STAT3/HIF-1 /ग्लाइकोलाइसिस एक्सिस के माध्यम से सिस्टैंच टैबलेट द्वारा क्रोनिक प्रोस्टेटाइटिस के सुधार पर यंत्रवत अध्ययन

 

अमूर्त

यह अध्ययन चिकित्सीय तंत्र की जांच करता हैसिस्टैंच टैबलेट (सीटी)क्रोनिक प्रोस्टेटाइटिस के उपचार मेंSTAT3/HIF-1 /ग्लाइकोलाइसिस सिग्नलिंग अक्ष. सिस्टैंच टैबलेट की प्रभावकारिता का मूल्यांकन करने के लिए प्रायोगिक ऑटोइम्यून प्रोस्टेटाइटिस (ईएपी) का एक चूहा मॉडल स्थापित किया गया था। नर विस्टार चूहों को बेतरतीब ढंग से छह समूहों में विभाजित किया गया था (n =7 प्रति समूह): नियंत्रण, मॉडल, निम्न-, मध्यम- और उच्च खुराक वाले सीटी समूह (क्रमशः 197.2, 591.5, और 1774.4 मिलीग्राम/किग्रा/दिन), और एक सकारात्मक नियंत्रण समूह (पुसिटाई, 34.2 मिलीग्राम/किग्रा/दिन)। मॉडल प्रेरण के बाद, सभी उपचार लगातार चार सप्ताह तक किए गए।

हेमेटोक्सिलिन और ईओसिन (एचई) स्टेनिंग का उपयोग करके हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण ने प्रोस्टेट सूजन और ग्रंथियों की क्षति का आकलन किया। इंटरल्यूकिन-8 (IL-8), इंटरल्यूकिन-1 (IL-1), और इम्युनोग्लोबुलिन जी (आईजीजी) के सीरम स्तर को एलिसा के माध्यम से मापा गया था। प्रोस्टेट ऊतकों में फॉस्फोराइलेटेड STAT3 (p-STAT3), HIF-1, मल्टीपल इनोसिटोल पॉलीफॉस्फेट फॉस्फेट 1 (MINPP1), और हेक्सोकाइनेज (HK) की प्रोटीन अभिव्यक्ति का मूल्यांकन वेस्टर्न ब्लॉटिंग और इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री के माध्यम से किया गया था। अलक्षित चयापचयों का उपयोग विभेदक चयापचयों और संबंधित चयापचय मार्गों की पहचान करने के लिए किया गया था।

परिणामों से पता चला कि सीटी ने प्रोस्टेट में रोग संबंधी क्षति को काफी हद तक कम कर दिया। एलिसा ने सीरम में IL-8, IL-1 और आईजीजी के स्तर में कमी का खुलासा किया। वेस्टर्न ब्लॉट और इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री ने प्रदर्शित किया कि CT ने MINPP1 को अपग्रेड करते हुए p-STAT3, HIF-1 और HK को डाउनरेगुलेट किया। मेटाबोलॉमिक्स ने 96 विभेदक मेटाबोलाइट्स की पहचान की और खुलासा किया कि सीटी ग्लाइकोलाइसिस और एराकिडोनिक एसिड चयापचय को संशोधित करके अपना चिकित्सीय प्रभाव डाल सकता है।

निष्कर्ष:सिस्टैंच टैबलेट STAT3 को लक्षित करके, HIF-1 सिग्नलिंग को दबाकर, और ग्लाइकोलाइटिक चयापचय को विनियमित करके सूजन को कम कर सकता है और क्रोनिक प्रोस्टेटाइटिस की प्रगति को रोक सकता है।

कीवर्ड: सिस्टैंच गोलियाँ; cक्रोनिक प्रोस्टेटाइटिस; चयापचय; HIF-1 सिग्नलिंग मार्ग; ग्लाइकोलाइसिस

प्रोस्टेट और किडनी के लिए सिस्टैंच के फायदे

 

 

 

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परिचय

क्रोनिक प्रोस्टेटाइटिस पुरुषों में एक सामान्य मूत्र संबंधी स्थिति है, जो मूत्र संबंधी शिथिलता, दर्दनाक पेशाब, तात्कालिकता और पेरिनेल असुविधा की विशेषता है। यह प्रोस्टेटाइटिस का सबसे प्रचलित प्रकार है, जो रोगियों के जीवन की गुणवत्ता को महत्वपूर्ण रूप से प्रभावित करता है। अध्ययनों से पता चलता है कि चीनी पुरुषों में इसका प्रसार 6.0%-32.9% और अंतरराष्ट्रीय स्तर पर 2.0%-16.0% है। वर्तमान पश्चिमी उपचार एंटीबायोटिक्स और एनएसएआईडी पर निर्भर हैं, लेकिन लंबे समय तक उपयोग से अक्सर गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल दुष्प्रभाव होते हैं।

क्रोनिक प्रोस्टेटाइटिस का एटियलजि और रोगजनन जटिल है, जिसमें प्रतिरक्षा विकृति, न्यूरोएंडोक्राइन असंतुलन और जीवनशैली कारक शामिल हैं। प्रतिरक्षाविज्ञानी असामान्यताएं और चयापचय संबंधी शिथिलता चिंता के प्रमुख क्षेत्र माने जाते हैं।

पारंपरिक चीनी चिकित्सा (टीसीएम) के परिप्रेक्ष्य से, क्रोनिक प्रोस्टेटाइटिस किडनी क्यूई की कमी, नमी-गर्मी संचय और रक्त ठहराव से जुड़ा हुआ है।सिस्टैंच गोलियाँ, एक पारंपरिक इन-हॉस्पिटल फॉर्मूलेशन [अनुमोदन संख्या Z04000524] से प्राप्त, "कुस्कुटा पिल" के साथ संयुक्त शास्त्रीय फॉर्मूला "चेंग्स बी झी फेन किंग यिन" पर आधारित हैं। इस फ़ॉर्मूले में दस जड़ी-बूटियाँ शामिल हैं जैसेसिस्टैंच डेजर्टिकोला, डायोस्कोरिया, औरपॉलीपोरस अम्बेलैटस, और पारंपरिक रूप से गुर्दे को टोन करने, सार को सुरक्षित करने, पेशाब को बढ़ावा देने और मैलापन को खत्म करने के लिए उपयोग किया जाता है।

नैदानिक ​​अध्ययनों ने पुष्टि की है कि सिस्टैंच टैबलेट प्रोस्टेटाइटिस के लक्षणों को प्रभावी ढंग से कम करती है और एक अच्छी सुरक्षा प्रोफ़ाइल के साथ जीवन की गुणवत्ता में सुधार करती है। हालाँकि, अधिकांश मौजूदा शोध नैदानिक ​​​​अवलोकनों पर केंद्रित हैं, और सटीक चिकित्सीय तंत्र अस्पष्ट हैं।

हाल के साक्ष्यों से पता चलता है कि क्रोनिक प्रोस्टेटाइटिस में असामान्य ग्लाइकोलाइसिस और हाइपोक्सिया-प्रेरक कारक 1 (HIF-1) की अत्यधिक अभिव्यक्ति शामिल है, जो इसे उपचार के लिए एक संभावित लक्ष्य बनाता है। इसके अलावा, STAT3 मार्ग को विनियमित करना पुरानी सूजन और ऑटोइम्यून प्रतिक्रियाओं को नियंत्रित करने में एक नई रणनीति के रूप में उभरा है। यह अध्ययन विवो प्रयोगों और मेटाबोलॉमिक्स के आधार पर सिस्टैंच टैबलेट के चिकित्सीय तंत्र की खोज करता है, जिसका उद्देश्य क्रोनिक प्रोस्टेटाइटिस में हर्बल फॉर्मूलेशन के उपयोग के लिए नए सबूत प्रदान करना है।

 

सामग्री और तरीके

1. सामग्री

पशु:सूज़ौ एसपीएफ़ बायोटेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड से 42 एसपीएफ़-ग्रेड नर विस्टार चूहे (190-210 ग्राम) खरीदे गए थे। जानवरों को मानक परिस्थितियों (20±3 डिग्री, 55%±5% आर्द्रता, 12 घंटे का प्रकाश/अंधेरा चक्र) के तहत रखा गया था और भोजन और पानी यथा संभव प्रदान किया गया था। अध्ययन को संस्थागत पशु आचार समिति (अनुमोदन संख्या. 2023112001) द्वारा अनुमोदित किया गया था।

औषधियाँ और अभिकर्मक:

सिस्टैंच गोलियाँ

पुसिटाई गोलियाँ (सकारात्मक नियंत्रण)

सेलाइन, पीबीएस बफर, पूर्ण फ्रायंड का सहायक

IL-8, IL-1 और आईजीजी के लिए एलिसा किट

एंटीबॉडीज़: p-STAT3, HIF-1, MINPP1, HK

माध्यमिक एंटीबॉडी और इम्यूनोहिस्टोकेमिकल अभिकर्मक

उपकरण:

एलसी-एमएस सिस्टम (ट्रिपल टीओएफ 6600, एगिलेंट 1290 इन्फिनिटी एलसी)

हाई-स्पीड सेंट्रीफ्यूज, होमोजेनाइज़र, माइक्रोप्लेट रीडर और सटीक संतुलन

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2. तरीके

2.1 विवो अध्ययन में

2.1.1 क्रोनिक प्रोस्टेटाइटिस मॉडल

एक प्रायोगिक ऑटोइम्यून प्रोस्टेटाइटिस (ईएपी) मॉडल को पूर्ण फ्रायंड के सहायक के साथ इमल्सीफाइड समरूप प्रोस्टेट ऊतक का उपयोग करके प्रेरित किया गया था। चूहों को 1 और 28 दिनों में कई स्थानों (गले, कमर और पिछले पंजे) पर चमड़े के नीचे के इंजेक्शन मिले। नियंत्रण चूहों को सलाइन इंजेक्शन प्राप्त हुए। व्यवहार संबंधी संकेतों और हिस्टोपैथोलॉजी द्वारा मॉडल की सफलता की पुष्टि की गई।

2.1.2 समूहीकरण और उपचार

मॉडल की पुष्टि के बाद, चूहों को यादृच्छिक रूप से छह समूहों में विभाजित किया गया: नियंत्रण, मॉडल, कम-, मध्यम-, उच्च-खुराक सीटी, और पुसिटाई समूह। सीटी मध्यम खुराक नैदानिक ​​समकक्ष खुराक के अनुसार निर्धारित की गई थी। उपचार 28 दिनों तक प्रतिदिन एक बार मौखिक रूप से दिया गया।

2.1.3 नमूना संग्रह

अंतिम दिन, 24 घंटे का मूत्र और पानी का सेवन दर्ज किया गया। इच्छामृत्यु के बाद, रक्त और प्रोस्टेट ऊतक एकत्र किए गए। प्रोस्टेट सूचकांक (प्रोस्टेट वजन/शरीर का वजन) की गणना की गई। आगे के विश्लेषण के लिए ऊतकों को या तो फॉर्मेलिन में स्थिर किया गया या तरल नाइट्रोजन में जमाया गया।

2.1.4 सामान्य टिप्पणियाँ

पूरे मॉडलिंग और उपचार के दौरान, चूहों के व्यवहार, कोट की स्थिति और सामान्य स्वास्थ्य की निगरानी की गई।

2.1.5 सीरम साइटोकिन्स के लिए एलिसा

निर्माता के निर्देशों का पालन करते हुए सीरम IL-8, IL-1 और आईजीजी स्तर को एलिसा का उपयोग करके मापा गया।

2.1.6 हिस्टोपैथोलॉजी (एचई स्टेनिंग)

फॉर्मेलिन-निर्धारित प्रोस्टेट ऊतकों को पैराफिन-एम्बेडेड किया गया और एचई धुंधला होने के लिए विभाजित किया गया। माइक्रोस्कोप के तहत सूजन और ऊतक क्षति देखी गई।

2.1.7 MINPP1 और HK के लिए इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री

मानक IHC प्रक्रियाओं का पालन किया गया, जिसमें डिपैराफिनाइजेशन, एंटीजन पुनर्प्राप्ति, ब्लॉकिंग, प्राथमिक और माध्यमिक एंटीबॉडी ऊष्मायन, डीएबी स्टेनिंग और हेमेटोक्सिलिन काउंटरस्टेनिंग शामिल हैं। सकारात्मक धुंधलापन की मात्रा निर्धारित करने के लिए ImageJ सॉफ़्टवेयर का उपयोग किया गया था।

2.1.8 पी-एसटीएटी3 और HIF-1 के लिए वेस्टर्न ब्लॉट

जमे हुए प्रोस्टेट ऊतकों का विश्लेषण किया गया और प्रोटीन सांद्रता निर्धारित की गई। एसडीएस-पेज और पीवीडीएफ झिल्ली स्थानांतरण के बाद इमेजजे का उपयोग करके ब्लॉकिंग, प्राथमिक/द्वितीयक एंटीबॉडी ऊष्मायन, ईसीएल विकास और डेंसिटोमेट्री की गई।

2.1.9 सांख्यिकीय विश्लेषण

ग्राफपैड प्रिज्म 9.5.1 का उपयोग करके डेटा का विश्लेषण किया गया। परिणाम माध्य ± एसडी के रूप में व्यक्त किए गए थे। एलएसडी पोस्ट हॉक परीक्षण के बाद एक-तरफ़ा एनोवा का उपयोग किया गया। पी<0.05 was considered statistically significant.

 

2.2 सीरम मेटाबोलॉमिक्स

2.2.1 नमूना तैयार करना

नियंत्रण, मॉडल और मध्यम-खुराक सीटी समूहों से सीरम को पिघलाया गया, ठंडे मेथनॉल-एसीटोनिट्राइल-पानी के साथ मिलाया गया, सोनिकेटेड और सेंट्रीफ्यूज किया गया। एलसी-एमएस विश्लेषण के लिए सतह पर तैरनेवाला को सुखाया गया और पुनर्गठित किया गया।

2.2.2 एलसी-एमएस शर्तें

मेटाबोलाइट्स को एक विशिष्ट ग्रेडिएंट रेफरेंस प्रोफाइल के साथ यूपीएलसी बीईएच एमाइड कॉलम का उपयोग करके अलग किया गया था। उच्च-संवेदनशीलता आईडीए मोड का उपयोग करके सकारात्मक और नकारात्मक दोनों आयन मोड में डेटा प्राप्त किया गया था।

2.2.3 डाटा प्रोसेसिंग

Raw data were converted to .mzML format, processed using XCMS for peak identification, alignment, and normalization. Metabolites with >50% missing values were removed. PCA and PLS-DA were used for multivariate analysis. Significant metabolites were filtered based on VIP >1.0 और पी<0.05, and KEGG pathway enrichment was performed.

 

परिणाम और चर्चा

सिस्टैंच टैबलेट ने प्रोस्टेट हिस्टोपैथोलॉजिकल परिवर्तनों में काफी सुधार किया, सूजन संबंधी साइटोकिन्स को कम किया, और STAT3/HIF-1 /ग्लाइकोलाइसिस अक्ष में प्रमुख प्रोटीन अभिव्यक्तियों को नियंत्रित किया। मेटाबोलॉमिक्स ने ग्लाइकोलाइसिस और एराकिडोनिक एसिड चयापचय के मॉड्यूलेशन का खुलासा किया, जो विरोधी भड़काऊ और चयापचय नियामक तंत्र दोनों का सुझाव देता है।

ये निष्कर्ष के विकास का समर्थन करते हैंसिस्टैंच-आधारित हर्बल सप्लीमेंटक्रोनिक प्रोस्टेटाइटिस के लिए एक आशाजनक प्राकृतिक चिकित्सा के रूप में, अच्छी सुरक्षा के साथ बहु-लक्ष्य विनियमन की पेशकश करता है।