एनेस्ली फ्रैग्रेंस वॉल से फेनोलिक रचनाओं का गतिविधि निर्देशित अलगाव। और हेपजी2 कोशिकाओं में हाइड्रोजन पेरोक्साइड प्रेरित ऑक्सीडेटिव तनाव के खिलाफ उनका साइटोप्रोटेक्टिव प्रभाव भाग 1

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सार: Anneslea fragrans Wall., commonly known as"Pangpo Tea", is traditionally used as folk medicine and healthy tea for the treatment of liver and intestine diseases. The aim of this study was to purify the antioxidative and cytoprotective polyphenols from A.fragrans leaves. After fractionation with polar and nonpolar organic solvents, the fractions of aqueous ethanol extract were evaluated for their total phenolic (TPC) and flavonoid contents(TFC) and antioxidant activities(DPPH, ABTS, and FRAPassays). The n-butanol fraction (BF)showed the highest TPC and TFC with the strongest antioxidant activity. The bio-guided chromatography of BF led to the purification of six flavonoids (1-6) and one benzoquinone lanthanoid (7). The structures of these compounds were determined by NMR and MS techniques. Compound 6 had the strongest antioxidant capacity, which was followed by 5 and 2. The protective effect of the isolated compounds on hydrogen peroxide (H2O2)-induced oxidative stress in HepG2 cells revealed that the compounds 5 and 6exhibited better protective effects by inhibiting ROS productions, having no significant difference with vitamin C(p>0.05), जबकि 6 ने सबसे अच्छी एपोप्टोसिस-विरोधी गतिविधि दिखाई। परिणाम बताते हैं कि ए.सुगंध कार्यात्मक भोजन और स्वास्थ्य न्यूट्रास्युटिकल उत्पादों को विकसित करने के लिए एक मूल्यवान एंटीऑक्सीडेंट फाइटोकेमिकल स्रोत के रूप में काम कर सकता है।

कीवर्ड:एनेस्ली सुगंध; एंटीऑक्सीडेंट; निर्देशित अलगाव; ऑक्सीडेटिव तनाव; फ्लेवोनोइड ग्लाइकोसाइड्स

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1 परिचय

प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियां (आरओएस) सामान्य शारीरिक और जैव रासायनिक प्रक्रियाओं में ऑक्सीडेटिव श्वसन के माध्यम से उप-उत्पादों के रूप में उत्पादित होती हैं [1]। अंतर्जात मुक्त कणों के रूप में, आरओएस सेल सिग्नलिंग और सामान्य श्रेणी में शरीर की स्थिरता के रखरखाव में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है [2]। यदि आरओएस को प्रभावी ढंग से परिमार्जन नहीं किया जा सकता है, तो अत्यधिक आरओएस ऑक्सीडेटिव तनाव की घटना को जन्म दे सकता है, जो सेल प्रसार और एपोप्टोसिस [3] को प्रभावित कर सकता है। ऑक्सीडेटिव तनाव मधुमेह, हाइपरलिपीमिया, मोटापा, कैंसर और हृदय और न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों [4] सहित विभिन्न प्रकार की बीमारियों से निकटता से संबंधित है। हाल ही में, कई अध्ययनों ने यह प्रमाणित किया है कि एंटीऑक्सिडेंट से समृद्ध आहार में अत्यधिक आरओएस [5,6] पर उनकी मैला ढोने की क्षमता के कारण लाभकारी प्रभावों की एक श्रृंखला होती है।

प्राकृतिक एंटीऑक्सीडेंट में विभिन्न प्रकार के अणु होते हैं जैसे पॉलीफेनोल [], कैरोटेनॉयड्स [8], विटामिन [9], नाइट्रोजन युक्त यौगिक [10], और कौमारिन [9]। पॉलीफेनोल्स पूरे पौधे साम्राज्य में व्यापक रूप से वितरित किए जाते हैं और उनके एंटीऑक्सीडेंट गुणों के कारण स्वास्थ्य लाभ को बढ़ावा देते हैं [11]। उनमें से कई, जैसे रेस्वेराट्रोल और कुछ डेरिवेटिव [12], एंथोसायनिडिन्स [13, आइसोफ्लेवोन्स [14एल, कैटेचिन [15एल, और क्वेरसेटिन [16] आरओएस [1] को साफ करके अपने सुरक्षात्मक प्रभाव के लिए जाने जाते हैं। पिछले कुछ वर्षों से, पॉलीफेनोल्स कैंसर [17], कार्डियोवैस्कुलर डिसफंक्शन [18], न्यूरोडीजेनेरेटिव बीमारियों [19] और उम्र बढ़ने [20] की रोकथाम में ध्यान आकर्षित कर रहे हैं। इसलिए, मानव स्वास्थ्य को बढ़ावा देने के लिए प्रभावी एंटीऑक्सिडेंट की खोज एक तत्काल आवश्यकता है।

सिस्टैन्च इम्युनिटी में सुधार कर सकता है

एनेस्ली फ्रेग्रेंस वॉल। एक सदाबहार पौधा है, जो मुख्य रूप से चीन के दक्षिण में वितरित किया जाता है [21]। इसके सजावटी उद्देश्य के अलावा, A.fragrans की पत्तियों का उपयोग बुखार, जिगर की सुरक्षा, पेट और आंतों को मजबूत करने वाले चीन और कंबोडिया [22] के इलाज के लिए एक लोक औषधि के रूप में भी किया जाता है, जिसे "युन्नान सिमाओ चीनी हर्बल मेडिसिन" में दर्ज किया गया था। इसके अलावा, पत्तियों को एक चाय पेय के रूप में भी संसाधित किया गया है, जिसे "पैंगपो चाय" के रूप में जाना जाता है। पिछली रिपोर्टों [23] में, ए. सुगंधित के अर्क ने एंटीऑक्सिडेंट और मलेरिया-रोधी गतिविधियों को दिखाया है। हालांकि, आज तक, ए। सुगंध से इसके एंटीऑक्सीडेंट फेनोलिक यौगिकों की सूचना नहीं मिली है।

इस प्रकार, इस शोध का उद्देश्य ए। सुगंधित पत्तियों से एंटीऑक्सिडेंट यौगिकों को अलग करना और पहचानना था जो कि यकृत रोगों के उपचार के लिए उनके पारंपरिक उपयोग के लिए जिम्मेदार हैं। जलीय इथेनॉल निकालने के चार अंश, डाइक्लोरोमेथेन अंश (डीएफ), एथिल एसीटेट अंश (ईएएफ), एक एन-ब्यूटानॉल अंश (बीएफ), और अवशिष्ट जल अंश (आरडब्ल्यूएफ) का मूल्यांकन उनके कुल फेनोलिक (टीपीसी) और कुल फ्लेवोनोइड सामग्री के लिए किया गया था। (TFC) और उनकी एंटीऑक्सीडेंट क्षमता के लिए। n-butanol अंश (BF) में सबसे अधिक TPC और TFC सबसे मजबूत एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि के साथ था। बीएफ के जैव-निर्देशित अंश ने यौगिकों के शुद्धिकरण की अनुमति दी। इसके अलावा, पृथक यौगिकों का साइटोप्रोटेक्टिव प्रभाव हाइड्रोजन पेरोक्साइड (H, O,) पर मानव यकृत कैंसर HepG2 कोशिकाओं में ऑक्सीडेटिव तनाव पर प्रदर्शन किया गया था। इंट्रासेल्युलर आरओएस उत्पादन और सेल एपोप्टोसिस को फ्लो साइटोमेट्री का उपयोग करके निर्धारित किया गया था। इस प्रकार, इस शोध ने खाद्य और स्वास्थ्य उद्योग में एक कार्यात्मक पूरक (स्वस्थ चाय) के रूप में ए। सुगंधित पत्तियों के विकास और उपयोग के लिए एक मूल्यवान एंटीऑक्सीडेंट फाइटोकेमिकल घटक प्रदान किया।

2. परिणाम और चर्चा

2.1. भिन्नों और उप-अंशों की यील्ड दक्षता

कार्बनिक सॉल्वैंट्स और कॉलम फ्रैक्शन द्वारा तरल-तरल विभाजन कच्चे अर्क से बायोएक्टिव यौगिकों को समृद्ध करने के लिए महत्वपूर्ण तकनीकें हैं [24]। तरल-तरल विभाजन का उपयोग करते हुए, ए। सुगंधित पत्तियों से इथेनॉल निकालने (सीई) को क्रमशः चार अंश (डीएफ, ईएएफ, बीएफ, और आरडब्ल्यूएफ) देने के लिए डाइक्लोरोमेथेन, एथिल एसीटेट और एन-ब्यूटानॉल के साथ विभाजित किया गया था। भिन्नों का उपज प्रतिशत 11 से 27 प्रतिशत के बीच पाया गया। अवशिष्ट जल अंश (RWF, 27 प्रतिशत) की उपज सबसे अधिक थी, और अन्य अंशों की पैदावार इस क्रम में थी: n-butanol अंश (BF, 24 प्रतिशत), एथिल एसीटेट अंश (EAF, 21 प्रतिशत), डाइक्लोरोमेथेन अंश (डीएफ, 11 प्रतिशत)।

उप-अंशों (बीएफ-ए से ई) का उपज प्रतिशत 3.82 से 48.4 प्रतिशत के बीच पाया गया। बीएफ-ई ने 48.4 प्रतिशत की उच्चतम उपज प्रस्तुत की, इसके बाद बीएफ-डी (24.96 प्रतिशत) का स्थान आया, जिसमें अन्य अंशों की तुलना में काफी अधिक उपज है।

2.2.एचपीएलसी विश्लेषण

उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (एचपीएलसी) का पता लगाना मात्रात्मक निर्धारण के लिए एक शक्तिशाली तकनीक के रूप में प्रदर्शित किया गया है। एचपीएलसी विश्लेषण से पता चला कि बीएफ में सबसे मजबूत एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि के साथ सबसे अधिक यौगिक थे। एंटीऑक्सिडेंट एसेज़ और एचपीएलसी विश्लेषण के मार्गदर्शन में, सबफ़्रेक्शन के अलगाव के लिए एंटीऑक्सिडेंट अंश को आगे क्रोमैटोग्राफ किया गया था। पांच सबफ़्रेक्शन (बीएफ-ए से ई) प्राप्त करने के लिए बीएफ को एक हाइड्रेटेड राल डी 101 कॉलम के अधीन किया गया था। एचपीएलसी विश्लेषण से पता चला कि बीएफ-सीटीओ ई में सबसे अधिक एंटीऑक्सीडेंट यौगिक थे। इन अंशों (बीएफ-सी से ई) के जैव-निर्देशित विभाजन ने सात शुद्ध यौगिकों की शुद्धि की अनुमति दी।

जैसा कि चित्र 1 में दिखाया गया है, बीएफ और सात शुद्ध यौगिकों को एचपीएलसी विश्लेषण द्वारा प्रोफाइल किया गया था। अवधारण समय और यूवी अवशोषण घटता के साथ तुलना के आधार पर, इन सात यौगिकों की पुष्टि 7.51 मिनट (संक्षारक, 7),7.92 मिनट ((एपीआई) -कैटेचिन, 6), 9.38 मिनट (कन्फ्यूसोसाइड, 1),9.57 पर अवधारण समय के माध्यम से की गई थी। मिन ((एस) -नारिंगिनिन -7- ओ - - डी-ग्लूकोपाइरानोसाइड, 4), 10.32 मिनट (वैक्सिनी फोलिन, 2), 12.64 मिनट (2', 3,4,4'-टेट्राहाइड्रॉक्सीडी डाइहाइड्रोचलकोन, 5), और 13.95 मिनट (1-[4-(-D-glucopyranosyloxy)-2-hydroxyphenyl]-3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl) -1-प्रोपेनोन,3)(चित्र 1ए)। उनमें से, यौगिक 1-6 फ्लेवोनोइड्स से संबंधित हैं, और यौगिक 7 बेंज़ोक्विनोलेथेनॉइड है।

2.3.कुल फेनोलिक सामग्री (टीपीसी) और कुल फ्लेवोनोइड सामग्री (टीएफसी)

सुगंधित पत्तियों का पारंपरिक रूप से प्रसंस्कृत स्वास्थ्य चाय के रूप में उपयोग किया जाता है और यह फेनोलिक्स और फ्लेवोनोइड्स का एक अच्छा संसाधन साबित हुआ है [25]। स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक परख के अनुसार, टीपीसी और टीएफसी का परीक्षण ए। सुगंधित पत्तियों से अलग-अलग अंशों और उप-अंशों में किया गया था। जैसा कि तालिका 1 में दिखाया गया है, बीएफ का उच्चतम टीपीसी मूल्य 238.12 ± 12 है। 0 5 मिलीग्राम जीएई / जी निकालने के बाद ईएएफ। DF ने सबसे कम TPC मान 66.52 ± 0.57 mg GAE/g अर्क के रूप में दिखाया। इसी तरह, उच्चतम टीएफसी सांद्रता भी बीएफ में 165.19 ± 5.21 मिलीग्राम आरई / अर्क के टीएफसी मूल्य के साथ पाए गए। आरडब्ल्यूएफ और ईएएफ (क्रमशः 66.92 ± 1.38 और 116.12 ± 2.89 मिलीग्राम जीएई / अर्क) के संबंध में, उनके पास बीएफ (165.19 ± 5.21 मिलीग्राम आरई / जी निकालने) की तुलना में कम टीएफसी सांद्रता थी, जबकि डीएफ में सबसे कम टीएफसी एकाग्रता थी। 47.94 ± 2.84 मिलीग्राम आरई / जी निकालने के रूप में। TPC और TFCin BF की सामग्री DF की तुलना में लगभग चार गुना अधिक थी।

डेटा ने बीएफ-ई में उच्चतम टीपीसी और टीएफसी की उपस्थिति को 262.03 ± 1.72 मिलीग्राम जीएई / जी निकालने के मूल्यों के साथ दर्शाया; 180.52±6.30 मिलीग्राम आरई/जी अर्क, इसके बाद बीएफ-डी(219.84±4.01 और 157.01±2.50 मिलीग्राम आरई/जी अर्क, क्रमशः), बीएफ-सी (210.69±6.31 और 151.01±4.33 मिलीग्राम आरई/जी अर्क, क्रमशः), जबकि बीएफ-बी और बीएफ-ए में सबसे कम टीपीसी और टीएफसी मान थे (तालिका 1)।

2.4.एंटीऑक्सीडेंट सक्रियता

अधिकांश पॉलीफेनोल्स, विशेष रूप से फ्लेवोनोइड्स और फेनोलिक एसिड, लोकप्रिय एंटीऑक्सिडेंट खाद्य पदार्थों (न्यूट्रास्युटिकल्स) में उपयोग किए जाते हैं और मानव लाभों की एक श्रृंखला पेश करते हैं [17]। हमारे पिछले अध्ययन में, ए.सुगंधित पत्तियां पॉलीफेनोल्स [26] का एक अच्छा संसाधन साबित हुई हैं। हालांकि, ए। सुगंधित पत्तियों और इसके फाइटोकेमिकल्स के अर्क की एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि की अभी तक जांच नहीं की गई है। विभिन्न एंटीऑक्सीडेटिव प्रतिक्रिया तंत्रों के कारण, एबीटीएस, डीपीपीएच, और एफआरएपी के तीन परखों को ए। सुगंधित पत्तियों से अंशों और उप-अंशों की एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि का मूल्यांकन करने के लिए जोड़ा गया था।

Among the fractions, BF showed the most potent antioxidant activity in ABTS, DPPH, and FRAP radical-scavenging activities with 1808.46±96.52,951.42±87.75, and 1822.96± 29.24 μmol TE/g extract （Table 1）.PDF showed the lowest antioxidative activity in ABTS and FRAP assays（139.23±8.62 μmol TE/g extract and 180.05± 9.46 μmol TE/g extract, respectively)(Table 1). Whereas the radical scavenging activities of four fractions (DF, EAE, BF, and RWF) in the DPPH radical-scavenging assay were found to vary from 613.38± 45.35 to 951.42±87.75 μmol TE/g extract, respectively, having no significant difference (p>0.05). These results suggested that the phytochemicals from A. fragrans leaves might be insensitive to DPPH. To further obtain the active metabolites, BF was selected for further fractionation. The BF was subjected to D101 macroporous adsorbing resin column chromatography eluting by a gradient of the methanol-aqueous system to yield five subfractions(BF-A to E). Hence, the ABTS radical-scavenging activity of these subfractions can be ranked as BF-E> BF-C>बीएफ-डी। FRAP परख में घटती गतिविधि से पता चला कि BF-Dhad सबसे मजबूत एंटीऑक्सीडेटिव गतिविधि है, जिसके बाद BF-C और BF-E। यह उल्लेखनीय है कि तीन सबफ़्रेक्शन (BF-C से E) ने मदर फ्रैक्शन की तुलना में उच्च एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि प्रस्तुत की। (बीएफ)। एक साथ लिया गया, बीएफ-सी से ई को एंटीऑक्सीडेटिव फाइटोकेमिकल्स को अलग करने और पहचानने के लिए कॉलम क्रोमैटोग्राफी में जमा किया गया था।

2.5. पृथक यौगिकों की एंटीऑक्सीडेंट सक्रियता

सभी पृथक यौगिकों (यौगिक 1-7) का मूल्यांकन एबीटीएस, डीपीपीएच रेडिकल मैला ढोने की गतिविधि और एफआरएपी एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि द्वारा एंटीऑक्सीडेंट क्षमता के लिए किया गया था। सभी डेटा तालिका 2 में वर्णित हैं। यौगिकों 6 और 2 ने उच्चतम एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि दिखाई, इसके बाद 5. यौगिक 4 ने मध्यम एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि प्रदर्शित की और यौगिकों 1, 3, और 7 को 200 μmol से कम ABTS और DPPH कट्टरपंथी मैला ढोने की गतिविधियों के साथ निष्क्रिय माना गया। टीई / जी निकालने। सकारात्मक नियंत्रण के रूप में क्रमशः 2932.91 ± 93.63 और 1873.56 ± 121.68 umol TE/g अर्क के साथ कट्टरपंथी मैला ढोने की गतिविधियों का उपयोग करते हुए, यौगिक 6 में 1580.37 ± 89.32 और 1953.31 ± 109.93 μmol के साथ ABTS और DPPH कट्टरपंथी मैला ढोने वाले assays में सबसे मजबूत एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि थी। टीई/जी अर्क p<0.05）, respectively.="" furthermore,="" compound="" 6="" had="" the="" best="" antioxidant="" capacity="" in="" the="" frap="" assay="" as="" 5027.43±620.75="" μmol="" te/extract,="" which="" was="" much="" higher="" than="" that="" of="" vc="" as="" 3291.28±241.02="" μmol="" te/extract.="" moreover,="" the="" compound="" 2and6showed="" a="" significant="" antioxidant="" activity,="" which="" was="" equivalent="" to="" a="" positive="" control="">

इसके अतिरिक्त, फ्लेवोनोइड्स (1-6) के एंटीऑक्सीडेंट संरचना-गतिविधि संबंध पर निरोधात्मक प्रभावों की अलग-अलग डिग्री द्वारा चर्चा की जाती है। यौगिक 2 ने यौगिक 1, 3, और 5 की तुलना में अधिक एंटीऑक्सिडेंट गतिविधि प्रस्तुत की, जिसने सुझाव दिया कि 2 में डायहाइड्रोचालकोन में 3, 4- डाइहाइड्रॉक्सी समूह एबीटीएस, डीपीपीएच कट्टरपंथी मैला ढोने की गतिविधि और एफआरएपी एंटीऑक्सिडेंट के खिलाफ एक महत्वपूर्ण भूमिका निभा सकते हैं। गतिविधि, और 2 में C-4' पर प्रतिस्थापित ग्लूकोज की मात्रा इसकी एंटीऑक्सीडेंट क्षमता [4] पर एक महत्वपूर्ण भूमिका निभा सकती है। इसके अलावा, यौगिक 6 ने अन्य यौगिकों की तुलना में उच्चतम एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि का प्रदर्शन किया, जिसने सुझाव दिया कि फ्लैवन -3- ओल्स (कैटेचिन) शायद डायहाइड्रोचलकोन और फ्लैवनोन [27] की तुलना में बेहतर कट्टरपंथी सफाई गतिविधि प्रदर्शित करता है। सारांश में, अगले अध्ययन में H2O2 द्वारा ऑक्सीडेटिव तनाव के खिलाफ साइटोप्रोटेक्टिव प्रभावों के लिए अच्छी एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि वाले यौगिकों 2, 5, और 6 को आगे चुना गया।

2.6. एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि और टीपीसी/टीएफसी सामग्री के बीच संबंध

TPC और TFC की सांद्रता FRAP (r{0}.982 और 0.977) और ABTS (r=0.959 और के मूल्यों से एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि के साथ अत्यधिक सहसंबद्ध है। 0.965), क्रमशः। सहसंबंध मैट्रिक्स ने एबीटीएस और एफआरएपी मूल्यों (आर =0.992) के बीच मजबूत सहसंबंध भी दिखाया। इसके अलावा, एक बहुभिन्नरूपी विश्लेषण (पीसीए), जिसे तालिका 1 के डेटा से निकाला गया था, किया गया था। जैसा कि चित्र 2 में दिखाया गया है, PCA ने कुल भिन्नता का 94.44 प्रतिशत समझाया, जिसमें PC1 में 84.73 प्रतिशत विचरण और PC2 का 9.71 प्रतिशत हिस्सा था। EAF और RWF के साथ FRAP, ABTS, और DPPH assays को ऊपरी दाएं चतुर्थांश पर रखा गया है, और BF और BF-Cto E के साथ TPC और TFC सांद्रता क्रमशः PC1 सकारात्मक स्कोर में निचले दाएं चतुर्थांश पर स्थित हैं। इस बीच, कम टीपीसी और टीएफसी सांद्रता वाले डीएफ और बीएफ-ए से बी पीसी1 नकारात्मक स्कोर की धुरी के साथ स्थित हैं। इन निष्कर्षों से पता चला है कि टीपीसी और/या टीएफसी सांद्रता एंटीऑक्सिडेंट क्षमता के साथ निकटता से जुड़े हुए हैं, और अंशों और उप-अंशों में टीपीसीओआर टीएफसी सांद्रता जितनी अधिक होगी, उनकी एंटीऑक्सीडेंट क्षमता मान उतनी ही अधिक होगी। इन परिणामों से पता चला कि ए। सुगंधित पत्तियों से विभिन्न अंशों और उप-अंशों में उच्च फेनोलिक और फ्लेवोनोइड सामग्री एंटीऑक्सिडेंट गतिविधि में योगदान कर सकती है।

चित्रा 2. कुल phenolics, flavonoids, और एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि पर पीसीए विश्लेषण। विभिन्न अक्षरों वाले साधन महत्वपूर्ण अंतर दर्शाते हैं (p .)<0.05).df, eaf,="" bf,="" rwf="" mean="" dichloromethane="" fraction,="" ethyl="" acetate="" fraction,="" n-butanol="" fraction,="" and="" residual="" water="" fraction.="" bf-a="" to="" e="" means="" bf="" was="" subjected="" to="" d101="" column="" chromatography="" to="" yield="" five="">

यह लेख अणु 2021, 26, 3690 से निकाला गया है।