Leontopodium Alpinum (Edelweiss) Callus Culture Extract Through Transcriptome प्रोफाइलिंग के एंटी-एजिंग प्रभाव

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सारांश:एस्टेरेसी परिवार में एडलवाइस (लियोन्टोपोडियम एल्पिनम) एक जंगली फूल है जो चट्टानी चूना पत्थर स्थानों में बढ़ता है। यहां, हमने एडलवाइस कैलस संस्कृति निकालने की प्रभावकारिता की जांच की (लियोन्टोपोडियम एल्पिनम कॉलस संस्कृति निकालने; LACCE) इन विट्रो से विवो के साथ-साथ ट्रांसक्रिप्टोम प्रोफाइलिंग में कई assays का उपयोग करना। कई इन विट्रो परख परिणामों में UVB उपचार के जवाब में LACCE की मजबूत एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि से पता चला. इसके अलावा, LACCE सूजन और wrinkling दबा दिया; हालांकि, LACCE द्वारा मॉइस्चराइजिंग गतिविधि में वृद्धि की गई थी। विवो में नैदानिक परीक्षण ने प्रदर्शित किया कि चेहरे और त्वचा के ऊतकों पर एलएसीई के निरंतर आवेदन ने प्लेसबो की तुलना में एंटी-पेरिऑर्बिटल झुर्रियों, त्वचा लोच, त्वचीय घनत्व और त्वचा की मोटाई में सुधार किया। आरएनए-अनुक्रमण परिणामों से पता चला है कि कम से कम 16.56% मानव जीन केराटिनोसाइट कोशिकाओं में व्यक्त किए गए थे। LACCE अप-विनियमित जीन कई KRT प्रोटीन एन्कोडिंग; DDIT4, BNIP3, और IGFBP3 विकास प्रक्रिया के सकारात्मक विनियमन में शामिल थे, क्रमादेशित सेल मृत्यु, केराटिनाइजेशन, और त्वचा बाधाओं का निर्माण करने वाले कॉर्निफिकेशन, जो मानव त्वचा को कई लाभ प्रदान करते हैं। इसके विपरीत, डाउन-विनियमित जीन तनाव-उत्तरदायी जीन थे, जिनमें धातु, ऑक्सीकरण, घायल, हाइपोक्सिया और वायरस संक्रमण शामिल थे, यह सुझाव देते हुए कि एलएसीसीई ने त्वचा पर किसी भी हानिकारक तनाव का कारण नहीं बनाया। हमारे व्यापक अध्ययन से पता चला है कि LACCE एंटी-एजिंग सौंदर्य प्रसाधनों के लिए एक आशाजनक एजेंट है।

खोजशब्दों:एंटी-एजिंग; कैलस; एडलवाइस;त्वचा कोशिकाएं;ट्रांसक्रिप्टोम

1. परिचय

Edelweiss (Leontopodium noble sub sp. Alpinum(कैस.) Greuter) परिवार में Asteraceae एक wildflower है कि उच्च ऊंचाई पर चट्टानी चूना पत्थर स्थानों में बढ़ता है, जैसे स्विस आल्प्स [1,2]. अपने अल्पकालिक सफेद फूलों की दुर्लभता के कारण, एडलवाइस आल्प्स और कार्पेथियन से संबंधित सुंदरता और शुद्धता का प्रतिनिधित्व करता है। इसके अलावा, ऑस्ट्रिया, बुल्गारिया, रोमानिया, स्लोवेनिया और स्विट्जरलैंड सहित कई देश एडलवाइस को एक राष्ट्रीय प्रतीक के रूप में मानते हैं।

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लंबे समय से, एडलवाइस का उपयोग पेट में दर्द, ब्रोंकाइटिस, दस्त, पेचिश और बुखार के खिलाफ पारंपरिक दवा के रूप में किया जाता है [3, ए]। हाल ही में, कई अध्ययनों ने चूहों और चूहों में विरोधी सूजन के लिए एडलवाइस अर्क की प्रभावकारिता को दिखाया है [3] और मानव केराटिनोसाइट्स और एंडोथेलियल कोशिकाओं [4]। इसके अलावा, एडलवाइस के जड़ अर्क में घटक होते हैं जो कोलिनर्जिक न्यूरोट्रांसमिशन को बढ़ाते हैं, जो एंटीडिमेंशिया एजेंटों [5] और एंटीऑक्सिडेंट के लिए इसकी क्षमता का संकेत देते हैं, जैसे कि

लियोन्टोपोडिक एसिड ए और 35-कैफेयोइलक्विनिक एसिड, जिसे एंटी-एजिंग एजेंटों के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है [6]। इसके अलावा, एडलवाइस के अर्क ने एंटरोकोकस मल, एस्चेरिचिया कोलाई, स्यूडोमोनास एरुगिनोसा, स्टेफिलोकोकस ऑरियस, स्ट्रेप्टोकोकस निमोनिया और स्ट्रेप्टोकोकस प्योजीनेस के खिलाफ जीवाणुरोधी गतिविधि दिखाई, जो श्वसन और पेट के विकारों के लिए उनके संभावित नृवंशविज्ञान उपयोग का सुझाव देती है [7]।

पिछले कई अध्ययनों ने एडलवाइस अर्क के यौगिकों का विश्लेषण किया है। उदाहरण के लिए, केशिका क्रोमैटोग्राफी विधि ने 12 औषधीय रूप से महत्वपूर्ण यौगिकों का खुलासा किया, जिसमें फ्लेवोनोइड्स, कैफेइक एसिड और लियोन्टोपोडिक एसिड शामिल हैं, जो एडलवाइस के हवाई भागों से [8]। एडलवाइस पौधों से एंटीऑक्सिडेंट निकालने के लिए, केन्द्रापसारक विभाजन क्रोमैटोग्राफी (सीपीसी) और उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (एचपीएलसी) विधियों को विकसित किया गया है [6]। यह ज्ञात है कि हवाई भागों और जड़ों के बीच एडलवाइस अर्क के सक्रिय यौगिक विविध हैं[3]। उदाहरण के लिए, एडलवाइस की बालों वाली जड़ें औषधीय रूप से सक्रिय लिग्नान्स का उत्पादन करती हैं, जैसे लॉगिन और 5-मेथोक्सी-लॉगिन, जिसे कई अन्य घटकों द्वारा उत्तेजित किया जा सकता है, जैसे कि सिल्वर नाइट्रेट, सुक्रोज, मिथाइल जैस्मोनेट, और खमीर निकालने [9]।सिस्तान्चे अर्क लाभइसके अलावा, 11 अलग-अलग लियोन्टोपोडियम प्रजातियों के चयापचय पैटर्न को परमाणु चुंबकीय अनुनाद (1एच एनएमआर) स्पेक्ट्रोस्कोपी और तरल क्रोमैटोग्राफी-मास स्पेक्ट्रोमेट्री (एलसी-एमएस) द्वारा उनके वर्गीकरण संबंध में प्रकट किया गया है [10]।

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प्लांट कैलस को असंगठित या अविभाजित सेल द्रव्यमान के रूप में परिभाषित किया जा सकता है, जो आसानी से पौधे के घाव को कवर करने या कृत्रिम रूप से इन विट्रो सिस्टम का संचालन करने के लिए घायल होकर प्रेरित होते हैं। पादप कैलस कृत्रिम रूप से एंटीसेप्टिक विकास की स्थिति में पोषक तत्वों और पौधों के विकास नियामकों को जोड़कर सुसंस्कृत होता है। वर्तमान में, बायोरिएक्टर में समान गुणवत्ता के साथ विशिष्ट पौधों की कोशिकाओं की एक उच्च संख्या का उत्पादन करना संभव है। इसके अलावा, एक पौधे की कोशिका में टोटिपोटेंसी के रूप में संदर्भित एक क्षमता होती है, जो पूरे परिपक्व पौधे का उत्पादन करने के लिए एक पौधे की कोशिका की आनुवंशिक क्षमता है [11]। इस प्रकार, विशिष्ट पौधे के कैलस से एक परिपक्व पौधे उत्पन्न करना संभव है। इसके अलावा, दुर्लभ और लुप्तप्राय पौधों के संरक्षण के लिए पौधे के पुनर्जनन के लिए कॉलस का व्यापक रूप से उपयोग किया जा सकता है [12,13].

पशु कोशिकाओं की तरह, पौधों की कोशिकाओं में चोट के बाद पौधों की उत्तेजना और उत्थान को सुविधाजनक बनाने की क्षमता होती है [14]। यद्यपि पौधे स्टेम कोशिकाओं को कॉस्मेटिक उद्योग में उभरती हुई सामग्री के रूप में माना जाता है, उपलब्ध सामग्री सीमित है। नए पौधे स्रोतों की पहचान करना और सौंदर्य प्रसाधनों से जुड़े उनके कार्यात्मक घटकों का मूल्यांकन करना महत्वपूर्ण है।

एडलवाइस अर्क दवा एजेंटों में उनके उपयोग के लिए अच्छी तरह से जाना जाता है; हालांकि, एक प्राकृतिक कॉस्मेटिक स्रोत के रूप में edelweiss निकालने के प्रभाव शायद ही कभी रिपोर्ट कर रहे हैं. यहां, हमने एडलवाइस कैलस निकालने की प्रभावकारिता की जांच की (लियोन्टोपोडियम एल्पिनम कॉलस संस्कृति निकालने; LACCE) edelweiss पत्तियों से व्युत्पन्न इन विट्रो से विवो में कई assays का उपयोग कर और ट्रांसक्रिप्टोम प्रोफाइलिंग का उपयोग कर LACCE के कारण आणविक तंत्र का पता चला.

2. सामग्री और तरीके

2.1. Edelweiss Callus का उत्पादन

एडलवाइस बीज व्यावसायिक रूप से खरीदे गए थे। एडलवाइस के बीजों को 30 के दशक के लिए 70% इथेनॉल में भिगोया गया था, जिसके बाद आसुत पानी से धोया गया था। फिर से, बीज ों को 20 मिनट के लिए 0.3% सोडियम हाइपोक्लोराइट (वाको, ओसाका, जापान) में हिलाया गया था और आसुत पानी से धोया गया था। निष्फल बीज एक बुनियादी Murashige और Skoog (एमएस) माध्यम (Duchefa बायोकेमी, Haarlem, नीदरलैंड) पर अंकुरित थे। एसेप्टिक स्थिति में एडलवाइस के पत्तों को छोटे टुकड़ों (0.5 से 1 सेमी) में काटा गया था। हमने एक एमएस माध्यम पर पौधे की कोशिकाओं के शुरुआती चरण को प्रेरित किया जिसमें 6-बेंजिलामिनोप्यूरिन (6-बीएपी) (डुचेफा बायोकेमी) के 0.5-3 मिलीग्राम / एमएल और 2,4-डाइक्लोरोफेनोक्सीएसिटिक एसिड (2,4-डी) (डुचेफा बायोकेमी) के 0.5-3 मिलीग्राम / एमएल 25± 2 डिग्री सेल्सियस [15] पर अंधेरे में। एमएस माध्यम के पीएच को NaOH (Duchefa Biochemie) के 1N का उपयोग करके 5.8 में समायोजित किया गया था। प्रेरित कैलस पेट्री डिश में प्रचारित किया गया था। चयनित callus लाइन BIO-FD &C कं, लिमिटेड, इंचियोन, कोरिया के एंटी एजिंग रिसर्च इंस्टीट्यूट में एक बायोरिएक्टर में सुसंस्कृत किया गया था। सुसंस्कृत कैलस को काटा गया था और आसुत पानी के साथ तीन बार धोया गया था।सिस्तानचे चंगेज खाननिर्माता के निर्देशों के अनुसार फ्रीज ड्रायर (IlShinbioBase, Dongducheonsi, कोरिया) का उपयोग करके कॉलस को निर्जलित किया गया था। सूखे एडलवाइस कॉलस को 8 घंटे के लिए 50 डिग्री सेल्सियस पर आसुत पानी में हिलाया गया था। कैलस अर्क 10 मिनट के लिए 98 डिग्री सेल्सियस पर गर्मी निष्कर्षण द्वारा प्राप्त किए गए थे।

2.2. मानव त्वचा कोशिकाओं की संस्कृति

मानव त्वचा कोशिकाओं, केराटिनोसाइट (HaCaT) कोशिकाओं, और सामान्य मानव डेट्रायट 551 फाइब्रोब्लास्ट (ATCC, Manassas, VA, USA) पर एडलवाइस अर्क के मूल्यांकन किए गए प्रभावों को Dulbecco के संशोधित ईगल मीडियम (DMEM) (वेल्जीन, Gyeongsan-si, कोरिया) में 10% भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS) (थर्मो फिशर साइंटिफिक, वाल्थम, एमए, यूएसए) और 1% एंटीबायोटिक-एंटीमाइकोटिक (थर्मो फिशर, फिशर फिशर, यूएसए) के साथ पूरक किया गया था।

2.3. एमटीटी परख द्वारा सेल चयापचय गतिविधि का आकलन

मानव त्वचा कोशिकाओं के सेलुलर विकास, प्रसार और अस्तित्व पर एलएसीई की साइटोटॉक्सिसिटी का आकलन करने के लिए, एक एमटीटी (3-(45-डाइमिथाइलथियाज़ोल-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium ब्रोमाइड) परख पहले वर्णित के रूप में किया गया था[16,17]. संक्षेप में, एचएसीटी और डेट्रायट 551 कोशिकाओं को क्रमशः 5×10 * कोशिकाओं के घनत्व पर, 24 घंटे के लिए 96-अच्छी तरह से प्लेट में इनक्यूबेट किया गया था। आसुत जल का उपयोग नियंत्रण के रूप में किया जाता था। LACCE के उपचार के बाद, माध्यम को हटा दिया गया था, इसके बाद 4 μLof 5 mg / mL MTT (सिग्मा-एल्ड्रिच, सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) के अलावा और 4h के लिए इनक्यूबेट किया गया था। माध्यम को हटाने के बाद, डाइमिथाइलसल्फोक्साइड (डीएमएसओ) (सिग्मा) के 100 μL को जोड़ा गया और 10 मिनट के लिए भंग कर दिया गया।सिस्तानचे जीवन विस्तारतरंग दैर्ध्य अवशोषण को थर्मो साइंटिफिक मल्टीस्कन गो माइक्रोप्लेट स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (फिशर साइंटिफिक लिमिटेड, वांटा, फिनलैंड) का उपयोग करके 570 एनएम पर मापा गया था। निम्नलिखित सूत्र का उपयोग करके सेल व्यवहार्यता प्राप्त की गई थी। सेल व्यवहार्यता (%) = (उपचारित कोशिकाओं के लिए अवशोषण की मात्रा / नियंत्रण कोशिकाओं के अवशोषण की मात्रा) 100 ×।

2.4. DPPH परख द्वारा एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि का आकलन

LACCE की एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि को एक DPH (2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazine-hydrate) परख में मापा गया था जैसा कि पहले वर्णित है [18]. संक्षेप में, 0.1%, 0.5%, और 1% LACCE की अंतिम सांद्रता के 0.1 मिलीलीटर को इथेनॉल के 0.4 मिलीलीटर की उपस्थिति में डीपीपीएच (सिग्मा-एल्ड्रिच) के 0.1 मिलीलीटर में इलाज किया गया था। हमने सकारात्मक नियंत्रण के रूप में 0.001% एस्कॉर्बिक एसिड (विटामिन सी) (सिग्मा-एल्ड्रिच) का उपयोग किया। नमूनों को 10 के दशक के लिए अच्छी तरह से मिलाया गया था और 30 मिनट के लिए अंधेरे परिस्थितियों में कमरे के तापमान पर इनक्यूबेट किया गया था। तरंग दैर्ध्य absorbance एक थर्मो वैज्ञानिक Multiskan जाओ माइक्रोप्लेट Spectrophotometer (थर्मो फिशर वैज्ञानिक, Waltham, एमए, संयुक्त राज्य अमेरिका) का उपयोग कर 517 एनएम पर मापा गया था। रेडिकल स्कैवेंजिंग गतिविधि की गणना निम्नलिखित सूत्र का उपयोग करके की गई थी। स्कैवेंजिंग गतिविधि (%)=[1-(परीक्षण नमूने का अवशोषण/नियंत्रण का अवशोषण)]×100.

2.5. हाइड्रोजन पेरोक्साइड (H2O2) परख द्वारा एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि का आकलन

हाइड्रोजन पेरोक्साइड कोशिकाओं में ऑक्सीजन मुक्त कणों का उत्पादन करता है, जिसके परिणामस्वरूप कोशिका मृत्यु होती है। हमने LACCE-उपचारित नमूनों में हाइड्रोजन पेरोक्साइड के कारण कोशिका मृत्यु दर का परीक्षण किया। प्रति अच्छी तरह से 5×105 कोशिकाओं के घनत्व पर HaCaT कोशिकाओं को 24 घंटे के लिए 24-अच्छी तरह से प्लेट में इनक्यूबेट किया गया था। उसके बाद, 0.1%, 0.5%, और 1% LACCE की अंतिम सांद्रता को 8h के लिए H, O के 1 mM की उपस्थिति में इलाज किया गया था। एक सकारात्मक नियंत्रण के रूप में, 0.033% एनएसी (सिग्मा-एल्ड्रिच) का उपयोग किया गया था। एक एमटीटी परख का उपयोग एचओ 2 के कारण LACCE-उपचारित नमूनों की सेल उत्तरजीविता दर को मापने के लिए किया गया था। इसके अलावा, हमने मेथिलीन ब्लू स्टेनिंग (सिग्मा-एल्ड्रिच, सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) द्वारा सेल आकृति विज्ञान का अवलोकन किया।

2.6. रीयल टाइम रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन (आरटी)-पीसीआर

विरोधी शिकन, मॉइस्चराइजिंग, और विरोधी सूजन पर LACCE के प्रभाव की जांच करने के लिए, हमने निर्माता के निर्देशों के अनुसार QuantiTect प्राइमर Assays (Qiagen, Hilden, जर्मनी) का उपयोग करके मार्कर जीन को बढ़ाने वाले ज्ञात प्राइमरों के साथ वास्तविक समय आरटी-पीसीआर किया। प्रति कुएं 5×104 कोशिकाओं के घनत्व पर डेट्रायट 551 कोशिकाओं को 24 घंटे के लिए 96-वेल प्लेट में इनक्यूबेट किया गया था। उसके बाद, 0.1%, 0.5%, और 1% LACCE की अंतिम सांद्रता का इलाज 24 घंटे के लिए किया गया था cDNA को संबंधित डेट्रायट 551 कोशिकाओं से संश्लेषित किया गया था, जो qPCR (Toyobo, Osaka, Japan) के लिए एक SuperPrep सेल Lysis और RT Kit का उपयोग करके विभिन्न LACCE सांद्रता के साथ इलाज किया गया था, जिसमें निर्माता के निर्देशों के अनुसार लाइसिस अभिकर्मक और आरटी अभिकर्मक शामिल थे। LACCE उपचार पर विरोधी शिकन प्रभाव के लिए, जीन एन्कोडिंग मैट्रिक्स Metaloproteinase-2 (MMP-2) की अभिव्यक्ति को निर्माता के निर्देशों के आधार पर थंडरबर्ड SYBR qPCR मिक्स किट (Toyobo) का उपयोग करके वास्तविक समय आरटी-पीसीआर द्वारा परिमाणित किया गया था। LACCE उपचार के माध्यम से मॉइस्चराइजिंग के मूल्यांकन के लिए, जीन एन्कोडिंग Aquaporin 3 (AOP3) की अभिव्यक्ति की जांच वास्तविक समय आरटी-पीसीआर द्वारा की गई थी। विरोधी भड़काऊ परख के मामले में, अच्छी तरह से प्रति 5×104 कोशिकाओं के घनत्व पर HaCaT कोशिकाओं को 24h के लिए 96-अच्छी तरह से प्लेट में इनक्यूबेट किया गया था। माध्यम को हटाने के बाद, यूवीबी को HaCaT कोशिकाओं पर विकिरणित किया गया था। यूवीबी विकिरण के लिए, 5 एमजे / सेमी ' का उपयोग सीएल -1000 यूवी बॉक्स (एनालिस्टिक जेना एजी, जेना, जर्मनी) द्वारा किया गया था। उसके बाद, 0.1%, 0.5%, और 1% LACCE की अंतिम सांद्रता को 4h के लिए इलाज किया गया था। हमने एक सकारात्मक नियंत्रण के रूप में डेक्सामेथासोन (डेक्स) (सिग्मा-एल्ड्रिच) का उपयोग किया। LACCE उपचार के विरोधी भड़काऊ प्रभाव के लिए, COX2 और iNOS एन्कोडिंग जीन की अभिव्यक्ति, क्रमशः, वास्तविक समय आरटी-पीसीआर द्वारा परिमाणित किया गया था। व्यक्तिगत जीन की अभिव्यक्ति को GAPDH जीन अभिव्यक्ति के लिए सामान्यीकृत किया गया था। 2.7. Vioo में सौंदर्य प्रसाधन के लिए एक एजेंट के रूप में LACCE का नैदानिक मूल्यांकन

चेहरे के उठाने और पेरिऑर्बिटल शिकन, त्वचा लोच, त्वच, त्वचीय घनत्व, और त्वचा की मोटाई में सुधार पर LACCE की प्रभावकारिता के मूल्यांकन के लिए एक नैदानिक अध्ययन एलेएड कंपनी द्वारा मानक ऑपरेटिंग प्रक्रियाओं (Ver. 3.0) (Ellead, Seongnam, कोरिया) के आधार पर अनुमोदन के बाद आयोजित किया गया था कोरिया गुड क्लिनिकल प्रैक्टिसेस दिशानिर्देश (B1-2015-4-002) के अनुसार, खाद्य और औषधि सुरक्षा मंत्रालय (MFDS) और Ellead मानक ऑपरेटिंग प्रक्रियाओं (EL-P-70) द्वारा वर्णित एलेड आईआरबी के आधार पर।

विवो में एलएसीई के प्रभाव की जांच करने के लिए, हमने चार अलग-अलग कारकों के लिए एलएसीसीई का नैदानिक मूल्यांकन किया: चेहरे को उठाने और पेरिऑर्बिटल झुर्रियों, त्वचा लोच, त्वचीय घनत्व और त्वचा की मोटाई में सुधार। इसके लिए, 48.04 ± 4.28 वर्ष की औसत के साथ कुल 21 महिला स्वयंसेवकों को आगे अपने 40 के दशक में आयु वर्ग के 12 स्वयंसेवकों में विभाजित किया गया था और उनके 50 के दशक में नौ स्वयंसेवकों ने चार सप्ताह में नैदानिक मूल्यांकन में भाग लिया।

नैदानिक परीक्षण सभी स्वयंसेवकों के लिए तीन अलग-अलग समय बिंदुओं, बेसलाइन, 2 सप्ताह और 4 सप्ताह में आयोजित किया गया था। अध्ययन की शुरुआत से एक सप्ताह पहले से अंत तक, सभी स्वयंसेवकों ने त्वचा, सौंदर्य प्रसाधन और सैनिटरी सहायता में सुधार के लिए अतिरिक्त उपचार नहीं किया, जो परिणामों को प्रभावित कर सकता था। सफाई फोम का उपयोग करके स्वयंसेवकों के चेहरे धोने के बाद, स्वयंसेवक एक स्थिर तापमान (20-24 डिग्री सेल्सियस) और आर्द्रता (40% -60% सापेक्ष आर्द्रता) के साथ एक नियंत्रित कमरे में कम से कम 30 मिनट के लिए खड़े थे। हमने स्वयंसेवकों के चेहरों के बाईं या दाईं ओर बेतरतीब ढंग से माप का प्रदर्शन किया। हमारा परीक्षण एक डबल-ब्लाइंड परीक्षण था जिसमें न तो विषयों और न ही शोधकर्ताओं को पता था कि कौन सा उत्पाद एक परीक्षण नमूना था। घटी हुई और बढ़ी हुई दरों की गणना करने के लिए योगों को तालिका 1 में वर्णित किया गया था।

2.8. चेहरे के उठाने और Periorbital झुर्रियों में सुधार की माप

बेसलाइन पर, पेरिऑर्बिटल झुर्रियों, त्वचा की लोच, त्वच, गाल पर त्वचा की मोटाई, और मुंह के कोने पर चेहरे के उठाने को सभी स्वयंसेवकों के लिए मापा गया था। उसके बाद, दो अलग-अलग नमूने, LACCE, और प्लेसबो (नियंत्रण), दिन में दो बार (सुबह और रात) चेहरे के निर्दिष्ट क्षेत्र पर लागू किए गए थे। स्वयंसेवकों को दो अलग-अलग समूहों में विभाजित किया गया था, एक समूह I (LACCE को बाएं चेहरे के क्षेत्र में लागू किया गया था जबकि प्लेसबो को दाएं चेहरे के क्षेत्र में लागू किया गया था) और समूह II (प्लेसबो को बाएं चेहरे के क्षेत्र में लागू किया गया था जबकि एलएसीसीई को दाएं चेहरे के क्षेत्र में लागू किया गया था)। उपचार के दो और चार सप्ताह बाद, प्लेसबो की तुलना में एलएसीसीई के प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए एक ही माप आयोजित किए गए थे।

पेरिऑर्बिटल झुर्रियों का विश्लेषण ऑप्टिकल 3 डी (आयाम) त्वचा माप प्रणाली PRIMOS उच्च संकल्प (कैनफील्ड वैज्ञानिक, पारसीप्पनी, एनजे, यूएसए) का उपयोग करके किया गया था, जो त्वचा के माइक्रोस्ट्रक्चर और झुर्रियों की जांच के लिए आदर्श है। दो अलग-अलग खुरदरापन पैरामीटर, रा (औसत खुरदरापन), जो खुरदरापन प्रोफ़ाइल की प्रोफ़ाइल ऊंचाइयों के पूर्ण मूल्यों का औसत है, और आरजी (रूट मतलब वर्ग खुरदरापन), जो खुरदरापन प्रोफ़ाइल की प्रोफ़ाइल ऊंचाइयों का मूल माध्य वर्ग औसत है, को मापा गया था।

यह लेख जीन 2020, 11, 230 से निकाला गया है; doi:10.3390/genes11020230 www.mdpi.com/journal/genes