ओवरीएक्टोमाइज्ड चूहों के अस्थि चयापचय पर सिस्टानोसाइड ए का चिकित्सीय प्रभाव

1 परिचय

ऑस्टियोपोरोसिस, एक प्रणालीगत कंकाल "साइलेंट किलर", हाल के वर्षों में दुनिया भर में 2000 मिलियन से अधिक लोगों को प्रभावित करने वाला एक प्रमुख स्वास्थ्य खतरा बन गया है। यह कम अस्थि द्रव्यमान घनत्व (बीएमडी) और सूक्ष्म-वास्तुशिल्पीय गिरावट की विशेषता है, जो हड्डी के गठन पर हड्डी के पुनर्वसन की अधिकता से उत्पन्न होता है और अंत में, ऑस्टियोपोरोटिक फ्रैक्चर का परिणाम होता है। आजकल, ऑस्टियोक्लास्टिक भेदभाव और पुनर्वसन को अवरुद्ध करने वाले एजेंटों की पहचान ऑस्टियोपोरोसिस के लिए चिकित्सीय दवाओं के विकास के लिए आम और सफल रणनीति है, और वास्तव में एस्ट्राडियोल वैलेरेट और एलेंड्रोनेट सोडियम सहित कई सिंथेटिक एजेंट हैं, जो कर सकते हैंऑस्टियोपोरोसिस को रोकें और उसका इलाज करें. हालाँकि, बीमारियों के लिए दवाएँ आदर्श से बहुत दूर हैं; इनमें से कुछ दवाएं एंडोमेट्रियल और स्तन कैंसर के खतरे को बढ़ा सकती हैं और इसके कुछ हद तक दुष्प्रभाव भी होते हैं, जैसे हाइपरकैल्सीमिया, हाइपरकैल्सीयूरिया, आदि, जो उनके नैदानिक ​​​​अनुप्रयोग को सीमित करते हैं। इसलिए, एक सहस्राब्दी से अधिक समय से, पारंपरिक चीनी दवाओं (टीसीएम), विशेष रूप से अलग-अलग बायोएक्टिव यौगिकों और अंशों के साथ खाद्य टीसीएम, का उपयोग एशियाई देशों में ऑस्टियोपोरोसिस सहित विभिन्न बीमारियों की रोकथाम और इलाज के लिए बड़े पैमाने पर सुरक्षित और प्रभावी ढंग से किया जाता रहा है।

ऑस्टियोपोरोसिस रोग के उपचार और रोकथाम के लिए प्राकृतिक सिस्टान्चे ट्यूबुलोसा PHGS75% ECH 30% ACT 12%

ऑस्टियोपोरोसिस को ऑस्टियोक्लास्टोजेनेसिस में वृद्धि के कारण बढ़ी हुई हड्डी पुनर्वसन के रूप में जाना जाता है, और इस प्रक्रिया में ओस्टियोक्लास्ट अग्रदूतों में हेमेटोपोएटिक मोनोसाइट्स की प्रतिबद्धता शामिल होती है, जो बहुकेंद्रीय ऑस्टियोक्लास्ट बनाने के लिए फ्यूज होती है जो रीमॉडलिंग से गुजरने वाले हड्डी साइटों को लक्षित करती है [4]। परमाणु कारक-κB लिगैंड (RANKL) के लिए रिसेप्टर एक्टिवेटर, एक प्रमुख कारक जो ऑस्टियोब्लास्ट से स्रावित होता है, ऑस्टियोक्लास्ट में मोनोसाइट भेदभाव को उत्तेजित करता है [8,9]। अपने रिसेप्टर RANK के साथ RANKL की अंतःक्रिया के परिणामस्वरूप एडेप्टर सिग्नल प्रोटीन TNF रिसेप्टर-संबद्ध कारक (TRAF6) की भर्ती करके NF-κB, PI3K/Akt, और कैल्शियम/शांतोडुलिन-निर्भर किनेज सहित इंट्रासेल्युलर घटनाओं का एक झरना होता है। परिणामस्वरूप, TRAP, कैथेप्सिन K और DPD सहित कई ऑस्टियोक्लास्ट-संबंधित मार्कर जीन अपग्रेड हो जाते हैं, और हड्डी पुनर्जीवन की प्रक्रिया तेज हो जाती है।

फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स की विशेषता सिनामिक एसिड और हाइड्रॉक्सिल फिनाइल एथिल मोइटीज़ हैं जो एक ग्लाइकोसिडिक बंधन के माध्यम से -ग्लूकोपाइरानोज़ (एपियोस, गैलेक्टोज़, रैम्नोज़, ज़ाइलोज़, आदि) से जुड़े होते हैं, जो औषधीय पौधों में व्यापक रूप से वितरित होते हैं [10]। सिस्टानोसाइड ए (सीआईएस ए) एक सक्रिय हैफेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइडसिस्टैंच डेजर्टिकोला वाईसी मा में। चीनी फार्माकोपिया के रिकॉर्ड के अनुसार, सी. डेजर्टिकोला का उपयोग पारंपरिक रूप से किडनी-यिन की कमी, मांसपेशियों की कमजोरी, काठ की कमजोरी आदि के इलाज के लिए किया जाता था, और इस जड़ी बूटी में फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड मुख्य बायोएक्टिव घटक हैं [11]। टीसीएम के 'किडनी' सिद्धांत के आधार पर, किडनी हड्डी प्रणाली को नियंत्रित कर सकती है, जिसका अर्थ है कि हड्डियों का विकास और कार्य किडनी-सार पर निर्भर करते हैं, और यह किडनी-सार हड्डियों को पोषण देने के लिए अस्थि मज्जा में बदल सकता है, कंकाल की वृद्धि और मरम्मत को बढ़ावा देना और कंकाल को मजबूत करना [12]। चूंकि सी. डेजर्टिकोला किडनी को मजबूत कर सकता है, हमारा मानना ​​था कि सीआईएस ए ऑस्टियोपोरोसिस को रोक सकता है और उसका इलाज कर सकता है। इसलिए वर्तमान अध्ययन को इसकी क्षमता को मान्य करने के लिए डिज़ाइन किया गया थाऑस्टियोपोरोसिस को रोकने में सीआईएस एइस एजेंट की एंटीऑस्टियोपोरोटिक बायोएक्टिविटी का अनुमान लगाने के लिए एक ओवरीएक्टोमाइज्ड चूहों के मॉडल और हड्डी निर्माण और पुनर्जीवन मार्करों के साथ-साथ संबंधित संभावित तंत्र का उपयोग करके निर्धारित किया गया था।

2. परिणाम और चर्चा

2.1. परिणाम

2.1.1. बोन थ्री-पॉइंट बेंडिंग परीक्षण पर सीआईएस ए का प्रभाव

यह विश्लेषण करने के लिए कि क्या सीआईएस ए के साथ उपचार हड्डी को मजबूत बनाता है, हमने महिलाओं को तीन-बिंदु झुकने वाले परीक्षण के अधीन किया। जैसा कि चित्र 1 में दिखाया गया है, हड्डी टूटने पर लगाया जाने वाला अधिकतम भार 21.5% और 22 था। 20 मिलीग्राम/किलोग्राम और 8{{12%) मिलीग्राम/ से उपचारित पशुओं में 0% अधिक है। ओवरीएक्टोमाइज्ड (ओवीएक्स) समूह (पी <{15}}.05) में जानवरों की तुलना में क्रमशः किग्रा सीआईएस ए। इस बीच, सीआईएस ए के उपचार से हड्डी की कठोरता भी बढ़ गई; सभी सीआईएस ए-उपचारित चूहों ने 121 के डेटा के साथ उल्लेखनीय रूप से बढ़ी हुई कठोरता दिखाई। जब OVX चूहों के 102.2 ± 10.7 से तुलना की गई। परिणामों से संकेत मिलता है कि सीआईएस ए के साथ इलाज किए गए ओवीएक्स चूहों में हड्डियों की ताकत में वृद्धि हड्डी की बढ़ी हुई मात्रा और हड्डी की गुणवत्ता में वृद्धि के कारण हुई थी।

2.1.2. अस्थि माइक्रोआर्किटेक्चर पर सीआईएस ए का प्रभाव

माइक्रो-सीटी (चित्रा 2 और तालिका 1) द्वारा मापी गई चूहों की त्रि-आयामी ट्रैब्युलर हड्डी माइक्रोआर्किटेक्चर सहज रूप से दिखाती है कि ओवीएक्स समूह के चूहों ने शम समूह की तुलना में ट्रैब्युलर क्षेत्र और ट्रैब्युलर संख्या में उल्लेखनीय कमी पेश की, जो दर्शाता है कि ओवरीएक्टोमी अस्थि द्रव्यमान घनत्व (बीएमडी, -46%), अस्थि खनिज सामग्री (बीएमसी, -66%), ऊतक खनिज सामग्री (टीएमसी, -85%), अस्थि आयतन अंश (बीवीएफ, -82%) में उल्लेखनीय कमी ला सकता है। कुल ऊतक खनिज घनत्व (टीएमडी) और ट्रैब्युलर मोटाई (टीबी थ) में किसी भी संशोधन के बिना ट्रैब्युलर संख्या (टीबी एन, −76%) और ट्रैब्युलर पृथक्करण में वृद्धि (टीबी एसपी, {{9%)%)। 12 सप्ताह का ऑपरेशन. हालाँकि, सीआईएस ए के साथ इलाज किए गए ओवीएक्स चूहों में खुराक-निर्भरता में वृद्धि हुई बीएमडी (+43%~57%), बीएमसी (+65%~73%), टीएमसी (+83%~ 90%), बीवीएफ (+80%~88%), टीबी में अधिक कमी। एसपी (−79%~88%) और आगे बढ़ा हुआ टीबी। ओवीएक्स समूह की तुलना में एन (+73%~82%)। ऐसा प्रतीत होता है कि टीएमडी ओवरीएक्टोमी से प्रभावित नहीं है लेकिन एस्ट्राडियोल वैलेरेट (ईवी) के साथ उपचार से इसमें काफी वृद्धि हुई है।

2.1.3. अस्थि निर्माण और पुनर्वसन मार्करों दोनों पर सीआईएस ए का प्रभाव

TRAP, DPD, कैथेप्सिन K अस्थि निर्माण सूचकांक ALP, और अस्थि Gla-प्रोटीन (BGP) सहित हड्डी पुनर्जीवन मार्करों पर Cis A का प्रभाव चित्र 3 में दिखाया गया है। ओवरीएक्टोमी ऑपरेशन के 12 सप्ताह के बाद, TRAP, DPD की गतिविधियाँ , और OVX समूह में कैथेप्सिन K में उल्लेखनीय वृद्धि हुई, विशेष रूप से DPD, जिसमें लगभग 55.6% की वृद्धि हुई; शम समूह की तुलना में TRAP और कैथेप्सिन K को क्रमशः 43.5% और 38.1% बढ़ाया गया था। 12 सप्ताह तक मौखिक रूप से प्रशासित सीआईएस ए ने उपरोक्त सभी हड्डी अवशोषण मार्करों को रोकने में उल्लेखनीय क्षमता का प्रदर्शन किया, विशेष रूप से उच्च खुराक (8 {{13 }} मिलीग्राम/किग्रा) डीपीडी की गतिविधियों को दबाने पर महत्वपूर्ण प्रभाव प्रदर्शित करती है। की तुलना में 45.0%, TRAP 49.0% और कैथेप्सिन K 44.0%, क्रमशः (p < 0.01) तक। ओवीएक्स समूह (चित्रा 3)। यद्यपि ओवीएक्स समूह में एएलपी और बीजीपी गतिविधियों की बढ़ती प्रवृत्ति का प्रदर्शन किया गया था, लेकिन सांख्यिकीय रूप से कोई महत्वपूर्ण परिवर्तन नहीं देखा गया। हालाँकि, शैम समूह (पी <0.01) की तुलना में निम्न और उच्च-सीआईएस ए-उपचारित समूहों में एएलपी गतिविधि में महत्वपूर्ण सुधार देखा गया।

ऑस्टियोपोरोसिस रोग की रोकथाम के लिए प्राकृतिक सिस्टान्चे ट्यूबुलोसाPHGS75% ECH 30% ACT 12%

2.1.4. TRAF6, NF-κB PI3K, Akt, OPG और RANKL के प्रोटीन अभिव्यक्ति स्तर पर Cis A का प्रभाव

वेस्टर्न ब्लॉट विश्लेषण से पता चला कि शम समूह की तुलना में, OVX समूह में TRAF6, NF-κB, और RANKL के प्रोटीन स्तर में काफी वृद्धि हुई थी (p < 0.05), जबकि OPG, PI3K, और Akt में उल्लेखनीय रूप से कमी आई (चित्र 4)। Cis A (2{{13%) mg/kg या 80 mg/kg) ने TRAF6 एक्सप्रेशन (p <0.05) को काफी हद तक कम कर दिया, इसके बाद RANKL एक्सप्रेशन कम हो गया और OPG बढ़ गया, जिसका मतलब है कि OPG/RANKL अनुपात अपग्रेड हो गया। परिणामस्वरूप, NF-κB के सिग्नलिंग कैस्केड को डाउनरेगुलेट किया गया और PI3K/Akt को Cis A ट्रीटमेंट (p <0.05) द्वारा अपग्रेड किया गया।

2.2. बहस

ऑस्टियोपोरोसिस रोग के लिए वर्तमान चिकित्सीय विकल्पों की सीमाओं को देखते हुए, भोजन या प्राकृतिक खाद्य औषधीय पौधों के विकल्पों की आवश्यकता है। टीसीएम से प्रभावी एंटीऑस्टियोपोरोटिक एजेंटों की खोज के हमारे चल रहे प्रयास के एक भाग के रूप में, हमें अर्क, अंश और यौगिकों की एक श्रृंखला मिली, जिनमें एंटीऑस्टियोपोरोटिक गुणों का प्रभाव होता है [13,14]। सिस्टैंच डेजर्टिकोला एक महत्वपूर्ण क्लासिक टीसीएम है, जिसमें किडनी की कमी आदि के उपचार के लिए अनुकूल सुरक्षा प्रोफ़ाइल [15] और व्यापक औषधीय कार्य पाए गए हैं। [16]। टीसीएम के सिद्धांत के अनुसार, टीसीएम में आमतौर पर गुर्दे को सक्रिय करने का प्रभाव होता हैऑस्टियोपोरोसिस का इलाज करने के लिए उपयोग किया जाता है; इस जड़ी बूटी में फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स मुख्य बायोएक्टिव घटक हैं, इस प्रकार इसका अर्थ यह हैफेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्ससी. डेजर्टिकोला में मौजूद एंटीऑस्टियोपोरोटिक गुण हो सकते हैं। यह सिद्ध हो चुका है कि सी. डेजर्टिकोला अर्क बीएमडी में कमी को महत्वपूर्ण रूप से रोक सकता है और ओवीएक्स [17] के कारण होने वाले ट्रैब्युलर माइक्रोआर्किटेक्चर की गिरावट को रोक सकता है। इन विट्रो प्रयोग में, इसने एएलपी, हड्डी मॉर्फोजेनेटिक प्रोटीन -2, और ऑस्टियोपोन्ट एमआरएनए के साथ-साथ सुसंस्कृत ऑस्टियोब्लास्ट के हड्डी खनिजकरण में भी उल्लेखनीय वृद्धि की है [18]। इचिनाकोसाइड, सी. डेजर्टिकोला में एक मुख्य बायोएक्टिव घटक, जिसे आधिकारिक तौर पर चीनी फार्माकोपिया [11] में दर्ज किया गया है, ने 30 ~ 270 मिलीग्राम/किग्रा शरीर के वजन/दिन [19] की उच्च खुराक के साथ एंटीऑस्टियोपोरोटिक गतिविधि प्रदर्शित की, और आगे इन विट्रो परिणामों से पता चला कि यह MC3T3-E1 सबक्लोन 14 कोशिकाओं [20] में OPG/RANKL राशन को बढ़ाकर हड्डी पुनर्जनन को बढ़ावा दे सकता है। सीआईएस ए, सी. डेजर्टिकोला से पृथक फेनिलएथेनॉल ग्लाइकोसाइड्स में से एक था, और कई रिपोर्टों से पता चला है कि इस यौगिक में एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि [21] और विरोधी भड़काऊ गुण [22,23] थे। हाल ही में प्रकाशित एक पेपर से पता चला है कि Cis A ने चूहों में CCl4 और अल्कोहल-प्रेरित हेपेटोटॉक्सिसिटी दोनों पर सुरक्षात्मक गतिविधियाँ प्रदर्शित की हैं, और इसने इन विट्रो में प्राथमिक सुसंस्कृत माउस हेपेटोसाइट्स में इथेनॉल-प्रेरित क्षति पर एक सुरक्षात्मक गुण भी दिखाया है [24]। हमारे वर्तमान अध्ययन में, परिणामों से पता चला कि सीआईएस ए में एक ओवरीएक्टोमाइज्ड चूहों के मॉडल का उपयोग करके कम खुराक (20 ~ 80 मिलीग्राम / किग्रा शरीर के वजन / दिन) पर एंटीऑस्टियोपोरोटिक गतिविधि थी, और इस बायोएक्टिविटी को TRAF6 के स्तर को कम करके, दबाकर लागू किया गया था। RANKL और NF-κB की अभिव्यक्ति और OPG, PI3K और Akt को उत्तेजित करना, जिसका अर्थ है कि OVX चूहों में Cis A का चिकित्सीय प्रभाव TRAF6-मध्यस्थता NF-kappaB निष्क्रियता और PI3K/Akt सक्रियण के तंत्र के माध्यम से था।

यह सर्वविदित है कि ओवरीएक्टोमी बीएमडी, बायोमैकेनिकल ताकत, हड्डी की गुणवत्ता और ट्रैब्युलर हड्डी माइक्रोआर्किटेक्चर में स्पष्ट कमी के साथ ऑस्टियोपोरोसिस का कारण बन सकती है, और उपरोक्त परिवर्तन आंशिक रूप से एस्ट्रोजेन की कमी के कारण होते हैं [25]। अब, वर्तमान विवो प्रयोग में, हमारा अध्ययन दर्शाता है कि ओवरीएक्टोमी-प्रेरित ऑस्टियोपोरोसिस के परिणामस्वरूप बीएमडी, बीएमसी, टीएमसी और टीबी सहित बायोमैकेनिकल ताकत और ट्रैब्युलर संरचनात्मक मापदंडों में महत्वपूर्ण कमी आई है। एन, और टीबी बढ़ रही है। एसपी; और सीआईएस ए के उपचार से अधिकतम भार और कठोरता सहित हड्डी के यांत्रिक गुणों में काफी सुधार हुआ, बीएमडी में वृद्धि हुई, और ओवीएक्स समूह में चूहों की तुलना में अधिकांश हड्डी ट्रैब्युलर माइक्रोआर्किटेक्चर संरचनात्मक मापदंडों में सुधार हुआ, यह दर्शाता है कि सीआईएस ए हड्डी की गुणवत्ता में सुधार करने में प्रभावी था। और OVX चूहों में ट्रैब्युलर माइक्रोआर्किटेक्चर।

कुल बीएमडी के अलावा, तीन-बिंदु झुकने परीक्षण और ट्रैब्युलर हड्डी माइक्रोआर्किटेक्चर माप सीधे ऑस्टियोपोरोसिस का निदान कर सकते हैं, एएलपी और बीजीपी सहित हड्डी गठन मार्कर, और टीआरएपी, डीपीडी और कैथेप्सिन के सहित हड्डी पुनर्वसन सूचकांक को भी नियोजित किया गया था। सीआईएस ए के संबंधित एंटीऑस्टियोपोरोटिक तंत्र को स्पष्ट करें। हमारे अध्ययन में, ओवीएक्स समूह के चूहों में एएलपी गतिविधि ने एक गैर-महत्वपूर्ण बढ़ती प्रवृत्ति का प्रदर्शन किया, जिसने पोस्टमेनोपॉज़ल ऑस्टियोपोरोसिस में हड्डी के कारोबार की बढ़ी हुई दर [26,27] का संकेत दिया; सीआईएस ए उपचार की उच्च (80 मिलीग्राम/किलोग्राम शरीर वजन/दिन) और निम्न (20 मिलीग्राम/किलो शरीर वजन/दिन) खुराक ने दिखावटी समूह की तुलना में एएलपी गतिविधि पर महत्वपूर्ण वृद्धि दिखाई, जबकि बीजीपी गतिविधि प्रभावित नहीं हुई सभी उपचारित समूहों में ओवरीएक्टोमी; ओवीएक्स समूह में टीआरएपी, डीपीडी और कैथेप्सिन के में उल्लेखनीय वृद्धि हुई थी, और सीआईएस ए प्रशासन ने सभी तीन हड्डी अवशोषण मार्करों को उल्लेखनीय रूप से कम कर दिया था। उपरोक्त आंकड़ों से पता चलता है कि सीआईएस ए में संभावित एंटीऑस्टियोपोरोटिक गतिविधि है, और यह प्रभाव हड्डी के चयापचय के नियमन द्वारा डाला गया था, जिसमें हड्डी के अवशोषण को दबाने और हड्डी के गठन को बढ़ाने दोनों शामिल थे।

कंकाल की अखंडता के रखरखाव में ऑस्टियोब्लास्ट और ऑस्टियोक्लास्ट के बीच समन्वय एक महत्वपूर्ण कारक है। ओस्टियोक्लास्ट, टीआरएपी को व्यक्त करते हुए, एक्टिन-बाउंड सीलिंग ज़ोन के निर्माण के माध्यम से हड्डी की सतह से जुड़ते हैं, जिसके भीतर प्रोटीयोलाइटिक एंजाइम, जैसे कैथेप्सिन के, जारी होते हैं, जिससे पुनर्जीवन गड्ढों का निर्माण होता है। ऑस्टियोब्लास्टिक वंश की अपरिपक्व कोशिकाओं द्वारा ऑस्टियोक्लास्टोजेनेसिस का मॉड्यूलेशन RANKL और OPG [28] द्वारा मध्यस्थ होता है। ओपीजी एक डिकॉय रिसेप्टर है जो ऑस्टियोक्लास्टोजेनेसिस के आरएएनसीएल सक्रियण को रोकता है, जिससे हड्डी का अवशोषण कम हो जाता है। RANKL, जो ऑस्टियोक्लास्ट पूर्वजों को एक महत्वपूर्ण संकेत प्रदान करता है, ट्यूमर नेक्रोसिस फैक्टर लिगैंड परिवार का एक झिल्ली-बद्ध अणु है जो ऑस्टियोक्लास्ट के गठन को बढ़ावा देता है। ओपीजी/आरएएनकेएल अभिव्यक्ति का अनुपात ओस्टियोक्लास्टोजेनिक गतिविधि का एक प्रमुख पैरामीटर माना जाता है, और आरएएनकेएल द्वारा सक्रिय सिग्नलिंग कैस्केड में एनएफ-κबी और पीआई3के मार्ग शामिल हैं [29]। ऑस्टियोक्लास्टोजेनेसिस के लिए NF-κB मार्ग का महत्व इस तथ्य से प्रदर्शित होता है कि चूहों में NF-κB के विलोपन के परिणामस्वरूप परिपक्व ऑस्टियोक्लास्ट की अनुपस्थिति हो गई [30]। TRAF6 नवीन ऑस्टियोपोरोटिक दवाओं के लिए एक आशाजनक लक्ष्य साबित हुआ है। TRAF 6- की कमी वाले चूहों में दोषपूर्ण ऑस्टियोक्लास्टोजेनेसिस और गंभीर ऑस्टियोपेट्रोसिस दिखाई दे रहे थे, जिससे हड्डी के चयापचय में TRAF6 का महत्व प्रदर्शित हुआ। उभरते साक्ष्य RANKL/RANK-मध्यस्थता सिग्नलिंग कैस्केड में TRAF6 के लिए एक महत्वपूर्ण नियामक कार्य की ओर इशारा करते हैं [4,31]। वर्तमान अध्ययन के आंकड़ों से संकेत मिलता है कि OVX चूहों पर Cis A उपचार के परिणामस्वरूप TRAF6 प्रोटीन अभिव्यक्ति के स्तर में गिरावट आई, RANKL में कमी आई और OPG अभिव्यक्ति में वृद्धि हुई, जिससे डाउनस्ट्रीम NF-κB के RANKL सक्रियण को रोका गया और PI3K/Akt सिग्नल मार्ग सक्रिय हो गए। यह सुझाव देते हुए कि Cis A TRAF6-मध्यस्थता NF-kappaB निष्क्रियता और PI3K/Akt सक्रियण द्वारा ऑस्टियोक्लास्ट विभेदन को रोकता है और OPG/RANKL अनुपात को बढ़ाता है, बाद में ऑस्टियोक्लास्टोजेनेसिस को रोकता है और हड्डी के निर्माण को बढ़ावा देता है।

प्राकृतिक सिस्टांचे ट्यूबुलोसा के लिएएंटीऑस्टियोपोरोटिक गतिविधिPHGS75% ECH 30% ACT 12%

3. सामग्री और विधियाँ

3.1. पौधों की सामग्री, तैयारी और निर्धारण

सिस्टैंच डेजर्टिकोला के तनेनिंग्ज़िया मेडिकल यूनिवर्सिटी के फार्मेसी विभाग के प्रोफेसर ज़ू-यान फू द्वारा पहचाने गए वाईसी मा को 2 सितंबर 2015 को योंगनिंग काउंटी, निंग्ज़िया प्रांत, चीन में एकत्र किया गया था। फार्मेसी विभाग के हर्बेरियम में एक वाउचर नमूना (#20150901) संरक्षित किया गया था। सी. डेजर्टिकोला के हवा में सुखाए गए कुल 30.0 किलोग्राम तनों को 70% इथेनॉल (180 एल, 3 × 2 घंटे) के साथ 3 बार निकाला गया। फ़िल्ट्रेट को संयोजित किया गया और तीन अंश देने के लिए पानी में इथेनॉल (0%, 20% और 60%, प्रत्येक 60 एल) बढ़ाने की एक चरणबद्ध ढाल विलायक प्रणाली के साथ एक मैक्रोपोरस राल (एबी -8) कॉलम के अधीन किया गया, फिर हल्के पीले रंग को प्राप्त करने के लिए 60% अंश को सेफडेक्स एलएच -20 (फार्मासिया बायोटेक कंपनी, उप्साला, स्वीडन) और अर्ध-प्रारंभिक उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (एगिलेंट 1100, एगिलेंट टेक्नोलॉजीज, वाल्डब्रॉन, जर्मनी) द्वारा शुद्ध किया गया था। सिस्टानोसाइड ए 4.5 ग्राम (सीआईएस ए; उपज 0.015% थी)। संरचना को मुख्य रूप से एनएमआर (ब्रूकर एवेंस, 400 मेगाहर्ट्ज, जर्मनी) और एमएस स्पेक्ट्रा (एगिलेंट 6540, एगिलेंट टेक्नोलॉजीज) डेटा विश्लेषण द्वारा स्पष्ट किया गया था, जो रिपोर्ट किए गए डेटा [19] के अनुरूप थे। इसकी शुद्धता एचपीएलसी क्षेत्र सामान्यीकरण विधि (चित्रा 5) द्वारा निर्धारित की गई थी। पशु प्रयोगों में, हमारे प्रारंभिक प्रयोग के आधार पर, सीआईएस ए की खुराक 20-80 मिलीग्राम/किग्रा/दिन थी।

3.2. रसायन और विलायक

निम्नलिखित का उपयोग किया गया: कुल प्रोटीन निष्कर्षण किट और बीसीए प्रोटीन परिमाणीकरण किट (केन जेन बायोटेक। कंपनी लिमिटेड, नानजिंग, चीन), TRAF6, NF-κB, PI3K, Akt, RANKL, OPG, -actin और Tubelin के प्राथमिक एंटीबॉडी ( सेल सिग्नलिंग टेक्नोलॉजी, बेवर्ली, एमए, यूएसए), हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज-संयुग्मित बकरी विरोधी खरगोश आईजीजी (जेडएसजीबी-बीआईओ, बीजिंग, चीन) के द्वितीयक एंटीबॉडी, एस्ट्राडियोल वैलेरेट (1 मिलीग्राम, डेलफार्म लिले एसएएस, पेरिस, फ्रांस), हड्डी ग्लै -प्रोटीन और डीऑक्सीपाइरिडिनोलिन क्रॉसलिंक एलिसा किट (ज़िन्यू बायोलॉजिकल इंजीनियरिंग कंपनी लिमिटेड, शंघाई, चीन) और कैथेप्सिन के एलिसा किट (बायोविज़न, माउंटेन व्यू, सीए, यूएसए)। उपयोग किए गए अन्य सभी रसायन और जैव रासायनिक एजेंट एआर विश्लेषणात्मक-ग्रेड अभिकर्मक थे।

3.3. पशु प्रयोग

साठ मादा कुनमिंग स्ट्रेन चूहे, जिनकी उम्र 8 सप्ताह थी और जिनका शरीर का वजन 26 था। और वायु-नियंत्रित स्थिति में नल का पानी (24.{{9%) ± 0.5 ◦C, 45%-50% आर्द्रता और 12 घंटे/12 घंटे हल्के-अंधेरे रोशनी चक्र)। 1 सप्ताह तक अभ्यस्त होने के बाद, सड़न रोकने वाली स्थिति में सर्जरी की गई, और सभी चूहों को क्लोरल हाइड्रेट (100 मिलीग्राम/किग्रा, आईपी) से एनेस्थेटाइज किया गया; जिन चूहों को अंडाशय को हटाए बिना सर्जरी के संपर्क में लाया गया था, वे नकली समूह (एन=10) थे; अन्य को ओवीएक्स समूह (एन=50) के रूप में द्विपक्षीय ओवरीएक्टोमी के अधीन किया गया था। उपरोक्त पशु प्रयोग प्रयोगशाला जानवरों की देखभाल और उपयोग के लिए गाइड के अनुसार किए गए थे और निंग्ज़िया मेडिकल यूनिवर्सिटी की बायोएथिक्स समिति द्वारा अनुमोदित किए गए थे।

एक और {0}}सप्ताह की पुनर्प्राप्ति अवधि के बाद, उपरोक्त 50 ओवीएक्स चूहों को यादृच्छिक रूप से और समान रूप से 5 समूहों में विभाजित किया गया: सकारात्मक नियंत्रण (ईवी) के रूप में एस्ट्राडियोल वैलेरेट (1 मिलीग्राम/किग्रा/दिन) के साथ मौखिक रूप से इलाज किया गया; निम्न, मध्यम और उच्च खुराक समूहों के रूप में क्रमशः 20, 40, और 80 मिलीग्राम/किग्रा/सीआईएस ए के साथ; मॉडल समूह (OVX) के रूप में वाहन (0.5% कार्बोक्सिमिथाइलसेलुलोज()-Na) के साथ। सभी चूहों को मौखिक रूप से 1 एमएल/100 ग्राम बॉडी वेट व्हीकल, ईवी या सीआईएस ए की समान मात्रा दी गई, जो ऑपरेशन के बाद दूसरे सप्ताह से शुरू हुई और 12 सप्ताह तक चली। शरीर का वजन सप्ताह में दो बार मापा जाता था और खुराक को तदनुसार समायोजित किया जाता था। अंतिम मौखिक प्रशासन के बाद, संवेदनाहारी चूहों की ऊरु धमनी से रक्त के नमूने निकाले गए, उन्हें थक्का जमने दिया गया और सीरम तैयार करने के लिए 10 मिनट के लिए 3000× ग्राम पर सेंट्रीफ्यूज किया गया; दाहिने फीमोरा और टिबिया को विच्छेदित किया गया। हड्डी के माइक्रोआर्किटेक्चर और ऑस्टियोपोरोटिक-संबंधित सीरम जैव रासायनिक मापदंडों के आगे के मूल्यांकन के लिए सभी नमूनों को -80 ◦C पर संग्रहीत किया गया था।

3.4. तीन-बिंदु झुकने का परीक्षण

चूहे की दाहिनी जांघ की बायोमैकेनिकल संपत्ति तीन-बिंदु झुकने की व्यवस्था का उपयोग करके निर्धारित की गई थी। परीक्षण के दौरान फीमर के डिस्टल और समीपस्थ सिरों को सुरक्षित करने के लिए झुकने वाले जिग में वी-आकार का समर्थन होता है। फीमर को क्षैतिज रूप से सामने की ओर ऊपर की ओर स्थित किया गया था, और भार मध्य फीमर के केंद्र में नीचे की ओर लगाया गया था। समर्थनों के बीच की दूरी 8 मिमी थी। बोस परीक्षण मशीन (3220) (बोस कॉर्पोरेशन, एंडुरा टीईसी सिस्टम्स ग्रुप, मिनेटोनका, एमएन, यूएसए) का उपयोग करके विफलता तक हड्डियों को 0.02 मिमी/सेकेंड की निरंतर विस्थापन दर पर लोड किया गया था। लोड-विस्थापन वक्र प्राप्त किए गए और संरचनात्मक और भौतिक गुणों की गणना के लिए उपयोग किए गए, जिनमें अधिकतम भार, शिखर भार, लोचदार मापांक, लचीली ताकत आदि शामिल हैं।

3.5. माइक्रो-कंप्यूटेड टोमोग्राफी विश्लेषण

सभी चूहों की दाहिनी जांघों को मुलायम ऊतकों से साफ किया गया था, और ऊपर की दाहिनी डिस्टल ऊरु मेटाफिजिक की ट्रैब्युलर हड्डी माइक्रोआर्किटेक्चर को एक माइक्रो-सीटी स्कैनर (ईएक्सप्लोर लोकस एसपी, जीई हेल्थकेयर, लंदन, ओएन, कनाडा) द्वारा निर्धारित किया गया था। तीनों स्थानिक आयामों में आइसोट्रोपिक रिज़ॉल्यूशन 8 µm पर सेट है। फीमर की वृद्धि प्लेट में समान निर्देशांक का उपयोग करके रुचि के क्षेत्र (आरओआई) का चयन किया गया था। बीएमडी, अस्थि खनिज सामग्री (बीएमसी), ऊतक खनिज सामग्री (टीएमसी), ऊतक खनिज घनत्व (टीएमडी), हड्डी की मात्रा अंश (बीवीएफ), ट्रैब्युलर पृथक्करण (टीबी। एसपी), ट्रैब्युलर संख्या (टीबी एन) सहित अस्थि मॉर्फोमेट्रिक पैरामीटर। ) और ट्रैब्युलर मोटाई (टीबी थ) का मूल्यांकन एबीए हड्डी विश्लेषण सॉफ्टवेयर का उपयोग करके आरओआई का विश्लेषण करके किया गया था।

3.6. जैव रासायनिक मापदंडों का विश्लेषण

सीरम क्षारीय फॉस्फेट (एएलपी) की गतिविधि को एक स्वचालित विश्लेषक (सिबा-कॉर्निंग 550 डायग्नोस्टिक्स, कॉर्प., ओबेरलिन, ओएच, यूएसए)) पर मापा गया था; सीरम डीपीडी, बीजीपी और कैथेप्सिन के का स्तर संबंधित अभिकर्मक किटों द्वारा निर्धारित किया गया था, और टार्ट्रेट-प्रतिरोधी एसिड फॉस्फेट (टीआरएपी) का विश्लेषण संबंधित साहित्य के अनुसार किया गया था [32]।

3.7. वेस्टर्न ब्लॉट विश्लेषण

वेस्टर्न ब्लॉट विश्लेषण द्वारा विभिन्न समूहों में TRAF6, NF-κB PI3K, Akt, OPG और RANKL के प्रोटीन अभिव्यक्ति स्तर का पता लगाया गया। संक्षेप में, प्रोटीन को चूहों के दाहिने टिबिया से 0.5 मिमी फेनिलमिथाइलसल्फोनील फ्लोराइड, प्रोटीज़ और फॉस्फेट अवरोधक युक्त लिसीज़ बफर का उपयोग करके निकाला गया था। आगे के विश्लेषण के लिए सतह पर तैरनेवाला प्राप्त करने के लिए लाइसेट्स को 10 मिनट के लिए 12,{7}}× g पर सेंट्रीफ्यूज किया गया। लाइसेट्स की प्रोटीन सांद्रता को बाइसिनकोनिक एसिड परिमाणीकरण परख का उपयोग करके मापा गया था। प्रोटीन (50-100 माइक्रोग्राम) को 10% एसडीएस-पेज का उपयोग करके अलग किया गया, एक पॉलीविनाइलिडीन डिफ्लुओराइड झिल्ली में स्थानांतरित किया गया और TRAF6, NF-κB RANKL, PI3K, Akt, OPG और -actin (1:500) को लक्षित करने वाले मोनोक्लोनल प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ ऊष्मायन किया गया। उसी झिल्ली को हटा दिया गया और दोबारा जांच की गई, जिसमें इमेज लैब सॉफ्टवेयर द्वारा केमिलुमिनसेंट संकेतों का पता लगाया गया। -एक्टिन या ट्यूबुलिन आंतरिक नियंत्रण के रूप में कार्य करता है।

3.8. सांख्यिकीय विश्लेषण

पशु प्रयोगों से प्राप्त सभी डेटा का विश्लेषण एसपीएसएस (संस्करण 22.0, आईबीएम एसपीएसएस सांख्यिकी, आईबीएम कॉर्प, आर्मोंक, न्यूयॉर्क, एनवाई, यूएसए) द्वारा डेनेट के परीक्षण के साथ भिन्नता के एक-तरफ़ा विश्लेषण का उपयोग करके किया गया था। ) सॉफ़्टवेयर; p <{3}}.05 का मान सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण माना जाता था, और सभी परिणाम माध्य ± SD के रूप में प्रस्तुत किए गए थे।

4 निर्णय

संक्षेप में, सीआईएस ए,सक्रिय फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइडसी. डेजर्टिकोला से पृथक, OVX चूहों पर एक महत्वपूर्ण एंटीऑस्टियोपोरोटिक गतिविधि प्रदर्शित की गई, और आणविक तंत्र TRAF{0}}मध्यस्थता NF-kappaB निष्क्रियता और PI3K/Akt सक्रियण से संबंधित हो सकता है, इस प्रकार संभवतः ऑस्टियोपोरोसिस के उपचार के लिए एक आशाजनक एजेंट है बीमारी।

प्राकृतिक सिस्टांचे ट्यूबुलोसा के लिएएंटीऑस्टियोपोरोटिक गतिविधिPHGS75% ECH 30% ACT 12%