एचपीएलसी-एमएस के माध्यम से तारिम रेगिस्तान से संवर्धित सिस्टैंच हर्बा में सत्रह घटकों का लक्षण वर्णन

[अमूर्त]उद्देश्य: 60% मेथनॉल अर्क के क्रोमैटोग्राफिक घटकों की पहचान करनासिस्टैंचेस डेजर्टिकोला हर्बाएचपीएलसी-एमएस द्वारा तारिम रेगिस्तान में संवर्धित किया गया।

तरीका: एचपीएलसी-एमएस विश्लेषण एक एगिलेंट ZOＲBAX एक्लिप्स प्लस C18 कॉलम (6 मिमी × 250 मिमी, 5 माइक्रोन) पर किया गया था। मोबाइल चरण 1 एमएल · मिनट -1 की प्रवाह दर पर ग्रेडिएंट एल्युशन द्वारा एसीटोनिट्राइल -0. 1% फॉर्मिक एसिड जलीय घोल था, और पता लगाने की तरंग दैर्ध्य 254 एनएम थी। स्तंभ का तापमान 25 डिग्री पर सेट किया गया था, और इंजेक्शन की मात्रा 10 μL थी। परिणाम: हमारे द्वारा पृथक और पहचाने गए यौगिकों के अवधारण समय, आणविक भार और टुकड़े आयनों की तुलना करके सोलह क्रोमैटोग्राफिक चोटियों / सत्रह घटकों की सटीक पहचान की गई। इन क्रोमैटोग्राफ़िक घटकों को कोनिफ़रिन, डेमिथाइल सिरिंजिन, सिरिंजिन, इचिनाकोसाइड, सिस्टानोसाइड ए, वर्बास्कोसाइड (ट्यूबुलोसाइड ए), सिस्टानोसाइड बी, आइसोवरबास्कोसाइड, 2'-एसिटाइलसिस्टनोसाइड ए, सिस्टानोसाइड सी, आइसोकिस्तानोसाइड सी, 2'-एसिटाइलवरबास्कोसाइड, ट्यूबलोसाइड बी, एपिमेरिडिनोसाइड ए, सिस्टानोसाइड के रूप में निर्धारित किया गया था। के, और सिस्टानोसाइड जे．

निष्कर्ष: एचपीएलसी-एमएस विधि सिस्टैंच हर्बा में 60% मेथनॉल अर्क के क्रोमैटोग्राफिक घटकों की पहचान के लिए उपयुक्त है। यह अध्ययन इस औषधीय जड़ी बूटी के रासायनिक घटकों के व्यापक विश्लेषण के लिए वैज्ञानिक प्रमाण प्रदान करेगा।

［मुख्य शब्द］ सिस्टैंचेस डेजर्टिकोलाहर्बा; Cistanche; एचपीएलसी-एमएस; मेथनॉल अर्क

सिस्टैंच डेजर्टिकोला वाईसीएमए

सिस्टैंच डेजर्टिकोला, जिसे "रेगिस्तान जिनसेंग" भी कहा जाता है,एक प्रसिद्ध टॉनिक चीनी औषधि है, जो चीन के भीतरी मंगोलिया, निंग्ज़िया, गांसु और झिंजियांग में वितरित किया जाता है [1]।इसमें किडनी-यांग को टोन करने, रक्त सार को लाभ पहुंचाने, आंतों को नम करने और शौच करने का प्रभाव होता है। इसका उपयोग आमतौर पर क्लीनिकों में पुरुष नपुंसकता, महिला बांझपन, कमर और घुटने में ठंडा दर्द, रक्त ठहराव, कब्ज के इलाज के लिए किया जाता है।, आदि [2-3]।सिस्टैंच डेजर्टिकोला, जो हैचीनी फार्माकोपिया (2015 संस्करण) के पहले भाग में शामिल, सिस्टैंच डेजर्टिकोला और सिस्टैंच ट्यूबुलोसा (4) का सूखा मांसल तना है। हमारी शोध टीम ने कई वर्षों तक सिस्टैंच पौधों पर व्यवस्थित और गहन शोध किया है।सिस्टैंच पौधों के रासायनिक घटकों में मुख्य रूप से फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड होते हैं, इसके अलावा इरिडोइड और उनके ग्लाइकोसाइड, लिग्नान और उनके ग्लाइकोसाइड, बेंजाइल अल्कोहल ग्लाइकोसाइड आदि होते हैं।[5]. आधुनिक औषधीय अध्ययनों से पता चलता है कि फिनाइल इथेनॉल ग्लाइकोसाइड, जीनस के मुख्य घटक, में न्यूरोप्रोटेक्टिव, एंटीऑक्सिडेंट, यकृत सुरक्षा, जीवाणुरोधी, एंटीवायरल, एंटी-ट्यूमर, एंटी-इंफ्लेमेटरी और अन्य प्रभाव होते हैं [6-11]।

रेगिस्तानी जिनसेंग

चीन में, सिस्टैंच डेजर्टिकोला पश्चिमी भीतरी मंगोलिया, उत्तरी झिंजियांग और क़िंगहाई में कायदाम बेसिन में वितरित किया जाता है, लेकिन दक्षिणी झिंजियांग में तारिम बेसिन में नहीं।. 1990 के दशक के उत्तरार्ध में, ताज़ोंग तेल क्षेत्र की रक्षा करने और रेगिस्तान को नियंत्रित करने के लिए, तेल क्षेत्र मुख्यालय ने ताज़ोंग तेल क्षेत्र के चारों ओर और रेगिस्तानी राजमार्ग के दोनों किनारों पर बड़ी संख्या में हेलोक्सिलोन अमोडेंड्रोन की शुरूआत की और हेलोक्सिलॉन अमोडेंड्रोन को सिस्टैंच के साथ टीका लगाया, जो 10 साल से अधिक समय से है। दक्षिण झिंजियांग में गर्म जलवायु और तेल बेस में अच्छी ड्रिप सिंचाई की स्थिति के कारण, सिस्टैंच डेजर्टिकोला की उपज बहुत अधिक है, और प्रति म्यू ताजा सिस्टैंच डेजर्टिकोला की उपज 500 किलोग्राम से अधिक तक पहुंच जाती है [8]। सिस्टैंच डेजर्टिकोला में कई रासायनिक घटकों ने प्रतिस्थापनों की विभिन्न कनेक्शन स्थितियों के कारण बड़ी संख्या में आइसोमर्स का उत्पादन किया है। इससे इस औषधीय सामग्री के क्रोमैटोग्राफ़िक शिखर की पहचान करने में बड़ी कठिनाइयाँ आती हैं। यदि नियंत्रण के रूप में मोनोमर यौगिकों के बिना केवल एलसी-एमएस पर भरोसा किया जाए तो क्रोमैटोग्राफिक शिखर के घटकों की सटीक पहचान करना मुश्किल है। इसलिए, प्रारंभिक चरण में इस कार्य पर कुछ साहित्यिक रिपोर्टें हैं। लेखक ने प्रारंभिक चरण में ताज़ोंग रेगिस्तान में खेती की जाने वाली सिस्टैंच डेजर्टिकोला से कई मोनोमर यौगिकों [9-11] को अलग किया। प्रारंभिक चरण में प्राप्त इन मोनोमर यौगिकों के माध्यम से, सिस्टैंच डेजर्टिकोला के 60% मेथनॉल अर्क की एचपीएलसी आंशिक क्रोमैटोग्राफिक चोटियों की सटीक पहचान की गई। इससे न केवल सिस्टैंच डेजर्टिकोला के रासायनिक घटकों में कुछ ज्ञात यौगिकों की बार-बार पहचान से बचा जा सकेगा बल्कि औषधीय सामग्री की गुणवत्ता नियंत्रण पर आगे के शोध के लिए कुछ संदर्भ भी मिलेंगे। इस पेपर में, एचपीएलसी-एमएस द्वारा सिस्टैंच डेजर्टिकोला के 60% मेथनॉल अर्क के 17 घटकों की पहचान की गई थी।

सिस्टैंच डेजर्टिकोला स्लाइस

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1.सामग्री

इनोवा-500 परमाणु चुंबकीय अनुनाद उपकरण (वेरियन, यूएसए); 6320IonTrap LC-MS मास स्पेक्ट्रोमीटर, EclipseXDB-C18 कॉलम (4.6 मिमी × 250 मिमी, 5 μ मीटर) (एगिलेंट, यूएसए); QUINTIX313-1CN प्रकार 1/10000 इलेक्ट्रॉनिक बैलेंस (सेडारिस डिवीजन); KQ-500DV अल्ट्रासोनिक क्लीनर (जियांग्सू कुशान अल्ट्रासोनिक इंस्ट्रूमेंट कंपनी लिमिटेड); केएमयूपी - Ⅰ ट्रेस एनालिटिकल अल्ट्रा प्योर वॉटर जेनरेशन सिस्टम (चेंगदू हाओचुन इंस्ट्रूमेंट इक्विपमेंट कंपनी लिमिटेड)।

इस प्रयोग में उपयोग किए गए 39 नियंत्रण पदार्थ प्रारंभिक चरण में लेखक द्वारा ताज़होंग में रेगिस्तान में खेती किए गए सिस्टैंच डेजर्टिकोला से अलग किए गए थे, और उनकी संरचना एनएमआर और अन्य स्पेक्ट्रोस्कोपी तकनीकों द्वारा निर्धारित की गई थी। 39 नियंत्रण नमूनों की संरचनाओं की पहचान सिस्टैंच डेजर्टिकोसाइड जे, सिस्टैंच डेजर्टिकोसाइड के, सिस्टैंच डेजर्टिकोसाइड एल, सिस्टैंच डेजर्टिकोसाइड एम, सिस्टैंच डेजर्टिकोसाइड एन, एपिमेरिडिनोसाइडए, आइसोसिस्टैनसाइड सी, एंजियोसायनिन बी, सिस्टैंच हेटरोफिलिन, आइसोकोर्निसिन, सिस्टैंच डेजर्टिकोसाइड डी, सिस्टैंच डेजर्टिकोसाइड सी, सिस्टैंच साइमोसिन, 2'- एसिटाइल के रूप में की गई थी। सिस्टैंच डेजर्टिकोसाइड ए, 2' - एसिटाइल सिस्टैंच डेजर्टिकोसाइड ए, सिस्टैंच डेजर्टिकोला बी, सिस्टैंच डेजर्टिकोला ए, इचिनोसाइड ए, सिस्टैंच डेजर्टिकोला ग्लाइकोसाइड ई, सैलिड्रोसाइड, 6' - एसिटाइल सैलिड्रोसाइड, सैलिसाइड बी, सिरिंजिन, डेमिथाइल सिरिंजिन, जुनिपेरिन, (2ई, 6ई) - 3, 7-डाइमिथाइल-8-हाइड्रॉक्सीक्टाडियन-1-O- - डी-ग्लूकोसाइड, लार्विसाइडिंग-4-ओ- - डी-ग्लूकोसाइड- - डी ग्लूकोपाइरानोसाइड, हेस्परिडिन ए, एरिया असाइड ए, 6-डीऑक्सीकैटापोल। उपरोक्त सभी सन्दर्भ पदार्थों की शुद्धता 98.0% से अधिक है। एसीटोनिट्राइल क्रोमैटोग्राफिक रूप से शुद्ध है (डिकमाप्योर, यूएसए), पानी अल्ट्राप्योर पानी है, और परीक्षण प्रक्रिया में उपयोग किए जाने वाले अन्य अभिकर्मक विश्लेषणात्मक शुद्ध अभिकर्मक हैं, जो बीजिंग केमिकल प्लांट द्वारा उत्पादित हैं।

इस प्रयोग में उपयोग की जाने वाली औषधीय सामग्री, सिस्टैंच डेजर्टिकोला, नवंबर 2010 में झिंजियांग के ताज़ोंग के रेगिस्तानी इलाके से एकत्र की गई थी। इसकी पहचान पेकिंग विश्वविद्यालय के स्कूल ऑफ फार्मेसी के प्रोफेसर तू पेंगफेई ने लेओबेसी पौधे सिस्टैंच डेजर्टिकोला के सूखे मांसल तने के रूप में की थी। नमूना पेकिंग विश्वविद्यालय के पारंपरिक चीनी चिकित्सा के आधुनिक अनुसंधान केंद्र में संग्रहीत किया गया था (नमूना संख्या: CD201011)।

सिस्टैंच डेजर्टिकोला स्लाइस

2.तरीके और परिणाम

2.1 संदर्भ समाधान तैयार करना

प्रारंभिक चरण में सिस्टैंच डेजर्टिकोला से प्राप्त 39 नियंत्रण नमूनों में से प्रत्येक का लगभग 1 मिलीग्राम लें, उन्हें सटीक रूप से तौलें, उन्हें क्रमशः 5 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में डालें, उन्हें मेथनॉल के साथ घोलें, और उन्हें पैमाने पर मात्रा दें, और फिर एकल नियंत्रण समाधान प्राप्त करें।

2.2 परीक्षण समाधान तैयार करना

चीनी फार्माकोपिया, 2015 संस्करण का संदर्भ लेते हुए, लगभग 1 ग्राम उत्पाद पाउडर लें (चौथी छलनी के माध्यम से), इसे सटीक रूप से तौलें, इसे 100 एमएल भूरे रंग की बोतल में डालें, इसमें 50 एमएल 60% मेथनॉल मिलाएं, इसे थपथपाएं, इसे अच्छी तरह से हिलाएं, द्रव्यमान का वजन करें, इसे 30 मिनट के लिए भिगोएँ, 40 मिनट के लिए अल्ट्रासोनिक उपचार करें, इसे ठंडा करें, द्रव्यमान को फिर से तौलें, इसे बनाने के लिए 50% मेथनॉल मिलाएं। द्रव्यमान कम करें, इसे अच्छी तरह से हिलाएं, इसे खड़ा करें, सतह पर तैरनेवाला लें, और 0.45 μM माइक्रोपोरस झिल्ली निस्पंदन का उपयोग करें, परीक्षण समाधान प्राप्त करने के लिए निरंतर निस्पंदन लें।

2.3 क्रोमैटोग्राफ़िक स्थितियाँ

AgilentEclipse XDB-C18 क्रोमैटोग्राफ़िक कॉलम (4.6 मिमी × 250 मिमी, 5 μ मीटर), डिटेक्शन वेवलेंथ 254 एनएम, कॉलम तापमान 25 डिग्री; मोबाइल चरण के रूप में एसीटोनिट्राइल (ए) - 0.1% फॉर्मिक एसिड जलीय घोल (बी) का उपयोग करना, ग्रेडिएंट रेफरेंस (0 - 20मिनट, 5% - 15% ए; 20 - 50मिनट, 15% - 30% ए; 50 - 60मिनट, 30% - 50% ए; 60 - 70मिनट, 50% - 95% ए); प्रवाह दर: 1.0mL · न्यूनतम-1, इंजेक्शन की मात्रा: 10 μL।

2.4 मास स्पेक्ट्रम स्थितियाँ

केशिका तापमान 350 डिग्री; केशिका वोल्टेज 3500V; जैकेट गैस (नाइट्रोजन) प्रवाह दर 12.0एल · न्यूनतम-1; सहायक गैस (नाइट्रोजन) दबाव 206.8kPa; मास स्पेक्ट्रोमेट्री की पूर्ण स्कैनिंग रेंज m/z 50~1000 है; परीक्षण के दौरान टकराव गैस हीलियम, टकराव ऊर्जा स्वचालित रूप से चुनी जाती है; प्रत्येक सकारात्मक और नकारात्मक आयन मोड के लिए 1 सुई लीजिए।

2.5 किसी संदर्भ पदार्थ का परीक्षण

2.1 के तहत तैयार किए गए 39 संदर्भ समाधानों का परीक्षण 2.3 क्रोमैटोग्राफिक स्थितियों और 2.4 मास स्पेक्ट्रोमेट्रिक स्थितियों के तहत किया गया था, और उनका अवधारण समय और सापेक्ष आणविक भार दर्ज किया गया था (तालिका 1)।

2.6 परीक्षण समाधान का निर्धारण

ताज़ोंग, झिंजियांग के रेगिस्तानी इलाके से एकत्र की गई औषधीय सामग्री सिस्टैंच डेजर्टिकोला लें और 2.2 में वर्णित विधि के अनुसार परीक्षण समाधान तैयार करें। फिर, 2.3 में वर्णित क्रोमैटोग्राफिक स्थितियों और 2.4 में वर्णित मास स्पेक्ट्रोमेट्री स्थितियों के अनुसार निर्धारण करें, और सकारात्मक और नकारात्मक आयन मोड में इसके एचपीएलसी क्रोमैटोग्राम और मास स्पेक्ट्रोमेट्री निर्धारित करें (आंकड़े 1-3)।

अंजीर। सिस्टैंच हर्बा के 60% मेथनॉल अर्क का 1 एचपीएलसी क्रोमैटोग्राम

अंजीर। सिस्टैंच हर्बा के 60% मेथनॉल अर्क का 2 सकारात्मक टीआईसी एमएस क्रोमैटोग्राम

अंजीर। सिस्टैंच हर्बा के 60% मेथनॉल अर्क का 3 नकारात्मक टीआईसी एमएस क्रोमैटोग्राम

2.7 औषधीय सामग्रियों के एचपीएलसी क्रोमैटोग्राम की पहचान

समान स्थितियों (2.3 क्रोमैटोग्राफिक स्थितियों और 2.4 मास स्पेक्ट्रोमेट्री स्थितियों) के तहत, परीक्षण नमूने और नियंत्रण नमूने के अवधारण समय और सापेक्ष आणविक भार की तुलना करके घटकों की पहचान की गई थी। परीक्षण नमूने के क्रोमैटोग्राम शिखर की विशिष्ट पहचान प्रक्रिया (चित्र 1) इस प्रकार है।

2.7.1 क्रोमैटोग्राफिक शिखर की पहचान 1

क्रोमैटोग्राफ़िक शिखर 1 का अवधारण समय 16.67 मिनट है। सकारात्मक आयन मोड में, एक्साइमर आयन शिखर m/z365 को [M+Na]+ के रूप में दिया जाता है, जबकि नकारात्मक आयन मोड में, एक्साइमर आयन शिखर m/z387 [M+COOH] - दिया जाता है। शिखर 1 का सापेक्ष आणविक भार 342 निर्धारित किया गया है। टुकड़ा आयन एम/जेड179 भी दिया गया है, जो ग्लाइकोसाइड बंधन के दरार के कारण ग्लूकोज के 1 अणु, 163 डी के नुकसान से उत्पन्न होता है। संदर्भ पदार्थ के अवधारण समय और सापेक्ष आणविक भार के अनुसार, क्रोमैटोग्राफ़िक शिखर 1 को कोनिफ़रिन के रूप में पहचाना गया था।

2.7.2 क्रोमैटोग्राफिक शिखर की पहचान 2

क्रोमैटोग्राफ़िक शिखर 2 का अवधारण समय 17.36 मिनट है। नकारात्मक आयन मोड के तहत, एक्साइमर आयन शिखर m/z357 [M - H] -, 393 [M+Cl] - दिए गए हैं, और शिखर 2 का सापेक्ष आणविक भार 358 निर्धारित किया गया है। साथ ही, टुकड़ा आयन m/z195 ग्लाइकोसाइड बंधन टूटने के कारण ग्लूकोज के 1 अणु, 163 Da के नुकसान से प्राप्त होता है। संदर्भ पदार्थ के अवधारण समय और सापेक्ष आणविक भार के अनुसार क्रोमैटोग्राफिक शिखर 2 की पहचान डेमिथाइलसिरिंगिन के रूप में की गई थी।

2.7.3 क्रोमैटोग्राफिक शिखर की पहचान 3

क्रोमैटोग्राफ़िक शिखर 3 का अवधारण समय 19.04 मिनट है, एक्साइमर आयन शिखर एम/जेड395 [एम+ना] सकारात्मक आयन मोड में दिया गया है, और एक्साइमर आयन शिखर एम/जेड417 [एम+एचसीओओ] - नकारात्मक आयन मोड में दिया गया है, और शिखर 3 का सापेक्ष आणविक भार 372 निर्धारित किया गया है। साथ ही, टुकड़ा आयन एम/जेड209 के नुकसान से प्राप्त होता है ग्लूकोज का 1 अणु, 163 दा, ग्लाइकोसाइड बंधन टूटने के कारण। संदर्भ पदार्थ के अवधारण समय और सापेक्ष आणविक भार के अनुसार क्रोमैटोग्राफिक शिखर 3 को सिरिंजिन के रूप में पहचाना गया था।

2.7.4 क्रोमैटोग्राफिक शिखर की पहचान 4

क्रोमैटोग्राफ़िक शिखर 4 का अवधारण समय 27.66 मिनट है। एक्साइमर आयन शिखर m/z804 [M+NH4] सकारात्मक आयन मोड में दिया गया है, और एक्साइमर आयन शिखर m/z785 [M-H] - नकारात्मक आयन मोड में दिया गया है। शिखर 4 का सापेक्ष आणविक भार 786 निर्धारित किया गया है। साथ ही, टुकड़ा आयन एम/जेड623 कैफीन के 1 अणु, 163 दा के एस्टर बंधन-तोड़ने वाले नुकसान से प्राप्त होता है। अवधारण समय और संदर्भ पदार्थ के सापेक्ष आणविक भार के साथ संयुक्त, क्रोमैटोग्राफ़िक शिखर 4 को इचिनेसिया के रूप में पहचाना गया था।

2.7.5 क्रोमैटोग्राफिक शिखर की पहचान 5

क्रोमैटोग्राफ़िक शिखर 5 का अवधारण समय 31.48 मिनट है, एक्साइमर आयन शिखर एम/जेड818 [एम+एनएच4 सकारात्मक आयन मोड में दिया गया है, और एक्साइमर आयन शिखर एम/जेड799 [एम-एच] - नकारात्मक आयन मोड में दिया गया है, और शिखर 5 का सापेक्ष आणविक भार 800 निर्धारित किया गया है। साथ ही, टुकड़ा आयन एम/जेड637 एस्टर से प्राप्त होता है कैफीन के 1 अणु की बंधन-तोड़ने वाली हानि, 163डीए। अवधारण समय और संदर्भ पदार्थ के सापेक्ष आणविक भार को मिलाकर, यह पुष्टि की गई कि क्रोमैटोग्राफिक शिखर 5 सिस्टैंच ग्लाइकोसाइड ए था।

तालिका 1 39 मानक यौगिकों का आणविक भार और अवधारण समय (tＲ)।

2.7.6 क्रोमैटोग्राफिक शिखर की पहचान 6

क्रोमैटोग्राफ़िक शिखर 6 का अवधारण समय 34.17 मिनट है। दो एक्साइमर आयन शिखर m/z846642 [M+NH4] + सकारात्मक आयन मोड में दिए गए हैं, और दो एक्साइमर आयन शिखर m/z827623 [M-H] - नकारात्मक आयन मोड में भी दिए गए हैं। यह अनुमान लगाया गया है कि शिखर 6 में 828624 के सापेक्ष आणविक भार के साथ दो यौगिक हो सकते हैं। साथ ही, टुकड़ा आयन एम/जेड665461 कैफीन के 1 अणु, 163 दा के एस्टर बंधन टूटने के नुकसान से प्राप्त होता है, और टुकड़ा आयन एम/जेड622 एसिटाइल एस्टर बंधन टूटने से प्राप्त होता है। इन दो यौगिकों को अलग किया गया और संदर्भ पदार्थ के अवधारण समय और सापेक्ष आणविक भार के साथ जोड़ा गया; क्रोमैटोग्राफ़िक शिखर 6 सिमिसिफ्यूगरिन और एंथोसायनिन ए का मिश्रण था।

2.7.7 क्रोमैटोग्राफिक शिखर की पहचान 7

क्रोमैटोग्राफ़िक शिखर 7 का अवधारण समय 35.34 मिनट है। एक्साइमर आयन शिखर m/z832 [M+NH4]+, 837 [M+Na]+ सकारात्मक आयन मोड में दिया गया है, और एक्साइमर आयन शिखर m/z813 [M-H] - नकारात्मक आयन मोड में दिया गया है, और शिखर 7 का सापेक्ष आणविक भार 814 है। साथ ही, टुकड़ा आयन m/z637 1 अणु के एस्टर बंधन-तोड़ने वाले नुकसान से प्राप्त होता है फेरुलिक एसिड, 177Da. अवधारण समय और संदर्भ पदार्थ के सापेक्ष आणविक भार के साथ संयुक्त, क्रोमैटोग्राफिक शिखर 7 को सिस्टैंच ग्लाइकोसाइड बी के रूप में पहचाना गया था।

2.7.8 क्रोमैटोग्राफिक शिखर की पहचान 8

क्रोमैटोग्राफ़िक शिखर 8 का अवधारण समय 36.17 मिनट है, एक्साइमर आयन शिखर एम/जेड647 [एम+ना] सकारात्मक आयन मोड में दिया गया है, और एक्साइमर आयन शिखर एम/जेड623 [एम-एच] - नकारात्मक आयन मोड में दिया गया है, और शिखर 8 का सापेक्ष आणविक भार 624 निर्धारित किया गया है। साथ ही, टुकड़ा आयन एम/जेड461 दिया गया है, जो से उत्पन्न होता है एस्टर बंधन टूटना और कैफीन समूह के 1 अणु का नुकसान, 163 दा। अवधारण समय और संदर्भ पदार्थ के सापेक्ष आणविक भार के साथ संयुक्त, क्रोमैटोग्राफ़िक शिखर 8 को हेटेरोकोएनोसाइड के रूप में पहचाना गया था।

2.7.9 क्रोमैटोग्राफिक शिखर की पहचान 9

क्रोमैटोग्राफ़िक शिखर 9 का अवधारण समय 38.20 मिनट है। एक्साइमर आयन की चोटियाँ m/z841 [M-H] -, 877 [M+Cl] - सकारात्मक आयन मोड में दी गई हैं। शिखर 9 का सापेक्ष आणविक भार 842 निर्धारित किया गया है। साथ ही, टुकड़ा आयन एम/जेड679636 कैफीन के 1 अणु, 163 दा, और एसिटाइल के 1 अणु, 43 दा के एस्टर बंधन-तोड़ने वाले नुकसान से प्राप्त होता है। संदर्भ पदार्थ का अवधारण समय और सापेक्ष आणविक भार सुसंगत है, और पहचान शिखर 9 2- 2'-एसिटाइल सिस्टैंच ग्लाइकोसाइड ए है।

2.7.10 क्रोमा की पहचानस्थलाकृतिक पीएक 10

क्रोमैटोग्राफ़िक शिखर 10 का अवधारण समय 39.04 मिनट है। एक्साइमर आयन शिखर m/z656 [M+NH4]+, 661 [M+Na] सकारात्मक आयन मोड में दिया गया है, और एक्साइमर आयन शिखर m/z637 [M-H] -, 673 [M+Cl] - नकारात्मक आयन मोड में दिया गया है। शिखर 10 का सापेक्ष आणविक भार 638 निर्धारित किया गया है। साथ ही, टुकड़ा आयन एम/जेड475 कैफीन के 1 अणु, 163 दा के एस्टर बंधन को तोड़ने वाले नुकसान से प्राप्त होता है। संदर्भ पदार्थ का अवधारण समय और सापेक्ष आणविक भार सुसंगत है, और पहचान शिखर 10 सिस्टैंच सी है।

2.7.11 क्रोमैटोग्राफिक शिखर की पहचान 11

क्रोमैटोग्राफ़िक शिखर 11 का अवधारण समय 40.82 मिनट है। एक्साइमर आयन शिखर m/z661 [M+Na]+, 677 [M+K + सकारात्मक आयन मोड में दिया गया है, और एक्साइमर आयन शिखर m/z637 [M-H] -, 673 [M+Cl] - नकारात्मक आयन मोड में दिया गया है। यह निर्धारित किया जा सकता है कि शिखर 11 का सापेक्ष आणविक भार 638 है। साथ ही, टुकड़ा आयन एम/जेड475 कैफीन के 1 अणु, 163 दा के एस्टर बंधन-तोड़ने वाले नुकसान से प्राप्त होता है। अवधारण समय और संदर्भ पदार्थ के सापेक्ष आणविक भार को मिलाकर, क्रोमैटोग्राफ़िक शिखर 11 को आइसोसिस्तांच ग्लाइकोसाइड सी के रूप में पहचाना गया था।

2.7.12 क्रोमैटोग्राफिक शिखर की पहचान 12

क्रोमैटोग्राफ़िक शिखर 12 का अवधारण समय 41.48 मिनट है। एक्साइमर आयन शिखर m/z684 [M+NH4]+, 689 [M+Na + सकारात्मक आयन मोड में दिया गया है, और एक्साइमर आयन शिखर m/z665 [M-H] - नकारात्मक आयन मोड में दिया गया है। यह निर्धारित किया जा सकता है कि शिखर 12 का सापेक्ष आणविक भार 666 है। साथ ही, यह दिखाया गया है कि टुकड़ा आयन एम/जेड503460 एस्टर बंधन से कैफीन के 1 अणु, 163 दा, और एसिटाइल के 1 अणु, 43 दा के नुकसान को तोड़ता है। संदर्भ पदार्थ के अवधारण समय और सापेक्ष आणविक भार के अनुसार, क्रोमैटोग्राफ़िक शिखर 12 की पहचान a2'-एसिटाइल कोएलियाओसाइड के रूप में की गई थी।

सिस्टैंच डेजर्टिकोला प्रयोग

2.7.13 क्रोमैटोग्राफिक शिखर की पहचान 13

क्रोमैटोग्राफ़िक शिखर 13 का अवधारण समय 44.29 मिनट है, एक्साइमर आयन शिखर एम/जेड689 [एम+ना] सकारात्मक आयन मोड में दिया गया है, और एक्साइमर आयन शिखर एम/जेड665 [एम-एच] - नकारात्मक आयन मोड में दिया गया है, और शिखर 13 का सापेक्ष आणविक भार 666 है। साथ ही, यह दिखाया गया है कि टुकड़ा आयन एम/जेड503460 आता है एस्टर बंधन तोड़ने से कैफीन के 1 अणु, 163 Da, और एसिटाइल के 1 अणु, 43 Da की हानि होती है। अवधारण समय और संदर्भ पदार्थ के सापेक्ष आणविक भार के साथ संयुक्त, क्रोमैटोग्राफ़िक शिखर 13 को एंथोसायनिन बी के रूप में पहचाना गया था।

2.7.14 क्रोमैटोग्राफिक शिखर की पहचान 14

क्रोमैटोग्राफ़िक शिखर 14 का अवधारण समय 46.67 मिनट है। एक्साइमर आयन शिखर m/z675 [M+Na] सकारात्मक आयन मोड में दिया गया है, और एक्साइमर आयन शिखर m/z651 [M-H] - नकारात्मक आयन मोड में दिया गया है। शिखर 14 का सापेक्ष आणविक भार 652 है। साथ ही, टुकड़ा आयन m/z475 फेरुलिक एसिड समूह, 177Da के 1 अणु के एस्टर बांड-ब्रेकिंग नुकसान से प्राप्त होता है। अवधारण समय और संदर्भ पदार्थ के सापेक्ष आणविक भार के साथ संयुक्त, क्रोमैटोग्राफिक शिखर 14 को एपिमेरिडिनोसाइड ए के रूप में पहचाना गया था।

2.7.15 क्रोमैटोग्राफिक शिखर की पहचान 15

क्रोमैटोग्राफ़िक शिखर 15 का अवधारण समय 49.90 मिनट है। एक्साइमर आयन शिखर m/z698 [M+NH4]+, 703 [M+Na + सकारात्मक आयन मोड में दिया गया है, और एक्साइमर आयन शिखर m/z679 [M-H] -, 715 [M+Cl] - नकारात्मक आयन मोड में दिया गया है। शिखर 15 का सापेक्ष आणविक भार 680 है। साथ ही, टुकड़ा आयन एम/जेड517474 कैफीन के 1 अणु, 163 दा, और एसिटाइल के 1 अणु, 43 दा के एस्टर बंधन-तोड़ने वाले नुकसान से प्राप्त होता है। संदर्भ पदार्थ के अवधारण समय और सापेक्ष आणविक भार के आधार पर क्रोमैटोग्राफिक शिखर 15 की पहचान सिस्टैंच ग्लाइकोसाइड K के रूप में की गई थी।

2.7.16 क्रोमैटोग्राफिक शिखर की पहचान 16

क्रोमैटोग्राफ़िक शिखर 16 का अवधारण समय 55.36 मिनट है। सकारात्मक आयन मोड में, एक्साइमर आयन शिखर m/z717 [M+N दिया गया है, जबकि नकारात्मक आयन मोड में, एक्साइमर आयन शिखर m/z693 [M-H] -, 729 [M+Cl] - दिया गया है, जिसके परिणामस्वरूप शिखर 16 के लिए 694 का सापेक्ष आणविक भार होता है। साथ ही, यह दिखाया गया है कि टुकड़ा आयन m/z517474 एस्टर बंधन तोड़ने के नुकसान से आता है फेरुलिक एसिड समूह का 1 अणु, 177 Da, और एसिटाइल समूह का 1 अणु, 43 Da. संदर्भ पदार्थ के अवधारण समय और सापेक्ष आणविक भार के साथ संयुक्त, क्रोमैटोग्राफिक शिखर 16 को सिस्टैंच ग्लाइकोसाइड जे के रूप में पहचाना गया था। सिस्टैंच डेजर्टिकोला के 60% मेथनॉल अर्क के क्रोमैटोग्राफिक शिखरों की पहचान एचपीएलसी-एमएस द्वारा सापेक्ष आणविक भार, अवधारण समय और अलग संदर्भ पदार्थ के टुकड़े आयन के साथ संयुक्त रूप से की गई थी। परिणामों से पता चला कि 16 क्रोमैटोग्राफ़िक चोटियों के 17 घटकों की सटीक पहचान की गई (तालिका 2)।

तालिका 2: सिस्टैंच हर्बा और संदर्भ मानक यौगिकों की पहचानी गई क्रोमैटोग्राफ़िक चोटियाँ

3  . बहस

3.1 परीक्षण लेख तैयार करने की विधि का चयन

इस अध्ययन का मुख्य उद्देश्य सिस्टैंच डेजर्टिकोला की एचपीएलसी चोटियों की पहचान करना है। इसलिए, निष्कर्षण विलायक और निष्कर्षण विधि का चयन अधिक एचपीएलसी शिखर प्राप्त करने की क्षमता पर आधारित है। शोध दल ने सिस्टैंच डेजर्टिकोला पर दीर्घकालिक शोध किया है और गुणवत्ता विश्लेषण में बहुत काम किया है। इस पेपर में, अनुसंधान समूह और चीनी फार्माकोपिया (2015 संस्करण) के पिछले विश्लेषण कार्य के आधार पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला के निष्कर्षण विलायक और निष्कर्षण विधि का भी चयन किया गया था। अंत में, 40 मिनट के लिए 60% मेथनॉल विलायक अल्ट्रासोनिक निष्कर्षण को निष्कर्षण विधि के रूप में चुना गया।

3.2 एचपीएलसी-एमएस स्थिति चयन

इस पेपर में क्रोमैटोग्राफ़िक कॉलम का चयन अनुसंधान समूह के प्रारंभिक चरण में सिस्टैंच डेजर्टिकोला के गुणवत्ता विश्लेषण और AgilentZORBAXEclipsePlusC18 (4.6mm × 250mm,5 μm), DionexC18(4.6mm × 250mm,5 μm), ThermoC18(4.6mm × 250mm,5 μm) की जांच पर आधारित है। एम) क्रोमैटोग्राफ़िक कॉलम, अंत में AgilentZORBAXEclipsePlusC18 क्रोमैटोग्राफ़िक कॉलम (4.6 मिमी × 250 मिमी, 5 μ मीटर) का चयन करें, इसका सिस्टैंच डेजर्टिकोला पर अच्छा पृथक्करण प्रभाव पड़ता है; 39 संदर्भ पदार्थों में फेनिलएथेनॉइड, लिग्नांस और फेनिलप्रोपेनॉइड शामिल हैं, इसलिए पता लगाने की तरंग दैर्ध्य 254nm है; उसी समय, क्रोमैटोग्राफिक पृथक्करण और मास स्पेक्ट्रोमेट्री का पता लगाने पर मेथनॉल-पानी, एसीटोनिट्राइल-पानी, मेथनॉल-0.1% फॉस्फोरिक एसिड पानी, एसीटोनिट्राइल-0.1% फॉर्मिक एसिड पानी जैसे मोबाइल चरण के प्रभावों की जांच की गई, और एसीटोनिट्राइल-0.1% फॉर्मिक एसिड पानी को अंततः मोबाइल चरण के रूप में चुना गया।

3.3 सारांश

इस अध्ययन में स्थापित विधि ने 60% मेथनॉल के 16 क्रोमैटोग्राफिक शिखरों में से 17 घटकों की सटीक पहचान कीनिकालनाकासिस्टैंच डेजर्टिकोला.

अनुसंधान के परिणाम न केवल औषधीय सामग्री के आगे की गुणवत्ता विश्लेषण के लिए एक निश्चित संदर्भ मूल्य रखते हैं, बल्कि औषधीय सामग्री के ज्ञात यौगिकों की संरचना की पहचान पर कुछ दोहराव वाले काम से भी बच सकते हैं। हालाँकि, सामान्य तौर पर, अपेक्षाकृत कम पहचाने गए क्रोमैटोग्राफ़िक शिखर हैं, और कई क्रोमैटोग्राफ़िक शिखरों की पहचान नहीं की गई है क्योंकि उन्हें संदर्भ पदार्थ को नहीं सौंपा गया है। अधिकांश पहचाने गए घटक फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड हैं, जबकि लिग्नान दुर्लभ हैं। ऐसा इसलिए हो सकता है क्योंकि चीनी फार्माकोपिया के 2015 संस्करण में उल्लिखित निष्कर्षण विधि मुख्य रूप से फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स के उद्देश्य से है, या क्योंकि इस औषधीय सामग्री के अर्क में इचिनाकोसाइड और कोलीफॉर्म जैसे यौगिकों की सामग्री बहुत अधिक है, जिससे कम सामग्री वाले अन्य यौगिकों का पता लगाना मुश्किल हो जाता है। विशिष्ट कारणों को और स्पष्ट करने की आवश्यकता है।

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