ट्रेडमिल व्यायाम हिप्पोकैम्पस और प्रीफ्रंटल कॉर्टेक्स की संरचनात्मक सिनैप्टिक प्लास्टिसिटी को बढ़ाकर 3×Tg-AD चूहों में स्थानिक सीखने और स्मृति में गिरावट को रोकता है भाग 1

अमूर्त:

अल्जाइमर रोग (एडी) की विशेषता सीखने और याददाश्त में कमी है। एडी की एक पैथोलॉजिकल विशेषता हिप्पोकैम्पस और प्रीफ्रंटल कॉर्टेक्स में सिनैप्स की संख्या और आकार, एक्सॉन की लंबाई, डेंड्राइटिक जटिलता और डेंड्राइटिक रीढ़ की संख्या में परिवर्तन है।

अल्जाइमर रोग एक न्यूरोडीजेनेरेटिव रोग है जो मुख्य रूप से मरीजों की याददाश्त, सोचने की क्षमता और दैनिक जीवन जीने की क्षमता को प्रभावित करता है। हालाँकि, यद्यपि अल्जाइमर रोग के रोगियों की याददाश्त प्रभावित होती है, फिर भी हम उन्हें कई दृष्टिकोणों से समझ सकते हैं और उनकी मदद कर सकते हैं।

सबसे पहले, हालांकि अल्जाइमर रोग के रोगियों की याददाश्त धीरे-धीरे कम हो जाएगी, लेकिन उनकी संवेदी क्षमता और भावनात्मक अभिव्यक्ति क्षमता प्रभावित नहीं होती है। इसलिए, हम उनकी शारीरिक जरूरतों का ख्याल रखकर और उनकी भावनात्मक जरूरतों पर ध्यान देकर उनकी मदद कर सकते हैं।

दूसरा, प्रशिक्षण और ध्यान में सुधार करके अल्जाइमर रोग के रोगियों की स्मृति हानि को कम किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, मरीज़ किताबें पढ़कर और संगीत गतिविधियों या खेलों में भाग लेकर अपने दिमाग का व्यायाम कर सकते हैं और अपनी याददाश्त में सुधार कर सकते हैं। इसके अलावा, यदि परिवार के सदस्य और समुदाय रोगियों को सहायता और सहायता प्रदान कर सकते हैं, तो इन गतिविधियों का प्रभाव अधिक महत्वपूर्ण हो सकता है।

अंत में, हमें समाज को अल्जाइमर रोग के रोगियों पर अधिक ध्यान देने और समझने के लिए प्रोत्साहित करना चाहिए। मरीज़ों को केवल याददाश्त पर निर्भर रहने की नहीं, बल्कि हमारी कंपनी और सहायता की ज़रूरत है। जब सामाजिक वातावरण प्यार और देखभाल से भरा होगा तभी मरीज की स्थिति का बेहतर इलाज और प्रबंधन किया जा सकता है।

संक्षेप में, अल्जाइमर रोग और स्मृति के बीच संबंध बहुत जटिल है, लेकिन हमें सक्रिय रूप से रोगियों की मदद करनी चाहिए, उनके जीवन की गुणवत्ता में सुधार करना चाहिए और समाज को उनकी स्थिति पर ध्यान देने और समझने के लिए प्रोत्साहित करना चाहिए। मुझे आशा है कि हममें से प्रत्येक भविष्य में एक बेहतर और अधिक सामंजस्यपूर्ण समाज का निर्माण कर सकेगा। यह देखा जा सकता है कि हमें याददाश्त में सुधार करने की आवश्यकता है, और सिस्टैंच याददाश्त में काफी सुधार कर सकता है क्योंकि यह न्यूरोट्रांसमीटर के संतुलन को भी नियंत्रित कर सकता है, जैसे एसिटाइलकोलाइन और विकास कारकों के स्तर को बढ़ाना, जो स्मृति और सीखने के लिए बहुत महत्वपूर्ण हैं। इसके अलावा, सिस्टैंच रक्त प्रवाह में भी सुधार कर सकता है और ऑक्सीजन वितरण को बढ़ावा दे सकता है, जो यह सुनिश्चित कर सकता है कि मस्तिष्क को पर्याप्त पोषण और ऊर्जा प्राप्त हो, जिससे मस्तिष्क की जीवन शक्ति और सहनशक्ति में सुधार हो।

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ट्रेडमिल व्यायाम स्ट्रोक, इस्केमिया और मनोभ्रंश के माउस या चूहे के मॉडल में सिनैप्टिक प्लास्टिसिटी को बढ़ा सकता है। इस अध्ययन का उद्देश्य AD के एक माउस मॉडल, 3×Tg-AD चूहों में सीखने और स्मृति, और संरचनात्मक सिनेप्टिक प्लास्टिसिटी पर ट्रेडमिल व्यायाम के प्रभावों की जांच करना था।

यहां, हम दिखाते हैं कि तीन महीने के चूहों में शुरू होने वाले 12 सप्ताह के ट्रेडमिल व्यायाम से छह महीने के 3×Tg-AD चूहों में स्थानिक कामकाजी स्मृति में सुधार होता है, जबकि गैर-व्यायाम छह महीने के 3×Tg-AD चूहों में कमज़ोरी दिखाई देती है। स्थानिक कार्यस्मृति.

ट्रेडमिल व्यायाम-प्रेरित स्थानिक शिक्षा और स्मृति में सुधार के लिए संभावित तंत्र की जांच करने के लिए, हमने छह महीने के 3 × टीजी-एडी चूहों के हिप्पोकैम्पस और प्रीफ्रंटल कॉर्टेक्स में संरचनात्मक सिनैप्टिक प्लास्टिसिटी की जांच की, जो 12 सप्ताह के ट्रेडमिल व्यायाम से गुजर चुके थे।

हमने पाया कि ट्रेडमिल व्यायाम से 3×Tg-AD चूहों में सिनैप्स संख्या, सिनैप्टिक संरचनात्मक पैरामीटर, सिनैप्टोफिसिन (Syn, एक प्रीसिनेप्टिक मार्कर), एक्सोन की लंबाई, डेंड्राइटिक जटिलता और डेंड्राइटिक स्पाइन की संख्या में वृद्धि हुई और इसे बहाल किया गया। ये पैरामीटर ट्रेडमिल व्यायाम के बिना गैर-टीजी नियंत्रण चूहों के समान स्तर के हैं। इसके अलावा, ट्रेडमिल व्यायाम ने गैर-टीजी नियंत्रण चूहों में भी इन मापदंडों में सुधार किया।

संरचनात्मक सिनैप्टिक प्लास्टिसिटी को मजबूत करना एक संभावित तंत्र का प्रतिनिधित्व कर सकता है जिसके द्वारा ट्रेडमिल व्यायाम 3 × टीजी-एडी चूहों में स्थानिक सीखने और स्मृति और सिनैप्स हानि में गिरावट को रोकता है।

कीवर्ड: व्यायाम; याद; सिनैप्टिक; डेंड्राइटिक स्पाइन; संरचनात्मक सिनैप्टिक प्लास्टिसिटी; 3×Tg-AD चूहे।

1 परिचय

अल्जाइमर रोग (एडी) एक प्रगतिशील न्यूरोडीजेनेरेटिव बीमारी है जो अक्सर स्मृति हानि और संज्ञानात्मक गिरावट की विशेषता होती है [1]। नई सीखी गई जानकारी को याद रखने में कठिनाई, या अल्पकालिक स्मृति हानि, एडी [2] का प्रारंभिक लक्षण है।

जैसे-जैसे बीमारी बढ़ती है, एडी के मरीज़ धीरे-धीरे दीर्घकालिक स्मृति हानि का अनुभव करते हैं, जो जीवन की गुणवत्ता पर गंभीर प्रभाव डालता है। एडी पैथोलॉजी की विशेषता हिप्पोकैम्पस और प्रीफ्रंटल कॉर्टेक्स (पीएफसी) में अमाइलॉइड- (ए) प्लाक और ताऊ न्यूरोफाइब्रिलरी टेंगल्स के संचय से होती है, ये दोनों सीखने और स्मृति में महत्वपूर्ण संरचनाएं हैं [3-6]।

पिछले अध्ययनों से पता चलता है कि ए और ताऊ हिप्पोकैम्पस और प्रीफ्रंटल कॉर्टेक्स में सिनैप्टिक प्लास्टिसिटी को बाधित करके स्मृति को ख़राब कर सकते हैं [7,8]।

इस सिनैप्टिक प्लास्टिसिटी में सिनैप्टिक प्रभावकारिता और रीमॉडलिंग, एक्सोनल स्प्राउटिंग और डेंड्रिटिक्रीमॉडलिंग और डेंड्राइटिक स्पाइन डायनेमिक्स में गतिविधि-निर्भर परिवर्तन शामिल हैं।

जानवरों के अध्ययन में, नैनोमोलर सांद्रता में घुलनशील ए-ओलिगोमर्स, विशिष्ट एडी रोगियों के सेरेब्रल कॉर्टेक्स से सीधे निकाले गए या सिंथेटिक पेप्टाइड से उत्पन्न, दीर्घकालिक पोटेंशिएशन (एलटीपी) को संभावित रूप से बाधित करके सीखे गए व्यवहार की स्मृति को बाधित करते हैं, जिससे दीर्घकालिक अवसाद बढ़ जाता है। (लिमिटेड), हिप्पोकैम्पस के डेंड्राइटिक स्पाइन घनत्व को कम करना [9-11]।

इस बीच, यह दिखाया गया है कि स्थानिक शिक्षा और स्मृति हानि अमानवीय रोगियों और एडी के विभिन्न ट्रांसजेनिक माउस मॉडल दोनों सिनैप्टिक डिसफंक्शन के कारण होती है, उदाहरण के लिए, ऐपएनएल-जीएफ [12,13], टीजी2576 [14], एपीपी/पीएस1 [15], 5×एफएडी [16], और 3×टीजी-एडी [17]।

कम सिनैप्टिक फ़ंक्शन अक्सर युवा चूहों में प्लाक विकास से पहले देखा गया था, जिससे संकेत मिलता है कि ए ऑलिगोमर्स प्लाक गठन से पहले सिनैप्टिक घाटे को ट्रिगर करते हैं [18]। इस बीच, कंप्यूटेड टोमोग्राफी (सीटी) और मैग्नेटिक रेजोनेंस इमेजिंग (एमआरआई) का उपयोग करने वाले अध्ययनों से पता चलता है कि अल्जाइमर रोग से पीड़ित लोगों के हिप्पोकैम्पल और प्रीफ्रंटल कॉर्टेक्स बीमारी बढ़ने पर नाटकीय रूप से सिकुड़ जाते हैं [19,20]।

एडी दुनिया भर में तेजी से प्रचलित है, और अभी तक कोई भी उपलब्ध उपचार इस बीमारी को ठीक नहीं कर सकता है या इसकी प्रगति को धीमा कर सकता है। एकत्रित साक्ष्य से पता चलता है कि शारीरिक व्यायाम से अमाइलॉइड बोझ कम हो जाता है, सिनैप्टिक प्लास्टिसिटी में सुधार होता है और एडी के कृंतक मॉडल में सीखने और स्मृति की कमी होती है और रोग संबंधी परिवर्तनों की प्रगति में देरी होती है। मस्तिष्क में [21-28]।

शारीरिक व्यायाम विभिन्न प्रायोगिक मॉडलों में विभिन्न तंत्रों के माध्यम से कार्य कर सकता है। एरोबिक व्यायाम सेरेब्रल रक्त प्रवाह को बढ़ा सकता है, ऑक्सीजन के उपयोग में सुधार कर सकता है, और विकास कारकों की अभिव्यक्ति को बढ़ा सकता है जो सिनैप्टिक प्लास्टिसिटी और न्यूरोजेनेसिस को बढ़ावा देते हैं और मस्तिष्क समारोह पर सीधा लाभकारी प्रभाव डाल सकते हैं [29-31]।

इसमें शामिल तंत्रों में सीखने और स्मृति, सिनैप्टिक प्लास्टिसिटी और न्यूरोनल सर्वाइवल [30] से जुड़े आणविक लक्ष्यों की जीन अभिव्यक्ति का अपग्रेडेशन शामिल है।

इसके अलावा, एरोबिक व्यायाम उम्रदराज़ चूहों में हिप्पोकैम्पस और कॉर्टेक्स में सिनेप्स हानि को उलट कर, संवहनी मनोभ्रंश का एक चूहा मॉडल, और एक मध्य सेरेब्रल आर्टरी रोड़ा/रीपरफ्यूजन (एमसीएओ/आर) मॉडल [31-33] द्वारा सीखने और स्मृति की कमी को सुधार सकता है।

वर्तमान अध्ययन छह महीने के 3×Tg-AD चूहों में आठ-हाथ रेडियल भूलभुलैया का उपयोग करके स्थानिक सीखने और स्मृति पर 12 सप्ताह के ट्रेडमिल व्यायाम के प्रभावों की जांच करेगा।

फिर, इसमें शामिल संभावित तंत्रों की जांच की जाती है। हिप्पोकैम्पस और प्रीफ्रंटल कॉर्टेक्स को स्थानिक सीखने और स्मृति के लिए महत्वपूर्ण मस्तिष्क क्षेत्र माना जाता है [34]।

ऐसा माना जाता है कि हिप्पोकैम्पस और प्रीफ्रंटल कॉर्टेक्स के भीतर सिनैप्टिक प्लास्टिसिटी सीखने और स्मृति का सेलुलर आधार है, जो सिनैप्टिक कनेक्शन की मजबूती पर निर्भर करता है [35]।

पिछले अध्ययनों से पता चला है कि बड़ा सिनैप्टिक सक्रिय क्षेत्र रोमांचक पोस्टसिनेप्टिकन्यूरॉन्स पर अधिक प्रभावी है और सक्रिय क्षेत्र का छोटा होना सिनैप्टिक ट्रांसमिशन की ख़राब दक्षता की स्थिति को दर्शा सकता है [36]।

न्यूरोट्रांसमीटर सिनैप्टिक फांक में फैलता है और पोस्टसिनेप्टिक न्यूरॉन की झिल्ली पर रिसेप्टर प्रोटीन को बांधता है, जिससे पोस्टसिनेप्टिक झिल्ली में आयनिक चैनल या तो खुलते हैं या बंद होते हैं।

सिनैप्टिक फांक सीमा का इष्टतम छोटा होना और पोस्टसिनेप्टिक घनत्व (पीएसडी) का मोटा होना सिनैप्टिक ट्रांसमिशन दक्षता को बढ़ा सकता है [37-39]। इसके अलावा, एक्सॉन, डेंड्राइटिक और डेंड्राइटिक स्पाइन संरचनात्मक सिनैप्टिक प्लास्टिसिटी का संरचनात्मक आधार बनाते हैं।

वर्तमान अध्ययन में, हमने यह निर्धारित किया कि क्या 12 सप्ताह के ट्रेडमिल व्यायाम प्रीट्रीटमेंट ने छह महीने के 3×टीजी-एडी चूहों में हिप्पोकैम्पस और प्रीफ्रंटल कॉर्टेक्स के भीतर संरचनात्मक सिनैप्टिक प्लास्टिसिटी में ए-प्रेरित हानि को बदल दिया है।

हमने पाया कि 12 सप्ताह के ट्रेडमिल व्यायाम ने छह महीने के 3×टीजी-एडी चूहों में स्थानिक सीखने और स्मृति में कमी को रोका और ट्रेडमिल व्यायाम ने सिनैप्स संख्या और सिनैप्टिक संरचनात्मक मापदंडों, सिनैप्टोफिसिन (सिन) की अभिव्यक्ति को बढ़ाकर संरचनात्मक सिनैप्टिक प्लास्टिसिटी को बढ़ाया। ), अक्षतंतु की लंबाई, वृक्ष के समान जटिलता, और वृक्ष के समान रीढ़ की संख्या। ये तंत्र ट्रेडमिल व्यायाम-प्रेरित सीखने और स्मृति में सुधार का आधार बन सकते हैं।

2। सामग्री और विधि

2.1. पशु

ट्रिपल-ट्रांसजेनिक अल्जाइमर रोग (3×Tg-AD) नर चूहों (PS1M146Vknockin, APPswe, और TauP301L ट्रांसजेन को आश्रय देने वाले) को जैक्सन प्रयोगशाला से प्राप्त किया गया था। आयु-मिलान C57BL/6J नर चूहों को गैर-ट्रांसजेनिक (गैर-टीजी) के रूप में नियोजित किया गया था। नियंत्रण.

अध्ययन 3-माह पुराने 3×Tg-AD (n=20) और गैर-Tg चूहों (n=20) पर किया गया था। सभी जानवरों को 12 घंटे के प्रकाश-अंधेरे चक्र के साथ नियंत्रित तापमान (23 ± 1◦C) और आर्द्रता (40-60%) पर बनाए गए कमरे में भोजन और पानी तक पहुंच प्रदान की गई थी।

व्यवहार प्रयोगों से पहले 3-6 दिनों तक प्रतिदिन चूहों की देखभाल की जाती थी। सभी जानवरों का रखरखाव और उपयोग बीजिंग स्पोर्टयूनिवर्सिटी (2015015) की नैतिक समिति द्वारा अनुमोदित प्रोटोकॉल के अनुसार किया गया था।

2.2. ट्रेडमिल व्यायाम प्रोटोकॉल

3 महीने की उम्र में, चूहों को बेतरतीब ढंग से चार समूहों में विभाजित किया गया (प्रत्येक n {{1%): गैर-टीजी नियंत्रण समूह, गैर-टीजी व्यायाम समूह, 3×टीजी-एडी नियंत्रण समूह, और 3×टीजी-एडी व्यायाम समूह .

व्यायाम करने वाले सभी चूहों को लगातार 3 दिनों तक 30 मिनट तक ट्रेडमिल दौड़ने की अनुमति दी गई (पहले दिन 5 मीटर/मिनट, दूसरे और तीसरे दिन 10 मीटर/मिनट)।

फिर, उन चूहों को 10 मिनट के लिए ढलान पर 12 मीटर/मिनट की गति से, फिर 50 मिनट के लिए 15 मीटर/मिनट की गति से ट्रेडमिल व्यायाम प्रोटोकॉल के अधीन किया गया। कुल मिलाकर, चूहों को कुल 12 सप्ताह तक प्रति दिन 1 घंटे, प्रति सप्ताह 5 दिन प्रशिक्षित किया गया।

ऑक्सीमैक्स/व्यापक प्रयोगशाला पशु निगरानी प्रणाली से जुड़े एक संलग्न सिंगल-लेनट्रेडमिल द्वारा हमारे परीक्षण के अनुसार, यह लंबी अवधि का प्रशिक्षण प्रोटोकॉल व्यायाम की तीव्रता को VO2max के 50% से 65% तक बनाए रखता है।

गैर-टीजी नियंत्रण और 3×टीजी-एडी नियंत्रण समूहों में चूहों को व्यायाम समूहों के समान अवधि के लिए बिना दौड़े ट्रेडमिल पर छोड़ दिया गया था। हमने सबसे पहले सभी चूहों (प्रत्येक समूह में 10 चूहे, 6 महीने की उम्र) के लिए आठ-आर्मरेडियल भूलभुलैया परीक्षण किया।

इसके बाद, हमने गोल्गी स्टेनिंग (प्रत्येक समूह में 3 चूहे), वेस्टर्न ब्लॉट (प्रत्येक समूह में 3 चूहे), और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (प्रत्येक समूह में 4 चूहे) द्वारा हिस्टोलॉजिकल असामान्यताओं की जांच की (चित्रा 1 ए)।

चित्र 1. ट्रेडमिल व्यायाम 3×Tg-AD चूहों में स्थानिक सीखने और स्मृति में गिरावट को रोकता है। (ए) ट्रेडमिल व्यायाम या गैर-व्यायाम नियंत्रण, व्यवहार परीक्षण और हिस्टोलॉजिकल परीक्षण की समयरेखा। (बी)

गैर-टीजी नियंत्रण समूह (बी; ** पी < 0.01, एन=10 की तुलना में 3×टीजी-एडी चूहों में दिन 5 और दिन 6 पर कार्यशील मेमोरी त्रुटियों का प्रतिशत काफी बढ़ गया था। चूहों)।

कार्यशील मेमोरी त्रुटियों के प्रतिशत में वृद्धि को ट्रेडमिल व्यायाम प्रीट्रीटमेंट (बी; ## पी < {{0}}.01,n=10 चूहों) द्वारा रोका गया था। (सी) गैर-टीजी नियंत्रण, गैर-टीजी व्यायाम, 3×टीजी-एडी नियंत्रण और 3×टीजी-एडी व्यायाम चूहों के बीच संदर्भ स्मृति त्रुटियों के प्रतिशत पर कोई महत्वपूर्ण प्रभाव नहीं पड़ा (सी; पी > 0.05,एन {{ 11}} चूहे)।

2.3. आठ-हाथ रेडियल भूलभुलैया परीक्षण

आठ भुजाओं वाली रेडियल भूलभुलैया में 18 सेमी व्यास वाला एक केंद्रीय मंच और आठ भुजाएं शामिल थीं जो केंद्रीय मंच से फैली हुई थीं, प्रत्येक 30 सेमी लंबी, 7 सेमी चौड़ी और 15 सेमी ऊंची, आसन्न भुजाओं के बीच समान कोणीय दूरी के साथ। आठ भुजाओं वाली रेडियलमेज़ को नीले रंग से रंगा गया था।

प्रत्येक भुजा के सिरे पर एक भोजन का प्याला था जिसका व्यास 3 सेमी और गहराई 1 सेमी थी। प्रत्येक भुजा और भूलभुलैया के केंद्र के बीच एक दरवाजा स्थित था। भूलभुलैया के ऊपर स्थित एक वीडियो कैमरा जानवरों की गतिविधियों को रिकॉर्ड करने के लिए एक कंप्यूटर से जुड़ा था।

भूलभुलैया को कई अतिरिक्त भूलभुलैया संकेतों के साथ एक मंद रोशनी वाले कमरे में फर्श के स्तर से 35 सेमी ऊपर उठाया गया था। पूरी प्रायोगिक प्रक्रिया में भोजन के रूप में चॉकलेट का उपयोग किया गया। डेटा का विश्लेषण एथोलॉजी वीडियो विश्लेषण सॉफ्टवेयर (JLBehv-8ARMM, शंघाईजिलियांग कंपनी, शंघाई, चीन) के साथ किया गया था।

रेडियल भूलभुलैया प्रोटोकॉल में चॉकलेट के लिए प्रेरणा बढ़ाने के लिए, चूहों को मूल शरीर के वजन के 80-85% तक पहुंचने के लिए एक अतिरिक्त सप्ताह के लिए भोजन-प्रतिबंधित किया गया था और पूरे अध्ययन के दौरान इन परिस्थितियों में बनाए रखा गया था।

रेडियल भूलभुलैया कार्य को अनुकूलन और अधिग्रहण सत्रों में विभाजित किया गया था। अनुकूलन सत्र के लगातार दो दिनों में, प्रत्येक माउस को केंद्रीय प्रारंभिक प्लेटफ़ॉर्म में रखा गया था।

10 सेकंड के बाद, सभी दरवाजे खोल दिए गए, और चूहे को 10 मिनट के लिए भूलभुलैया के प्रत्येक हाथ में भोजन (0.08 ग्राम चॉकलेट) का पता लगाने और उपभोग करने की अनुमति दी गई। अधिग्रहण सत्र में लगातार 10 दिनों तक दिन में एक बार एक परीक्षण किया गया।

चार भुजाओं (1, 3, 5, और 7) पर चॉकलेट पुरस्कार का प्रलोभन दिया गया। चूहों को भूलभुलैया के केंद्र में रखा गया, और 10 सेकंड के बाद, सभी दरवाजे खोल दिए गए। चूहों की गतिविधियों को स्वचालित रूप से रिकॉर्ड किया गया और फिर वीडियो ट्रैकिंग सिस्टम का उपयोग करके विश्लेषण किया गया।

जब चूहे के चारों पंजे बांह की शुरुआत को पार कर गए तो बांह की प्रविष्टि की गणना की गई। परीक्षण तब तक जारी रहा जब तक कि चूहा चारो चारा भुजाओं में प्रवेश नहीं कर गया। परीक्षण के अंत में, चूहे को घर के पिंजरे में वापस कर दिया गया।

नॉन-बैटेडआर्म में प्रवेश को एक संदर्भ मेमोरी त्रुटि के रूप में माना जाता था और पहले से देखे गए आर्म में पुनः प्रवेश को एक कार्यशील मेमोरी त्रुटि के रूप में माना जाता था।

प्रदर्शन को सारणीबद्ध करने में, कार्यशील मेमोरी त्रुटियों (अल्पकालिक मेमोरी) के प्रतिशत को कुल प्रविष्टियों के बीच किसी भी बार-बार की गई प्रविष्टियों के रूप में परिभाषित किया गया था, और संदर्भ मेमोरी त्रुटियों (दीर्घकालिक मेमोरी) के प्रतिशत को एक अनबैटेड आर्म में प्रविष्टियों के प्रतिशत और उपभोग के बिना उन लोगों के प्रतिशत के रूप में परिभाषित किया गया था। कुल प्रविष्टियों में से चारा हथियार में प्रवेश करते समय चारा [40,41]।

2.4. गोल्गी धुंधलापन

रूपात्मक परिवर्तनों की मात्रा निर्धारित करने के लिए, निर्माता के निर्देशों का पालन करते हुए हिप्पोकैम्पस और प्रीफ्रंटलकोर्टेक्स को गोल्गी स्टेनिंग किट (एफडी रैपिड गोल्गी स्टेन किट पीके -401, एफडी न्यूरोटेक्नोलॉजीज, कोलंबिया, एमडी, यूएसए) के साथ दाग दिया गया था।

संक्षेप में, मस्तिष्क को निकाला गया और क्रायोस्टेट (लीका, नुस्लोच, जर्मनी) का उपयोग करके 60 माइक्रोन स्लाइस में काटने से पहले अंधेरे में 17 दिनों के लिए 20 एमएल गोल्गी-कॉक्स समाधान वाले जार में रखा गया।

वर्गों को 10 मिनट के लिए धुंधला घोल में डाला गया, आरोही इथेनॉल श्रृंखला (50%, 70%, 95% और 100%) में निर्जलित किया गया, और जाइलीन में दो बार साफ किया गया। अंत में, स्लाइड्स को पर्माउंट के साथ कवर-स्लिप किया गया।

हिप्पोकैम्पस के CA1 क्षेत्र या प्रीफ्रंटल कॉर्टेक्स की परत V से पिरामिड कोशिकाएं 200× और 1000× के आवर्धन पर माइक्रोस्कोप का उपयोग करके खींची गईं।

न्यूरॉन्स का चयन किया गया था यदि वे अस्पष्ट थे (वास्कुलचर, ग्लियाल कोशिकाओं या अन्य न्यूरॉन्स द्वारा) और अनुभाग के भीतर पूरी तरह से दागदार और बरकरार दिखाई देते थे।

अक्षतंतु की लंबाई को सोम की सीमा से अक्षतंतु की नोक तक मैन्युअल रूप से एक न्यूराइट का पता लगाकर मापा गया था [42]। डेंड्राइटिक आकृति विज्ञान का मूल्यांकन शोल विश्लेषण द्वारा किया गया था।

समदूरस्थ (10 µm) संकेंद्रित वलय वाला एक पारदर्शी ग्रिड वृक्ष के समान वृक्ष के निशानों पर केंद्रित था। कुल डेंड्राइटिक लंबाई और डेंड्रिटिकार्बोराइजेशन [43-45] का अनुमान लगाने के लिए रिंग चौराहों की संख्या का उपयोग किया गया था।

अंत में, हमने प्रत्येक प्रयोग समूह में 3 चूहों से CA1 हिप्पोकैम्पस और लेयरV प्रीफ्रंटल कॉर्टेक्स में 9–13 अनुभाग एकत्र किए। रीढ़ की हड्डी की संख्या की गणना करने के लिए, डेंड्राइट की लंबाई (कम से कम 10 माइक्रोन से अधिक या उसके बराबर, 2-ओडर डेंड्राइट) का पता लगाया गया (1000× पर)। प्रत्येक डेंड्राइटिक शाखा की सटीक लंबाई की गणना की गई, और लंबाई के साथ रीढ़ की संख्या की गणना की गई (रीढ़/10 µm प्राप्त करने के लिए) [43]।

The length of dendritic filopodia is normally >3 µm और<10 µm [46]. The morphology of spines is commonly categorized into three types: thin, mushroom, and stubby [47]. 

रीढ़ की हड्डी पतली मानी जाती है यदि लंबाई गर्दन के व्यास से अधिक हो और सिर और गर्दन के व्यास समान हों। यदि सिर का व्यास गर्दन के व्यास से अधिक है तो रीढ़ को मशरूम के रूप में वर्गीकृत किया जाता है। यदि लंबाई और चौड़ाई समान हो तो रीढ़ को ठूंठदार माना जाता है।

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