चयनित थाई पौधों की एंटीऑक्सीडेंट और त्वचा-विरोधी उम्र बढ़ने की क्षमता: इन विट्रो मूल्यांकन और सिलिको लक्ष्य भविष्यवाणी भाग 2 में

Jul 06, 2023

3. चर्चा

त्वचा की उम्र बढ़ना सभी मनुष्यों में स्वाभाविक रूप से होने वाली प्रक्रिया है। हालाँकि, कई जीवनशैली और पर्यावरणीय कारक भी इस प्रक्रिया को तेज कर सकते हैं जिससे त्वचा समय से पहले बूढ़ी हो सकती है [19]। आरओएस त्वचा की उम्र बढ़ने की प्रक्रिया में एक महत्वपूर्ण रोगजनक कारक के रूप में जाना जाता है। आरओएस का संचय इलास्टेज और टायरोसिनेस एंजाइम दोनों की अभिव्यक्ति को बढ़ा सकता है, जो बाद में झुर्रियों का निर्माण, लोच की कमी और हाइपरपिग्मेंटेशन की ओर ले जाता है [20-22]। ये सभी त्वचा की उम्र बढ़ने की सामान्य विशेषताएं हैं [4]। यहां, हमारे अध्ययन ने 16 थाई पौधों की प्रजातियों के पौधों के अर्क के एंटीऑक्सिडेंट, एंटी-इलास्टेज और एंटी-टायरोसिनेस गुणों की जांच की और त्वचा की उम्र बढ़ने के खिलाफ उपन्यास उपचार के संभावित विकास के लिए आशाजनक प्राकृतिक यौगिकों का खुलासा किया।

सिस्टैंच का ग्लाइकोसाइड हृदय और यकृत के ऊतकों में एसओडी की गतिविधि को भी बढ़ा सकता है, और प्रत्येक ऊतक में लिपोफसिन और एमडीए की सामग्री को काफी कम कर सकता है, विभिन्न प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन रेडिकल्स (ओएच-, एच₂ओ₂, आदि) को प्रभावी ढंग से हटा सकता है और डीएनए क्षति से बचा सकता है। ओएच-रेडिकल्स द्वारा। सिस्टैंच फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स में मुक्त कणों की एक मजबूत सफाई क्षमता होती है, विटामिन सी की तुलना में उच्च कम करने की क्षमता होती है, शुक्राणु निलंबन में एसओडी की गतिविधि में सुधार होता है, एमडीए की सामग्री कम होती है, और शुक्राणु झिल्ली समारोह पर एक निश्चित सुरक्षात्मक प्रभाव पड़ता है। सिस्टैंच पॉलीसेकेराइड डी-गैलेक्टोज के कारण प्रयोगात्मक रूप से वृद्ध चूहों के एरिथ्रोसाइट्स और फेफड़ों के ऊतकों में एसओडी और जीएसएच-पीएक्स की गतिविधि को बढ़ा सकते हैं, साथ ही फेफड़ों और प्लाज्मा में एमडीए और कोलेजन की सामग्री को कम कर सकते हैं और इलास्टिन की सामग्री को बढ़ा सकते हैं। डीपीपीएच पर एक अच्छा सफाई प्रभाव, वृद्ध चूहों में हाइपोक्सिया का समय बढ़ाना, सीरम में एसओडी की गतिविधि में सुधार करना, और प्रयोगात्मक रूप से वृद्ध चूहों में फेफड़ों के शारीरिक अध: पतन में देरी करना, सेलुलर रूपात्मक अध: पतन के साथ, प्रयोगों से पता चला है कि सिस्टैंच में अच्छी एंटीऑक्सीडेंट क्षमता है और त्वचा की उम्र बढ़ने वाली बीमारियों को रोकने और उनका इलाज करने के लिए एक दवा बनने की क्षमता रखती है। साथ ही, सिस्टैंच में इचिनाकोसाइड में डीपीपीएच मुक्त कणों को साफ़ करने की एक महत्वपूर्ण क्षमता है और प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों को साफ़ कर सकता है, मुक्त कट्टरपंथी प्रेरित कोलेजन गिरावट को रोक सकता है, और थाइमिन मुक्त कट्टरपंथी आयनों की क्षति पर भी अच्छा मरम्मत प्रभाव पड़ता है।

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इलास्टेज एक प्रोटीज एंजाइम है जो मुख्य रूप से इलास्टिन के क्षरण के लिए जिम्मेदार है, जो ईसीएम में पाया जाने वाला एक महत्वपूर्ण प्रोटीन है। इलास्टिन अपने इलास्टिक रीकॉइल गुणों के कारण त्वचा को लचीलापन देने के लिए महत्वपूर्ण है [13]। इसलिए, इलास्टेज गतिविधि का निषेध त्वचा की लोच और झुर्रियों के नुकसान को रोकने में मदद कर सकता है [23]। हमारे परिणाम में पाया गया कि ए. ऑक्सीडेंटेल सबसे शक्तिशाली इलास्टेज अवरोधक था, इसके बाद आईसी50 मूल्यों के रैंक क्रम में जी. ज़ेलेनिकम और एस. अलाटा थे। इसके अलावा, डॉकिंग परिणामों से पता चला कि इन तीन पौधों से प्राप्त पांच यौगिकों में ईजीसीजी (सकारात्मक नियंत्रण) और एफआरडब्ल्यू (मूल अवरोधक) की तुलना में कम बाध्यकारी ऊर्जा है, जिसमें कम बाध्यकारी ऊर्जा प्रदर्शित करने वाले यौगिकों को बेहतर निषेध माना जाता है (तालिका एस 4) [ 24]. वे यौगिक फ्लेवोनोइड हैं, जिनमें प्रोएन्थोसाइनिडिन [25] का टेट्रामर, एमेंटोफ्लेवोन [25], रुटिन [26,27], ए. ऑक्सीडेंटेल से एगाथिसफ्लेवोन [26] और एस. अलाटा से काएम्फेरोल 3-ओ-जेंटियोबायोसाइड शामिल हैं। [28] (तालिका एस3)। परिणामों से पता चला कि सभी पांच यौगिक एंटी-इलास्टेज गतिविधि के लिए जिम्मेदार हैं और साथ ही इन्हें एंटी-स्किन एजिंग के विकास के लिए आशाजनक उम्मीदवार माना जा सकता है। हालाँकि, हमने पाया कि जी. ज़ेलेनिकम के किसी भी यौगिक ने नियंत्रण लिगेंड की तुलना में मजबूत बंधन संबंध नहीं दिखाया, हालांकि इसके अर्क ने इन विट्रो परख द्वारा दूसरी सबसे अधिक गतिविधि दिखाई। यह प्रत्येक फाइटोकेमिकल घटक के व्यक्तिगत प्रभाव के बजाय मिश्रण में यौगिकों के सहक्रियात्मक प्रभाव के कारण हो सकता है।

इलास्टेज के अलावा, त्वचा की उम्र बढ़ने के उपचार के लिए मेलेनिन को एक और महत्वपूर्ण लक्ष्य माना जाता है। मेलानिन त्वचा, बाल और आंखों के रंग का एक प्रमुख घटक है जो मेलानोसाइट के भीतर मेलानोजेनेसिस द्वारा संश्लेषित होता है। हालांकि, मेलेनिन के अधिक उत्पादन से त्वचा संबंधी विकार हो सकते हैं, जिनमें झाइयां, मेलास्मा, उम्र के धब्बे और हाइपरपिग्मेंटेशन शामिल हैं, जिससे समय से पहले बुढ़ापा दिखने लगता है [12]। मेलानोजेनेसिस में, टायरोसिनेस दर-सीमित चरण में महत्वपूर्ण एंजाइम है। इसलिए, टायरोसिनेस गतिविधि के डाउनरेगुलेशन से मेलेनिन उत्पादन कम हो सकता है [29]। हमारे परिणामों से पता चला कि IC50 मूल्यों के अनुसार, जी. ज़ेलेनिकम सबसे शक्तिशाली टायरोसिनेस अवरोधक था, इसके बाद ए. कैटेचू और ए. ऑक्सीडेंटेल थे। आश्चर्यजनक रूप से, इन तीन पौधों में अधिकांश यौगिकों (48 यौगिकों में से 47) ने केए (सकारात्मक नियंत्रण) और ट्रोपोलोन (मूल अवरोधक) (तालिका एस 5) की तुलना में टायरोसिनेस के खिलाफ कम बाध्यकारी ऊर्जा दिखाई। 47 यौगिकों में से 16 जी. ज़ेलेनिकम से प्राप्त हुए थे, 12 ए. कैटेचू से प्राप्त हुए थे, और 29 ए. ऑक्सीडेंटेल से प्राप्त हुए थे, जिनमें से 10 एक से अधिक पौधों में पाए जा सकते हैं (तालिका एस3)। हालांकि, इलास्टेज के साथ यौगिक के बंधन के विपरीत, टायरोसिनेस के खिलाफ पहचाने गए संभावित यौगिक विभिन्न प्रकार के फाइटोकेमिकल वर्गों से हैं। टायरोसिनेस के प्रति बाध्यकारी ऊर्जाओं की श्रेणी के संबंध में, जिन यौगिकों को सर्वश्रेष्ठ पांच अवरोधक माना जाता है वे हैं ओ-कौमरिक एसिड [30] (फेनोलिक), प्रोएंथोसायनिडिन का एक टेट्रामर [25] (फ्लेवोनॉइड), कैफिक एसिड [30] (फेनोलिक), फेरुलिक एसिड [30] (फेनोलिक), और एरेका टैनिन ए1 [31] (टैनिन), स्कोर के बढ़ते क्रम में (तालिका एस5)। इस अध्ययन में इन विट्रो स्क्रीनिंग और डॉकिंग विश्लेषण से प्राप्त परिणामों ने चार थाई औषधीय पौधों के त्वचा-विरोधी गुणों की पुष्टि की है और उनके संभावित व्युत्पन्न यौगिकों का सुझाव दिया है जो देखी गई गतिविधियों के लिए जिम्मेदार हो सकते हैं। अंशीकरण पर आगे के अध्ययन, साथ ही इन आशाजनक पौधों के अर्क में बायोएक्टिव यौगिकों की पहचान और अलगाव, हमारे प्रस्तावित अणुओं की उपस्थिति को साबित करने के लिए गंभीर रूप से आवश्यक हैं जिन्हें बाद में उम्र बढ़ने वाली त्वचा के उपचार के लिए विकसित किया जा सकता है [14]।

ए. कैटेचू, ए. ऑक्सीडेंटेल, जी. ज़ेलेनिकम, और एस. अलाटा पारंपरिक चिकित्सा में उपयोग किए जाने वाले पौधे हैं और थाईलैंड सहित दक्षिण पूर्व एशिया के उष्णकटिबंधीय क्षेत्र में पाए जाते हैं [32-36]। विशेष रूप से, इन पौधों को कई एंटीऑक्सीडेंट-संबंधित गतिविधियों के लिए प्रदर्शित किया गया था। कत्था फल पान के पत्तों के साथ चबाने योग्य एक लोकप्रिय वस्तु है, जो नशीला और थोड़ा नशीला होता है [36]। इसका उपयोग जले हुए घावों और त्वचा के अल्सर के इलाज के लिए किया जाता है और एक कसैले के रूप में कार्य करता है [35,37]। यह चूहों में ऑक्सीडेटिव तनाव-प्रेरित यकृत की चोट के खिलाफ शक्तिशाली एंटीऑक्सिडेंट और विरोधी भड़काऊ प्रभाव के लिए रिपोर्ट किया गया है [38]। दक्षिणी थाईलैंड से संबंधित ए. ऑक्सीडेंटेल और जी. ज़ेलेनिकम का उपयोग भोजन और स्थानीय औषधीय पौधे के रूप में किया जाता है [32,33]। ए. ऑक्सीडेंटेल की पत्तियों का उपयोग त्वचा पर चकत्ते, खुजली, अल्सर और बुखार के इलाज के लिए किया जाता है, जबकि जी. ज़ेलेनिकम की पत्तियों का उपयोग संधिशोथ, इन्फ्लूएंजा, पेचिश और अपच के इलाज के लिए किया जाता है [32,33,39]। ए. ऑक्सीडेंटेल और जी. ज़ेलेनिकम की पत्तियों के अर्क ने ग्लूटामेट और एच2ओ2-प्रेरित ऑक्सीडेटिव क्षति [32,40] के खिलाफ न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव प्रदर्शित किया। इसके अलावा, दोनों पौधों की पत्तियों से कच्चे अर्क ने नेमाटोड कैनोर्हाडाइटिस एलिगेंस [33,41,42] में एंटीऑक्सीडेंट तनाव और एंटी-एजिंग गुणों को बढ़ाया। एस. अलाटा की पत्तियों का उपयोग त्वचा पर चकत्ते, माइकोसिस और जिल्द की सूजन के इलाज के लिए किया जाता है [34]। इस पौधे की पत्ती का अर्क एंजाइमैटिक और नॉनएंजाइमेटिक दोनों तरह के एंटीऑक्सीडेंट सिस्टम को बढ़ाने में सक्षम था और चूहे के मॉडल में मधुमेह के दौरान ऑक्सीडेटिव तनाव के कारण होने वाले नुकसान से लीवर और गुर्दे के ऊतकों को बचाता था [43]।

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पिछली रिपोर्टों के साथ समझौते में, हमारे निष्कर्षों से पता चलता है कि ए. कैटेचू, ए. ऑक्सीडेंटेल, जी. ज़ेलेनिकम, और एस. अलाटा, त्वचा की उम्र बढ़ने से संबंधित एंजाइमों की गतिविधियों के अलावा, एंटीऑक्सीडेंट क्षमता प्रदर्शित करते हैं। हमने पाया कि ये पौधे डीपीपीएच और एबीटीएस रेडिकल्स के प्रति उच्च एंटीऑक्सीडेंट क्षमता वाले कुल फेनोलिक्स और फ्लेवोनोइड से समृद्ध हैं, एस अलाटा को छोड़कर, जो मात्रा और गतिविधियों दोनों में केवल मध्यम स्तर दिखाता है। फेनोलिक्स और फ्लेवोनोइड्स पौधों के द्वितीयक मेटाबोलाइट्स के दो प्रसिद्ध वर्ग हैं जो एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि के लिए प्रमुख रूप से जिम्मेदार हैं [44,45]। यह हमारे परिणामों के अनुरूप था कि कुल फेनोलिक और फ्लेवोनोइड सामग्री ने मुक्त कट्टरपंथी सफाई गतिविधियों (चित्रा एस 1) के साथ एक महत्वपूर्ण सकारात्मक सहसंबंध प्रदर्शित किया। दिलचस्प बात यह है कि सहसंबंध विश्लेषण से यह भी पता चला है कि इस अध्ययन किए गए पौधे के अर्क में कुल फेनोलिक और फ्लेवोनोइड यौगिकों की सामग्री इलास्टेज और टायरोसिनेस निषेध दोनों के साथ सकारात्मक रूप से सहसंबद्ध थी। हालाँकि, सहसंबंध शक्ति फ्लेवोनोइड की तुलना में फेनोलिक्स के साथ अधिक पाई गई। मुक्त कण सफाई गतिविधियों को अर्क की एंजाइम-निरोधक गतिविधियों से उच्च सहसंबंध दिखाया गया है। इन परिणामों ने सुझाव दिया कि उच्च फेनोलिक सामग्री और एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि से इलास्टेज और टायरोसिनेस एंजाइमों का मजबूत निषेध हो सकता है। हालाँकि, प्रोटीन-पॉलीफेनोल इंटरैक्शन की संभावना भी चिंता का विषय होनी चाहिए। कुछ पॉलीफेनोल्स प्रोलाइन-समृद्ध प्रोटीन के साथ जुड़ने की अपनी क्षमता के माध्यम से सीधे एंजाइम अवक्षेपण का कारण बन सकते हैं, जिसके परिणामस्वरूप एंजाइम के साथ हाइड्रोजन-बॉन्ड का निर्माण होता है और इस तरह गैर-चयनात्मक निषेध होता है [46]।

4. सामग्री और विधियाँ

4.1. रसायन और अभिकर्मक

फोलिन-सियोकैल्ट्यू का फिनोल अभिकर्मक, एल्युमीनियम क्लोराइड (AlCl3), डाइमिथाइल सल्फ़ोक्साइड (DMSO), सोडियम एसीटेट (NaOAc), क्वेरसेटिन, 2, 2-डिफेनिल-1-पिक्रिलहाइड्राजाइल (DPPH), 2,{5} } एज़िनोबिस-(3-एथिलबेनज़थियाज़ोलिन-6-सल्फोनिक एसिड) (एबीटीएस), एल-एस्कॉर्बिक एसिड, पोटेशियम परसल्फेट (K2S2O8), पोर्सिन अग्न्याशय से इलास्टेज, एपिगैलोकैटेचिन गैलेट (ईजीसीजी), एनसुसिनिल-अला-अला- अला-पी-नाइट्रोएनिलाइड (एसएएनए), मशरूम से टायरोसिनेस, कोजिक एसिड (केए), और 3, 4- डाइहाइड्रॉक्सी-एल-फेनिलएलनिन (एल-डीओपीए) सिग्मा-एल्ड्रिच (सेंट लुइस, एमओ) से खरीदे गए थे। यूएसए)। सोडियम कार्बोनेट (Na2CO3) मर्क (डार्मस्टेड, जर्मनी) से खरीदा गया था। गैलिक एसिड टीसीआई अमेरिका (पोर्टलैंड, ओआर, यूएसए) से खरीदा गया था। डिपोटेशियम फॉस्फेट (K2HPO4) और मोनोबैसिक पोटेशियम फॉस्फेट (KH2PO4) HiMedia (मुंबई, भारत) से खरीदे गए थे। ट्रिस बेस विवांटिस टेक्नोलॉजीज (शाह आलम, मलेशिया) से खरीदा गया था। इथेनॉल और मेथनॉल आरसीआई लैबस्कैन (बैंकॉक, थाईलैंड) से खरीदे गए थे। सभी रसायन और अभिकर्मक विश्लेषणात्मक ग्रेड थे।

4.2. पौधों की सामग्री और निष्कर्षण

इस अध्ययन में पौधों को स्थानीय रूप से बगीचों से एकत्र किया गया था या उपयुक्त होने पर स्थानीय बाजारों से खरीदा गया था। तालिका 1 प्रत्येक पौधे का वैज्ञानिक नाम, प्रयुक्त भाग और स्रोत प्रदान करती है। इन पौधों को वानस्पतिक रूप से प्रमाणित किया गया था, और उनके वाउचर नमूने कासिन सुवाताबंधु, वनस्पति विज्ञान विभाग, विज्ञान संकाय, चुलालोंगकोर्न विश्वविद्यालय, बैंकॉक, थाईलैंड के हर्बेरियम में जमा किए गए थे, या किसी वनस्पतिशास्त्री द्वारा पहचाने गए थे। पौधों की सामग्री को धोया गया, 65 डिग्री सेल्सियस पर सुखाया गया और एक यांत्रिक ग्राइंडर में बारीक पीस लिया गया। सूखे पौधे (40 ग्राम) का निष्कर्षण 400 एमएल इथेनॉल या मेथनॉल का उपयोग करके सॉक्सलेट निष्कर्षण या मैक्रेशन विधि द्वारा किया गया था। अर्क को फ़िल्टर किया गया और वैक्यूम के तहत सूखने तक वाष्पित किया गया। फिर, सूखे अवशेषों को 100 मिलीग्राम/एमएल स्टॉक समाधान के रूप में डीएमएसओ में भंग कर दिया गया और आगे के अध्ययन के लिए -20 ◦C पर संग्रहीत किया गया।

4.3. कुल फेनोलिक सामग्री का निर्धारण

कुल फेनोलिक सामग्री का प्रदर्शन फोलिन-सियोकाल्टु विधि [47] का उपयोग करके किया गया था। संक्षेप में, विआयनीकृत पानी में 1 मिलीग्राम/एमएल पर 50 μL अर्क को 10 प्रतिशत (w/v) फोलिन-सियोकाल्टेउ के फिनोल अभिकर्मक के 50 μL के साथ एक {5}}वेल प्लेट में मिलाया गया और कमरे के तापमान पर अंधेरे में इनक्यूबेट किया गया। आरटी) 20 मिनट के लिए। ऊष्मायन के बाद, 7.5 प्रतिशत (w/v) Na2CO3 का 50 μL मिश्रण में जोड़ा गया और अगले 20 मिनट के लिए ऊष्मायन किया गया। अवशोषण को 760 एनएम पर माइक्रोप्लेट रीडर से मापा गया था। कुल फेनोलिक सामग्री की गणना 1.56 से 100 माइक्रोग्राम/एमएल तक गैलिक एसिड का उपयोग करके एक मानक अंशांकन वक्र से की गई थी, और परिणाम प्रति ग्राम शुष्क वजन निकालने के मिलीग्राम गैलिक एसिड समकक्ष (जीएई) के रूप में दिखाए गए हैं।

4.4. कुल फ्लेवोनोइड सामग्री का निर्धारण

कुल फ्लेवोनोइड सामग्री एल्यूमीनियम क्लोराइड (AlCl3) [47] का उपयोग करके प्रदर्शित की गई थी। संक्षेप में, विआयनीकृत पानी में 1 मिलीग्राम/एमएल पर 50 μL अर्क को 95 प्रतिशत इथेनॉल के साथ 200 μL तक बनाया गया था, और फिर 10 प्रतिशत AlCl3 के 10 μL और 1 M NaOAc के 10 μL को एक 96- कुएं में जोड़ा गया था। थाली। प्लेट को 40 मिनट के लिए आरटी पर अंधेरे में इनक्यूबेट किया गया था, और अवशोषण को 415 एनएम पर माइक्रोप्लेट रीडर के साथ मापा गया था। कुल फ्लेवोनोइड सामग्री की गणना 1.56 से 100 μg/mL तक क्वेरसेटिन का उपयोग करके एक मानक अंशांकन वक्र से की गई थी, और परिणाम प्रति ग्राम शुष्क वजन अर्क के मिलीग्राम क्वेरसेटिन समकक्ष (क्यूई) के रूप में दिखाए गए थे।

4.5. डीपीपीएच रेडिकल स्केवेंजिंग गतिविधि का निर्धारण

डीपीपीएच रेडिकल स्केवेंजिंग गतिविधि परख पहले वर्णित अनुसार की गई थी [47]। DPPH• कार्यशील अभिकर्मक DPPH द्वारा पूर्ण इथेनॉल में घोलकर तैयार किया गया था। संक्षेप में, 180 μL DPPH• कार्यशील घोल को 20 μL अर्क के साथ एक अच्छी प्लेट में मिलाया गया था और 15 मिनट के लिए RT पर अंधेरे में रखा गया था, और अवशोषण को 517 एनएम पर एक माइक्रोप्लेट रीडर के साथ मापा गया था। 1.56 से 100 µg/mL तक एस्कॉर्बिक एसिड मानक के रूप में परोसा जाता है। कट्टरपंथी सफाई गतिविधि की गणना निम्नलिखित समीकरण का उपयोग करके मुक्त कणों के प्रतिशत निषेध के रूप में की गई थी:

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प्रत्येक पौधे के अर्क की डीपीपीएच सफाई गतिविधि के प्रतिशत की तुलना एस्कॉर्बिक एसिड से की गई थी। परिणाम प्रति ग्राम शुष्क वजन अर्क में मिलीग्राम विटामिन सी समकक्ष एंटीऑक्सीडेंट क्षमता (वीसीईएसी) के रूप में व्यक्त किए गए थे। IC50 (आधा-अधिकतम निरोधात्मक एकाग्रता) प्रत्येक अर्क की एकाग्रता के विरुद्ध प्रतिशत निषेध के ग्राफ से निर्धारित किया गया था।

4.6. एबीटीएस रेडिकल स्केवेंजिंग गतिविधि का निर्धारण

एबीटीएस रेडिकल स्केवेंजिंग गतिविधि परख पहले वर्णित अनुसार की गई थी [47]। ABTS• प्लस कार्यशील अभिकर्मक 1:1 के अनुपात में 7 mM ABTS• और 2.45 mM K2S2O8 को मिलाकर तैयार किया गया था, और मिश्रण को RT पर अंधेरे में 16-18 घंटे तक रहना था। अवशोषण क्षमता को 734 एनएम पर 0.7 और 0.8 के बीच पहुंचाने के लिए एबीटीएस• प्लस कार्यशील घोल को पूर्ण इथेनॉल के साथ पतला किया गया था। संक्षेप में, 180 μL ABTS• प्लस वर्किंग सॉल्यूशन को 20 μL अर्क के साथ एक अच्छी प्लेट में मिलाया गया था और 30 मिनट के लिए आरटी पर अंधेरे में इनक्यूबेट किया गया था, और अवशोषण को 734 एनएम पर एक माइक्रोप्लेट रीडर के साथ मापा गया था। 1.56 से 100 µg/mL तक एस्कॉर्बिक एसिड मानक के रूप में परोसा जाता है। कट्टरपंथी सफाई गतिविधि की गणना समीकरण (1) का उपयोग करके मुक्त कणों के प्रतिशत निषेध के रूप में की गई थी।

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प्रत्येक पौधे के अर्क की एबीटीएस सफाई गतिविधि के प्रतिशत की तुलना एस्कॉर्बिक एसिड से की गई थी। परिणाम प्रति ग्राम शुष्क भार अर्क में मिलीग्राम विटामिन सी समतुल्य एंटीऑक्सीडेंट क्षमता (वीसीईएसी) के रूप में व्यक्त किए गए हैं। IC50 को प्रत्येक अर्क की सांद्रता के विरुद्ध प्रतिशत निषेध के ग्राफ से निर्धारित किया गया था।

4.7. एंटी-इलास्टेज गतिविधि का निर्धारण

संशोधित प्रोटोकॉल [13,48,49] का उपयोग करके इलास्टेज निषेध परख द्वारा एंटी-इलास्टेज गतिविधि का मूल्यांकन किया गया था। संक्षेप में, अर्क के 20 μL, 0.4 यू/एमएल अग्न्याशय पोर्सिन इलास्टेज (पीपीई) का 1{{9%) μL, और पीएच 8.0 पर 0.1 एम ट्रिस-एचसीएल बफर के 140 μL एक अच्छी तरह से प्लेट में जोड़ा गया और 20 मिनट के लिए आरटी पर प्री-इन्क्यूबेट किया गया। ऊष्मायन के बाद, 2 मिमी साना के 30 μL को प्रतिक्रिया मिश्रण में जोड़ा गया और आरटी पर 30 मिनट के लिए और ऊष्मायन किया गया। अवशोषण को 734 एनएम पर माइक्रोप्लेट रीडर से मापा गया था। ईजीसीजी का उपयोग निषेध के सकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया गया था। नकारात्मक नियंत्रण में अर्क के बजाय 100 प्रतिशत डीएमएसओ शामिल था। इलास्टेज गतिविधि के प्रतिशत निषेध की गणना समीकरण (1) का उपयोग करके की गई थी। IC50 को प्रत्येक अर्क की सांद्रता के विरुद्ध प्रतिशत इलास्टेज निषेध के ग्राफ से निर्धारित किया गया था।

4.8. एंटी-टायरोसिनेस गतिविधि का निर्धारण

एंटी-टायरोसिनेस गतिविधि कुछ संशोधनों के साथ डोपाक्रोम विधि का उपयोग करके की गई थी [8]। संक्षेप में, 2 0 μL अर्क, 20 μL 200 U/mL मशरूम टायरोसिनेस, और 140 μL 0.1 M फॉस्फेट बफर pH 6.8 पर अच्छी तरह से प्लेटों में जोड़ा गया और आरटी में प्री-इन्क्यूबेट किया गया। बीस मिनट। ऊष्मायन के बाद, 2.5 एमएम एल-डीओपीए का 40 μL प्रतिक्रिया मिश्रण में जोड़ा गया और आरटी पर 20 मिनट के लिए और ऊष्मायन किया गया। अवशोषण को 492 एनएम पर एक माइक्रोप्लेट रीडर के साथ पढ़ा गया था। केए का उपयोग निषेध के सकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया जाता था। नकारात्मक नियंत्रण में अर्क के बजाय 100 प्रतिशत डीएमएसओ शामिल था। टायरोसिनेस गतिविधि के प्रतिशत निषेध की गणना समीकरण (1) का उपयोग करके की गई थी। IC50 को प्रत्येक अर्क की सांद्रता के विरुद्ध प्रतिशत टायरोसिनेस निषेध के ग्राफ से निर्धारित किया गया था।

4.9. आणविक डॉकिंग

4.9.1. लिगैंड तैयारी

इलास्टेज या टायरोसिनेस के खिलाफ मजबूत अवरोध वाले तीन सबसे प्रभावी पौधों से फाइटोकेमिकल यौगिकों की एक सूची प्रकाशित साहित्य [25-28,30-32,42,50-61] (तालिका एस3) से चुनी गई थी। यौगिकों की सभी रासायनिक संरचनाएं BIOVIA ड्रा 2019 (BIOVIA, सैन डिएगो, CA, यूएसए) का उपयोग करके IUPAC नाम से उत्पन्न की गईं। फिर, यौगिकों को ज्यामिति से साफ़ किया गया और डिस्कवरी स्टूडियो विज़ुअलाइज़र (बीआईओवीआईए, सैन डिएगो, सीए, यूएसए) का उपयोग करके फ़ाइल को पीडीबी प्रारूप में सहेजा गया। इन फ़ाइलों को AutoDockTools-1.5.6 सॉफ़्टवेयर (द स्क्रिप्स रिसर्च इंस्टीट्यूट, सैन डिएगो, सीए, यूएसए) का उपयोग करके पीडीबीक्यूटी प्रारूप में परिवर्तित किया गया था।

4.9.2. प्रोटीन की तैयारी

इलास्टेज (पीडीबी आईडी: 3एचजीपी) [62] और टायरोसिनेज (पीडीबी आईडी: 2वाई9एक्स) [63] की एक्स-रे क्रिस्टलोग्राफिक संरचनाएं आरसीएसबी प्रोटीन डेटा बैंक से प्राप्त की गईं। डॉकिंग अध्ययन से पहले, डिस्कवरी स्टूडियो विज़ुअलाइज़र का उपयोग करके, टायरोसिनेस की संरचनाओं में Cu2 प्लस को छोड़कर, पानी के अणुओं और मूल अवरोधक को प्रोटीन संरचना से हटा दिया गया था। ये प्रोटीन संरचनाएं AutoDockTools-1.5.6 सॉफ़्टवेयर में तैयार प्रोटीन सेटअप का उपयोग करके तैयार की गईं। सभी लापता हाइड्रोजन और कोल्मन चार्ज को प्रोटीन संरचना में जोड़ा गया और डॉकिंग अध्ययन के लिए पीडीबीक्यूटी प्रारूपित करने के लिए फ़ाइल में सहेजा गया।

4.9.3. आणविक डॉकिंग

AutoDockTools{{0}}.5.6 सॉफ़्टवेयर में डिफ़ॉल्ट प्रोटोकॉल का उपयोग करके आणविक डॉकिंग अध्ययन किया गया। ग्रिड साइटों को 0.375 Å के अंतर के साथ सेट किया गया था। एक्स-वाई-जेड आयाम इलास्टेज के लिए 40 × 40 × 40 अंक और टायरोसिनेज के लिए 60 × 60 × 60 अंक पर निर्धारित किए गए थे। एक्स, वाई और जेड केंद्रों का ग्रिड बॉक्स इलास्टेज के लिए 12.58, 9.36 और 2.251 था, और टायरोसिनेस के लिए −10.044, −28.706, और −43.443 था। डॉकिंग अध्ययन डिफ़ॉल्ट मापदंडों के साथ लैमार्कियन जेनेटिक एल्गोरिदम (जीए) का उपयोग करके किया गया था, और डॉकिंग परिणामों का विश्लेषण AutoDockTools.5.6 सॉफ़्टवेयर और डिस्कवरी स्टूडियो विज़ुअलाइज़र का उपयोग करके किया गया था।

4.10. सांख्यिकीय विश्लेषण

सभी प्रयोग कम से कम तीन प्रतियों में किए गए, और परिणाम माध्य ± मानक विचलन (एसडी) के रूप में दर्शाए गए। IC50 मानों का विश्लेषण सिग्माप्लॉट संस्करण 12.0 सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके किया गया। विभिन्न चरों के बीच सहसंबंध को पियर्सन के सहसंबंध गुणांक (आर) के रूप में व्यक्त किया गया था। सहसंबंध को ग्राफपैड प्रिज्म (ग्राफपैड सॉफ्टवेयर इंक, सैन डिएगो, सीए, यूएसए) का उपयोग करके निर्धारित किया गया था, और जब पी 0.05 (पी <0.05) से कम था तो परिणामों को सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण माना जाता था।

प्र. 5। निष्कर्ष

संक्षेप में, हमारे निष्कर्षों से चार थाई औषधीय पौधों का पता चला जिनमें त्वचा की उम्र बढ़ने से रोकने वाले एजेंटों के रूप में विकास के लिए आशाजनक यौगिक शामिल हैं। ए. ऑक्सीडेंटेल और जी. ज़ेलेनिकम की पत्ती के अर्क ने इलास्टेज और टायरोसिनेस दोनों एंजाइमों के खिलाफ मजबूत निरोधात्मक कार्रवाई का प्रदर्शन किया, जबकि एस. अलाटा पत्ती और ए. कैटेचू फल के अर्क ने क्रमशः केवल इलास्टेज या टायरोसिनेज के प्रति अपनी गतिविधि को अधिक मजबूती से प्रदर्शित किया। इन पौधों से प्राप्त कई यौगिकों की आणविक डॉकिंग अध्ययन के माध्यम से दोनों एंजाइमों से जुड़ने की उनकी क्षमता की भी पुष्टि की गई। इसके अलावा, जी. ज़ेलेनिकम पत्ती, ए. ऑक्सीडेंटेल पत्ती, और ए. कैटेचू फल में उच्च मात्रा में फेनोलिक्स और फ्लेवोनोइड के साथ मुक्त कणों के प्रति महत्वपूर्ण एंटीऑक्सीडेंट क्षमता होती है। एक साथ लेने पर, ए. कैटेचू फल, ए. ऑक्सीडेंटेल पत्ती, जी. ज़ेलेनिकम पत्ती, और एस. अलाटा पत्ती की पहचान एंटीऑक्सिडेंट, एंटी-इलास्टेज और एंटी-टायरोसिनेस के प्राकृतिक स्रोतों के रूप में की जाती है, जिन्हें उम्र बढ़ने के खिलाफ उपचार के लिए संभावित रूप से उपयोगी माना जाता है। त्वचा का.

लेखक का योगदान:संकल्पना, एपी; जांच और औपचारिक विश्लेषण, केसी, एससी (सावरिन चम्पोल्फेंट), पीआर, और सीएस; सत्यापन, पीआर और एपी; विज़ुअलाइज़ेशन, केसी और एससी (सावरिन चम्पोल्फेंट); लेखन- मूल ड्राफ्ट तैयारी, केसी, एससी (सावरिन चम्पोल्फेंट), पीआर, सीएस, और एपी; लेखन-समीक्षा और संपादन, केसी, एससी (सावरिन चुमपोलफैंट), पीआर, सीएस, एससी (सिरीपोर्न चुचावांकुल), टीटी, और एपी; पर्यवेक्षण, टीटी, और एपी; सॉफ्टवेयर, एससी (सिरीपोर्न चुचावांकुल) और टीटी; संसाधन, टीटी, और एपी; फंडिंग अधिग्रहण, एपी सभी लेखकों ने पांडुलिपि के प्रकाशित संस्करण को पढ़ लिया है और उससे सहमत हैं।

अनुदान: इस शोध को थाईलैंड साइंस रिसर्च एंड इनोवेशन फंड चुलालोंगकोर्न यूनिवर्सिटी (सीयू_एफआरबी65_hea (91)_198_53_01), और स्थायी सचिव के कार्यालय, मंत्रालय द्वारा आर्थिक रूप से समर्थित किया गया था। उच्च शिक्षा, विज्ञान, अनुसंधान और नवाचार (अनुदान संख्या आरजीएनएस 63- 003)। केसी चुलालोंगकोर्न यूनिवर्सिटी फंड (रैचैडाफिसेकसोमफोट एंडोमेंट फंड) की 90वीं वर्षगांठ के लिए भी धन्यवाद देना चाहता है।

डेटा उपलब्धता विवरण:लागू नहीं।

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स्वीकृतियाँ: लेखक पौधे का अर्क तैयार करने में उनकी तरह की मदद के लिए मनिवान सुवाट्रोनकोर्न, सोमचाई इस्सरावानिच और चतरावी डुआंगजान के आभारी हैं। हम पौधों की पहचान में सहायता के लिए निजसिरी रुआंग्रुंगसी और चानिडा पलानुवेज और पांडुलिपि के अंग्रेजी संपादन में उनकी मदद के लिए डिक्सन शीजा मलार के भी आभारी हैं। एपी नए फैकल्टी स्टाफ के विकास के लिए अनुदान, रैचडाफिसेकसोमफोट एंडोमेंट फंड, चुलालोंगकोर्न विश्वविद्यालय का आभारी है।

हितों का टकराव:ऑथर ने किसी हित संघर्ष की घोषणा नहीं की है।

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