डीएनए एप्टामर "एप्टामिन सी" का उपयोग कर त्वचाविज्ञान में प्रगति नवाचार: ऑक्सीडेटिव तनाव निवारण और एंटीऑक्सीडेशन के माध्यम से विटामिन सी का प्रभाव अधिकतमकरण

joanna.jia@wecistanche.com/ व्हाट्सएप: 008618081934791

सूहो चोई PhD1|जेओंगमिन हान पीएच.डी. उम्मीदवार2|जी ह्यून किम एमएस कैंडिडेट1|अरु किम पीएच.डी. उम्मीदवार3|सांग हेन किम पीएच.डी. उम्मीदवार3|Weontae ली पीएच.डी., प्रोफेसर2|मून: यंग यूं पीएच.डी., प्रोफेसर3|ग्युयूप किम पीएचडी1|यूं, सेओंग किम पीएच.डी., प्रोफेसर1

सार

पार्श्वभूमि:विटामिन सी(एल-एस्कॉर्बिक एसिड के रूप में भी जाना जाता है) कोशिकाओं को ऑक्सीडेटिव तनाव से बचाकर प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (आरओएस) में कमी और सेल पुनर्जनन में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। हालांकि कॉस्मेटिक और चिकित्सीय बाजारों में विटामिन सी का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है, लेकिन इस बात के काफी प्रमाण हैं कि विटामिन सी आसानी से निकल जाता हैऑक्सीकरणभंडारण पर हवा, पीएच, तापमान और यूवी प्रकाश द्वारा। विटामिन सी की यह कमी एक एंटीऑक्सीडेंट के रूप में इसकी शक्ति को कम कर देती है और विटामिन सी युक्त उत्पादों के शेल्फ जीवन को कम कर देती है। विटामिन सी की कमी को दूर करने के लिए, हमने एप्टामिन सी विकसित किया है, जो एक अभिनव डीएनए एप्टैमर है जो विटामिन सी के कम रूप से बाध्य होकर विटामिन सी की एंटीऑक्सीडेंट प्रभावकारिता को अधिकतम करता है और इसकी देरी सेऑक्सीकरण.

तरीके:विटामिन सी के साथ एप्टामिन सी का बंधन आईटीसी विश्लेषण का उपयोग करके निर्धारित किया गया था। ITC प्रयोग 0.2 mmol/L . के साथ किया गया थाविटामिन सी0.02 mmol/L की सांद्रता में Aptamin C युक्त 1.8 मिलीलीटर नमूना सेल में 2 µ l aliquots में 25 बार इंजेक्ट किया गया था। आईटीसी v.5.0 के लिए मूल कार्यक्रम के साथ डेटा को एक-साइट बाइंडिंग इज़ोटेर्म में फिट किया गया था।

परिणाम:Aptamin C और . के प्रभाव की जांच करने के लिएविटामिन सीमानव खाल में जटिल, इन विट्रो और नैदानिक ​​परीक्षणों दोनों में प्रदर्शन किया गया। हमने देखा कि एप्टामिन सी और विटामिन सी का परिसर शिकन सुधार, सफेदी प्रभाव और जलयोजन वृद्धि में काफी प्रभावी था। नैदानिक ​​​​परीक्षण में, जटिल के साथ इलाज किए गए विषयों ने त्वचा की जलन और खुजली में नाटकीय सुधार दिखाया। परीक्षण में एप्टामिन सी कॉम्प्लेक्स द्वारा कोई प्रतिकूल प्रतिक्रिया प्रस्तुत नहीं की गई।

निष्कर्ष:एक साथ लिया गया, इन परिणामों से पता चला कि एप्टामिन सी, एक अभिनव उपन्यास यौगिक, संभावित रूप से त्वचा की विभिन्न स्थितियों के लिए एक प्रमुख कॉस्मेटिक घटक के रूप में परोसा जाना चाहिए।

कीवर्डएंटीऑक्सीडेशन, एप्टामिन सी (विटामिन सी बाइंडिंग एप्टामर),ऑक्सीकरण, ऑक्सीडेटिव तनाव,विटामिन सी(एल एस्कॉर्बिक एसिड)

सिस्टैंचेएंटीऑक्सीडेशन की एक मजबूत क्षमता रखते हैं

1|परिचय

प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियां (आरओएस) रासायनिक रूप से प्रतिक्रियाशील रासायनिक प्रजातियां हैं जिनमें ऑक्सीजन होती है, जो सेल सिग्नलिंग और होमियोस्टेसिस में महत्वपूर्ण भूमिका निभाती है। 1-3 इनमें न केवल सकारात्मक प्रभाव शामिल हैं जैसे कि मेजबान रक्षा जीन को शामिल करना और आयन परिवहन प्रणालियों को जुटाना बल्कि एपोप्टोसिस (क्रमादेशित कोशिका मृत्यु) में भी भूमिकाएँ। 4,5ROS का स्तर पर्यावरणीय तनाव से बढ़ाया जा सकता है, जिससे कोशिका संरचनाओं को नुकसान होता है। 3 इस घटना को "ऑक्सीडेटिव तनाव" कहा जाता है। ऑक्सीडेटिव तनाव विभिन्न रोगों के प्रमुख कारणों में से एक है, जिसमें न्यूरोडीजेनेरेटिव रोग, लू गेहरिग्स रोग, ऑटिज्म, मल्टीपल स्केलेरोसिस और त्वचा रोग शामिल हैं। 6-15 इसके अलावा, ऑक्सीडेटिव तनाव का त्वचा की उम्र बढ़ने की प्रक्रिया पर सीधा प्रभाव पड़ता है16; प्रोटीन, लिपिड और डीएनए ऑक्सीडेटिव तनाव के प्रति संवेदनशील रूप से प्रतिक्रिया कर रहे हैं जो आरओएस के कारण होता है। 17 एंटीऑक्सिडेंट त्वचा की सुरक्षा में अत्यधिक प्रभावी होते हैं क्योंकि वे आरओएस पर सीधे प्रतिक्रिया करते हैं और उन्हें जैविक लक्ष्य अणुओं तक पहुंचने से रोकते हैं। 18,19 एंटीऑक्सिडेंट जैसे किविटामिन सीविटामिन ई, कोएंजाइम Q10 और पॉलीफेनोलिक यौगिक त्वचा को ROS से होने वाले नुकसान से बचाते हैं। इस प्रकार एंटीऑक्सिडेंट विभिन्न त्वचा रोगों को रोकने और उनका इलाज करने में मदद करते हैं और त्वचा की उम्र बढ़ने की प्रक्रिया को धीमा करते हैं। 20 उद्योगों में विटामिन सी का उपयोग मुख्य रूप से इसके एंटीऑक्सीडाइजिंग गुणों के कारण होता है, जिसका परिणाम हैविटामिन सीरेडिकल मैला ढोने की प्रक्रिया के माध्यम से मुक्त ऑक्सीजन रेडिकल्स को बेअसर करने की क्षमता। 21,22 हालांकि, इन्हीं एंटीऑक्सीडेंट गुणों के कारण, अणु स्वयं के माध्यम से गिरावट के लिए स्वाभाविक रूप से अतिसंवेदनशील है।ऑक्सीकरण. इस समस्या को हल करने के लिए, हमने Aptamin C, एक DNA aptamer विकसित किया है जो विशेष रूप से विटामिन C से बंधता है और विटामिन C के ऑक्सीकरण को रोकता है। Aptamers सिंगल-स्ट्रैंडेड DNA‐ या RNA-आधारित ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्स हैं जो चुनिंदा रूप से अणुओं की एक विस्तृत श्रृंखला को बांधने में सक्षम हैं। Aptamers को आमतौर पर चयन की इन विट्रो विधि द्वारा पहचाना जाता है जिसे एक्सपोनेंशियल संवर्धन या "SELEX" द्वारा लिगैंड्स के व्यवस्थित विकास के रूप में संदर्भित किया जाता है। हमने पहचाना कि Aptamin C को रोकता हैऑक्सीकरणकई ऑक्सीकरण एजेंटों से विटामिन सी की और लंबी अवधि के भंडारण के दौरान एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि को बनाए रखता है। Aptamin C के सुरक्षा मूल्यांकन की पुष्टि करने के लिए, सेलुलर स्तर पर प्रयोग किए गए और सीधे मनुष्यों पर लागू किए गए और कोई विषाक्तता नहीं देखी गई। त्वचा रोग जैसे एटोपिक जिल्द की सूजन, छालरोग, और मुँहासे प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया और ROS.23 से संबंधित हैंविटामिन सीROS को हटाने की क्षमता रखता है और इसका सूजन-रोधी प्रभाव होता है। 24 Aptamin C रोकता हैऑक्सीकरणविटामिन सी की और धीमी गति से रिलीज के माध्यम से इसकी प्रभावकारिता को अधिकतम करता है। इसलिए, हम उम्मीद करते हैं कि एप्टामिन सी-विटामिन सी कॉम्प्लेक्स सहक्रियात्मक प्रभाव दिखाएगा।

2|सामग्री और तरीके

2.1|कम ग्रेफीन-ऑक्साइड के साथ विटामिन सी के खिलाफ Aptamer स्क्रीनिंग

इस पद्धति को पिछले शोध की पद्धति को संशोधित करके किया गया है। 25 एसएसडीएनए उम्मीदवार जो विशेष रूप से बाध्य कर सकते हैंविटामिन सीलगभग 1X1018 विभिन्न अनुक्रमों से युक्त एक यादृच्छिक ssDNA पुस्तकालय से विकसित किए गए थे। ssDNA लाइब्रेरी के लिए, हमने एक कस्टम-निर्मित अनुक्रम का उपयोग किया, जिसका आकार 60mer है और इसमें 30 बेतरतीब ढंग से उत्पन्न न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम और प्रवर्धन के लिए प्राइमर साइट है (5′‐ATGCGGATCCCGCGC‐(N)30‐GCGCGAAGCTGTGCGC-3′)। अधिक विशिष्ट अनुक्रम का चयन करने के लिए प्रायोगिक स्थिति को बदलते हुए हमने कुल पांच राउंड किए। प्रतिक्रिया के लिए कुल मात्रा 200 μL थी । लगभग 20 μL 10 × बाइंडिंग बफर (10 × PBS जोड़ा 10 mmol/L MgCl2), rGO का 80 μL (5 mg/mL, पानी में पतला), और ssDNA लाइब्रेरी के 200 पिकोमोल (100 μmol/L स्टॉक का 20 μL) ) जोड़े गए और dH2O को 200 μL में दर्ज किया गया। प्रतिक्रिया 30 मिनट के लिए ssDNA पुस्तकालय को rGO पर बाँधने के लिए आगे बढ़ी, और फिर, सतह पर तैरनेवाला को खत्म करने के लिए मिश्रण को 20 मिनट के लिए 20 000 g पर सेंट्रीफ्यूज किया गया। आरजीओ गोली को 200 μL बाइंडिंग बफर के साथ 1 बार धोया गया था जो कि प्रत्येक दौर की लक्ष्य बाध्यकारी स्थिति के समान एकाग्रता है। उम्मीदवारों को उत्साहित करने के लिए के 200 नैनोमोल्सविटामिन सी2 में पतला 00 बाध्यकारी बफर के μL को rGO गोली में जोड़ा गया था, और क्षालन चरण 1 घंटे के लिए किया गया था। Eluted ssDNA को सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा विभाजित किया गया था, इसे 20 मिनट के लिए 20 000 g पर किया गया और प्रवर्धित किया गया। हमने प्रवर्धन से पहले ssDNA को छोड़कर अशुद्धियों को खत्म करने के लिए EtOH वर्षा की। हमने प्रवर्धित ssDNA प्राप्त करने के लिए असममित पीसीआर किया। असममित पीसीआर के प्राइमर को रिवर्स प्राइमर से फॉरवर्ड करने का अनुपात 10:1 था। हमने कुछ माइक्रोलीटर के साथ पीसीआर उत्पाद की पुष्टि करने के लिए 2.5 प्रतिशत agarose gel पर वैद्युतकणसंचलन किया। असममित पीसीआर केवल ssDNA का उत्पादन नहीं कर सकता। इसलिए, हमने ssDNA उम्मीदवारों को अलग करने के लिए क्रश और सोख विधि की। विधि के लिए, हमने 12 प्रतिशत पॉलीएक्रिलामाइड देशी जेल पर वैद्युतकणसंचलन किया और जेल को एथिडियम ब्रोमाइड (EtBr) के साथ दाग दिया। डबल-फंसे डीएनए (dsDNA) और ssDNA को अलग करने के लिए, ssDNA द्वारा दागे गए जेल के हिस्से को क्रश और सोख बफर (500 mmol/L NH4OAc, 0.1 प्रतिशत SDS, 0.1 mmol/L EDTA) के साथ काट दिया गया, चूर्णित किया गया और ssDNA निकाला गया। रात भर। चूर्णित जेल को सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा अलग किया गया था। सतह पर तैरनेवाला जिसमें ssDNA होता है, EtOH वर्षा करके केंद्रित और शुद्ध होता है। सूखे ssDNA को निष्फल dH2O के साथ इकट्ठा किया गया था और इसे अगले दौर के लिए एक पुस्तकालय के रूप में इस्तेमाल किया गया था।

प्राकृतिक घटकअमेज़न

2.2|इज़ोटेर्मल अनुमापन कैलोरीमेट्री (आईटीसी) प्रयोग

1 mmol/L मैग्नीशियम क्लोराइड (pH 7.4) से बने फॉस्फेट बफर खारा में 25 डिग्री पर VP-ITC सिस्टम (MicroCal Inc नॉर्थम्प्टन) का उपयोग करके इज़ोटेर्मल अनुमापन कैलोरीमेट्री प्रयोग किया गया था। प्रत्येक अनुमापन प्रयोग से पहले, Aptamin C 2 mL औरविटामिन सी600 µL के नमूनों को 30 मिनट के लिए निर्वात में, बिना हिलाए, प्रयोग के तापमान से कुछ डिग्री कम तापमान पर नष्ट कर दिया गया। हमने 0.2 mmol/L विटामिन C तैयार किया जिसे 2 µ l aliquots में 25 बार इंजेक्ट किया गया और 0.02 mmol/L की सांद्रता पर Aptamin C युक्त 1.8 mL नमूना सेल में डाला गया। आईटीसी v.5.0 (माइक्रोकैल इंक) के लिए मूल कार्यक्रम के साथ डेटा को एक-साइट बाइंडिंग इज़ोटेर्म में फिट किया गया था।

2.3|विटामिन सी ऑक्सीकरण के लिए प्रतिदीप्ति-आधारित माइक्रोप्लेट परख

ऑक्सीकरणकाविटामिन सीVislisel et al.7 द्वारा वर्णित विधि के एक संशोधित संस्करण का उपयोग करके ऑक्सीकृत उत्पाद डीहाइड्रोस्कॉर्बेट (डीएचए) का पता लगाकर मापा गया था। इस विधि में, फ्लोरोसेंट संघनन उत्पाद बनाने के लिए ओ-फेनिलेनेडियम (ओपीडीए) के साथ प्रतिक्रिया से डीएचए का पता लगाया जाता है। डाइहाइड्रॉक्सीएथाइल) फ़्यूरो [3,4-बी] क्विनॉक्सालाइन-1-वन। परख निम्नानुसार काली 384-वेल प्लेट्स (ग्रीनर बायो-वन) में की गई थी। Aptamers को पहले फॉस्फेट-बफर खारा, pH 7.2 में भंग कर दिया गया था, जिसमें 1mM MgCl2 था, 200 μmol / L की सांद्रता में, फिर 95 डिग्री तक गर्म करके फोल्ड किया गया और 15 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर धीरे-धीरे ठंडा होने दिया गया। मुड़े हुए aptamers को फिर 1:1 (v:v) को 5 mmol/L के ताजा तैयार घोल में पतला किया गया।विटामिन सीपरख बफर में [50 mmol/L सोडियम एसीटेट, 1 प्रतिशत (w/v) BSA, 0.05 प्रतिशत (v/v) ट्वीन 20, 1mM MgCl2 (सिग्मा, सभी घटक) pH 5.5 में समायोजित], और मिश्रण को कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए ऊष्मायन किया गया था, ताकि ऑक्सीडाइज़र जोड़ने से पहले एप्टामर्स को बांधने की अनुमति मिल सके। ऑक्सीडाइज़र को तब (EM) H2O2 (सिग्मा) की सांद्रता में विटामिन C/aptamer घोल में मिलाया गया। ऑक्सीडाइज़र परख बफर में उनके काम करने की सांद्रता के लिए पूर्व-पतला थे। परख बफर में 5.5 mmol / L की सांद्रता में OPDA (सिग्मा) को जोड़ने से पहले नमूने को 10 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर ऊष्मायन किया गया था। ओपीडीए को जोड़ने के तुरंत बाद, 425 एनएम पर नमूनों की प्रतिदीप्ति को 345 एनएम पर उत्तेजना के साथ स्पेक्ट्रामैक्स® आई3एक्स प्लेट रीडर (आणविक उपकरण) का उपयोग करके निर्धारित किया गया था, हर 60 सेकंड में माप के साथ 45-मिनट के समय पाठ्यक्रम में। प्रतिदीप्ति assays के लिए किए गए सभी ऊष्मायन के दौरान सभी नमूनों और अभिकर्मक युक्त जहाजों को प्रकाश से बचाने के लिए पन्नी में लपेटा गया था।

2.4|डीसीपीआईपी का उपयोग करके विटामिन सी की कमी का मापन (2,6-डाइक्लोरोफेनोलिंडोफेनॉल)

की कमी का निर्धारण करने के लिएविटामिन सी, हमने DCPIP प्रतिक्रिया का उपयोग करके प्रयोग किए। विटामिन सी डीसीपीआईपी के साथ प्रतिक्रिया करता है, रंग को नीले से बेरंग में बदल देता है। तैयार विटामिन सी को 5 प्रतिशत एप्टामिन सीटीएम के साथ इलाज किया गया था, और अनुपचारित विटामिन सी को कमरे के तापमान पर 8 सप्ताह के लिए ऊष्मायन किया गया था। नमूना 2, 4 और 8 सप्ताह के बाद मापा गया था। एक पिपेट का उपयोग करके शंक्वाकार फ्लास्क में लगभग 2 एमएल डीसीपीआईपी जोड़ा गया था, और घोल के रंगहीन होने तक पहले अनुपचारित विटामिन सी को जोड़ा गया था। की राशिविटामिन सीजोड़ा गया था और अन्य नमूनों के साथ दोहराया गया था। प्रत्येक नमूने की कमी की डिग्री की गणना इस डेटा के अनुसार की गई थी।

2.5|मानव त्वचीय फाइब्रोब्लास्ट में विरोधी शिकन प्रभाव के इन विट्रो अध्ययन में

मानव त्वचीय फ़ाइब्रोब्लास्ट में सेल व्यवहार्यता का मूल्यांकन करने के लिए, कोशिकाओं का इलाज एप्टामिन सी के विभिन्न अंतिम सांद्रता के साथ किया गया थाविटामिन सी(एप्टामिन सी यूजी प्लस विटामिन सी यूजी/एमएल) {{0}}.01 प्लस 0.5 यूजी/एमएल, 0.1 प्लस 5 यूजी/एमएल, 0.5 प्लस 25 यूजी /एमएल, 1 प्लस 50 यूजी/एमएल, और 2 प्लस 100 यूजी/एमएल। और फिर, कोशिकाओं को इंट्रासेल्युलर कोलेजन, इंट्रासेल्युलर कोलेजनेज़ (एमएमपी -1) और इलास्टेज गतिविधि का पता लगाने के लिए विटामिन सी के साथ एप्टामिन सी की सांद्रता में इलाज किया गया।

मानव त्वचीय फाइब्रोब्लास्ट (एचडीएफ) का चयन एमएफडीएस के "कार्यात्मक सौंदर्य प्रसाधन (ΙI) के प्रभावकारिता मूल्यांकन के लिए दिशानिर्देश" के आधार पर किया गया था। एचडीएफ को डीएमईएम/एफ में संवर्धित किया गया था12 3:1 मिश्रण उच्च ग्लूकोज को 10 प्रतिशत एफबीएस और 1 प्रतिशत एंटीबायोटिक-एंटीमायोटिक के साथ 37 डिग्री सेल्सियस पर आर्द्र 5 प्रतिशत सीओ 2 वातावरण में पूरक किया गया था।

एचडीएफ (5 × 104 सेल / कुएं) को 24-वेल प्लेटों में डाला गया और 24 घंटे के लिए इनक्यूबेट किया गया और एप्टामिन सी के विभिन्न सांद्रता के साथ इलाज किया गया।विटामिन सीऔर 24 घंटे के लिए ऊष्मायन किया गया। 24 घंटों के बाद, सतह पर तैरनेवाला एकत्र किया गया था, और प्रोकोलेजन टाइप आईसी-पेप्टाइड (पीआईपी) एलिसा किट का उपयोग करके माध्यम में मुक्त होने वाले प्रोकोलेजन की मात्रा को 450 एनएम पर मापा गया था। कोलेजन उत्पादन की डिग्री को कुल प्रोटीन सामग्री द्वारा कैलिब्रेट किया गया था और टीजीएफ ‐ 1 के साथ एक सकारात्मक नियंत्रण के रूप में तुलना की गई थी। परीक्षण सामग्री के बिना मीडिया का उपयोग विलायक नियंत्रण के रूप में किया गया था।

एचडीएफ (5 × 104 सेल / कुएं) को 24-वेल प्लेटों में डाला गया और 24 घंटे के लिए इनक्यूबेट किया गया और एप्टामिन सी के विभिन्न सांद्रता के साथ इलाज किया गया।विटामिन सीऔर 48 घंटे के लिए ऊष्मायन किया गया। 48 घंटों के बाद, MMP-1 मानव एलिसा किट का उपयोग करके कोलेजनेज़ की गतिविधि को 450 एनएम मापा गया। एमएमपी -1 गतिविधि का मूल्यांकन कुल प्रोटीन सामग्री द्वारा किया गया था और टीजीएफ -1 के साथ सकारात्मक नियंत्रण के रूप में तुलना की गई थी। परीक्षण सामग्री के बिना मीडिया का उपयोग विलायक नियंत्रण के रूप में किया गया था।

सभी डेटा को ± मानक विचलन के रूप में व्यक्त किया गया था और 3 स्वतंत्र प्रयोगों से प्राप्त किया गया था। P <.05 महत्व="" स्तर="" पर="" spss®="" सॉफ़्टवेयर="" प्रोग्राम="" (ibm)="" का="" उपयोग="" करके="" स्वतंत्र="" नमूने="" t-परीक्षण="" द्वारा="" सांख्यिकीय="" विश्लेषण="" किया="" गया="">

2.6|3डी छवि विश्लेषण प्रणाली द्वारा त्वचा की शिकन का मापन

इस अध्ययन में बाईस महिला विषयों (औसत आयु: 50.05 ± 2.94 वर्ष) ने भाग लिया। कौवा के पैरों की त्वचा की शिकन का मूल्यांकन बेसलाइन, 4 और 8 सप्ताह में एक 3D छवि विश्लेषण प्रणाली द्वारा किया गया था। त्वचा के जलयोजन का मूल्यांकन कैपेसिटेंस विधि द्वारा किया गया था, और TEWL को स्किन सर-फेस वॉटर डिफ्यूजन विधि द्वारा और सक्शन विधि द्वारा त्वचा की लोच का मूल्यांकन उपचार के बाद बेसलाइन, 2, 4 और 8 सप्ताह में किया गया था। इसके अलावा, प्रभावकारिता से संबंधित स्व-प्रश्नावली 2 और 4 और 8 सप्ताह में विषयों द्वारा भरी गई थी, और प्रयोज्यता को उपचार के 8 सप्ताह बाद विषयों द्वारा भर दिया गया था। सभी प्राप्त डेटा का सांख्यिकीय विश्लेषण SPSS® सॉफ़्टवेयर द्वारा किया गया था। PRIMOS® प्रीमियम (GFMesstechnik GmbH) का उपयोग करके कौवा के पैरों के शिकन मापदंडों का मूल्यांकन किया गया। इस प्रणाली ने त्वचा की शिकन पर खुरदरापन, गहराई, क्षेत्र और उभरे हुए आयतन के मात्रात्मक विश्लेषण की अनुमति दी। छवि का विश्लेषण उसी क्षेत्र में त्वचा की झुर्रियों के मापदंडों (1, झुर्रियों की औसत गहराई; 2, औसत गहराई सबसे बड़ी शिकन; 3, अधिकतम गहराई सबसे बड़ी शिकन; 4, कुल शिकन क्षेत्र; 5, कुल शिकन मात्रा; 6) के संदर्भ में किया गया था। , कुल रूप कारक झुर्रियाँ; 7, झुर्रियों की कुल लंबाई; 8, रा; 9, Ry; और 10, Rz) बेसलाइन पर, 4 और 8 सप्ताह के बाद प्राइमोस 5.8 ई वेर द्वारा उपचार के बाद। सॉफ़्टवेयर।

3|परिणाम

3.1|अस्थिर लक्ष्य के साथ rGO‐SELEX को सफलतापूर्वक निष्पादित करने के लिए बफर तैयारी के लिए एक कठोर दृष्टिकोण की आवश्यकता थी

SsDNA लाइब्रेरी, जो कि ग्राफीन सतह के सुगंधित वलय और डीएनए आधार 26, 27 और rGO पर गैर-बाध्य ssDNA के बीच स्टैकिंग इंटर-एक्शन के माध्यम से rGO के लिए बाध्य थी, को सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा अलग और हटा दिया गया था। ssDNA जिसे rGO सतह पर adsorbed किया गया था, को लक्ष्य यौगिक के साथ उपचार के माध्यम से अलग किया गया था। साहित्य रिपोर्टों के अनुसार, लक्ष्य के साथ बंधने के बाद और आरजीओ के साथ स्टैकिंग इंटरैक्शन को कमजोर करके aptamer की संरचना बदल जाती है।28-31 इस प्रक्रिया को पांच राउंड के लिए दोहराया गया था। प्रत्येक बाद का दौर कठोर बफर स्थितियों और कम रेफरेंस समय के साथ आगे बढ़ा। इस प्रदर्शन ने हमें लक्ष्य यौगिकों के लिए बेहतर विशिष्टता के साथ ssDNA बनाए रखने की अनुमति दी।

rGO-SELEX प्रक्रिया द्वारा निर्मित समृद्ध पुस्तकालय के NGS डेटा से 404071 अनुक्रम प्राप्त हुए। हमने इस डेटा से 119 अनुक्रमों का चयन किया, संरचना समानता के आधार पर इन्हें 11 समूहों में क्रमबद्ध किया, और उपयुक्त उम्मीदवारों के लिए चयनित प्रतिनिधि अनुक्रम (चित्र 1क)।

3.2|एप्टामिन सी चयन

Aptamin C उम्मीदवारों की माध्यमिक संरचनाओं का पूर्वानुमान M‐Fold मुक्त सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके लगाया गया था। 32,33 उम्मीदवारों को उनकी स्थिति, लंबाई, आकार और उच्चतम संभावित संरचना के स्टेम और लूप की संख्या के आधार पर समूहीकृत किया गया था (चित्र 1B)। डीएचए, ऑक्साइडविटामिन सी, o-फेनिलेनेडियम (OPDA) के साथ इसकी प्रतिक्रिया से पता चलता है जो एक संकेतक के रूप में भूमिका निभाता है। 34 यदि aptamer बांधता है और इसे रोकता हैऑक्सीकरण, विटामिन सी के लिए और इसके ऑक्सीकरण को रोकता है, विटामिन सी और ओपीडीए के संघनन उत्पाद 3‐(डायहाइड्रॉक्सीएथिल)‐फ़्यूरो‐[3,4‐बी] क्विनोक्सालाइन-1‐वन से प्रतिदीप्ति संकेत, की तुलना में कम होगा नो-एप्टामर नियंत्रण। सकारात्मक नियंत्रण के साथ विटामिन सी और ऑक्सीडाइज़र के साथ मिश्रित प्रत्येक उम्मीदवार aptamer का एक प्लॉट,विटामिन सीप्लस ऑक्सीडाइज़र और हाथापाई अनुक्रम विटामिन सी और ऑक्सीडाइज़र (चित्रा 1C) के साथ मिश्रित। पांच aptamers, Aptamin Cb, Cc, Cf, Cg, और Ck, को एंटीऑक्सीडेशन के प्रभाव के लिए दिखाया गया था।

3.3|Aptamin C . द्वारा विटामिन सी ऑक्सीकरण का निषेध

Aptamin C के लिए उच्च बाध्यकारी संबंध हैविटामिन सी. ITC विश्लेषण का उपयोग करके विटामिन सी के साथ Aptamin C का बंधन निर्धारित किया गया था। बाध्यकारी आइसोथर्म से, बाध्यकारी प्रतिक्रिया के थैलेपी (ΔH), एन्ट्रॉपी (ΔS), और स्टोइकोमेट्री (एन) प्राप्त की जा सकती है। ITC माप से Aptamin Cb एक्ज़ोथिर्मिक बाइंडिंग का पता लगाया गया था, और थैलीपी (ΔH) की गणना 3 0 2.5 ± 3.788 के रूप में की गई थी, एन्ट्रापी (ΔS) की गणना 18.9 के रूप में की गई थी, स्टोइकोमेट्री (n) की गणना 56.7 ± {{21 के रूप में की गई थी। }}.426, और वियोजन स्थिरांक (केडी) की गणना विटामिन सी के लिए 2.13uM के रूप में की गई थी। ITC माप से Aptamin Cf एक्ज़ोथिर्मिक बाइंडिंग का पता लगाया गया था, और थैलेपी (ΔH) की गणना 279.2 ± 2.992 के रूप में की गई थी, एन्ट्रॉपी (ΔS) की गणना की गई थी। 18.4 के रूप में, स्टोइकोमेट्री (एन) की गणना 167 ± 1.15 के रूप में की गई थी, और पृथक्करण स्थिरांक (केडी) की गणना विटामिन सी के लिए 0 .89uM के रूप में की गई थी। ITC माप से Aptamin Ck एक्ज़ोथिर्मिक बाइंडिंग का पता लगाया गया था, और थैलेपी (ΔH) ) की गणना 25 0 के रूप में की गई थी। विटामिन सी (चित्र 2क)। ITC मापों से पता चलता है कि Aptamin C के साथ जुड़ने पर एन्ट्रापी में परिवर्तन के लिए एक प्रमुख प्रेरक शक्ति हैविटामिन सी. रोकने के लिएऑक्सीकरणतरल अवस्था में विटामिन सी के सभी घोल नाइट्रोजन से उपचारित विआयनीकृत पानी से तैयार किए गए थे। प्रतिदीप्ति व्यक्त की गई थी और मात्रात्मक रूप से विश्लेषण किया गया था जब ओपीडीए (ओ-फेनिलेनेडियम) द्वारा उत्पन्न डीएचए के लिए बाध्य थाऑक्सीकरणविटामिन सी की। एपटामिन सी (125, 250, 500, और 1000 एनएमओएल / एल) की एकाग्रता के अनुसार विटामिन सी के ऑक्सीकरण की डिग्री की तुलना ओपीडीए परख द्वारा की गई और पुष्टि की गई। परिणामों ने प्रदर्शित किया किविटामिन सीजब एप्टामिन सी की सांद्रता अधिक थी, तब डीहाइड्रोस्कॉर्बिक एसिड में रूपांतरण धीमा था। (चित्रा 2बी)। ये आंकड़े साबित करते हैं कि Aptamin C विटामिन सी ऑक्सीकरण का एक खुराक पर निर्भर अवरोधक है।

हमने यह निर्धारित करने के लिए प्रयोग किए कि क्या एप्टामिन सी इसे रोक सकता हैऑक्सीकरणलंबे समय तक विटामिन सी की कमी। Aptamin C सह-इलाजविटामिन सी, और अनुपचारित विटामिन सी को प्रकाश के संपर्क में लाया गया और 8 सप्ताह तक कमरे के तापमान पर खड़े रहने दिया गया। नतीजतन, जब अनुपचारित विटामिन सी को अकेला छोड़ दिया गया, तो कमी की डिग्री 2 सप्ताह में आधे से भी कम हो गई, और लगभग सभी 4 सप्ताह के बाद ऑक्सीकृत हो गए। Aptamin C की उपस्थिति में, विटामिन C को लगभग आधा घटाकर 8 सप्ताह (चित्र 2C) कर दिया गया था। इससे पता चलता है कि Aptamin C लंबे समय तक विटामिन C के ऑक्सीकरण को रोकता है।

शरीर सौष्ठव

3.4|इंट्रासेल्युलर कोलेजनेज़ (एमएमपी -1) गतिविधि और कोलेजन का विश्लेषण

कोलेजनेज गतिविधि के विश्लेषण पर, मैट्रिक्स मेटालोप्रोटीनेज -1 (एमएमपी -1) का उत्पादन खुराक पर निर्भर तरीके से काफी कम हो गया था, जिसमें 7.06 प्रतिशत, 9.29 प्रतिशत, और 31.81 प्रतिशत {{1{ की सांद्रता पर था। {12}}}}.01 प्लस 0.5 यूजी/एमएल, 0.1 प्लस 5 यूजी/एमएल, और 0.5 प्लस 25 यूजी/ एमएल, क्रमशः (चित्रा 3ए)। कोलेजन संश्लेषण के विश्लेषण पर, प्रोकोलेजन प्रकार - कार्बोक्सी-टर्मिनल पेप्टाइड (पीआईपी) को खुराक पर निर्भर तरीके से 25.{{20}} प्रतिशत वृद्धि के साथ 0.01 प्लस 0.5 यूजी/एमएल , 41.99 प्रतिशत 0.1 प्लस 5 यूजी/एमएल, और 71.18 प्रतिशत 0.5 प्लस 25 यूजी/एमएल पर (चित्र 3बी)।

3.5|मानव त्वचा पर त्वचा की शिकन सुधार प्रभावों का नैदानिक ​​अध्ययन

मानव त्वचा पर परीक्षण उत्पाद के त्वचा शिकन सुधार प्रभावों का मूल्यांकन करने के लिए, 3 डी छवि विश्लेषण प्रणाली द्वारा शिकन मानकों का सांख्यिकीय विश्लेषण किया गया था। नियंत्रण समूह की तुलना में, "झुर्रियों की औसत गहराई" पैरामीटर 4 सप्ताह में 4.77 प्रतिशत और 8 सप्ताह में 4.25 प्रतिशत कम हो गया था, "मीन गहराई सबसे बड़ी शिकन" पैरामीटर 4 सप्ताह में 3.37 प्रतिशत और 8 सप्ताह में 4.53 प्रतिशत कम हो गया था, " अधिकतम गहराई सबसे बड़ी शिकन" पैरामीटर 4 सप्ताह में 4.36 प्रतिशत और 8 सप्ताह में 7.19 प्रतिशत कम हो गया था, "झुर्रियों की कुल लंबाई" पैरामीटर 4 सप्ताह में 1.61 प्रतिशत और 8 सप्ताह में 2.67 प्रतिशत कम हो गया था, "रा" पैरामीटर 4.22 प्रतिशत कम हो गया था 4 सप्ताह में और 3.90 प्रतिशत 8 सप्ताह में, "Ry" पैरामीटर 4 सप्ताह में 2.66 प्रतिशत और 8 सप्ताह में 7.11 प्रतिशत कम किया गया, "Rz" पैरामीटर 4 सप्ताह में 3.69 प्रतिशत और 8 सप्ताह में 6.22 प्रतिशत घटाया गया, कमी 3.69 थी प्रतिशत 7.11 प्रतिशत (चित्र 4)।

4|निष्कर्ष

विटामिन सीएक व्यावसायिक रूप से महत्वपूर्ण अभी तक अस्थिर अणु है, इसलिए इसकी स्थिरता में सुधार करना विभिन्न बाजार क्षेत्रों के लिए रुचिकर है। हमारा काम दर्शाता है कि डीएनए एप्टैमर्स, एप्टामिन सी, संभावित रूप से शेल्फ-लाइफ को बढ़ाता है और देरी से ऐसे उत्पादों की शक्ति को बढ़ाता है।विटामिन सी ऑक्सीकरणएक समाधान में। हमने शिकन सुधार और त्वचा के जलयोजन में एप्टामिन सी कॉम्प्लेक्स की नैदानिक ​​​​प्रभावकारिता का प्रदर्शन किया। Aptamin C कॉम्प्लेक्स कठोर त्वचा को राहत देने में भी मदद कर सकता है।

त्वचा की सफेदी में सुधार