सिस्टेंच प्रणालीगत ल्यूपस एरिथेमेटोसस के कारण गुर्दे के संक्रमण में सुधार करता है

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चर्चा

परमाणु एंटीजन के खिलाफ सहिष्णुता का एक ब्रेक किसकी पहचान हैदैहिक लूपसएरिथेमेटोसस, और बी कोशिकाओं के अलावा, ऑटोरिएक्टिव टी कोशिकाओं को इसके रोगजनन में एक केंद्रीय भूमिका निभाने के लिए माना जाता है। हालांकि, (ऑटो) एंटीजन-विशिष्ट का पता लगाने के रूप मेंCD4⁺ टी कोशिकाएं अभी भी ऑटोइम्यूनिटी अनुसंधान में एक बड़ी चुनौती पेश करती हैं, आज तक, परमाणु एंटीजन-प्रतिक्रियाशील सीडी 4 के बारे में वास्तव में बहुत कम जाना जाता है⁺में T कोशिकाएँदैहिकलूपसएरिथेमेटोसस.

हाल ही में, एंटीजन-विशिष्ट CD4 का पता लगाने और गणना के लिए उपन्यास विधियाँ⁺टी कोशिकाओं को विकसित किया गया है। टी-सेल लाइब्रेरी दृष्टिकोण दुर्लभ एंटीजन-विशिष्ट टी-सेल क्लोन का पता लगाने में सक्षम करने के लिए टी कोशिकाओं के पूर्व पॉलीक्लोनल विस्तार का शोषण करता है। यह रणनीति उच्च संवेदनशीलता प्रदान करती है और सीमित मात्रा में कोशिकाओं के साथ काम करने की अनुमति देती है। इस तकनीक का उपयोग करते हुए, हम सक्रिय रोगियों में 5 विहित परमाणु एंटीजन के खिलाफ प्रतिक्रियाशील टी कोशिकाओं को प्रदर्शित करने में सक्षम थेदैहिकलूपसएरिथेमेटोसस. पुस्तकालय-आधारित पहचान के नुकसान, श्रम-गहन होने के अलावा, विस्तार के दौरान कुछ क्लोनों की वृद्धि या हानि, चरण को बाहर नहीं रखा जा सकता है और कोशिकाओं के फेनोटाइपिक विश्लेषण के लिए सीमित विकल्प हैं।

मानक साथी साइटोमेट्री पता लगाने योग्य घटनाओं की संख्या से सीमित है, जो आमतौर पर 0.01% से ऊपर की आवृत्तियों के साथ आबादी के लिए नमूनों के विश्लेषण को प्रतिबंधित करता है। टी-सेल लाइब्रेरी का उपयोग करके हमारे अवलोकन से पता चला है कि ऑटोरिएक्टिव सीडी 4 को प्रसारित करने की आवृत्ति⁺एक रोग भड़कने वाले रोगियों में एक विशेष ऑटोएंटीजन के लिए टी कोशिकाएं एक मिलियन कोशिकाओं में w20 कोशिकाएं थीं, जो 0.002% की आवृत्ति का प्रतिनिधित्व करती थीं; इसलिए, autoantigen-विशिष्ट CD4 का पता लगाना⁺मानक, nonmanipulated साथी cytometry का उपयोग कर टी कोशिकाओं लगभग असंभव है. Bacher et al. CD4 के पूर्व संवर्धन की शुरुआत की⁺टी कोशिकाएं जो साथी साइटोमेट्री पर अधिग्रहण से पहले विशेष एंटीजन के लिए प्रतिक्रियाशील होती हैं, जिन्हें एआरटीई विधि के रूप में जाना जाता है। परमाणु एंटीजन-विशिष्ट CD4 का पता लगाने के लिए इस दृष्टिकोण को अपनाना⁺टी कोशिकाओं, हम अपने निष्कर्षों की पुष्टि करने और परमाणु एंटीजन-प्रतिक्रियाशील सीडी 4 के विस्तार का प्रदर्शन करने में सक्षम थे⁺सक्रिय में T कोशिकाएँदैहिकलूपसएरिथेमेटोसस. विशेष रूप से, ट्रांसथायरेटिन और सी अल्बिकन्स के साथ प्रतिक्रियाशील टी कोशिकाओं की आवृत्ति स्वस्थ नियंत्रण और रोगियों के साथ उदासीन थीदैहिकलूपसएरिथेमेटोससअलग-अलग रोग गतिविधि के साथ। इसलिए, के मनाया विस्तारस्वत: प्रतिक्रियाशीलTकोशिकाएँसामान्य अतिसक्रियता निष्क्रिय का परिणाम नहीं हैदैहिकलूपसएरिथेमेटोससलेकिन एंटीजन-विशिष्ट टी कोशिकाओं के विस्तार का।

वहीप्रणालीगत ल्यूपस एरिथेमेटोसससंक्रमित करता हैगुर्दा, इसलिए cistanche की रक्षा के लिए प्रयोग किया जाता हैगुर्दे.

पहले की रिपोर्टों ने पहले से ही अस्तित्व का प्रदर्शन किया हैस्वत: प्रतिक्रियाशीलT कोशिकाएँमेंदैहिकलूपसएरिथेमेटोसस, मुख्य रूप से प्रसार, साइटोकाइन उत्पादन, या सक्रियण मार्करों के अपरेगुलेशन का उपयोग करके, हालांकि इन कोशिकाओं की एक स्पष्ट आबादी को मापने में सक्षम होने के बिना। परमाणु एंटीजन-विशिष्ट टी कोशिकाओं की आवृत्ति पर सबसे अच्छा सबूत U1 छोटे राइबोन्यूक्लियोप्रोटीन के खिलाफ प्रतिक्रियाशीलता के लिए मौजूद है, जो मिश्रित संयोजी ऊतक रोग में एक विशेषता ऑटोएंटीजन लक्ष्य है और केवल रोगियों के एक अंश में पाया जाता हैदैहिकलूपसएरिथेमेटोसस. U1 छोटे परमाणु राइबोन्यूक्लियोप्रोटीन- प्रतिक्रियाशील CD4⁺टी कोशिकाओं को सीमित कमजोर पड़ने और एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनो स्पॉट परख (ELISPOT) का उपयोग करके निर्धारित किया गया था और क्रमशः (40 से 250) 106 टी कोशिकाओं और (20 से 60) 106 पीबीएमसी की आवृत्ति पर होने की सूचना दी गई थी, जो हमारे अध्ययन में ऑटोरिएक्टिव कोशिकाओं की आवृत्ति के समान परिमाण का है। हमारे काम में, हमने कई विशेषताओं के खिलाफ प्रतिक्रियाशीलता की जांच कीदैहिकलूपसएरिथेमेटोसस-संबद्ध परमाणु एंटीजन। दिलचस्प बात यह है कि, हालांकि सक्रिय एलएन वाले सभी रोगियों ने एंटी-न्यूक्लियर एंटीजन-रिएक्टिव सीडी 4 की बढ़ी हुई आवृत्तियों को दिखाया⁺टी कोशिकाओं, रोगियों को उनके लक्ष्य पोर्टफोलियो में भिन्न, और प्रतिक्रियाशीलता निष्क्रिय के साथ रोगियों की तुलना में एंटीजन के एक व्यापक सेट के खिलाफ उद्देश्य थादैहिकलूपसएरिथेमेटोसस. इसका जैविक संकेत वर्तमान में अज्ञात है। विभिन्न CD4⁺टी सेल reactivities विभिन्न reactivities है कि रोग रोगजनन के लिए अनावश्यक हो सकता है की कुछ नैदानिक अभिव्यक्तियों के साथ संबद्ध हो सकता है.

अन्य ऑटोइम्यून बीमारियों के समान, हम ऑटोरिएक्टिव सीडी 4 के अस्तित्व को भी प्रदर्शित करने में सक्षम थे⁺स्वस्थ व्यक्तियों में टी कोशिकाएं, हालांकि सक्रिय प्रणालीगत ल्यूपस एरिथेमेटोसस वाले रोगियों की तुलना में बहुत कम आवृत्तियों पर। इन कोशिकाओं को एंटीजन उत्तेजना के साथ या बिना सक्रिय कोशिकाओं की संख्या की तुलना करके पता लगाने योग्य नहीं था, यहां तक कि टी-सेल पुस्तकालयों या एआरटीई विधियों जैसी अत्यधिक संवेदनशील तकनीकों के साथ भी। हालांकि, एकल-सेल क्लोनिंग द्वारा, हम यह प्रदर्शित करने में सक्षम थे कि "पृष्ठभूमि" सिग्नल में वास्तव में ऑटोएंटीजन-विशिष्ट सीडी 4 शामिल है⁺टी कोशिकाओं. कौन सी विशिष्ट घटनाएं सहिष्णुता के टूटने और आवृत्तियों में वृद्धि का कारण बनती हैंस्वत: प्रतिक्रियाशीलTकोशिकाएँसट्टा रहता है; फिर भी, हमारे डेटा से पता चलता है कि autoreactive क्लोन का विस्तार प्रणालीगत ल्यूपस erythematosus के रोगजनन में एक भूमिका निभाता है।

परिसंचारी परमाणु प्रतिजन-प्रतिक्रियाशील CD4⁺टी कोशिकाओं ने मुख्य रूप से आईएफएन-जी का उत्पादन किया और, कुछ हद तक, आईएल -17 और आईएल -10। ऑटोएंटीबॉडी उत्पादन के साथ कमजोर / कोई सहसंबंध के साथ यह साइटोकाइन प्रोफ़ाइल से पता चलता है कि परमाणु एंटीजन-प्रतिक्रियाशील सीडी 4 की भूमिका⁺टी कोशिकाएं बी सेल मदद का अनन्य प्रदाता नहीं हो सकती हैं। IFN-g को LN के रोगजनन में अपरिहार्य दिखाया गया है। Th1 कोशिकाओं में भर्ती होने के लिए दिखाया गया हैसंक्रमित गुर्दाऊतकदैहिक लूपसएरिथेमेटोसस, परमाणु एंटीजन-प्रतिक्रियाशील टी कोशिकाओं को प्रमुख उम्मीदवारों पर आक्रमण करने के लिए बनानागुर्दे, जहां वे अपने सर्वव्यापी संज्ञेय autoantigen मुठभेड़ होगा. मूत्र टी कोशिकाओं को पहले रोग गतिविधि को प्रतिबिंबित करने और एलएन 20,33 में इंट्रारेनल कोशिकाओं के फेनोटाइप को दर्पण करने के लिए वर्णित किया गया है; इस प्रकार, हमने मूत्र टी कोशिकाओं को प्रॉक्सी के रूप में इस्तेमाल कियागुर्दाटी कोशिकाओं. मूत्र टी कोशिकाओं ने एक प्रतिबंधित टीसीआर परिवर्तनशीलता का खुलासा किया, जो अवलोकनों के अनुरूप हैगुर्दाबायोप्सी, में कुछ टी सेल क्लोन के संवर्धन का संकेतसंक्रमितगुर्दाऊतक। मूत्र टी कोशिकाओं के बीच, हम परमाणु एंटीजन-प्रतिक्रियाशील टी कोशिकाओं का पता लगाने में सक्षम थे, और उनकी आवृत्ति परिसंचरण टी कोशिकाओं की तुलना में समृद्ध थी। नतीजतन, ऐसा लगता है कि परमाणु एंटीजन-प्रतिक्रियाशील कोशिकाएं सीधे स्थानीय अंग क्षति के प्रसार में भाग लेती हैं।

संक्षेप में, हम यहां प्रदर्शित करते हैं कि परमाणु एंटीजन-प्रतिक्रियाशील CD4⁺T कोशिकाओं का विस्तार निष्क्रिय हैदैहिकलूपसएरिथेमेटोसस; वे फेनोटाइपिक रूप से मुख्य रूप से IFN-g-उत्पादन Th1 T कोशिकाओं और आक्रमण कर रहे हैंसंक्रमितलक्ष्य अंगों जैसे किगुर्दा.

Cistanche करने के लिए संक्रमण से बचने के लिए कर सकते हैंगुर्दाके कारणदैहिकलूपसएरिथेमेटोसस.

विधियाँ

अनुपूरक सामग्री में विस्तृत विधियां दी गई हैं।

विषयों और रक्त और मूत्र के नमूने

रक्त के नमूने 17 स्वस्थ व्यक्तियों से प्राप्त किए गए थे, निष्क्रिय के साथ 12 रोगियोंदैहिकलूपस एरिथेमेटोसस(दैहिकलूपसएरिथेमेटोससडीएआई स्कोर<10), and="" 20="" patients="" with="" active="">दैहिकलूपसएरिथेमेटोसस(दैहिकलूपसएरिथेमेटोससडीएआई स्कोर >10)। इसके अलावा, सक्रिय के साथ 12 रोगियों से मूत्र के नमूने प्राप्त किए गए थेदैहिकलूपसएरिथेमेटोससऔर एलएन। सभी विषयों ने Charité में संस्थागत समीक्षा बोर्ड और नैतिकता के अधिकारियों द्वारा प्राप्त नैतिक अनुमोदन के आधार पर अपनी सूचित सहमति दी थी - Universitätsmedizin बर्लिन (EA 1/342/12, EA 1/098/07, और EA 1/036/16)। PBMCs और मूत्र कोशिकाओं को एक FicollHypaque घनत्व ढाल का उपयोग करके तैयार किया गया था।

एंटीबॉडी और साइटोमेट्री का पालन करें

प्रयोगों के आधार पर, कई सतह अणुओं को निम्नलिखित मोनोक्लोनल एंटीबॉडी के विभिन्न संयोजनों में एंटीजन-उत्तेजित कोशिकाओं पर दाग दिया गया था: एंटी-सीडी 3, -सीडी 4, -सीडी 8, -सीडी 14, -सीडी 20, -सीडी 6 9, और -सीडी 154; जीवित और मृत कोशिकाओं में भेदभाव करने के लिए, लाइव / मृत एक्वा किट (लाइफ टेक्नोलॉजीज लिमिटेड,Paisystemicलूपसएरिथेमेटोसस, यूके) का उपयोग किया गया था।

इंट्रासेल्युलर सेल डिब्बे को दागने के लिए, कोशिकाओं को कमरे के तापमान पर 15 मिनट के लिए 2% (वी / वी) पैराफॉर्मेल्डिहाइड के साथ तय किया गया था और बीडी एफएसीएस परमेबिलाइजिंग सॉल्यूशन 2 (बीडी बायोसाइंसेज, सैन जोस, सीए) के साथ परमेबिलाइज़ किया गया था; निम्नलिखित एंटीजन को एक मानक प्रोटोकॉल का उपयोग करके इंट्रासेल्युलर रूप से दाग दिया गया था: CD154, IFN-g, IL-2, IL-4, IL-10, और IL-17।

नमूने BD FACSCanto II और BD LSRFortessa (BD Biosciences) पर अधिग्रहित किए गए थे, जो फ्लो साइटोमेट्री कोर फैसिलिटी ड्यूश रुमा-Forschungszentrum बर्लिन में BD FACSDiva सॉफ़्टवेयर (BD Biosciences) का उपयोग करके साइटोमीटर का पालन करते हैं। फ्लो साइटोमेट्री डेटा का विश्लेषण फ्लोजो सॉफ्टवेयर (FlowJo v10, थ्री स्टार, एशलैंड, वीए) का उपयोग करके किया गया था।

एंटीजन और एंटीजन पूल तैयारी

हमने CD4 को उत्तेजित करने के लिए निम्नलिखित एंटीजन का उपयोग किया⁺टी सेल पुस्तकालय परख में टी कोशिकाओं: मानव SNRPD1 (SmD1) पुनः संयोजक प्रोटीन (Biorbyt लिमिटेड, कैम्ब्रिज, ब्रिटेन), मानव SNRP70 (RNP70) पुनः संयोजक प्रोटीन के 50 एनजी / एमएल (Abcam Plc., कैम्ब्रिज, ब्रिटेन), 0.5 मिलीग्राम / मिलीलीटर प्राकृतिक मानव हिस्टोन प्रोटीन (Abcam Plc.), 0.5 मिलीग्राम / Lübeck, जर्मनी), मानव एसएस-बी / ला के 0.5 मिलीग्राम / एमएल पुनः संयोजक प्रोटीन (कृपया Orgentec Diagnostika GmbH, Mainz, जर्मनी द्वारा प्रदान की गई), SEB के 1 मिलीग्राम / मिलीलीटर (सिग्मा-एल्ड्रिच Chemie GmbH, स्टीनहाइम, जर्मनी), PepTivator Candida albicans MP65 के 1 मिलीग्राम / एमएल (Miltenyi Biotec GmbH, Bergisch Gladbach, जर्मनी), और मानव ट्रांसथायरेटिन के 0.5 मिलीग्राम / मिलीलीटर मानव ट्रांसथायरेटिन पुनः संयोजक प्रोटीन के 0.5 मिलीग्राम / मिलीलीटर।

परिधीय और मूत्र टी-सेल पुस्तकालय प्रवर्धित परिधीय और मूत्र टी-सेल पुस्तकालयों को उत्पन्न करने के लिए प्रोटोकॉल को अपनाया गया था और पहले वर्णित के रूप में अनुकूलित किया गया था।14 संक्षिप्त रूप से, 200,000 परिधीय सीडी 4⁺टी कोशिकाओं या 500 से 2000 मूत्र CD4⁺टी कोशिकाओं को एंटी-ह्यूमनसीडी 4 का उपयोग करके अलग किया गया था⁺MicroBeads (Miltenyi Biotec GmbH) निर्माता के निर्देशों के अनुसार। CD4 की शुद्धता⁺टी-सेल अंश को नियमित रूप से सीडी 3 के आधार पर फॉलो साइटोमेट्री का उपयोग करके जांचा गया था⁺CD4⁺अभिव्यक्ति, जहां शुद्धता हमेशा परिधीय रक्त और मूत्र के नमूनों के लिए क्रमशः >99% और 70% से 75% तक पहुंच गई। समानांतर में, एंटीजन-प्रस्तुत करने वाली कोशिकाओं को एंटी-ह्यूमन सीडी 3 माइक्रोबीड्स (मिल्टेनेयी बायोटेक जीएमबीएच) और क्रायोप्रिजर्व्ड के साथ कमी के बाद पीबीएमसी से सीडी 3 कोशिकाओं को इकट्ठा करके तैयार किया गया था। संस्कृति के 1 से 2 सप्ताह के बाद, प्रवर्धित CD4 के अंश⁺टी कोशिकाओं को 96-अच्छी तरह से प्लेटों में वितरित किया गया था, जो विश्लेषण किए जाने वाले एंटीजन की संख्या पर निर्भर करता है। एंटीजन के साथ उत्तेजना से पहले, कोशिकाओं को कम से कम 4 दिनों के लिए आराम दिया गया था। उत्तेजना के दिन, एंटीजन-प्रस्तुत करने वाली कोशिकाओं को पिघलाया गया और टी-सेल संस्कृति में कम से कम 1 एंटीजन-प्रस्तुत करने वाले सेल के अनुपात में 100 सीडी 4 के अनुपात में वितरित किया गया।⁺टी कोशिकाओं. CD4⁺नकारात्मक नियंत्रण (unstimulated कोशिकाओं) और सकारात्मक नियंत्रण (SEB के साथ उत्तेजित कोशिकाओं) के लिए टी-सेल पुस्तकालयों को हमेशा प्रयोगों में शामिल किया गया था। CD4⁺ टी कोशिकाओं को 4 दिनों के लिए एंटीजन के साथ उत्तेजित किया गया था, और प्रसार को एक मानक [3 एच] -थाइमिडिन प्रोटोकॉल का उपयोग करके निर्धारित किया गया था।

प्रवर्धित टी-सेल विस्फोटों ने अत्यधिक विषम सिंटिलेशन सीपीएम द्वारा प्रदर्शित एंटीजन के लिए अलग-अलग प्रतिक्रिया दी; इस प्रकार, दाता-विशिष्ट जेड स्कोर के रूप में निर्धारित प्रसार सीमा का सामान्यीकरण आवश्यक था। जेड स्कोर की गणना 75 वें और 25 वें प्रतिशत के 5 अंतरों के रूप में की गई थी, जो कि अउत्तेजित माइक्रोकल्चर के औसत सीपीएम से ऊपर थी। एसईबी के साथ प्रेरित माइक्रोकल्चर में कोशिकाओं ने एक सकारात्मक नियंत्रण के रूप में कार्य किया। ध्यान दें, एक SEB उत्तेजना सूचकांक के साथ microcultures के<5 for="" peripheral="" blood="" samples,="" or="" 4="" for="" urinary="" samples,="" were="" excluded="" because="" it="" indicated="" poor="" cell="" viability.="" enumeration="" of="" the="" precursor="" frequency="" of="" antigen-specific="">⁺टी कोशिकाओं की गणना पॉइसन वितरण के अनुसार नकारात्मक माइक्रोकल्चर की संख्या का उपयोग करके की गई थी और प्रति 1 मिलियन कोशिकाओं को व्यक्त किया गया था, जैसा कि पहले वर्णित है। Poisson वितरण का उपयोग संभावना है कि कम से कम 1CD4 पर आधारित है⁺टी सेल टी-सेल पुस्तकालयों के एक एकल माइक्रोकल्चर में मौजूद होता है जब एंटीजन-विशिष्ट उत्तेजना के बाद रेडियोधर्मी संकेत का पता लगाया गया था।

परिधीय और मूत्र ARTE विधियों हम प्रोटोकॉल है कि CD154 MicroBead किट (Miltenyi Biotec GmbH) का उपयोग करता है का पालन किया. संक्षेप में, कोशिकाओं को एंटीजन के साथ 7 घंटे के लिए उत्तेजित किया गया था और फिर निर्माता के निर्देशों के अनुसार एंटी-ह्यूमन सीडी 154-बायोटिन एंटीबॉडी और एंटी-बायोटिन माइक्रोबीड्स के साथ लेबल किया गया था। लेबल किए गए कोशिकाओं को CD154-अभिव्यक्त कोशिकाओं को समृद्ध करने के लिए कैलिब्रेटेड एमएस कॉलम (Miltenyi Biotec GmbH) पर लोड किया गया था। कार्बोक्सीफ्लोरोसीन डायएसीटेट एन-सुकिनिमिडिल एस्टर (सिग्मा-एल्ड्रिच केमी जीएमबीएच) के साथ कोशिकाओं का लेबलिंग एक मानक प्रोटोकॉल का पालन करते हुए किया गया था।

Cistanche में सुधारगुर्दाकार्यों।

एकल-सेल क्लोन की पीढ़ी

एकल-सेल क्लोन एंटीजन-प्रतिक्रियाशील कोशिकाओं से उत्पन्न हुए थे, जिन्हें एआरटीई प्रोटोकॉल के बाद सीडी 154 अभिव्यक्ति द्वारा समृद्ध किया गया था। CD154-व्यक्त करने वाली कोशिकाओं को 30-मिमी तैयारी फ़िल्टर (Miltenyi Biotec GmbH) के साथ फ़िल्टर किया गया था और 20% (v / v) ठंडे फॉस्फेट-बफ़र्ड नमकीन, 0.5% गोजातीय सीरम एल्ब्यूमिन, और 2mM ethylenediaminetetraacetic एसिड के 1 मिलीलीटर में फिर से निलंबित किया गया था। CD154 के लिए सॉर्ट किए गए एकल कक्ष कक्ष कक्ष थे⁺CD69⁺फेनोटाइप, और एकल क्रमबद्ध कोशिकाओं को फीडर कोशिकाओं की उपस्थिति में 96-अच्छी तरह से प्लेटों के एकल कुओं में सुसंस्कृत किया गया था। सेल संस्कृतियों को 3 से 4 दिनों तक बनाए रखा गया था जब तक कि कई क्लोन दिखाई नहीं दे रहे थे। restimulation से एक दिन पहले, एंटीजन-प्रस्तुत करने वाली कोशिकाओं को पिघलाया गया था और टी-सेल संस्कृति में किस अनुपात में वितरित किया गया था?

कम से कम 1 एंटीजन-100 CD4 के लिए प्रस्तुत सेल⁺टी कोशिकाओं. कोशिकाओं को एंटीजन के 1 मिलीग्राम / मिलीलीटर के साथ उत्तेजित किया गया था, और बिना उकसाए गए क्लोन एक नकारात्मक नियंत्रण के रूप में कार्य करते थे।

अगली पीढ़ी के अनुक्रमण-आधारित टीसीआर प्रदर्शनों की सूची विश्लेषण

जीनोमिक डीएनए को परिधीय CD4 से अलग किया गया था⁺AllPrep DNA/RNA Micro Kit (Qiagen, Venlo, The Netherlands) का उपयोग करके टी कोशिकाओं और मूत्र कोशिकाओं। पुन: संयोजित टीसीआर-बी लोकस को प्रोटोकॉल के बाद प्रवर्धित किया गया था जैसा कि पहले वर्णित है। IMSEQ का उपयोग करके पठन संसाधित किए गए थे, और समान क्लोनोटाइप को क्लस्टर किया गया था और आगे का विश्लेषण किया गया था।

सांख्यिकी

सांख्यिकीय परीक्षण GraphPad प्रिज्म सॉफ्टवेयर (प्रिज्म 8, GraphPad सॉफ्टवेयर इंक, ला जोला, सीए) के साथ किया गया था। कई तुलनाओं के लिए Bonferroni समायोजन लागू किया गया था। मान-व्हिटनी यू परीक्षण और विलकॉक्सन साइन-रैंक परीक्षण का उपयोग क्रमशः स्वतंत्र और निर्भर डेटा सेट के साथ प्रयोगों में किया गया था। कई तुलनाओं के लिए Bonferroni समायोजन के बाद, महत्वपूर्ण P मानों की गणना को सही किया गया था क्योंकि यह नियोजित तुलनाओं की संख्या पर आधारित है। P मान<0.01 were="" considered="" statistically="" significant="" with="" the="" following="" indication:="" *p="">< 0.01,="" **p="">< 0.005,="" and="" ***p="">< 0.0005.="" correlation="" analyses="" were="" performed="" using="" spearman="" rank="" correlations="" by="" showing="" the="" absolute="">दैहिकलूपसएरिथेमेटोससकोशिकाओं की संख्या और रोग गतिविधि के बीच सहसंबंध की समझ को बेहतर ढंग से प्रदान करने के लिए रैंक किए गए मूल्यों के बजाय डीएआई मूल्यों को बेहतर ढंग से मानता है। सहसंबंध विश्लेषण के लिए, P मान<0.5 were="" considered="" statistically="" significant="" with="" the="" following="" indication:="" *p="">< 0.05,="" **p="">< 0.01,="" and="" ***p="">< 0.001.="" when="" background="" frequencies="" were="" higher="" than="" the="" frequencies="" of="" nuclear="" antigen–reactive="">⁺टी कोशिकाओं, पृष्ठभूमि के बिना आवृत्तियों को शून्य के रूप में परिभाषित किया गया था। एक लॉग (x π 1) रूपांतरण डेटा सेट करने के लिए लागू किया गया था जब इसमें शून्य मान शामिल थे। पूरक रोगी डेटा और सांख्यिकीय डेटा अनुपूरक तालिका S1 और S2 में उपलब्ध हैं।

परमाणु प्रतिजन-प्रतिक्रियाशील CD4⁺कोशिकाओं का सक्रिय रूप से विस्तार होता हैदैहिकलूपसएरिथेमेटोसस, प्रभावकारी साइटोकिन्स का उत्पादन, और संक्रमितगुर्दे, cistanche की रक्षा कर सकते हैंगुर्दे.

प्रकटीकरण

सभी लेखकों ने कोई प्रतिस्पर्धी हितों की घोषणा नहीं की।

पावती

हम Flflow cytometry और सेल छँटाई के साथ सहायता के लिए Toralf कैसर और जेनी Kirsch (प्रवाह Cytometry और सेल सॉर्टिंग सुविधा, Deutsches Rheuma-Forschungszentrum बर्लिन) को धन्यवाद देते हैं। इन अध्ययनों के लिए समर्थन ड्यूश Forschungsgemeinschaft से अनुदान द्वारा प्रदान किया गया था Sonderforschungsbereich 650 के भीतर जीआर के लिए और ड्यूश Gesellschaft für नेफ्रोलॉजी और Charité-Universitätsmedizin बर्लिन और बर्लिन इंस्टीट्यूट ऑफ हेल्थ के नैदानिक वैज्ञानिक कार्यक्रम से अनुदान द्वारा पीई के लिए।

अनुपूरक सामग्री अनुपूरक फाइल (पीडीएफ)

चित्रा S1. स्वत: सक्रिय परमाणु एंटीजन-विशिष्ट CD4⁺T कक्ष लायब्रेरी विधि द्वारा T कक्षों का पता लगाया गया था. चित्रा S2. CD154⁺CD69⁺CD4⁺स्वस्थ व्यक्तियों से परमाणु एंटीजन के साथ उत्तेजना के बाद अलग-थलग टी कोशिकाएं बोना-फिफे एंटीजन-विशिष्ट सीडी 4 हैं⁺टी कोशिकाओं.

चित्रा S3. साइटोकाइन-उत्पादक ऑटोरिएक्टिव CD4 की आवृत्तियों⁺टी कोशिकाओं की तुलना एंटीन्यूक्लियर एंटीबॉडी (एंटी-एएनए) (ए) के टिटर के साथ की गई थी, और एंटी-डबल स्ट्रैंड डीएनए एंटीबॉडी (एंटी-डीएसडीएनए) (बी) की एकाग्रता के साथ।

चित्रा S4. परमाणु प्रतिजन-प्रतिक्रियाशील CD4⁺सक्रिय के मूत्र में टी कोशिकाओं का पता लगाया गया थादैहिकलूपसएरिथेमेटोससएलएन के साथ रोगियों।

तालिका S1. नैदानिक डेटा।

तालिका S2. माध्यिका मानों का सारांश.

अनुपूरक विधियाँ.

एक बारगुर्दापरमाणु एंटीजन-प्रतिक्रियाशील CD4 के कारण संक्रमित है⁺सक्रिय रूप से फैलने वाली कोशिकाएँदैहिकलूपसएरिथेमेटोससवहीगुर्दासमारोह नष्ट हो जाता है, cistanche सुधार करने के लिए उपयोग किया जाता हैगुर्दाफलन।

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