बीटा वल्गरिस रूब्रा एल (चुकंदर) पील मेथनॉल एक्सट्रैक्ट ऑक्सीडेटिव स्ट्रेस को कम करता है और H2O2 प्रेरित ऑक्सीडेटिव स्ट्रेस्ड ह्यूमन अम्बिलिकल वेन एंडोथेलियल सेल्स में VEGF एक्सप्रेशन को बढ़ाकर सेल प्रोलिफरेशन को उत्तेजित करता है।

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लैला नाइफ अल-हरबी 1,*, सुभाष-बाबू पांडुरंगन 1, अलहानौफ मोहम्मद अल-दोसारी 1, घलिया शामलान 1, अहमद मोहम्मद सलामतुल्ला 1, अली ए अलशतवी 1 और आमना अब्दुल्ला अलोटिबी 2

सार:पॉलीफेनोल्स की एंटीऑक्सीडेंट क्षमता औरflavonoidsआहार एजेंटों में मौजूद प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (आरओएस) के विकास को रोकने और ऑक्सीडेटिव तनाव / प्रेरित नेक्रोसिस से एंडोथेलियल चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं की रक्षा करने में सहायता करता है। चुकंदर (बीटा वल्गरिस वर। रूब्रा एल।; बीवीआर) आमतौर पर खपत की जाने वाली सब्जी है जो कि एक समृद्ध स्रोत का प्रतिनिधित्व करती है।एंटीऑक्सीडेंट. चुकंदर के छिलके के बायोएक्टिव यौगिक और मानव गर्भनाल एंडोथेलियल कोशिकाओं (HUVECs) में उनकी भूमिका पर अभी भी शोध किया जा रहा है। वर्तमान अध्ययन में, चुकंदर के छिलके मेथनॉल अर्क (बीपीएमई) तैयार किया गया था, और एचयूवीईसी में जैव-प्रभावकारिता, परमाणु अखंडता, माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली क्षमता, संवहनी कोशिका वृद्धि, और इम्यूनोरेग्यूलेशन-संबंधित जीन अभिव्यक्ति स्तरों पर इसके प्रभाव को प्रेरित किया गया था।ऑक्सीडेटिवतनाव का विश्लेषण किया गया। गैस क्रोमैटोग्राफी-मास स्पेक्ट्रोस्कोपी (जीसी-एमएस) के परिणामों ने पुष्टि की कि बीपीएमई में 5-हाइड्रॉक्सीमिथाइलफुरफुरल (32.6 प्रतिशत), मिथाइल पाइरूवेट (15.13 प्रतिशत), फुरफुरल (9.98 प्रतिशत), और2,3-डायहाइड्रो{{11} शामिल हैं। },5-डायहाइड्रॉक्सी-6-मिथाइल-4H-Pyran-4-एक (12.4 प्रतिशत)। बीपीएम ने प्रभावी रूप से सेल प्रसार को बढ़ाया और एमटीटी परख द्वारा पुष्टि की गई; प्रोपीडियम आयोडाइड (पीआई) धुंधला परख द्वारा परमाणु अखंडता की पुष्टि की गई थी; माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली क्षमता (∆ψm) की पुष्टि जेसी -1 धुंधला परख द्वारा की गई थी। एनेक्सिन वी परख ने पुष्टि की कि बीपीएमई-उपचारित एचयूवीईसी ने 99 प्रतिशत व्यवहार्य कोशिकाएं दिखाईं, लेकिन एचयूवीईसी में केवल एच2ओ2 के साथ इलाज किए गए एचयूवीईसी में केवल 39.8 प्रतिशत व्यवहार्यता दिखाई गई। इसके अलावा, एचयूवीईसी के बीपीएमई उपचार ने 48 घंटे के लिए लिपिड पेरोक्साइड (एलपीओ) की एमआरएनए अभिव्यक्ति को कम कर दिया और एनओएस -3, एनआरएफ -2, जीएसके -3, जीपीएक्स, एंडोथेलियल नाइट्रिक ऑक्साइड सिंथेज़ (ईएनओएस) को बढ़ा दिया। ), और संवहनी कोशिका वृद्धि कारक (VEGF) mRNA अभिव्यक्ति स्तर। हमने पाया कि BPME उपचार ने प्रिनफ्लेमेटरी (परमाणु कारक-F (F-κ), ऊतक परिगलन कारक- (TNF-), टोल-जैसे रिसेप्टर -4 (TLR -4), इंटरल्यूकिन {{37} को कम कर दिया। } (आईएल-1 ))और संवहनीसूजन और जलन(इंट्रासेल्युलर आसंजन अणु (ICAM), संवहनी कोशिका आसंजन अणु (VCAM), EDN1, IL-1) -संबंधित mRNA अभिव्यक्तियाँ। अंत में, चुकंदर के छिलके के उपचार ने संवहनी चिकनी कोशिका वृद्धि कारकों और सूक्ष्मनलिका विकास को प्रभावी ढंग से बढ़ाया, जबकि इससे संवहनी भड़काऊ नियामकों में कमी आई। बीपीएम संवहनी चिकनी कोशिका पुनर्जनन, ऊतक की मरम्मत और एंटी-एजिंग क्षमता के लिए फायदेमंद हो सकता है।

कीवर्ड:चुकंदर; ऑक्सीडेटिव तनाव; माइटोकॉन्ड्रिया; वाहिकाजनन; सूजन और जलन

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1 परिचय

एंजियोजेनेसिस शरीर के मौजूदा वास्कुलचर [1] से वास्कुलोजेनेसिस की शारीरिक प्रक्रिया है। यह न केवल भ्रूण के विकास और प्रजनन के लिए बल्कि कोशिका चक्र और ऊतक की मरम्मत के लिए भी आवश्यक है [2,3]। हालांकि, यह विभिन्न रोगों के रोगजनन से जुड़ा है, जैसे कि ट्यूमर का विकास, रुमेटीइड गठिया, और विभिन्न इस्केमिक और सूजन संबंधी रोग [3–5]। संवहनी एंडोथेलियम रक्त वाहिका स्वर और प्रतिरक्षा और भड़काऊ प्रतिक्रियाओं [6,7] को विनियमित करके संवहनी हेमोस्टेसिस को बनाए रखने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। एंडोथेलियल कोशिकाएं (ईसी) पतली मोनोसेलुलर परतें होती हैं जो रक्त वाहिकाओं की सभी आंतरिक सतहों को रेखाबद्ध करती हैं और विभिन्न प्रकार के अणु उत्पन्न करती हैं जो स्थानीय या दूर के स्थलों पर कार्य करती हैं [7]। एंडोथेलियम शरीर के होमियोस्टेसिस के लिए मौलिक है, और एंडोथेलियम सेल प्रतिक्रिया में किसी भी परिवर्तन से एथेरोस्क्लेरोसिस और उच्च रक्तचाप [6,8,9] जैसी सूजन और संवहनी रोग प्रक्रियाओं की प्राथमिक घटनाएं होती हैं। ये रोग ऑक्सीडेटिव तनाव का कारण बनते हैं, जो ईसी संरचना और कार्य अखंडता को बदल देता है और एंडोथेलियल डिसफंक्शन [9] की ओर जाता है। मानव नाभि नस ईसीएस (HUVECs) का व्यापक रूप से मानव संवहनी एंडोथेलियम-संबंधित अध्ययनों के लिए एक मॉडल के रूप में उपयोग किया गया है। इसके अलावा, वे एंडोथेलियम फ़ंक्शन [10] में शामिल मुख्य जैविक मार्गों के अध्ययन के लिए एक उपयोगी मॉडल का प्रतिनिधित्व करते हैं। बायोएक्टिव यौगिक और फाइटोकेमिकल्स फल, सब्जियों, हरी जड़ी-बूटियों और कई पौधों में प्रचुर मात्रा में पाए जाते हैं, जो कई स्वास्थ्य लाभ प्रदर्शित करते हैं, जैसे कि विरोधी भड़काऊ, एंटीऑक्सिडेंट, एंटीकार्सिनोजेनिक और एंजियोजेनिक गुण [11-13]। इस संबंध में, लाल चुकंदर (बीटा वल्गरिस वर। रूब्रा एल।; बीवीआर) ऐमारैंथेसी परिवार से संबंधित है और इसे उच्च स्तर के एंटीऑक्सिडेंट [14,15] के सर्वोत्तम स्रोतों में से एक के रूप में वर्गीकृत किया गया है। विशेष रूप से, इसमें कई फाइटोकेमिकल्स होते हैं जो जैविक रूप से सक्रिय होते हैं, जिनमें शामिल हैंसुपारी, फ्लेवोनोइड्स,polyphenols, चिकित्सीय एंजाइम, एस्कॉर्बिक एसिड, डीहाइड्रोस्कॉर्बिक एसिड (डीएचएए), और अकार्बनिक नाइट्रेट (एनओ 3) [16-18]। इसके अलावा, यह पोटेशियम, कैल्शियम, मैग्नीशियम, सोडियम, लोहा, जस्ता, फॉस्फोरस, तांबा और मैंगनीज जैसे मूल्यवान आवश्यक पोषक तत्व प्रदान करता है [19]। कई अध्ययनों से पता चला है कि लाल चुकंदर के अर्क (जड़) में इसके हाइपोग्लाइकेमिक, लिपिड-लोअरिंग, एंटी-इंफ्लेमेटरी, एंटीहाइपरटेन्सिव और एंटीप्रोलिफेरेटिव गुणों [20–22] के कारण कई लाभकारी प्रभाव होते हैं। इन सभी लाभकारी गुणों को बायोएक्टिव यौगिकों की मुक्त मूलक-स्कैवेंजिंग क्षमताओं से जोड़ा जा सकता है। इस प्रकार, लाल चुकंदर के सेवन को कई पोषण और स्वास्थ्य लाभों से जोड़ा गया है। इसके पोषण मूल्य के कारण, इसका उपयोग ऑक्सीडेटिव तनावों के खिलाफ एक कार्यात्मक खाद्य स्रोत के रूप में किया जा सकता है जो पुरानी चयापचय संबंधी बीमारियों को प्रेरित करता है, जैसे कि टाइप 2 मधुमेह और हृदय रोग [23]। साहित्य समीक्षा के आधार पर, बीटा वल्गरिस में शक्तिशाली एंटीऑक्सीडेंट, इम्यूनोरेगुलेटरी और एंजियोजेनिक गुण होते हैं। चुकंदर के पत्तों में एपिजेनिन पाया गया है; यह जिगर और आंतों की कोशिकाओं में एंटीप्रोलिफेरेटिव प्रभाव डालता है, और यह एएमपीके सक्रियण [24,25] के माध्यम से उच्च वसा वाले आहार-प्रेरित मोटापे की सहवर्तीता में सुधार कर सकता है। डी सिल्वा एट अल।, (2020) [26] ने पहचाना कि बीटा वल्गरिस संवहनी ईसी को बाहरी रूप से प्रेरित ऑक्सीडेटिव तनाव से बचाता है, जो इस संयंत्र में मौजूद कई बायोएक्टिव यौगिकों के संयुक्त प्रभाव के कारण हो सकता है। अब तक, बीटा वल्गरिस रूट पील के ईसी प्रसार और एंजियोजेनेसिस प्रभाव के लिए यंत्रवत कार्रवाई पर शोध किया गया है। इसलिए, हमने एचयूवीईसी में सेलुलर आकारिकी और जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण का उपयोग करके बीटा वल्गरिस रूट पील से संबंधित संवहनी कोशिका प्रसार, सूक्ष्मनलिका विकास, ऑक्सीडेटिव तनाव और एंजियोजेनेसिस क्षमता की जांच करने के लिए वर्तमान अध्ययन का संचालन करने का लक्ष्य रखा है। मानव संवहनी ईसीएस में परमाणु अखंडता, सूक्ष्मनलिका विकास, माइटोकॉन्ड्रियल दक्षता और कोशिका चक्र उत्तेजना से जुड़े लाल चुकंदर के छिलके मेथनॉल अर्क के एंजियोजेनिक प्रभावों का पता लगाया जाता है।

2। सामग्री और प्रणालियां

2.1. चुकंदर की तैयारी(बीटा वल्गरिस रूब्रा एल.) मेथनॉल एक्सट्रैक्ट ताजा चुकंदर के नमूने (बीटा वल्गरिस वर। रूब्रा एल।; बीवीआर।) शुरू में सब्जी की दुकानों, रियाद, किंगडम ऑफ सऊदी अरब (केएसए) से प्राप्त किए गए थे। ताजा चुकंदर को आसुत जल से धोया जाता है ताकि तने और दूषित तत्व खत्म हो जाएं। बाहरी त्वचा को छीलकर छोटे-छोटे टुकड़ों में काट लिया जाता है। नमूनों को गर्म हवा के ओवन में 40 Cand पर सुखाया गया और फिर इलेक्ट्रॉनिक ब्लेंडर का उपयोग करके पाउडर बनाया गया। फिर, 5{{10}}0 पाउडर को 1 लीटर मेथनॉल (सिग्मा, सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) युक्त बाँझ बोतल में 24 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर निकाला गया। एक प्रकार के बरतन और तीन बार दोहराया। बाद में, एक व्हाटमैनफिल्टर (व्हाटमैन, क्लिफ्टन, एनजे, यूएसए) का उपयोग अर्क को फ़िल्टर करने के लिए किया गया था। अंत में, दबाव को कम करके, विलायक को अर्क से अलग किया गया था, और अर्क को मेथनॉल के वाष्पीकरण के बाद एक ठोस सूखे पदार्थ के रूप में एकत्र किया गया था। निकाले गए नमूने को आगे के उपयोग तक 4 C पर एक रेफ्रिजरेटर में संग्रहीत किया गया था। 2.2. गैस क्रोमैटोग्राफी और मास स्पेक्ट्रोस्कोपी विश्लेषण चुकंदर छील मेथनॉल निकालने (बीपीएमई) को सिलिका केशिका स्तंभ (3 0 मीटर × {{6 0}}.25 मिमी आईडी × 0 में अंतःक्षिप्त किया गया था। .25 माइक्रोन फिल्म मोटाई) जीसी-एमएस उपकरण (एगिलेंट 6890एन/5973आई, कैलिफोर्निया, सीए, यूएसए) के साथ रासायनिक संरचना का पता लगाने के लिए एक बड़े पैमाने पर चयनात्मक डिटेक्टर के साथ। उपकरण का तापमान प्रारंभिक 7{{90} C के रूप में सेट किया गया था, 2 मिनट, 30 5 C को 20 C/मिनट पर, उसके बाद 1 मिनट के लिए पकड़े हुए। कुल जीसी चलने का समय हीलियम गैस (99.999 प्रतिशत) के साथ वाहक गैस (1.2 एमएल/मिनट की निरंतर साथी दर), इंजेक्टर तापमान के रूप में 250 डिग्री सेल्सियस, और आयन स्रोत के रूप में 230 डिग्री सेल्सियस के रूप में 45 मिनट पर सेट किया गया था। तापमान। जीसी-एमएस स्पेक्ट्रम के आधार पर, संबंधित घटक के सापेक्ष प्रतिशत की गणना की गई, और अज्ञात घटक के द्रव्यमान स्पेक्ट्रा की पहचान ज्ञात 62, 000 पैटर्न के साथ तुलना करके की गई, जो राष्ट्रीय मानक और प्रौद्योगिकी संस्थान में उपलब्ध हैं। कंप्यूटर लाइब्रेरी (NIST08)। 2.3. सेल कल्चर मैटेरियल्स एंड केमिकल्स HUVECs को अमेरिकन टाइप कल्चर कलेक्शन (ATCC, मानस, VA, यूएसए) से खरीदा गया था। सेल संस्कृति सामग्री जैसे डल्बेको के संशोधित ईगल माध्यम (डीएमईएम), ईडीटीए, ट्रिप्सिन, और अन्य गिब्को (पैस्ले, यूके) से प्राप्त किए गए थे। पेनिसिलिन-स्ट्रेप्टोमाइसिन (PS) और भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS) को Hyclone Laboratories, USA से खरीदा गया था। आणविक जीव विज्ञान प्रयोग में प्रयुक्त रसायन सिग्मा-एल्ड्रिच से प्राप्त किए गए थे, विशेष रूप से, एमटीटी [3-(4,5-डाइमिथाइलथियाज़ोल-2-yl)-2,5- डाइफेनिलटेट्राजोलियम ब्रोमाइड], पीआई, और जेसी -1 दाग। SYBR ग्रीन पीसीआर मास्टर मिक्स और सीडीएनए सिंथेसिस किट क्यूजेन (हिल्डेन, जर्मनी) से प्राप्त किए गए थे। 2.4. HUVECs HUVECs को DMEM में संवर्धित किया गया और 1 प्रतिशत PS और 10 प्रतिशत FBS कॉम्प्लेक्स के साथ पूरक किया गया। कोशिकाओं को 37 C, 5 प्रतिशत CO2 पर आर्द्र वातावरण में ऊष्मायन किया गया था, और लगभग हर 3 दिनों में उप-सुसंस्कृत किया गया था। 2.5. एमटीटी परख एचयूवीईसी (1 × 104 कोशिकाओं / कुएं) द्वारा सेल व्यवहार्यता और सेल प्रसार एक रखरखाव माध्यम के साथ सुसंस्कृत थे और एक 96-वेल कल्चर प्लेट में रात भर पालन करने की अनुमति दी गई थी। फिर, एमटीटी परख प्लेट मैप के अनुसार बीपीएमई (0, 0.05, 0.1, 0.2, 0.4, 0.8, 1.6, और 3.2 माइक्रोग्राम / एमएल) की बढ़ती सांद्रता वाले माध्यम को एक नए संस्कृति माध्यम से बदल दिया गया और 24 और 48 के लिए इनक्यूबेट किया गया। एच; अनुपचारित कोशिकाओं को नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया गया था। ऊष्मायन अवधि के बाद, प्रयोगात्मक कोशिकाओं को एमटीटी (3-[4,5-डाइमिथाइलथियाज़ोल-2-yl]-2 के 5 मिलीग्राम/एमएल के 20 µ एल/वेल के साथ इलाज किया गया था। 5-डाइफेनिलटेट्राजोलियम ब्रोमाइड जो डाइमिथाइल सल्फोऑक्साइड (डीएमएसओ) में घुल गया था और इसके अलावा 37 डिग्री सेल्सियस पर 4 घंटे के लिए इनक्यूबेट किया गया था। फिर, माध्यम को त्याग दिया गया था, और उत्पादित बैंगनी फॉर्मेज़न को 100 प्रतिशत डीएमएसओ के 100 माइक्रोन में भंग कर दिया गया था। 570 एनएम तरंग दैर्ध्य पर एक माइक्रोप्लेट रीडर (थर्मो साइंटिफिक, वॉलथम, एमए, यूएसए) का उपयोग करके समाधान के अवशोषण को मापा गया था। सेल प्रसार के प्रतिशत (प्रतिशत) की गणना निम्नलिखित समीकरण द्वारा की गई थी: (नमूना का अवशोषण/नियंत्रण का औसत अवशोषण) × 100। 2.6। प्रायोगिक डिजाइन वर्तमान सेल प्रसार परख के अनुसार, बीपीएमई (0.1 और 0.2 माइक्रोग्राम/एमएल) की कम सांद्रता का परीक्षण किया गया जिसमें विषाक्तता के बिना एचयूवीईसी और सूक्ष्मनलिका आकारिकी का प्रसार हुआ। बीपीएमई की 0.1 और 0.2 माइक्रोग्राम/एमएल खुराक की मात्रा का चयन किया गया और सेल प्रसार, विरोधी भड़काऊ, एंजियोजेनिक और एपोप्टोटिक क्षमता का निर्धारण करने के लिए 48 घंटे के लिए एचयूवीईसी के 10 मिमी और एच2ओ के 10 मिमी प्रेरित ऑक्सीडेटिव-तनाव वाले एचयूवीईसी के साथ इलाज किया गया। (आकृति 1)। दोनों समूहों में 48 घंटे के लिए वाहन नियंत्रण भी बनाए रखा गया था। दोनों प्रायोगिक समूहों में क्वेरसेटिन (10 माइक्रोन) का उपयोग संदर्भ नियंत्रण के रूप में किया गया था। ऊष्मायन के बाद, बीडीटीएम माइटोस्क्रीन (जेसी -1) किट का उपयोग करके सेल और परमाणु आकारिकी और माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली क्षमता के लिए अनुपचारित और प्रयोगात्मक कोशिकाओं का विश्लेषण किया गया था; एपोप्टोसिस को साथी साइटोमेट्री में एनेक्सिन वी / एपोप्टोसिस-आधारित सेल छँटाई विधि द्वारा निर्धारित किया गया था। ऑक्सीडेटिव तनाव, प्रिनफ्लेमेटरी और एंजियोजेनेसिस-संबंधित जीन अभिव्यक्ति के स्तर की जांच की गई।

2.7. परमाणु क्षति के लिए प्रोपीडियम आयोडाइड धुंधला परख HUVECs में 0.1 और 0 के साथ उपचार के बाद विशिष्ट परमाणु क्षति, पाइकोनोसिस या एपोप्टोटिक रूपात्मक परिवर्तनों के लिए सेलुलर आकारिकी। HUVECs में BPME (H2O2 के साथ या बिना) के 2 माइक्रोग्राम / एमएल उल्टे प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी के तहत पीआई धुंधला विश्लेषण का उपयोग करके निर्धारित किया गया था, जैसा कि लेइट एट अल द्वारा वर्णित है। [27].

2.8. जेसी द्वारा माइटोकॉन्ड्रियल मेम्ब्रेन पोटेंशियल (∆ψm) की परख -1 डाई स्टेनिंग माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली (∆ψm) की क्षमता को JC -1 परख द्वारा वाहन नियंत्रण में माइटोकॉन्ड्रियल दक्षता का आकलन करने के लिए निर्धारित किया गया था और {{4} }.1 और 0.2 माइक्रोग्राम/एमएल बीपीएमई-उपचारित एचयूवीईसी (H2O2 के साथ और बिना)। संक्षेप में, जेसी -1 धुंधला समाधान संस्कृति माध्यम की समान मात्रा के साथ मिलाया गया था और फिर प्रयोगात्मक एचयूवीईसी में जोड़ा गया और 37 डिग्री सेल्सियस पर 20 मिनट के लिए अंधेरे में ऊष्मायन किया गया। फिर, अनबाउंड JC -1 डाई को 200 µL JC -1 का उपयोग करके 4 C पर धुलाई बफर को धीरे से दो बार धोया गया। बाद में, जेसी -1 धुंधला के खिलाफ जे-एग्रीगेट का संचय एक प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप का उपयोग करके प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी के तहत देखा गया था, और छवियों को कैप्चर किया गया था। इसके अलावा, माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली की क्षमता को बीडीटीएम माइटोस्क्रीन (जेसी -1) किट का उपयोग करके फ्लो साइटोमेट्री में मापा गया था।

2.9. फ्लो साइटोमेट्री का उपयोग करते हुए एनेक्सिन वी / एपोप्टोसिस विश्लेषण साथी साइटोमेट्री-आधारित एनेक्सिन वी / पीआई डिटेक्शन किट (सिग्मा केमिकल्स, यूएसए) विधि का उपयोग व्यवहार्य, प्रॉपोपोटिक, प्रारंभिक एपोप्टोटिक और नेक्रोटिक कोशिकाओं को निर्धारित करने के लिए किया गया था। ऑक्सीडेटिव तनाव-प्रेरित एचयूवीईसी (1 × 1 0 5/अच्छी तरह से) को 24-वेल प्लेट्स में चढ़ाया गया और बीपीएमई (0.1 और 0.2 माइक्रोग्राम/एमएल) या वाहन नियंत्रण के साथ इनक्यूबेट किया गया। 48 घंटे ऊष्मायन के बाद, कोशिकाओं को 5 µL एनेक्सिन V-fluorescein isothiocyanate (FITC) के 400 µ l और बाध्यकारी बफर युक्त PI के 5 µ l में इनक्यूबेट किया गया था; इसके बाद, कोशिकाओं को कमरे के तापमान (आरटी) पर 15 मिनट के लिए अंधेरे में रखा गया। एपोप्टोटिक (पीआई नेगेटिव और एनेक्सिन वी पॉजिटिव) और लेट एपोप्टोटिक (पीआई-पॉजिटिव और एनेक्सिन वी पॉजिटिव) कोशिकाओं [28] की पहचान करने के लिए साथी साइटोमेट्री (बीडी बायोसाइंसेज, सैन जोस, सीए, यूएसए) द्वारा कोशिकाओं का विश्लेषण किया गया था।

2.10. मात्रात्मक वास्तविक समय पीसीआर विश्लेषण फास्टलेन® सेल टू सीडीएनए किट (क्यूजेन, हिल्डेन, जर्मनी) का उपयोग वाहन नियंत्रण से कुल आरएनए और संश्लेषण सीडीएनए निकालने के लिए किया गया था, बीपीएमई-उपचारित एचयूवीईसी (एच 2 ओ 2 के साथ और बिना) एक मात्रात्मक पीसीआर (क्यूपीसीआर) अर्धस्वचालित का उपयोग करके उपकरण (एप्लाइड बायोसिस्टम्स, फोस्टर सिटी, सीए, यूएसए)। (लिपिड पेरोक्साइड, एनओएस -3), एंटीऑक्सिडेंट (एनआरएफ -2, जीएसके -3, और जीपीएक्स), प्रिनफ्लेमेटरी (परमाणु कारक-κ (एनएफ- κ) सहित ऑक्सीडेटिव तनाव के अभिव्यक्ति स्तर, ट्यूमर नेक्रोसिस फैक्टर- (TNF-), इंटरल्यूकिन -1 (IL -1), संवहनी कोशिका वृद्धि कारक (VEGF), टोल-जैसे रिसेप्टर -4 (TLR -4)) , और संवहनी सूजन (इंट्रासेल्युलर आसंजन अणु (ICAM), संवहनी कोशिका आसंजन अणु (VCAM), EDN1 और एंडोथेलियल नाइट्रिक ऑक्साइड सिंथेज़ (eNOS)) -संबंधित जीन और संदर्भ जीन, -एक्टिन, का विश्लेषण HUVECs में किया गया और विधि द्वारा इसकी मात्रा निर्धारित की गई। युआन एट अल। [29]। प्रवर्धन मूल्यों (∆Ct) की गणना सीटी (उपचार) और सीटी (नियंत्रण) के बीच के अंतर से की गई थी। 2−∆∆Ct मान की अभिव्यक्ति का उपयोग करके जीन अभिव्यक्ति की साजिश रची गई थी।

2.11. सांख्यिकीय विश्लेषण सभी प्रयोगों को तीन गुना किया गया था, और परिणामी डेटा को माध्य मान ± मानक विचलन (एसडी) के रूप में व्यक्त किया गया था। समूहों के बीच अंतर का सांख्यिकीय विश्लेषण SPSS सॉफ़्टवेयर (संस्करण 28.5, SAS Institute Inc., Cary, NC, USA) का उपयोग करके विचरण (ANOVA) के एक-तरफ़ा विश्लेषण द्वारा किया गया था। फिर, महत्वपूर्ण अंतर पाए जाने पर तुकी का बहु तुलना परीक्षण किया गया। सभी परिणाम प्रत्येक समूह में छह प्रतिकृति के लिए औसत ± एसडी के रूप में प्रस्तुत किए गए थे। एक पी-वैल्यू <0.05 को="" संकेत="" माना="" जाता="" था-="" कठबोली="">

प्रतिरक्षा में सुधार के लिए सिस्टैंच

3। परिणाम

3.1. बीपीएमई में बायोएक्टिव अणु जीसी-एमएस (टर्बोमास, पर्किनएल्मर) का उपयोग करके बीपीएमई के रासायनिक घटकों की पुष्टि की गई। चुकंदर के छिलके के अर्क की रासायनिक संरचना को नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ स्टैंडर्ड एंड टेक्नोलॉजी (NIST) स्पेक्ट्रल डेटाबेस के साथ उपलब्ध मास स्पेक्ट्रा की तुलना करके निर्धारित किया गया था। जीसी-एमएस के परिणामों ने पुष्टि की कि बीपीएमई में हाइड्रोक्सीएसिटोन (8.18 प्रतिशत), 5-हाइड्रॉक्सीमिथाइलफुरफुरल (32.6 प्रतिशत), मिथाइल पाइरूवेट (15.13 प्रतिशत), बीटा-डी-एलोपाइरानोज (1.48 प्रतिशत), फुरफुरल (9.98 प्रतिशत) शामिल हैं। 2-हाइड्रॉक्सी-गामा-ब्यूटिरोलैक्टोन (1.32 प्रतिशत), और 2,3-डायहाइड्रो-3,5-डायहाइड्रॉक्सी- 6-मिथाइल-4एच-पायरान -4-एक (12.4 प्रतिशत; चित्र 2क, तालिका 1)। 3.2. सेल प्रसार HUVECs के विरुद्ध BPME की इन विट्रो सेल प्रसार क्षमता चित्र 2b में प्रस्तुत की गई है। वाहन नियंत्रण की तुलना में प्रायोगिक समूहों में कोई महत्वपूर्ण कोशिका वृद्धि अवरोध नहीं देखा गया। वर्तमान अध्ययन से इसकी पुष्टि हुई कि एचयूवीईसी के साथ इलाज किए गए बीपीएमई की एकाग्रता में वृद्धि के परिणामस्वरूप 24 घंटे (1{51}}3 प्रतिशत) उपचार की तुलना में 48 घंटे (112 प्रतिशत) के बाद सेल प्रसार और व्यवहार्यता में वृद्धि हुई। इसके अलावा, 48 घंटे के बाद बीपीएमई-उपचारित एचयूवीईसी की हल्की सूक्ष्म छवियों ने आसन्न कोशिका आकृति विज्ञान के समान आकार के साथ सामान्य कोशिकाओं की पुष्टि की, बिना किसी नुकसान के प्रसार (प्रतिकृति) कोशिकाओं की संख्या में वृद्धि स्पष्ट थी (चित्रा 2 सी)। 3.3. सेल और न्यूक्लियर मॉर्फोलॉजी, माइक्रोट्यूब्यूल फॉर्मेशन, और जेसी का विश्लेषण -1 एचयूवीईसी में धुंधला हो जाना चित्रा 3 FL प्रतिदीप्ति सूक्ष्म छवियों में सूक्ष्मनलिका विकास की आकृति विज्ञान को दर्शाता है। H2O 2- प्रेरित ऑक्सीडेटिव-तनाव वाले HUVECs ने HUVECs को नियंत्रित करने की तुलना में खराब प्रसार और आसन्न कोशिकाओं के अनियमित आकारिकी को दिखाया। बीपीएमई के 0.2 माइक्रोग्राम/एमएल के साथ इलाज किए गए सामान्य एचयूवीईसी ने सूक्ष्मनलिका आकारिकी के साथ प्रतिकृति या नियोजेनेसिस के माध्यम से कोशिकाओं का प्रसार दिखाया। इस बीच, बीपीएमई उपचारित कोशिकाओं की 0.1 माइक्रोग्राम/एमएल खुराक ने सूक्ष्मनलिकाएं के प्रारंभिक चरणों के साथ 100 प्रतिशत अनुयाई कोशिकाओं को दिखाया। बीपीएमई के 0.2 माइक्रोग्राम/एमएल के साथ इलाज किए गए ऑक्सीडेटिव-स्ट्रेस्ड एचयूवीईसी ने सूक्ष्मनलिका आकारिकी के साथ नई कोशिकाओं के प्रसार की पहचान की और ऑक्सीडेटिव सेलुलर क्षति को कम किया। इसके अलावा, बीपीएमई के 0.1 माइक्रोग्राम/एमएल ने प्रोलिफ़ेरेटिंग कोशिकाओं के साथ सामान्य संवहनी कोशिका आकृति विज्ञान में भी वृद्धि की।

चित्र 4क, नियंत्रण में और बीपीएमई (0.1 या 0.2 माइक्रोग्राम/एमएल)-उपचारित एचयूवीईसी में, गोलाकार आकार के साथ, परमाणु संरचना की सामान्य आकृति विज्ञान को दर्शाता है। चित्रा 4 बी एच 2 ओ 2 द्वारा प्रेरित ऑक्सीडेटिव तनाव के साथ सामान्य और एचयूवीईसी के पीआई धुंधला के लिए छवियों को दिखाता है। H2O {{1 0}} उपचारित HUVECs अनियमित आकार के नाभिक दिखाते हैं, 3 0 मिनट के बाद संक्षेपण और पाइकोनोसिस प्रदर्शित करते हैं। हालांकि, ऑक्सीडेटिव तनाव के तहत एचयूवीईसी के लिए 0 .2 माइक्रोग्राम / एमएल बीपीएमई उपचार ने सामान्य आकारिकी के साथ गोलाकार नाभिक दिखाया। बीपीएमई अर्क के 0.2 माइक्रोग्राम/एमएल की तुलना में, बीपीएमई के 0.1 माइक्रोग्राम/एमएल का एचयूवीईसी में एच2ओ 2- प्रेरित ऑक्सीडेटिव तनाव के खिलाफ कम सुरक्षात्मक प्रभाव पड़ा।

चित्रा 2. चुकंदर छील मेथनॉल निकालने (ए) के जीसी-एमएस क्रोमैटोग्राम के परिणाम, इन विट्रो सेल प्रसार (बी) में, और एचयूवीईसी में सेल आकारिकी (सी) के लिए प्रकाश माइक्रोस्कोपी छवियों, चुकंदर छील मेथनॉल निकालने (बीपीएमई) की बढ़ती एकाग्रता के साथ इलाज किया जाता है ) (लाल तीर द्वारा उल्लिखित अनुयाई और प्रसार कोशिकाओं का एक समान आकार)। सभी मान माध्य ± SD (n=6) हैं। * पी वाहन नियंत्रण की तुलना में 0.05 से कम या उसके बराबर।

चित्रा 3. वाहन नियंत्रण में फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोपिक पर आधारित माइक्रोट्यूब गठन का विश्लेषण, 0.1 और 0। चुकंदर छील मेथनॉल निकालने (बीपीएमई) की 2 माइक्रोग्राम / एमएल खुराक सामान्य और एच 2 ओ {{6} } 48 घंटे के बाद ऑक्सीडेटिव-तनाव वाले HUVECs को प्रेरित किया। 48 घंटे के बाद, H2O 2- प्रेरित ऑक्सीडेटिव-तनाव वाले HUVECs ने वाहन नियंत्रण की तुलना में परिवर्तित आकारिकी दिखाई। 0.1 और 0.2 माइक्रोग्राम/एमएल चुकंदर के छिलके मेथनॉल अर्क (बीपीएमई) से उपचारित एचयूवीईसी के आयतन में संवहनी सूक्ष्मनलिकाएं के साथ सामान्य आकृति विज्ञान दिखाया गया है, जो चिकनी पेशी कोशिका व्यवहार की सामान्य आकृति विज्ञान से मिलती-जुलती है।

चित्रा 4. वाहन नियंत्रण में परमाणु आकारिकी के लिए प्रोपीडियम आयोडाइड (पीआई) धुंधला विश्लेषण, 0.1 और 0। चुकंदर छील मेथनॉल निकालने (बीपीएमई) के 2 माइक्रोग्राम / एमएल - सामान्य (3 ए) का इलाज और H2O 2- 48 घंटे के बाद ऑक्सीडेटिव-स्ट्रेस्ड (3b) HUVECs को प्रेरित करता है। PIstaining में, वाहन नियंत्रण ने दिखाया कि न्यूक्लियस सिकुड़ा हुआ, पाइकोनोसिस या एपोप्टोटिक न्यूक्लियस के कोई संकेत नहीं के साथ सामान्य प्रतीत होता है। अकेले H2O2 में, उपचारित कोशिकाओं ने 48 घंटे के बाद एक ध्रुवीकृत परमाणु झिल्ली दिखाई। 0.2 माइक्रोग्राम/एमएल बीपीएमई के साथ उपचार ने 0.1 माइक्रोग्राम/एमएल बीपीएमई या क्वेरसेटिन 10 माइक्रोन की तुलना में एच2ओ2-प्रेरित परमाणु झिल्ली ध्रुवीकरण को सामान्य कर दिया।

चित्र 5क एचयूवीईसी के लिए जेसी -1 धुंधला परिणाम दिखाता है, जिसमें नियंत्रण और बीपीएमई-उपचारित कोशिकाएं शामिल हैं; यह आंकड़ा सक्रिय माइटोकॉन्ड्रिया के साथ स्वस्थ कोशिकाओं को दिखाता है, जैसा कि एक्स्ट्रामिटोकॉन्ड्रियल लिपोफिलिक cationic JC -1 (हरा रंग) और J- समुच्चय को लाल रंग इंट्रामाइटोकॉन-ड्रिली के साथ परिवर्तित करके नकारात्मक रूप से चार्ज किए गए माइटोकॉन्ड्रिया द्वारा पुष्टि की गई है। चित्रा 5बी एचयूवीईसी को एच2ओ2 द्वारा प्रेरित ऑक्सीडेटिव तनाव के साथ प्रशासित बीपीएमई के 0 के लिए जेसी -1 धुंधला परिणाम दिखाता है; परिणामों ने पुष्टि की कि लगभग 94 प्रतिशत नकारात्मक चार्ज माइटोकॉन्ड्रिया ने लिपोफिलिक cationic JC -1 (हरा रंग) को 0 के साथ तुलना करने पर लाल रंग J-समुच्चय में बदल दिया। BPME (61.4 प्रतिशत) उपचार के 1 माइक्रोग्राम / एमएल या H2O{{20}}HUVECs में प्रेरित ऑक्सीडेटिव तनाव (2 प्रतिशत)। माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली क्षमता (एमएमपी) को बीपीएमई-उपचारित कोशिकाओं में रेफरेंस ड्रग क्वेरसेटिन की तुलना में अधिक देखा गया। 3.4. एचयूवीईसी में एफएसीएस-असिस्टेड माइटोकॉन्ड्रियल मेम्ब्रेन पोटेंशियल (∆ψm; बीडी माइटोस्कैन) और एनेक्सिन वी/एपोप्टोसिस विश्लेषण चित्र 6 सामान्य एचयूवीईसी के बीपीएमई उपचार के 0.2 माइक्रोग्राम/एमएल के बाद बीडी माइटोस्कैन विश्लेषण में माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली संभावित क्षमता को दर्शाता है। और H2O2 द्वारा प्रेरित ऑक्सीडेटिव तनाव वाले HUVECs। हमने पाया कि बीपीएमई उपचार के 0.2 माइक्रोग्राम / एमएल ने एमएमपी (∆ψm) को बढ़ाकर 92.7 प्रतिशत ± 3.7 प्रतिशत कर दिया, जब अकेले H2O2 के साथ इलाज किए गए HUVECs (27.9 प्रतिशत ± 7.2 प्रतिशत) की तुलना में। इसके विपरीत, क्वेरसेटिन-उपचारित कोशिकाओं ने अकेले BPME और H2O2 या H2O2 के साथ इलाज किए गए HUVECs की तुलना में बढ़े हुए MMP (∆ψm) का 41.4 प्रतिशत ± 1.6 प्रतिशत प्रतिशत दिखाया।

चित्रा 5. वाहन नियंत्रण के लिए जेसी -1 धुंधला का उपयोग करके माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली क्षमता का विश्लेषण, 0 .1 और 0 .2 माइक्रोग्राम / एमएल चुकंदर के छिलके मेथनॉल अर्क (बीपीएमई) का इलाज सामान्य (ए ) और H2O 2- ने 48 घंटे के बाद ऑक्सीडेटिव-तनाव (b) HUVECs को प्रेरित किया। JC{{10}}फ्लूफ्लोरेसेंस छवियां डाई के लाल और हरे रंग के संकेतों की मर्ज की गई छवियों को दिखाती हैं, जो J-समुच्चय बनाम मोनोमेरिक रूप में JC-1 के अनुरूप हैं। हमने अकेले उपचारित HUVECs में कम J-समुच्चय H2O2 पाया। 0 .2 माइक्रोग्राम/एमएल बीपीएमई-उपचारित एचयूवीईसी में उच्च जे-एग्रीगेट्स सीधे (उच्च एमएमपी, m) उच्च माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली क्षमता का प्रतिनिधित्व करते हैं, बीपीएमई के 0.1 माइक्रोग्राम/एमएल या क्वेरसेटिन के 10 माइक्रोन की तुलना में।

4। चर्चा

बाह्य या अंतःकोशिकीय तनाव पर, प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियां (आरओएस) जैवउपलब्धता एंटीऑक्सिडेंट रक्षा से आगे निकल जाती हैं, और ऑक्सीडेटिव तनाव रेडॉक्स सिग्नलिंग और नियंत्रण को बाधित करता है [31]। ऑक्सीडेटिव तनाव का विकास पुराने विकारों के रोगजनकों से जुड़ा है, जैसे कि न्यूरोडीजेनेरेटिव रोग, मधुमेह और एथेरोस्क्लेरोसिस। जैसे, ऑक्सीडेटिव तनाव एंडोथेलियल डिसफंक्शन की शुरुआत करता है और प्रणालीगत सूजन और मैक्रोफेज की भर्ती को बढ़ावा देता है [32]। सक्रिय प्रतिरक्षा कोशिकाएं वाहिकासंकीर्णन में पलायन करती हैं और वाहिकासंकीर्णन से जुड़े साइटोकिन्स और केमोकाइन्स को छोड़ती हैं और चिकनी पेशी कोशिका रक्त वाहिकाओं की रीमॉडेलिंग और संवहनी चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं और संवहनी दीवार को प्रभावित करने वाली सूजन [33]। संवहनी ऑक्सीडेटिव तनाव में वृद्धि संवहनी क्षति, चिकनी मांसपेशियों की कोशिका कठोरता और संरचनात्मक इलास्टिन असामान्यताओं के साथ समाप्त होती है। इसके अलावा, संवहनी ऑक्सीडेटिव तनाव को अन्य रोग स्थितियों में प्रेरित किया गया है, जैसे कि आंत का मोटापा या एथेरोस्क्लेरोसिस, पेरिवास्कुलर वसा ऊतक [34] में NADPH ऑक्सीडेज (NOX -2) गतिविधि में वृद्धि के कारण। संवहनी ऑक्सीडेटिव तनाव उम्र बढ़ने के दौरान होने वाले प्रमुख एपिजेनेटिक परिवर्तनों का कारण बनता है, और यह जल्दी उम्र बढ़ने की प्रक्रिया के साथ समाप्त होता है [35]। जैविक प्रणाली में आरओएस उत्पादन और ऑक्सीडेटिव तनाव का विकास काफी हद तक एनओएक्स -2, एंडोथेलियल ज़ैंथिन ऑक्सीडेज, अनकॉल्ड ईएनओएस और लिपोक्सिनेज [36] के अलावा माइटोकॉन्ड्रियल डिसफंक्शन पर निर्भर करता है। आहार एजेंटों के एंटीऑक्सीडेंट गुण बढ़ी हुई एंटीऑक्सीडेंट क्षमता [26] के माध्यम से आरओएस पीढ़ी को बेअसर कर सकते हैं। जिन्कगो बिलोबा अर्क ऑक्सीएलडीएल-प्रेरित एंडोथेलियल डिसफंक्शन [37] में आरओएस पीढ़ी और लिपोक्सीजेनेस गतिविधि को कम करके एथेरोस्क्लेरोसिस के विकास से बचाता है। इसके अलावा, विभिन्न फेनोलिक यौगिक औरसे फ्लेवोनोइड्सखाद्य पौधों और अनाज में आरओएस और लिपिड पेरोक्सीडेशन [38] को परिमार्जन करने का गुण होता है। चुकंदर के छिलके (बीटा वल्गरिस) मेथनॉलिक अर्क में उच्च फाइबर, एंथोसायनिन और फ्लेवोनोइड जैसे विटेक्सिन और बीटानिन [39] की उपलब्धता के कारण एंटीऑक्सीडेंट क्षमता होती है। वर्तमान अध्ययन में, बीपीएमई को माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली क्षमता, एलपीओ शमन, और संवहनी सूजन से संबंधित एमआरएनए अभिव्यक्ति स्तरों के निषेध पर इसके प्रभाव की खोज के लिए माइटोकॉन्ड्रियल-आश्रित यंत्रवत दृष्टिकोण की पहचान करने के लिए चुना गया था। एमटीटी परख ने पुष्टि की कि बीपीएमई ने सेल प्रसार में उल्लेखनीय रूप से वृद्धि की है, जैसा कि पीआई धुंधला में वृद्धि हुई परमाणु अखंडता द्वारा पुष्टि की गई है 0 की प्रभावी खुराक के साथ। बीपीएमई बनाम परीक्षण किए गए 0 के 2 माइक्रोग्राम / एमएल। 1 माइक्रोग्राम / एमएल बीपीएमई की। कम सांद्रता और उच्चतम गतिविधि के साथ प्रभावी खुराक की पहचान को शारीरिक रूप से सुरक्षित माना जा सकता है। हमने JC -1 का FL प्रतिदीप्ति सूक्ष्म धुंधला पाया, और माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली क्षमता को सामान्य और H2O {{1 0}} दोनों में बहाल किया गया था, BPME के ​​0.2 माइक्रोग्राम / एमएल के बाद बाहरी रूप से उत्तेजित ऑक्सीडेटिव-तनाव वाले HUVECs को प्रेरित किया। इलाज। माइटोकॉन्ड्रियल डिसफंक्शन ऑक्सीडेटिव फास्फारिलीकरण को बदल देता है, जो ग्लूटाथियोन पेरोक्सीडेज द्वारा ऑक्सीजन (O2·−) रेडिकल्स को H2O2 और H2O में बदलने में विफल रहता है। अपर्याप्त ROS विषहरण या अनियंत्रित ROS उत्पादन के कारण, बढ़े हुए माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव तनाव को एथेरोस्क्लेरोसिस [40] से जोड़ा जाता है। चुकंदर के छिलके के अर्क ने माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली क्षमता को प्रभावी ढंग से बहाल किया, जिसने आरओएस डिटॉक्सिफिकेशन और एच 2 ओ 2 पीढ़ी को सफलतापूर्वक बढ़ाया। एनेक्सिन वी / पीआई धुंधला विश्लेषण ने पुष्टि की कि बीपीएमई उपचार ने व्यवहार्य सेल प्रतिशत को बनाए रखा और एच 2 ओ 2 द्वारा प्रेरित ऑक्सीडेटिव तनाव के साथ सामान्य एचयूवीईसी और एचयूवीईसी दोनों में सेल प्रसार चरण को बढ़ाया। इस संदर्भ में, चू एट अल। [41] ने पुष्टि की कि इस्केमिक साइट पर अत्यधिक ROS या बहिर्जात H2O2 के उत्पन्न होने के बाद, प्रत्यारोपित मेसेनकाइमल स्टेम सेल (MSCs) आत्म-प्रसार और बहु-वंश क्षमता को ख़राब कर सकते हैं। पुनर्योजी चिकित्सा में, संवहनी चिकनी पेशी कोशिकाएं धमनी परिधीय प्रतिरोध, रक्तचाप नियामकों, रक्त साथी, और धमनियों की मरम्मत [42] को बनाए रखने के माध्यम से सिकुड़ा हुआ स्वर धमनियों के प्रमुख नियामक हैं। इसके अलावा, ईसीएस का आयु-प्रेरित फेनोटाइप मॉड्यूलेशन घटी हुई सेलुलर सिकुड़न और बढ़ी हुई सेल सेनेस के साथ जुड़ा हुआ है। निरंतर तनाव पर या कम यांत्रिक संवेदनशीलता के कारण, वृद्ध चिकनी पेशी कोशिकाओं [43] में सूक्ष्म पर्यावरण संकेतों के घटे हुए अनुकूलन की पहचान की जाती है। वर्तमान परिणामों ने पुष्टि की कि बीपीएमई उपचार ने व्यवहार्य सेल आबादी को बनाए रखा, जैसा कि एंजियोजेनेसिस क्षमता से पता चलता है। एचयूवीईसी पर बीपीएमई की पहचान की गई प्रसार क्षमता को एलपीओ अभिव्यक्ति में कमी और एंटीऑक्सीडेंट जीन अभिव्यक्ति में वृद्धि द्वारा समर्थित किया गया है। आरओएस और एलपीओ शुरू में माइटोकॉन्ड्रियल कॉम्प्लेक्स (आई और III) और एनओएक्स -4 से सेल प्रसार या भेदभाव [44] के दौरान उत्पन्न होते हैं। अत्यधिक आरओएस प्रतिक्रिया करता है और बायोमोलेक्यूल्स को नुकसान पहुंचाता है, विशेष रूप से जीनोमिक डीएनए की अखंडता को बदल देता है, जो सेलुलर प्रसार और कार्यों के लिए महत्वपूर्ण है [45]। हालांकि, यह पुष्टि की गई है कि एपिगैलोकैटेचिन और टोकोफेरोल जैसे एंटीऑक्सिडेंट पॉलीफेनोल्स का आहार सेवन, कोशिकाओं को ऑक्सीडेटिव तनाव से बचाता है और प्रसार क्षमता को बढ़ाता है [46]। हमारे अध्ययन में, LPO के mRNA अभिव्यक्ति स्तर में कमी आई, और NOS -3, Nrf -2, और eNOS को H2O2 से प्रेरित ऑक्सीडेटिव तनाव के साथ HUVECs में दो गुना बढ़ा हुआ पाया गया। ईएनओएस, एनओएस का प्रमुख आइसोफॉर्म है, जो चिकनी पेशी कोशिकाओं और संवहनी ऊतकों में अधिकांश एनओ · उत्पादों के लिए जिम्मेदार है। NO· सभी प्रकार के संवहनी वाहिकाओं को फैलाता है और ईसीएस में प्लेटलेट एकत्रीकरण और ल्यूकोसाइट आसंजन की रक्षा करता है [47]। इस प्रकार अब तक, हृदय संबंधी जोखिम कारकों के बारे में कई परस्पर विरोधी रिपोर्टें आई हैं, और एंडोथेलियल डिसफंक्शन को ईएनओएस अभिव्यक्ति में कमी या वृद्धि के साथ जोड़ा गया है [48]। संवहनी रोग पर ईएनओएस की उन्नत अभिव्यक्ति देखी गई, जो एच 2 ओ 2 के अतिरिक्त उत्पादन का परिणाम होने की संभावना है। O2·−, एक विघटनकारी उत्पाद, ट्रांसक्रिप्शनल और पोस्ट-ट्रांसक्रिप्शनल तंत्रों के माध्यम से eNOS अभिव्यक्ति को बढ़ा सकता है [49]। संवहनी रोग का रोगजनन O2 · - के साथ प्रतिक्रिया के बाद NO · के त्वरित क्षरण के साथ होता है, और अंत में, ONOO− रूप, जिससे eNOS अनकप्लिंग और NOX एंजाइम डिसफंक्शन [50] होता है। एंटीऑक्सिडेंट एंजाइमों द्वारा ऑक्सीडेटिव तनाव को दबा दिया गया है, और बीपीएमई उपचार के बाद जीएसके -3 और जीपीएक्स के एमआरएनए स्तर में वृद्धि हुई है। बीपीएमई में कई फाइटोकेमिकल्स होते हैं जो जैविक रूप से सक्रिय होते हैं, जिनमें बीटालेन, फ्लेवोनोइड्स, पॉलीफेनोल्स, चिकित्सीय एंजाइम, एस्कॉर्बिक एसिड, डीहाइड्रोस्कॉर्बिक एसिड (डीएचएए), और अकार्बनिक नाइट्रेट (एनओ 3) शामिल हैं, और ये एचयूवीईसी में एंटीऑक्सीडेंट क्षमता के अपग्रेडेशन में शामिल हो सकते हैं। इस संदर्भ में, चा एट अल। (2014) [51] ने बताया कि क्लोरोजेनिक एसिड मानव केराटिनोसाइट्स में ऑक्सीडेटिव तनाव-प्रेरित डीएनए क्षति से प्रभावी रूप से बचाता है। एंडोटिलिन -1 (एडन -1), एक एंडोथेलियम-व्युत्पन्न वैसोकॉन्स्ट्रिक्टर, चिकनी पेशी कोशिका प्रवासन करता है और नाइट्रिक ऑक्साइड-प्रेरित तनाव [52,53] के साथ कोशिकाओं में एक एंटीपैप्टोटिक कारक के रूप में कार्य करता है। संवहनी रीमॉडेलिंग, प्रवासन, प्रसार और बाह्य मैट्रिक्स संचय की प्रक्रियाओं को एडन -1 और NO [54, 55] दोनों द्वारा प्रेरित किया गया है। हमने देखा कि एचयूवीईसी में ऑक्सीडेटिव तनाव के साथ बीपीएमई उपचार के बाद एडन -1 अभिव्यक्ति में वृद्धि हुई है। ऑक्सीडेटिव तनाव या एलपीओ संचय पर, संवहनी सूजन का प्रारंभिक चरण एंडोथेलियल चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं के लिए ल्यूकोसाइट्स का आसंजन है, यह इस्किमिया और एथेरोस्क्लेरोसिस [56] की महत्वपूर्ण घटनाओं के लिए प्रमुख है। इसकी मध्यस्थता VCAM और ICAM अभिव्यक्तियों द्वारा की जाती है; इसे कई केमोकाइन्स और केमोटैक्सिस एजेंटों द्वारा प्रेरित किया गया है, जैसे कि NF-κB, IL-1, और TNF- एक्सप्रेशन [57]। आहार फेनोलिक यौगिक एलाजिक एसिड [58] द्वारा आसंजन अणु अभिव्यक्ति के बाद आईएल -1 सक्रियण का निषेध प्राप्त किया गया है। ऑक्सीडेटिव तनाव के साथ बाहरी रूप से उत्तेजित एचयूवीईसी के लिए बीपीएमई के साथ उपचार ने वीकेएएम, आईसीएएम, एनएफ-κबी, आईएल -1, और टीएनएफ-अभिव्यक्ति के स्तर जैसे संवहनी कोशिका-विशिष्ट प्रिनफ्लेमेटरी कारकों को काफी कम कर दिया। इस संदर्भ में, क्रेस्पो एट अल। [59] ने बताया कि काएम्फेरोल और क्वेरसेटिन ने प्रो-इंफ्लेमेटरी जीन को बाधित किया, जैसे कि VCAM, ICAM, NF- B, और IL -1 भाव, क्रमशः। कुल मिलाकर, बीपीएमई के ऑक्सीडेटिव तनाव और संवहनी सूजन-संबंधी जीन अभिव्यक्ति क्षमता के निषेध ने संवहनी कोशिका वृद्धि कारकों और संभावित रूप से सहायता प्राप्त संवहनी कोशिका प्रसार और विकास की अभिव्यक्ति का पक्ष लिया।

5। निष्कर्ष

वर्तमान निष्कर्ष इस बात की पुष्टि करते हैं कि एंटीऑक्सिडेंट जीन की बढ़ी हुई अभिव्यक्ति ऑक्सीडेटिव तनाव के शमन से जुड़ी थी, जो एचयूवीईसी प्रसार और एंजियोजेनेसिस की हानि को दूर करने में सहायता करती है। हाइड्रॉक्सीमेथिलफुरफुरल युक्त काला लहसुन एचयूवीईसी को टीएनएफ-प्रेरित मोनोसाइट सेल आसंजन के भड़काऊ प्रभाव को दबा देता है और आगे आरओएस पीढ़ी, वीकेएम -1 अभिव्यक्ति, और एनएफ-κB सक्रियण [60] को दबा देता है। इसके अलावा, वह एट अल। [61] ने पुष्टि की कि हाइड्रॉक्सीमिथाइलफुरफुरल में ईसी को हाइपोक्सिया से बचाने की क्षमता है। चुकंदर के छिलके में फ्लेवोनोइड्स, फ्यूरान और एंटीऑक्सीडेंट घटक शामिल होते हैं, जैसे 5-हाइड्रॉक्सीमिथाइलफुरफुरल, मिथाइल पाइरूवेट, फुरफुरल, और 2,3-डायहाइड्रो-3,5- डाइहाइड्रॉक्सी-6-मिथाइल-4H-Pyran-4-एक; ये घटक बढ़ी हुई एंटीऑक्सीडेंट क्षमता और प्रिनफ्लेमेटरी वैस्कुलर स्मूथ मसल सेल आसंजन अणुओं के दमन के लिए जिम्मेदार हैं। चुकंदर के छिलके का उपयोग एंटीऑक्सिडेंट पूल के लिए उत्तेजक के रूप में बाहरी उत्तेजना या पेरोक्सीडेटिव सेलुलर तनाव के आंतरिक रोग संबंधी उत्तेजना को बुझाने के लिए किया गया है। हमारे निष्कर्षों से पता चलता है कि चुकंदर के घटक एचयूवीईसी में चयापचय तनाव और सूजन को कम करने में सहायता करते हैं, जो संवहनी कोशिका प्रसार और एंजियोजेनेसिस के लिए फायदेमंद हो सकता है।

लेखक योगदान:

संकल्पना, एलएनए-एच। और एस.-बीपी; कार्यप्रणाली, एलएनए-एच। और एस.-बीपी; सॉफ्टवेयर, जीएस; सत्यापन, एलएनए-एच। और एस.-बीपी; औपचारिक विश्लेषण, एस.-बीपी, एएमए-डी।, एएए (अली ए अलशतवी) और जीएस; जांच, एलएनए-एच।, एस-बीपी और एएमए-डी।; संसाधन, एलएनए-एच।; डेटा क्यूरेशन, एस.-बीपी और एलएनए-एच .; लेखन- मूल मसौदा तैयार करना, LNA-H. और एस.-बीपी; लेखन-समीक्षा और संपादन, एलएनए-एच।, एएमएस, जीएस और एएए (आमना अब्दुल्ला अलोटिबी); विज़ुअलाइज़ेशन, एस-बी और एएए (अली ए अलशतवी); पर्यवेक्षण, एलएनए-एच।, और एस-बीपी; परियोजना प्रशासन, एलएनए-एच .; वित्त पोषण अधिग्रहण, एलएनए-एच। सभी लेखकों ने पांडुलिपि के प्रकाशित संस्करण को पढ़ लिया है और सहमत हैं। अनुदान: लेखक अनुसंधान समूह संख्या RG-1442-432 के माध्यम से इस कार्य के वित्तपोषण के लिए किंग सऊद विश्वविद्यालय में वैज्ञानिक अनुसंधान के डीनशिप की सराहना करते हैं। संस्थागत समीक्षा बोर्ड का वक्तव्य: लागू नहीं। सूचित सहमति वक्तव्य: लागू नहीं। डेटा उपलब्धता विवरण : इस अध्ययन में प्रस्तुत डेटा संबंधित लेखक के अनुरोध पर उपलब्ध हैं। हितों का टकराव: इस अध्ययन के लिए हितों का कोई टकराव नहीं है।

संदर्भ

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