Fengdan Peony Flavonoids के एंटीऑक्सीडेंट, व्हाइटनिंग और जीवाणुरोधी प्रभाव
Mar 23, 2022
संपर्क: ali.ma@wecistanche.com
जी लु†, ज़िकियांग हुआंगु†, युशेंग लियू, हुइमिन वांग, मिन किउ, यिंगहुई क्व और वेनपेंग युआन *
सार: flavonoidsमहत्वपूर्ण जैविक गतिविधियाँ हैं, जैसे कि विरोधी भड़काऊ, जीवाणुरोधी, एंटीऑक्सिडेंट और सफेदी, जो एक संभावित कार्यात्मक खाद्य कच्चा माल है। हालांकि, Fengdan peony की जैविक गतिविधिflavonoidविशेष रूप से स्पष्ट नहीं है। इसलिए, इस अध्ययन में, peonyflavonoidFengdan peony बीज भोजन से निकाला गया था, और peony की एंटीऑक्सीडेंट, जीवाणुरोधी और सफेद करने वाली गतिविधियाँflavonoidखोजबीन की गई। इष्टतम निष्कर्षण की स्थिति 90 प्रतिशत की मेथनॉल एकाग्रता, 1:35 ग्राम का ठोस-से-तरल अनुपात: एमएल, 55 C का तापमान और 80 मिनट का समय था; इन शर्तों के तहत, Fengdan peony की उपजflavonoid1.205 ± 0.019 प्रतिशत तक पहुंच सकता है (रूटिन के शुष्क द्रव्यमान का peony बीज भोजन के शुष्क द्रव्यमान का अनुपात)। Fengdan peony कुल की निकासीflavonoidsसे 1,1-डाइफिनाइल-2-पिक्रीलहाइड्राज़िल (DPPH) मुक्त मूलक, हाइड्रॉक्सिल रेडिकल और 2,2'-एज़िनो-बीआईएस (3-एथिलबेनज़ोथियाज़ोलिन-6-सल्फ़ोनिक एसिड) (ABTS) फ्री रेडिकल क्रमशः 75 प्रतिशत, 70 प्रतिशत और 97 प्रतिशत तक पहुंच सकता है। फेंगडान पेनीflavonoidग्राम पॉजिटिव बैक्टीरिया के विकास को रोक सकता है। Fengdan peony की न्यूनतम निरोधात्मक सांद्रता (MICs)flavonoidएस. ऑरियस, बी. एन्थ्रेसीस, बी. सबटिलिस और सी. परफ्रिंजेंस पर {{0}}.0293 मिलीग्राम/एमएल, 0.1172 मिलीग्राम/एमएल, 0.2344 मिलीग्राम/एमएल और 7.500 मिलीग्राम/ एमएल, क्रमशः। टायरोसिनेस पर फेंगडान पेनी फ्लेवोनोइड की अवरोध दर 8.53–81.08 प्रतिशत थी। इस अध्ययन ने तीव्रता से स्पष्ट किया है कि फेंगडान पेनी टोटल की एंटीऑक्सीडेंट, सफेदी और जीवाणुरोधी गतिविधिflavonoidsमहत्वपूर्ण थे। फेंगडान पेनी टोटलflavonoidsकार्यात्मक खाद्य सामग्री के रूप में उपयोग किए जाने की एक बड़ी संभावना है।
कीवर्ड:फेंगडान पेनीflavonoid; एंटीऑक्सिडेंट; सफेद; जीवाणुरोधी गतिविधि; क्रियाशील आहार
सिस्टैंच का मुख्य तत्व फ्लेवोनोइड्स एंटी-एजिंग है।
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1 परिचय
Peony is one of the economic and ornamental crops, which has been cultivated for more than 1600 years in China [1]. Oil peony refers to the variety of peony that can be used as a raw material for edible oil [2]. As one of the most commonly used oil peonies, Fengdan peony contains dark oval seeds, which has abundant unsaturated fatty acids (>90 प्रतिशत ) [3]। चीनी सरकार द्वारा Peony बीज के तेल को एक नए संसाधन भोजन के रूप में प्रमाणित किया गया है, क्योंकि इसमें 2011 में -लिनोलेनिक एसिड का उच्च अनुपात [4] है। इसके अलावा, 2011 में चीन के जनवादी गणराज्य के राष्ट्रीय स्वास्थ्य और परिवार नियोजन आयोग द्वारा मानव स्वास्थ्य को बढ़ाने के लिए चपरासी के बीज को कार्यात्मक भोजन के एक नए संसाधन के रूप में प्रमाणित किया गया है [5]। फेंगडान peony बीज भोजन peony बीज के तेल की तैयारी में सबसे महत्वपूर्ण उप-उत्पादों में से एक है, जो लगभग 60 प्रतिशत से 70 प्रतिशत Fengdan peony बीज के लिए जिम्मेदार है, और फ्लेवोनोइड्स, प्रोटीन, पॉलीसेकेराइड, पॉलीफेनोल्स, पेओनिफ्लोरिन और अन्य सक्रिय में समृद्ध है। सामग्री। हालांकि, बड़ी मात्रा में Fengdan peony बीज भोजन वर्तमान में केवल फ़ीड या अपशिष्ट के रूप में उपयोग किया जाता है [6], जिसके परिणामस्वरूप प्राकृतिक संसाधनों और पर्यावरण प्रदूषण की बर्बादी होती है [2]।
साहित्य के अनुसार, फ्लेवोनोइड्स में महत्वपूर्ण जैविक गतिविधियाँ होती हैं, जैसे कि विरोधी भड़काऊ, जीवाणुरोधी, एंटीऑक्सिडेंट और सफेद करने वाले प्रभाव [7–10], जिन्हें माना जाता हैसंभावित कार्यात्मक खाद्य कच्चे माल। उदाहरण के लिए, सोयाबीन आइसोफ्लेवोन अपने एंटीऑक्सीडेंट गुणों [11-13] के कारण कोशिकाओं को मुक्त कणों से होने वाले नुकसान से बचा सकता है। जिन्कगो बिलोबा अर्क में फ्लेवोनोइड में मजबूत एंटीऑक्सीडेंट गुण होते हैं और यह सीधे मुक्त कणों को रोक सकता है [14]। सफेद अमरूद का फ्लेवोनोइड अर्क एक प्राकृतिक जीवाणुरोधी एजेंट है, जो ई. कोलाई और एस. ऑरियस [15] के सूक्ष्म आकारिकी को बदल सकता है।
दुर्भाग्य से, एक संभावित कार्यात्मक खाद्य कच्चे माल के रूप में, Fengdan peony flavonoid न केवल औद्योगिक उत्पादन में शामिल है, बल्कि इसकी जैविक गतिविधि भी विशेष रूप से स्पष्ट नहीं है। इसलिए, जितना संभव हो सके खाद्य क्षेत्र में peony flavonoids के अनुप्रयोग मूल्य में सुधार करने और संसाधनों की बर्बादी को कम करने के लिए, peony flavonoid को Fengdan peony बीज भोजन से निकाला गया था, और Fengdan peony flavonoid की एंटीऑक्सिडेंट, सफेदी और जीवाणुरोधी गतिविधियां। अध्ययन किया गया। यह Fengdan peony से नए कार्यात्मक खाद्य कच्चे माल के विकास की नींव रखने की उम्मीद है।
2. परिणाम और चर्चा
2.1. कुल फ्लेवोनोइड्स उपज के लिए चार कारकों का प्रभाव
कुल फ्लेवोनोइड उपज के लिए मेथनॉल एकाग्रता का प्रभाव चित्र 1a में दिखाया गया था। पहले कुल फ्लेवोनोइड उपज में वृद्धि हुई, और फिर मेथनॉल सांद्रता में वृद्धि के साथ घट गई, और अधिकतम (1.016 प्रतिशत, रटिन के शुष्क द्रव्यमान का अनुपात चपरासी बीज भोजन के शुष्क द्रव्यमान का अनुपात) तक पहुंच गई, जब मेथनॉल एकाग्रता 90 थी। प्रतिशत।इसका कारण मेथनॉल की ध्रुवीयता और चपरासी के बीज भोजन [16] में कुल फ्लेवोनोइड्स की घुलनशीलता से संबंधित हो सकता है। इस प्रकार, इष्टतम मेथनॉल सांद्रता 90 प्रतिशत थी।
जैसा कि चित्र 1c में दिखाया गया है, कुल फ्लेवोनोइड्स की उपज पहले बढ़ाई गई और फिर तापमान में वृद्धि के साथ घट गई। 55 C पर कुल फ्लेवोनोइड्स की उपज अधिकतम मूल्य (1.141 प्रतिशत, रटिन के सूखे द्रव्यमान का peony बीज भोजन के सूखे द्रव्यमान का अनुपात) तक पहुंच गई। तापमान को उचित रूप से बढ़ाकर बीज भोजन में कुल फ्लेवोनोइड की विघटन दर को तेज किया गया था। हालांकि, उच्च तापमान [18] पर उजागर होने पर आंशिक कुल फ्लेवोनोइड विघटित हो गया था, जिससे कुल फ्लेवोनोइड की उपज में कमी आई है। इस प्रकार, 55 C सबसे अच्छा तापमान था।
कुल फ्लेवोनोइड्स उपज के लिए निष्कर्षण समय का प्रभाव चित्र 1d में दिखाया गया था। 0.5 घंटे से 1.5 घंटे में कुल फ्लेवोनोइड्स की उपज में तेजी से वृद्धि हुई। जब निष्कर्षण का समय 1.5 घंटे से अधिक था, तो कुल फ्लेवोनोइड्स की उपज अपरिवर्तित रही। इस घटना का कारण यह हो सकता है कि बीज भोजन में कुल फ्लेवोनोइड्स को निष्कर्षण समय के विस्तार के साथ 0 .5 घंटे से 1.5 घंटे तक लगातार भंग कर दिया गया था। इसके अलावा, 1.5 घंटे तक पहुंचने के साथ, सभी कुल फ्लेवोनोइड भंग हो सकते हैं। इसलिए, समय बढ़ाने से फ्लेवोनोइड्स की कुल उपज [4,19] पर थोड़ा प्रभाव पड़ा। इस प्रकार, सबसे अच्छा निष्कर्षण समय 1.5 घंटे था।
2.2. कुल Flavonoids उपज के लिए अनुकूलन
2.2.1. RSM का उपयोग करके मॉडल फिटिंग और डेटा विश्लेषण
Fengdan peony बीज भोजन की कुल फ्लेवोनोइड उपज के लिए विभिन्न कारकों के सापेक्ष महत्व का पता लगाने के लिए, RSM प्रयोग किया गया था। RSM का उपयोग कई चरों के सापेक्ष महत्व का आकलन करने और आदर्श प्रतिक्रियाओं के लिए सर्वोत्तम स्थितियों को खोजने के लिए बहु-कारक प्रयोगों के सांख्यिकीय डिजाइन और डेटा विश्लेषण में किया जाता है [20]। आरएसएम के साथ बॉक्स-बेहेनकेन डिज़ाइन रैखिक प्रतिगमन समीकरण को फिट कर सकता है, इसलिए प्रभावशाली कारकों के बीच कानून खोजने के लिए प्रयोग का अधिक सटीक विश्लेषण किया जा सकता है [21]।
तालिका S1 ने कुल फ्लेवोनोइड्स उपज और परीक्षण चर के बीच संबंध दिखाया। प्रयोगात्मक डेटा का विश्लेषण कई प्रतिगमन विश्लेषण द्वारा किया गया था। ठोस-से-तरल अनुपात (ए), निष्कर्षण तापमान (बी) और निष्कर्षण समय (सी) के लिए कुल फ्लेवोनोइड्स उपज (वाई) का द्विघात बहुपद प्रतिगमन समीकरण था: y=1.19 प्लस 0 .01A - {{10}}.02B - 0.003C प्लस 0.02AB - 0.02AC प्लस 0.01BC - 0.03A2 - 0.04B20.02C2।
द्विघात बहुपद मॉडल का एनोवा तालिका 1 में प्रदर्शित किया गया थामॉडल का F-मान 18.57 था, मॉडल का p मान 0 था।0004 (p <0.01), मॉडल की फिटिंग डिग्री 0.1202 थी, और निर्धारण गुणांक (आर2) 0.9598 था, जो दर्शाता है कि मॉडल का अत्यंत महत्वपूर्ण सांख्यिकीय महत्व था। प्राथमिक शब्द (बी) और द्वितीयक शब्द (ए2, बी2, सी2) का कुल फ्लेवोनोइड्स उपज (पी <0.01) पर="" अत्यंत="" महत्वपूर्ण="" प्रभाव="" पड़ा।="" a,="" ab="" और="" ac="" का="" फ्लेवोनोइड्स="" की="" कुल="" उपज="" पर="" महत्वपूर्ण="" प्रभाव="" पड़ा="" (p=""><0.05)। कुल="" फ्लेवोनोइड="" उपज="" (पी=""> 0.05) पर सी और बीसी का कोई महत्वपूर्ण प्रभाव नहीं था। तीन कारकों के एफ-मूल्य के अनुसार, कुल फ्लेवोनोइड उपज पर प्रभाव निष्कर्षण तापमान> ठोस-से-तरल अनुपात> निष्कर्षण समय था।
तालिका एक।द्विघात बहुपद मॉडल का एनोवा।
त्रि-आयामी (3D) प्रतिक्रिया सतह आरेख चित्र 2a,c,eमें दिखाए गए थे। इंटरैक्टिव कारकों के लिए 3डी ग्राफ़ का उच्चतम बिंदु सबसे अच्छी स्थिति थी। ए और बी (चित्रा 2 बी), ए और सी (चित्रा 2 डी) के बीच बातचीत के समोच्च ढलान तेज थे, जबकि ए और सी (चित्रा 2 एफ) के चिकनी थे। यह स्पष्ट करता है कि ए और बी, ए और सी के बीच की बातचीत का कुल फ्लेवोनोइड उपज पर बहुत प्रभाव था, जबकि बी और सी के बीच की बातचीत का कुल फ्लेवोनोइड उपज पर कोई महत्वपूर्ण प्रभाव नहीं था। आरएसएम प्रयोग और प्रतिगमन विश्लेषण के बीच निरंतरता ने यह साबित कर दिया कि स्थापित मॉडल अधिक सटीक था।
चित्र 2।AB के लिए 3D सतह के आरेख (a), एसी (c) और ईसा पूर्व (e) कुल फ्लेवोनोइड उपज के लिए।
2.2.2. इष्टतम स्थितियों का सत्यापन
मॉडल द्वारा दिए गए सैद्धांतिक इष्टतम पैरामीटर 1: 36.11 का ठोस-से-तरल अनुपात, 53.52 C का निष्कर्षण तापमान, 82.65 मिनट का निष्कर्षण समय और कुल फ्लेवोनोइड उपज का सैद्धांतिक मूल्य 1.195 प्रतिशत था। वास्तविक संचालन को ध्यान में रखते हुए, सैद्धांतिक मापदंडों को 1:35 के ठोस-से-तरल अनुपात, 55 C के निष्कर्षण तापमान और 8 0 मिनट के निष्कर्षण समय में समायोजित किया गया था। इन शर्तों के तहत, कुल फ्लेवोनोइड्स की उपज 1.205 ± 0.019 प्रतिशत थी। सैद्धांतिक पूर्वानुमान मूल्य की तुलना में, सापेक्ष त्रुटि 0.8 प्रतिशत थी। सैद्धांतिक मूल्य वास्तविक परिणाम के अनुरूप था, यह दर्शाता है कि अनुकूलन पैरामीटर उपलब्ध थे। चेन एट अल। [10] 60 प्रतिशत इथेनॉल-जलीय घोल का उपयोग करके चपरासी से निकाले गए फ्लेवोनोइड्स और उपज 1.34 प्रतिशत थी, जो इस पेपर के अनुरूप थी। आरएसएम का व्यापक रूप से पौधों से फ्लेवोनोइड्स की इष्टतम निष्कर्षण प्रक्रिया को अनुकूलित करने के लिए उपयोग किया गया था, जैसे कि औरांति फ्रुक्टस [22], पुएरिया [23], और करकुमा ज़ेडोरिया के पत्ते [24]। ओर्थोगोनल परीक्षण की तुलना में, RSM के पास सटीक पूर्वानुमेयता, उच्च सटीकता और अधिक आसानी से प्रभाव कारकों का विश्लेषण करने के फायदे थे [25]।
2.3. Fengdan Peony Flavonoid की एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि
Flavonoids प्राकृतिक एंटीऑक्सीडेंट हैं जो शरीर में मुक्त कणों को प्रभावी ढंग से साफ कर सकते हैं। फ्लेवोनोइड्स की एंटीऑक्सीडेंट क्षमता इस तथ्य के कारण है कि फ्लेवोनोइड मुक्त कणों को हाइड्रोजन परमाणु प्रदान कर सकते हैं और खुद को फेनोलिक मुक्त कणों में परिवर्तित कर सकते हैं। फेनोलिक मुक्त कणों की स्थिरता से स्वचालित ऑक्सीकरण श्रृंखला प्रतिक्रिया की स्थानांतरण दर को धीमा किया जा सकता है, इस प्रकार लिपिड के आगे ऑक्सीकरण को रोकता है [26]।
डीपीपीएच मुक्त मूलक के लिए कुल फ्लेवोनोइड्स की निकासी चित्र 3ए में दिखाई गई थी। 0.1 से 1.0 mg/mL की सांद्रता रेंज में, कुल फ्लेवोनोइड्स और VC से DPPH मुक्त रेडिकल्स की निकासी उनकी एकाग्रता के साथ सकारात्मक रूप से सहसंबद्ध थी। 0.1 से 0.5 मिलीग्राम/एमएल की सीमा में, वीसी की निकासी को इसकी एकाग्रता के साथ बढ़ाया गया था। जब सांद्रता 0.5 मिलीग्राम/एमएल से अधिक थी, तो वीसी की निकासी 98 प्रतिशत तक पहुंच गई और स्थिर हो गई। 0.1 से 0.8 मिलीग्राम/एमएल की सीमा में, एकाग्रता में वृद्धि के साथ कुल फ्लेवोनोइड की निकासी में वृद्धि हुई थी। जब सांद्रता 0.8 मिलीग्राम/एमएल से अधिक थी, तो कुल फ्लेवोनोइड्स की निकासी लगभग 75 प्रतिशत तक स्थिर हो गई। ओन्सिया एट अल। [27] ने बताया कि डीपीपीएच मुक्त मूलक के लिए चपरासी कच्चे तेल के अर्क की निकासी 81 प्रतिशत थी; निकासी इस अध्ययन के परिणामों के समान थी। Fengdan peony कुल फ्लेवोनोइड्स में DPPH मुक्त कणों की एक निश्चित समाशोधन क्षमता थी, लेकिन क्षमता VC से थोड़ी कम थी। एंटीऑक्सिडेंट और डीपीपीएच मुक्त कण के बीच प्रतिक्रिया हाइड्रोजन परमाणु और इलेक्ट्रॉन हस्तांतरण तंत्र [28] द्वारा महसूस की जाती है। इथेनॉल के घोल में DPPH फ्री रेडिकल बैंगनी होता है। जब एंटीऑक्सीडेंट डीपीपीएच मुक्त कणों को हाइड्रोजन की आपूर्ति के माध्यम से एक स्थिर अवस्था में परिमार्जन करता है, तो इसका रंग पीला हो जाता है और 517 एनएम [29] पर मजबूत अवशोषण होता है। इस पत्र में, डीपीपीएच पर चपरासी फ्लेवोनोइड्स के मैला ढोने के प्रभाव को फ्लेवोनोइड एकाग्रता में वृद्धि के साथ काफी बढ़ाया गया था, जिसने संकेत दिया कि पेनी फ्लेवोनोइड्स प्रभावी एंटीऑक्सिडेंट थे।
हाइड्रॉक्सिल रेडिकल के लिए कुल फ्लेवोनोइड्स की निकासी को चित्र 3 बी में चित्रित किया गया था। 0.1 से 1.0 mg/mL की सांद्रता में, हाइड्रॉक्सिल रेडिकल के लिए कुल फ्लेवोनोइड्स की निकासी VC से कम थी। 0.4 मिलीग्राम/एमएल पर, वीसी की मंजूरी मूल रूप से अधिकतम, लगभग 97 प्रतिशत तक पहुंच गई। हाइड्रॉक्सिल रेडिकल्स पर कुल फ्लेवोनोइड्स की मैला ढोने की दर को एकाग्रता में वृद्धि के साथ बढ़ाया गया था, और अधिकतम मूल्य (7 0 प्रतिशत) तक पहुंच गया था जब एकाग्रता 0 .8 मिलीग्राम / एमएल से अधिक थी। हाइड्रॉक्सिल रेडिकल काफी सक्रिय है और किसी भी बायोमोलेक्यूल के साथ जल्दी से प्रतिक्रिया कर सकता है, जो अंगों या ऊतकों को बहुत नुकसान पहुंचाता है [3 0]। हाइड्रॉक्सिल रेडिकल कोशिकाओं के लिए सबसे विषैली प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजाति है [31], जो शरीर के ऑक्सीकरण को बढ़ाकर सेल एपोप्टोसिस को तेज करता है [32]। यांग एट अल। [33] पाया गया कि हाइड्रॉक्सिल रेडिकल पर चपरासी के बीज के तेल का मैला ढोने का प्रभाव एकाग्रता पर निर्भर था, और हाइड्रॉक्सिल रेडिकल की निकासी 92 प्रतिशत तक 0.1-0.5 मिलीग्राम / एमएल की एकाग्रता सीमा में थी। इस पेपर की तुलना में, चपरासी बीज भोजन फ्लेवोनोइड्स की निकासी peony बीज के तेल की तुलना में कम थी, लेकिन peony बीज के तेल के उत्पादन में एक उप-उत्पाद के रूप में, peony बीज भोजन से निकाले गए फ्लेवोनोइड्स का हाइड्रॉक्सिल रेडिकल पर स्पष्ट रूप से मैला ढोने का प्रभाव था। कम सांद्रता पर। इसलिए, चपरासी फ्लेवोनोइड्स को एक कार्यात्मक खाद्य कच्चे माल के रूप में माना जा सकता है जिसमें एक मैला ढोने वाले हाइड्रॉक्सिल रेडिकल की क्षमता होती है। एक ओर, मानव एंटीऑक्सीडेंट रक्षा प्रणाली पर इसका बेहतर सुरक्षात्मक प्रभाव पड़ा, और दूसरी ओर, यह चपरासी के बीज के व्यापक उपयोग में भी सुधार कर सकता था।
2.4. Fengdan Peony Flavonoid . की सफेदी गतिविधि
जैसा कि चित्र 4 में दिखाया गया है, Fengdan peony flavonoid (0.03–1.00 mg/mL) ने tyrosinase के 8.53–81.08 प्रतिशत निषेध का उत्पादन किया, जो tyrosinase निषेध खुराक-निर्भरता प्रदर्शित करता है। . IC50 0.24 mg/mL था। लिन एट अल। [36] पाया गया कि टायरोसिनेस की निषेध दर लगभग 75 प्रतिशत थी जब peony से इथेनॉल निकालने की एकाग्रता 1 मिलीग्राम/एमएल थी। टायरोसिनेस की निषेध दर इस पेपर के परिणामों के करीब थी। मेलानिन सफेद करने को रोकने वाला प्रमुख पदार्थ है [37]। टायरोसिनेस मेलेनिन के संश्लेषण में एक महत्वपूर्ण एंजाइम है, जिसका उपयोग कॉस्मेटिक और सफेद करने वाले कार्यात्मक खाद्य पदार्थों की जांच के लिए एक सूचकांक के रूप में किया जाता है [38]। अधिकांश सौंदर्य प्रसाधनों या सफेद करने वाले खाद्य पदार्थों में टायरोसिनेस अवरोधक आवश्यक तत्व हैं [39]। इस अध्ययन में, peony flavonoid का tyrosinase गतिविधि पर एक स्पष्ट निरोधात्मक प्रभाव था। इसलिए, सौंदर्य प्रसाधनों में चपरासी फ्लेवोनोइड्स या सफेद करने वाले खाद्य पदार्थों को सफेद करने वाली सामग्री के रूप में जोड़ना संभव और मान्य था।
तालिका 2।निषेध क्षेत्र का व्यास।
3. सामग्री और तरीके
3.1. सामग्री और अभिकर्मक
स्किम्ड Fengdan peony सीड मील को Guyu Peony Biotech-nology Co., Ltd. (Heze, China) से खरीदा गया था। बीज भोजन को पीसकर पाउडर बनाया गया और फिर एक 40-जाली वाली छलनी [45] से गुजारा गया। बीज भोजन पाउडर को भविष्य में उपयोग के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर एकत्र और संग्रहीत किया गया था। रुटिन मानक, विटामिन सी (वीसी), मेथनॉल, निर्जल इथेनॉल सोडियम नाइट्राइट (NaNO2), एल्यूमीनियम नाइट्रेट (Al (NO3) 3) और सोडियम हाइड्रॉक्साइड (NaOH) की आपूर्ति चीन द्वारा की गई थी।फार्मास्युटिकल ग्रुप कं, लिमिटेड (बीजिंग, चीन); हाइड्रॉक्सिल रेडिकल, डीपीपीएच फ्री रेडिकलऔर एबीटीएस मुक्त कट्टरपंथी मैला ढोने की क्षमता किट शंघाई टोंगवेई इंडस्ट्रियल कं, लिमिटेड से खरीदी गई थी।
3.2. कुल Flavonoids का निष्कर्षण
इसके अलावा, 15.00 g स्किम्ड Fengdan peony सीड मील को 1000 mL के बीकर में मिलाया गया। फिर, इसे एक इलेक्ट्रिक ब्लेंडर (OES-60M, वानजाउ, चीन, 220 r/मिनट) के साथ एक डिजिटल डिस्प्ले थर्मोस्टेटिक वॉटर बाथ (HH-S4, Jiangsu, China) में रखा गया और निम्नलिखित शर्तों के तहत निकाला गया: मेथनॉल सांद्रता 90 प्रतिशत थी, ठोस-से-तरल अनुपात 1:35 ग्राम:एमएल था, निष्कर्षण तापमान 55 C था, और निष्कर्षण का समय 80 मिनट था। निष्कर्षण पर, वैक्यूम फिल्टर द्वारा कुल फाल्वोनोइड्स का छानना एकत्र किया गया था।
3.3. एकल-कारक प्रयोग
Fengdan peony बीज भोजन की कुल फ्लेवोनोइड उपज को एकल-कारक प्रयोग का उपयोग करके अनुकूलित किया गया था। यह कुल फ्लेवोनोइड उपज पर चार कारकों के प्रभाव को दर्शा सकता है। इस प्रयोग का अध्ययन एकल परिवर्ती विधि द्वारा किया गया। प्रयोग के कारक और चर तालिका 3 में दिखाए गए थे।
टेबल तीन।एकल-कारक प्रयोग के कारक और चर
3.4. आरएसएम प्रयोग
एकल-कारक प्रयोग ने RSM प्रयोग के लिए प्रत्येक कारक के तीन चर प्रदान किए। इस अध्ययन में, एकल-कारक प्रयोग के आधार पर, मेथनॉल सांद्रता को 90 प्रतिशत चुना गया था; ठोस-से-तरल अनुपात, निष्कर्षण तापमान और निष्कर्षण समय का उपयोग तर्क के रूप में किया गया था। Peony कुल फ्लेवोनोइड्स उपज का उपयोग प्रतिक्रिया मूल्य के रूप में किया गया था। डिज़ाइन-विशेषज्ञ सॉफ़्टवेयर 12.0 में बॉक्स-बेनकेन परीक्षण के सिद्धांत के आधार पर, तीन कारकों और तीन स्तरों के साथ RSM को चपरासी बीज भोजन से कुल फ्लेवोनोइड की निकासी की स्थिति को अनुकूलित करने के लिए डिज़ाइन किया गया था। संपूर्ण प्रायोगिक डिजाइन 17 प्रायोगिक बिंदुओं (तालिका S1) से बना था। शुद्ध त्रुटि का अनुमान लगाने के लिए डिजाइन केंद्र में पांच प्रतिकृति (13-17) का प्रदर्शन किया गया। आरएसएम के कारकों और स्तरों को तालिका 4 में प्रदर्शित किया गया था।
तालिका 4.आरएसएम के कारक और स्तर।
3.5. Fengdan Peony कुल Flavonoids पाउडर की तैयारी
RSM द्वारा इष्टतम निष्कर्षण प्रक्रिया निर्धारित किए जाने के बाद, Fengdan peony कुल flavonoids छानना सबसे अच्छा निष्कर्षण प्रक्रिया के साथ निकाला गया था, फिर peony कुल flavonoids पाउडर को रोटरी बाष्पीकरण (20 mL / मिनट, 25 W, R) द्वारा छानने के बाद प्राप्त किया गया था। -1001वीएन, झेंग्झौ, चीन) और फ्रीज ड्रायर द्वारा सुखाया गया (−80 C, 24 h, SCIENTZ-12N, Ningbo, चीन)। पाउडर का उपयोग एंटीऑक्सिडेंट, सफेदी और जीवाणुरोधी प्रयोगों में किया जाएगा।
3.6. एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि मूल्यांकन
Fengdan peony कुल फ्लेवोनोइड समाधान और विभिन्न द्रव्यमान सांद्रता के साथ VC समाधान (0.1, 0.2, 0.3, 0.4, {{9 }}.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0 मिलीग्राम/एमएल) तैयार किए गए 80 प्रतिशत इथेनॉल के साथ, जिसका उपयोग तीन मुक्त कणों के लिए कुल फ्लेवोनोइड की निकासी को निर्धारित करने के लिए किया जाएगा।
3.6.1. डीपीपीएच फ्री रेडिकल परख
डीपीपीएच मुक्त मूलक के लिए कुल फ्लेवोनोइड्स की निकासी का निर्धारण फाम, डीसी द्वारा मामूली संशोधनों के साथ किया गया था [48]। संक्षेप में, निर्जल एथेनॉल में 0.2 mM DPPH के 150 μL को विभिन्न सांद्रता (0.1-1.0 mg/mL) पर नमूने के 150 μL में जोड़ा गया था। मिश्रण को हिलाया गया और अंधेरे में कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए ऊष्मायन किया गया। 200 μL मिश्रण को 96-अच्छी तरह से प्लेट में जोड़ा गया था, और एंजाइम-लेबल वाले उपकरण (स्पेक्ट्रामैक्स 190, शंघाई, चीन) द्वारा अवशोषण को 517 एनएम पर मापा गया था। वीसी का उपयोग नियंत्रण पदार्थ के रूप में किया गया था। DPPH की निकासी की गणना निम्न सूत्र द्वारा की गई थी।
डीपीपीएच प्रतिशत की निकासी={1− [(ऐ - अज) / एओ] × 100} प्रतिशत (2)
जहां ऐ 150 μL नमूना प्लस 150 μL DPPH का अवशोषण था; अज 150 μL नमूना प्लस 150 μL निर्जल इथेनॉल का अवशोषण था; A0 150 μL DPPH प्लस 150 μL निर्जल इथेनॉल का अवशोषण था।
3.6.2. हाइड्रॉक्सिल रेडिकल परख
हाइड्रॉक्सिल रेडिकल के लिए कुल फ्लेवोनोइड्स की निकासी कुछ संशोधनों के साथ झोउ, जे. द्वारा वर्णित के रूप में निर्धारित की गई थी [49]। संक्षेप में, विभिन्न सांद्रता के 50 μL नमूना समाधान (0.1–1.0 मिलीग्राम/एमएल), 50 9.0 मिमी सैलिसिलिक एसिड-इथेनॉल समाधान का μL , 9.0 mM FeSO4 घोल का 50 μL और आसुत जल का 200 μL एक ट्यूब में मिलाया गया। फिर, 8.8 मिमी H2O2 के 50 μL को ऊपर के मिश्रण में जोड़ा गया, और अवशोषण को 510 एनएम पर मापा गया। हाइड्रॉक्सिल रेडिकल की निकासी की गणना निम्न सूत्र द्वारा की गई थी।
हाइड्रॉक्सिल रेडिकल प्रतिशत की निकासी={1− [(ऐ - अज) / एओ] × 100 } प्रतिशत (3)
जहां एआई नमूने का अवशोषण था; अज H2O2 के बजाय विआयनीकृत पानी का अवशोषण है; A0 नमूने के बजाय विआयनीकृत पानी का अवशोषण था।
3.6.3. ABTS फ्री रेडिकल परख
एबीटीएस मुक्त मूलक के लिए कुल फ्लेवोनोइड्स की निकासी निर्धारित की गई थी जैसा कि गोंग, जे। द्वारा कुछ संशोधनों के साथ वर्णित किया गया था [5 {{1 0}}]। संक्षेप में, अंधेरे में कमरे के तापमान पर 12 घंटे के लिए 7 मिमी एबीटीएस समाधान के 1 एमएल और 2.45 मिमी पोटेशियम पर्सल्फेट समाधान के 1 एमएल को एक ट्यूब में मिलाया गया था। निर्जल इथेनॉल के साथ मिश्रण को 40 बार पतला किया गया था। फिर, 190 μL मिश्रण और 10 μL नमूने अलग-अलग सांद्रता (0.1-1.0 mg/mL) पर अंधेरे में कमरे के तापमान पर 6 मिनट के लिए एक ट्यूब में मिलाया गया; अवशोषण को 734 एनएम पर मापा गया था। ABTS मुक्त मूलक की निकासी की गणना निम्न सूत्र द्वारा की गई थी।
एबीटीएस प्रतिशत की निकासी={1− [(ऐ - अज) / एओ] × 100} प्रतिशत (4)
जहां ऐ 10 μL नमूना प्लस 190 μL मिश्रण का अवशोषण था; अज 10 μL नमूना प्लस 190 μL निर्जल इथेनॉल का अवशोषण था; A0 10 μL निर्जल इथेनॉल प्लस 190 μL मिश्रण का अवशोषण था।
सिस्टैंच फ्री रेडिकल्स को साफ करता है।
3.7. व्हाइटनिंग गतिविधि मूल्यांकन
टाइरोसिनेस निषेध परख को चेन क्यू द्वारा मामूली संशोधनों [38] के साथ वर्णित किया गया था। संक्षेप में, 1/15 फॉस्फेट बफ़र्स (पीएच 6.8) के 80 μL में भंग 5 mmol/L tyrosine के 40 μL को 15 मिनट के लिए 37 C पर 40 μL Fengdan peony कुल flavonoids समाधान के साथ मिलाया गया था। इसके बाद, प्रतिक्रिया शुरू करने के लिए 40 μL tyrosinase (300 IU/mL) जोड़ा गया। परख मिश्रण 10 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया गया था। अवशोषण को एंजाइम-लेबल वाले उपकरण (स्पेक्ट्रामैक्स 190, शंघाई, चीन) द्वारा 482 एनएम पर मापा गया था। उसी समय, रिक्त समूह और नियंत्रण समूह स्थापित किए गए थे। रिक्त समूह में, टायरोसिनेस नहीं जोड़ा गया था और मात्रा बनाने के लिए फॉस्फेट बफर का उपयोग किया गया था। नियंत्रण समूह में, फ्लेवोनोइड समाधान नहीं जोड़ा गया था, और मात्रा बनाने के लिए फॉस्फेट बफर का उपयोग किया गया था। टायरोसिनेस गतिविधि के निरोधात्मक प्रतिशत की गणना निम्न सूत्र द्वारा की गई थी:
निषेध दर(प्रतिशत)= [1−(As - Ab) / (Ac - Ab)]×100 प्रतिशत (5)
जहां एबी 482 एनएम पर रिक्त समूह का अवशोषण था, एसी 482 एनएम पर नियंत्रण समूह का अवशोषण था, और एएस 482 एनएम पर नमूने का अवशोषण था।
3.8. जीवाणुरोधी गतिविधि प्रयोग
फिर, बैक्टीरियल फ्रीज-ड्राई ट्यूब में 400 μL बाँझ पानी डाला गया। पूरी तरह से मिश्रित होने के बाद, 200 μL बैक्टीरिया तरल समान रूप से अगर प्लेट में फैला हुआ था। यह बैक्टीरिया को सक्रिय करने के लिए 24 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर एक जैव रासायनिक इनक्यूबेटर (एलआरएच -250, 650 डब्ल्यू, चांगझौ, चीन) में ऊष्मायन किया गया था। फिर, एकल कॉलोनी को डिस्पोजेबल इनोक्यूलेशन लूप (65-0001, शेडोंग, चीन) के साथ अगर प्लेट में उठाया गया और तरल माध्यम में टीका लगाया गया। माध्यम को एक बुद्धिमान स्थिर तापमान संस्कृति थरथरानवाला (HNYC -202 T, 1800W, तियानजिन, चीन) में 24 घंटे के लिए 37 C, 120 r/मिनट पर रखा गया था। बैक्टीरियल सस्पेंशन की सांद्रता को हेमोसाइटोमीटर (Q401, शंघाई, चीन) द्वारा देखा और गिना गया, और फिर 106 CFU / mL [51] में समायोजित किया गया।
निषेध क्षेत्र प्रयोग पंचिंग विधि द्वारा संचालित किया गया था। सबसे पहले, विभिन्न सांद्रता (30 मिलीग्राम / एमएल और 500 मिलीग्राम / एमएल) के फेंगडान peony कुल फ्लेवोनोइड समाधान 80 प्रतिशत मेथनॉल के साथ तैयार किए गए थे। फिर, जीवाणु निलंबन के 80 μL को बाँझ अगर माध्यम पर समान रूप से फैलाया गया था। इसके बाद, 7 मिमी (A0358, गुआंगज़ौ, चीन) के व्यास के साथ एक पंचर द्वारा माध्यम में 4 छेदों को छिद्रित किया गया। तीन छिद्रों को कुल फ्लेवोनोइड्स समाधान के 100 μL में जोड़ा गया था, और दूसरे को नियंत्रण के रूप में 80 प्रतिशत मेथनॉल के 100 μL में जोड़ा गया था। अंतिम, इसे 24 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर जैव रासायनिक इनक्यूबेटर में सुसंस्कृत किया गया था। प्रत्येक छेद के चारों ओर स्पष्ट अवरोध क्षेत्र का व्यास वर्नियर कैलिपर (SWB -227-150, गुआंगज़ौ, चीन) का उपयोग करके मापा गया था।
एमआईसी प्रयोग निम्नलिखित चरणों के अनुसार किया गया था। बैक्टीरियल ग्रोथ सिस्टम जिसमें कुल फ्लेवोनोइड्स सॉल्यूशन (0.0037, 0.0073, के विभिन्न सांद्रण होते हैं। 0.0146, 0.0293, 0.0586, 0.1172, 0.2344, 0.4688, 0.9375, 1.8750, 3.7500, 7.5000, 15.0000 मिलीग्राम/एमएल) तैयार किया गया था एक डबल ग्रेडिएंट कमजोर पड़ने की विधि द्वारा [52]। इसके अलावा, कुल फ्लेवोनोइड समाधान के बिना जीवाणु समाधान जोड़ने का उपयोग विकास नियंत्रण समूह के रूप में किया गया था, और जीवाणु समाधान के बिना कुल फ्लेवोनोइड समाधान को रिक्त नियंत्रण समूह के रूप में उपयोग किया गया था। वे बुद्धिमान निरंतर तापमान संस्कृति थरथरानवाला (HNYC - 202 T, 1800 W, तियानजिन, चीन) में 37 C, 24 घंटे के लिए 120 rpm/मिनट पर सुसंस्कृत थे। बैक्टीरिया के विकास के बिना कुल फ्लेवोनोइड्स की अधिकतम पतला सांद्रता बैक्टीरिया पर कुल फ्लेवोनोइड्स का एमआईसी था [53]।
3.9. सांख्यिकीय विश्लेषण
डिज़ाइन-विशेषज्ञ V12.0.3.0 (Stat-Ease Inc., मिनियापोलिस, MN, USA) का उपयोग द्विघात बहुपद मॉडल और अनुकूलन के गुणांकों की गणना के लिए किया गया था। बहुपद मॉडल समीकरण की सटीकता की जांच करने के लिए F-मान और p-मानों का उपयोग किया गया था, और {{10}}.05 (p <0.05) से="" कम="" के="" p-मानों="" को="" सांख्यिकीय="" रूप="" से="" महत्वपूर्ण="" माना="" गया="" था।="" सभी="" प्रयोगों="" को="" तीन="" बार="" मापा="" गया,="" और="" डेटा="" मानों="" को="" ±="" मानक="" विचलन="" (एसडी)="" के="" रूप="" में="" व्यक्त="" किया="">
4। निष्कर्ष
इस अध्ययन में, Fengdan peony कुल फ्लेवोनोइड्स की इष्टतम निकासी की स्थिति 90 प्रतिशत की मेथनॉल सांद्रता, 1:35 का ठोस-से-तरल अनुपात, 55 C का निष्कर्षण तापमान, 80 मिनट का निष्कर्षण समय, और कुल फ्लेवोनोइड्स की उपज 1.204 प्रतिशत थी। हम मानते हैं कि निष्कर्षण प्रक्रिया औद्योगिक उत्पादन के लिए उपयुक्त है। फेंगडान पेनी फ्लेवोनोइड्स ने उत्कृष्ट एंटीऑक्सीडेंट प्रभाव का प्रदर्शन किया, डीपीपीएच मुक्त रेडिकल के लिए कुल फ्लेवोनोइड्स की निकासी 75 प्रतिशत थी, हाइड्रॉक्सिल रेडिकल के लिए 70 प्रतिशत थी, और एबीटीएस के लिए फ्री रेडिकल 97 प्रतिशत थी। इसके अलावा, Fengdan peony flavonoids का एक निश्चित श्वेत प्रभाव था, tyrosinase के लिए Fengdan peony flavonoids की निषेध दर खुराक पर निर्भर रूप से प्रदर्शित होती है और IC50 0.24 mg / mL तक पहुंच सकती है। इसके अलावा, Fengdan peony कुल फ्लेवोनोइड ग्राम-पॉजिटिव बैक्टीरिया के विकास को रोक सकता है। सभी परिणामों ने स्वास्थ्य उत्पाद और कार्यात्मक खाद्य कच्चे माल में Fengdan peony कुल flavonoids के आवेदन के लिए एक विश्वसनीय डेटा समर्थन प्रदान किया, और Fengdan peony कुल flavonoids के औद्योगिक उत्पादन की नींव रखी।
सिस्टैंच की गोलियां जिनमें फ्लेवोनोइड्स होते हैं
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