Cistanche डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड्स संज्ञानात्मक गिरावट को कम करते हैं और उम्र बढ़ने के मॉडल चूहों में स्मृति में सुधार करते हैं

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युआन गाओ1,*, बिंग ली1,*, होंग लियू1, यजुआन तियान2, चाओ गु1, शियाओली ड्यू1, रेन बू1, जी गाओ1, यांग लियू1, गैंग ली1

सार

हाल के साक्ष्य से पता चलता है कि आंत माइक्रोबायोटा-मस्तिष्क अक्ष में परिवर्तन से संज्ञानात्मक हानि हो सकती है। वर्तमान अध्ययन में, हमने देखा कि चूहों में डी-गैलेक्टोज के लंबे समय तक प्रशासन ने संज्ञानात्मक गिरावट, आंत माइक्रोबियल डिस्बिओसिस, परिधीय सूजन और ऑक्सीडेटिव तनाव को प्रेरित किया। उम्र से संबंधित संज्ञानात्मक गिरावट के इस मॉडल में, सिस्टैन्च डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड्स (सीडीपीएस) ने आंत के माइक्रोबियल होमियोस्टेसिस को बहाल करके डी गैलेक्टोज-उपचारित चूहों में संज्ञानात्मक कार्य में सुधार किया, जिससे ऑक्सीडेटिव तनाव और परिधीय सूजन कम हो गई। इन उम्र बढ़ने वाले मॉडल चूहों में सीडीपीएस के लाभकारी प्रभावों को एंटीबायोटिक दवाओं के साथ गटमाइक्रोबायोटा के उन्मूलन या साइक्लोफॉस्फेमाइड के साथ इम्युनोसुप्रेशन के माध्यम से समाप्त कर दिया गया था। सीरम मेटाबॉलिक प्रोफाइलिंग से पता चला है कि उम्र बढ़ने वाले मॉडल चूहों में क्रिएटिनिन, वेलिन, एल-मेथियोनीन, ओ-टोल्यूडीन, एन-एथिलैनिलिन, यूरिक एसिड और प्रोलाइन के स्तर को बदल दिया गया था, लेकिन सीडीपीएस द्वारा बहाल किया गया था। इन निष्कर्षों से पता चला है कि सीडीपीएस आंत माइक्रोबायोटा मस्तिष्क अक्ष के होमोस्टैसिस को बहाल करके चूहों में डी-गैलेक्टोज-प्रेरित उम्र बढ़ने के मॉडल में संज्ञानात्मक कार्य में सुधार करता है, जो एक एमिनो एसिड असंतुलन, परिधीय सूजन और ऑक्सीडेटिव तनाव को कम करता है। सीडीपीएस इस प्रकार स्मृति और सीखने संबंधी विकारों वाले रोगियों के लिए चिकित्सीय क्षमता को दर्शाता है, विशेष रूप से जो आंतमाइक्रोबियल डिस्बिओसिस से संबंधित हैं।

सिस्टांचेजड़ी बूटी

परिचय

डी-गैलेक्टोज (डी-गैल) और बेरिलियम लवण का लंबे समय तक प्रशासन प्रायोगिक पशु मॉडल और इन विट्रो प्राथमिक सेल संस्कृतियों में उम्र बढ़ने को प्रेरित करता है और प्राकृतिक उम्र बढ़ने की प्रक्रिया [1-4] के अंतर्निहित तंत्र की पहचान करने के लिए उपयोग किया जाता है। पिछले अध्ययनों से पता चलता है कि डी-गैलेक्टोज-प्रेरित उम्र बढ़ने वाले मॉडल चूहों में संज्ञानात्मक गिरावट कम तंत्रिका विकास कारक (एनजीएफ) प्रोटीन के स्तर और मस्तिष्क में प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (आरओएस) में वृद्धि से संबंधित है, जो दोनों हिप्पोकैम्पस न्यूरॉन्स के अध: पतन का कारण बनते हैं और कम करते हैं न्यूरोजेनेसिस [3, 4]। हाल के अध्ययनों से यह भी पता चला है कि मानव आंत माइक्रोबायोटा की संरचना और संख्या उम्र बढ़ने की प्रक्रिया के दौरान महत्वपूर्ण रूप से बदल जाती है [5]।

सिस्टैंच डेजर्टिकोला एक जड़ी बूटी है जो मुख्य रूप से चीन के उत्तर-पश्चिमी रेगिस्तानी क्षेत्र में उगती है और पारंपरिक चीनी चिकित्सा में उपयोग की जाती है। इसे आमतौर पर "रेगिस्तान के जिनसेंग" के रूप में जाना जाता है। सिस्टैंच डेजर्टिकोला के अर्क में कई औषधीय रूप से सक्रिय यौगिक होते हैं, जिनमें फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स, इरिडोइड्स, लिग्नोज़, ओलिगोसेकेराइड्स, पॉलीसेकेराइड्स और अमीनो एसिड शामिल हैं; ये यौगिक एंटी-इंफ्लेमेटरी, एंटी-ऑक्सीडेटिव, एंटी-सीनसेंट, न्यूरोप्रोटेक्टिव और इम्यूनोमॉड्यूलेटरी गुणों से जुड़े हैं [6, 7]। उदाहरण के लिए, कोलोरेक्टल कैंसर [8] के इलाज के लिए पारंपरिक चीनी चिकित्सा में सिस्टैंच डेजर्टिकोला से निकाले गए पॉलीसेकेराइड का उपयोग किया गया है। उपयोगी बायोएक्टीविटी के साथ कमजोर जहरीले पॉलीसेकेराइड की एक विस्तृत श्रृंखला को कई जीवों से अलग किया गया है, जैसे कि चुआनकिओंग पॉलीसेकेराइड, गैनोडर्मा ल्यूसिडम पॉलीसेकेराइड, और लाइसियम बारबारम पॉलीसेकेराइड [9–11]। सीडीए 0.05 एक गैलेक्टोग्लुकन है जो सिस्टांच डेजर्टिकोला से अलग किया गया है जो कई फायदेमंद आंतों के बैक्टीरिया के विकास को बढ़ावा देता है, जिसमें बैक्टेरॉइड्स और लैक्टोबैसिलस [12] की कई प्रजातियां शामिल हैं।

सामान्य उम्र बढ़ने की प्रक्रिया के अंतर्निहित तंत्र को कई मानव रोगों जैसे कि न्यूरोडीजेनेरेटिव विकार, कोरोनरी एथेरोस्क्लेरोसिस, टाइप 2 मधुमेह (T2DM), और उच्च रक्तचाप [13, 14] में भी फंसाया जाता है। हाल के अध्ययनों से पता चला है कि आंतों के वनस्पतियों में परिवर्तन मानव उम्र बढ़ने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं [15]। कई अध्ययनों से पता चला है कि प्रायोगिक चूहों और चूहों में डी-गैलेक्टोज का लंबे समय तक प्रशासन सामान्य उम्र बढ़ने की प्रक्रिया की नकल करता है और उम्र बढ़ने से संबंधित फेनोटाइप जैसे कि अनुभूति में गिरावट [16] का अध्ययन करने के लिए एक उपयोगी मॉडल है। इसके अलावा, डी-गैलेक्टोज-प्रेरित उम्र बढ़ने वाले मॉडल चूहों में आंत माइक्रोबायोटा [17] की संरचना में परिवर्तन दिखाई देते हैं। इसलिए, हमने अनुमान लगाया कि आंत माइक्रोबायोटा संरचना में परिवर्तन डी गैलेक्टोज-प्रेरित उम्र बढ़ने वाले मॉडल चूहों में संज्ञानात्मक गिरावट का कारण हो सकता है, और जांच की गई कि क्या सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड्स (सीडीपीएस) आंत माइक्रोबायोटा डिस्बिओसिस को बहाल करके संज्ञानात्मक गिरावट को कम कर सकता है।

सिस्टैंच स्टेम

परिणाम

डी-गैलेक्टोज-प्रेरित एजिंग मॉडल चूहे संज्ञानात्मक गिरावट और आंत माइक्रोबियल डिस्बिओसिस प्रदर्शित करते हैं

हमने जंगली-प्रकार (डब्ल्यूटी) चूहों के व्यवहारिक प्रदर्शन का विश्लेषण किया और उपन्यास वस्तु मान्यता और मॉरिस वॉटर भूलभुलैया (एमडब्लूएम) परीक्षणों का उपयोग करके 2 महीने (मॉडल या मॉड) के लिए 150 मिलीग्राम डी-गैल प्रति किलोग्राम शरीर के वजन के साथ इलाज किया। WT समूह चूहों (चित्रा 1ए, 1बी) की तुलना में मॉड समूह चूहों में उपन्यास वस्तु मान्यता परीक्षण में अधिमान्य सूचकांक मूल्यों में काफी कमी आई थी। MWM परीक्षण के परिणामों से पता चला है कि छठे दिन के बाद भागने की विलंबता समय WT समूह (चित्रा 1C, 1D) की तुलना में मॉड समूह में काफी बढ़ गया था। इसके अलावा, डब्ल्यूटी समूह (चित्रा 1ई, 1एफ) की तुलना में मॉड समूह में लक्ष्य मंच क्रॉसिंग और लक्ष्य चतुर्थांश के भीतर तैराकी के समय को काफी कम कर दिया गया था। इन परिणामों ने कानूनी-प्रेरित उम्र बढ़ने वाले मॉडल चूहों की सीखने और स्मृति क्षमताओं में उल्लेखनीय गिरावट का प्रदर्शन किया।

फिर हमने फेकल नमूनों से 16S राइबोसोमल आरएनए (आरआरएनए) अनुक्रमण डेटा का उपयोग करके चूहों के मॉड और डब्ल्यूटी समूहों के मल नमूनों में आंत माइक्रोबियल फ़ाइला, जेनेरा और प्रजातियों की बहुतायत और संरचना में अंतर का विश्लेषण किया। WT और मॉड समूह के चूहों में प्रमुख आंतों की वनस्पतियाँ फर्मिक्यूट्स और बैक्टेरॉइड्स थीं। हालांकि, बैक्टेरॉइड्स की प्रचुरता काफी कम हो गई थी और डब्ल्यूटी समूह (चित्रा 2ए) की तुलना में मॉड समूह में फर्मिक्यूट्स की प्रचुरता में काफी वृद्धि हुई थी। इसके बाद, हमने एलडीए प्रभाव आकार (एलईएफएसई) स्कोर निर्धारित करने के लिए रैखिक विभेदक विश्लेषण (एलडीए) का प्रदर्शन किया, जिसके बाद डब्ल्यूटी और मॉड समूह चूहों में विभिन्न टैक्सों के सापेक्ष बहुतायत का मूल्यांकन करने के लिए क्रुस्कल-वालिस और विलकॉक्सन परीक्षण किए गए। एलडीए के परिणाम चित्र 2खमें दर्शाए गए हैं। इसके अलावा, हमने डब्ल्यूटी और मॉडल समूहों (चित्रा 2सी) में बैक्टीरियोड्स और फर्मिक्यूट्स फ़ाइला से संबंधित विभिन्न जेनेरा और प्रजातियों के अंतर संवर्धन को दर्शाने वाले क्लैडोग्राम का निर्माण किया। कुल मिलाकर, हमारे परिणामों ने डी-गैलेक्टोज-प्रेरित उम्र बढ़ने वाले मॉडल चूहों में बिगड़ा संज्ञानात्मक क्षमता और आंत माइक्रोबियल डिस्बिओसिस का प्रदर्शन किया।

सिस्टैंच स्वास्थ्य लाभ: एंटी-ऑक्सीडेशन

सीडीपीएस उपचार डी-गैल-प्रेरित एजिंग मॉडल चूहों में संज्ञानात्मक क्षमता में सुधार करता है

हमने विश्लेषण किया कि क्या सीडीपीएस उपचार डी-गैल-प्रेरित उम्र बढ़ने वाले मॉडल चूहों में संज्ञानात्मक गिरावट को कम करता है। प्रशासन के 2 महीनों के दौरान, शरीर के वजन को हर दूसरे दिन मापा जाता था। चूहों के मॉडल और सीडीपीएस समूहों के शरीर के वजन समान थे (चित्र 3ए)। अंतिम खुराक के बाद व्यवहार प्रयोगों का संचालन करें। उपन्यास वस्तु पहचान और मॉरिस वॉटर भूलभुलैया परीक्षण के परिणामों से पता चला है कि चूहों के मॉडल समूह की तुलना में चूहों के सीडीपीएस समूहों में अल्पकालिक स्मृति काफी अधिक थी; चूहों के सीडीपीएस समूह में दीर्घकालिक स्मृति अधिक थी लेकिन चूहों के मॉडल समूह (चित्रा 3बी, 3सी) की तुलना में सांख्यिकीय रूप से महत्वहीन थी। इसने सुझाव दिया कि सीडीपीएस उपचार ने डी-गैल उपचारित चूहों में अल्पकालिक वस्तु पहचान स्मृति के नुकसान को निरस्त कर दिया।

इन चूहों की स्थानिक सीखने और स्मृति का मूल्यांकन मॉरिस वॉटर भूलभुलैया परीक्षण द्वारा किया गया था, और परिणामों से पता चला कि चूहों के सीडीपीएस समूह के भागने के विलंबता समय चूहों के डब्ल्यूटी समूह के बराबर थे और मॉड ग्रुपमाइस (चित्रा 3 डी) की तुलना में काफी कम थे। . इसके अलावा, मॉडल समूह (चित्रा 3ई) की तुलना में छठे दिन के बाद के सीडीपीएस प्रशासन में एस्केप लेटेंसी समय काफी कम था। मॉडल समूह की तुलना में सीएच और सीएम समूहों में लक्ष्य चतुर्थांश के भीतर तैराकी का समय काफी अधिक था। CL समूह मॉडल समूह से अधिक है लेकिन इसका कोई सांख्यिकीय महत्व नहीं है (चित्र 3F)। इसके अलावा, मॉडल समूह की तुलना में सीएम और सीएल समूहों में प्लेटफॉर्म क्रॉसिंग की संख्या काफी अधिक थी। हालांकि, सीएच समूह मॉडल समूह से अधिक है और इसका कोई सांख्यिकीय महत्व नहीं है (चित्र 3जी)। इन परिणामों ने प्रदर्शित किया कि सीडीपीएस उपचार ने डी-गैल-प्रेरित उम्र बढ़ने वाले मॉडल चूहों में स्थानिक सीखने और स्मृति में सुधार किया।

चित्रा 1. डी-गैलेक्टोज का लंबे समय तक प्रशासन चूहों में सीखने और स्मृति हानि को प्रेरित करता है।

चित्रा 2. डी-गैलेक्टोज का लंबे समय तक प्रशासन चूहों में आंत माइक्रोबियल डिस्बिओसिस को प्रेरित करता है।

सीडीपीएस उपचार डी-गैलेक्टोज-एजिंग मॉडल चूहों में आंत माइक्रोबायोटा संरचना के होमोस्टैसिस को पुनर्स्थापित करता है

मोनोसेकेराइड और पॉलीसेकेराइड बैक्टीरिया के विकास के लिए आवश्यक आवश्यक पोषक तत्व हैं [18-21]। यह भी बताया गया है कि सीडीपीएस आंत माइक्रोबायोटा [22] की संरचना को नियंत्रित करता है। इसलिए, हमने विश्लेषण किया कि क्या सीडीपीएस उपचार ने चूहों के डब्ल्यूटी, मॉडल और सीडीपीएस समूहों से मल के नमूनों के 16S rRNA अनुक्रमण डेटा का मूल्यांकन करके मॉडल समूह चूहों में आंत माइक्रोबियल डिस्बिओसिस को कम किया।

सबसे पहले, हमने इन समूहों के बीच समग्र फेकल माइक्रोबायोटा समृद्धि और संरचनात्मक अंतर का मूल्यांकन करने के लिए अल्फा विविधता सूचकांकों की गणना की। हमने अलग-अलग म्यूरिन समूहों के मल नमूनों में विभिन्न जीवाणु प्रजातियों की संरचना में परिवर्तन का निर्धारण करने के लिए देखी गई प्रजातियों, शैनन, चाओ 1, एसीई, और सिम्पसन सूचकांक मूल्यों जैसे अल्फा विविधता (-विविधता) सूचकांक का विश्लेषण किया। मॉडल समूह की तुलना में चूहों के डब्ल्यूटी और सीडीपीएस समूहों में -विविधता (देखी गई प्रजातियां, शैनन, चाओ 1, एसीई, और सिम्पसन इंडेक्स) इंडेक्स अधिक थे, लेकिन सीएम के बीच चाओ 1 इंडेक्स वैल्यू के लिए सांख्यिकीय महत्व केवल देखा गया था। समूह और मॉड समूह। इसने संकेत दिया कि सीडीपीएस के साथ प्रशासन माइक्रोबायोम समृद्धि को बढ़ाता है (चित्र 4ए-4ई)। इसके बाद, हमने गैर-मीट्रिक बहुआयामी स्केलिंग (NMDS), प्रिंसिपल कोऑर्डिनेट एनालिसिस (PCoA), और प्रिंसिपल कंपोनेंट एनालिसिस (PCA) का उपयोग करके चूहों के WT, मॉडल और CDPS समूहों के बीच आंत माइक्रोबियल प्रजातियों में अंतर की पहचान करने के लिए -डायवर्सिटी इंडेक्स का विश्लेषण किया। . पीसीए ने उम्र बढ़ने की प्रक्रिया के दौरान मॉडल समूह चूहों की आंत माइक्रोबियल संरचना में बदलाव दिखाया, जिसमें आयाम में कमी और पैटर्न और प्रवृत्तियों का रखरखाव शामिल है (चित्रा 4एफ)। डब्ल्यूटी, मॉडल और सीडीपीएस समूहों के बीच फेकल माइक्रोबायोटा में अंतर की पहचान 16एस आरआरएनए जीन (चित्रा 4जी) के लिए अनवीटेड यूनीफ्रैक दूरियों के पीसीओए के आधार पर की गई थी। क्लस्टरिंग विश्लेषण ने मॉडल समूह और डब्ल्यूटी और सीडीपीएस समूहों (चित्रा 4एच) के बीच एनएमडीएस में महत्वपूर्ण अंतर दिखाया।

हमने आंत माइक्रोबायोटा के शीर्ष 10 फ़ाइला का मूल्यांकन किया और पाया कि मॉडल समूह (चित्रा 4I) की तुलना में सीएच, सीएम और सीएल समूहों में बैक्टेरॉइड्स फ़ाइला की प्रचुरता काफी अधिक थी। इसने सुझाव दिया कि सीडीपीएस ने डी-गैल-उपचारित चूहों में आंत माइक्रोबायोटा के होमोस्टैसिस को बहाल कर दिया। क्लैडोग्राम ने डब्ल्यूटी, मॉडल और सीडीपीएस समूहों (चित्रा 4जे) में बैक्टीरियोड्स और फर्मिक्यूट्स फ़ाइला से संबंधित विभिन्न प्रजातियों और प्रजातियों के अंतर संवर्धन को दिखाया। जैसा कि हीटमैप्स में दिखाया गया है, सीडीपीएस उपचारों ने थर्मोप्लास्माटा, बेसिली, अज्ञात एक्टिनोबैक्टीरिया, फुसोबैक्टीरिया, और अज्ञात एलुसिमाइक्रोबिया के सापेक्ष बहुतायत को कम कर दिया और मेथनोबैक्टीरिया, स्पाइरोचैटिया, डेल्टाप्रोटोबैक्टीरिया, अज्ञात _ डेफेरिबैक्टेरस, मॉलिक्यूटेरिया, नाइट्रोसियोसेरिया के सापेक्ष बहुतायत में वृद्धि की। मॉडल समूह (चित्रा 4K) की तुलना में एरीसिपेलोट्रिचिया, और अज्ञात _ साइनोबैक्टीरिया। इन परिणामों ने प्रदर्शित किया कि सीडीपीएस उपचार ने डी-गैल-प्रेरित उम्र बढ़ने वाले मॉडल चूहों में आंत माइक्रोबायोटा के होमोस्टैसिस को काफी हद तक बहाल कर दिया।

चित्रा 3. सीडीपीएस उपचार डी-गैल उम्र बढ़ने मॉडल चूहों में सीखने और स्मृति में सुधार करता है।

सीडीपीएस उपचार ऑक्सीडेटिव तनाव को कम करके डी-गैल-प्रेरित उम्र बढ़ने वाले मॉडल चूहों में न्यूरोडीजेनेरेशन को कम करता है

हमने अगली बार प्रो-इंफ्लेमेटरी साइटोकिन्स (IL-2 और TNF-), और एंटी-इंफ्लेमेटरी साइटोकिन्स (IL-4 और IL-10 के सीरम स्तर का विश्लेषण करके सूजन पर CDPS के प्रभावों का विश्लेषण किया। ) चूहों के विभिन्न समूहों में। आईएल -2 और टीएनएफ- का सीरम स्तर काफी कम था और सीएच, सीएम और सीएल समूहों में आईएल -4 और आईएल -10 का सीरम स्तर मॉडल की तुलना में काफी अधिक था। समूह। यह दिखाया गया है कि सीडीपीएस में सूजन-रोधी प्रभाव होता है (चित्र 5ए-5डी)।

ऑक्सीडेटिव तनाव प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (आरओएस) के बढ़ते उत्पादन के कारण होता है और उम्र बढ़ने को बढ़ावा देने वाले मुख्य कारकों में से एक है [23]। इसलिए, हमने एंटीऑक्सिडेंट एंजाइम, एसओडी, और लिपिड पेरोक्सीडेशन उत्पाद, मालोंडियलडिहाइड (एमडीए) के सीरम स्तर का मूल्यांकन करके डी-गैल-प्रेरित एजिंग माउस मॉडल में ऑक्सीडेटिव तनाव पर सीडीपीएस के प्रभावों का विश्लेषण किया। एमडीए का सीरम स्तर काफी अधिक था और डब्ल्यूटी समूह की तुलना में मॉड समूह में एसओडी का सीरम स्तर काफी कम हो गया था, लेकिन सीडीपीएस उपचार ने इन प्रभावों को उलट दिया (चित्र 5ई, 5एफ)। इन परिणामों ने प्रदर्शित किया कि डी-गैल-प्रेरित उम्र बढ़ने वाले मॉडल चूहों में ऑक्सीडेटिव तनाव बढ़ गया था, लेकिन सीडीपीएस उपचार द्वारा कम किया गया था।

इसके अलावा, हमने उन्नत ऑक्सीकृत प्रोटीन उत्पाद (एओपीपी), प्रत्यक्ष लिपिड पेरोक्सीडेशन (एलपीओ), और एमडीए के स्तर के साथ-साथ ग्लूटाथियोन पेरोक्सीडेज (जीएसएच-पीएक्स) जैसे एंटीऑक्सीडेंट एंजाइमों की गतिविधियों का विश्लेषण करके मस्तिष्क के ऊतकों में ऑक्सीडेटिव तनाव के स्तर का आकलन किया। ) और मस्तिष्क ऊतक समरूप में सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेज (एसओडी)। मॉड समूह के चूहों के दिमाग ने एसओडी और जीएसएच-पीएक्स की गतिविधियों को काफी कम कर दिया और डब्ल्यूटी समूह की तुलना में एओपीपी, एलपीओ और एमडीए के स्तर में काफी वृद्धि हुई, लेकिन इन प्रभावों को सीएच, सीएम और सीएल समूह (चित्रा 6ए) में उलट दिया गया। 6ई)।

इसके अलावा, हमने डी-गैल प्रेरित उम्र बढ़ने वाले मॉडल चूहों के दिमाग पर सीडीपीएस के सुरक्षात्मक प्रभावों का आकलन करने के लिए एच एंड ई और निस्सल दाग के साथ मस्तिष्क वर्गों के ऊतकीय धुंधलापन का प्रदर्शन किया। मॉड समूह के चूहों ने WT समूह की तुलना में न्यूरोनल संख्या और मात्रा में उल्लेखनीय कमी, न्यूरॉन्स के बीच अंतर में वृद्धि, न्यूरॉन्स की अनियमित व्यवस्था, और हिप्पोकैम्पस CA1 क्षेत्र में परमाणु pyknosis दिखाया, लेकिन इन रोग परिवर्तनों को CDPS उपचार द्वारा काफी कम किया गया था। चित्रा 6एफ)। इन परिणामों ने प्रदर्शित किया कि सीडीपीएस उपचार ने डी गैल-प्रेरित उम्र बढ़ने वाले मॉडल चूहों में ऑक्सीडेटिव तनाव और मस्तिष्क विकृति को काफी कम कर दिया।

चित्रा 4. सीडीपीएस उपचार डी-गैलेक्टोज-प्रेरित उम्र बढ़ने वाले मॉडल चूहों में आंत माइक्रोबियल संरचना को पुनर्स्थापित करता है।

सीडीपीएस उपचार डी-गैल-प्रेरित मॉडल चूहों में आंत माइक्रोबियल होमियोस्टेसिस को बनाए रखकर परिधीय सूजन और ऑक्सीडेटिव तनाव को कम करता है

अगला, हमने विश्लेषण किया कि क्या आंत माइक्रोबायोटा की संरचना में परिवर्तन उम्र बढ़ने के दौरान बढ़े हुए परिधीय सूजन और ऑक्सीडेटिव तनाव से जुड़े थे। इसके लिए, हमने सीडीपीएस-उपचारित उम्र बढ़ने वाले मॉडल चूहों में आंत माइक्रोबायोटा को समाप्त करने या इम्युनोसुप्रेशन को प्रेरित करने के लिए ट्रिपल-एंटीबायोटिक कॉकटेल (एबीएक्स समूह) या साइक्लोफॉस्फेमाइड (साइ समूह; सामग्री और विधियों को भी देखें) का उपयोग किया। एंटीबायोटिक उपचार ने उम्र बढ़ने वाले मॉडल चूहों में सीडीपीएस उपचार के लाभकारी प्रभावों को समाप्त कर दिया। हमने सीडीपीएस-उपचारित समूह की तुलना में एबीएक्स समूह चूहों में बिगड़ा हुआ सीखने और स्मृति (चित्रा 7ए), और आंत माइक्रोबायोटा (चित्रा 7बी, 7सी) की संरचना में परिवर्तन देखा। उपरोक्त परिणामों से संकेत मिलता है कि सीडीपीएस का प्रशासन भी आंतों के वनस्पतियों को बदलने के बाद चूहों की सीखने और स्मृति क्षमता को नहीं बढ़ा सकता है। इसके अलावा, हमने सीडीपीएस समूह (चित्रा 7डी-7एन) की तुलना में मस्तिष्क में प्रो-भड़काऊ साइटोकिन्स के स्तर और एबीएक्स समूह चूहों के सीरम में वृद्धि देखी। एबीएक्स समूह और सीवाई समूह के परिणामों से पता चला है कि आंतों के वनस्पतियों और प्रतिरक्षा समारोह के नष्ट होने के बाद, सीडीपीएस का प्रशासन भी चूहों की सीखने और स्मृति क्षमता में सुधार नहीं कर सका। इन परिणामों ने सुझाव दिया कि सीडीपीएस उपचार ने परिधीय सूजन, ऑक्सीडेटिव तनाव और कानूनी-प्रेरित उम्र बढ़ने वाले मॉडल चूहों में संज्ञानात्मक गिरावट को कम कर दिया, जिससे आंत डिस्बिओसिस को रोका जा सके।

इसके बाद हमने सीडीपीएस के लाभकारी प्रभावों में सूजन की भूमिका निर्धारित करने के लिए इम्यूनोसप्रेसिव दवा, साइक्लोफॉस्फेमाइड [24] का इस्तेमाल किया। साइक्लोफॉस्फेमाइड-उपचारित सीडीपीएस चूहों (साइ समूह) ने बिगड़ा हुआ सीखने और स्मृति क्षमता, आंत माइक्रोबायोटा संरचना में परिवर्तन, और मस्तिष्क और सीरम में जंगली-प्रकार और सीडीपीएस समूह चूहों की तुलना में प्रो-और विरोधी भड़काऊ साइटोकिन्स के असामान्य स्तर को दिखाया। हालांकि, मॉडल और एबीएक्स समूह की तुलना में कोई महत्व नहीं है। (चित्र 7ए-7एन)। इन आंकड़ों से पता चलता है कि आंत माइक्रोबायोटा की संरचना में परिवर्तन से डी-गैल-प्रेरित उम्र बढ़ने वाले मॉडल चूहों में परिधीय सूजन बढ़ जाती है।

चित्रा 5. सीडीपीएस उपचार डी-गैलेक्टोज-प्रेरित उम्र बढ़ने वाले मॉडल चूहों में समर्थक और विरोधी भड़काऊ साइटोकिन्स और ऑक्सीडेटिव तनाव से संबंधित कारकों के परिसंचारी स्तरों को नियंत्रित करता है।

सीडीपीएस अमीनो एसिड चयापचय को विनियमित करके डी-गैल-प्रेरित उम्र बढ़ने को रोकता है

मेजबान की प्रतिरक्षा प्रणाली आंत माइक्रोबायोटा [25] द्वारा उत्पन्न मेटाबोलाइट्स से प्रभावित होती है। फेकल मेटाबोलाइट्स आंत माइक्रोबियल चयापचय और आंत माइक्रोबियल संरचना [26] के एक कार्यात्मक रीडआउट का प्रतिनिधित्व करते हैं। इसके अलावा, आंत माइक्रोबायोटा के मेटाबोलाइट्स रक्त परिसंचरण में प्रवेश करते हैं और मेजबान चयापचय और स्वास्थ्य को प्रभावित करते हैं [26, 27]। FWT, Mod और CDPS चूहों से सीरम के नमूनों में कुल 1058 मेटाबोलाइट्स की पहचान की गई। फिर, हमने बायोसाइक, जीन और जीनोम के क्योटो एनसाइक्लोपीडिया (केईजीजी), और ह्यूमन मेटाबॉलिक डेटाबेस (एचएमडीबी) का उपयोग करके इन मेटाबोलाइट्स का विश्लेषण किया और पाया कि डब्ल्यूटी समूह की तुलना में मॉड समूह में 65 मेटाबोलाइट्स को आंशिक रूप से व्यक्त किया गया था। इसके अलावा, हमने पाया कि डब्ल्यूटी, मॉड और सीडीपीएस समूहों के बीच 8 मेटाबोलाइट्स (क्रिएटिनिन, वेलिन, एल-(-)-मेथियोनीन, ओ-टोल्यूडीन, एन एथिलैनिलिन, यूरिक एसिड, प्रोलाइन और फेनिलएलनिन) का स्तर काफी भिन्न था। मेटाबोएनालिस्ट [28, 29] का उपयोग करते हुए इन 8 मेटाबोलाइट्स के पाथवे संवर्धन विश्लेषण से पता चला है कि ये मेटाबोलाइट्स आर्जिनिन, हिस्टिडाइन, आर्जिनिन, प्रोलाइन और प्यूरीन चयापचय (चित्रा 8ए, 8बी) से संबंधित थे। डब्ल्यूटी समूह में एमओडी समूह और सीडीपीएस समूह के 7 विभिन्न मेटाबोलाइट्स।

हमने तब विश्लेषण किया था कि क्या अमीनो एसिड चयापचय में परिवर्तन आंत माइक्रोबायोटा की संरचना में परिवर्तन से संबंधित थे। हमने देखा कि ABX, Cy, में WT, Mod, और CDPS समूहों (क्रिएटिनिन, वेलिन, L-(-)-मेथियोनीन, o-Toluidine, N-Ethylaniline, यूरिक एसिड और प्रोलाइन) के 7 अलग-अलग मेटाबोलाइट्स काफी कम हो गए थे। और मॉड समूह WT और CDPS समूहों की तुलना में। इसके अलावा, ABX और Cy समूहों (चित्र 8C) के बीच कोई महत्व नहीं है। अंत में, यह पता लगाने के लिए कि अंतर चयापचय और अन्य उम्र बढ़ने से संबंधित बीमारियों के बीच एक संबंध है। हमने मेटाबोएनालिस्ट डेटाबेस का उपयोग करते हुए इन सात अलग-अलग व्यक्त मेटाबोलाइट्स और मानव रोगों के बीच सहसंबंध का विश्लेषण किया और पाया कि ये मेटाबोलाइट्स अल्जाइमर रोग (पी =0.00173; चित्रा 8डी, 8ई) से जुड़े थे। कुल मिलाकर, इन आंकड़ों ने सुझाव दिया कि सीडीपीएस अमीनो एसिड चयापचय को विनियमित करके डी-गैल-प्रेरित उम्र बढ़ने से बचाता है।

चित्रा 6. सीडीपीएस उपचार डी-गैलेक्टोज-प्रेरित उम्र बढ़ने वाले मॉडल चूहों के दिमाग में ऑक्सीडेटिव तनाव को कम करता है

बहस

संज्ञानात्मक कार्य में प्रगतिशील गिरावट उम्र बढ़ने की एक विशेषता है। पिछले अध्ययनों से पता चला है कि सीडीपीएस उपचार ने उम्र बढ़ने वाले मॉडल चूहों [30-33] में सीखने और याददाश्त में काफी सुधार किया है। इस अध्ययन में, हमने दिखाया कि सीडीपीएस उपचार ने डी-गैल-प्रेरित उम्र बढ़ने वाले मॉडल चूहों (चित्रा 9) में आंत माइक्रोबियल होमियोस्टेसिस की बहाली के माध्यम से परिधीय सूजन और ऑक्सीडेटिव तनाव को रोककर संज्ञानात्मक कार्य में सुधार किया। Sprague-Dawley चूहों को Cistanche polysaccharides से खिलाया गया, लाभकारी आंत बैक्टीरिया की वृद्धि और आंत माइक्रोबियल विविधता में वृद्धि हुई [34]। CDA-0.05, एक सिस्टैंच तटस्थ पॉलीसेकेराइड, प्रोबायोटिक लैक्टोबैसिली [22] के विकास में सुधार करता है। इन आंकड़ों ने सुझाव दिया कि सिस्टैंच पॉलीसेकेराइड्स ने आंत बैक्टीरिया के होमोस्टैसिस में सुधार किया।

इस अध्ययन में, हमने दिखाया कि सीडीपीएस में सूजन-रोधी प्रभाव होता है और बैक्टीरिया, फर्मिक्यूट्स और प्रोटोबैक्टीरिया जैसे आंत के जीवाणु जनन की प्रचुरता को संशोधित करके उम्र बढ़ने वाले मॉडल चूहों की संज्ञानात्मक क्षमता में सुधार करता है। इसलिए, सीडीपी आंत माइक्रोबायोटा [35,36] की संरचना को फिर से आकार देकर उम्र बढ़ने से संबंधित बीमारियों के लिए चिकित्सीय रूप से फायदेमंद हो सकता है। इसके अलावा, पिछले अध्ययनों से पता चला है कि सीरम और कोलन में भड़काऊ साइटोकिन्स का स्तर बैक्टीरिया जेनेरा जैसे बैक्टीरिया, फर्मिक्यूट्स और प्रोटोबैक्टीरिया [37, 38] के सापेक्ष बहुतायत से जुड़ा हुआ है। इसके अलावा, आंत माइक्रोबियल संरचना कई साइटोकिन्स [39-43] के परिसंचारी स्तरों को संशोधित करके मस्तिष्क के कार्य को नियंत्रित करती है। हमारे परिणामों से पता चला है कि सीडीपीएस उपचार ने थर्मोप्लास्माटा, बेसिली, अज्ञात एक्टिनोबैक्टीरिया, फुसोबैक्टीरिया, और अज्ञात एलुसिमिक्रोबिया की सापेक्ष बहुतायत को कम कर दिया, और मेथनोबैक्टीरिया, स्पाइरोचैटिया, डेल्टाप्रोटोबैक्टीरिया, अज्ञात _ डेफेरिबैक्टीरिया, मॉलिक्यूट्स, नाइट्रोसोफ़ेरिया, एनारोलिनेए, के सापेक्ष बहुतायत में वृद्धि की। एरीसिपेलोट्रिचिया, और अज्ञात_सायनोबैक्टीरिया।

आंत माइक्रोबियल चयापचयों को रक्तप्रवाह में छोड़ा जाता है और मेजबान के स्वास्थ्य और चयापचय को नियंत्रित करता है [26, 27]। आंत माइक्रोबियल मेटाबोलाइट्स का अनुमान फेकल मेटाबोलाइट संरचना का मूल्यांकन करके लगाया जा सकता है, जो आंत के रोगाणुओं [44] की संरचना में परिवर्तन के साथ बदलता है। हाल के अध्ययनों से पता चला है कि साइट्रलाइन, प्रोलाइन, आर्जिनिन, शतावरी, फेनिलएलनिन और थ्रेओनीन के प्लाज्मा स्तर अल्जाइमर रोग [45, 46] सहित न्यूरोडीजेनेरेटिव विकारों से जुड़े हैं। हमारे अध्ययन से पता चला है कि क्रिएटिनिन, वेलिन, एल-मेथियोनीन, ओ-टोल्यूडीन, एन एथिलैनिलिन, यूरिक एसिड और प्रोलाइन के सीरम स्तर चूहों में डी-गैल-प्रेरित उम्र बढ़ने से जुड़े थे।

सिस्टैंच का अर्क: एंटी-अल्जाइमर रोग

प्रतिरक्षा प्रणाली की जन्मजात और अनुकूली भुजाएं आंतों की ल्यूमिनल सतह [47] में मेजबान-माइक्रोबियल होमियोस्टेसिस को बनाए रखने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाती हैं। आंतों का माइक्रोबायोटा भी केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) और प्रतिरक्षा को नियंत्रित करने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, जिससे रक्तप्रवाह में साइटोकिन्स और मेटाबोलाइट्स जारी होते हैं [48, 49]। प्रो-इंफ्लेमेटरी साइटोकिन्स कई न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों [50-52] में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। उदाहरण के लिए, उम्र से संबंधित धब्बेदार अध: पतन (एएमडी) और ग्लूकोमा अमाइलॉइड (ए) के बाह्य संचय और रेटिना नाड़ीग्रन्थि कोशिकाओं (आरजीसी) [44] में हाइपर-फॉस्फोराइलेटेड ताऊ (पी ताऊ) और लोहे के इंट्रासेल्युलर जमाव से जुड़े हैं। इसके अलावा, ग्लूकोमा से जुड़े रोगजनन में सूजन एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाती है [53]। दृश्य हानि अल्जाइमर रोग (एडी) का प्रारंभिक लक्षण है और संज्ञानात्मक गिरावट की शुरुआत से पहले प्रकट होता है [54]। हमारे अध्ययन से पता चला है कि सीडीपीएस आंत माइक्रोबायोटा के होमोस्टैसिस को बनाए रखते हुए संज्ञानात्मक गिरावट और परिधीय सूजन से बचाता है।

इस अध्ययन पर बहुत सी सीमाएं हैं। सबसे पहले, अमीनो एसिड चयापचय और आंत माइक्रोबायोटा की संरचना के बीच संबंध अच्छी तरह से ज्ञात नहीं है। दूसरे, सीडीपीएस की संरचना और आणविक संरचना ज्ञात नहीं है। इसलिए, आंत माइक्रोबायोटा-ब्रेनसिग्नलिंग अक्ष के माध्यम से एडी को कम करने में सीडीपीएस की नियामक भूमिका का पता लगाने के लिए भविष्य के अध्ययन की आवश्यकता है।

अंत में, हमारे अध्ययन ने प्रदर्शित किया कि सीडीपीएस ने आंत माइक्रोबायोटा के होमोस्टैसिस को बहाल करके डी-गैल-प्रेरित उम्र बढ़ने वाले मॉडल चूहों में संज्ञानात्मक क्षमता में सुधार किया, जिससे अमीनो एसिड असंतुलन, परिधीय सूजन और ऑक्सीडेटिव तनाव बहाल हो गया। इन निष्कर्षों से पता चलता है कि सीडीपीएस सीखने और स्मृति विकारों वाले रोगियों के लिए एक संभावित चिकित्सीय है, विशेष रूप से आंत डिस्बिओसिस से जुड़े लोगों के लिए।

सामग्री और तरीके

सीडीपीएस की तैयारी

लगभग 1.0 साफ किए गए सिस्टैंच डेजर्टिकोला के किलोग्राम को 40 डिग्री सेल्सियस पर ओवन में हवा में सुखाया गया और कच्चे पाउडर में चूर्णित किया गया। पाउडर को 3 घंटे के लिए गर्म इथेनॉल में निकाला गया था। छानने को हटाने के लिए अवशेषों को धुंध के माध्यम से फ़िल्टर किया गया था और फिर पानी (8X) से पतला किया गया था और क्रमिक रूप से 2 घंटे, 1.5 घंटे और 1 घंटे के लिए 90 डिग्री सेल्सियस पर रिफ्लक्स किया गया था। प्रत्येक समय बिंदु पर, सतह पर तैरनेवाला को अलग करने के लिए समाधान को सेंट्रीफ्यूज किया गया था और भूरे-लाल छानना के साथ संयुक्त। फिर, छानना कम दबाव में केंद्रित किया गया था, कमरे के तापमान में ठंडा किया गया, धीरे-धीरे 95 प्रतिशत इथेनॉल (3X) में जोड़ा गया, और 24 घंटे के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर खड़े होने की अनुमति दी गई। फिर, समाधान को 6000 आर/मिनट पर 20 मिनट के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर सेंट्रीफ्यूज किया गया था। पानी की निकासी और शराब की वर्षा को तीन बार दोहराने के बाद अवक्षेप एकत्र किया गया था। अवक्षेप को पानी में पुनर्गठित किया गया था, क्रूड सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड (सीडीपी) प्राप्त करने के लिए डिप्रोटिनाइज़्ड, डायलाइज़्ड और फ्रीज-ड्राय किया गया था। पराबैंगनी स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री द्वारा मूल्यांकन के अनुसार पॉलीसेकेराइड सामग्री 90 प्रतिशत से अधिक थी।

सिस्टैंच का सत्त

पशु समूहन और उपचार

आठ सप्ताह के नर कुनमिंग चूहों (SCXK लाइसेंस नंबर 2019-0010) को SPF बायोटेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड (बीजिंग, चीन) से खरीदा गया था, जिसे एक प्रकाश और तापमान नियंत्रित कमरे में रखा गया था, और भोजन और पानी से खिलाया गया था। सभी पशु प्रयोगों को इनर मंगोलिया मेडिकल यूनिवर्सिटी की संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित प्रोटोकॉल के अनुसार आयोजित किया गया था। प्रयोग प्रयोगशाला जानवरों की देखभाल और उपयोग के लिए राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (एनआईएच) गाइड के अनुसार किए गए थे।

नए परिवेश में 1 सप्ताह के अनुकूलन के बाद, 120 चूहों को निम्नलिखित 7 समूहों में विभाजित किया गया: (1) जंगली प्रकार का नियंत्रण (WT); मॉडल समूह (150 मिलीग्राम / किग्रा / दिन डी-गैल; मॉड); (3) सीएच: डी-गैल प्लस 100 मिलीग्राम/किलोग्राम सीडीपीएस; (4) सीएम: डी-गैल प्लस 50 मिलीग्राम / किग्रा सीडीपीएस; (5) सीएल: डी-गैल प्लस 25 मिलीग्राम / किग्रा सीडीपीएस; (6) एबीएक्स समूह: एंटीबायोटिक्स प्लस डी-गैल प्लस 50 मिलीग्राम / किग्रा सीडीपीएस; (7) साइ समूह: साइक्लोफॉस्फेमाइड प्लस डी-गैल प्लस 50 मिलीग्राम/किग्रा सीडीपीएस।

मॉडल, ABX, Cy, और CDPS समूहों के चूहों को 2 महीने के लिए हर दिन खारा-घुलनशील 15 0 मिलीग्राम/किलोग्राम डी-गैल के चमड़े के नीचे के इंजेक्शन प्राप्त हुए। WT समूह को 2 महीने के लिए समान मात्रा में खारा के साथ सूक्ष्म रूप से इंजेक्ट किया गया था। सीडीपीएस समूह के चूहों को भी 2 महीने के लिए 1 0 0 मिलीग्राम / किग्रा, 5 0 मिलीग्राम / किग्रा या 25 मिलीग्राम / किग्रा सीडीपीएस युक्त इंट्रागैस्ट्रिक इंजेक्शन के साथ दैनिक रूप से प्रशासित किया गया था। एबीएक्स समूह के चूहों को डी-गैल और सीडीपीएस इंजेक्शन के अलावा 2 महीने के लिए 0.1 मिलीग्राम/एमएल एम्पीसिलीन और 0.5 मिलीग्राम/एमएल स्ट्रेप्टोमाइसिन के साथ पीने का पानी मिला। डी-गैल को प्रशासित करने से पहले, चूहों को एबीएक्स समूह में 0.1 मिलीग्राम/एमएल एम्पीसिलीन, 0.5 मिलीग्राम/एमएल स्ट्रेप्टोमाइसिन, और 0.1 मिलीग्राम/एमएल कोलिस्टिन युक्त इंजेक्शन प्राप्त हुए। Cy समूह के चूहों को D-gal और CDPS के दैनिक इंजेक्शन के अलावा 2 महीने के लिए हर दूसरे दिन (qod) 20 mg/kg cyclophosphamide के इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन मिले।

उपन्यास वस्तु पहचान परीक्षण

अंतिम खुराक के बाद व्यवहार प्रयोगों का संचालन करें। ऑब्जेक्ट रिकग्निशन टेस्ट में परिचित, प्रशिक्षण और परीक्षण चरण शामिल थे। परिचित चरण के दौरान, चूहों को दो दिनों के लिए 10 मिनट के लिए एक खाली परीक्षण कक्ष में रहने की आदत थी। फिर, तीसरे दिन (प्रशिक्षण दिवस), समान आकार, आकार और रंग (A1 और A2) की दो वस्तुओं को कक्ष के विपरीत छोर पर रखा गया। फिर प्रत्येक माउस को दो समान वस्तुओं का पता लगाने के लिए 10 मिनट का समय दिया गया। 1- घंटे (तीसरे दिन) और 24- घंटे (चौथे दिन) प्रशिक्षण-से-परीक्षण अंतराल के बाद, समान वस्तुओं में से एक (ए 1 या ए 2) को बी या सी से बदल दिया गया था वह वस्तु जो परीक्षण के दिन आकार, रंग और आकार में भिन्न होती है। परीक्षण चरण के दौरान, प्रत्येक माउस का 5 मिनट के लिए परीक्षण किया गया था और तरजीही सूचकांक की गणना निम्न सूत्र का उपयोग करके उपन्यास वस्तु (बी या सी) मान्यता की स्मृति को निर्धारित करने के लिए की गई थी: अधिमानी सूचकांक =वस्तु बी या सी पर समय/ (ऑब्जेक्ट बी या सी पर समय प्लस ऑब्जेक्ट ए पर समय) × 100 प्रतिशत।

मॉरिस वॉटर भूलभुलैया टेस्ट

मॉरिस वाटर भूलभुलैया परीक्षण एक गोल पूल में किया गया था जो 45 सेमी गहराई और 90 सेमी व्यास का था। रुएडिगर एस, एट अल द्वारा वर्णित प्रोटोकॉल। (2011) [55] और वुड आरए, एट अल। (2018) [56] यहां कार्यरत थे। पूल में पानी की गहराई 30 सेमी थी, और पानी का तापमान 20 ± 1 डिग्री सेल्सियस था। मंच 6 सेमी व्यास और 1 सेमी पानी के नीचे था। प्रशिक्षण और परीक्षण का समय प्रत्येक 60 सेकंड था। प्रशिक्षण के लिए, हमने लगातार पांच दिनों तक हर दिन एक छिपे हुए मंच के साथ 60 एस के चार परीक्षण किए। यदि 60 एस में चूहों द्वारा मंच की खोज नहीं की गई थी, तो उन्हें मंच पर निर्देशित किया गया था और मंच पर 5 एस के लिए रखा गया था। परीक्षण चरण के दौरान, प्रशिक्षण और जांच परीक्षण सत्रों में छिपे हुए मंच तक पहुंचने की विलंबता, हटाए गए प्लेटफ़ॉर्म स्थान पर क्रॉसिंग की संख्या और लक्ष्य (प्लेटफ़ॉर्म) चतुर्थांश में बिताए गए समय को रिकॉर्ड और विश्लेषण किया गया था।

एलिसा परख

प्रो-भड़काऊ साइटोकिन्स के सीरम स्तर जैसे कि आईएल -2 (), आईएल -4, आईएल -10, और टीएनएफ- का विश्लेषण शंघाई यी ली से खरीदे गए एलिसा किट का उपयोग करके चूहों के प्रत्येक समूह के लिए किया गया था। निर्माता के निर्देशों के अनुसार जैविक प्रौद्योगिकी कं, लिमिटेड (शंघाई, चीन)। चूहों के प्रत्येक समूह के सीरम में एंटीऑक्सिडेंट एंजाइम, सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेज (एसओडी), और लिपिड पेरोक्सीडेशन उत्पाद के स्तर, मालोंडियलडिहाइड (एमडीए) की गतिविधि का विश्लेषण नानजिंग जियानचेंग बायोइंजीनियरिंग इंस्टीट्यूट (नानजिंग, चीन) से खरीदे गए परख किट द्वारा किया गया था। . murine हिप्पोकैम्पस नमूनों में उन्नत ऑक्सीकरण प्रोटीन उत्पादों (AOPP) के स्तर का अनुमान निर्माता के निर्देशों के अनुसार शंघाई यी ली बायोलॉजिकल टेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड (शंघाई, चीन) से एक एलिसा किट का उपयोग करके लगाया गया था।

murine दिमाग में ऑक्सीडेटिव तनाव का आकलन

हमने 0.9 मिली बर्फ-ठंडा खारा के साथ 1 0 0 मिलीग्राम हिप्पोकैम्पस ऊतक को समरूप बनाया और समरूप को 12000 आरपीएम पर 30 मिनट के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर सेंट्रीफ्यूज किया गया। सतह पर तैरनेवाला में प्रोटीन सामग्री का विश्लेषण बीसीए प्रोटीन परख किट का उपयोग करके किया गया था ( बायोटाइम बायोटेक्नोलॉजी, शंघाई, चीन)। निर्माता के निर्देशों के अनुसार नानजिंग जियानचेंग बायोइंजीनियरिंग इंस्टीट्यूट (नानजिंग, चीन) से किट का उपयोग करके हिप्पोकैम्पस के नमूनों में लिपिड पेरोक्सीडेशन (एलपीओ) और मालोंडियलडिहाइड (एमडीए) और जीएसएच-पीएक्स और एसओडी की गतिविधियों का विश्लेषण किया गया था।

Cistanche पूरक: स्मृति में सुधार करता है

आंत माइक्रोबायोटा रचना

सभी चूहों से मल के नमूने एकत्र किए गए और तुरंत -80 डिग्री C पर संग्रहीत किए गए। 16S rRNA जीन के V3 प्लस V4 क्षेत्र को Illumina MiSeq (बीजिंग नोवोजेन कंपनी लिमिटेड, बीजिंग, चीन) का उपयोग करके अनुक्रमित किया गया और QIIME का उपयोग करके विश्लेषण किया गया। आंत माइक्रोबायोटा प्रोफाइल निर्धारित करने के लिए खुला मंच।

सीरम मेटाबोलाइट्स का एलसी / एमएस विश्लेषण

सीरम के नमूनों को प्रोटीन को अवक्षेपित करने के लिए 1:3 के अनुपात में प्री-चिल्ड मेथनॉल के साथ 1 0 मिनट के लिए इनक्यूबेट किया गया था। नमूनों को 12 0 00r/मिनट पर 15 मिनट के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर सेंट्रीफ्यूज किया गया था। सतह पर तैरनेवाला का विश्लेषण थर्मो साइंटिफिक डायोनेक्स अल्टीमेट3000 रैपिड रेज़ोल्यूशन लिक्विड क्रोमैटोग्राफी और क्यूएक्सएक्टिव मास स्पेक्ट्रम द्वारा किया गया था। क्रोमैटोग्राफिक स्थितियों को तालिका 1 में दिखाया गया है। एनालिटिक्स को एक एक्सब्रिज बीईएच एमाइड क्रोमैटोग्राफिक कॉलम (2.1 × 100 मिमी; वाटर्स कं, मिलफोर्ड, एमए, यूएसए) में 0.1 प्रतिशत फॉर्मिक एसिड और एसीटोनिट्राइल को मोबाइल चरण ए और बी के रूप में अलग किया गया था। , क्रमश। प्रवाह दर 0.4 मिली/मिनट पर सेट की गई थी, इंजेक्शन की मात्रा 5 µl थी, और स्तंभ का तापमान 25 डिग्री सेल्सियस (तालिका 1) पर सेट किया गया था। बड़े पैमाने पर स्पेक्ट्रम संकेत सकारात्मक और नकारात्मक आयन स्कैनिंग मोड का उपयोग करके प्राप्त किए गए थे। आयन स्प्रे वोल्टेज और अन्य विशिष्ट एमएस पैरामीटर तालिका 2 में दिखाए गए हैं।

सांख्यिकीय विश्लेषण

Statistical analysis was performed using the SPSS 13.0 software (SPSS Inc., Chicago, Illinois, USA). The data plots were generated using GraphPad Prism 8.0.1 (GraphPad Software, La Jolla, California, USA). Partial least squares discriminant analysis (OPLS-DA) of SIMCA-P+13.0 (Umetrics, AB, Umeå, Sweden) and Principal Components Analysis (PCA) were used to assess normalized GC-MS spectral data. Variable Influence on Projection (VIP) values were used to identify significant variables with VIP values >1.0 और पी< 0.05.="" these="" significant="" variables="" were="" used="" to="" identify="" the="" spectral="" peaks.="" the="" student's="" t-test="" was="" used="" to="" analyze="" the="" differences="" between="" two="" groups="" of="" data.="" the="" taxonomic="" rank="" differential="" between="" groups="" was="" determined="" using="" student's="" test="" (v3.1.2;="" r="" programming="" language).="" the="" correlation="" between="" genera="" abundance="" and="" mouse="" behavior="" was="" calculated="" using="" spearman="" correlation="" coefficients="" (r="" language).="" p="" <="" 0.05="" was="" considered="" statistically="" significant.="" the="" data="" are="" presented="" as="">