Acteoside: एंटीऑक्सीडेंट और उच्चरक्तचापरोधी गतिविधि पर शोध

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एक्टोसाइड और उसके एनालॉग्स की एंटीऑक्सीडेंट और एंटीहाइपरटेन्सिव गतिविधियां

चाओ-हिसियांग चेन1,2, यिन-शिउ लिन3, मेई-यिन चिएन2,4, वेन-ची एचओयू5,6,*, और मियाओ-लिन एचयू1,*

सार। एक्टियोसाइड(अधिनियम), एक फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड, कई पौधों और पारंपरिक हर्बल दवाओं में एक सक्रिय यौगिक है। इसके संरचनात्मक आइसोमर के साथ अधिनियम,आइसोएक्टोसाइड(आइसोएक्ट), और एक एनालॉग, 6-O-एसीटी-लैक्टोसाइड (6-O-एसिटाइलैक्ट), का उपयोग अध्ययन में किया गया थाएंटीऑक्सिडेंट, एंटी-एंजियोटेंसिन-परिवर्तित एंजाइम (एसीई), और हेमोलिसिस निरोधात्मक गतिविधियाँमें इन विट्रोऔर अनायास उच्च रक्तचाप से ग्रस्त चूहों (SHR) के खिलाफ उच्चरक्तचापरोधी गतिविधिमें विवो. हमने दिखाया कि अधिनियम, इसोएक्ट, और 6-O-एसिटाइलएक्ट ने प्रभावी रूप से 1,1-डिपेनिल-2-पिक्रील-हाइड्राज़ाइल रेडिकल्स (IC50 के साथ क्रमशः 11.4, 9.48, और 9.55 μM पर) और सुपरऑक्साइड रेडिकल्स (IC50 के साथ 66.0, 38.5 पर) को प्रभावी ढंग से परिमार्जन किया। , और 39.1 माइक्रोन, क्रमशः)। आइसोएक्ट और 6- के रूप मेंO-एसिटाइलैक्ट में समान कट्टरपंथी-मैला ढोने वाली गतिविधियाँ थीं, केवल अधिनियम और इसोएक्ट का उपयोग निम्नलिखित अध्ययनों के लिए किया गया था। एक्ट और आइसोएक्ट दोनों ने क्रमशः 53.3 और 62.2 μM पर IC50 के साथ xanthine ऑक्सीडेज गतिविधि को रोक दिया। Act और Isoact दोनों ने ACE गतिविधि और 2,2'-azo-bis(2-amidinopropane) dihydrochloride द्वारा प्रेरित हेमोलिसिस को भी महत्वपूर्ण रूप से बाधित किया, लेकिन अधिनियम के प्रभाव Isoact से अधिक मजबूत थे। इसके बाद हमने मौखिक रूप से एसएचआर को एक्ट या आइसोएक्ट (10 मिलीग्राम/किलोग्राम शरीर के वजन) की एक खुराक दी और 24 घंटे में सिस्टोलिक रक्तचाप (एसबीपी) और डायस्टोलिक रक्तचाप (डीबीपी) के परिवर्तनों को मापा। अधिनियम, लेकिन इसोएक्ट नहीं, ने एसबीपी और डीबीपी को कम करने में उच्चरक्तचापरोधी गतिविधि दिखाई। परिणाम स्वास्थ्य खाद्य उत्पाद के रूप में अधिनियम की संभावित उपयोगिता का सुझाव देते हैंएंटीऑक्सिडेंटसुरक्षा और रक्तचाप विनियमन।

कीवर्ड: एक्टियोसाइड; उच्चरक्तचापरोधी गतिविधि; एंजियोटेंसिन-परिवर्तित एंजाइम (एसीई); एंटीऑक्सीडेंट; हेमोलिसिस।

सिस्टैंच में सक्रिय संघटक एक्टोसाइड

परिचय

एक्टियोसाइड(अधिनियम), एक फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड जिसमें कैफिक एसिड, 3', 4'-डायहाइड्रॉक्सी फेनिलएथेनॉल, ग्लूकोज और रमनोज होता है, को पहले फूलों से अलग किया गया थाबकाइन वुल- गरिसो(बिरकोफर एट अल।, 1968), और साथ में के संरचनात्मक आइसोमर के साथआइसोएक्टोसाइड(आइसोएक्ट) और का व्युत्पन्न6-O-एसिटाइलैक्टोसाइड(6-O-एसिटाइलैक्ट), कई पौधों और हर्बल दवाओं में पाया गया है, जैसे किलिगस्ट्रम पुरपुरसेंस(वोंग एट अल।, 2001),कैलिकार्पा द्विभाजन(कू एट अल।, 2006; ली एट अल।, 2006),सिस्टांचे डेजर्टिकोलातथाबॉशनियाकिया रसिका(वू एट अल।, 2006),कंठमाला निंगपोएनिस(हुआंग एट अल।, 2008),रहमानिया ग्लूटिनोसा(ली एट अल।, 2006)। अधिनियम को C57BL / 6 चूहों के मॉडल (ओहनो एट अल।, 2002) में B16 मेलेनोमा कोशिकाओं पर एंटीमैस्टेटिक गतिविधि प्रदर्शित करने के लिए सूचित किया गया था। अधिनियम, इसोएक्ट, और 6-O-एसिटाइलैक्ट को हाल ही में मानव गर्भनाल एंडोथेलियल कोशिकाओं (चेन एट अल।, 2009) में आईएल -1 - इंटरसेलुलर सीएएम की सक्रिय अभिव्यक्ति -1 और संवहनी सीएएम -1 को बाधित करने के लिए दिखाया गया था। अधिनियम गोजातीय फुफ्फुसीय एंडोथेलियल कोशिकाओं को हाइड्रॉक्सिल रेडिकल-प्रेरित ऑक्सीडेटिव तनाव (चियो एट अल।, 2004) से भी बचाता है और लिपोपॉलेसेकेराइड-उत्तेजित मैक्रोफेज (राव एट अल) में एपी -1 सक्रियण को अवरुद्ध करके नाइट्रिक ऑक्साइड और टीएनएफ-उत्पादन को रोकता है। , 2009)। एक्ट और आइसोएक्ट न्यूरोप्रोटेक्टिव गतिविधियों को प्रदर्शित करता हैमें इन विट्रो(कू एट अल।, 2005)। कू एट अल। (2006) ने बताया कि अधिनियम और इसके एग्लिकोन्स 1,1-डिपेनिल-2-पिक्रील-हाइड्राज़िल (DPPH) और नाइट्रिक ऑक्साइड को प्रभावी ढंग से परिमार्जन करते हैं।में इन विट्रो. हालांकि, कुछ अध्ययनों ने साथ-साथ तुलना की हैमें इन विट्रो एंटीऑक्सिडेंटअधिनियम की गतिविधियों और इसके संरचनात्मक रूप से संबंधित यौगिकों जैसे कि इसोएक्ट और 6-O- एसिटाइलैक्ट।

उच्च रक्तचाप के उपचार में औषधीय एजेंटों के कई वर्गों का उपयोग किया गया है (मार्क और डेविस, 2000)। एंटीहाइपरटेन्सिव ड्रग्स के एक वर्ग, जिसे एंजियोटेंसिन I कन्वर्टिंग एंजाइम (एसीई) इनहिबिटर (यानी पेप्टिडेज़ इनहिबिटर) के रूप में जाना जाता है, में प्रतिकूल साइड-इफेक्ट्स की कम घटना होती है और एंटी-हाइपरटेन्सिव का पसंदीदा वर्ग होता है।

एजेंट जब समवर्ती माध्यमिक रोगों के रोगियों का इलाज करते हैं (Fotherby और Panayiotou, 1999)। ACE (पेप्टिडाइल-डाइपेप्टाइड हाइड्रॉलेज़ EC 3.4.15.1) एक डाइपेप्टाइड-मुक्त करने वाला Zn-युक्त एक्सोपेप्टिडेज़ है, जो एंजियोटेंसिन I के सी-टर्मिनस से एक डाइपेप्टाइड को हटाकर एंजियोटेंसिन II बनाता है, जो एक बहुत ही उच्च रक्तचाप वाला यौगिक है। कईएंटीऑक्सिडेंटपेप्टाइड्स (कम ग्लूटाथियोन और कार्नोसिन से संबंधित पेप्टाइड्स) एसीई निरोधात्मक गतिविधियों (हो एट अल।, 2003) को प्रदर्शित करते हैं। पहले चिकित्सकीय रूप से उपलब्ध, मौखिक रूप से सक्रिय एसीई अवरोधक, कैप्टोप्रिल, उच्च रक्तचाप से ग्रस्त उपचारों के लिए विकसित किया गया था (ओंडेटी एट अल।, 1977; बोरर, 2007)। इस अधिनियम को एसडी चूहों के एंडोथेलियम- अक्षुण्ण महाधमनी के छल्ले (वोंग एट अल।, 2001) पर नाइट्रिक ऑक्साइड-मध्यस्थता आराम प्रभाव डालने की सूचना मिली है। अहमद एट अल। (1995) ने बताया है कि अधिनियम सिस्टोलिक ब्लड प्रेशर (एसबीपी) और डायस्टोलिक ब्लड प्रेशर (डीबीपी) में एक खुराक पर निर्भर कमी को प्रेरित करता है, जो कि नॉर्मोटेन्सिव एनेस्थेटाइज़्ड विस्टार चूहों में अंतःशिरा इंजेक्शन के बाद होता है। हालांकि, यह स्पष्ट नहीं है कि मौखिक रूप से प्रशासित अधिनियम और/या इससे संबंधित आइसोमर्स उच्चरक्तचापरोधी हैंमें विवो. वर्तमान अध्ययन में, हमने जांच कीमें इन विट्रो एंटीऑक्सिडेंटक्षमता और एसीई निरोधात्मक गतिविधियों के साथ-साथमें विवोअधिनियम, इसोएक्ट, और/या 6- की उच्चरक्तचापरोधी गतिविधिOसहज उच्च रक्तचाप से ग्रस्त चूहों (SHRs) का उपयोग करके -एसिटाइलैक्ट। इन अध्ययनों से एक स्वास्थ्य खाद्य उत्पाद के रूप में अधिनियम के विकास के लिए उपयोगी डेटा उपलब्ध कराने की उम्मीद है।

सामग्री और तरीके

सामग्री

2,2'-एज़ो-बीआईएस (2-एमिडिनोप्रोपेन) डाइहाइड्रोक्लोराइड (एएपीएच), एसीई (आई यूनिट, खरगोश फेफड़े), ब्यूटाइलेटेड हाइड्रोक्सीटोल्यूइन (बीएचटी), डीपीपीएच, एन-(3-[{{7 }}furyl]acryloyl)-Phe-Gly- Gly (FAPGG), NADH, फेनज़ीन मेथोसल्फेट (PMS), ज़ैंथिन, और ज़ैंथिन ऑक्सीडेज़ को सिग्मा केमिकल कंपनी (सेंट लुइस, MO, USA) से खरीदा गया था। Captopril को Calbiochem Co. (CA, USA) से खरीदा गया था। अधिनियम, इसोएक्ट, और 6-O-एसिटाइलैक्ट (चित्र 1) समान कॉर्प (शुद्धता> 98 प्रतिशत, शंघाई, चीन) से खरीदे गए थे। अन्य रसायन और अभिकर्मक सिग्मा केमिकल कंपनी (सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) के थे।

सफाई गतिविधि का कार्यवाही करना, आइसोएक्ट, तथा 6-O- एसिटाइलैक्ट के खिलाफ डीपीपीएच कण द्वारा स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री

Act, Isoact, और 6- का आयतन (0.3 mL)O-एसिटाइलैक्ट (अंतिम सांद्रता 1.56 से 5 0 माइक्रोन), बीएचटी और एस्कॉर्बिक एसिड (अंतिम सांद्रता 2.4 से 6 0 माइक्रोन) को 1 एम ट्रिस-एचसीएल बफर (पीएच 7.9) के 0.1 एमएल में जोड़ा गया था। ) और फिर मेथनॉल में 100 µM DPPH के 0.6 मिलीलीटर के साथ मिलाया जाता है और कमरे के तापमान पर प्रकाश संरक्षण के तहत 20 मिनट के लिए 60 µM की अंतिम सांद्रता में मिलाया जाता है (लियू एट अल।, 2004; लिन एट अल।, 2008)। 517 एनएम पर अवशोषण की कमी को मापा गया और 517 एनएम के रूप में व्यक्त किया गया। विआयनीकृत पानी को एक खाली प्रयोग के रूप में इस्तेमाल किया गया था। DPPH रेडिकल (प्रतिशत) की मैला ढोने की गतिविधि की गणना समीकरण के साथ की गई थी: (ΔA517blank - ΔA517 नमूना) ÷ A517blank × 100। IC50 अर्ध-अवरोध की एकाग्रता के लिए है।

निरोधात्मक गतिविधि का कार्यवाही करना तथा आइसोएक्ट के खिलाफ ज़ैंथिन ऑक्सीकारक

xanthine ऑक्सीडेज गतिविधि को सब्सट्रेट के रूप में xanthine का उपयोग करके 295 एनएम पर यूरिक एसिड के गठन का निर्धारण करके मापा गया था (कलकार, 1947)। Act और Isoact की अलग-अलग मात्रा (अंतिम सांद्रता 25, 50, और 75 µM थी) को 1 घंटे के लिए 4 डिग्री पर 1 mU/mL xanthine ऑक्सीडेज के 50 μL के साथ पूर्व-मिश्रित किया गया था, और फिर 1 mM xanthine के 300 μL के साथ पूर्व-मिश्रित किया गया था। जोड़ा गया था। 295 एनएम पर अवशोषण के परिवर्तन 2 मिनट से अधिक दर्ज किए गए और A295 एनएम/मिनट के रूप में व्यक्त किए गए। xanthine ऑक्सीडेज निरोधात्मक गतिविधि (प्रतिशत) की गणना निम्नानुसार की गई थी: (ΔA295 एनएम / मिनट काला - ΔA295 एनएम / मिनट नमूना) ÷ A295 एनएम / मिनट काला × 100। एक खाली प्रयोग के रूप में नमूना समाधान के बजाय विआयनीकृत पानी का उपयोग किया गया था। IC50,अर्ध-निषेध की एकाग्रता के लिए खड़ा है।

सफाई गतिविधि का कार्यवाही करना, आइसोएक्ट, तथा 6-O- एसिटाइलैक्ट के खिलाफ सुपरऑक्साइड कण द्वारा स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री

सुपरऑक्साइड रेडिकल पीएमएस-एनए-डीएच सिस्टम (लियू एट अल।, 2 0 04; लिन एट अल।, 2008) द्वारा उत्पन्न किया गया था। सभी 0.2 एमएल के नमूने, जिनमें एक्ट, आइसोएक्ट, और 6- की विभिन्न मात्राएँ हैंO-एसिटाइलेट (अंतिम सांद्रण 15.6, 31.3, 62.5, 125, और 25 0 µM) को क्रम में जोड़ा गया 0 .2 एमएल of 63 0 µM नाइट्रोब्लू टेट्राजोलियम, 0.2 100 एमएम फॉस्फेट बफर (पीएच 7.4) में 33 माइक्रोन पीएमएस के एमएल, और 156 माइक्रोन एनएडीएच के 0.2 मिली। एक खाली प्रयोग के रूप में नमूना समाधान के बजाय विआयनीकृत पानी का उपयोग किया गया था। एस्कॉर्बिक एसिड (अंतिम सांद्रता 6, 9, 12, और 24 µ एम) का उपयोग सकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया गया था। 560 एनएम पर अवशोषण के परिवर्तन 2 मिनट के दौरान दर्ज किए गए और 560 एनएम/मिनट के रूप में व्यक्त किए गए। सुपरऑक्साइड रेडिकल्स (प्रतिशत) की मैला ढोने की गतिविधि की गणना इस प्रकार की गई: (ΔA560 एनएम / मिनट काला - ΔA560 एनएम / मिनट नमूना) A560 एनएम / मिनट काला × 100। IC50 अर्ध-निषेध की एकाग्रता के लिए है।

दृढ़ निश्चय का ऐस निरोधात्मक गतिविधि का कार्यवाही करना तथा आइसोएक्ट द्वारा एचपीएलसी

अधिनियम के प्रत्येक 50 μL (0.2, 0.4, 0.5, और 2.0 µmole) और Isoact ({{ 11}}.1, 0.2, 0.5, 1.0, और 2.0 µmole) को 1U/mL ACE के 15 µL के साथ प्रीमिक्स किया गया था। 5 मिनट के लिए, और फिर 2 0 0.5 एमएम एफएपीजीजी के 0 µ एल को जोड़ा गया और 10 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर प्रतिक्रिया की गई (एंजेनबाचेरोवा एट अल।, 2001)। प्रतिक्रिया को रोकने के लिए 800 µ एल मेथनॉल जोड़ा गया था। खाली प्रयोग केवल FAPGG था। नियंत्रण प्रयोग में, ACE ने समान परिस्थितियों में FAPGG के साथ प्रतिक्रिया की। FAPGG और FAP का क्रोमैटोग्राफिक पृथक्करण हिताची (जापान) क्रोमैटोग्राफिक सिस्टम पर 10 µL-लूप के साथ किया गया था। एचपीएलसी विश्लेषण एक बायोसिल एक्वा-ओडीएस-डब्ल्यू 5 µ कॉलम (जैविक रासायनिक कं, लिमिटेड, ताइवान, 250 × 4.6 मिमी आईडी), कण आकार 5 माइक्रोन पर किया गया था। प्रतिक्रियात्मक मिश्रण को 67.5: 32.5 (वी/वी) (एंजेनबाचेरोवा एट अल।, 2001) के अनुपात में 0.02 एम नोनीलामाइन (फॉस्फोरिक एसिड के साथ पीएच 2.4 में समायोजित) और एसिटोनिट्राइल से युक्त मोबाइल चरण के साथ आइसोक्रेटिक रूप से अलग किया गया था। प्रवाह दर 1 एमएल/मिनट थी; इंजेक्शन की मात्रा 10 µ l थी; डिटेक्टर 345 एनएम पर सेट किया गया था। अधिनियम और Isoact के ACE निषेध (प्रतिशत) की गणना इस प्रकार की गई: [(FAPGGblank का क्षेत्र - FAPGG नियंत्रण का क्षेत्र) - (FAPGGblank का क्षेत्र - FAPGG नमूना का क्षेत्र) ÷ (FAPGGblank का क्षेत्र - FAPGG नियंत्रण का क्षेत्र) × 100।

निरोधात्मक गतिविधि का कार्यवाही करना तथा आइसोएक्ट के खिलाफ AAPH की मध्यस्थता hemolysis

AAPH की मध्यस्थता वाले हेमोलिसिस (Miki et al।, 1987) के माध्यम से चूहे की लाल रक्त कोशिकाओं (RBC) का मुक्त-कट्टरपंथी श्रृंखला ऑक्सीकरण। चूहे के खून को हेपरिनिज्ड ट्यूबों में रखा गया और 1000 × पर सेंट्रीफ्यूज किया गयाg10 मिनट के लिए 0.15 M NaCl से तीन बार धोने के बाद, पैक्ड RBC को सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा 1000 × पर प्राप्त किया गया थाg10 मिनट के लिए। Act और Isoact की अलग-अलग मात्रा (अंतिम सांद्रता 2, 5, और 10 µM थे) को 20 प्रतिशत RBC सस्पेंशन (V/V, 10 mM पीबीएस में) के 25 μL और 500 mM AAPH समाधान के 25 μL को 37 डिग्री पर 0 के लिए मिश्रित किया गया था। , 1, 1.5, 2, 2.5, 3, और 3.5 एच हल्के झटकों के साथ। प्रत्येक मिश्रण को 1000 × पर सेंट्रीफ्यूज किया गया थाg10 मिनट के लिए, और सतह पर तैरनेवाला 536 एनएम पर मापा गया था। खाली समूह के रूप में या नियंत्रण समूह के रूप में क्रमशः AAPH समाधान या नमूना समाधान के बजाय विआयनीकृत पानी का उपयोग किया गया था। 3 घंटे या 3.5 घंटे पर एक्ट और आइसोएक्ट के हेमोलिसिस निषेध (प्रतिशत) की गणना निम्नानुसार की गई: (ΔA536 एनएम नियंत्रण - ΔA536 एनएम नमूना) ΔA536 एनएम नियंत्रण × 100।

उच्चरक्तचापरोधी प्रभाव का कार्यवाही करना तथा आइसोएक्ट पर श्री

कम एसबीपी और कम डीबीपी पर फीडिंग ट्यूब (2.0 × 80 मिमी) द्वारा मौखिक रूप से प्रशासित एक्ट, आइसोएक्ट और कैप्टोप्रिल के प्रभाव को पिछली रिपोर्ट (लिन) की विधि के अनुसार निर्धारित किया गया था। एट अल।, 2006; लिन एट अल।, 2008; हान एट अल।, 2011)। सभी पशु प्रायोगिक प्रक्रियाओं ने प्रकाशित दिशानिर्देशों (राष्ट्रीय विज्ञान परिषद, 1994) का पालन किया। पुरुष SHRs (8 सप्ताह की आयु, राष्ट्रीय प्रयोगशाला पशु केंद्र, ताइपे) को व्यक्तिगत रूप से 24 डिग्री पर 12- h प्रकाश-अंधेरे चक्र के साथ स्टील के पिंजरों में रखा गया था और एक मानक माउस / चूहे की चाउ तक मुफ्त पहुंच थी। प्रोलैब RMH2500, 5P14 डाइट, PMI न्यूट्रिशन इंटरनेशनल, ब्रेंटवुड, MO) और पानी। SHR को बेतरतीब ढंग से SBP और DBP निर्धारण (प्रति समूह छह चूहों) के लिए नियंत्रण और नमूना उपचार में विभाजित किया गया था। एक अल्पकालिक एंटीहाइपरटेन्सिव प्रयोग के लिए, 10 मिलीग्राम अधिनियम के 0.5 एमएल या एसएचआर के आइसो-एक्ट / किग्रा या एसएचआर के 5 मिलीग्राम कैप्टोप्रिल / किग्रा को मौखिक रूप से प्रशासित किया गया था, और पूंछ रक्तचाप को 2, 4, 6 और 24 पर मापा गया था। एच एकल मौखिक प्रशासन के बाद। एक खाली प्रयोग के लिए 0.5 एमएल आसुत जल का उपयोग किया गया था। एक अप्रत्यक्ष रक्तचाप मीटर (BP-98A, Softron Co. Ltd. Tokyo, Japan) का उपयोग प्रत्येक उपचार के लिए प्रत्येक निर्धारण में SBP और DBP को चार बार मापने के लिए किया गया था।

जानकारी विश्लेषण

मानों को ± एसडी के रूप में प्रस्तुत किया जाता है और एक-तरफ़ा एनोवा का उपयोग करके विश्लेषण किया जाता है, इसके बाद कई माध्य तुलनाओं के लिए पोस्ट हॉक टुके का परीक्षण किया जाता है। विद्यार्थियोंt-टेस्ट किया गया था, जब डेटा के केवल दो समूहों की तुलना की गई थी (जैसे कि एक ही एकाग्रता में अधिनियम और इसोएक्ट के बीच)। एक p-मान <0.05 को="" सांख्यिकीय="" रूप="" से="" महत्वपूर्ण="" माना="" जाता="" है।="" विंडोज,="" संस्करण="" 10="" (एसपीएसएस,="" इंक।,="" शिकागो,="" आईएल,="" यूएसए)="" के="" लिए="" एसपीएसएस="" का="" उपयोग="" करके="" सांख्यिकीय="" विश्लेषण="" किया="" गया="">

एक्टोसाइडयाददाश्त बढ़ाने के लिए सिस्टैंच में

परिणाम

सफाई गतिविधि का पीपीएच तथा सुपरऑक्साइड कण

अधिनियम, इसोएक्ट, और 6-O-एसिटाइलैक्ट ने पीएच 7.9 (चित्रा 2) पर खुराक पर निर्भर डीपीपीएच मैला ढोने की गतिविधियों का प्रदर्शन किया। एक्ट, आइसोएक्ट, और 6- के लिए IC50 मान क्रमशः 11.4, 9.48, और 9.55 µM थे।O-एसिटाइलैक्ट। एस्कॉर्बिक एसिड और बीएचटी के सकारात्मक नियंत्रण के IC50 मान क्रमशः 13.1 और 18.5 माइक्रोन थे।

निषेध का ज़ैंथिन ऑक्सीकारक गतिविधि

एक्ट और आइसोएक्ट को ज़ैंथिन ऑक्सीडेज (चित्र 3) के खुराक पर निर्भर निषेध को प्रदर्शित करने के लिए दिखाया गया था। अधिनियम और इसोएक्ट के लिए IC50 की गणना क्रमशः 53.3 और 62.2 µM की गई थी।

निषेध का सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेस गतिविधि

क्योंकि एक्ट और आइसोएक्ट दोनों ने ज़ैंथिन ऑक्सीडेज गतिविधि को बाधित किया, हमने सुपरऑक्साइड रेडिकल्स (लियू एट अल।, 2004; लिन एट अल।, 2008) उत्पन्न करने के लिए पीएमएस-एनएडीएच प्रणाली का उपयोग किया। कार्यवाही करना,

आइसोएक्ट, और 6-O-एसिटाइलैक्ट ने खुराक पर निर्भर सुपरऑक्साइड रेडिकल मैला ढोने की गतिविधियों (चित्र 4) का प्रदर्शन किया। एक्ट, आइसोएक्ट और 6- के लिए IC50 मान क्रमशः 66.0, 38.5, और 39.1 µM थे।O-एसिटाइलैक्ट। एस्कॉर्बिक एसिड के सकारात्मक नियंत्रण के IC5 0 मान 9.0 माइक्रोन थे। चित्र 2 और 4 के परिणामों से यह स्पष्ट था कि Isoact और 6-O-एसिटाइलेट में डीपीपीएच और सुपरऑक्साइड रेडिकल्स के खिलाफ समान कट्टरपंथी-स्कैवेंजिंग गतिविधियां थीं, और इस प्रकार आगे की जैविक गतिविधि स्क्रीनिंग के लिए केवल एक्ट और इसोएक्ट का चयन किया गया था।

ऐस निरोधात्मक गतिविधियां का कार्यवाही करना तथा आइसोएक्ट

प्रारंभिक परीक्षण में, हमने पाया कि एक्ट और आइसोएक्ट ने एसीई सब्सट्रेट एफएपीजीजी और इसके हाइड्रोलाइज्ड उत्पाद एफएपी के अवशोषण में 345 एनएम पर हस्तक्षेप किया, जैसा कि निरंतर स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक परख (होल्मक्विस्ट एट अल।, 1979) के लिए उपयोग किया जाता है। इसलिए, एचपीएलसी द्वारा एक्ट या आइसोएक्ट और एफएपीजीजी का पता लगाने के साथ युग्मित पृथक्करण का उपयोग एसीई निरोधात्मक गतिविधियों की निगरानी के लिए किया गया था। चित्रा 5ए से चित्रा 5डी एक रिक्त परीक्षण के 1 0 μl प्रतिक्रिया मिश्रण से विशिष्ट एचपीएलसी क्रोमैटोग्राम हैं (केवल एफएपीजीजी, चित्रा 5ए); नियंत्रण परीक्षण (एसीई ने एफएपीजीजी के साथ एफएपी, चित्रा 5बी का उत्पादन करने के लिए फिर से काम किया); 0.5 µmol of Act (312.5 µ g), ACE और FAPGG (चित्र 5ग); और आइसोएक्ट (312.5 माइक्रोग्राम), ऐस और एफएपीजीजी (चित्रा 5डी) के 0.5 माइक्रोन। चित्रा 5बी में एफएपीजीजी का क्षेत्र सबसे कम था और चित्रा 5ए में चार विशिष्ट एचपीएलसी क्रोमैटोग्राम का उच्चतम था। आंकड़े 5सी और 5डी में एफएपीजीजी के क्षेत्र अधिनियम और आइसोएक्ट की विभिन्न सांद्रता की एसीई निरोधात्मक गतिविधियों पर निर्भर हैं। अधिनियम और Isoact के परिकलित ACE अवरोध चित्र 5E में दिखाए गए हैं। इस अधिनियम ने Isoact की तुलना में उच्च ACE निरोधात्मक गतिविधियों को दिखाया, और पूर्व के IC50 की गणना HPLC क्रोमैटोग्राम में क्षेत्र द्वारा 472 µM की गई।

निरोधात्मक गतिविधि का कार्यवाही करना तथा आइसोएक्ट के खिलाफ AAPH की मध्यस्थता hemolysis

2, 5, और 10 माइक्रोन की सांद्रता में AAPH की मध्यस्थता वाले हेमोलिसिस के खिलाफ अधिनियम और आइसोएक्ट की निरोधात्मक गतिविधियों का मूल्यांकन 3.5 घंटे (मिकी एट अल।, 1987) से अधिक किया गया था। चित्रा 6ए के परिणाम प्रदर्शित करते हैं कि चूहे आरबीसी में हेमोलिसिस नाटकीय रूप से बढ़ गया (ΔA536 एनएम के रूप में व्यक्त) 3- घंटे या 3.5-एच प्रतिक्रियाओं के बाद एएपीएच रेडिकल्स (नियंत्रण समूहों, सफेद चक्र प्रतीक के रूप में) की उपस्थिति में प्रतिक्रियाएं ) 3.5-h प्रतिक्रिया (रिक्त समूहों, काला चक्र प्रतीक के रूप में) के दौरान AAPH रेडिकल्स की अनुपस्थिति में बहुत कम या कोई हेमोलिसिस नहीं देखा गया था। इसलिए, 3 घंटे या 3.5 घंटे पर एक्ट और आइसोएक्ट के हेमोलिसिस निषेध की गणना इस प्रकार की गई: (ΔA536 एनएमकंट्रोल - ΔA536 एनएम नमूना) ÷ ΔA536 एनएमकंट्रोल × 100। चित्र 6B

से पता चलता है कि 2, 5 और 10 माइक्रोन पर एक्ट और आइसोएक्ट दोनों ने एएपीएएच-प्रेरित हेमोलिसिस पर एकाग्रता-निर्भर निषेध का प्रदर्शन किया, जिसमें एक्ट के निरोधात्मक प्रभाव इस्तेमाल किए गए प्रत्येक एकाग्रता पर आइसोएक्ट की तुलना में काफी मजबूत थे।

उच्चरक्तचापरोधी प्रभाव का कार्यवाही करना तथा आइसोएक्ट पर श्री

SHRs को Act और Isoact (10 mg/Kg SHR) का एकल मौखिक प्रशासन प्राप्त हुआ, और SBP और DBP में परिवर्तन 24 घंटे में दर्ज किए गए। हमने पहले बताया था कि SHR का रक्तचाप (SBP और DBP) 24- h (लिन एट अल।, 2006; हान एट अल।, 2011) के दौरान परिवर्तनशील था। इसलिए, मौखिक प्रशासन से पहले और बाद के बजाय रिक्त और नमूने के बीच एक निश्चित समय (जैसे 2, 4, 6, 8, और 24 घंटे) पर तुलना का उपयोग किया गया था। यह पाया गया कि अधिनियम, लेकिन आइसोएक्ट नहीं, ने एसएचआर के एसबीपी और डीबीपी को रिक्त (आसुत जल) समूह की तुलना में प्रभावी रूप से कम कर दिया। अधिनियम समूह में एसबीपी को क्रमशः 18.8, 16.5, और 14.9 एमएमएचजी द्वारा अधिनियम समूह में काफी कम कर दिया गया था, लेकिन अधिनियम उपचार के बाद 24 घंटे में एसबीपी (3.3 एमएमएचजी) की कमी स्थिर नहीं थी-

कलात्मक रूप से महत्वपूर्ण (चित्र 7क)। जैसा कि चित्र 7बी में दिखाया गया है, अधिनियम समूह में डीबीपी को 2, 4 और 6 घंटे (क्रमशः 8.5, 7.6, और 12.0 मिमीएचजी) पर घटाया गया था, हालांकि केवल 6 घंटे पर प्राप्त परिणाम सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण था। (P< 0.05).="" यह="" नोट="" किया="" गया="" था="" कि="" मौखिक="" प्रशासन="" के="" बाद="" प्रारंभिक="" चरणों="" (2,="" 4,="" और="" 6="" घंटे)="" में="" अधिनियम="" और="" कैप्टोप्रिल="" (सकारात्मक="" नियंत्रण="" के="" रूप="" में)="" का="" एसबीपी="" पर="" समान="" प्रभाव="">

एक्टोसाइडcistanche में एंटीऑक्सीडेंट पर अच्छा प्रभाव पड़ता है

बहस

सक्रिय ऑक्सीजन प्रजातियां और मुक्त कट्टरपंथी-मध्यस्थता प्रतिक्रियाएं उम्र बढ़ने, कैंसर, कोरोनरी हृदय रोग और अल्जाइमर रोग (एम्स, 1983; गे, 1990; स्मिथ एट अल।, 1996) जैसी अपक्षयी या रोग प्रक्रियाओं में शामिल हैं। कई रिपोर्टों ने स्क्रीनिंग पर ध्यान केंद्रित किया हैएंटीऑक्सिडेंटप्राकृतिक संसाधनों से गतिविधियाँ। वर्तमान अध्ययन में, हमने सबसे पहले की तुलना की हैएंटीऑक्सिडेंटअधिनियम, इसोएक्ट, और 6- की गतिविधियाँO-एसिटाइलेट। एक्ट और आइसोएक्ट संरचनात्मक समावयवी हैं जिसमें कैफिक एसिड की मात्रा का घटक पूर्व में ग्लूकोज के C-4 हाइड्रॉक्सिल समूह और बाद में ग्लूकोज के C-6 हाइड्रॉक्सिल समूह से जुड़ा होता है। जबकि रमनोज और 3', 4'- डाइहाइड्रॉक्सी फिनाइल इथेनॉल के घटक, क्रमशः एक ही अधिनियम और आइसोएक्ट अणु में ग्लूकोज की मात्रा के C-3 और C-1 हाइड्रॉक्सिल समूहों से बंधे होते हैं, { {8}}O-एसिटाइलैक्ट एक अधिनियम व्युत्पन्न है जिसमें एसिटिक एसिड ग्लूकोज की मात्रा में C-6 हाइड्रॉक्सिल समूह से जुड़ा होता है (चित्र 1)। कू एट अल। (2006) ने बताया कि अधिनियम और उसके एग्लीकोन्स ने डीपीपीएच-स्कैवेंजिंग गतिविधियों को प्रदर्शित किया, और इन गतिविधियों का क्रम (आईसी50 के रूप में व्यक्त) अधिनियम (1.28 माइक्रोन)> कैफिक एसिड (2.22 माइक्रोन)> 3',4'-डायहाइड्रॉक्सी फिनाइल इथेनॉल ( 7.72 µm) >-टोकोफेरोल (15.1 µm). वर्तमान रिपोर्ट (चित्र 2) में, DPPH मैला ढोने की गतिविधियों (IC50 के रूप में व्यक्त) का क्रम 6- हैO-एसिटाइलेट (9.55 µm) ≈ इसोएक्ट (9.48 µm) > एक्ट (11.4 µm). ये मान डीपीपीएच रेडिकल्स को मैला करने के लिए एस्कॉर्बिक एसिड (13.1 माइक्रोन का IC50) और बीएचटी (18.5 माइक्रोन का IC50) की तुलना में या उससे बेहतर थे। वर्तमान रिपोर्ट में अधिनियम का उच्च IC50 कू एट अल के उपयोग किए गए 30 माइक्रोन के बजाय 60 माइक्रोन डीपीपीएच की अंतिम एकाग्रता से हो सकता है। रिपोर्ट किया गया (2006)। जैसा कि डीपीपीएच कट्टरपंथी परख इलेक्ट्रॉन-स्थानांतरण प्रतिक्रिया (हुआंग एट अल।, 2005) से संबंधित है, यह अनुमान लगाया गया है कि ग्लूकोज की मात्रा के सी -6 हाइड्रॉक्सिल समूह में व्युत्पन्न, जैसे एसिटाइल समूह {{21 में }}O- आइसोएक्ट में एसिटिलेट और कैफिक एसिड की मात्रा, डीपीपीएच मैला ढोने की परख के लिए ग्लूकोज की मात्रा में सी -6 मुक्त हाइड्रॉक्सिल समूह की तुलना में अधिक आसानी से एक इलेक्ट्रॉन-स्थानांतरण प्रतिक्रिया प्रदान कर सकती है।

अधिनियम, 6-O-एसिटाइलेट और आइसोएक्ट में सुपरऑक्साइड रेडिकल्स (वांग एट अल।, 1996; गाओ एट अल।, 1999) उत्पन्न करने के लिए ज़ैंथिन / ज़ैंथिन ऑक्सीडेज सिस्टम का उपयोग करके इन विट्रो में सुपरऑक्साइड-स्कैवेंजिंग गतिविधि रखने की सूचना मिली है। हालांकि, हमारे वर्तमान अध्ययन ने संकेत दिया कि अधिनियम ने ज़ैंथिन ऑक्सीडेज निरोधात्मक गतिविधियों (चित्र 3) का प्रदर्शन किया। इसलिए, सुपरऑक्साइड रेडिकल वर्तमान रिपोर्ट (लियू एट अल।, 2 0 04; लिन एट अल।, 2008) में xanthine/xanthine ऑक्सीडेज सिस्टम के बजाय PMS-NADH प्रणाली का उपयोग करके उत्पन्न किया गया था। दरअसल, सुपरऑक्साइड रेडिकल्स, वांग एट अल उत्पन्न करने के लिए xanthine/xanthine ऑक्सीडेज सिस्टम का उपयोग करना। (1996) ने सुपरऑक्साइड रेडिकल्स के खिलाफ 63 μM अधिनियम का IC50 प्राप्त किया, और यह मान अधिनियम द्वारा xanthine ऑक्सीडेज गतिविधि के निषेध के करीब है, जैसा कि वर्तमान अध्ययन (53.3 µM) में बताया गया है। यह बताया गया कि कैफिक एसिड ने ज़ैंथिन ऑक्सीडेज निरोधात्मक गतिविधियों (चियांग एट अल।, 1994) का प्रदर्शन किया। यह अनुमान लगाया जा सकता है कि कैफिक एसिड से जुड़ी संरचनाओं के साथ कुछ फाइटोकेमिकल्स के ज़ैंथिन / ज़ैंथिन ऑक्सीडेज जनरेटिंग सिस्टम का उपयोग करने वाली सुपरऑक्साइड-स्कैवेंजिंग गतिविधियाँ, जैसे कि एक्ट या आइसोएक्ट (वांग एट अल।, 1996; गाओ एट अल।, 1999), हो सकता है। कम से कम आंशिक रूप से, ज़ैंथिन ऑक्सीडेज अवरोधों पर योगदान दिया गया है। दिलचस्प है, वांग एट अल। (1996) ने पाया कि अधिनियम (0.5 और 2.5 एमएम) ने ज़ैंथिन ऑक्सीडेज गतिविधि को बाधित नहीं किया जो कि एक्सथाइन ऑक्सीकरण के दौरान ऑक्सीजन की खपत के लिए ऑक्सीजन इलेक्ट्रोड द्वारा निर्धारित किया गया था। इस प्रकार, यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि सुपरऑक्साइड-मैला ढोने की गतिविधि को परखने के लिए विभिन्न तरीके विरोधाभासी डेटा उत्पन्न कर सकते हैं।

ली एट अल। (1993) ने चूहों के आरबीसी में AAPH की मध्यस्थता वाले हेमोलिसिस के खिलाफ अधिनियम और इसोएक्ट के निषेध की एक समान सीमा की सूचना दी है। हालांकि, हमने यहां दिखाया कि एक्ट ने चूहों के आरबीसी में एएपीएच-प्रेरित हेमोलिसिस के खिलाफ इसोएक्ट (चित्रा 6) की तुलना में बहुत अधिक निरोधात्मक गतिविधि प्रदर्शित की। यह स्पष्ट नहीं है कि क्या ऐसी असंगति कृंतक प्रजातियों में अंतर के कारण हो सकती है।

कांग एट अल। (2003) ने बताया कि अधिनियम ने ACE निरोधात्मक गतिविधियों को प्रदर्शित किया, और IC50 373.3 µg/mL था, जिसकी गणना सब्सट्रेट के रूप में हिप-हिज-ल्यू का उपयोग करते हुए 598 µM की गई थी। वर्तमान रिपोर्ट में, अधिनियम ने Isoact की तुलना में उच्च ACE निरोधात्मक गतिविधियों को दिखाया, और पूर्व के IC50 की गणना HPLC क्रोमैटोग्राम (चित्र 5) में क्षेत्र द्वारा 472 µM की गई थी। इस अधिनियम में एसडी चूहों के एंडोथेलियम- अक्षुण्ण महाधमनी के छल्ले (वोंग एट अल।, 2001) पर नाइट्रिक ऑक्साइड-मध्यस्थता आराम प्रभाव डालने की सूचना मिली है। हालांकि अधिनियम को विस्टार चूहों में उच्चरक्तचापरोधी दिखाया गया है,

अध्ययन ने सोखना कारक (अहमद एट अल।, 1995) को रद्द करने के लिए एक संवेदनाहारी चूहे में अधिनियम के अंतःशिरा इंजेक्शन को नियोजित किया। यहां, हमने एसएचआर को मौखिक रूप से अधिनियम प्रशासित किया और रक्तचाप में परिवर्तन निर्धारित किया। हमने पाया कि मौखिक प्रशासन तथ्य, लेकिन इसोएक्ट का नहीं, एकल प्रशासन (चित्र 7) के बाद 24 घंटे से अधिक एसबीपी और डीबीपी को कम करके एंटीहाइपरटेंसिव प्रभाव प्रदर्शित करता है। 10 मिलीग्राम / किग्रा शरीर के वजन की खुराक पर एसबीपी को कम करने में 5 मिलीग्राम / किग्रा एसएचआर की खुराक में कैप्टोप्रिल के करीब प्रभाव पड़ा और डीबीपी को कम करने पर कैप्टोप्रिल से बेहतर था।

निष्कर्ष में, अधिनियम प्रदर्शितएंटीऑक्सिडेंटगतिविधियाँ, ACE निरोधात्मक गतिविधियाँ, और SHR पर उच्चरक्तचापरोधी प्रभाव। यहां प्रस्तुत परिणाम भविष्य में एंटी-ऑक्सीडेंट संरक्षण और चिकित्सीय प्रभावों के लिए अधिनियम का उपयोग करके हर्बल दवाओं या संबंधित उत्पादों को विकसित करने के प्रयास को लाभान्वित करेंगे, जो कई पौधों और हर्बल दवाओं में पाए गए हैं।

सिस्टांचेएक्टोसाइडएंटीऑक्सीडेशन और एंटी-एजिंग के लिए

1 विभाग खाद्य विज्ञान और जैव प्रौद्योगिकी, राष्ट्रीय चुंग सिंग विश्वविद्यालय, ताइचुंग, ताइवान

2को दा फार्मास्युटिकल कं, लिमिटेड, ताओ-युआन, ताइवान

3 स्कूल ऑफ फार्मेसी, ताइपे मेडिकल यूनिवर्सिटी, ताइपेई, ताइवान

4 ग्रेजुएट इंस्टीट्यूट ऑफ बायोमेडिकल मैटेरियल्स एंड इंजीनियरिंग, ताइपे मेडिकल यूनिवर्सिटी, ताइपे, ताइवान

5पारंपरिक हर्बल मेडिसिन रिसर्च सेंटर, ताइपे मेडिकल यूनिवर्सिटी अस्पताल, ताइपे, ताइवान

6 ग्रेजुएट इंस्टीट्यूट ऑफ फार्माकोग्नॉसी, ताइपे मेडिकल यूनिवर्सिटी, ताइपेई, ताइवान

(12 मार्च 2012 को प्राप्त; 20 अप्रैल 2012 को स्वीकार किया गया)

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