​मधुमेह नेफ्रोपैथी प्रभाव पर सिस्टांच ट्यूबुलोसा के फेनिलथेनोइड ग्लाइकोसाइड के प्रभाव का पता लगाने के लिए नेटवर्क फार्माकोलॉजी और पशु प्रयोगों पर आधारित

सार: उद्देश्य के प्रभाव का पता लगानासिस्टैंचेफेनिलएथेनॉल ग्लाइकोसाइड(सीपीएचजी) परमधुमेह गुर्दे की बीमारी(डीकेडी) नेटवर्क फार्माकोलॉजी और पशु प्रयोगों पर आधारित है। विधियाँ यूएचपीएलसी-क्यूई-एमएस विधि का उपयोग विश्लेषण करने के लिए किया गया थासीपीएचजी के रासायनिक घटक. कोर घटकों की स्क्रीनिंग के लिए TCMSP और स्विस टारगेट प्रेडिक्शन डेटाबेस का उपयोग किया गया। DKD-संबंधित लक्ष्य प्राप्त करने के लिए OMIM और GeneCards डेटाबेस का उपयोग किया गया। सामान्य लक्ष्य प्राप्त करने के बाद, प्रोटीन इंटरैक्शन नेटवर्क बनाने के लिए STRING वेबसाइट का उपयोग किया गया। GO, KEGG मार्ग विश्लेषण के लिए DAVID डेटाबेस का उपयोग किया गया और "CPhGs कोर घटक-लक्ष्य-मार्ग" नेटवर्क बनाने के लिए साइटोस्केप सॉफ़्टवेयर का उपयोग किया गया। दस चूहों को सामान्य समूह के रूप में यादृच्छिक रूप से चुना गया था, और शेष चूहों को उच्च-चीनी और उच्च-वसा वाले फ़ीड के साथ खिलाया गया था और DKD मॉडल स्थापित करने के लिए STZ का एक एकल इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन दिया गया था। उन्हें मॉडल समूह, डेपाग्लिफ्लोज़िन (1 मिलीग्राम/किग्रा) समूह, और सीपीएचजी उच्च और मध्यम और निम्न खुराक (500, 25{{40}}, 125 मिलीग्राम/किग्रा) समूहों में विभाजित किया गया था, प्रत्येक समूह में 10 जानवर थे, 6 सप्ताह के लिए दवा हस्तक्षेप, सामान्य स्थितियों का अवलोकन किया गया, शरीर का वजन निर्धारित किया गया और हर हफ्ते रक्त शर्करा का परीक्षण किया गया; अंतिम खुराक के 24 घंटे बाद मूत्र एकत्र किया गया। 24-घंटे कुल मूत्र प्रोटीन (24-यूटीपी) का पता लगाएं; उदर महाधमनी से रक्त एकत्र करें और इसे त्याग दें, सीरम को अलग करें, और यूरिया नाइट्रोजन (बीयूएन), यूरिक एसिड (यूए), कुल कोलेस्ट्रॉल (टीसी), ट्राइग्लिसराइड (टीजी), और उच्च रक्तचाप का पता लगाएं। उच्च घनत्व वाले लिपोप्रोटीन (एचडीएल) और निम्न घनत्व वाले लिपोप्रोटीन (एलडीएल) स्तर, एचई स्टेनिंग और मैसन स्टेनिंग का उपयोग गुर्दे के ऊतकों में रोग संबंधी परिवर्तनों को देखने के लिए किया गया था, एलिसा का उपयोग सीरम आईएल-1, आईएल-6, और टीएनएफ-स्तरों का पता लगाने के लिए किया गया था, और वेस्टर्न ब्लॉट का उपयोग गुर्दे के ऊतकों का पता लगाने के लिए किया गया था। JAK2, p-JAK2, STAT3, p STAT3, SOCS3 प्रोटीन अभिव्यक्ति। परिणाम UHPLC-QE-MS तकनीक द्वारा कुल 699 घटकों का पता लगाया गया। स्क्रीनिंग के बाद, CPhGs के 16 मुख्य घटक और 323 संबंधित लक्ष्य प्राप्त किए गए। CPhGs और DKD ने 99 लक्ष्यों को साझा किया। मुख्य लक्ष्य STAT3, SRC, EGFR आदि थे। KEGG मार्ग विश्लेषण ने 151 सिग्नलिंग मार्गों की जांच की, जिसमें दिखाया गया कि IL-17 सिग्नलिंग मार्ग, PI3K/Akt सिग्नलिंग मार्ग, TNF सिग्नलिंग मार्ग, आदि CPhGs द्वारा DKD के उपचार में महत्वपूर्ण भूमिका निभा सकते हैं। CPhGs DKD चूहों के शरीर के वजन को बढ़ा सकते हैं (P＜0.01), पानी की खपत को कम कर सकते हैं (P＜0.01), ग्लूकोज और लिपिड चयापचय को विनियमित कर सकते हैं, 24-UTP और BUN के स्तर को कम कर सकते हैं (P＜0.01), और गुर्दे के ऊतकों में सुधार कर सकते हैं। रोगात्मक क्षति ने गुर्दे के ऊतकों में p-JAK2/JAK2 और p-STAT3/STAT3 के प्रोटीन अभिव्यक्ति को कम कर दिया (P＜0.01) और SOCS3 के प्रोटीन अभिव्यक्ति को बढ़ा दिया (P＜0.01)। निष्कर्ष सीपीएचजी कई घटकों, कई लक्ष्यों और कई मार्गों के माध्यम से डीकेडी में हस्तक्षेप करते हैं, संभवतः जेएके2/

STAT3 सिग्नलिंग मार्ग.

कीवर्ड: सिस्टांच फेनिलएथेनॉल ग्लाइकोसाइड; मधुमेह अपवृक्कता; यूएचपीएलसी-क्यूई-एमएस; नेटवर्क फार्माकोलॉजी; पशु प्रयोग; JAK2 /STAT3 सिग्नलिंग मार्ग

किडनी के रोगियों के लिए सिस्टान्चे को काम करने में कितना समय लगता है?

मधुमेह किडनी रोग (डीकेडी)मधुमेह की सबसे महत्वपूर्ण माइक्रोवैस्कुलर जटिलताओं में से एक के रूप में, यह न केवल प्राथमिक कारक हैदीर्घकालिक वृक्क रोगलेकिन यह दुनिया भर में अंतिम चरण के गुर्दे की बीमारी (ईएसआरडी) का मुख्य कारण भी है। कारण [1-2]। डीकेडी के नैदानिक ​​उपचार में मुख्य रूप से सबसे पहले रक्त शर्करा, रक्तचाप और रक्त लिपिड को नियंत्रित करना और दूसरा गुर्दे के कार्य की रक्षा करना, नेफ्रोटॉक्सिक दवाओं के उपयोग से बचना और जीवनशैली में सुधार करना शामिल है [3-4]। हालांकि, डीकेडी के जटिल रोगजनन और विशिष्ट हस्तक्षेप लक्ष्यों की कमी के कारण, वर्तमान उपचार विकल्पों की सीमाएँ हैं और वे प्रभावी नहीं हैं। अंतिम चरण के डीकेडी की घटना अभी भी बढ़ रही है। इसलिए, प्रभावी प्राकृतिक दवाओं को खोजना बहुत महत्वपूर्ण है।

सिस्टान्चे डेजर्टीकोला वाई. सी． मा यासिस्टैंच सी.सूखे मांसल तनेसिस्टान्चे ट्यूबुलोसा (शेंक) वाइटस्केली पत्तियों वाले [5] को पहली बार "शेन नॉन्ग के मटेरिया मेडिका" में दर्ज किया गया था और उन्हें शीर्ष श्रेणी के रूप में सूचीबद्ध किया गया था। उन्हें "रेगिस्तानी जिनसेंग" [6] के रूप में जाना जाता है। वे मीठे, नमकीन और गर्म होते हैं। , गुर्दे और बड़ी आंत के मेरिडियन में लौटता है, और गुर्दे के यांग को पोषण देने, सार और रक्त को फिर से भरने, आंतों को नम करने और रेचक के प्रभाव डालता है। शोध से पता चलता है कि फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स (CPhGs) इसके मुख्य सक्रिय तत्वों में से एक हैं और इसके विकास के लिए जिम्मेदार हैं।

औषधीय प्रभाव डालने के लिए भौतिक आधार; सिस्टांच अर्क में मधुमेह विरोधी [7-8], यकृत कैंसर विरोधी [9], गुर्दे की सुरक्षा [10-11], न्यूरोप्रोटेक्टिव [12-13] और अन्य औषधीय प्रभाव होते हैं, लेकिन वर्तमान में, CPhGs DKD के उपचार में प्रभावी नहीं हैं। इसके प्रभाव और तंत्र अस्पष्ट हैं।

इस अध्ययन में नेटवर्क फार्माकोलॉजी और आणविक डॉकिंग विधियों [14] का उपयोग किया गया, सीपीएचजी को शोध वस्तु के रूप में लिया गया, डीकेडी के उपचार के लिए इसके मुख्य सक्रिय अवयवों और संभावित लक्ष्यों की भविष्यवाणी और विश्लेषण किया गया और फिर स्ट्रेप्टोज़ोसिन (एसटीजेड) प्रेरित उच्च के संयोजन की स्थापना की गई। लिपिड फ़ीड के साथ खिलाए गए डीकेडी चूहे मॉडल का उपयोग इन विवो शोध के विषय के रूप में किया गया, ताकि संबंधित उपचारों के नैदानिक ​​विस्तार और अनुप्रयोग के लिए संदर्भ प्रदान किया जा सके और कार्रवाई के तंत्र पर आगे के शोध हो सके।

1 सामग्री

1.1 पशु

70-सप्ताह के नर एसडी चूहे जिनका एसपीएफ स्तर, शरीर का वजन (240±20) ग्राम था, झिंजियांग मेडिकल यूनिवर्सिटी के एनिमल एक्सपेरीमेंट सेंटर से खरीदे गए [एक्सपेरीमेंटल एनिमल यूज लाइसेंस नंबर SYXK (नया) 2018-0002], जानवरों को (22 ±2) डिग्री के तापमान, 50% से 70% की सापेक्ष आर्द्रता और 12 घंटे/12 घंटे बारी-बारी से प्रकाश और अंधेरे चक्र में 1 सप्ताह के लिए अनुकूल रूप से पाला गया। प्रयोग को झिंजियांग मेडिकल यूनिवर्सिटी के मेडिकल एक्सपेरीमेंटल एनिमल सेंटर की एनिमल एथिक्स कमेटी (एथिक्स नंबर IACUC-20220127-19) द्वारा अनुमोदित किया गया था।

1.2 अभिकर्मक और औषधियाँ

CPhGs (batch number 201610, purity >80%) झिंजियांग होटन डिचेन कंपनी लिमिटेड द्वारा प्रदान किए गए थे। डेपाग्लिफ्लोज़िन (बैच नंबर NB2248) को एस्ट्राजेनेका, यूके से खरीदा गया था। उच्च-चीनी और उच्च-वसा फ़ीड (कैट. नंबर बोआइगांग-बी1135डीएम) और एसटीजेड (बैच नंबर 2021110307) बीजिंग बोई पोर्ट बायोटेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड से खरीदे गए थे; मूत्र माइक्रोएल्ब्यूमिन (बैच संख्या 20220611), यूरिया नाइट्रोजन (बैच संख्या 20220626), यूरिक एसिड (बैच संख्या 20220613), कुल कोलेस्ट्रॉल (बैच संख्या 20220615), ट्राइग्लिसराइड्स (बैच संख्या 20220616), उच्च घनत्व वाले लिपोप्रोटीन (बैच संख्या 20220614), और निम्न घनत्व वाले लिपोप्रोटीन (बैच संख्या 20220615) नानजिंग जियानचेंग बायोइंजीनियरिंग संस्थान से खरीदे गए थे; इंटरल्यूकिन-6 (IL-6, लॉट नंबर JL20896), इंटरल्यूकिन-1 (IL-1, लॉट नंबर JL20884), और ट्यूमर नेक्रोसिस फैक्टर- (TNF-, लॉट नंबर 13202) शंघाई जियांगलाई बायोटेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड से खरीदे गए; JAK2 खरगोश पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी (लॉट नंबर 22v9316), p-JAK2 खरगोश पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी (लॉट नंबर 78g9360), STAT3 खरगोश पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी (लॉट नंबर 15x8824), p-STAT3 खरगोश पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी (लॉट नंबर 74m1478), SOCS3 खरगोश पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी (लॉट नंबर 31d4841) सभी जियांगसू कियानके बायोटेक्नोलॉजी रिसर्च सेंटर कंपनी लिमिटेड से खरीदे गए; एचआरपी-लेबल बकरी एंटी-खरगोश आईजीजी पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी (बैच संख्या 20000758) वुहान मिटाका बायोटेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड से खरीदी गई; -एक्टिन खरगोश मोनोक्लोनल एंटीबॉडी (बैच संख्या AC230205001), आरआईपीए लाइसिस बफर (बैच संख्या 20220416), बीसीए प्रोटीन सांद्रता निर्धारण किट (बैच संख्या 20230401) बीजिंग सोलेबाओ टेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड से खरीदी गई।

1. 3 उपकरण

वैनक्विश अल्ट्रा-हाई परफॉरमेंस लिक्विड क्रोमैटोग्राफी, क्यू एक्सएक्टिव फोकस हाई-रिज़ॉल्यूशन मास स्पेक्ट्रोमीटर, हेरियस फ्रेस्को17 सेंट्रीफ्यूज, एफसी स्वचालित माइक्रोप्लेट रीडर (थर्मो फिशर साइंटिफिक, यूएसए); जेएक्सएफएसटीपीआरपी-24 ग्राइंडर (शंघाई जिंगक्सिन टेक्नोलॉजी कंपनी, लिमिटेड); मिंगचे डी24 यूवी शुद्ध जल मीटर (जर्मनी मर्क मिलिपोर कंपनी); एक्विटी यूपीएलसी बीईएच सी18 कॉलम (1. 7 माइक्रोन, 2. 1 मिमी×100 मिमी) (अमेरिकन वाटर्स कंपनी); एक्यू चेक परफॉर्मा ब्लड ग्लूकोज मीटर (स्विस रोश कंपनी); सीएम1850यूवी क्रायोस्टेट, डीएम300 अपराइट फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोप (लीका कंपनी, जर्मनी); जीएल-88बी वोर्टेक्स मीटर (हाइमेन क्विलिन बेल इंस्ट्रूमेंट मैन्युफैक्चरिंग कंपनी, लिमिटेड); इलेक्ट्रॉनिक एनालिटिकल बैलेंस (बायो-रेड कंपनी, यूएसए)।

2 विधियाँ

2. 1 यूएचपीएलसी-क्यूई-एमएस विश्लेषण

2.1.1 परीक्षण समाधान की तैयारी

100 मिग्रा सीपीएचजी का वजन करें, 500 μL 80% मेथनॉल मिलाएं, 30 सेकंड के लिए भंवर करें, 1 घंटे के लिए बर्फ के पानी के स्नान में अल्ट्रासोनिकेट करें, 1 घंटे के लिए 5 डिग्री पर खड़े रहने दें, 4 डिग्री पर अपकेंद्रित्र करें, 15 मिनट के लिए 8 आर/मिनट, सतह पर तैरनेवाला चूसें, 0. एक 22μm माइक्रोपोरस झिल्ली के माध्यम से फ़िल्टर करें और 12 डिग्री रेफ्रिजरेटर में स्टोर करें।

2.1.2 क्रोमैटोग्राफिक स्थितियां

ACQUITY UPLC BEH C18 स्तंभ (1. 7 μm, 2. 1 मिमी × 100 मिमी); मोबाइल चरण एसिटोनाइट्राइल (A) -1% फॉर्मिक एसिड (B), ग्रेडिएंट एल्यूशन (0 ~ 11 मिनट, 15% ~ 75% A; 11 से 12 मिनट, 75% से 98% A; 12 से 14 मिनट, 98% A; 14 से 14. 1 मिनट, 98% से 15% A; 14. 1 से 15 मिनट, 15% A); आयतन प्रवाह दर 0 . 5 mL/मिनट; स्तंभ तापमान 35 डिग्री; इंजेक्शन आयतन 5 μL.

2.1.3 मास स्पेक्ट्रोमेट्री स्थितियां

पूर्ण स्कैन ddMS2 पूर्ण स्कैन मोड; म्यान गैस मात्रा प्रवाह दर 45 arb; सहायक गैस मात्रा प्रवाह दर 15 arb; केशिका तापमान 400 डिग्री; NCE मोड में टक्कर ऊर्जा 15% ~ 30% ~ 45% चक्र; स्प्रे वोल्टेज ± 4. 0 केवी।

2.2 नेटवर्क फार्माकोलॉजी अनुसंधान

2. 2. 1 सीपीएचजी

घटक लक्ष्य स्क्रीनिंग: UHPLC-QE-MS द्वारा विश्लेषित रासायनिक घटकों को सापेक्ष सामग्री के अनुसार क्रमबद्ध करें, और उन लोगों को हटा दें जिनकी रासायनिक संरचना अभी तक निर्धारित नहीं की गई है। प्रत्येक घटक के फार्माकोकाइनेटिक मापदंडों को प्राप्त करने के लिए TCMSP डेटाबेस में जांचे गए अवयवों की InChIKey सीरियल नंबर इनपुट करें। मौखिक जैवउपलब्धता (OB) > 30% और दवा-समानता (DL) > 0.18 की शर्तों के आधार पर, जो उम्मीदवार आवश्यकताओं को पूरा करते हैं, उनकी स्क्रीनिंग की जाएगी। लक्ष्य की भविष्यवाणी करने और CPhGs रासायनिक घटक लक्ष्य प्राप्त करने के लिए स्विस लक्ष्य भविष्यवाणी डेटाबेस में प्रत्येक घटक की SMILES संख्या दर्ज करें।

2. 2. 2 डीकेडी

रोग लक्ष्य स्क्रीनिंग ओएमआईएम, जीनकार्ड्स और एनसीबीआई डेटाबेस में रोग लक्ष्यों की खोज के लिए खोज शब्द के रूप में "मधुमेह अपवृक्कता" का उपयोग करें।

2. 2. 3 घटक-लक्ष्य-रोग नेटवर्क निर्माण

सीपीएचजी घटकों और रोगों के क्रॉस-टारगेट को आर सॉफ्टवेयर मैपिंग के माध्यम से प्राप्त किया गया था, और साइटोस्केप 3.7.2 सॉफ्टवेयर का उपयोग घटक-लक्ष्य नेटवर्क प्रणाली के निर्माण के लिए किया गया था, जिसमें विश्लेषण प्लग-इन ने कोर लक्ष्यों का पता लगाया।

2. 2. 4 प्रोटीन-प्रोटीन इंटरैक्शन नेटवर्क (पीपीआई) का निर्माण

घटकों और रोगों के प्रतिच्छेदन लक्ष्य प्रोटीन को STRING डेटाबेस में आयात करें, प्रोटीन-प्रोटीन इंटरैक्शन नेटवर्क (PPI) का निर्माण करें, नेटवर्क में जुड़े नोड्स के बिना प्रोटीन को हटाएँ, और सबसे कम प्रोटीन इंटरैक्शन स्कोर का विश्वास स्तर 0.700 पर सेट करें। एक PPI नेटवर्क बनाएँ, इसके TSV प्रारूप परिणाम डाउनलोड करें, उन्हें साइटोस्केप 3.7.2 सॉफ़्टवेयर में आयात करें, और कोर लक्ष्यों को आगे स्क्रीन करने के लिए विश्लेषण प्लग-इन का उपयोग करें।

2. 2. 5 GO, KEGG विश्लेषण

घटक रोगों के प्रतिच्छेदन लक्ष्यों पर संवर्धन विश्लेषण करने के लिए डेविड डेटाबेस में कार्यात्मक एनोटेशन अनुभाग का उपयोग करें। सबसे पहले विश्लेषण पैरामीटर सेट करें, जीन सूची बॉक्स में प्रतिच्छेदन लक्ष्य दर्ज करें, लक्ष्य पहचानकर्ता के रूप में आधिकारिक-जीन-प्रतीक का चयन करें, डेटा प्रकार (सूची प्रकार) के रूप में जीन सूची का चयन करें, और लक्ष्य स्रोत (प्रजाति) के रूप में "होमो सेपियन्स (प्रजाति)" का चयन करें। रेस)", विश्लेषण मापदंडों की पुष्टि करने के बाद विश्लेषण शुरू करें, GO और KEGG विश्लेषण परिणाम प्राप्त करें, और फिर KEGG और GO विश्लेषण परिणामों के बबल आरेख को खींचने के लिए ImageGP ऑनलाइन ड्राइंग प्लेटफ़ॉर्म का उपयोग करें। साइटोस्केप 3.7.2 सॉफ़्टवेयर घटक-लक्ष्य-मार्ग नेटवर्क चित्र का निर्माण करता है।

2. 2. 6 आणविक डॉकिंग

सबसे पहले PubChem डेटाबेस से SDF प्रारूप में सक्रिय संघटक का 3D संरचना आरेख डाउनलोड करें, फिर US ग्लोबल प्रोटीन डेटाबेस (PDB) से PDB प्रारूप में इंटरसेक्शन लक्ष्य का 3D संरचना आरेख डाउनलोड करें, और अंत में इसे आणविक डॉकिंग के लिए CB-Dock वेबसाइट पर अपलोड करें। प्रमुख डॉकिंग अनुरूपताओं को स्क्रीन करें और उन्हें Pymol के साथ विज़ुअलाइज़ करें।

2.3 पशु प्रयोग

2.3.1 मॉडलिंग, समूहीकरण और औषधि प्रशासन

16 चूहों को यादृच्छिक रूप से सामान्य समूह के रूप में चुना गया और उन्हें साधारण चारा खिलाया गया, और शेष चूहों को उच्च-चीनी और उच्च-वसा वाला चारा खिलाया गया। 6 सप्ताह के बाद, उन्हें 30 मिलीग्राम/किलोग्राम एसटीजेड (पीएच 4.5 सोडियम साइट्रेट बफर में भंग 0.1 एमएमओएल/एल एसटीजेड) का एक बार का इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन दिया गया, और 72 घंटे बाद, उपवास रक्त शर्करा (एफबीजी) का पता लगाने के लिए पूंछ की नस से खून लिया गया। यदि एफबीजी 16.7 एमएमओएल/एल से अधिक या बराबर है, तो मधुमेह मॉडल सफलतापूर्वक स्थापित हो गया था [15]; जारी रखें उन्हें 2 सप्ताह तक उच्च-चीनी और उच्च वसा वाला चारा खिलाया गया। मूत्र ग्लूकोज सकारात्मकता और 20 मिलीग्राम से अधिक या बराबर कुल मूत्र प्रोटीन (यूटीपी) के आधार पर डीकेडी मॉडलिंग को सफल माना गया। जिन चूहों को सफलतापूर्वक मॉडल किया गया था, उन्हें यादृच्छिक रूप से मॉडल समूह, डेपाग्लिफ्लोज़िन समूह (1 मिलीग्राम/किग्रा) और सीपीएचजी उच्च, मध्यम और निम्न खुराक (500, 250, 125 मिलीग्राम/किग्रा) समूहों में विभाजित किया गया था। प्रत्येक प्रशासन समूह को इंट्रागैस्ट्रिक रूप से प्रशासित किया गया था। सामान्य समूह और मॉडल समूह के चूहों को संबंधित दवाएँ दी गईं, और सामान्य समूह और मॉडल समूह के चूहों को कुल 6 सप्ताह के लिए दिन में एक बार गैवेज द्वारा सामान्य खारा की समान मात्रा दी गई। प्रशासन अवधि के दौरान, सामान्य समूह को छोड़कर प्रत्येक समूह के चूहों को उच्च वसा वाला चारा दिया जाता रहा।

2.3.2 जैव रासायनिक संकेतक का पता लगाना

CPhG हस्तक्षेप के 6 सप्ताह बाद, चूहों से 24- घंटे का मूत्र एकत्र किया गया, और 24- घंटे का कुल मूत्र प्रोटीन (24-UTP) मापा गया; FBG स्तरों का पता लगाने के लिए उपवास पूंछ नस से रक्त एकत्र किया गया; उदर महाधमनी से रक्त एकत्र किया गया, 4 डिग्री, 1500 आर/मिनट। सीरम को अलग करने और सीरम यूरिया नाइट्रोजन का पता लगाने के लिए 10 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज करें।

बीयूएन), यूरिक एसिड (यूए), कुल कोलेस्ट्रॉल (टीसी), ट्राइग्लिसराइड (टीजी), उच्च घनत्व वाले लिपोप्रोटीन (एचडीएल), निम्न घनत्व वाले लिपोप्रोटीन (निम्न घनत्व वाले लिपोप्रोटीन एलडीएल) स्तर।

2.3.3 वृक्क ऊतक की विकृतिजन्य आकृति विज्ञान का अवलोकन

चूहों को सोडियम पेंटोबार्बिटल से बेहोश कर दिया गया और मार दिया गया। गुर्दे छील दिए गए, तौले गए, 4% पैराफॉर्मेल्डिहाइड के साथ स्थिर किए गए, निर्जलित, पारदर्शी, मोम में डूबा हुआ, एम्बेडेड, और हेमाटोक्सिलिन-इओसिन (एचई) धुंधलापन के लिए खंडित किया गया।

मैसन अभिरंजन के बाद, ऊतक आकृति विज्ञान को माइक्रोस्कोप के नीचे देखा गया, और एकीकृत ऑप्टिकल घनत्व का विश्लेषण करने और सापेक्ष कोलेजन फाइबर क्षेत्र को मापने के लिए इमेज-प्रो प्लस 6.0 सॉफ्टवेयर का उपयोग किया गया।

2. 3. 4 एलिसा

इस विधि का उपयोग चूहों में सीरम इन्फ्लेमेटरी कारकों के स्तर का पता लगाने के लिए किया गया था। किट के निर्देशों के अनुसार IL-6, IL-1 और TNF- के स्तरों का पता लगाया गया।

2. 3. 5 संबंधित प्रोटीन अभिव्यक्ति का पता लगाने के लिए वेस्टर्न ब्लॉट विधि

चूहे के गुर्दे के ऊतक लिए गए, कुल प्रोटीन निकालने के लिए RIPA लाइसेट मिलाया गया, तथा BCA विधि द्वारा सांद्रता निर्धारित की गई।

सोडियम डोडेसिल सल्फेट-पॉलीएक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन के बाद, PVDF झिल्ली में स्थानांतरित करें, और ब्लॉकिंग के बाद, JAK2 (1: 2000), p-JAK2 (1: 1000), STAT3 (1: 2000), p -STAT3 (1:2000), SOCS3 (1:2000), -एक्टिन (1:2000) एंटीबॉडी, 4 डिग्री पर रात भर इनक्यूबेट करें, HRP-लेबल वाले IgG सेकेंडरी एंटीबॉडी (1:5000) जोड़ें, और कमरे के तापमान पर 1 घंटे के लिए इनक्यूबेट करें, इलेक्ट्रोल्यूमिनेसेंस किट के साथ विकसित, प्रोटीन जेल इमेजर द्वारा उजागर, इमेज जे सॉफ्टवेयर का उपयोग करके

टुकड़ों का मात्रात्मक विश्लेषण। -एक्टिन को आंतरिक संदर्भ के रूप में उपयोग करते हुए, लक्ष्य बैंड और आंतरिक संदर्भ बैंड के ग्रे मान का अनुपात सापेक्ष प्रोटीन अभिव्यक्ति है।

2.4 सांख्यिकीय विश्लेषण

डेटा को SPSS 25.0 सॉफ़्टवेयर द्वारा संसाधित किया गया था, और डेटा को (x±s) के रूप में व्यक्त किया गया था। समूहों के बीच तुलना के लिए विचरण का एकतरफा विश्लेषण इस्तेमाल किया गया था।<0.05 indicates that the difference is statistically significant.