अमूर्त
उद्देश्य: यह अध्ययन एक मिश्रित हर्बल अर्क (एमएचई) की प्रयोज्यता की पुष्टि करने के लिए आयोजित किया गया थाएंटी-एजिंग कॉस्मेटिकइसकी जांच करके संघटकत्वचा विरोधी उम्र बढ़नेइन विट्रो और विवो में गतिविधियाँ। तरीके: इस अध्ययन में, हमने एक अल्ट्रासोनिक निष्कर्षण का उपयोग करके MHE तैयार किया जिसमें फोर्सिथिया फ्रुक्टस, ट्रिबुली फ्रुक्टस, सोलोमन सील, साइबेरियन जिनसेंग, पोन्सिरी फ्रुक्टस और जिनसेंग शामिल हैं। हमने जांच कीत्वचीय फाइब्रोब्लास्ट्स में त्वचा के लिए MHE का एंटी-एजिंग प्रभाव.विरोधी उम्र बढ़ने की गतिविधिप्रकार I कोलेजन संश्लेषण स्तरों द्वारा निर्धारित किया गया था। मैट्रिक्स मेटालोप्रोटीनेज -1 (MMP1) और मेटालोप्रोटीनिस 1 (TIMP1) mRNA स्तर के ऊतक अवरोधक को qRT-PCR द्वारा मापा गया। MMP1 प्रोटीन के स्तर का मूल्यांकन सोख्ता विश्लेषण द्वारा किया गया था। 1 प्रतिशत एमएचई युक्त सौंदर्य प्रसाधनों का उपयोग करके त्वचा की नमी, लोच, बनावट और झुर्रियों के नैदानिक परीक्षण किए गए। परिणाम: MHE ने प्रो-कोलेजन प्रकार I संश्लेषण और TIMP1 mRNA अभिव्यक्ति के अपरेगुलेशन को प्रेरित किया। MHE ने MMP1 mRNA के स्तर और प्रोटीन के स्तर को कम कर दिया। इसके अलावा, 1 प्रतिशत एमएचई युक्त सौंदर्य प्रसाधनों के त्वचा पर लगाने के बाद, उपचार के 4 सप्ताह बाद त्वचा का जलयोजन, लोच, बनावट और कौवा के पैर में सुधार हुआ। निष्कर्ष: कोलेजन संश्लेषण को बढ़ावा देने और इन विट्रो में MMP1 जीन अभिव्यक्ति को दबाने से MHE का एंटी-एजिंग प्रभाव होता है, और इसका विवो में त्वचा में सुधार प्रभाव होता है। इसलिए, एमएचई को एक कार्यात्मक कॉस्मेटिक घटक के रूप में मूल्य दिखाया गया था।
कीवर्ड:त्वचा की देखभाल, बुढ़ापा विरोधी, सिकुड़न प्रतिरोधी, प्राकृतिक सौंदर्य प्रसाधन, हर्बल दवा
एंटी-एजिंग के लिए हर्बल सप्लीमेंट सिस्टंच
परिचय
त्वचा एक ऐसा अंग है जो बाहरी वातावरण के संपर्क में आता है और प्राथमिक बाधा के रूप में कार्य करते हुए हमारे अस्तित्व के लिए महत्वपूर्ण हैबाहरी हमलों के खिलाफजैसे संक्रामक एजेंट और शारीरिक चोट; इसके अतिरिक्त, यह कई महत्वपूर्ण शारीरिक भूमिकाओं (स्लोमिंस्की एट अल।, 2004; वोल्मर एट अल।, 2018) को पूरा करता है। जैसे - जैसे हमारी उम्र बढ़ती है,त्वचा समारोहधीरे-धीरे पराबैंगनी (यूवी) किरणों, प्रदूषण, और तनाव के कारण और त्वचा की उम्र बढ़ने से त्वचा की कोशिकाओं की संख्या और त्वचा की मोटाई में कमी (Farage et al., 2013) के कारण धीरे-धीरे बिगड़ती जाती है।
त्वचा की उम्र बढ़नाअंतर्जात उम्र बढ़ने और बहिर्जात उम्र बढ़ने में विभाजित किया जा सकता है। बाहरी प्रभावों की परवाह किए बिना अंतर्जात त्वचा की उम्र बढ़ने स्वाभाविक रूप से समय के साथ होती है। त्वचीय-एपिडर्मलजंक्शन (डीईजे) सामंजस्य कमजोर होता है, और भेदभाव के साथकेराटिनोसाइट्स, लिपिड गठन कम हो जाता है (मक्रांटोनाकीऔर अन्य., 2007)। दूसरी ओर, बहिर्जात बुढ़ापा बाहरी कारणों से होता हैयूवी किरणें, अवरक्त किरणें (आईआर), धूम्रपान, ठीक जैसे कारकधूल, और जीवन शैली। इनमें से फोटोएजिंग यूवी के कारण होता हैकिरणें त्वचा में प्रवेश करती हैं और कोलेजन और इलास्टिन को नुकसान पहुंचाती हैंडर्मिस में। इस प्रक्रिया में, लोचदार फाइबर और कोलेजनत्वचा के तंतु विकृत हो जाते हैं, जिसके परिणामस्वरूप लोच कम हो जाती हैऔर शिथिलता। कोलेजन बाह्यकोशिकीय का एक प्रमुख घटक हैमैट्रिक्स और ऊतक समारोह का निर्धारण करने में एक महत्वपूर्ण भूमिका है।
विभिन्न कोलेजन प्रकारों में, टाइप 1 कोलेजन कुल कोलेजन का लगभग 75-80 प्रतिशत है (Landau, 2007; Lovell et al., 1987; Mays et al., 1988)। जब त्वचा खुल जाती हैलंबे समय तक यूवी किरणें फ्री रेडिकल्स पैदा करती हैं। ये मुफ्तरेडिकल्स मैट्रिक्स मेटेलोप्रोटीनेज -1 की अभिव्यक्ति को उत्तेजित करते हैं(MMP1) जो कोलेजन क्षरण को बढ़ावा देता है और कोलेजन को रोकता हैसंश्लेषण जो त्वचा की लोच को कम करता है और झुर्रियाँ पैदा करता है।इसलिए, त्वचा की झुर्रियों को रोकने और सुधारने के लिएउम्र बढ़ने, बढ़ावा देने वाले एक घटक को विकसित करना आवश्यक हैकोलेजन उत्पादन और की अभिव्यक्ति और गतिविधि को रोकता हैएमएमपी1 (व्लाशेकऔर अन्य., 2001).
त्वचा की उम्र बढ़नाजीवन की गुणवत्ता से गहरा संबंध है। क्योंकि त्वचा सबसे अधिक दिखाई देने वाला अंग है, यह हमें उम्र बढ़ने की प्रक्रिया से अवगत कराता है (बिनिक एट अल।, 2013)। दवा, फार्मास्यूटिकल्स और सौंदर्य प्रसाधन के क्षेत्र में विभिन्न प्रयास चल रहे हैंत्वचा की उम्र बढ़ने को रोकें और सुधारें.बुढ़ापा रोधी अवयवों का विकाससबसे महत्वपूर्ण एंटी-एजिंग रणनीतियों में से एक है।
हमने फोर्सिथिया फ्रुक्टस, ट्राइबुली फ्रुक्टस, सोलोमन सील, साइबेरियन जिनसेंग, पोन्सिरी फ्रुक्टस और जिनसेंग युक्त नए एंटी-एजिंग अवयवों को विकसित करने के लिए अल्ट्रासोनिक निष्कर्षण का उपयोग करके हर्बल अर्क तैयार किया है।
विभिन्न चिकित्सा और त्वचा प्रभावों वाले पौधों से छह हर्बल दवाओं का चयन किया गया। Forsythiae fructus, Forsythia सस्पेंस (फैमिली Oleaceae) का सूखा फल, जिसे Lian Qiao के नाम से जाना जाता हैचीन में, पहली बार शेनोंग बेन्काओ जिंग में दर्ज किया गया था, एपारंपरिक चीनी चिकित्सा पर प्रतिष्ठित मोनोग्राफ (टीसीएम)(डोंगऔर अन्य., 2017)। इसका उपयोग गर्मी-समाशोधन और के रूप में किया गया हैसंक्रामक रोगों के उपचार के लिए टीसीएम को डिटॉक्सीफाई करना, जैसेतीव्र नेफ्रैटिस, विसर्प, और अल्सर (वैंगऔर अन्य।, 2018)। यह हैक्लिनिक में व्यापक रूप से एकल दवा या यौगिक नुस्खे के रूप में उपयोग किया जाता है।आधुनिक फार्माकोलॉजी ने इसे विभिन्न प्रकार के होने के लिए दिखाया हैविरोधी भड़काऊ, जीवाणुरोधी, विरोधी सहित बायोएक्टिविटीजवायरल, एंटीऑक्सिडेंट, एंटीट्यूमर, एंटी-डायबिटिक, एंटीहाइपरलिपिडेमिक,एंटीएंड्रोजेनिक एलोपेसिया, एंटी-उल्टी, एंटी-एजिंग और एंटी-मोटापा गतिविधियाँ और न्यूरोप्रोटेक्टिव, हेपाटो-प्रोटेक्टिव औरवैसोरेलैक्सेंट प्रभाव (डोंगऔर अन्य., 2017)। इसके अलावा हो गया हैसूचना दी गईफोर्सिथिया फ्रुक्टसत्वचा की सफेदी है, एंटी-एटोपिक जिल्द की सूजन, और एंटी-एजिंग प्रभाव। ताइवान के अनुसारराष्ट्रव्यापी नुस्खे डेटाबेस,फोर्सिथिया फ्रुक्टसरहा हैशीर्ष 10 जड़ी बूटियों में शामिल हैं जो आमतौर पर एटोपिक के इलाज के लिए उपयोग की जाती हैंडर्मेटाइटिस (15.9 प्रतिशत), पित्ती (11.49-13.4 प्रतिशत), और मुहांसे (22.3 प्रतिशत)(डोंगऔर अन्य., 2017). फोर्सिथिया फ्रुक्टससैपोनिन होता है,फ्लेवोनोइड्स,और अल्कलॉइड्स और ओलीनोलिक एसिड जो एक उपयोगी हैऔषधीय कार्रवाई। इसके अतिरिक्त, इसमें आर्कटिजेनिन और होता हैmatairesinol. शारीरिक रूप से सक्रिय त्वचा सामग्री के रूप में, वेtyrosinase अवरोधक हैं जो मेलेनिन चयापचय पर कार्य करते हैंद्वारा प्रेरित मार्ग - मेलानोसाइट उत्तेजक हार्मोन ( -एमएसएच)और कॉस्मेटिक व्हाइटनिंग सामग्री के रूप में ध्यान आकर्षित कर रहे हैं(यांग एंड चो, 2011)।ट्रिबुली फ्रुक्टसजो कि का सूखा मेवा हैTribulus Terrestrisएल, औषधीय होने की सूचना दी गई हैयौन क्रिया में सुधार, रोकथाम और उपचार की गतिविधियाँहृदय रोग, और न्यूरोप्रोटेक्शन में सुधार औरयाद। इसमें एंटी-डायबिटिक, एंटी-इंफ्लेमेटरी और भी हैएंटीऑक्सीडेंट प्रभाव (छत्रेऔर अन्य., 2014)। ट्रिबुली फ्रुक्टसअर्क में बड़ी मात्रा में डायोसजेनिन, टिगोजिन, विभिन्न होते हैंसैपोनिन, आदि ये सैपोनिन सबसे महत्वपूर्ण बायोएक्टिव हैंविभिन्न जैविक प्रभावों के लिए जिम्मेदार घटक जैसेकामोद्दीपक प्रभाव, उच्चरक्तचापरोधी प्रभाव और सुरक्षात्मकischemia-reperfusion चोट और कैंसर विरोधी के खिलाफ प्रभाव,जीवाणुरोधी और एंटिफंगल गतिविधियों (छत्रेऔर अन्य., 2014).
अन्य अवयवों में फ़्यूरोस्टानॉल और स्पिरोस्टानॉल सैपोनिन, पॉलीसेकेराइड, फ्लेवोनोइड ग्लाइकोसाइड, अल्कलॉइड और एमाइड्स शामिल हैं। इसके अलावा, यह चूहों में एटोपिक डर्मेटाइटिस के खिलाफ प्रभावी है और इसमें सूजन-रोधी प्रभाव होता है (छत्रे एट अल।, 2014)। यह बताया गया है कि ट्रिबुली फ्रक्टस एक्सट्रैक्ट का एंटी-एजिंग प्रभाव HS68 कोशिकाओं में टाइप I प्रो-कोलेजन और इलास्टिन के उत्पादन को बढ़ाता है, एडिपोसाइट्स के लिपिड संचय को बढ़ावा देता है, और अंततः त्वचा की झुर्रियों और लोच में सुधार करता है (किम एट अल।, 2016) ). साइबेरियाई जिनसेंग (एकेंथोपैनाक्स सेंटिकोसस) एक पर्णपाती झाड़ी है जो जिनसेंग और जंगली जिनसेंग के साथ परिवार ओगा से संबंधित है। साइबेरियाई जिनसेंग में जिनसेंग के साथ कई समानताएं हैं और इसका उपयोग स्ट्रोक, उच्च रक्तचाप और मधुमेह के लिए एक हर्बल दवा के रूप में किया जाता है। साइबेरियाई जिनसेंग अर्क का उपयोग प्राच्य चिकित्सा में लंबे समय से किया जाता रहा है, और हाल तक विभिन्न अध्ययनों में औषधीय और शारीरिक परिणाम सामने आए हैं। अब तक जिन साइबेरियाई जिनसेंग घटकों की पहचान की गई है, उनमें ए, बी, सी, डी, ई, आई, के, एल, और एम, और सेसमिन, चीसानोसाइड, कैफिक एसिड, क्लोरोजेनिक एसिड, कैंपेस्टरोल, विटामिन और खनिज (पार्क) शामिल हैं। एट अल।, 2010)।
इसमें ट्राइटरपेनॉयड सैपोनिन्स, लिग्नांस, कूमारिन्स और शामिल हैंflavonoidsजिनमें से फेनोलिक यौगिकों को सबसे सक्रिय घटक माना जाता है (हुआंग एट अल।, 2011)। त्वचा पर साइबेरियाई जिनसेंग अर्क की प्रभावशीलता के बारे में कई रिपोर्टें हैं।विरोधी शिकन प्रभाव,एंटीऑक्सीडेंट प्रभाव,कोलेजन संश्लेषण, और फोटोएजिंग के खिलाफ कोलेजेनेज़ निरोधात्मक गतिविधि की सूचना दी गई है (पार्क एट अल।, 2010)। यह बताया गया है कि साइबेरियाई जिनसेंग अर्क टाइप IV कोलेजन के संश्लेषण को नियंत्रित करता है, एपिडर्मल स्टेम सेल की प्रसार क्षमता को प्रभावित करता है और एपिडर्मिस को मोटा करता है (चोई एट अल।, 2016)। सोलोमन की मुहर पॉलीगोनैटम गंध (पर्यायवाची: पी. ऑफिसिनेल) का एक प्रकंद है जिसका एक टॉनिक प्रभाव होता है और इसका उपयोग प्राच्य चिकित्सा में हृदय की विफलता और मधुमेह के इलाज के लिए किया जाता है। सोलोमन की सील एंटी-साइकल और एंटीट्यूसिव है; यह हृदय तनाव से राहत देता है, और एक मूत्रवर्धक, स्फूर्तिदायक, हाइपोग्लाइसेमिक, शामक और टॉनिक है; इसका उपयोग तपेदिक और जठरांत्र संबंधी विकारों सहित फेफड़ों के रोगों के इलाज के लिए किया जाता है (हारून एट अल।, 2012)। इसके अलावा, यह रक्त विकारों के उपचार में व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है; यह गुर्दे की नलिकाओं पर लाभकारी प्रभाव डालता है और भूरे बालों, दृष्टि की समस्याओं, चक्कर और दाद को रोकता है। यह एक तंत्रिका टॉनिक है और इसका उपयोग मधुमेह के उपचार में किया जाता है (हारून एट अल।, 2012)। सोलोमन की सील में उच्च फिनोल सामग्री और एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि होती है। सोलोमन की सील से होमोइसोफ्लेवानोन उन्नत ग्लाइकोसिलेशन अंत उत्पादों के निर्माण को रोकते हैं। सोलोमन की मुहर ने एक मजबूत आंतों की प्रतिरक्षा प्रणाली नियामक गतिविधि और ऑस्टियोक्लास्ट भेदभाव और लेक्टिन-प्रेरित एपोपोसिस को प्रेरित करने की क्षमता दिखायी है। P. odoratum लीफ एक्सट्रैक्ट के मामले में, घाव भरने के कार्य को एक उदाहरण के रूप में रिपोर्ट किया गया है (Fathi et al., 2014)। पोंसिरी फ्रुक्टस अपरिपक्व पोंसिरस ट्राइफोलियाटा राफिनेस्क का कच्चा फल है, जो रूटेसी परिवार (जंग एट अल।, 2016) से संबंधित है। हाल ही में, विरोधी भड़काऊ और अतिसंवेदनशीलता विरोधी प्रभावों की सूचना दी गई है, और वसा गाद के अर्क के प्रभाव को कैंसर कोशिकाओं (ली एट अल।, 2008) के एपोप्टोसिस को प्रेरित करने के लिए सूचित किया गया है। पोंसिरी फ्रुक्टस को एटोपिक डर्मेटाइटिस के इलाज में प्रभावी माना जाता है। पोंसिरी फ्रुक्टस सत्त के त्वचा पर अनुप्रयोग के माध्यम से, एटोपिक डर्मेटिटाइड्स, जैसे कि एपिडर्मल हाइपरकेराटोसिस, त्वचीय एडिमा और साइटोकिन्स के विरुद्ध इसके प्रभावों की सूचना दी गई है। विशेष रूप से, खुजली, मस्तूल कोशिकाओं की संख्या, आईजीई उत्पादन, और तंत्रिका विकास कारक अभिव्यक्ति में महत्वपूर्ण कमी दर्ज की गई है। पोंसिरी फ्रुक्टस अर्क ने प्रतिरक्षा तंत्र को विनियमित करके एटोपिक जिल्द की सूजन और एंटीप्रुरिटिक प्रभावकारिता के खिलाफ एक प्रभावी विरोधी भड़काऊ प्रभाव दिखाया है। इसके अलावा, पॉन्किरी फ्रुक्टस के सत्त को मौखिक रूप से देने से एलर्जी संबंधी बीमारियों के उपचार और रोकथाम में मदद मिलती है (ह्वांग एट अल., 1997)। जिनसेंग बहु-कार्यात्मक गतिविधियों के साथ व्यापक रूप से इस्तेमाल की जाने वाली पारंपरिक हर्बल दवा है। जिनसेंग का उपयोग इसके विरोधी भड़काऊ, एंटीऑक्सिडेंट, एंटीट्यूमर और एंटी-एजिंग गतिविधियों (चोई, 2008; किम एंड को, 2020) के लिए किया गया है। त्वचा पर जिनसेंग की प्रभावकारिता पर कई अध्ययन किए गए हैं (He et al., 2018)। उनमें से, सैपोनिन्स और जिनसैनोसाइड्स पर कई रिपोर्टें हैं, जो जिनसेंग के प्रतिनिधि तत्व हैं। सैपोनिन यौगिक अधिकांश पौधों में बड़े पैमाने पर पाए जाते हैं और विभिन्न रूपों में मौजूद होते हैं। सैपोनिन विभिन्न जैविक गतिविधियों जैसे हेमोलिसिस, और जीवाणुरोधी, एंटीवायरल और एंटीऑक्सिडेंट कार्यों को तेज कर सकता है। इसके अलावा, सैपोनिन्स में एंटी-इंफ्लेमेटरी गुण होते हैं जो सूजन और त्वचा की सूजन को कम कर सकते हैं। Ginsenosides इंटरल्यूकिन (IL) -1 को बढ़ाते हैं, जो एंजियोजेनेसिस को बढ़ावा देने और संवहनी एंडोथेलियल ग्रोथ फैक्टर और संचय को प्रेरित करने के लिए जाने जाने वाले भड़काऊ साइटोकिन्स में से एक है।चूहों में त्वचा की जलन वाली जगहों पर। त्वचा के घावों से मैक्रोफेज को हटाने और घाव भरने को बढ़ावा देने का उनका प्रभाव भी बताया गया है (किम एट अल।, 2011)।
इस अध्ययन का उद्देश्य इन विट्रो और विवो में मिश्रित हर्बल अर्क (एमएचई) के त्वचा के एंटी-एजिंग प्रभाव को स्पष्ट करना था।
तरीकों
1. इन विट्रो प्रभावकारिता मूल्यांकन
1) एमएचई की तैयारी
फोर्सिथिया सस्पेंस के सूखे फल, ट्रिब्युलस टेरेस्ट्रिस एल के सूखे फल, साइबेरियन जिनसेंग (एकेंथोपैनाक्स सेंटिकोसस (एलेउथेरो) रूट), सोलोमन की सील (राइज़ोम और पॉलीगोनैटम ऑफ़िसिनेल की जड़), पोन्सिरस ट्रिफ़ोलियाटा राफ़िनेस्क, और जिनसेंग (पैनाक्स) के फल थे। स्थानीय बाजार से खरीदा गया। पारंपरिक चीनी चिकित्सा (टीसीएम) के "यिन-यांग" और "पांच तत्वों" सिद्धांत के आधार पर, फोर्सिथिया सस्पेंस, ट्रिब्युलस टेरेस्ट्रिस एल।, और "यांग" और साइबेरियाई जिनसेंग, जिनसेंग, और सोलोमन की सील के अनुरूप पोन्सिरस ट्राइफोलियाटा राफिनस्क्यू "यिन" चुना गया था। छह औषधीय जड़ी बूटियों को फिर से पांच तत्वों (लकड़ी, आग, पानी, धातु या सोना, और पृथ्वी या मिट्टी) के अनुरूप विशेषताओं में विभाजित किया गया था। इन औषधीय जड़ी बूटियों को प्रत्येक तत्व के संतुलन के लिए एक ही अनुपात में मिलाया गया था, और पोंसिरस ट्राइफोलियाटा और जिनसेंग को पृथ्वी के अनुरूप अन्य तत्वों के साथ जोड़ा गया था ताकि अनुपात (तालिका 1) का मिलान किया जा सके। अल्ट्रा-सोनिकेशन (20 kHz, 2 h) द्वारा छह औषधीय पौधों को 30 प्रतिशत इथेनॉल में निकाला गया। रोटरी बाष्पीकरण के साथ ध्यान केंद्रित करने के बाद, 30 प्रतिशत (v/v) ब्यूटिलीन ग्लाइकोल जोड़ा गया था, और 1 प्रतिशत ठोस सामग्री युक्त अर्क तैयार करने के लिए घोल को पतला किया गया था।
तालिका 1. मिश्रित जड़ी बूटियों की संरचना
2) सेल संस्कृतियों और अभिकर्मकों
मानव प्राथमिक फाइब्रोब्लास्ट कोशिकाएं (एचडीएफएन) प्रोमोसेल (सामान्य मानव त्वचीय फाइब्रोब्लास्ट किशोर चमड़ी, सी -12300; प्रोमोसेल, जर्मनी) से प्राप्त की गईं। डल्बेको के साथ सेल कल्चरसंशोधित ईगल का मध्यम उच्च ग्लूकोज (DMEM उच्च ग्लूकोज, SH30243.01, Hyclone, Cytiva) जिसमें 10 प्रतिशत (v/v) भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS, SH30084.03, Hyclone) और 1 प्रतिशत एंटीबायोटिक होता हैएंटीमाइकोटिक एजेंट (एंटी-एंटी, 15240-062, गिब्को, यूएसए) को 5 प्रतिशत CO2 इनक्यूबेटर में 37 डिग्री पर सुसंस्कृत किया गया।
3) सेल व्यवहार्यता परख (एमटीटी परख)
MTT परख ने सेल व्यवहार्यता को मापा और MHE की साइटोटोक्सिसिटी निर्धारित की। कोशिकाओं को 96-वेल प्लेट पर 5 × 103 कोशिकाओं/कुएं पर सीड किया गया और सेल कल्चर के तहत 24 घंटे के लिए सुसंस्कृत किया गयास्थितियाँ। फिर, हमने माध्यम को त्याग दिया, कोशिकाओं को फॉस्फेट-बफर खारा (पीबीएस, 21-040- सीवी; कॉर्निंग, यूएसए) के घोल से धोया, कोशिकाओं को नए सीरम-मुक्त मीडिया में रखा, और{{0}}.01, 0.025, {{10}}.05 की सांद्रता वाली कोशिकाओं का उपचार किया। 0.10, 0.25, 0.50, 0.75, और 1. 00 प्रतिशत नमूने, और 24 और 48 घंटे के लिए कोशिकाओं को ऊष्मायन किया। फिर, हमने एमटीटी समाधान के 100 μL जोड़े(0.5 प्रतिशत , 3-(4,5-डाइमिथाइलथियाज़ोल-2-वाईएल)-2,5 डाइफेनिल-2एच टेट्राजोलियम ब्रोमाइड) प्रत्येक को अच्छी तरह से और कोशिकाओं को एक और 2 घंटे के लिए ऊष्मायन किया। कल्चर मीडिया को हटाने के बाद, हमने 100 प्रतिशत डाइमिथाइल सल्फोऑक्साइड (DMSO) के 100 μL जोड़े, 10 मिनट के लिए कोशिकाओं को हिलाया, और एक माइक्रोप्लेट रीडर (एपोक 2 माइक्रोप्लेट रीडर, बायोटेक, यूएसए) के साथ 590 एनएम पर अवशोषण को मापा।
4) प्रो-कोलेजन प्रकार I पीढ़ी का मापन
सेल कल्चर माध्यम में प्रो-कोलेजन टाइप I की सांद्रता को व्यावसायिक रूप से उपलब्ध एलिसा किट (प्रोकोलेजन टाइप I C-पेप्टाइड EIA किट, MK101, TaKaRa) का उपयोग करके मापा गया था।बायो, जापान) निर्माता के निर्देशों के अनुसार। प्रत्येक नमूने का तीन प्रतियों में विश्लेषण किया गया था।
5) मात्रात्मक का उपयोग करके एमआरएनए अभिव्यक्ति स्तरों का मापन
रीयल-टाइम पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (qRT PCR) सेल को 6-वेल प्लेट पर 1×105 सेल/वेल पर सीड किया गया। एचडीएफएन कोशिकाओं को 24 घंटे के लिए सुसंस्कृत किया गया; फिर, कोशिकाओं को 24 घंटे के लिए FBS के बिना DMEM उच्च ग्लूकोज के साथ सिंक्रनाइज़ किया गया। माध्यम को सीरम-मुक्त मीडिया से बदल दिया गया और 0.05, 0.10, 0.25, 0.5, और 0.75 प्रतिशत नमूनों की सांद्रता के साथ इलाज किया गया 24 और 48 घंटे के लिए। RNA निष्कर्षण किट (TaKaRa MiniBEST Universal RNA निष्कर्षण किट, 9767A, Takara Bio, USA) का उपयोग करके HDFn कोशिकाओं के साथ RNA निष्कर्षण किया गया था और निर्माता के प्रोटोकॉल के बाद नमूनों को शुद्ध किया गया था। पृथक RNA (1 ug) को TR अभिकर्मक किट (GDNA इरेज़र, RR047A, Takara Bio, USA के साथ PrimeScriptTM RT अभिकर्मक किट) का उपयोग करके cDNA में संश्लेषित किया गया था। SYRB ग्रीन रीयलटाइम PCR मास्टर मिक्स (पॉवर SYBRTM ग्रीन PCR मास्टर मिक्स, 4367659, एप्लाइड बायोसिस्टम्सTM, USA) और QuantStudioTM 3 (QuanStudioTM 3 रीयल-टाइम PCR इंस्ट्रूमेंट, A28132, थर्मो फ़िशर साइंटिफिक, USA) रीयल-टाइम PCR मशीन का उपयोग करके, जीन अभिव्यक्ति के स्तर को हाउसकीपिंग जीन ग्लिसराल्डिहाइड 3- फॉस्फेट डिहाइड्रोजनेज (GAPDH) के लिए मानकीकृत किया गया था। इस अध्ययन में प्रयुक्त प्राइमरों को तालिका 2 में प्रस्तुत किया गया है। प्रयोग तीन स्वतंत्र दोहरावों के लिए दो प्रतियों में किए गए थे। पिघलने की अवस्था का विश्लेषणप्रत्येक प्राइमर सेट के लिए प्रदर्शन किया गया था।
6) पश्चिमी धब्बा विश्लेषण
फ़ाइब्रोब्लास्ट कोशिकाओं से प्रोटीन lysates को एक लिसीज़ बफर (EzRIPA Lysis Kit, WSE -7420; ATTO Corporation, Japan) के साथ निकाला गया था। प्रोटीन की मात्रा निर्धारित करने के लिए ब्रैडफोर्ड विधि का उपयोग किया गया था।प्रोटीन की समान मात्रा को 5X नमूना बफर (टीएलपी -102-01, ट्रांसलैब, कोरिया) के साथ मिलाया गया और 1 0 मिनट के लिए 99 डिग्री पर विकृत किया गया। प्रोटीन को 150 मिनट के लिए 150 वी पर 10 प्रतिशत एसडीएस-पेज द्वारा अलग किया गया और पीवीडीएफ झिल्ली (क्लियर ब्लाट मेम्ब्रेन, 3322546, एटीटीओ कॉर्पोरेशन, जापान) में स्थानांतरित किया गया। झिल्लियों को 0.5 प्रतिशत गोजातीय सीरम एल्ब्यूमिन (BSA, A4503-10G; सिग्मा) के साथ 1 घंटे के लिए अवरुद्ध कर दिया गया था और ट्रिस-बफर खारा से धोया गया था जिसमें ट्वीन -20 (ट्वीन 30, TR { के साथ 10X TBS) शामिल था। {17}}; बायोसेंग, कोरिया) तीन बार; इसके बाद झिल्लियों को एमएमपी -1 (रिकॉम्बिनेंट एंटी-एमएमपी1 एंटीबॉडी [ईपी1249वाई], एबी134184, एबीकेम, यूएसए), -एक्टिन (एंटी - -एक्टिन (एन-टर्न) और पीए0207 (एबफ्रंटियर) के खिलाफ प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ ऊष्मायन किया गया था। , कोरिया) रातोंरात 4 डिग्री पर। धोने के बाद, झिल्लियों को एंटी-खरगोश आईजीजी-हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज (एचआरपी) (एंटी-खरगोश आईजीजी, एचआरपी-लिंक्ड एंटीबॉडी, # 7074; सेल सिग्नलिंग टेक्नोलॉजी, यूएसए) के साथ माध्यमिक एंटीबॉडी के रूप में इलाज किया गया था। 1 घंटे के लिए। ECL प्राइम वेस्टर्न ब्लॉटिंग डिटेक्शन रिएजेंट (GE हेल्थकेयर, यूएसए) और ATTO WSE -6100 LuminoGraph (ATTO Corporation, Japan) का उपयोग करके केमिलुमिनेसेंस डिटेक्शन का प्रदर्शन किया गया। मात्रात्मक विश्लेषण के लिए, कैप्चर की गई छवियों का छवि के साथ विश्लेषण किया गया सॉफ्टवेयर (सीएस विश्लेषक 4, एटीटीओ निगम, जापान)।
7) सांख्यिकीय विश्लेषण
विंडोज (ग्राफपैड सॉफ्टवेयर, यूएसए) के लिए ग्राफपैड प्रिज्म संस्करण 3.03 का उपयोग करके सांख्यिकीय विश्लेषण किया गया था। परिणाम 3 प्रयोगों के औसत ± एसडी के रूप में प्रस्तुत किए जाते हैं। एक अयुग्मितविद्यार्थी के t-परीक्षण का उपयोग किया गया था, और p मान<0.05 were considered statistically significant.
2. विवो प्रभावकारिता मूल्यांकन में
1) अभिकर्मकों और कॉस्मेटिक उत्पादों
परीक्षण उत्पाद स्किन लोशन, एसेंस क्रीम और आई क्रीम थे; उन क्रीमों में एमएचई का 1 प्रतिशत तालिका 3 में दिखाए गए सक्रिय संघटक के रूप में होता है।
2) मानव प्रतिभागी
सभी स्वयंसेवकों ने परीक्षण के उद्देश्य और सामग्री पर सहमति व्यक्त की और परीक्षण शुरू करने से पहले लिखित सूचित सहमति प्रपत्रों पर हस्ताक्षर किए। उन्हें किसी भी अन्य त्वचा देखभाल उत्पादों का उपयोग करने की अनुमति नहीं थी, और त्वचा-आंख क्रीम (केवल कौवा के पैरों पर) - सार क्रीम-लोशन क्रीम के क्रम में परीक्षण उत्पादों को चेहरे पर लागू किया गया था। अध्ययन हेलसिंकी की घोषणा के दिशानिर्देशों के अनुसार आयोजित किया गया था और इंस्टीट्यूशनल रिव्यू बोर्ड ऑफ कोरिया नेशनल इंस्टीट्यूट फॉर बायोएथिक्स पॉलिसी (#P01-202108-13-001) द्वारा अनुमोदित किया गया था।
3) प्रभावकारिता परीक्षण
इस अध्ययन में सामान्य त्वचा के साथ 45 और 55 (मतलब ±एसडी 50.81±2.86) वर्ष की 21 महिला विषयों ने भाग लिया। परीक्षण उत्पादों को 4 सप्ताह के लिए दिन में दो बार (सुबह और शाम) लगाया गया। प्रतिभागियों ने हर 2 सप्ताह में अनुसंधान केंद्र का दौरा किया, और परीक्षण स्थलों को प्रयोगशाला में मापा गया, जहां परिवेश का तापमान और सापेक्षिक आर्द्रता क्रमशः 22±2 डिग्री और 50±5 प्रतिशत पर बनाए रखा गया था। प्रतिभागियों ने अपने चेहरे धोने के बाद प्रयोगशाला में 20 मिनट के लिए अनुकूलन किया और त्वचा जलयोजन, लोच, बनावट और कौवा के पैर के लिए मूल्यांकन किया गया। त्वचा के जलयोजन को कॉर्नियोमीटर® सीएम825 (सी प्लस के इलेक्ट्रॉनिक जीएमबीएच, कोलोन, जर्मनी) का उपयोग करके मापा गया था; लोच को कटोमीटर® एमपीए 580 (सी प्लस के इलेक्ट्रॉनिक जीएमबीएच, कोलोन, जर्मनी) का उपयोग करके मापा गया था, और बनावट और कौवा के पैरों को डर्माटॉप 3 डी-एचई (ईओटेक एसएएस, फ्रेंच) का उपयोग करके मापा गया था।
4) त्वचा की प्रतिकूल प्रतिक्रियाओं का मूल्यांकन
प्रश्नावली और अवलोकन द्वारा प्रतिकूल प्रतिक्रियाओं की हर यात्रा की जाँच की गई। मूल्यांकन में, व्यक्तिपरक मापदंडों को खुजली, चुभन, गुदगुदी, जलन, चुभन के रूप में वर्गीकृत किया गया था।कठोरता, और कसाव, और उद्देश्य मापदंडों को एरिथेमा, एडिमा, स्केल और पैप्यूल के रूप में वर्गीकृत किया गया था।
5) सांख्यिकीय विश्लेषण
SPSS® सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके डेटा का विश्लेषण किया गया। बार-बार उपायों के विश्लेषण का उपयोग करके समय बिंदुओं के बीच अंतर का सांख्यिकीय महत्व निर्धारित किया गया था; एक पी-मूल्य<0.05 सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण माना जाता था। बेसलाइन मान से परिवर्तन दर (प्रतिशत) की गणना निम्नानुसार की गई:
परिवर्तन दर=((उपचार-आधार रेखा के बाद)/आधार रेखा)×100 प्रतिशत
