सीनील कब्ज चूहा मॉडल में शौच पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला का चिकित्सीय प्रभाव

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ज़िया झांग, फा-जुआन झेंग, जेन झांग

सार

पार्श्वभूमि

कब्ज पुरानी गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल कार्यात्मक रोगों में से एक है। यह जीवन की गुणवत्ता को गंभीरता से प्रभावित करता है। Cistanche Deserticola (C. Deserticola) स्पष्ट रूप से कब्ज का इलाज कर सकता है, लेकिन इसके तंत्र को स्पष्ट नहीं किया गया है। हमने सोचा था कि इसके तंत्र ने अंतरालीय काजल कोशिकाओं (आईसीसी) को उत्तेजित करके आंतों की गतिशीलता में सुधार किया है। ICC की सतह पर C-किट रिसेप्टर का सक्रियण ICC फ़ंक्शन से निकटता से संबंधित है, और स्टेम सेल फैक्टर (SCF)/C-किट सिग्नलिंग पाथवे इसमें एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। सी. डेजर्टिकोला कब्ज का इलाज कैसे करता है, इसके तंत्र की जांच करने के लिए, इस अध्ययन का उद्देश्य चूहों में एक कब्ज मॉडल स्थापित करना और उपचार में एससीएफ/सी-किट सिग्नलिंग मार्ग की भूमिका का पता लगाना है।

उद्देश्य

कब्ज चूहा मॉडल द्वारा कब्ज के उपचार के लिए सी. डेजर्टिकोला की भूमिका में एससीएफ/सी-किट सिग्नलिंग मार्ग का पता लगाना।

विधि

अड़तालीस 8-मो-पुराने स्प्राग-डावले चूहों को यादृच्छिक भार विधि द्वारा 4 समूहों में विभाजित किया गया था: सामान्य समूह (n=12), मॉडल समूह (n=12), C. डेजर्टिकोला समूह (एन=12) और अवरोधक समूह (एन=12)। सामान्य समूह को सामान्य खारा बाईगैवेज प्राप्त हुआ; मॉडल समूह को गैवेज द्वारा लोपरामाइड प्राप्त हुआ; अवरोधक समूह को गैवेज द्वारा लोपरामाइड और सी. डेजर्टिकोला प्राप्त हुआ, और STI571 को अंतर्गर्भाशयी इंजेक्शन लगाया गया। उपचार के दौरान, वजन, fecal granules, और fecal गुणवत्ता हर 10 d दर्ज की गई। मॉडल इंडक्शन के 20 दिन बाद, प्रत्येक समूह के बृहदान्त्र के ऊतकों को हटा दिया गया। हेमेटोक्सिलिन और ईओसिन धुंधला का उपयोग पैथोलॉजिकल परिवर्तनों का निरीक्षण करने के लिए किया गया था। इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री, वेस्टर्न ब्लॉटिंग और रियल-टाइम क्वांटिटेटिव पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन द्वारा एससीएफ, सी-किट और एक्वापोरिन जीन के अभिव्यक्ति स्तर का पता लगाया गया। ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी द्वारा कॉलोनिक एपिथेलियल माइटोकॉन्ड्रिया और गॉब्लेट कोशिकाओं को देखा गया।

परिणाम

सामान्य समूह की तुलना में, जैसे-जैसे उपचार आगे बढ़ा, मॉडल और अवरोधक समूहों में चूहों का वजन काफी कम हो गया, मल का वजन कम हो गया, और मल की गुणवत्ता शुष्क थी (पी <{0}}। {{6}="" }5).="" c.="" डेजर्टिकोला="" ने="" शरीर="" के="" वजन="" और="" मल="" के="" वजन="" में="" कमी="" को="" उलट="" दिया="" और="" मल="" की="" गुणवत्ता="" में="" सुधार="" किया।="" हिस्टोपैथोलॉजिकल="" विश्लेषण="" ने="" संकेत="" दिया="" कि="" मॉडल="" समूह="" में="" कोलोनिक="" म्यूकोसल="" एपिथेलियम="" अधूरा="" था,="" और="" ग्रंथियों="" की="" व्यवस्था="" अनियमित="" या="" क्षतिग्रस्त="" थी।="" सी।="" डेजर्टिकोला="" के="" साथ="" उपचार="" ने="" उपकला="" कोशिकाओं="" की="" अखंडता="" और="" निरंतरता="" और="" ग्रंथियों="" की="" नियमित="" व्यवस्था="" में="" सुधार="" किया।="" अवरोधक="" एजेंटों="" ने="" सी।="" डेजर्टिकोला="" इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री="" के="" प्रभावों="" को="" बाधित="" किया="" और="" वास्तविक="" समय="" की="" मात्रात्मक="" पोलीमरेज़="" चेन="" रिएक्शन="" से="" पता="" चला="" कि="" मॉडल="" समूह="" के="" कोलोनिक="" ऊतक="" में="" एससीएफ="" और="" सी-किटप्रोटीन="" या="" जीन="" की="" अभिव्यक्ति="" कम="" हो="" गई="" थी="" (पी=""><0.05), जबकि="" सी="" के="" साथ="" उपचार।="" डेजर्टिकोला="" ने="" प्रोटीन="" या="" जीन="" की="" अभिव्यक्ति="" में="" वृद्धि="" की="" (पी=""><0.05)। पश्चिमी="" सोख्ता="" ने="" दिखाया="" कि="" एक्वापोरिन="" एपीक्यू="" 3="" की="" अभिव्यक्ति="" में="" वृद्धि="" हुई="" थी,="" जबकि="" मॉडल="" समूह="" में="" सीएक्स="" 43="" की="" अभिव्यक्ति="" में="" कमी="" आई="" थी।="" सी.="" डेजर्टिकॉलैन="" के="" साथ="" उपचार="" एपीक्यू3="" की="" अभिव्यक्ति="" को="" रोकता="" है="" और="" सीएक्स43="" की="" प्रचारित="" अभिव्यक्ति="" करता="" है।="" ट्रांसमिशनइलेक्ट्रॉन="" माइक्रोस्कोपी="" ने="" दिखाया="" कि="" मॉडल="" समूह="" में="" कोलोनिक="" एपिथेलियम="" के="" माइटोकॉन्ड्रिया="" सूज="" गए="" थे="" और="" अव्यवस्थित="" रूप="" से="" व्यवस्थित="" थे,="" और="" माइक्रोविली="" विरल="" थे।="" सी.="" डेजर्टिकोला="" समूह="" में="" स्थिति="" बेहतर="" थी।="" sti571="" अवरोधक="" के="" साथ="" इलाज="" किए="" गए="" चूहे="" ने="" पुष्टि="" की="" कि="" scf/c-किट="" मार्ग="" को="" अवरुद्ध="" करने="" से="" c.="" डेजर्टिकोला="" द्वारा="" कब्ज="" में="" सुधार="" बाधित="" होता="">

निष्कर्ष

सी. डेजर्टिकोला ने कब्ज के साथ चूहों में शौच में सुधार किया, और एससीएफ/सी-किटसिग्नलिंग मार्ग, जो कि आईसीसी समारोह की एक प्रमुख कड़ी है, ने उपचार में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाई।

मुख्य शब्द:सिस्टैंच डेजर्टिकोला; बूढ़ा कब्ज; स्टेम सेल कारक; सी किट

ताजा सिस्टैंच कच्चा माल

परिचय

वृद्धावस्था कब्ज (एससी) वृद्धावस्था के रोगियों में आम पुरानी गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल कार्यात्मक बीमारियों में से एक है, जो सेरेब्रोवास्कुलर घटनाओं और अन्य बीमारियों को प्रेरित या बढ़ा देती है और बुजुर्ग आबादी के जीवन की गुणवत्ता को गंभीर रूप से प्रभावित करती है [1,2]। पारंपरिक चीनी चिकित्सा के अनुसार, मुख्य एसकेयर गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल हीट, यिन और जिन की कमी, और आंतों की डी-वेटिंग [3,4] की एटियलजि और रोगजनन, जबकि सिस्टैंच डेजर्टिकोला (सी। डेजर्टिकोला) गुर्दे को गर्म कर सकता है और आंतों को आराम दे सकता है। शोधकर्ताओं ने बताया है कि आंतों का प्रभाव अनुसूचित जाति की गतिशीलता में सुधार और उपचार स्पष्ट है, लेकिन इसके तंत्र को स्पष्ट नहीं किया गया है [5,6]। इंटरस्टीशियल काजलसेल (ICCs) गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल ट्रैक्ट में एक विशेष प्रकार की मेसेनकाइमल कोशिकाएं हैं। ICCs की सतह पर C-किट रिसेप्टर का सक्रियण सेल प्रसार, विभेदन और कार्य से निकटता से संबंधित है। ICCs कई गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल मोटर डिसफंक्शन [7,8] के रोगजनन में भाग लेते हैं। सी-किट का सक्रियण इसके लिगैंड स्टेम सेल फैक्टर (एससीएफ) [9] के बंधन पर निर्भर करता है। सी की कार्रवाई के प्रभाव और तंत्र की जांच करना। एससी पर डेजर्टिकोला, इस अध्ययन का उद्देश्य सी. डेजर्टिकोला द्वारा कब्ज के उपचार में एससीएफ/सी-किट सिग्नलिंग मार्ग की भूमिका का पता लगाने के लिए बायलोपेरिडोल प्रेरित चूहों में एक एससी मॉडल स्थापित करना है।

सामग्री और तरीके

प्रायोगिक सामग्री

प्रायोगिक जानवर:प्रायोगिक पशुओं में 48 नर 8-मो-ओल्ड स्प्रैग डावले चूहों का वजन 500-550 ग्राम था; सभी चांग्शा तियानकिन बायोटेक्नोलॉजी कंपनी से खरीदे गए। लिमिटेड चूहों को चोंगकिंग वीसिटेंग बायोमेडिकल टेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड की पशु प्रयोगशाला में उठाया गया था, जिसे सामान्य दिन और रात की रोशनी, भोजन और पेय दिया गया था। चोंगकिंग ट्रेडिशनल चाइनीज मेडिसिन हॉस्पिटल की एथिक्स कमेटी द्वारा जारी प्रबंधन दिशा-निर्देशों का पालन करने वाली सभी प्रक्रियाएं।

प्राथमिक अभिकर्मक:प्राथमिक अभिकर्मकों में लोपरामाइड (सिग्मा, सेंट लुइस, एमओ, संयुक्त राज्य अमेरिका), हुबेई जुरुई पारंपरिक चीनी चिकित्सा डेकोक्शनको से सी। डेजर्टिकोला शामिल थे। Ltd., चाइनीज सेलेक कंपनी लिमिटेड से STI571, और SCF, C-किट, कनेक्सिन 43 (Cx43), एक्वापोरिन 3 (AQP3) और -एक्टिन एंटीबॉडी (Abcam, कैम्ब्रिज, MA, यूनाइटेड स्टेट्स), प्राइमस्क्रिप्ट II 1st स्ट्रैंड सीडीएनए Synthesis Kit और Premix Taq™ (Ex Taq™ संस्करण 2.0)(Takara Co. Ltd., Japan)।

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तरीकों

एससी मॉडल तैयार करना और समूह बनाना:प्रयोगात्मक परिणामों पर शरीर के वजन जैसे भ्रमित करने वाले कारकों के प्रभाव से बचने के लिए, चूहों को बेतरतीब ढंग से ब्लॉक रैंडम ग्रुपिंग विधि द्वारा समूहीकृत किया गया था। अड़तालीस चूहों को 1 सप्ताह के लिए अनुकूल रूप से खिलाया गया था, और चूहों को हल्के से भारी वजन के क्रम में गिना गया था। शरीर के वजन के क्रम के अनुसार, चूहों को 12 क्षेत्रों में विभाजित किया गया था (प्रत्येक क्षेत्र में चूहों का वजन समान था), प्रत्येक क्षेत्र में 4 चूहों के साथ। 12 क्षेत्रों को 12 (सामान्य, मॉडल, सी. डेजर्टिकोला, और अवरोधक) के 4 समूहों में विभाजित किया गया था। मॉडल समूह में चूहों को गैवेज द्वारा लोपेरामाइड (0.0625/100 g, 10 mL/kg) दिया गया। पहली गैवेज खुराक को दोगुना कर दिया गया था, और दवा हर दिन 10:00 बजे दी जाती थी, दिन में एक बार लगातार 20 दिनों तक। गैवेज द्वारा सामान्य समूह को सामान्य खारा की समान मात्रा दी गई थी। इसके अलावा, मॉडल समूह को गवेज द्वारा सी. डेजर्टिकोला (0.156 ग्राम/100 ग्राम, 10 मिली/किलोग्राम) के साथ इलाज किया गया था। दब्लॉकर ग्रुप को गैवेज द्वारा सी. डेजर्टिकोला (0.156 ग्राम/100 ग्राम, 10 एमएल/किलोग्राम) और इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन द्वारा एसटीआई571 (25 मिलीग्राम/एमएल, 1 एमएल/किलोग्राम) दिया गया। प्रयोग के दौरान, शरीर का वजन, मल का वजन और मल की स्थिति हर 10 d दर्ज की गई। किसी भी चूहे की आकस्मिक मृत्यु नहीं हुई। बीस दिन बाद, चूहों को मार दिया गया, और कोलोनिक ऊतक को जांच और तरल नाइट्रोजन संरक्षण के लिए हटा दिया गया। शेष भागों को तय और एम्बेडेड किया गया था।

हिस्टोपैथोलॉजिकल विश्लेषण:रात भर उपवास करने वाले चूहों को अगले दिन 7 प्रतिशत क्लोरल हाइड्रेट (5 एमएल / किग्रा) के साथ इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन द्वारा संवेदनाहारी किया गया। कोलोनिक ऊतक को अलग करने के लिए पेट को खोल दिया गया था, और 8-10 मिमी बृहदान्त्र को हटा दिया गया था। आंतों की सामग्री को प्रीकूल्ड पॉलीब्यूटिलीनसुकेट में धीरे से हिलाकर हटा दिया गया और 4 प्रतिशत पैराफॉर्मलडिहाइड लगाने वाले घोल में 24 घंटे के लिए तय किया गया। पारंपरिक पैराफिन एम्बेडिंग किया गया था। ऊतक वर्गों (5 माइक्रोन) को हेमटॉक्सिलिन और ईओसिन धुंधला के लिए हटा दिया गया था, और एक माइक्रोस्कोप के तहत हिस्टोपैथोलॉजिकल आकारिकी देखी गई थी।

इम्यूनोहिस्टोकेमिकल धुंधला द्वारा एससीएफ और सी-किट की अभिव्यक्ति का पता लगाना:ऊपर दिए गए हिस्टोपैथोलॉजी द्वारा जांचे गए थेपराफिन ऊतकों को खंडित किया गया था, खंडित ज़ाइलीन डीवैक्सड ग्रेडिएंट इथेनॉल के साथ पुनर्जलीकरण किया गया था, प्रतिजन गर्मी द्वारा उपचार किया गया था, और कमरे के तापमान पर बकरी सीरम के साथ 1 घंटे के लिए सील कर दिया गया था। एससीएफ और सी-किट प्राथमिक एंटीबॉडी को ड्रॉपवाइज जोड़ा गया, और ऊतकों को रात भर 4 डिग्री पर रखा गया। पॉलीब्यूटिलीनसुकेट के साथ रिंसिंग के बाद, हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज को सेकेंडरी एंटीबॉडी लेबल करने के लिए गिरा दिया गया था, 5 मिनट के लिए पॉलीब्यूटिलीन सक्सेनेट के साथ रिंस किया गया, ड्रॉप 2, 4-डायमिनोब्यूट्रिक एसिड क्रोमोजेनसॉल्यूशन, हेमटॉक्सिलिन के साथ फिर से डाई, रिवर्स ग्रेडिएंट अल्कोहल डिहाइड्रेशन, जाइलीन द्वारा पारदर्शी और एक तटस्थ राल सील। सूक्ष्म रूप से, नाभिक बैंगनी-नीले थे, और सकारात्मक परिणाम उत्पाद भूरे पीले या पीले कण थे।

वास्तविक समय-मात्रात्मक पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (RT-qPCR) द्वारा कॉलोनिक ऊतक में C-किट mRNA की अभिव्यक्ति का पता लगाना:जमे हुए चूहे कोलोनिक ऊतक को एक होमोजेनाइज़र द्वारा जमीन पर रखा गया था, और 1 एमएल आरएनएआईएसओ प्लस जोड़ा गया था। कॉलोनिक ऊतक के कुल आरएनए को क्लोरोफॉर्म/आइसोप्रोपेनॉल विधि द्वारा निकाला गया था, और आरएनए गुणवत्ता का पता जेल वैद्युतकणसंचलन द्वारा लगाया गया था। बायो-रेड जेल इमेजर द्वारा पहचाने जाने के बाद, 1 कुरूप आरएनए को तकारा प्राइमस्क्रिप्ट II 1 स्ट्रैंड सीडीएनए सिंथेसिस किट द्वारा सीडीएनए में उलट दिया गया था। एनसीबीआई डेटाबेस जीन आईडी: 64030 के अनुसार, सी-किट जीन का सीडीएस क्षेत्र पाया गया था और इसके साथ संयुक्त था एनसीबीआई प्राइमर-ब्लास्ट डिज़ाइन प्राइमर सीक्वेंस, जिसे सेंगन बायोटेक कंपनी लिमिटेड, सी-किट प्राइमर सीक्वेंस सेंस स्ट्रैंड 5'-एजीजीटी जीटीएसीसीजीटीटीसीटीजीटीसीसीसी-3', एंटीसेंस स्ट्रैंड 5'-जीजीसीटीजीजीएटीटीटीजीसीटीसीटीटीजीसीटीजीटी-3' द्वारा संश्लेषित किया गया था, - एक्टिन सेंस स्ट्रैंड 5'-CTTCCTTCCTGGGTATGGAATC-3', एंटीसेंस स्ट्रैंड 5'-CTGTGTTGGCATAGAGGTCTT-3'। PCR प्रवर्धन एक Bio-RadCFX90 रीयल-टाइम PCR उपकरण पर किया गया था। पीसीआर परख के लिए शर्तें 5 मिनट के लिए 95 डिग्री पर प्रारंभिक विकृतीकरण, 30 एस के लिए 95 डिग्री के 30 चक्र, 30 एस के लिए 60 डिग्री और 1 मिनट के लिए 72 डिग्री और उसके बाद 10 मिनट के लिए 72 डिग्री पर अंतिम विस्तार थे। 2-ΔΔCt (ΔCt=Ct मान - -actin Ctvalue) सापेक्ष जीन अभिव्यक्ति का विश्लेषण करने के लिए लिया गया था।

पश्चिमी सोख्ता द्वारा कोलोनिक ऊतक में Cx43 और AQP3 के प्रोटीन अभिव्यक्ति स्तर का पता लगाना:लगभग 1 सेमी जमे हुए कोलोनिक ऊतक को एकत्र किया गया और RIPA मजबूत पायरोलिसिस तरल (100 μL) के साथ एकत्र किया गया। ऊतक को 20 बार एक ग्लासहोमोजेनाइज़र के साथ समरूप बनाया गया और 1.5 एमएल सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में स्थानांतरित किया गया। सतह पर तैरनेवाला 12000 आरपीएम पर 5 मिनट के लिए 4 डिग्री पर सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद निकाला गया था, और सतह पर तैरनेवाला में कुल प्रोटीन की एकाग्रता बीसीए विधि द्वारा निर्धारित की गई थी। हमने सोडियम डोडेसिल सल्फेट-पॉलीएक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन करने के लिए 25ug विकृत प्रोटीन को हटा दिया और फिर जेल में प्रोटीन को 200 एमए के निरंतर प्रवाह पर पॉलीविनाइलिडीन फ्लोराइडमेम्ब्रेन में स्थानांतरित कर दिया और फिर कमरे के तापमान पर 2 घंटे के लिए 5 प्रतिशत स्किम दूध सीमित तरल द्वारा सील कर दिया। इसी प्राथमिक एंटीबॉडी को सीलिंग तरल पदार्थ से पतला किया गया, रात भर 4 डिग्री पर ऊष्मायन किया गया, फिर झिल्ली प्रतिरोध को धोया गया और दूसरा एंटीबॉडी जोड़ा गया। ईसीएल द्रव जोड़ने के बाद, उन्हें ऑप्टिकल घनत्व विश्लेषण द्वारा परीक्षण के लिए एक्सपोजर मीटर के नीचे रखा गया था।

ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी:हमने लगभग 1 सेमी समीपस्थ कोलोनिक ऊतक लिया, इसे 2.5 प्रतिशत ग्लूटाराल्डिहाइड में 24 घंटे के लिए तय किया, इसे ग्रेडेड एसीटोन के साथ निर्जलित किया, एपोन 812 में एम्बेडेड, और एक अल्ट्रामाइक्रोटोम पर 50 एनएम अल्ट्राथिन वर्गों को काट दिया। वर्गों को 10 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर यूरेनियम डाइऑक्साइड एसीटेट और सीसा साइट्रेट रंगाई तरल के साथ दाग दिया गया था। हमने फिलिप्स टेक्नाई -10 ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप के तहत कॉलोनिक विली, एपिथेलियल सेल माइटोकॉन्ड्रिया, और गॉब्लेट कोशिकाओं का अवलोकन किया।

सांख्यिकीय विश्लेषण

डेटा विश्लेषण के लिए SPSS 19.0 सॉफ़्टवेयर का उपयोग किया गया था, और परिणामों को प्लॉट करने के लिए ग्राफ़पैड प्रिज़्म8.4 सॉफ़्टवेयर का उपयोग किया गया था। शापिरो-विल्क के परीक्षण का उपयोग सामान्यता परीक्षण के लिए किया गया था। सामान्य वितरण वाले डेटा को माध्य ± एसडी द्वारा दर्शाया गया था। उपचार के बाद हीमोग्लोबिन के माध्य ± एसडी का प्रतिनिधित्व करने के लिए त्रुटि आइटम का उपयोग किया गया था। छात्र के टी-टेस्ट का उपयोग दो समूहों के बीच तुलना के लिए किया गया था। कई समूहों के बीच तुलना के लिए विचरण के विश्लेषण का उपयोग किया गया था। छात्र-न्यूमैन-केल्स पद्धति का उपयोग जोड़े में कई समूहों के बीच तुलना के लिए किया गया था, और डननेट के परीक्षण का उपयोग अनुक्रम में प्रत्येक प्रयोगात्मक समूह और नियंत्रण समूह के बीच अंतर को मापने के लिए किया गया था। संबद्ध डेटा को कई समय बिंदुओं द्वारा मापा गया था, और बार-बार माप डेटा विचरण का विश्लेषण किया गया था। संचालित। यदि गोलाकार परीक्षण ने P > 0.{{10}}5 दिखाया, तो विचरण के बार-बार माप डेटा विश्लेषण का उपयोग किया गया था। यदि पी <0.05, सामान्यीकृत="" आकलन="" समीकरण="" लिया="" गया="" था।="" डेटा="" जो="" सामान्य="" वितरण="" के="" अनुरूप="" नहीं="" थे,="" उन्हें="" m="" (p25,="" p75)="" द्वारा="" दर्शाया="" गया="" था,="" और="" समूहों="" के="" बीच="" तुलना="" के="" लिए="" क्रुस्कल-वालिस="" एच="" रैंक-सम="" टेस्ट="" का="" उपयोग="" किया="" गया="" था।="" 2="" परीक्षण="" का="" उपयोग="" समूहों="" के="" बीच="" तुलना="" करने="" के="" लिए="" किया="" गया="" था="" जब="" डेटा="" अनियंत्रित="" डेटा="" था,="" और="" पियरसन="" के="" 2="" परीक्षण="" का="" उपयोग="" किया="" गया="" था="" यदि="" सैद्धांतिक="" आवृत्ति=""><5 के="" साथ="" कोशिकाओं="" का="" अनुपात=""><20 प्रतिशत="" था।="" यदि="" सैद्धांतिक="" आवृत्ति=""><5 वाली="" कोशिकाओं="" का="" अनुपात="" 20="" प्रतिशत="" से="" अधिक="" या="" उसके="" बराबर="" था,="" तो="" फिशर="" के="" सटीक="" परीक्षण="" का="" उपयोग="" किया="" गया="" था।="" p=""><0.05 का="" उपयोग="" यह="" निर्धारित="" करने="" के="" लिए="" किया="" गया="" था="" कि="" अंतर="" सांख्यिकीय="" रूप="" से="" महत्वपूर्ण="">

चित्र 1 कॉलोनिक हिस्टोपैथोलॉजिकल परिवर्तन।

परिणाम

सामान्य परिस्थितियां

सामान्य समूह की तुलना में लोपरामाइड के गैवेज के एक दिन बाद, मॉडल समूह में शरीर के वजन और मल के वजन में काफी कमी आई थी (पी <{{0}}.05), लेकिन="" मल="" की="" गुणवत्ता="" में="" कोई="" महत्वपूर्ण="" अंतर="" नहीं="" था।="" स्कोर="" (पी=""> 0.05)। C. मॉडल समूह में मरुस्थलीय उपचार ने शरीर के वजन और मल के वजन में कमी को धीमा कर दिया (P .)< 0.05),="" but="" the="" bodyweight="" in="" the="" blocker="" group="" was="" not="" significantly="" reduced.="" after="" 10="" d="" of="" treatment,="" compared="" with="" the="" normal="" group,="" the="" body="" weight="" and="" stool="" volume="" of="" rats="" in="" the="" model="" group="" were="" further="" significantly="" reduced,="" and="" the="" stools="" were="" dry="" and="" almost="" contained="" no="" water="" (p="" <="" 0.05).="" the="" body="" weight="" loss="" of="" rats="" was="" also="" significantly="" reduced="" by="" treatment="" with="" c.="" deserticola="" (p="" <="" 0.05).="" the="" bodyweight="" of="" rats="" in="" the="" blocker="" group="" was="" not="" significantly="" different="" from="" that="" in="" the="" model="" group="" (p="" >="" 0.05).="" on="" day="" 20="" before="" sampling,="" the="" bodyweight="" of="" rats="" in="" the="" model="" group="" was="" significantly="" lower="" than="" that="" in="" the="" normal="" group,="" and="" the="" stool="" quality="" score="" was="" significantly="" increased="" (p="" <="" 0.05),="" while="" the="" weight="" loss="" caused="" by="" constipation="" was="" inhibited="" by="" c.="" deserticola="" treatment,="" and="" the="" stool="" quality="" score="" was="" decreased="" (p="" <="">

कॉलोनिक हिस्टोपैथोलॉजी

चूहों के कोलोनिक ऊतक के हेमटॉक्सिलिन और ईओसिन धुंधला को चित्र 1 में दिखाया गया है। सामान्य समूह में, आंतों का विली बरकरार था, आंतों का म्यूकोसा बरकरार और निरंतर था, कोशिकाओं और ग्रंथियों को नियमित रूप से व्यवस्थित किया गया था। म्यूकोसा और सबम्यूकोसा भड़काऊ कोशिकाओं द्वारा घुसपैठ नहीं किए गए थे, और ऊतक संरचना सामान्य थी। मॉडल समूह में, आंतों के विली और म्यूकोसा को काफी हद तक नष्ट कर दिया गया था, स्थानीय विली को बहा दिया गया था और शिथिल रूप से व्यवस्थित किया गया था, और ग्रंथियों की संरचना का हिस्सा गायब हो गया था। सी. डेजर्टिकोला समूह में, हिस्टोपैथोलॉजिकल धुंधलापन मॉडल समूह की तुलना में कम था, लेकिन कुछ गॉब्लेट कोशिकाओं में परिगलन था। अवरोधक समूह में इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन के बाद, सी.डेसर्टिकोला समूह की तुलना में, आंतों के विली का स्थानीय नुकसान अभी भी था, और आंतों के म्यूकोसा का फ्रैक्चर और नुकसान था।

चित्रा 2 इम्यूनोहिस्टोकेमिकल डिटेक्शन द्वारा कोलोनिक ऊतक में स्टेम सेल कारक और सापेक्ष ऑप्टिकल घनत्व अनुपात की अभिव्यक्ति।

इम्यूनोहिस्टोकेमिकल स्टेनिंग द्वारा स्टेम सेल फैक्टर और सी-किट प्रोटीन की अभिव्यक्ति का पता लगाना

इम्यूनोहिस्टोकेमिकल धुंधला ने दिखाया कि एससीएफ और सी-किट को कोलोनोफ नियंत्रण समूह में व्यक्त किया गया था। नियंत्रण समूह की तुलना में, मॉडल समूह में SCF और C-किट की अभिव्यक्ति में काफी कमी आई थी (P <0.05)। मॉडलग्रुप="" की="" तुलना="" में,="" सी.="" डेजर्टिकोला="" समूह="" में="" एससीएफ="" और="" सी-किट="" की="" अभिव्यक्ति="" में="" काफी="" वृद्धि="" हुई="" थी="" (पी=""><0.05)। अवरोधक="" और="" मॉडल="" समूहों="" (पी=""><0.05, आंकड़े="" 2="" और="" 3)="" के="" बीच="" एससीएफ="" और="" सी-किट="" की="" अभिव्यक्ति="" में="" कोई="" अंतर="" नहीं="">

आरटी-क्यूपीसीआर

RT-qPCR showed that expression of C-kit mRNA in the model group was significantly lower than in the normal group (Figure 4, P < 0.05). Compared with the model group, C-kit in the C. deserticola group was significantly increased (P < 0.05). There was no significant difference in C-kit mRNA level between the model and blocker groups (P >0.05)। इन परिणामों ने संकेत दिया कि सी। डेजर्टिकोला द्वारा समायोजित सी-किट अभिव्यक्ति ने कब्ज के सुधार में भाग लिया, और अवरोधकों ने सी की प्रभावकारिता को बाधित किया। डेजर्टिकोला

सिस्टैंच साल्सा लाभ

पश्चिमी सोख्ता

पश्चिमी सोख्ता ने दिखाया कि AQP3 प्रोटीन को सामान्य नियंत्रण समूह में निम्न स्तर पर व्यक्त किया गया था, जबकि नियंत्रण समूह (चित्र 5) (P <0.05) की="" तुलना="" में="" मॉडल="" समूह="" में="" यह="" काफी="" बढ़="" गया="" था।="" .="" c.="" डेजर्टिकोला="" के="" साथ="" उपचार="" के="" बाद="" aqp3="" प्रोटीन="" की="" अभिव्यक्ति="" कम="" हो="" गई="" थी,="" और="" aqp3="" की="" अभिव्यक्ति="" पर="" c.deserticola="" के="" निरोधात्मक="" प्रभाव="" को="" अवरोधक="" उपचार="" (p=""><0.05) द्वारा="" बाधित="" किया="" गया="" था।="" cx43="" की="" अभिव्यक्ति="" aqp3="" के="" विपरीत="" थी।="" इन="" परिणामों="" ने="" सुझाव="" दिया="" कि="" sc="" के="" साथ="" चूहों="" पर="" c.="" डेजर्टिकोला="" का="" औषध="" विज्ञान="" प्रभाव="" cx43="" की="" अभिव्यक्ति="" को="" बढ़ावा="" देकर="" और="" aqp3="" (आंकड़े="" 5-7)="" की="" अभिव्यक्ति="" को="" बाधित="" करके="" प्राप्त="" किया="" गया="">

ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी

लोपरामाइड इंडक्शन के बाद, मॉडल समूह में कुछ कोलोनिक म्यूकोसल एपिथेलियल कोशिकाओं में माइटोकॉन्ड्रियल सूजन और ऑटोफैगी हुई। आंतों के माइक्रोविली की संख्या और लंबाई कम हो गई, और गॉब्लेट सेल पाइकनोसिस हुआ (चित्र 8)। सी। डेजर्टिकोला के साथ उपचार के बाद, आंतों के माइक्रोविली की संख्या में वृद्धि हुई। Themicrovilli को बड़े करीने से व्यवस्थित किया गया था, और संरचना पूर्ण थी। गॉब्लेट कोशिकाएं छोटी लंबाई, माइटोकॉन्ड्रिया की अनियमित आकारिकी, और गॉब्लेट कोशिकाओं के गंभीर pyknosis।

चित्रा 3 इम्यूनोहिस्टोकेमिकल डिटेक्शन द्वारा कॉलोनिक ऊतक में सी-किट और सापेक्ष ऑप्टिकल घनत्व अनुपात की अभिव्यक्ति।

बहस

बुजुर्ग आबादी में कब्ज आम है और उन सामान्य लक्षणों में से एक है जो बुजुर्ग लोगों के स्वास्थ्य की स्थिति और जीवन की गुणवत्ता को प्रभावित करते हैं [10,11]। पारंपरिक चीनी चिकित्सा, बाई एट अल [12] का मानना ​​​​था कि एससी का मूल रोगजनन बड़ी आंत के संचालन समारोह की शिथिलता, बूढ़ा शरीर की विफलता, यकृत और गुर्दे के कार्यों की क्रमिक हानि, क्यूई और रक्त की कमी और शरीर के तरल पदार्थ की हानि थी। , जिसके कारण मल सूख गया, जिसके परिणामस्वरूप कब्ज हो गया [13]। एससी कई पहलुओं में रोगियों और उनके परिवारों पर दबाव डालता है, और इसके रोगजनन का पता लगाना महत्वपूर्ण है।

सी. डेजर्टिकोला में किडनी यांग को टोनिफाई करने, रक्त को लाभ पहुंचाने और शरीर की प्रतिरोधक क्षमता को नियंत्रित करने का कार्य होता है [14]। सी. डेजर्टिकोला और चीनी हर्बल काढ़ा युक्त सी। डेजर्टिकोला का व्यापक रूप से कब्ज के उपचार में उपयोग किया गया है, और नैदानिक ​​प्रभाव उल्लेखनीय है। डु एट अल [15] यांग की कमी और कब्ज के एक चूहे के मॉडल में पाया गया कि सी। डेजर्टिकोला ने पृथक बृहदान्त्र के संकुचन आयाम में सुधार किया, आंतों के मार्ग की सिकुड़न को मजबूत किया, और गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल हार्मोन के स्तर को सामान्य में वापस कर दिया। इसके अलावा, सी. डेजर्टिकोला का आहार फाइबर, सी. डेजर्टिकोला का एक प्रसंस्करण उपोत्पाद, मल की जल धारण क्षमता में सुधार करता है और आंतों को पोषण देने और शौच में सुधार करने में कम खुराक और अच्छे प्रभाव का लाभ होता है।[16] हमारे अध्ययन में पाया गया कि सी. डेजर्टिकोला उपचार ने कब्ज के साथ चूहों की मल नमी और कोलोनिक हिस्टोपैथोलॉजी में सुधार किया।

ICCs पूरे आंत्र पथ में पाए जाते हैं और पेसमेकर और आंतों के तंत्रिका संचरण के रूप में आंतों की गति के तंत्रिका नियंत्रण में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। सी-किट [18]। एससीएफ/सी-किट प्रणाली आईसीसी के विकास में महत्वपूर्ण है। एससीएफ/सी-किट सिग्नलिंग मार्ग का विश्लेषण एक्यूपंक्चर द्वारा चूहों में धीमी गति से स्थानांतरण कब्ज के उपचार के दौरान किया गया है।[19] तियान्शु बिंदु पर इलेक्ट्रोएक्यूपंक्चर ने एसीके 2- उपचारित चूहों में बृहदान्त्र आईसीसी की संख्या में वृद्धि की, एससीएफ और सी-किट प्रोटीन की अपंजीकृत अभिव्यक्ति, और आईसीसी के फेनोटाइप को उलट दिया। क्यूई और प्लीहा को मजबूत करने के लिए नुस्खे कॉलोनिक ऊतक में आईसीसी की अभिव्यक्ति को बढ़ा सकते हैं और सी-किट और एससीएफ एमआरएनए की अभिव्यक्ति को बढ़ा सकते हैं, इस प्रकार कब्ज के लक्षणों में सुधार कर सकते हैं [20]। हमारे अध्ययन में, इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री ने दिखाया कि सी। डेजर्टिकोला एससी के एक चूहे के मॉडल में एससीएफ और सी-किट प्रोटीन की महत्वपूर्ण रूप से अपग्रेडित अभिव्यक्ति है, और आरटी-क्यूपीसीआर ने दिखाया कि सी। डेजर्टिकोला ने सी-किटएमआरएनए की अभिव्यक्ति को काफी हद तक अपग्रेड किया। सी-किट अवरोधक ने सी. डेजर्टिकोला द्वारा प्रेरित एससीएफ और सी-किट अभिव्यक्ति के अपग्रेडेशन को रोक दिया।

मल जल सामग्री और कोलोनिक जल परिवहन एक्यूपी से निकटता से संबंधित हैं, जो आंतों के जल चयापचय में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं [21]। धीमी परिवहन कब्ज के साथ चूहों के एक अध्ययन में, शौच के काढ़े ने AQP3 और AQP4 [22] को कम करके आंतों के पानी के अवशोषण को विनियमित करके कब्ज के लक्षणों में काफी सुधार किया। कार्यात्मक कब्ज के एक चूहे के मॉडल में, कार्यात्मक कब्ज के लिए मौखिक जिओफू टोंगजी फ्लूइड के उपचार तंत्र को बृहदान्त्र में वासोएक्टिव आंतों के पॉलीपेप्टाइड और AQP3 की अभिव्यक्ति को विनियमित करके महसूस किया जा सकता है [23]। चिकनी पेशी कोशिकाओं के समकालिक संकुचन की मध्यस्थता में गैपजंक्शन एक आवश्यक भूमिका निभाते हैं। Cx43 उस प्रक्रिया के दौरान सबसे महत्वपूर्ण प्रोटीन है [24]। सीएक्स43एक्सप्रेशन का नुकसान आंशिक रूप से चिकनी पेशी मोटर की शिथिलता के लिए जिम्मेदार हो सकता है [25]। धीमी गति से पारगमन कब्ज वाले चूहों में आंतों के तंत्रिका तंत्र नेटवर्क संरचना की मरम्मत से सीएक्स 43 की अभिव्यक्ति और कब्ज के लक्षणों में सुधार हो सकता है [26]। इन परिणामों से संकेत मिलता है कि वृद्धि हुई है AQP3 की अभिव्यक्ति मल में पानी की मात्रा को कम कर देती है, जिससे कब्ज हो जाता है, जो कब्ज का एक महत्वपूर्ण तंत्र हो सकता है। Cx43 की अभिव्यक्ति आंतों की चिकनी मांसपेशियों के संकुचन से संबंधित हो सकती है और कब्ज की घटना को कम कर सकती है। हमारे अध्ययन में, पश्चिमी सोख्ता ने दिखाया कि Cx43 अभिव्यक्ति में वृद्धि हुई थी और C.deserticola उपचार द्वारा AQP3 अभिव्यक्ति को बाधित किया गया था, जिसके परिणामस्वरूप चिकनी मांसपेशियों के संकुचन में वृद्धि हुई और जल अवशोषण में कमी आई, और अवरोधक उपचार ने इन प्रभावों को उलट दिया।

सिस्टैंच ट्यूबुलोसा निकालने की गोलियांबेहतर बनाता हैकब्जप्रेरकलोपरामिनऔर कम करता हैकोलोनिक ऊतक क्षति.

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निष्कर्ष

अंत में, C. डेजर्टिकोला AQP3 की अभिव्यक्ति को बाधित कर सकता है और SCF/C-किट मार्ग के माध्यम से Cx43 की अभिव्यक्ति को बढ़ावा दे सकता है, जिससे कब्ज से प्रेरित बायलोपरामाइन में सुधार होता है और वृद्ध चूहों में कोलोनिक ऊतक क्षति को कम करता है। इस अध्ययन ने सी. डेजर्टिकोला के नैदानिक ​​उपयोग के लिए एक अच्छा सैद्धांतिक आधार प्रदान किया।