अमूर्त

टायरोसिनेस मेलेनोसोम्स में मेलेनिन के निर्माण को नियंत्रित करने वाला एक महत्वपूर्ण एंजाइम है और बालों और त्वचा के रंजकता में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। टाइरोसिनेस की असामान्य अभिव्यक्ति या सक्रियण कई बीमारियों से जुड़ा हुआ है जैसे ऐल्बिनिज़म, विटिलिगो, मेलेनोमा और पार्किंसंस रोग। मेलेनिन के अत्यधिक जमाव से मानव शरीर में झाइयां और भूरे धब्बे जैसी बीमारियां हो सकती हैं, और यह फलों और सब्जियों के भूरेपन और कीटों के पिघलने से भी निकटता से संबंधित है। इन रोगों के निदान और उपचार की प्रगति में टायरोसिनेस की गतिविधि का पता लगाना और रोकना असाधारण मूल्य का है। इसलिए, कई चयनात्मक ऑप्टिकल पहचान जांच और छोटे आणविक अवरोधक विकसित किए गए हैं, और इन रोगों पर बुनियादी और नैदानिक ​​अनुसंधान में महत्वपूर्ण योगदान दिया है। इस पत्र में, फ्लोरोसेंट जांच और अवरोधकों के विकास पर विशेष जोर देने के साथ, टाइरोसिनेज का पता लगाने और निषेध और श्वेत उत्पादों में इसके आवेदन की समीक्षा की जाती है। उम्मीद है, यह समीक्षा अधिक कुशल और संवेदनशील टायरोसिनेस जांच और अवरोधकों को डिजाइन करने में मदद करेगी, साथ ही मेलेनोमा जैसी बीमारियों के उपन्यास उपचार पर प्रकाश डालेगी।

प्रासंगिक अध्ययनों के अनुसार,धनियाएक आम जड़ी बूटी है जिसे "चमत्कारिक जड़ी बूटी जो जीवन को लम्बा खींचती है" के रूप में जाना जाता है। इसका मुख्य अवयव हैसिस्टेनोसाइड, जिसके विभिन्न प्रभाव होते हैं जैसेएंटीऑक्सिडेंट,सूजनरोधी, औरप्रतिरक्षा समारोह को बढ़ावा देना. सिस्टंच और के बीच का तंत्रत्वचासफेदसिस्टैंच ग्लाइकोसाइड्स के एंटीऑक्सीडेंट प्रभाव में निहित है। मानव त्वचा में मेलेनिन द्वारा उत्प्रेरित टाइरोसिन के ऑक्सीकरण द्वारा निर्मित होता हैटायरोसिनेस, और ऑक्सीकरण प्रतिक्रिया में ऑक्सीजन की भागीदारी की आवश्यकता होती है, इसलिए शरीर में ऑक्सीजन मुक्त कण एक महत्वपूर्ण कारक बन जाते हैंप्रभावित मेलेनिनउत्पादन. Cistanche में cistanoside होता है, जो एक एंटीऑक्सीडेंट है और इस प्रकार शरीर में मुक्त कणों के उत्पादन को कम कर सकता हैबाधामेलेनिनउत्पादन.

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1 परिचय

टायरोसिनेज (ईसी 1.14.18.1; कैटेचोल ऑक्सीडेज; पॉलीफेनोल ऑक्सीडेज [1] या डिफेनोलेस) को मेलेनिन निर्माण में सबसे महत्वपूर्ण कॉपर युक्त एंजाइम माना जाता है। टायरोसिनेज़ आणविक ऑक्सीजन की क्रिया के तहत ऑर्थोक्विनोन को मोनोफेनोल इकाई के हाइड्रॉक्सिलेशन और बाद के ऑक्सीकरण को उत्प्रेरित कर सकता है। यह मेलेनोसोम में पाया जाता है, मेलेनिन के संश्लेषण, भंडारण और परिवहन के लिए साइट। हल्के और गंभीर रूप से मेलेनाइज़्ड मेलेनोसोम का पीएच मान क्रमशः 4.5 और 3 है। टाइरोसिनेज गतिविधि के लिए इष्टतम पीएच 6.8 [2] है। रैपर [3] और मेसन [4] विभिन्न जीवों में मेलेनिन गठन के बायोसिंथेटिक मार्गों को स्पष्ट करने वाले पहले व्यक्ति थे, जिन्हें हाल ही में स्कालरेउटर एट अल द्वारा अलंकृत किया गया था। [5] और कुकी एट अल। (चित्र 1) [6]।

टायरोसिनेज व्यापक रूप से पौधों, जानवरों और सूक्ष्मजीवों में पाया जाता है। मेलेनोमा के रोगजनन में टाइरोसिनेस की भागीदारी को देखते हुए, इसकी गतिविधि की निगरानी और औषधीय रूप से विनियमन रोग के निदान और उपचार में मदद करेगा [7]। विशेष रूप से शारीरिक वातावरण में टाइरोसिनेज गतिविधि का पता लगाने के लिए जांच विकसित की गई थी। अवरोधक जो टाइरोसिनेस को निष्क्रिय बना सकते थे, भी विकसित किए गए थे, और उनमें से कुछ का रोगों के इलाज के लिए नैदानिक ​​रूप से उपयोग किया गया था। उदाहरण के लिए, कोजिक एसिड और अर्बुटिन [8], टाइरोसिनेज के विशिष्ट अवरोधकों के रूप में, नैदानिक ​​रूप से एक सफेदी उत्पादों के रूप में उपयोग किए गए थे। दवा की खोज में प्रगति के साथ, प्रभावी यौगिकों की बढ़ती संख्या जो टाइरोसिनेज गतिविधि का पता लगा सकती है / रोक सकती है, हाल ही में डिज़ाइन और संश्लेषित की गई है। यह उन रोगों के निदान और उपचार की प्रगति को बहुत आसान बना देगा, जो मेलेनिन उत्पादन से उत्पन्न होते हैं। इस समीक्षा में, हम अंतर्जात टाइरोसिनेस गतिविधि के लिए छोटे-अणु-आधारित जांच और अवरोधकों के विकास में प्रगति पर चर्चा करेंगे। उम्मीद है, यह हमें tyrosinase के बारे में अधिक जानने में मदद करेगा और tyrosinase को लक्षित/विनियमित करने वाले अधिक कार्यात्मक यौगिकों को ढूंढेगा।

2. टायरोसिनेज की संरचना

टाइरोसिनेस सक्रिय साइट दो कॉपर आयनों (चित्र 2) से बना एक दोहरे कोर कॉपर सेंटर संरचना प्रस्तुत करती है, जो प्रोटीन में हिस्टडीन अवशेषों को बांधती है। दो तांबे आयन केंद्र अंतर्जात समन्वय पुल से जुड़े हुए हैं। टायरोसिन और अन्य पदार्थ एंजाइम के सक्रिय केंद्र और हाइड्रॉक्सिल समूह के बीच बंधन के माध्यम से एंजाइम के साथ जटिल होते हैं। मेलेनिन की उत्प्रेरक प्रतिक्रिया की प्रक्रिया में, उत्प्रेरक साइट को तीन रूपों में वर्गीकृत किया गया है: ऑक्सीकरण राज्य (ईऑक्सी), कमी राज्य (एमेट), और डीऑक्सीजनेशन राज्य (एडियोक्सी), अंतर परमाणु तांबे आयन सक्रिय केंद्र की संरचना में निहित है। (अंक 2)।

एपॉक्सी दो वर्ग तांबे (II) परमाणुओं से बना है; प्रत्येक परमाणु दो मजबूत भूमध्य रेखा से बना होता है और लिगेंड एक कमजोर अक्षीय NH [9] होता है। बहिर्जात ऑक्सीजन अणु दो तांबे के केंद्रों को पेरोक्साइड के रूप में बांधता है और पुल करता है। क्यूक्यू बांड की लंबाई लगभग 0.35 एनएम है। ऑक्सीजन अणुओं के संयोजन से (m-h2:h2 -पेरॉक्सो) संरचना [10] का निर्माण होता है, इसलिए Eoxy सक्रिय केंद्र को [Cu(II)eO2eCu(II)] के रूप में लिखा जा सकता है। पेरोक्साइड की इलेक्ट्रॉनिक संरचना Eoxy के जैविक कार्यों में महत्वपूर्ण भूमिका निभाती है। प्रबल s* ग्राही क्रिया के कारण, पेरोक्साइड का ऋणात्मक आवेश कम होता है, जबकि p इलेक्ट्रॉन स्वीकर्ता पेरोक्साइड के s* कक्षीय में इलेक्ट्रॉनों के साथ परस्पर क्रिया करता है, जो ऑक्सीजन-ऑक्सीजन बंधन की शक्ति को बहुत कमजोर कर देता है, नाभिक प्रदान करता है tyrosinase सक्रिय केंद्र आसानी से टूटने योग्य [9]। Mettyrosinase (Emet) Eoxy के समान है और इसमें अंतर्जात पुल के माध्यम से युग्मित दो टेट्रागोनल कॉपर (II) परमाणु भी होते हैं। अंतर यह है कि तांबे के आयनों के बीच ब्रिजिंग लिगैंड पेरोक्साइड [2] के बजाय हाइड्रॉक्साइड है। ऑक्सीडेटिव गुणों के संदर्भ में, Emet और Eoxy भी थोड़े अलग हैं। एमेट मोनो फेनोलिक यौगिकों को ऑक्सीकरण करने में सक्षम नहीं है। सबस्ट्रेट्स की अनुपस्थिति में, एमेट जीवों में मुख्य रूप में मौजूद है। डीऑक्सीटायरोसिनेज़ (एडियोक्सी), डीऑक्सी हेमोसायनिन के समान, एक सममित संरचना है [(Cu(I)eCu(I)]। बाइन्यूक्लियर कॉपर के बीच पेरोक्साइड या हाइड्रॉक्साइड जैसे कोई ब्रिजिंग लिगैंड नहीं है; इस प्रकार पानी में हाइड्रॉक्साइड एक आवश्यक ब्रिजिंग लिगैंड है।

3. टायरोसिनेज की क्रिया का तंत्र

हालांकि शोधकर्ताओं ने टाइरोसिनेज और इससे संबंधित प्रोटीन पर गहन अध्ययन किया है, लेकिन इसकी उत्प्रेरक प्रतिक्रिया का तंत्र अभी भी विवादास्पद है। उदाहरण के लिए, tyrosinase की एक ही सक्रिय साइट पर उत्प्रेरक गतिविधि अलग है। टाइरोसिनेज के उत्प्रेरक केंद्र में क्रमशः Cu(A) और Cu(B) नाम का एक बाइन्यूक्लियर कॉपर सेंटर होता है। सक्रिय केंद्र में प्रत्येक कॉपर आयन को तीन अलग-अलग हिस्टडीन अवशेषों के साथ समन्वित किया जाता है। माइकोफेनोलेट गतिविधि और डिफेनोलेस गतिविधि के बीच एक बड़ा अंतर है, और मोनोफेनोल के साथ प्रतिक्रिया करते समय कम टाइरोसिनेज का अंतराल चरण होता है। ये महत्वपूर्ण विषय हैं जिन्हें लगातार तलाशने और अध्ययन करने की आवश्यकता है [11]।

टाइरोसिनेस और संबंधित सबस्ट्रेट्स के बीच प्रतिक्रिया मुख्य रूप से सब्सट्रेट पर हाइड्रॉक्सिल समूह और टाइरोसिनेस सक्रिय केंद्र के बीच एक प्रभावी समन्वय बंधन के गठन के माध्यम से होती है। ओलिवारेस एट अल। [12] प्रस्तावित है कि स्तनधारियों में Eoxy और उपयुक्त सबस्ट्रेट्स माइकोफेनोलेट गतिविधि और डिफेनोलेस गतिविधि को ट्रिगर करते हैं। माइकोफेनोलेट गतिविधि के दौरान, मोनोफेनोल्स (एल-टायरोसिन) को ओ-क्विनोन (ओ-डोपाक्विनोन) बनाने के लिए ऑक्सीकृत किया जाता है, मेलेनिन का एक महत्वपूर्ण अग्रदूत और एडियोक्सी। डिफेनोलेस गतिविधि के दौरान, Eoxy और Emet भी o-डोपाक्विनोन [13] का उत्पादन करने के लिए o-diphenols (L-DOPA) का ऑक्सीकरण कर सकते हैं। यह तंत्र आम तौर पर शोधकर्ताओं द्वारा स्वीकार किया जाता है क्योंकि यह टाइरोसिनेस की गतिज विशेषताओं को सबसे सटीक रूप से प्रतिबिंबित कर सकता है, जिसमें मेलेनिन उत्पादन में दर-सीमित कदम मोनोफेनोल चक्र [14] है।

3.1। माइकोफेनोलेट गतिविधि का तंत्र

मेलेनिन संश्लेषण के दौरान, एंजाइम का मुख्य कार्य Eoxy द्वारा मोनोफेनोल सबस्ट्रेट्स को ओ-क्विनोन में ऑक्सीकरण करना है। यह प्रक्रिया एक महत्वपूर्ण विशेषता है जो टाइरोसिनेज को कैटेकोल ऑक्सीडेज जैसे अन्य ऑक्सीडोरडक्टेस से अलग करती है। मोनोफेनोल चक्र (अंजीर। 2) के दौरान, डिप्रोटोनेटेड फिनोल पर ऑक्सीजन परमाणु को ऑक्सीकृत टायरोसिनेस सक्रिय केंद्र के कॉपर आयन के साथ समन्वयित किया जाता है ताकि मायकोफेनोलेट ईऑक्सी कॉम्प्लेक्स (ईऑक्सीएम) बनाया जा सके, और फिर फिनोल को ऑर्थो-इलेक्ट्रोफिलिक रूप से डिफेनोलेस एमेट से प्रतिस्थापित किया जाता है। कॉम्प्लेक्स (ईएमटीडी)। EmetD सीधे ओ-क्विनोन और एडियोक्सी उत्पन्न करने के लिए एक दरार प्रक्रिया से गुजरता है। Edeoxy सीधे Eoxy को फिर से बनाने के लिए ऑक्सीजन के अणुओं के साथ जुड़ता है। यह माइकोफेनोलेट गतिविधि की चक्रीय प्रक्रिया है। यह प्रक्रिया तब तक समाप्त नहीं होती जब तक सब्सट्रेट प्रतिक्रिया पूरी नहीं हो जाती। मोनोफेनोल चक्र की प्रतिक्रिया प्रक्रिया में, यदि प्राकृतिक अवस्था में एमेट एक मोनोफेनोल सब्सट्रेट से मिलता है, तो यह एक अत्यंत धीमी ऑक्सीकरण प्रतिक्रिया से गुजरेगा और मोनोफेनोल प्रतिक्रिया की सामान्य प्रगति में बाधा उत्पन्न करेगा। इसलिए, इस अवधि को 'अंतराल अवधि' कहा जाता है क्योंकि एमेट स्वयं ऑक्सीजन अणुओं को बांध नहीं सकता [12]।

3.2। डिफेनोलेस गतिविधि का तंत्र

4. टायरोसिनेज का कार्य

टायरोसिनेज टाइप 3 कॉपर परिवार का हिस्सा है और मेलेनिन बनने की शुरुआती प्रक्रिया में मौजूद है। यह मुख्य रूप से निम्नलिखित दो प्रतिक्रिया प्रक्रियाओं में भाग लेता है [17]: (1) एल-टायरोसिन का एल-डोपा में हाइड्रॉक्सिलेशन; (2) डोपाक्विनोन बनाने के लिए एल-डीओपीए का ऑक्सीकरण। डोपाक्विनोन अंततः प्रतिक्रियाओं की एक श्रृंखला के माध्यम से मेलेनिन का निर्माण करेगा। टाइप 3 कॉपर परिवार के अन्य दो सदस्य कैटेकोल ऑक्सीडेज और हेमोसायनिन हैं। कैटेकोल ऑक्सीडेज केवल डिफेनोलेस गतिविधि प्रदर्शित करता है और हेमोसायनिन कई मोलस्क और आर्थ्रोपोड्स ऑक्सीजन वाहक के लसीका पर होता है। यद्यपि टाइप 3 कॉपर फैमिली प्रोटीन के सक्रिय केंद्र कुल संरचना और ऑक्सीजन अणुओं को जोड़ने की क्षमता के संदर्भ में संरक्षित हैं, एंजाइमेटिक की उनकी संभावित गतिविधियां एंजाइम केंद्र के लिए सब्सट्रेट के लगाव की परिवर्तनशीलता या बेकाबू होने के कारण थोड़ी अलग हैं। सब्सट्रेट पहुँच सकता है।

मेलेनिन उत्पादन की प्रक्रिया में भाग लेने के अलावा, टायरोसिनेस के अन्य महत्वपूर्ण शारीरिक कार्य भी हैं। स्पंज, पौधों और कुछ अकशेरूकीय में, टाइरोसिनेस मुख्य रूप से घाव भरने और प्राथमिक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया [18] की प्रक्रिया में शामिल है। आर्थ्रोपोड्स में, टायरोसिनेस पिघलने के बाद जानवरों के स्ट्रेटम कॉर्नियम की सख्त प्रक्रिया को बढ़ावा दे सकता है। बैक्टीरियल टायरोसिनेज को मिट्टी में स्रावित किया जा सकता है और ह्यूमस बनाने के लिए विभिन्न सुगंधित यौगिकों के यादृच्छिक युग्मन की प्रक्रिया में भाग ले सकता है। और, यह पता चला कि टायरोसिनेज बेंजीन विषाक्त पदार्थों [13,19] के लिए एक संभावित एंटीडोट भी हो सकता है। इसके अलावा, यह फेनोलिक सहजीवी बैक्टीरिया के खिलाफ परजीवी पौधों को मारने, प्राकृतिक रंजक के उत्पादन और लिनकोमाइसिन जैसे अमीनो एसिड एंटीबायोटिक दवाओं के संश्लेषण में एक अनिवार्य भूमिका निभाता है। इन प्रभावों का सामान्य बिंदु ऑक्सीजन अणुओं [11] के साथ रेडॉक्स प्रतिक्रियाओं का उपयोग करके टायरोसिनेस से अविभाज्य है।

5. टायरोसिनेस से संबंधित रोग

टायरोसिनेज का वितरण पौधों और जानवरों के शारीरिक कार्यों से निकटता से जुड़ा हुआ है। आमतौर पर यह माना जाता है कि पंख, बाल, आंखें, कीट एपिडर्मिस, बीज और अन्य पिगमेंट के रंग टाइरोसिनेज [10] के परिणाम हैं। विभिन्न जीवों में टायरोसिनेस के अलग-अलग लेकिन महत्वपूर्ण कार्य हैं। सामान्य शारीरिक स्थितियों के तहत अधिकांश कीड़ों में, टाइरोसिनेस ज़ाइमोजेन के रूप में मौजूद होता है, और विशिष्ट शारीरिक कार्यों को पूरा करने के लिए विभिन्न प्रकार के टायरोसिनेस कीटों के विशिष्ट भागों में मौजूद होते हैं [20]। मेलेनिन के उत्पादन में भाग लेने के अलावा, कीट टाइरोसिनेस केराटोसिस में शामिल एकमात्र एंजाइम है। कीट-कठोर केराटिन सूक्ष्मजीवों और विदेशी निकायों के आक्रमण को रोक सकता है और नरम अकशेरूकीय शरीर की रक्षा कर सकता है। आर्थ्रोपोड्स में, टाइरोसिनेस दो अन्य महत्वपूर्ण शारीरिक प्रक्रियाओं में भी भाग लेता है, अर्थात्, रक्षा प्रतिक्रिया और घाव भरना। स्तनधारियों में टाइरोसिनेस द्वारा उत्पादित मेलेनिन को एपिडर्मिस और बालों के केराटिनोसाइट्स में स्रावित किया जाता है, जिससे शरीर की सतह का रंग उड़ जाता है, जिससे त्वचा और आँखों की रक्षा होती है, पराबैंगनी विकिरण का विरोध होता है, और आंतरिक ऊतकों को ज़्यादा गरम होने से रोकता है [10]। स्तनधारियों में पाए जाने वाले टाइरोसिनेज को आमतौर पर मेलानोसाइट्स में खोजा जाता है, जो अत्यधिक विशिष्ट कोशिकाएं होती हैं जो त्वचा, बालों के रोम और आंखों में वर्णक उत्पन्न करने के लिए मौजूद होती हैं [4,21]। जब tyrosinase फ़ंक्शन कम या गायब हो जाता है, तो यह मेलेनिन चयापचय को प्रभावित करेगा और मिर्गी और ऐल्बिनिज़म जैसी बीमारियों का कारण बनेगा। जानवरों और मनुष्यों में ऑटोसोमल रिसेसिव रोग भी टायरोसिनेस के नुकसान या घटी हुई गतिविधि [22] से संबंधित हैं।

6. टायरोसिनेस की जांच

जांच ऐसे पदार्थ हैं जो विशेष रूप से लक्ष्य को पहचानते हैं और पता लगाने योग्य संकेत जारी करते हैं जो लक्ष्य की उपस्थिति और गतिविधि को दर्शाते हैं। इसकी कम संवेदनशीलता [23] के कारण टायरोसिनेज विश्लेषण के लिए पारंपरिक वर्णमिति विधि सीमित कर दी गई है। सबसे पहले, विलनर के समूह [24e27] द्वारा इलेक्ट्रोकैमिस्ट्री और सोने के नैनोकणों पर आधारित कई अन्य पहचान विधियों की सूचना दी गई थी, जो न केवल पहचान की बहुमुखी प्रतिभा को बढ़ाती है बल्कि संवेदनशीलता के मामले में वर्णमिति को भी बहुत अद्यतन करती है। जैसा कि चित्र 3 में दिखाया गया है, अत्यधिक संवेदनशील टाइरोसिनेज जांच को डिजाइन करने के लिए एक फ्लोरोसेंट रणनीति भी पेश की गई है। प्रारंभिक रूप से विकसित क्वांटम डॉट्स और संयुग्मित बहुलक फ्लोरोसेंट जांच टाइरोसिनेस [28] की गतिविधि की निगरानी के लिए लागू की जा सकती है। फिर भी, संवेदनशीलता, विशिष्टता और संगतता जैसे विशेष लाभों के कारण छोटे-अणु फ्लोरोसेंट जांच विशेष रूप से आकर्षक हैं। 2008 में, झू की टीम ने टायरोसिनेस के लिए फ्लोरोसेंट जांच के रूप में टाइरोसिन वारहेड (डब्ल्यूएच) युक्त एक एफएल फ्लोरोफोर के रूप में एक नया पानी घुलनशील ओलिगो (फेनिलीनविनाइलिन) (पीआर 1) संश्लेषित किया। यह प्रदर्शित किया गया था कि Pr1 agarose जेल [29] में भी एक जलीय बफर समाधान में अब तक tyrosinase की गतिविधि का पता लगाने के लिए उपयुक्त है। सबसे पहले, एक साइनाइन-आधारित निकट-अवरक्त (NIR) फ्लोरोसेंट जांच (Pr2) का उपयोग 2010 में Ma et al द्वारा tyrosinase की गतिविधि की निगरानी के लिए किया गया था। [30]। प्रतिक्रिया से पहले और बाद में महत्वपूर्ण रंग परिवर्तन नग्न आंखों से पता लगाया जा सकता है। हालांकि, ये जांच टाइरोसिनेज-उत्प्रेरित ऑक्सीकरण द्वारा उत्पन्न क्विनोन मौएटिटी के कारण होने वाले टर्न-ऑफ मोड को भी दिखाती है। हालांकि, कार्यात्मक उपयोग के लिए, जीवित प्रणालियों में टाइरोसिनेज की बायोइमेजिंग के लिए इसकी संवेदनशीलता और अधिक उपयुक्तता के कारण बायोसे को टर्न-ऑन मोड में लागू करना सबसे अच्छा तरीका है। 2010 में, किम एट अल। [31] लाइव मेलेनोमा कोशिकाओं (Pr3, चित्र 4) में अंतर्जात टायरोसिनेस गतिविधि का पता लगाने के लिए एक बॉडी-आधारित टर्न-ऑन फ्लोरोजेनिक जांच का प्रस्ताव रखा। टाइरोसिनेस के पिछले शोध के आधार पर अमाइन प्रोटेक्टिंग ग्रुप [32], यान एट अल को हटाने के लिए लागू किया गया। [33] तैयार टाइरोसिनेज जांच, पीआर4 और पीआर5, जिसमें 2012 में एक फिनोल समूह और एक नेफथाइलामाइन समूह यूरिया लिंकेज के माध्यम से जुड़े थे। महत्वपूर्ण रूप से, पीआर4 पहला दो-फोटॉन टर्न-ऑन फ्लोरोजेनिक जांच था जिसे टाइरोसिनेस की गतिविधि का पता लगाने के लिए डिज़ाइन किया गया था। जलीय बफर और जीवित कोशिकाओं में। 2013 में, वांग एट अल। [34] ने दिखाया कि NBD-NH 2- आधारित फ्लोरोसेंट जांच (Pr6 और Pr7) जिसमें फिनोल मोएटीज़ (WH) होते हैं, का उपयोग "टर्न-ऑन" के साथ संभावित टाइरोसिनेस अवरोधकों के लिए टायरोसिनेस और स्क्रीन की गतिविधि का पता लगाने के लिए किया जा सकता है। रणनीति। हालाँकि, इस कार्य में सेल इमेजिंग से संबंधित कोई जैविक प्रयोग नहीं है। 2016 में, ली और उनके सहयोगियों ने 7- अमीनो -4- (ट्राइफ्लोरोमेथाइल)-कूमरिन पर आधारित नए प्रोब के एक समूह को एक FL फ्लोरोफोर के रूप में डिज़ाइन किया और उन्हें संश्लेषित किया, Pr8-11, FL के बीच अलग-अलग दूरी के साथ फ्लोरोफोर और फिनोल। Pr9 लाइव मेलेनोमा कोशिकाओं [35] की इमेजिंग के लिए एक अत्यधिक संवेदनशील और चयनात्मक "टर्न-ऑन" फ्लोरोजेनिक जांच पाया गया। 2018 में, वू की टीम कृंतक माउस मॉडल (अंजीर। 4 और 5 ए) में प्रारंभिक मेलेनोमा का निदान करने के लिए एक FL फ्लोरोसेंट जांच (Pr12) का उपयोग करने वाली पहली थी। प्रोब को टाइरोसिनेस-मध्यस्थ ऑक्सीकरण द्वारा सक्रिय किया जा सकता है और फिर फ्लोरेसेंस सिग्नल उत्पन्न करने के लिए यूरिया बॉन्ड को हाइड्रोलाइज किया जा सकता है। साथ ही, यह जीवित कोशिकाओं और जेब्राफिश में अंतर्जात टाइरोसिनेस के स्तर को संवेदनशील और चुनिंदा रूप से मॉनिटर कर सकता है (चित्र 5 बी/सी) [36]।

2016 में, Ma's group [37] ने tyrosinase की गतिविधि का पता लगाने के लिए मेलानोसोम्स को लक्षित करने के लिए मेला-TYR (Pr13, Fig. 4) नामक एक उपन्यास फ्लोरोजेनिक जांच विकसित की। Pr13 को मॉर्फोलिन और 4-एमिनो-फिनोल-व्युत्पन्न यूरिया के साथ थैलिमाइड को शामिल करके डिजाइन किया गया था। जांच एक ऑक्सीकरण-दरार प्रतिक्रिया के माध्यम से टाइरोसिनेज के लिए अत्यधिक संवेदनशील और चयनात्मक टर्न-ऑन प्रतिक्रिया दिखाती है। ऊपर वर्णित प्रतिदीप्ति जांच में मुख्य रूप से एक 4- हाइड्रॉक्सीफेनिल समूह को पहचान की मात्रा (WH) के रूप में समाहित किया गया है और कई प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (ROS) और टायरोसिनेस के समानांतर प्रतिदीप्ति प्रतिक्रिया को दिखाया गया है, इस प्रकार ROS द्वारा हस्तक्षेप किया गया। मा के समूह ने एक नए टाइरोसिनेज-रिकग्निशन मोएटिटी, 3-हाइड्रॉक्सी बेंजाइलॉक्सी (डब्ल्यूएच) की खोज की, जिसने टायरोसिनेस और आरओएस [38] के लिए विविध प्रतिक्रिया तंत्र दिखाए। एक NIR फ्लोरोफोर (HXPI) में 3- हाइड्रॉक्सी बेंजाइलॉक्सी स्थापित करके एक NIR प्रतिदीप्ति जांच (Pr14, Fig. 4) विकसित की गई थी, और ROS के बजाय टायरोसिनेस के लिए अत्यधिक विशिष्ट ऑफ-ऑन प्रतिक्रिया दिखाई, इस प्रकार हस्तक्षेप पर काबू पाया। 3- हाइड्रॉक्सी समूह की उपस्थिति टाइरोसिनेज द्वारा 4-स्थिति रिक्ति पर हाइड्रॉक्सिलेशन की सुविधा देती है, लेकिन आरओएस द्वारा नहीं, और मध्यवर्ती सहज 1,6-पुनर्व्यवस्था उन्मूलन से गुजरेगा, मुक्त फ्लोरोफोर जारी करेगा। विकसित जांच की उच्च विशिष्टता जीवित कोशिकाओं और जेब्राफिश में अंतर्जात टाइरोसिनेस गतिविधि की इमेजिंग और पहचान से साबित हुई थी, और जांच की उच्च विशिष्टता को एक एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसॉर्बेंट परख (अंजीर। 4 और 6) द्वारा आगे सत्यापित किया गया था। मा के समूह ने बाद में 3-हाइड्रॉक्सीफिनाइल समूह [39] के साथ शामिल रिसोरूफिन पर आधारित एक और टर्न-ऑन फ्लोरोजेनिक जांच (Pr15, चित्र 4) विकसित की। इसका उपयोग विभिन्न प्रकार की जीवित कोशिकाओं में अंतर्जात टाइरोसिनेज की गतिविधि का पता लगाने और छवि बनाने के लिए किया गया था। उपरोक्त डिजाइन से प्रेरित होकर, झांग और सहकर्मियों [40] ने एक फ्लोरोफोर के रूप में रिसोरूफिन के साथ एक फ्लोरोजेनिक टायरोसिनेस जांच (Pr16, अंजीर। 4) और एक नए टायरोसिनेज-मान्यता के रूप में एम-टोलिल बोरोनिक एसिड पिनाकोल एस्टर (डब्ल्यूएच) का प्रस्ताव दिया। आधा भाग। जांच ने ROS सहित अन्य जैविक पदार्थों की तुलना में टायरोसिनेज के लिए उच्च चयनात्मकता दिखाई। हालाँकि, यह H2O2 द्वारा गंभीर रूप से दखल दिया गया था। 2019 में, हू एट अल। [41] फ्लोरेसिन (Pr17, अंजीर। 4) पर आधारित उच्च रासायनिक चयनात्मकता के साथ एक नई फ्लोरोजेनिक जांच की सूचना दी, जो इन विट्रो और विवो में टायरोसिनेस को ट्रैक कर सकती है, और टायरोसिनेस के उच्च केमोसेलेक्टिव डिटेक्शन का एहसास कर सकती है। इसके अलावा, जांच ने एक जलीय घोल में प्रतिक्रिया की और टाइरोसिनेस की उपस्थिति में 24 गुना से अधिक की प्रतिदीप्ति वृद्धि का प्रदर्शन किया। इसके अलावा, Pr17 ने महान कोशिका झिल्ली और ऊतक पारगम्यता विशेषताओं को दिखाया, जिसने अलग-अलग जीवित कोशिकाओं और जेब्राफिश मॉडल में अंतर्जात टाइरोसिनेज गतिविधि का अनुसरण करने में इसकी सफलता में मदद की। डिंग के समूह ने एक उपन्यास पानी में घुलनशील एनआईआर प्रतिदीप्ति जांच (Pr18, चित्र 4) का निर्माण किया है जो विशेष रूप से टाइरोसिनेस को पहचान सकता है, जो शारीरिक तापमान और पीएच के भीतर अत्यधिक स्थिर है और सर्वव्यापी संस्थाओं द्वारा परेशान किए बिना जैविक प्रणालियों में टायरोसिनेस का सटीक पता लगा सकता है। इसका उपयोग जीवित कोशिकाओं, जेब्राफिश, और जेनोजेनिक माउस मॉडल [42] में टाइरोसिनेज की इमेजिंग के लिए किया जा सकता है।

सिद्धू एट अल। नेफ़थलिमाइड पर आधारित एक रतिमितीय फ्लोरोसेंट जांच (Pr19, अंजीर। 4) को तैयार और संश्लेषित किया। Pr19 में tyrosinase के लिए उच्च चयनात्मकता और संवेदनशीलता है, और पता लगाने की सीमा (LOD) काफी कम है [43]। जांच को अभिकारकों के साथ मिलाने के बाद उत्तेजना या उत्सर्जन स्पेक्ट्रम बदलाव होता है। इसे दो अलग-अलग तरंग दैर्ध्य पर मापी गई प्रतिदीप्ति तीव्रता के अनुपात का उपयोग करके रिकॉर्ड किया जा सकता है, जिसे अनुपात माप कहा जाता है। इस सिद्धांत पर आधारित रतिमितीय फ्लोरोसेंट जांच उनकी संवेदनशीलता और चयनात्मकता दिखाती है और इसका उपयोग लाइव सिस्टम [44] में एंजाइम फ़ंक्शन के अध्ययन के लिए किया जा सकता है। गुओ की टीम ने अंतर्जात टाइरोसिनेज गतिविधि के वास्तविक समय का पता लगाने के लिए एक नया रतिमितीय और टर्न-ऑन एनआईआर फ्लोरोसेंट जांच (Pr2 0, चित्र 4) प्रस्तावित किया। Pr20 की ये विशेष विशेषताएं, दुर्लभ साइटोटॉक्सिसिटी, बेहतर फोटोफिजिकल कैरेक्टर और सेल मेम्ब्रेन पारगम्यता के साथ मिलकर इसे अंतर्जात टायरोसिनेस गतिविधि [45] की मात्रात्मक पहचान के लिए आदर्श बनाती हैं। साइनाइन डेरिवेटिव, ठेठ एनआईआर फ्लोरोसेंट रंजक के रूप में, जलीय समाधानों में नियंत्रित रूप से एकत्र किए जा सकते हैं और इस प्रकार कई अलग-अलग वर्णक्रमीय गुणों को प्रदर्शित करते हैं। साइनाइन कंकाल के केंद्र में क्लोरीन परमाणु आसानी से अन्य कार्यात्मक समूहों द्वारा प्रतिस्थापित किया जाता है। इस फ़ंक्शन के आधार पर, झांग एट अल। [46] टाइरोसिनेज़ गतिविधि (चित्र 7) के रतिमितीय प्रतिदीप्ति का पता लगाने के लिए एक नया साइनाइन-आधारित फ्लोरोसेंट जांच (Pr21, अंजीर। 4) विकसित किया। अनुपात निर्धारण ने एक अच्छा सिग्नल-टू-शोर अनुपात प्राप्त किया, और टायरोसिनेज गतिविधि का एलओडी मूल्य 0.02 यू/एमएल था। इसके अलावा, Pr21 को B16 कोशिकाओं में अंतर्जात टायरोसिनेस गतिविधि की इमेजिंग में सफलतापूर्वक नियोजित किया गया था और टाइरोसिनेस (चित्र 7) की अनुपस्थिति में इसे अन्य कैंसर / सामान्य कोशिकाओं से गुणात्मक रूप से अलग किया गया था।

7. टायरोसिनेज के अवरोधक

अवरोधकों को आम तौर पर प्रतिवर्ती अवरोधकों और अपरिवर्तनीय अवरोधकों में विभाजित किया जाता है, इस आधार पर कि क्या अवरोधक एंजाइमों के साथ बातचीत करते हैं, एंजाइम की स्थायी निष्क्रियता का कारण बनते हैं। टाइरोसिनेस की निषेध विशेषता प्रतिवर्ती निषेध है। उत्क्रमणीय निषेध की विशेषता अवरोध के लिए, अवरोधक और एंजाइम का संयोजन एक प्रतिवर्ती गतिशील संतुलन प्रक्रिया [47e49] है। अवरोधक की एकाग्रता में वृद्धि से एंजाइम गतिविधि कम हो जाएगी लेकिन अवरोधक एंजाइम गतिविधि को स्थायी रूप से निष्क्रिय करने के बजाय केवल एंजाइम गतिविधि को रोकता है। जब अवरोध करनेवाला एकाग्रता कम हो जाती है, तो टाइरोसिनेस गतिविधि बढ़ जाएगी। इस बीच, अपरिवर्तनीय निषेध tyrosinase की स्थायी निष्क्रियता होगी। विभिन्न साइटों और एंजाइम के साथ बातचीत करने वाले टाइरोसिनेस अवरोधकों के तरीकों के अनुसार, उन्हें चार रूपों में विभाजित किया जा सकता है: प्रतिस्पर्धी, गैर-प्रतिस्पर्धी, मिश्रित और धीमी बाध्यकारी।

फ्लेवोनोइड्स तीन-कार्बन श्रृंखला से जुड़े दो बेंजीन के छल्ले से बने यौगिकों का एक समूह है। क्योंकि हाइड्रॉक्सिल, मेथॉक्सी और ग्लाइकोसाइड साइड-चेन समूह बेंजीन के छल्ले में होते हैं, व्यवस्था को फ्लेवोनोल्स, चॉकोन्स, डायहाइड्रोफ्लेवोन्स और ऑरेंज वाले (चित्र 8) [56] में उप-विभाजित किया जा सकता है। फ्लेवोनोइड्स बड़े पैमाने पर पत्तियों, बीजों, खाल और पौधों के अनुयायियों में वितरित किए जाते हैं, और शोधकर्ताओं ने 4000 से अधिक फ्लेवोनोइड्स का सत्यापन किया है। कुछ पौधों के लिए, फ्लेवोनोइड्स और उनके डेरिवेटिव में यूवी किरणों, रोगजनकों और शाकाहारी [57] से सुरक्षा होती है। नद्यपान रूट एक्सट्रैक्ट की संरचना के विश्लेषण से पता चलता है कि नियो ग्लाइसीर्रिज़िन, ग्लाइसीर्रिज़िन, आइसोलिक्विरिटिजेनिन और ग्लाइसीर्रिज़िन की टाइरोसिनेस निरोधात्मक क्षमता उनके लिपोफिलिसिटी से संबंधित है। उनमें से, मोनोफेनॉल का अवरोध डिफेनॉल की तुलना में अधिक प्रभावी है, यह दर्शाता है कि यह ऑक्सीकरण प्रतिक्रिया [58] के पहले चरण में एक दर-सीमित प्रतिक्रिया है।

{{0}}हाइड्रॉक्सी-4-कीटोन संरचना वाले कुछ फ्लेवोन, टायरोसिनेज के सक्रिय स्थल पर कॉपर को चेलेट करके एंजाइम गतिविधि को प्रतिस्पर्धात्मक रूप से रोक सकते हैं, जिसके परिणामस्वरूप टायरोसिनेज की अपरिवर्तनीय निष्क्रियता होती है। टाइरोसिनेस को चीलेट करने के बाद, अणु सैद्धांतिक रूप से अपनी प्लेनर संरचना खो देता है और विकृत हो जाता है। प्रतिस्पर्धी अवरोधक आमतौर पर सब्सट्रेट की संरचना में समानांतर होते हैं, इसलिए अणु आसानी से टायरोसिनेस सक्रिय साइट में प्रवेश करता है और एल-डोपा [59,60] के प्रवेश को रोकता है। जियोंग एट अल। ज़ैंथोक्सिलम पिपेरिटम की पत्तियों से दो फ्लेवोनोल्स निकाले। फ्लेवोनोल्स मशरूम की टाइरोसिनेज गतिविधि को रोक सकते हैं, जो एक प्रतिस्पर्धी निषेध है, लेकिन यह स्ट्रेप्टोमाइसेस बिकिनेंसिस के मेलेनिन उत्पादन को बाधित नहीं कर सकता है। बाद में, यह पाया गया कि फिलीपीन फॉर्मोसा से पृथक फ्लेवोनोइड यौगिक टायरोसिनेज को भी रोक सकता है, और निरोधात्मक प्रभाव कोजिक एसिड [62] से बेहतर है। लिआंग एट अल। पाया गया कि कुसुम पीला वर्णक 1.01 mg/mL के अर्ध-अधिकतम निरोधात्मक सांद्रता (IC50) मान के साथ मशरूम टायरोसिनेस गतिविधि को भी रोक सकता है। यह अवरोधक संबंध खुराक पर निर्भर प्रतीत होता है [63]। (2R, 3R)-(þ)-शुइलियाओ से निकाला गया पुरपुरिन 70 प्रतिशत टाइरोसिनेस गतिविधि को रोकता है और एकाग्रता 0.50 मिमी है। कोजिक एसिड और अर्बुटिन [64] की तुलना में निरोधात्मक क्षमता बेहतर है।

7,8,40 -ट्राईहाइड्रोक्सीफ्लेवोन एक फ्लेवोनॉइड डेरिवेटिव है जो आईसी50 मान 10.31 ± 0.41 एमएम और एक की के साथ गैर-प्रतिस्पर्धी तरीके से टाइरोसिनेज डिफेनोलेस गतिविधि को रोकता है। 9.50 ± 0.40 मिमी। टाइरोसिनेज के साथ इस यौगिक की क्रिया का तंत्र एक स्थिर तंत्र है और 298 K पर (7.05 ± 1.20) × 104 M -1 के बाध्यकारी स्थिरांक के साथ एकल बाध्यकारी साइट दिखाता है। थर्मोडायनामिक पैरामीटर दिखाते हैं कि बंधन प्रक्रिया संबंधित है हाइड्रोजन बॉन्डिंग और वैन डेर वाल्स फोर्स [51]।

3,8-हाइड्रॉक्सीक्विनोलिन (In1, चित्र 9 [65]) को स्कोलोपेंद्र सब्सिडी म्यूटिलन्स से अलग किया गया है, जो मेलान-एक कोशिकाओं में मेलेनिन के उत्पादन और ऑक्सीकरण को रोक सकता है। In1 एक एकाग्रता-विकसित एंटीऑक्सीडेंट प्रभाव दिखाता है और गैर-प्रतिस्पर्धी निषेध के माध्यम से मशरूम टायरोसिनेस गतिविधि को महत्वपूर्ण रूप से रोकता है। उसी समय, In1 अध्ययन में गैर-साइटोटॉक्सिक पाया गया जैसा कि तालिका 1 [65] में दिखाया गया है। Nymphaea nuchal फ्लावर एक्सट्रैक्ट (NNFE) (100 mg/mL) का एथिल एसीटेट अंश प्रभावी रूप से मेलेनिन उत्पादन को कम कर सकता है और मशरूम टायरोसिनेस गतिविधि को रोक सकता है। अंतर्निहित तंत्र में मेलेनिन संश्लेषण [66] में ट्रांसक्रिप्शन कारकों और सार्वभौमिक सिग्नलिंग मार्गों में हस्तक्षेप शामिल है। काली मिर्च से निकाले गए कैप्साइसिन (In2, चित्र 9 [67]) और डाइहाइड्रोकैप्सैसिन (In3, ​​चित्र 9) टाइरोसिनेस गतिविधि को रोक सकते हैं। परिणाम से पता चलता है कि In2 का IC50 मान In3 की तुलना में 1.73 गुना छोटा है। निरोधात्मक स्थिरांक (Ki) भी In2 (0.30mM, तालिका 1) [67] की तुलना में tyrosinaseislow पर In3 (0.39 mM, तालिका 1) की निरोधात्मक गतिविधि का समर्थन करता है। यह पाया गया कि कैमेलिया पराग से निकाले गए कैफीन (In4, Fig. 9 [68]) एक गैर-प्रतिस्पर्धी मॉडल में मशरूम टायरोसिनेस के प्रति मजबूत निरोधात्मक गतिविधि दिखाता है जैसा कि तालिका 1 में दिखाया गया है। In4 एल-टायरोसिन और रिंग की बाध्यकारी साइट को बदलता है। tyrosinase से जुड़कर सक्रिय केंद्र से सटे रचना। प्रायोगिक परिणाम बताते हैं कि In4 का कोशिकाओं में टायरोसिनेस गतिविधि पर एक स्पष्ट निरोधात्मक प्रभाव है और B16F10 मेलेनोमा कोशिकाओं की मेलेनिन पीढ़ी एकाग्रता [68] से संबंधित है। अंगूर से निकाला गया कैफ्टेरिक एसिड (In5, अंजीर। 9) प्रतिस्पर्धात्मक रूप से टायरोसिनेज को रोक सकता है, और IC50 मान (तालिका 1) रिलेशनल यौगिकों, कैफिक और क्लोरोजेनिक एसिड [47] की तुलना में कम है। Phloretin (In6, चित्र 9) एक स्थिर प्रक्रिया के माध्यम से tyrosinase को बांध सकता है, जिससे tyrosinase की रचना बदल जाती है, जिससे इसकी गतिविधि बाधित हो जाती है। इसी समय, In6 में एक मजबूत एंटीऑक्सीडेंट क्षमता और एलडीओपीए [48] में ओ-डोपाक्विनोन को कम करने की क्षमता है।

शोधकर्ताओं ने टाइरोसिनेज के अवरोधकों के रूप में दो स्पाइरो एक्रिडाइन (AMTAC-01, In7, Fig. 9) और (AMTAC-02, In8, Fig. 9) का मूल्यांकन किया है। परिणाम बताते हैं कि एक्रिडीन डेरिवेटिव मशरूम टायरोसिनेज के साथ दृढ़ता से बातचीत करते हैं। In8, In7 की तुलना में एंजाइम गतिविधि को रोकने में अधिक प्रभावी है जैसा कि तालिका 1 में दिखाया गया है, जो इंगित करता है कि In8 का मेथॉक्सी समूह निरोधात्मक गतिविधि [49] के साथ अत्यधिक सहसंबद्ध है। कई 21 हैलोजेनेटेड थियोसेमिकरबाज़ोन (TSCs) को संश्लेषित और जांचा गया। यह पाया गया कि TSCs 6, 12, और 21 (In9/10/11, चित्र 9 [69]) अलग-अलग IC50 के साथ शक्तिशाली निरोधात्मक गुण प्रदर्शित करते हैं, क्रमशः (तालिका 1)। वे tyrosinase को बाधित करने के लिए एक पारस्परिक रूप से प्रतिवर्ती और प्रतिस्पर्धी तंत्र का प्रदर्शन करते हैं। अध्ययन किए गए यौगिकों में, थायोसेमिकारबाज़ोन के पैरा-प्रतिस्थापित एसीटोफेनोन डेरिवेटिव्स में एंजाइम [69] के लिए उच्चतम संबंध है। पेनिसिलिन वी (In12, चित्र 9) एक बैक्टीरियोलाइटिक बी-लैक्टम एंटीबायोटिक दवा है। अध्ययनों में पाया गया है कि In12 माइकोफेनोलेट और डिफेनोलेस गतिविधि को रोक सकता है। प्रतिदीप्ति शमन और आणविक डॉकिंग अध्ययनों से पता चला है कि In12 एंजाइम की उत्प्रेरक जेब के पास एक स्थिर संपर्क बना सकता है, जिससे सक्रिय साइट पर सब्सट्रेट परिवहन में बाधा उत्पन्न होती है और कटैलिसीस [70] के लिए तांबे की प्लास्टिसिटी कम हो जाती है। हाल ही में, रज़ा एट अल। एन-(प्रतिस्थापित-फिनाइल) -4- {(4- [(ई) -3- फिनाइल -2- प्रोपेनिल] -1-पाइपेराज़िनिल) ब्यूटेनमाइड्स की निरोधात्मक क्षमता का अध्ययन किया ( 5a-e) टायरोसिनेस पर। सभी यौगिकों को जैविक रूप से सक्रिय पाया गया, जिसमें 5b (In13, Fig. 9) उच्चतम निरोधात्मक क्षमता [71] दिखा रहा है। महाजन एट अल। 4a-h (In14e21, चित्र 9) एमाइड्स द्वारा डिज़ाइन और संश्लेषित क्विनाज़ोलिनोन बेन। टाइरोसिनेज की गतिविधि पर यौगिकों के निरोधात्मक प्रभाव के अध्ययन के माध्यम से, यह पाया गया कि तालिका 1 [72] में दिखाए गए अनुसार सभी यौगिक मानक कोजिक एसिड की तुलना में कम IC50 मान दिखाते हैं। शेन एट अल। एक नया टाइरोसिनेस अवरोधक, पेप्टाइड ईसीजीवाईएफ (ईएफ -5, इन22) मिला जैसा कि चित्र 9 में दिखाया गया है। इन22 और टाइरोसिनेस के बीच का बंधन मुख्य रूप से हाइड्रोजन बॉन्डिंग और हाइड्रोफोबिक इंटरैक्शन पर निर्भर करता है, और टाइरोसिनेज को रोकने का प्रभाव अधिक मजबूत होता है। अर्बुटिन और ग्लूटाथियोन [73]। वह एट अल। अलग-अलग तीन इमली 1/2/3 (In23/24/25) और दो फेनोलिक्स 4 और 5 (In26 और 27) जैसा कि अंजीर में दिखाया गया है। 9. प्रयोगों से पता चला है कि सभी आइसोलेट्स का मशरूम टायरोसिनेस पर निरोधात्मक प्रभाव पड़ता है, जिसमें In23 है। सबसे प्रभावी (टेबल 1) [74]।

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