प्राकृतिक कॉस्मेटिक प्रोटोटाइप में हिबिस्कस कैनबिनस एल (केनाफ) के पत्तों के अर्क को त्वचा को गोरा करने और एंटी-एजिंग एजेंटों के रूप में उपयोग किया जाता है

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यान यी सिम और कर लिन न्याम

सार

मलेशिया में, से औद्योगिक अपशिष्टहिबिस्कस कैनबिनसएल (केनाफ) उद्योग, विशेष रूप से छुट्टी, स्थिरता में चुनौतियों का कारण बनता है। केनाफ पत्तियों की जैविक गतिविधि को पिछले कुछ अध्ययनों द्वारा सूचित किया गया था, इसलिए, यह विश्वसनीय है कि केनाफ पत्तियों के अर्क (केएलई) को कॉस्मेटिक फॉर्मूलेशन में एक कार्यात्मक घटक के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है। इस प्रकार, इस अध्ययन का उद्देश्य केएलई युक्त एक प्राकृतिक कॉस्मेटिक फॉर्मूलेशन विकसित करना और इसकी भौतिक रासायनिक विशेषताओं, सूक्ष्मजीवविज्ञानी गुणों, भंडारण स्थिरता, जैविक गतिविधियों (एंटीऑक्सीडेंट, एंटीट्रोसिनेज, औरबुढ़ापा विरोधी), इन विट्रो साइटोटोक्सिसिटी (सामान्य मानव त्वचीय फाइब्रोब्लास्ट और B16F1 0 मेलेनोमा कोशिकाओं पर) और मेलेनोजेनेसिस परख (इंट्रासेल्युलर टायरोसिनेस गतिविधि और मेलेनिन उत्पादन में कमी) में। परिणामों से पता चला कि केएलई लोशन (केएलईएल) 15 प्रतिशत केनाफ बीज तेल (केएसओ) (एफ2) द्वारा 0.1 प्रतिशत डब्ल्यू/डब्ल्यू केएलई के साथ तैयार किया गया है, जो मानव कोशिकाओं पर कोई विषाक्तता के बिना सर्वोत्तम भौतिक और सूक्ष्मजीवविज्ञानी स्थिरता प्रदान करता है। केएलईएल ने कुल फेनोलिक सामग्री (टीपीसी) के लिए 1.84 ± 0.07 मिलीग्राम कैफिक एसिड समकक्ष (सीएई)/जी और 21.62 ± 0.76 मिलीग्राम कैटेचिन हाइड्रेट समकक्ष (सीएचई)/जी तक एंटीऑक्सीडेंट सामग्री भी प्रस्तुत की। ) और कुल फ्लेवोनोइड सामग्री (TFC), क्रमशः। इसके अलावा, केएलईएल ने माइकोफेनोलेट (30.28 ± 3.90 प्रतिशत) और डिफेनोल्स (11.40 ± 0.29 प्रतिशत) के गठन के निषेध पर एंटीटायरोसिनेस क्षमता प्रस्तुत की, और पहली बार प्रकट किया,बुढ़ापा विरोधीकोलेजनेज (36.41 ± 0.54 प्रतिशत) और इलास्टेज (23.13 ± 1.56 प्रतिशत) गतिविधियों को रोककर गुण। मेलानोजेनेसिस निरोधात्मक गतिविधि के संबंध में, KLEL ने B16F10 कोशिकाओं पर सेलुलर टायरोसिनेस गतिविधि और मेलेनिन सामग्री को दबाने में उच्च प्रभावकारिता प्रस्तुत की। कुल मिलाकर, इस अध्ययन के परिणाम केनाफ पत्तियों का उपयोग करके प्राकृतिक कॉस्मेटिक प्रोटोटाइप के विकास की दिशा में बहुत आशाजनक हैं।

डेजर्ट सिस्टैंच ड्रैगन हर्ब्स: एंटी-एजिंग

1 परिचय

हाल ही में, सर्कुलर आर्थिक मॉडल जो अपशिष्ट उत्पादन को कम करके और दीर्घकालिक मूल्य को बनाए रखते हुए अपशिष्ट प्रबंधन की स्थिरता को बढ़ा सकता है, जबकि संसाधन की कमी और पर्यावरणीय गिरावट के नकारात्मक परिणामों को कम करने से सार्वजनिक हित प्राप्त हुआ है (मोर्सलेटो, 2020)। सामान्य तौर पर, प्रत्येक वर्ष औद्योगिक फसल उद्योगों द्वारा कम आर्थिक मूल्य वाले उप-उत्पादों की एक महत्वपूर्ण मात्रा उत्पन्न होती है।हिबिस्कस कैनबिनसL. KR9 (kenaf) उद्योग, मलेशिया के सकल घरेलू उत्पाद (सकल घरेलू उत्पाद) में योगदान देने वाले कृषि क्षेत्रों में से एक है, जिसमें केनाफ सूखे तने का उत्पादन भार 2013 में 7.1 ({3}} टन) से बढ़कर 7.6 ({{7} हो गया है। } टन) 2014 में, और वैश्विक केनाफ बाजार 2025 तक यूएस $ 854 मिलियन को पार करने का अनुमान है (अब्देलरहमान एट अल।, 2016)। हालांकि, बड़ी मात्रा में उप-उत्पाद उत्पन्न होते हैं, जैसे कि केनाफ बीज और पत्ते, जो स्थिरता की समस्याओं में योगदान करते हैं।

केनाफ के पत्ते, कुल उप-उत्पादों की एक महत्वपूर्ण मात्रा के लिए लेखांकन, उत्पन्न सभी उप-उत्पादों में सबसे कम विशेषता और मूल्यवान हैं। सर्कुलर दृष्टिकोण के कारण, केनाफ के पत्तों को मूल्य वर्धित उत्पादों में पुन: उपयोग या पुनर्प्राप्त करना महत्वपूर्ण है क्योंकि यह आर्थिक, पर्यावरणीय और सामाजिक (कोडेरोनी और पेरिटो, 2019) के क्षेत्र में कई लाभ प्रदान करता है। केनाफ के पत्तों में बायोएक्टिव यौगिकों जैसे क्लोरोजेनिक एसिड, कैफिक सहायता, केम्फेरोल और कैटेचिन हाइड्रेट के समृद्ध स्रोत होते हैं, जैसा कि खो एट अल द्वारा किए गए अध्ययनों से सिद्ध होता है। (2019); सिम और न्याम (2019), और हॉ एट अल। (2020)। हालांकि, यह आमतौर पर कम आर्थिक मूल्य वाले उत्पादों के उत्पादन के लिए नियत है: आहार फाइबर और पशु चारा (लिम एट अल।, 2020)।

कॉस्मेटिक उद्योग अनुसंधान और विकास में "प्रकृति पर वापसी" शब्द का व्यापक रूप से उपयोग किया गया है, क्योंकि वनस्पति मूल के अर्क के उपयोग के परिणामस्वरूप उपभोक्ताओं द्वारा अच्छी स्वीकृति प्राप्त हुई है। सिम एट अल द्वारा किए गए अध्ययन के अनुसार। (2019), केनाफ के पत्तों के अर्क (केएलई) ने होनहार एंटीऑक्सिडेंट और एंटीटायरोसिनेस गुणों का प्रदर्शन किया, कॉस्मेटिक उत्पादों के विकास में मूल्य वर्धित सामग्री के रूप में उपयोग किए जाने की क्षमता थी। केएलई युक्त स्थिर और सुरक्षित फॉर्मूलेशन विकसित करना महत्वपूर्ण है क्योंकि इसमें बहुत सारे पॉलीफेनॉल यौगिक होते हैं जो त्वचा का प्रदर्शन करते हैंसफेदतथाबुढ़ापा विरोधीगुण। नए कॉस्मेटिक फॉर्मूलेशन विकसित करते समय कई आवश्यकताओं को ध्यान में रखा जाना चाहिए, जैसे फॉर्मूलेशन प्रकार, उपयोग का इरादा, और फॉर्मूलेशन में उपयोग की जाने वाली सामग्री के बीच संभावित बातचीत, जो समग्र रूप से स्थिरता और सुरक्षा अध्ययन की आवश्यकता में योगदान देती है। (गारबोसा और माया कैम्पोस, 2016)।

स्थिरता अध्ययन, जिसमें भौतिक, रासायनिक और माइक्रोबियल विशेषताओं का अध्ययन शामिल है, विकास प्रक्रिया के बाद कॉस्मेटिक फॉर्मूलेशन के लिए आवश्यक हैं। इसके अलावा, किसी भी प्रतिकूल प्रभाव या एलर्जी की प्रतिक्रिया को रोकने के लिए, सामान्य मानव त्वचा कोशिका रेखा पर इन विट्रो साइटोटोक्सिसिटी परख का उपयोग करके कॉस्मेटिक उत्पादों का भी परीक्षण किया जाना चाहिए। इस प्रकार, इस कार्य का उद्देश्य केएलई (केएलई लोशन- केएलईएल) युक्त एक प्राकृतिक कॉस्मेटिक फॉर्मूलेशन विकसित करना है। फिर, KLEL का मूल्यांकन इसकी भौतिक रासायनिक विशेषताओं, सूक्ष्मजीवविज्ञानी गुणों, भंडारण स्थिरता, इन विट्रो साइटोटोक्सिसिटी (सामान्य मानव त्वचीय फाइब्रोब्लास्ट और B16F10 मेलेनोमा कोशिकाओं पर), और मेलेनोजेनेसिस परख (इंट्रासेल्युलर टायरोसिनेस गतिविधि और मेलेनिन उत्पादन में कमी) के लिए किया गया था। इस अध्ययन ने हमें पहली बार न केवल केएलईएल की एंटीऑक्सीडेंट और एंटी-टायरोसिनेस गतिविधि को निर्धारित करने की अनुमति दी, बल्कि कोलेजनेज़ और इलास्टेज पर उनकी निरोधात्मक गतिविधि भी निर्धारित की।

सिस्टैन्च लाभ: एंटी-एजिंग

2। सामग्री और प्रणालियां

2.1. संयंत्र सामग्री और रसायन

ताज़ाहिबिस्कस कैनबिनसL. KR9 (केनाफ) बुवाई के 90 दिनों के बाद छोड़ देता है और बीज लेम्बागा केनाफ और टेम्बकाऊ नेगारा (LKTN, मलेशिया) से प्राप्त किया जाता है। Span 20 और Tween 80 को सिग्मा एल्ड्रिच (म्यूनिख, जर्मनी), Cosmedia® ACE, Iscaguard® PEG, और Emulgade® SE-PF को BASF (मलेशिया) से खरीदा गया था, और ग्लिसरीन को Croda International Plc से खरीदा गया था। (यूनाइटेड किंगडम)। सामान्य मानव त्वचीय फ़ाइब्रोब्लास्ट (NHDF) सेल लाइन को लोन्ज़ा (बेसल, स्विटज़रलैंड) से प्राप्त किया गया था और माउस मेलेनोमा (B16F10) को ATCC (मानस, VA, यूएसए) से खरीदा गया था। Dulbecco का मॉडिफाइड ईगल मीडियम (DMEM) Nacalai Tesque (जापान) से खरीदा गया था। उपयोग किए गए अन्य सभी रसायन विश्लेषणात्मक अभिकर्मक ग्रेड (बेल्जियम, जर्मनी, मलेशिया) के थे। पूरे विश्लेषण के दौरान अल्ट्रा-शुद्ध पानी (मिलिपोर, यूएसए) का उपयोग किया गया था।

2.2. तरीकों

2.2.1. केनाफ के पत्तों का सूखना

केनाफ के पत्तों को अल्ट्रा-शुद्ध पानी से साफ किया जाता है, सुखाया जाता है, और फिर रात भर −80 C पर रखा जाता है। फिर, नमूना को 48 घंटे के लिए 0.0004 बार के तहत एक फ्रीज ड्रायर (क्राइस्ट, जर्मनी) में सुखाया गया, जमीन, वैक्यूम-पैक, और −20 डिग्री पर संग्रहीत किया गया।

2.2.2. आंशिक शुद्ध केनाफ पत्तियों के अर्क (केएलई) की तैयारी

KLE का स्पंदित अल्ट्रासोनिक-सहायता प्राप्त निष्कर्षण (PUAE) सिम एट अल के अनुसार किया गया था। (2019)। नमूनों को 1:10 के अनुपात में निष्कर्षण सॉल्वैंट्स (इथेनॉल) से तौला गया। फिर, मिश्रण को स्पंदित अल्ट्रासोनिक-सहायता प्राप्त निष्कर्षण (सार्टोरियस, जर्मनी) के अधीन 50 प्रतिशत sonication आयाम, 1 मिनट पल्स अवधि अवधि, और 1 मिनट पल्स अंतराल अवधि 18-22 ± 3 डिग्री (तीन चक्र) पर बनाए रखा गया था। ) फिर, अर्क को फ़िल्टर किया गया और एक वैक्यूम रोटरी बाष्पीकरण (बुची, स्विट्जरलैंड) में केंद्रित किया गया। केएलई का आंशिक शुद्धिकरण सीबरा एट अल के अनुसार किया गया था। (2010) थोड़े संशोधन के साथ। कच्चे अर्क को सिलिका जेल से भरे कॉलम पर लगाया गया था और एन-हेक्सेन-एथिल एसीटेट के एक ढाल विलायक के साथ मिलाया गया था (1 00: 00, 90:10, 80:20, 50:50 , 20:80, 10:90, 00:100) और एथिल एसीटेट मेथनॉल (100:00, 90:10, 80:20, 50:50, 20:80, 10:90) , 00:100)। आंशिक रूप से शुद्ध किए गए KLE को एक रोटरी बाष्पीकरण का उपयोग करके सूखापन के लिए केंद्रित किया गया था और भविष्य में उपयोग के लिए −20 डिग्री पर संग्रहीत किया गया था।

2.2.3. केनाफ बीज तेल (केएसओ) का विलायक निष्कर्षण

केएसओ को च्यू एट अल के अनुसार निकाला गया था। (2015)। केनाफ के बीजों को ग्राइंडर (पैनासोनिक, जापान) का उपयोग करके एक महीन पाउडर में पिसा जाता है और 1:5 के अनुपात में हेक्सेन के साथ मिलाया जाता है। 3 घंटे के लिए 60 डिग्री सेल्सियस पर एक सॉक्सलेट एक्सट्रैक्टर का उपयोग करके तेल निकाला गया था, और एक रोटरी बाष्पीकरण का उपयोग करके हेक्सेन को हटा दिया गया था। नाइट्रोजन के साथ फ्लश करने के बाद, केएसओ को भविष्य में उपयोग के लिए −20 डिग्री पर संग्रहीत किया गया था (च्यू एट अल।, 2015)।

2.2.4। KLE युक्त लोशन निर्माण का प्रायोगिक विकास

सबसे पहले, लोशन बेस फॉर्मूलेशन (केएलई के बिना) केनाफ बीज तेल (केएसओ) के 4 अलग-अलग सांद्रता (10 प्रतिशत, 15 प्रतिशत, 20 प्रतिशत, और 25 प्रतिशत) का उपयोग करके अनुकूलित किया गया था। लोशन बेस का तुलनात्मक रूप से विभिन्न मापदंडों के लिए मूल्यांकन किया गया था: भौतिक उपस्थिति, गंध, समरूपता, पीएच, चिपचिपाहट, सेंट्रीफ्यूजेशन, और फ्रीज-थॉ मूल्यांकन, आगे के अध्ययन के लिए सबसे अच्छा लोशन बेस फॉर्मूलेशन का चयन करने के लिए। उपरोक्त मापदंडों के परिणामों के संबंध में, KLE (0.1 प्रतिशत w/w) (KLEL) के साथ निगमन के लिए सबसे उपयुक्त लोशन बेस फॉर्मूलेशन (15 प्रतिशत KSO) का चयन किया गया था। संक्षेप में, गैर-ध्रुवीय चरण (Emulgade® SE PF, Span 20, और KSO) और ध्रुवीय चरण (पानी, ट्वीन 80, और ग्लिसरीन) सामग्री को 75 ± 2 डिग्री तक गर्म किया गया था। फिर, गैर-ध्रुवीय चरण को एक प्राथमिक इमल्शन बनाने के लिए 350 आरपीएम पर एक चुंबकीय स्टिरर (थर्मो फिशर साइंटिफिक, यूएसए) का उपयोग करके तेजी से सरगर्मी के साथ ध्रुवीय चरण में बूंद-बूंद करके जोड़ा गया, इसके बाद IKA T25 डिजिटल ULTRA का उपयोग करके उच्च-कतरनी होमोजेनाइजेशन किया गया। -TURRAX® (IKA प्रयोगशाला उपकरण, जर्मनी) 3 मिनट के लिए 3200 आरपीएम पर और 3 मिनट के लिए 40 प्रतिशत आयाम पर अल्ट्रासोनिक होमोजेनाइजेशन। Cosmedia® ACE, Iscaguard® PEG, और KLE को कमरे के तापमान पर O/W इमल्शन में मिलाया और मिलाया गया। KLE के बिना KSO लोशन बेस नियंत्रण (KSOL) के रूप में कार्य करता है। जबकि कोजिक एसिड (0.1 प्रतिशत डब्ल्यू/डब्ल्यू) (केएएल) के साथ जोड़ा गया लोशन बेस एंटी-टायरोसिनेस गतिविधि और मेलेनोजेनेसिस परख के लिए सकारात्मक नियंत्रण के रूप में कार्य करता है। कैटेचिन हाइड्रेट (0.1 प्रतिशत डब्ल्यू/डब्ल्यू) (सीएचएल) के साथ जोड़ा गया लोशन बेस एंटी कोलेजेनेज और एंटीलेस्टेज गतिविधि के लिए सकारात्मक नियंत्रण के रूप में कार्य करता है

2.2.5. भौतिक रासायनिक विश्लेषण

2.2.5.1. उपस्थिति, गंध, और एकरूपता।

हनीफा और जुफरी (2018) के अनुसार, उनके रंग, गंध और एकरूपता और चरण पृथक्करण के लिए लोशन फॉर्मूलेशन का निरीक्षण किया गया था।

2.2.5.2. पीएच. माप से पहले पीएच मीटर इलेक्ट्रोड को कैलिब्रेट करने के लिए मानक समाधानों का उपयोग किया गया था।

नमूनों का पीएच कमरे के तापमान पर एक पीएच मीटर (मेट्लर टोलेडो, स्विट्जरलैंड) के साथ निर्धारित किया गया था।

2.2.5.3। रंग।

कलरमीटर (हंटर लैब, यूनाइटेड स्टेट) का उपयोग करके रंग का मूल्यांकन किया जाएगा। परिणाम रंग स्थान L* (हल्कापन), a* (हरा), b*(पीला), और कुल रंग अंतर (ΔE) के अनुसार व्यक्त किए जाएंगे। सभी नमूनों के लिए कुल रंग अंतर (ΔE) की गणना इस प्रकार समीकरण का उपयोग करके की गई: E =̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅ (L∗ - L∗0)2 प्लस (a∗ - a∗0)2 प्लस (b∗ - b∗0) 2√

2.2.5.4. श्यानता।

ग्यावली एट अल के अनुसार एलवी -64 स्पिंडल का उपयोग करके ब्रूक फील्ड विस्कोमीटर में नमूनों की चिपचिपाहट का मूल्यांकन किया गया था। (2016) थोड़े संशोधन के साथ। नमूना सीधे 100 आरपीएम रोटेशन दर के साथ धुरी में डूबा हुआ था और चिपचिपाहट (सीपी) मापा गया था।

2.2.5.5. फैलाव क्षमता।

नमूनों की प्रसार क्षमता समानांतर प्लेट विधि (ग्यावली एट अल।, 2016) द्वारा निर्धारित की गई थी। नमूने को ठीक (1 ग्राम) तौला गया और कांच की एक स्लाइड (20 × 20 सेमी 2) के ऊपर रखा गया। फिर, दूसरी स्लाइड को नमूने के शीर्ष पर रखा गया और 100 ग्राम वजन ऊपरी स्लाइड पर रखा गया, ताकि यह सुनिश्चित हो सके कि नमूना समान रूप से दबाया गया था। 1 मिनट के बाद, वजन हटा दिया गया था, और प्रसार व्यास (सेमी) मापा गया था।

2.2.5.6. सेंट्रीफ्यूजेशन मूल्यांकन।

नमूना एक सेंट्रीफ्यूजेशन ट्यूब में लोड किया गया था और फिर 30 मिनट (एपपॉर्फ 5417 आर, यूएसए) के लिए 3750 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज किया गया था। यह सेंट्रीफ्यूजेशन टेस्ट (1-वर्ष के गुरुत्वाकर्षण के बराबर) नमूने की स्थिरता को निर्धारित करता है (हिओला एट अल।, 2018)।

2.2.5.7. फ्रीज-पिघलना मूल्यांकन।

कुछ संशोधनों (क्रोंगरावा एट अल।, 2018) के साथ पिछले तरीकों के अनुसार फ्रीज-पिघलना अध्ययन किया गया था। प्रत्येक नमूने को बारी-बारी से ठंडे तापमान, 4 ± 1 C (24 घंटे) और गर्म तापमान, 45 ± 1 C (24 घंटे) पर 75 प्रतिशत ± 2 प्रतिशत आरएच (सापेक्ष आर्द्रता) के साथ एयरटाइट कांच के कंटेनरों में 6 चक्रों के लिए रखा गया था। नमूनों की चिपचिपाहट तापमान तनाव चक्र के बाद निर्धारित की गई थी।

2.2.6. एंटीऑक्सीडेंट सामग्री का निर्धारक

2.2.6.1. कुल फेनोलिक सामग्री (टीपीसी)।

कुल फेनोलिक सामग्री लिम एट अल के अनुसार निर्धारित की गई थी। (2007)। नमूना (10 मिलीग्राम/एमएल) को 10 प्रतिशत फोलिन-सियोकाल्टू अभिकर्मक और 7.5 प्रतिशत (w/w) Na2CO3 के साथ मिलाया गया था, इसके बाद अंधेरे में 30 मिनट ऊष्मायन किया गया। यूवी-विज़ स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (सेकोमन, फ्रांस) का उपयोग करके 765 एनएम पर अवशोषण लिया गया था। कैफिक एसिड के लिए अंशांकन समीकरण y=0.0269 प्लस 9.69x (आर2=0.999) (सिम एट अल।, 2019) था। परिणाम मिलीग्राम कैफिक एसिड समकक्ष (सीएई) / जी नमूने के रूप में व्यक्त किए गए थे।

2.2.6.2. कुल फ्लेवोनोइड सामग्री (टीएफसी)।

ओगबुनुगाफो एट अल के अनुसार कुल फ्लेवोनोइड सामग्री का मूल्यांकन किया गया था। (2011)। सामान्य तौर पर, नमूना (1{11}} mg/mL) को 15 प्रतिशत NaNO2, 10 प्रतिशत AlCl3 समाधान, अल्ट्रा-शुद्ध पानी और 1 M NaOH के साथ मिलाया गया था। कैटेचिन हाइड्रेट (0.02− 0.1 मिलीग्राम / एमएल) का उपयोग करके तैयार किए गए मानक की तुलना में अवशोषण को तुरंत 510 एनएम पर मापा गया था। कैटेचिन हाइड्रेट के लिए कैलिब्रेशन समीकरण y=0.004 प्लस 3.1x (r2=0.999) (Sim et al., 2019) था। कुल फ्लेवोनोइड सामग्री (टीएफसी) को कैटेचिन हाइड्रेट समकक्ष (सीएचई) / जी नमूने के मिलीग्राम के रूप में व्यक्त किया गया था।

सिस्टैन्च निकालने के लाभ: एंटी-एजिंग

2.2.7. एंटीकोलेजनेज गतिविधि

कोलेजनेज़ और सिंथेटिक सब्सट्रेट (FALGPA-N-(3-[2-Furyl]-acryloyl)-Leu-Gly-Pro-Ala) के बीच प्रोटीयोलाइटिक गिरावट पर आधारित एंटी कोलेजेनेज गतिविधि 345 एनएम पर कुछ संशोधनों के साथ बैरेंटेस और गिनी (2 0 03) के अनुसार कोलेजनेज़ अवरोधकों की उपस्थिति की गई। क्लोस्ट्रीडियम हिस्टोलिटिकम से प्राप्त 0.25 यूनिट/एमएल कोलेजेनेज (40 μL) को 15 मिनट के लिए अंधेरे में 10 μL परीक्षण नमूनों और 20 μL 50 मिमी ट्राइसिन बफर (पीएच 7.5, 100 मिमी CaCl2 और 5 मिमी NaCl के साथ) के साथ प्रतिक्रिया करने की अनुमति दी गई थी। पूर्व-ऊष्मायन के बाद, प्रत्येक कुएं में 2 मिमी FALGPA समाधान के 40 μL की मात्रा जोड़ी गई। प्रत्येक नमूना एक रिक्त के साथ था जिसमें FALGPA को छोड़कर सभी घटक थे और अवशोषण 20 मिनट के लिए ऊष्मायन के बाद निर्धारित किया गया था।

2.2.8. KLEL . का बैक्टीरियोलॉजिकल शेल्फ लाइफ विश्लेषण

कुल एरोबिक माइक्रोबियल काउंट (TAMC) और KLEL के कुल यीस्ट और मोल्ड्स काउंट (TYMC) के लिए उपयोग की जाने वाली विधियों को FDA बैक्टीरियोलॉजिकल एनालिटिकल मैनुअल (BAM) (हुआंग एट अल।, 2017) से संशोधित किया गया था। नमूना (1 ग्राम) को 1 एमएल बाँझ ट्वीन 80 के साथ मिलाया गया था और 10− 1 से 10−3 तक पूरी कमजोर पड़ने वाली श्रृंखला प्राप्त करने के लिए मात्रा को बाँझ पेप्टोन पानी के साथ समायोजित किया गया था। TAMC के लिए, नमूनों को पोषक तत्व अगर पर एक का उपयोग करके टीका लगाया गया था। स्प्रेड प्लेट विधि, और फिर प्लेटों को 48 घंटे के लिए 30 ± 2 C पर इनक्यूबेट किया गया था। TYMC मामले में, नमूनों को एक स्प्रेड प्लेट विधि का उपयोग करके आलू डेक्सट्रोज अगर की प्लेटों पर टीका लगाया गया था, और बाद में प्लेटों को 7 दिनों के लिए 30 ± 2 C पर इनक्यूबेट किया गया था। ऊष्मायन अवधि के बाद सूक्ष्मजीवों के विकास के लिए प्लेटों की जांच की गई।

2.3. सांख्यिकीय विश्लेषण

मिनिटैब 16.2.1 सांख्यिकीय पैकेज (मिनीटैब इंक, पेनसिल्वेनिया, यूएसए) का उपयोग करके सभी परिणामों का विश्लेषण किया गया था, विचरण का एकतरफा विश्लेषण (एनोवा) किया गया था, इसके बाद महत्वपूर्ण अंतर (पी <0) निर्धारित="" करने="" के="" लिए="" तुकी="" का="" परीक्षण="" किया="" गया="" था।="" .05)।="" मतलब="" ±="" मानक="" विचलन="" (एसडी)="" (एन="3)" डेटा="" विश्लेषण="" के="" लिए="" प्रस्तुत="" किया="" गया="">

3. परिणाम और चर्चा

3.1. लोशन बेस फॉर्मूलेशन का अनुकूलन

हिओला एट अल के अनुसार। (2018), लोशन बेस के अनुकूलन (पूर्व-सूत्रीकरण) की अच्छी और स्थिर रचना प्राप्त करने में महत्वपूर्ण भूमिका होती है। इसलिए, लोशन बेस को केएसओ के 4 अलग-अलग प्रतिशत का उपयोग करके अनुकूलित किया गया था जैसा कि तालिका 1 में दिखाया गया है। उनका मूल्यांकन उपस्थिति, गंध, एकरूपता, शारीरिक स्थिरता, पीएच, प्रसार क्षमता, चिपचिपाहट और फ्रीज-पिघलना विश्लेषण (पूरक सामग्री- S1 और) द्वारा किया गया था। एस 2)। केएसओ का उपयोग करके तैयार किए गए सभी लोशन बेस फॉर्मूलेशन में हल्के दूधिया पीले से दूधिया पीले रंग, अच्छी गंध के साथ (चू और न्याम, 2020) थे। प्राप्त परिणामों के आधार पर, सभी लोशन बेस फॉर्मूलेशन के पीएच मान त्वचा पीएच (4–6) की सीमा के भीतर थे, और यह एलर्जी प्रतिक्रिया को कम करने और भंडारण समय पर कॉस्मेटिक फॉर्मूलेशन की स्थिरता सुनिश्चित करने के लिए महत्वपूर्ण है (चू और न्याम) , 2020)। सभी लोशन बेस फॉर्मूलेशन ने फ्रीज-थॉ विश्लेषण के बाद चिपचिपाहट में गिरावट दिखाई, लेकिन फिर भी अच्छे लोशन (500-5000 सीपी) (कुसुमा एट अल।, 2017) की सीमा के भीतर। प्रसार क्षमता के लिए, KSO की सांद्रता जितनी अधिक होगी, उच्च चिपचिपाहट के कारण प्रसार क्षमता का व्यास उतना ही छोटा होगा। प्रसार क्षमता जितनी बड़ी होगी, त्वचा की सतह पर कॉस्मेटिक फॉर्मूलेशन उतना ही आसान होगा। सेंट्रीफ्यूजेशन के प्रतिरोध द्वारा स्थिरता परीक्षण के लिए, F2 और F3 ने कोई चरण पृथक्करण नहीं दिखाया, यह सुझाव देते हुए कि दोनों सूत्र 1 वर्ष के लिए स्थिर थे। हालाँकि, F3 को आसानी से नहीं डाला जा सकता है और यह क्रीम की तैयारी जैसा दिखता है क्योंकि इसमें F2 की तुलना में अधिक चिपचिपापन होता है। इसलिए, F2 को KLE के साथ शामिल करने के लिए अनुकूलित लोशन बेस के रूप में चुना गया था।

सिस्टैन्च किसके लिए प्रयोग किया जाता है: एंटी-एजिंग

3.2. केएलई लोशन (केएलईएल) सूत्रीकरण का मूल्यांकन

3.2.1. भौतिक रासायनिक विश्लेषण

तालिका 2 के परिणामों के आधार पर, केएलई के साथ जोड़ा गया लोशन बेस एक सुखद गंध के साथ हल्का दूधिया रंग दिखाता है और कोई चरण पृथक्करण नहीं देखा गया है। केएलईएल ने नियंत्रण से अधिक पीएच मान दिखाया, यह दर्शाता है कि कॉस्मेटिक फॉर्मूलेशन में केएलई को जोड़ने से पीएच मान में वृद्धि हो सकती है। नमूनों के पीएच मान सभी त्वचा के पीएच रेंज के अनुकूल थे और त्वचा के लिए सुरक्षित थे। केएलईएल और नियंत्रण के बीच चिपचिपाहट और प्रसार क्षमता में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं थे, जिसने संकेत दिया कि केएलई को पायस में जोड़ने से चिपचिपाहट और प्रसार क्षमता प्रभावित नहीं हुई। नियंत्रण की तुलना में केएलईएल के एल*, ए*, और बी* मूल्यों में महत्वपूर्ण परिवर्तन देखे गए, जिससे साबित हुआ कि लोशन का रंग केनाफ के पत्तों के प्राकृतिक हरे रंग से प्रभावित था। KLEL में a* मान (-2.24 ± 0.03) के लिए सबसे हरा और b* मान के लिए सबसे पीला (15.54 ± 0.{{13} }1). नियंत्रण की तुलना में केएलईएल का कुल रंग अंतर (Δई) सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण पी＜0.05 था, केएलईएल के लिए 6.82 ± 0.04 के मूल्य के साथ। पिछले अध्ययनों ने E=2 को दृश्य भेदभाव (झोउ एट अल।, 2009) के लिए दहलीज के रूप में माना। इस प्रकार, E के परिणामों ने साबित कर दिया कि KLE को जोड़ने से कॉस्मेटिक फॉर्मूलेशन का रंग प्रभावित हो सकता है।

3.2.2 एंटीऑक्सीडेंट सामग्री विश्लेषण

तालिका 3 कुल फेनोलिक (टीपीसी) और फ्लेवोनोइड सामग्री (टीएफसी) की मात्रा प्रस्तुत करती है। प्राप्त परिणामों ने संकेत दिया कि केएलई के साथ तैयार किए गए लोशन बेस में नियंत्रण से काफी अधिक टीपीसी (1.84 ± 0। 0 7 मिलीग्रामसीएई / जी) है (1.64 ± 0। 0 6 मिलीग्रामसीएई/जी)। जबकि, टीएफसी के लिए, केएलईएल ने नियंत्रण (19.42 ± 0.27 मिलीग्रामसीएचई/जी) की तुलना में टीएफसी (21.62 ± 0.76 एमजीसीएचई/जी) में भी काफी अधिक दिखाया। कुछ प्लांट बाय-प्रोडक्ट्स की इसी श्रेणी में, केएलई को डर्मेटोलॉजिकल आधार पर शामिल करना अभी भी उच्च एंटीऑक्सीडेंट सामग्री प्रस्तुत करता है, जो कॉस्मेटिक उद्योग में पॉलीफेनोल यौगिकों के संभावित स्रोत को उजागर करता है (अधिकारी एट अल।, 2019; रोड्रिग्स एट अल।, 2014) ) हॉ एट अल के अध्ययन के अनुसार। (2020), केनाफ की पत्तियां विभिन्न प्रकार के पॉलीफेनोल यौगिकों जैसे कैफिक एसिड, टैनिक एसिड, कैटेचिन और क्लोरोजेनिक एसिड से भरपूर होती हैं।

3.2.3. एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि विश्लेषण

डीपीपीएच और एबीटीएस परख का उपयोग करके लोशन की मुक्त कट्टरपंथी मैला ढोने की क्षमता की जांच की गई। तालिका 3 इंगित करती है कि KLEL ने उच्च DPPH (1.16 ± 0.18 mgTEAC/g) और ABTS (0.50 ± 0.0 का प्रदर्शन किया। 4 mgTEAC/g) नियंत्रण की तुलना में कट्टरपंथी मैला ढोने की गतिविधि। डीपीपीएच और एबीटीएस परख निष्कर्षों ने टीपीसी और टीएफसी के समान पैटर्न दिखाया है, जहां यह केएलई को लोशन बेस में जोड़कर एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि में काफी सुधार कर सकता है, इन निष्कर्षों ने सुझाव दिया है कि केएलई में फ्री रेडिकल मैला ढोने वाले होते हैं जो कॉस्मेटिक फॉर्मूलेशन में लागू होने पर एक खेल सकते हैं त्वचा की उम्र बढ़ने के कारण मुक्त कणों को दबाने में प्राथमिक एंटीऑक्सिडेंट के रूप में महत्वपूर्ण भूमिका। इसके अलावा, KLEL (0.69 ± 0.20 mgTEAC/g) ने भी नियंत्रण (0.46 ± 0.09 mgTEAC/g) की तुलना में फेरिक आयन में कमी करने की क्षमता में महत्वपूर्ण उच्चतम प्रदर्शन किया। डीपीपीएच और एबीटीएस। त्वचा की उम्र बढ़ने का कारण बनने वाले आरओएस के खिलाफ व्यक्तिगत त्वचा एंटीऑक्सिडेंट रक्षा प्रणाली को बहाल करने के लिए सौंदर्य प्रसाधन जैसे बाहरी स्रोतों से एंटीऑक्सिडेंट यौगिकों की निरंतर आपूर्ति की आवश्यकता है (डज़ियाओ एट अल।, 2016)। इसके अलावा, कट्टरपंथी मैला ढोने की गतिविधि और कम करने की शक्ति वाले लोशन फॉर्मूलेशन को त्वचा के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता हैसफेदडाउन-रेगुलेटेड यूवी-प्रेरित मेलेनिन उत्पादन द्वारा एजेंट (Dziło et al।, 2016)।

3.2.4। एंजाइम निरोधात्मक गतिविधि

इन विट्रो एंटीटायरोसिनेस गतिविधि के मूल्यांकन के लिए, मेलेनिन बायोसिंथेसिस में शामिल तांबे युक्त मेटालोप्रोटीन एंजाइम टायरोसिनेस के खिलाफ लोशन का परीक्षण किया गया था। तालिका 5 से पता चलता है कि सब्सट्रेट के रूप में एल-टायरोसिन का उपयोग करते समय केएलईएल (3 0.28 ± 3.9 0 प्रतिशत) ने सकारात्मक नियंत्रण (34.05 ± 4.60 प्रतिशत) के साथ एंटी-टायरोसिनेस गतिविधि में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं दिखाया। . हालांकि, सब्सट्रेट के रूप में एल-डोपा का उपयोग करते समय, सभी (11.40 ± 0.29 प्रतिशत) ने सकारात्मक नियंत्रण (15.01 ± 0.84 प्रतिशत) की तुलना में कम एंटीट्रोसिनेज गतिविधि का प्रदर्शन किया। इससे पता चला कि केएलईएल मुख्य रूप से डिफेनोल्स के बजाय माइकोफेनोलेट को रोकता है। इन विट्रोबुढ़ापा विरोधीगुणों का मूल्यांकन कोलेजनेज़ और इलास्टेज निरोधात्मक गतिविधि के माध्यम से किया गया था। कोलेजनेज़ और इलास्टेज जैसे एंजाइम कोलेजन और इलास्टिन को नीचा दिखा सकते हैं, जो त्वचा की अखंडता और लोच के लिए जिम्मेदार होते हैं (जेसुमानी एट अल।, 2019)। तो, इलास्टेज और कोलेजनेज़ गतिविधि का निषेध इलास्टिन और कोलेजन के क्षरण को कम करेगा और इस प्रकार झुर्रियों के गठन को रोकेगा, जो उम्र बढ़ने के प्रमुख लक्षणों में से एक है। जैसा कि तालिका 5 में दिखाया गया है, केएलईएल ने सकारात्मक नियंत्रण (सीएचएल) की तुलना में उल्लेखनीय विरोधी कोलेजनेज (36.41 ± 0.54 प्रतिशत) और एंटीलास्टेज (23.13 ± 1.56 प्रतिशत) गतिविधि का प्रदर्शन किया। केएसओएल ने एंटीटायरोसिनेज (18.82 ± 0.17 प्रतिशत (सब्सट्रेट के रूप में एल-टायरोसिन) का भी प्रदर्शन किया; 8.48 ± 0.29 प्रतिशत (सब्सट्रेट के रूप में एल-डीओपीए), एंटी कोलेजेनेज (18.84 ± {{26 }}.63 प्रतिशत) और एंटीलेस्टेज (5.78 ± 0.59 प्रतिशत) गतिविधि, लेकिन सभी से कम। यह संकेत दे सकता है कि केएलई और केएसओ के संयोजन ने बेहतर एंजाइम अवरोधक गतिविधि के साथ एक सहक्रियात्मक प्रभाव प्रदर्शित किया। यह द्वारा किए गए अध्ययनों द्वारा समर्थित है पास्कोल एट अल। (2015) और च्यू एट अल। (2016), जिसमें केएसओ टोकोफेरोल में समृद्ध है, जबकि केएलई क्वेरसेटिन और केम्पफेरोल डेरिवेटिव में समृद्ध है। इन यौगिकों ने त्वचा का प्रदर्शन कियासफेदतथाबुढ़ापा विरोधीगुण, त्वचा के हाइपरपिग्मेंटेशन और झुर्रियों के उत्पादन को कम करने में रुचि के साथ (लिन एट अल।, 2007; कीन और हसन, 2016)।

3.2.5. इन विट्रो मेलानोजेनेसिस परख

त्वचा को और अधिक एक्सप्लोर करने के लिएसफेदKLEL के गुण, B16F10 मेलेनोमा सेल मॉडल का उपयोग मेलानोजेनेसिस पर निरोधात्मक प्रभाव का अध्ययन करने के लिए किया गया था। सेलुलर टायरोसिनेस गतिविधि के लिए, जैसा कि अंजीर में दिखाया गया है। 5 ए, केएलईएल (32.35 प्रतिशत) 500 यूजी / एमएल पर केएएल (14.85 प्रतिशत) और केएसओएल (13.64 प्रतिशत) की तुलना में सेलुलर टायरोसिनेस गतिविधि पर काफी मजबूत निषेध प्रदर्शित करता है, जब ए-एमएसएच के साथ तुलना की जाती है। उपचारित नियंत्रण कक्ष। बाह्य और अंतःकोशिकीय मेलेनिन सामग्री के लिए, KLEL खुराक-निर्भरता ने B16F10 कोशिकाओं (छवि 5 बी और सी) की मेलेनिन सामग्री को कम कर दिया। ALL (500 ug/mL) का KAL (54.53 प्रतिशत) के साथ बाह्य कोशिकीय मेलेनिन सामग्री (56.13 प्रतिशत) (एक MSH-उपचारित नियंत्रण कक्ष की तुलना में) पर एक तुलनीय निरोधात्मक प्रभाव पाया गया। इसके अलावा, केएलईएल (36.52 प्रतिशत) ने भी केएएल (7.98 प्रतिशत) की तुलना में इंट्रासेल्युलर मेलेनिन सामग्री पर एक मजबूत निरोधात्मक प्रभाव का प्रदर्शन किया। जबकि, केएसओएल ने बाह्य कोशिकीय मेलेनिन सामग्री (17.73 प्रतिशत) पर एक निरोधात्मक प्रभाव भी दिखाया, लेकिन इंट्रासेल्युलर मेलेनिन सामग्री पर कोई प्रभाव नहीं पड़ा। केएएल की तुलना में, मेलेनोजेनेसिस के निषेध पर केएलईएल के मजबूत निरोधात्मक प्रभाव को केएसओ और केएलई के बीच सहक्रियात्मक गतिविधि द्वारा स्पष्ट किया जा सकता है, जो लोशन बेस में केएलई त्वचा को गोरा करने वाले गुणों को बढ़ा सकता है। इन परिणामों ने यह भी साबित कर दिया कि केएलई को प्राकृतिक कॉस्मेटिक प्रोटोटाइप में एक प्रभावी त्वचा को गोरा करने वाले एजेंट के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है।

3.2.6. इन विट्रो साइटोटोक्सिसिटी परख में

KLEL (MTT विश्लेषण) की जैव-अनुकूलता का आकलन करके, NHEF कोशिकाओं की व्यवहार्यता (24, 48, 72 h के बाद) विभिन्न KLEL सांद्रता (0.125− 2 mg/mL) की उपस्थिति में विकसित की गई थी। 95 प्रतिशत (चित्र। 4 ए)। इससे पता चला कि केएलईएल मनुष्यों के लिए विषाक्तता पैदा नहीं करेगा। जबकि B1610 मेलेनोमा कोशिकाओं का व्यापक रूप से त्वचा के अध्ययन में उपयोग किया जाता हैसफेदएजेंट (चटाटिकुन एट अल।, 2019; ली एट अल।, 2019)। B16F10 मेलेनोमा कोशिकाओं में मेलेनोजेनेसिस को दबाने के लिए KLEL की क्षमता के मापन से पहले, KLEL की साइटोटोक्सिसिटी का आकलन किया गया था। जैसा कि अंजीर में दिखाया गया है। 4 बी, यह पुष्टि की गई थी कि केएलईएल बी 16 एफ 10 मेलेनोमा कोशिकाओं के लिए 500 ug/mL से कम एकाग्रता पर विषाक्त नहीं था। जैसे, निम्नलिखित प्रयोगों के लिए 32.5− 500 ug/mL KLEL का उपयोग किया गया था।

4। निष्कर्ष

यह अध्ययन पूर्ण सर्कुलर आर्थिक मॉडल में बहुत महत्वपूर्ण साबित हुआ, क्योंकि यह केनाफ पत्तियों के लिए कॉस्मेटिक उद्योग के लिए त्वचा देखभाल गुणों के साथ उच्च मूल्य वर्धित सामग्री के रूप में नए संभावित अनुप्रयोगों को पेश करता है, अर्थात् एंटीऑक्सीडेंट,बुढ़ापा विरोधी, और विरोधी मेलेनोजेनिक गतिविधियों। अध्ययन में प्रस्तुत निष्कर्षों ने यह भी संकेत दिया कि 0.1 प्रतिशत केएलई के साथ 15 प्रतिशत केएसओ (एफ2) द्वारा तैयार किया गया लोशन फॉर्मूलेशन मानव कोशिकाओं पर कोई विषाक्तता के बिना सर्वोत्तम भौतिक और सूक्ष्मजीवविज्ञानी स्थिरता प्रदान करता है। निरंतरता में, आगे के अध्ययनों को केएलईएल माइक्रोबियल चुनौती परीक्षण और नैदानिक ​​प्रभावकारिता पर भी ध्यान केंद्रित किया जाना चाहिए।

सिस्टैंच पूरक