अमूर्त

उद्देश्य:आणविक तंत्र की जांच करना जिसके द्वारासिस्टैंच-आधारित बुशेन कैक्सुआन टोंग्लूओ फॉर्मूलाचक्रीय एडेनोसिन मोनोफॉस्फेट (सीएमपी) सिग्नलिंग मार्ग को विनियमित करके मधुमेह गुर्दे की बीमारी (डीकेडी) वाले चूहों में गुर्दे की सुरक्षात्मक प्रभाव डालता है।

तरीके:तीस विशिष्ट रोगज़नक़-मुक्त (एसपीएफ़) पुरुष डीबी/डीबी चूहों को 3 सप्ताह तक अनुकूल रूप से खिलाया गया। यादृच्छिक पूंछ शिरा रक्त ग्लूकोज स्तर 11.1 mmol·L⁻¹ से अधिक या उसके बराबर और मूत्र माइक्रोएल्ब्यूमिन/क्रिएटिनिन अनुपात 30 mg·g⁻¹ से अधिक या उसके बराबर वाले चूहों को सफलतापूर्वक मॉडलिंग माना गया। मॉडल किए गए चूहों को बेतरतीब ढंग से पांच समूहों (एन {{6%) प्रति समूह) को सौंपा गया था: मॉडल समूह, निम्न-, मध्यम- और उच्च खुराक वाले बुशेन कैक्सुआन टोंग्लुओ फॉर्मूला समूह (7, 14, और 28 ग्राम किग्रा⁻¹·डी⁻¹), और एक इर्बेसार्टन समूह (20 मिलीग्राम·किग्रा⁻¹·डी⁻¹)। रिक्त समूह के रूप में छह डीबी/एम चूहों का उपयोग किया गया था।

इंट्रागैस्ट्रिक प्रशासन के माध्यम से उपचार 12 सप्ताह तक चला। सामान्य स्थितियों, शरीर के वजन और गुर्दे के कार्य संकेतकों की निगरानी की गई। हस्तक्षेप के बाद, उपवास रक्त ग्लूकोज (एफबीजी) मापा गया। सीरम क्रिएटिनिन (एससीआर), रक्त यूरिया नाइट्रोजन (बीयूएन), मूत्र माइक्रोएल्ब्यूमिन (यूएएलबी), एल्ब्यूमिन-क्रिएटिनिन अनुपात (एसीआर), एस्पार्टेट एमिनोट्रांस्फरेज (एएसटी), एलानिन एमिनोट्रांस्फरेज (एएलटी), कुल कोलेस्ट्रॉल (टीसी), ट्राइग्लिसराइड्स (टीजी), लेप्टिन (एलईपी), ग्लाइकोसिलेटेड सीरम प्रोटीन (जीएसपी), और इंसुलिन (आईएनएस) का आकलन करने के लिए एक स्वचालित जैव रासायनिक विश्लेषक का उपयोग किया गया था।

वृक्क ऊतक हिस्टोपैथोलॉजी का मूल्यांकन एचई, पीएएस और मैसन के ट्राइक्रोम स्टेनिंग का उपयोग करके किया गया था। इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री (आईएचसी) ने प्रोटीन काइनेज ए (पीकेए) और सीएमपी प्रतिक्रिया तत्व-बाइंडिंग प्रोटीन (सीआरईबी) की अभिव्यक्तियों का पता लगाया। वेस्टर्न ब्लॉट ने पीकेए, फॉस्फोराइलेटेड पीकेए (पी-पीकेए), सीआरईबी, फॉस्फोराइलेटेड सीआरईबी (पी-सीआरईबी), और बीसीएल-2 के स्तर का विश्लेषण किया। पीकेए, सीआरईबी और बीसीएल-2 की एमआरएनए अभिव्यक्तियों का मूल्यांकन करने के लिए वास्तविक समय पीसीआर का उपयोग किया गया था।

परिणाम:रिक्त समूह की तुलना में, मॉडल समूह में सुस्ती, कम गतिविधि और शरीर के वजन में उल्लेखनीय वृद्धि देखी गई (पी<0.01). Biochemical markers such as BUN, uALB, ACR, AST, ALT, TC, TG, FBG, LEP, GSP, and INS were significantly increased (P<0.01), while SCr showed an upward trend without statistical significance.

मॉडल समूह की तुलना में, फॉर्मूला-उपचारित समूहों ने सामान्य स्थिति में सुधार और शरीर के वजन में गिरावट देखी। BUN, uALB, ACR, TC, GSP, और INS में काफी कमी की गई (P<0.05), while SCr, AST, ALT, TG, and LEP decreased without statistical significance.

हिस्टोपैथोलॉजिकल विश्लेषण से पता चला कि मॉडल समूह ने ग्लोमेरुलर बेसमेंट झिल्ली का मोटा होना, मेसेंजियल मैट्रिक्स विस्तार और ट्यूबलोइंटरस्टिटियम में कोलेजन जमाव जैसी क्लासिक डीकेडी विशेषताएं प्रदर्शित कीं। सभी उपचार समूहों में इन रोग संबंधी परिवर्तनों को कम किया गया।

IHC परिणामों से पता चला कि मॉडल समूह (P) में p-PKA और p-CREB अभिव्यक्तियों में उल्लेखनीय रूप से कमी आई है<0.01). Compared with the model group, the medium-dose formula group had significantly increased p-PKA (P<0.01) and a non-significant upward trend in p-CREB.

वेस्टर्न ब्लॉट से पता चला कि मॉडल समूह (पी) में पी-पीकेए/पीकेए, पी-सीआरईबी/सीआरईबी और बीसीएल-2 का स्तर काफी कम हो गया था।<0.05), but significantly increased in the medium-dose formula group (P<0.01).

वास्तविक समय पीसीआर ने मॉडल समूह (पी) में पीकेए, सीआरईबी और बीसीएल-2 एमआरएनए के डाउनरेगुलेशन की पुष्टि की<0.05), and significant upregulation in the medium-dose formula group (P<0.05).

निष्कर्ष:सिस्टैंच-आधारित बुशेन कैक्सुआन टोंग्लूओ फॉर्मूलालीवर और किडनी के कार्य में सुधार करता है, डीबी/डीबी चूहों में लिपिड और ग्लूकोज चयापचय संबंधी विकारों को ठीक करता है। इसका वृक्क सुरक्षात्मक प्रभाव अपग्रेडेशन से जुड़ा हुआ हैसीएमपी/पीकेए/सीआरईबी सिग्नलिंग मार्ग, जो गुर्दे की फाइब्रोसिस और ऑक्सीडेटिव तनाव को कम करता है, जिससे गुर्दे के कार्य की रक्षा होती है।

 

 

 

 

सिस्टैंच-आधारित बुशेन कैक्सुआन टोंग्लूओ फॉर्मूला के लिएलीवर और किडनी की कार्यप्रणाली में सुधार

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कीवर्ड

मधुमेह गुर्दे की बीमारी (डीकेडी);
बुशेन कैक्सुआन टोंग्लूओ फॉर्मूला;
Cistanche;
सीएमपी सिग्नलिंग मार्ग;
पारंपरिक चीनी चिकित्सा (टीसीएम)

 

सिस्टैंच-आधारित उपाय

 

पृष्ठभूमि

मधुमेह गुर्दे की बीमारी (डीकेडी), मधुमेह की सबसे गंभीर सूक्ष्म संवहनी जटिलताओं में से एक, दुनिया भर में अंतिम चरण की गुर्दे की बीमारी (ईएसआरडी) का एक प्रमुख कारण है। इसका बढ़ता प्रचलन सार्वजनिक स्वास्थ्य प्रणालियों के लिए एक महत्वपूर्ण चुनौती है। डीकेडी विशेषताओं में प्रगतिशील ग्लोमेरुलर मेसेंजियल मैट्रिक्स विस्तार, ट्यूबलोइंटरस्टीशियल फाइब्रोसिस और लगातार प्रोटीनुरिया शामिल हैं। रोगजनन में ग्लूकोज और लिपिड चयापचय विकारों, ऑक्सीडेटिव तनाव और विभिन्न सिग्नलिंग मार्गों के असामान्य सक्रियण के बीच जटिल बातचीत शामिल है।

वर्तमान प्रथम-पंक्ति उपचार में मुख्य रूप से रेनिन-एंजियोटेंसिन सिस्टम (आरएएस) अवरोधक शामिल हैं, जो ग्लोमेरुलर उच्च रक्तचाप को कम करने और प्रारंभिक प्रोटीनमेह में देरी करने में मदद करते हैं। हालाँकि, वे स्थापित ट्यूबलोइंटरस्टीशियल फ़ाइब्रोसिस वाले रोगियों में कम प्रभावी हैं, जिनमें 30-40% ईएसआरडी की प्रगति होती है।

इसलिए, नए डीकेडी तंत्रों की खोज करना और प्रभावी, सुरक्षित चिकित्सीय लक्ष्य ढूंढना तत्काल नैदानिक ​​​​और वैज्ञानिक रुचि का विषय है। पारंपरिक चिकित्सा कम दुष्प्रभावों के साथ बहु-लक्ष्य विनियमन प्रदान करती है, जो इसे क्रोनिक किडनी रोग में दीर्घकालिक उपयोग के लिए अधिक उपयुक्त बनाती है।सिस्टैंच-आधारित बुशेन कैक्सुआन टोंग्लूओ फॉर्मूलाडीकेडी के लिए एक अनुभवजन्य रूप से मान्य हर्बल मिश्रण है, जिसे पिछले नैदानिक ​​​​परीक्षणों में लक्षणों में सुधार और रोग की प्रगति में देरी के लिए दिखाया गया है।

हालाँकि, इसके आणविक तंत्र, विशेष रूप से प्रमुख सिग्नलिंग मार्गों के साथ इसकी बातचीत, को कम समझा जाता है। साक्ष्य सुझाव देते हैंकैंप/पीकेए/सीआरईबीमार्ग गुर्दे की फाइब्रोसिस को कम कर सकता है, लेकिन संबंधित अध्ययन सीमित हैं। यह अध्ययन इस मार्ग पर ध्यान केंद्रित करता है ताकि यह स्पष्ट किया जा सके कि यह कैसे होता हैसिस्टैंच-आधारित फ़ॉर्मूलाडीकेडी में सुधार करता है।

 

सामग्री और तरीके

1. पशु

30 नर डीबी/डीबी चूहे (7 सप्ताह पुराने, एसपीएफ ग्रेड, शरीर का वजन: 37.58±0.62 ग्राम)

6 आयु-मिलान डीबी/एम चूहे (शरीर का वजन: 24.38±0.35 ग्राम)

विक्रेता: जियांग्सू हुआचुआंग ज़िन्नुओ फार्मास्युटिकल टेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड।

लाइसेंस: एससीएक्सके (एसयू) 2020-0009 और एसवाईएक्सके (जिंग) 2020-0033

नैतिकता अनुमोदन: BUCM2024041506-2090

2. हर्बल संरचना

बुशेन कैक्सुआन टोंगलुओ फॉर्मूला में शामिल हैं (ग्राम में):
Cistanche(कच्चे एस्ट्रैगलस की जगह) 45, साल्विया मिल्टियोरिज़ा 30, हिरुडो 6, सैपोशनिकोविया 20, बॉम्बेक्स बैट्रीटिकैटस 15, सिकाडा स्लो 15, पॉलीगोनैटम सिबिरिकम 10, रहमानिया ग्लूटिनोसा 20, कॉर्नस ऑफिसिनैलिस 20, रोजा लाविगाटा 20, यूरीले फेरॉक्स (तला हुआ) 30, रूबस चिंगि 30, निडियम मोनिएरी 20, अचिरांथेस बिडेंटाटा 30, डायोस्कोरिया ऑपोसिटा 20।

सभी जड़ी-बूटियों को एक लाइसेंस प्राप्त फार्मासिस्ट द्वारा प्रमाणित किया गया था और पानी के काढ़े के माध्यम से तैयार किया गया था, वैक्यूम के तहत कम किया गया था, और पाउडर बनाने के लिए स्प्रे-सूखाया गया था। अंतिम सांद्रता 1.43 g·mL⁻¹ कच्ची जड़ी-बूटियाँ थी।

3. अभिकर्मक और उपकरण

(विस्तृत सूची के लिए मूल पाठ देखें।)

 

प्रयोगात्मक परिरूप

मॉडल मूल्यांकन

अनुकूली आहार के 3 सप्ताह के बाद, यादृच्छिक रक्त ग्लूकोज 11.1 mmol·L⁻¹ से अधिक या उसके बराबर और ACR 30 mg·g⁻¹ से अधिक या उसके बराबर वाले चूहों को सफल DKD मॉडल माना गया।

समूहन और खुराक

रिक्त समूह (डीबी/एम): पानी

मॉडल समूह: पानी

कम खुराक: 7 ग्राम·किलो⁻¹·डी⁻¹

मध्यम-खुराक: 14 ग्राम·किलो⁻¹·डी⁻¹

उच्च खुराक: 28 ग्राम·किलो⁻¹·डी⁻¹

इर्बेसार्टन समूह: 20 mg·kg⁻¹·d⁻¹

अवधि: निःशुल्क भोजन और पेय के अंतर्गत 12 सप्ताह।

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नमूना संग्रह और विश्लेषण

मूत्र:24 घंटों में एकत्र किया गया, सेंट्रीफ्यूज किया गया और -20 डिग्री पर संग्रहीत किया गया

खून:कक्षीय निष्कर्षण के माध्यम से एकत्र किया गया, सेंट्रीफ्यूज किया गया और -80 डिग्री पर संग्रहीत किया गया

गुर्दे:पैथोलॉजी (फॉर्मेलिन-फिक्स्ड), प्रोटीन (तरल नाइट्रोजन), और जीन अभिव्यक्ति (जमे हुए) के लिए विभाजित

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पता लगाने के तरीके

जैव रासायनिक विश्लेषण:एससीआर, बीयूएन, एएसटी, एएलटी, टीसी, टीजी, आईएनएस, एलईपी, जीएसपी, और यूएएलबी

हिस्टोपैथोलॉजी:हे, पीएएस, मेसन स्टेनिंग

आईएचसी:पी-पीकेए और पी-सीआरईबी प्रोटीन अभिव्यक्ति

पश्चिमी ब्लॉट:पी-पीकेए, पीकेए, पी-सीआरईबी, सीआरईबी, बीसीएल-2, -एक्टिन

वास्तविक समय पीसीआर:पीकेए, सीआरईबी और बीसीएल-2 की एमआरएनए अभिव्यक्ति

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तालिका 1. प्राइमर अनुक्रम

जीन	फॉरवर्ड प्राइमर (5′–3′)	रिवर्स प्राइमर (5′–3′)	लंबाई (बीपी)
पीकेए	GCTGGAGATGGTGAAACGGGA	CGTCCTTGAGTCCTCCACATTC	671
क्रीब	AGCAGCTCATGACACATCATC	AGTCCTTCAGGAAGACTGACT	152
बीसीएल -2	GCTACCCTGTGGATGACTTCGC	CCCACCCGAACTCAAAGAAGG	147
GAPDH	AGGTCGGTGTGAACGGATTTG	GGGGTCGTTGATGGCAACA	95