एंजाइम किण्वन के दौरान एंटीऑक्सिडेंट गतिविधि में परिवर्तन

अध्याय 4 एंजाइम किण्वन के दौरान एंटीऑक्सिडेंट गतिविधि में परिवर्तन

फल पोषक तत्वों में समृद्ध होते हैं और कई किस्मों में आते हैं। किण्वन के दौरान पदार्थों का उत्पादन जटिल और विविध है, और उनके कई अध्ययन हैंएंटीऑक्सिडेंट गतिविधि। लोग हमेशा खोज और खोज कर रहे हैं, उन खाद्य पदार्थों की तलाश कर रहे हैं जो फायदेमंद हैंमानव स्वास्थ्य, इसलिए एंजाइम हाल के वर्षों में एक गर्म विषय बन गए हैं। पारंपरिक एंजाइम उत्पादन प्रक्रिया फलों और सब्जियों के प्राकृतिक किण्वन द्वारा एंजाइम प्राप्त करना है। पिछले शोध के आधार पर, यह लेख 4 लाभकारी किण्वन बैक्टीरिया को जोड़ता है। यह बैक्टीरिया भी एंजाइम में मौजूद है। बैक्टीरिया के अतिरिक्त जोड़ के बाद, किण्वन प्रक्रिया में सूक्ष्मजीवों की संख्या और प्रकार को बदल दिया जाता है। इस परिवर्तन का इसकी एंटीऑक्सिडेंट गतिविधि पर क्या प्रभाव पड़ेगा? पिछले अध्याय में, हमने सेब को एक विस्तृत विवरण के लिए एक उदाहरण के रूप में लिया। प्रायोगिक समूह की एंटीऑक्सिडेंट गतिविधि और विभिन्न एंजाइम सांद्रता में नियंत्रण समूह की तुलना से पता चला कि प्रयोगात्मक समूह में एंजाइम की एंटीऑक्सिडेंट गतिविधि नियंत्रण समूह की तुलना में अधिक थी। एंटीऑक्सिडेंट गतिविधि की तीव्रता भी एक निश्चित तरीके से एंजाइम की विश्वसनीयता को दर्शाती है।

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यह अध्याय मूल प्रयोग के लिए सामान्य फल नाशपाती और खट्टे जोड़ता है, और ट्रैक करता है और उनके परिवर्तन का पता लगाता हैएंटीऑक्सिडेंट गतिविधिकिण्वन के दौरान। लागतों को कम करने के आधार पर, प्रयोगों के माध्यम से, हम अधिक व्यापक रूप से बैक्टीरिया को जोड़ने के बाद एंजाइमों की जैविक गतिविधि को प्रतिबिंबित करने की उम्मीद करते हैं, और माइक्रोबियल एंजाइम बी के उत्पादन के लिए एक निश्चित सैद्धांतिक आधार और डेटा समर्थन प्रदान करते हैं।वाई आर्टिफिशियल इनोक्यूलेशन ऑफ स्ट्रेन.

 

 

 

4.1 सामग्री और विधियाँ

4.1.1 सामग्री

(१) प्रायोगिक सामग्री

बाँझ परिस्थितियों में बाँझ पानी के साथ ताजे सेब, नाशपाती और खट्टे फलों को धोएं, उन्हें स्वाभाविक रूप से एक बाँझ ऑपरेटिंग टेबल पर सूखा, उन्हें छीलें और बाद में उपयोग के लिए उन्हें टुकड़ा करें। 1: 1 के द्रव्यमान अनुपात में एक निष्फल ग्लास जार में सफेद चीनी और फल जोड़ें। प्रयोग के लिए आवश्यक बैक्टीरिया को सक्रिय करें और उन्हें इष्टतम योजना के अनुसार एंजाइम में टीका लगाएं (यह ऑपरेशन चरण नियंत्रण समूह के लिए छोड़ा गया है), इसे सील करें और इसे एक शांत और शुष्क स्थान पर रखें। फलों के लुगदी वाले सभी एंजाइम तरल को प्राप्त करने के लिए कमरे के तापमान पर किण्वन के विभिन्न समय अवधि में नमूने लें, और इसे फ़िल्टर करें। प्रयोगात्मक नमूने के रूप में सतह पर तैरनेवाला लें, और इसका उपयोग प्रासंगिक डेटा को 10, 000 आरपीएम को 15 मिनट के लिए उच्च गति वाले सेंट्रीफ्यूज में centrifuging के बाद मापने के लिए करें। यह ध्यान देने योग्य है कि एंजाइम बनाने की प्रक्रिया में, अनावश्यक संदूषण से बचने के लिए, हमारे सभी संचालन बाँझ परिस्थितियों में किए जाते हैं।

(२) मुख्य उपकरण

प्रयोग के लिए आवश्यक उपकरण 3.1.1 (2) के समान हैं।

 

4.1.2 तरीके

(1) किण्वन के दौरान कुल फिनोल सामग्री में परिवर्तन

वॉल्यूम 46ml बनाने के लिए डिस्टिल्ड वॉटर के साथ 450μl का नमूना समाधान जोड़ा गया था, और फिर फोलिन-फेनोल अभिकर्मक के 1ml को जोड़ा गया था। अच्छी तरह से मिलाएं और 3min के लिए प्रतिक्रिया करें। फिर 20% Naco3 के 3ml को जोड़ा गया। मिश्रण को लगातार तापमान पानी के स्नान में 2h के लिए 25 डिग्री पर हिलाया गया था। डिस्टिल्ड वॉटर का इस्तेमाल रिक्त नियंत्रण के रूप में किया गया था। अवशोषण A को स्पेक्ट्रोफोटोमीटर द्वारा 760nm पर मापा गया था। प्रत्येक उपचार के लिए तीन प्रतिकृति की गई। कुल फिनोल सामग्री की गणना मानक वक्र समीकरण के अनुसार की गई थी।

(2) किण्वन के दौरान शक्ति को कम करने में परिवर्तन

0 की एकाग्रता के साथ फॉस्फेट बफर के 2.5ml में 45 0} μl जोड़ें। । एक खाली नियंत्रण के रूप में डिस्टिल्ड पानी का उपयोग करें, और एक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर के साथ 700nm के तरंग दैर्ध्य पर अवशोषण A को मापें। प्रत्येक उपचार के लिए 3 प्रतिकृति करें। बिजली को कम करने की ताकत अवशोषण मूल्य के आधार पर निर्धारित की जाती है।

 

(3) किण्वन के दौरान सुपरऑक्साइड आयियन कट्टरपंथी मैला ढोने की क्षमता में परिवर्तन
0 के 4.5 मिलीलीटर रखें। 20 मिनट के बाद, एंजाइम नमूना समाधान के 1 एमएल और 25 मिमीोल/एल के दाढ़ एकाग्रता के साथ पाइरोग्लोल समाधान के 0.4 एमएल जोड़ें। अच्छी तरह से मिलाएं और 5 मिनट के लिए 25 डिग्री पानी के स्नान में रखें। प्रतिक्रिया को समाप्त करने के लिए 8 मोल/एल एचसीएल के 1.0 एमएल जोड़ें। एक संदर्भ के रूप में ट्रिस-एचसीएल बफर का उपयोग करें और स्कैवेंजिंग दर की गणना करने के लिए 299 एनएम पर अवशोषण ए को मापने के लिए एक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करें। रिक्त नियंत्रण समूह नमूना के बजाय 1 एमएल विलायक का उपयोग करता है। सुपरऑक्साइड आयन रेडिकल स्कैवेंजिंग दर की गणना फॉर्मूला 4.1 के अनुसार की जाती है: सुपरऑक्साइड आयनों कट्टरपंथी स्कैवेंजिंग दर (%)=(ए 1- ए 2)/ए 1 × 100 (4.1) जहां: ए 1 रिक्त नियंत्रण समूह का अवशोषण है; A2 प्रयोगात्मक समूह के एंजाइम नमूना समाधान का अवशोषण है।

 

(4) किण्वन के दौरान हाइड्रॉक्सिल कट्टरपंथी मैला ढोने की क्षमता में परिवर्तन

 

2ml में 45 0 μl नमूना समाधान में पानी जोड़ें, फिर इसे 6 मिमी/एल के दाढ़ द्रव्यमान सांद्रता के साथ हाइड्रोजन पेरोक्साइड के 1.4ml में जोड़ें, फिर 20 मिमी/एल के मोलर द्रव्यमान सांद्रता के साथ सोडियम सैलिसिलेट के 0.6ml को जोड़ें। 1h। आसुत जल के साथ शून्य, और एक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर के साथ 562nm के तरंग दैर्ध्य पर अवशोषण A को मापें। प्रत्येक उपचार के लिए तीन प्रतिकृति की गई। हाइड्रॉक्सिल रेडिकल स्कैवेंजिंग दर की गणना फॉर्मूला 4.2 के अनुसार की गई थी: हाइड्रॉक्सिल कट्टरपंथी मैला ढोने की दर (%)=[(ए 1- ए 2)/ए 1] × 100 (4.2) जहां: ए 1 रिक्त स्थान का औसत अवशोषण है; A2 नमूना समाधान का औसत अवशोषण है।

 

(5) किण्वन के दौरान डीपीपीएच मुक्त कट्टरपंथी मैला ढोने की क्षमता में परिवर्तन
एंजाइम नमूना समाधान के 2 एमएल को 1 0 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क पर सटीक रूप से स्थानांतरित करें, फिर 2 × 10-4 मोल/एल के दाढ़ द्रव्यमान सांद्रता के साथ, वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में 80% डीपीपीएच इथेनॉल जलीय जलीय घोल के 2 एमएल जोड़ें। अच्छी तरह से मिलाएं और 30 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर खड़े होने दें। संदर्भ के रूप में 80% इथेनॉल समाधान लें और 517 एनएम के तरंग दैर्ध्य पर नमूने के अवशोषण को मापें, जिसे A1 के रूप में दर्ज किया गया है। डीपीपीएच समाधान के 2 एमएल और 80% इथेनॉल समाधान के 2 एमएल मिलाएं, और एक ही तरंग दैर्ध्य पर उनके अवशोषण को मापें, जिसे A0 के रूप में दर्ज किया गया है। एंजाइम समाधान के 2 एमएल और 80% इथेनॉल समाधान के 2 एमएल मिलाएं, और एक ही तरंग दैर्ध्य पर उनके अवशोषण को मापें, जिसे ए 2 के रूप में दर्ज किया गया है। प्रत्येक उपचार के लिए तीन प्रतिकृति की गई। फॉर्मूला 4.3 के अनुसार DPPH मुक्त कट्टरपंथी मैला ढोने की दर की गणना करें:
DPPH मुक्त कट्टरपंथी स्कैवेंजिंग दर (%) {{{0}} A2 2 एमएल एंजाइम समाधान और 2 एमएल 80% इथेनॉल मिश्रित समाधान का अवशोषण है; A0 2 एमएल डीपीपीएच समाधान और 2 एमएल 80% इथेनॉल मिश्रित समाधान का अवशोषण है।

(6) किण्वन के दौरान एबीटीएस मुक्त कट्टरपंथी मैला ढोने की क्षमता में परिवर्तन
8 μL नमूना समाधान को फॉस्फेट बफर (5 mmol/L ph 7.4) के साथ 10 μL के लिए पूरक किया गया था और फिर समान रूप से 10 एमएल पोटेशियम सल्फेट के साथ मिश्रित किया गया था और 30 डिग्री की प्रतिक्रिया तापमान और 5 मिनट की प्रतिक्रिया समय पर प्रतिक्रिया करने के लिए मिश्रित समाधान का एबीटीएस मिश्रित समाधान था। डिस्टिल्ड पानी के साथ समाधान शून्य करें और एक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके 734 एनएम के तरंग दैर्ध्य पर अवशोषण ए को मापें। प्रत्येक उपचार के लिए तीन प्रतिकृति की गई। ABTS मुक्त कट्टरपंथी मैला ढोने की दर की गणना फॉर्मूला 4.4 के अनुसार की गई थी:
ABTS मुक्त कट्टरपंथी मैला ढोने की दर (%)=[(A 1-} A2)/A1] × 100 (4.4) जहां: A1 रिक्त नियंत्रण समूह का अवशोषण है; A2 नमूना प्रयोगात्मक समूह का अवशोषण है।