मत्स्य उद्योग के अवशेषों से प्राप्त अर्क की ब्रह्मांडीय क्षमता: सार्डिन अपशिष्ट और कॉडफिश फ्रेम्स भाग 1

अमूर्त: मत्स्य उद्योग बड़ी मात्रा में अपशिष्ट उत्पन्न करता है (कुल पकड़ी गई मछली के वजन का 2-75 प्रतिशत (w/w)। अवशेषों से बायोएक्टिव यौगिकों की पुनर्प्राप्ति और सौंदर्य प्रसाधनों में उनका समावेश एक आशाजनक बाजार अवसर का प्रतिनिधित्व करता है और इस क्षेत्र के स्थायी मूल्य निर्धारण में योगदान दे सकता है। इस कार्य में, सार्डिन (सार्डिना पिलचार्डस) अपशिष्ट और कॉडफिश (गैडस मोरहुआ) फ्रेम से उच्च दबाव प्रौद्योगिकियों (सुपरक्रिटिकल सीओ 2 और सबक्रिटिकल पानी) द्वारा प्राप्त प्रोटीन युक्त अर्क को उनकी ब्रह्मांडीय क्षमता के संबंध में चित्रित किया गया था। एंटीऑक्सीडेंट, सूजन-रोधी और जीवाणुरोधी गतिविधियों का मूल्यांकन रासायनिक (ओआरएसी परख), एंजाइमैटिक (इलास्टेज और टायरोसिनेस का निषेध), रोगाणुरोधी संवेदनशीलता (क्लेबसिएला निमोनिया, स्टैफिलोकोकस ऑरियस और कटिबैक्टीरियम एक्ने) और कोशिका-आधारित (केराटिनोसाइट्स-एचएसीएटी में) परीक्षणों के माध्यम से किया गया था। . सार्डिन अर्क ने उच्चतम जीवाणुरोधी गतिविधि प्रस्तुत की, और उच्च निष्कर्षण तापमान (25 {{17 }} ◦C) का उपयोग करके प्राप्त अनुभाग और डीफ़ैटिंग चरण के बिना सबसे कम न्यूनतम निरोधात्मक एकाग्रता (एमआईसी) मान (1.17; 4.6; {{24}) प्रदर्शित किया। }.59 मिलीग्राम/एमएल क्रमशः के. निमोनिया, एस. ऑरियस और सी. एक्ने के लिए)। कम तापमान (90 ◦C) पर निकाले गए कॉडफिश के नमूने सबसे प्रभावी एंटी-इंफ्लेमेटरी एजेंट थे (0.75 मिलीग्राम/एमएल की सांद्रता ने आईएल -8 और आईएल -6 के स्तर को क्रमशः 58 प्रतिशत और 47 प्रतिशत कम कर दिया। , सकारात्मक नियंत्रण के सापेक्ष)। अर्क में थ्रेओनीन, वेलिन, ल्यूसीन, आर्जिनिन और कुल प्रोटीन सामग्री को रिपोर्ट की गई जैव सक्रियता (आर2 0.7 से अधिक या उसके बराबर) के साथ अत्यधिक सहसंबंधित करने के लिए हाइलाइट किया गया था। ये परिणाम बायोएक्टिव गतिविधियों के साथ कॉस्मीस्यूटिकल उत्पादों में मत्स्य उद्योग के कचरे से अर्क के संभावित अनुप्रयोग का समर्थन करते हैं।

सिस्टैंच का ग्लाइकोसाइड हृदय और यकृत के ऊतकों में एसओडी की गतिविधि को भी बढ़ा सकता है, और प्रत्येक ऊतक में लिपोफसिन और एमडीए की सामग्री को काफी कम कर सकता है, विभिन्न प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन रेडिकल्स (ओएच-, एच₂ओ₂, आदि) को प्रभावी ढंग से हटा सकता है और डीएनए क्षति से बचा सकता है। ओएच-रेडिकल्स द्वारा। सिस्टैंच फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स में मुक्त कणों की एक मजबूत सफाई क्षमता होती है, विटामिन सी की तुलना में उच्च कम करने की क्षमता होती है, शुक्राणु निलंबन में एसओडी की गतिविधि में सुधार होता है, एमडीए की सामग्री कम होती है, और शुक्राणु झिल्ली समारोह पर एक निश्चित सुरक्षात्मक प्रभाव पड़ता है। सिस्टैंच पॉलीसेकेराइड डी-गैलेक्टोज के कारण प्रयोगात्मक रूप से वृद्ध चूहों के एरिथ्रोसाइट्स और फेफड़ों के ऊतकों में एसओडी और जीएसएच-पीएक्स की गतिविधि को बढ़ा सकते हैं, साथ ही फेफड़ों और प्लाज्मा में एमडीए और कोलेजन की सामग्री को कम कर सकते हैं और इलास्टिन की सामग्री को बढ़ा सकते हैं। डीपीपीएच पर एक अच्छा सफाई प्रभाव, वृद्ध चूहों में हाइपोक्सिया का समय बढ़ाना, सीरम में एसओडी की गतिविधि में सुधार करना, और प्रयोगात्मक रूप से वृद्ध चूहों में फेफड़ों के शारीरिक अध: पतन में देरी करना, सेलुलर रूपात्मक अध: पतन के साथ, प्रयोगों से पता चला है कि सिस्टैंच में अच्छी एंटीऑक्सीडेंट क्षमता है और त्वचा की उम्र बढ़ने वाली बीमारियों को रोकने और उनका इलाज करने के लिए एक दवा बनने की क्षमता रखती है। साथ ही, सिस्टैंच में इचिनाकोसाइड में डीपीपीएच मुक्त कणों को साफ़ करने की एक महत्वपूर्ण क्षमता है और प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों को साफ़ करने और मुक्त कट्टरपंथी-प्रेरित कोलेजन गिरावट को रोकने की क्षमता है, और थाइमिन मुक्त कट्टरपंथी आयन क्षति पर भी अच्छा मरम्मत प्रभाव पड़ता है।

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कीवर्ड: मछली अपशिष्ट धाराओं का मूल्यांकन; प्रतिउपचारक गतिविधि; विरोधी भड़काऊ गतिविधि; सूक्ष्मजीव - रोधी गतिविधि; आयुर्वृद्धि विरोधक; एंटी-हाइपरपिग्मेंटेशन; सौंदर्य प्रसाधन

1 परिचय

नवाचार की निरंतर खोज के साथ, विशेष रूप से सक्रिय अवयवों के लिए, कॉस्मेटिक उद्योग बढ़ रहा है और प्राकृतिक यौगिकों की ओर आगे बढ़ते हुए पेट्रोलियम-व्युत्पन्न घटकों को प्रतिस्थापित करने का इरादा प्रदर्शित किया है [1]। प्राकृतिक सक्रिय अवयवों के एंटीऑक्सीडेंट गुण ऑक्सीडेटिव तनाव और उम्र बढ़ने के कारण होने वाली कई त्वचा समस्याओं की रोकथाम में मदद कर सकते हैं [2,3]। त्वचा की उम्र बढ़ना आंतरिक (जैसे सूजन या टेलोमेयर छोटा होना) और बाहरी (पर्यावरणीय) दोनों कारकों से प्रेरित हो सकता है [4]। त्वचा की उम्र बढ़ने से परिपक्व कोलेजन की हानि होती है और बाह्य कोशिकीय मैट्रिक्स (ईसीएम) में परिवर्तन होता है जो बाधा कार्य से समझौता करता है, जिसके परिणामस्वरूप शुष्क उपस्थिति और बाहरी आक्रमणकारियों के प्रति संवेदनशीलता बढ़ जाती है, जिससे त्वचा विकारों का खतरा बढ़ जाता है [5]। इस प्रक्रिया को कई एंजाइमों द्वारा त्वरित किया जा सकता है, जैसे कि इलास्टेसिस, मैट्रिक्स मेटालोप्रोटीनिस (एमएमपी), और हायल्यूरोनिडेस जो ईसीएम गिरावट को प्रेरित कर सकते हैं [6], या यहां तक ​​कि सेसिव रिएक्टिव ऑक्सीजन प्रजातियों (आरओएस) के संचय से भी जो सामान्य कोशिका कार्य से समझौता कर सकते हैं। [7]. पर्यावरणीय कारक, जैसे कि यूवी विकिरण के संपर्क में आने से, उच्च मात्रा में आरओएस उत्पन्न होता है जो आंतरिक उम्र बढ़ने के समान आणविक और सेलुलर प्रतिक्रियाओं को प्रेरित करता है, लेकिन बढ़े हुए प्रभावों के साथ। महत्वपूर्ण रूप से, आरओएस त्वचा की उम्र बढ़ने या त्वचा रंजकता प्रक्रियाओं [8,9] से संबंधित एंजाइमों की गतिविधि को तेज कर सकता है, और इस प्रकार एंटीऑक्सिडेंट की उपस्थिति कॉस्मेटिक क्षेत्र में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाती है।

2018 में, एफएओ द्वारा विश्व मछली की खपत 20.5 किलोग्राम प्रति पीटा [10] होने का अनुमान लगाया गया था, जिससे बड़ी मात्रा में उप-उत्पाद, ज्यादातर त्वचा और हड्डियां निकलती हैं। उत्पन्न अवशेष कुल पकड़ी गई मछली के वजन का 20-75 प्रतिशत (w/w) है, जो संभावित रूप से पर्यावरणीय समस्याओं का कारण बन सकता है [11,12]। हालाँकि, इन अवशेषों में अभी भी महत्वपूर्ण मात्रा में लिपिड, प्रोटीन और खनिज होते हैं और इन्हें पर्याप्त रूप से मान्य किया जाना चाहिए। हाल के वर्षों में, मछली उद्योग द्वारा उत्पन्न कचरे के अर्क ने एंटीहाइपरटेंसिव, एंटीऑक्सिडेंट, रोगाणुरोधी, न्यूरोप्रोटेक्टिव, एंटीहाइपरग्लाइसेमिक, एंटी-एजिंग और एंटी-इंफ्लेमेटरी जैसे सक्रिय गुण दिखाए हैं [13-19]। अटलांटिक कॉडफिश (गैडस रिया) और सार्डिन (सार्डिना पिलचार्डस) पुर्तगाल में सबसे अधिक खाई जाने वाली मछलियों में से हैं और इसके अवशेषों से प्राप्त ट्रैक्ट में एंटीऑक्सिडेंट, एंटीप्रोलिफेरेटिव या एंटी-इंफ्लेमेटरी गतिविधियों जैसे आशाजनक न्यूट्रास्यूटिकल क्षमता दिखाई गई है [11,20-22]। हालाँकि, चूंकि मछली उद्योग के कचरे का दोहन और मूल्य निर्धारण अभी भी प्रारंभिक चरण में है, इसलिए उद्योग के लिए इस कचरे को कॉस्मेटिक सामग्री सहित उच्च मूल्य वाले बाजार जैव उत्पादों में परिवर्तित करने के अवसर तलाशने की काफी गुंजाइश है।

पिछले काम में, हमने आशाजनक स्वास्थ्य लाभ के साथ सार्डिन अपशिष्ट और कॉडफिश फ्रेम से बायोएक्टिव अंशों को अलग करने के लिए उच्च दबाव प्रौद्योगिकियों (सुपरक्रिटिकल सीओ 2 और सबक्रिटिकल पानी) के उपयोग का पता लगाया था [11,22]। सार्डिन अपशिष्टों के लिए, हमने दिखाया कि सुपरक्रिटिकल कार्बन (एससीसीओ2) (लिपिड अंश को हटाने के लिए) के साथ पहला कदम और उसके बाद सबक्रिटिकल पानी (एसडब्ल्यू) के साथ निष्कर्षण प्रक्रिया को लागू करके उच्च एंटीऑक्सीडेंट क्षमता और एंटीप्रोलिफेरेटिव प्रभाव के साथ प्रोटीन हाइड्रोलिसेट्स प्राप्त करना संभव था। कोलोरेक्टल कैंसर कोशिकाएं [22]। सबक्रिटिकल जल निष्कर्षण/हाइड्रोलिसिस हमने कॉडफिश फ्रेम से प्रोटीन, पेप्टाइड्स और अमीनो एसिड समृद्ध अर्क प्राप्त करने के लिए भी आवेदन किया और हमने दिखाया कि कम प्रसंस्करण तापमान (90 डिग्री सेल्सियस) मानव आंतों के उपकला कोशिका में सूजन-रोधी क्षमता वाले यौगिकों के निष्कर्षण का पक्ष लेते हैं। मॉडल [11]. कॉडफिश फ्रेम अर्क में मौजूद अधिकांश प्रोटीन कोलेजन और कोलेजन के टुकड़े हैं। अन्य यौगिकों में थोड़ी मात्रा में लिपिड, राख और कुछ शर्करा शामिल हैं। सार्डिन अर्क पेप्टाइड्स और अमीनो एसिड से भरपूर थे, और लिपिड, राख और शर्करा भी मौजूद थे। चूंकि मछली से प्राप्त प्रोटीन और पेप्टाइड्स कॉस्मेटिक उद्योगों के लिए एक महत्वपूर्ण संसाधन बन सकते हैं, इसलिए वर्तमान अध्ययन का उद्देश्य मछली-प्रसंस्करण अपशिष्टों और उप-उत्पादों से प्राप्त इन अर्क की सक्रिय क्षमता का मूल्यांकन करना है, जो उनकी कॉस्मिक्यूटिकल क्षमता के मूल्यांकन के कारण होता है [23] . इस प्रयोजन के लिए, निकाले गए नमूनों के एंटीऑक्सीडेंट, एंटीएजिंग, एंटी-हाइपरपिग्मेंटेशन, एंटी-इंफ्लेमेटरी और रोगाणुरोधी प्रभावों का पता लगाने के लिए रासायनिक, एंजाइमैटिक और सेल-आधारित परीक्षणों की एक श्रृंखला लागू की गई थी। कॉस्मीस्यूटिकल क्षमता वाले मुख्य बायोएक्टिव घटकों की पहचान करने के लिए सहसंबंध अध्ययन भी किए गए।

2। सामग्री और विधि

2.1. अभिकर्मकों

3,4-डायहाइड्रॉक्सी-एल-फेनिलएलनिन (एल-डीओपीए), मशरूम टायरोसिनेज, पोर्सिन अग्न्याशय इलास्टेज (पीपीई) प्रकार III, एन-स्यूसिनिल-अला-अला-अला-पी-नाइट्रोएनिलाइड (एएएपीवीएन), ट्रिस ({ {11}एमिनो- 2-हाइड्रॉक्सीमेथाइल-प्रोपेन-1,{15}}डायोल), 2,{17}}एज़ोबिस (2-मिथाइलप्रोपियोनामिडाइन)डायहाइड्रोक्लोराइड (एएपीएच), और 20 ,70 -डाइक्लोरोफ्लोरेसिन डायसेटेट (डीसीएफएच-डीए) सिग्मा-एल्ड्रिच (सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) से खरीदे गए थे। कैल्शियम-समायोजित म्यूएलर हिंटन शोरबा (CAMHB) बीडी (स्पार्क्स, एमडी, यूएसए) से खरीदा गया था। ब्रेन-हार्ट इन्फ्यूजन (बीएचआई) एवंतोर (रेडनर, पीए, यूएसए) से खरीदा गया था। AnaeroGen™ कॉम्पैक्ट पाउच ऑक्सॉइड (हैम्पशायर, यूके) से खरीदे गए थे। प्रेस्टोब्लू™, डुल्बेको का संशोधित ईगल मीडियम (डीएमईएम), हीट-इनएक्टिवेटेड फेटल बोवाइन सीरम (एफबीएस), और पेनिसिलिन-स्ट्रेप्टोमाइसिन इनविट्रोजन (सैन डिएगो, सीए, यूएसए) से प्राप्त किए गए थे। मानव अमर गैर-ट्यूमरजेनिक केराटिनोसाइट सेल लाइन HaCaT को सेल लाइन सर्विस (एपेलहेम, जर्मनी) से प्राप्त किया गया था। ह्यूमन आईएल-8 और आईएल-6 मिनी टीएमबी एलिसा डेवलपमेंट किट पेप्रोटेक (लंदन, यूके) से प्राप्त किए गए थे। वर्तमान अध्ययन में उपयोग किए गए अन्य सभी अभिकर्मक और सॉल्वैंट्स विश्लेषणात्मक ग्रेड के थे और उपलब्ध आपूर्तिकर्ताओं से खरीदे गए थे।

2.2. नमूने

इस कार्य में उपयोग किए गए अर्क हमारे पिछले अध्ययनों में विकसित किए गए थे जो प्रक्रिया अनुकूलन पर केंद्रित थे [11,22]। संक्षेप में, कॉडफिश फ्रेम की आपूर्ति पास्कोल और फिल्होस एसए (गफन्हा दा नाज़ारे, पुर्तगाल) द्वारा की गई थी और इसमें मछली की रीढ़ की हड्डी और चिपकी हुई मांसपेशियां शामिल थीं। सिर, रीढ़ और आंत से बने सार्डिन अपशिष्ट की आपूर्ति कंसर्वस ए पोवेरा एसए (पोवोआ डी वार्ज़िम, पुर्तगाल) द्वारा की गई थी। प्रयुक्त कच्चे माल की अनुमानित संरचना हमारे पहले के कार्यों [11,22] में प्रस्तुत की गई है। प्रोटीन (47 wt प्रतिशत) और राख (39 wt प्रतिशत) कॉडफिश फ्रेम के प्रमुख घटक थे, जिनमें कम मात्रा में लिपिड और कार्बोहाइड्रेट (क्रमशः 2 wt प्रतिशत और {{7%).3 wt प्रतिशत) थे। कॉडफ़िश फ्रेम में कोलेजन प्रमुख प्रोटीन पाया जाता है, और इस मामले में, यह सीए के लिए जिम्मेदार है। मूल अपशिष्ट की कुल प्रोटीन सामग्री का 65 प्रतिशत। इसके विपरीत, सार्डिन एक तैलीय मछली है, इसलिए इसके अपशिष्ट में कॉडफिश फ्रेम की तुलना में लिपिड की मात्रा अधिक होती है। सार्डिन कचरे में लिपिड सामग्री 26 wt प्रतिशत और प्रोटीन सामग्री 52 wt प्रतिशत दिखाई गई, बाकी राख (17 wt प्रतिशत) और कार्बोहाइड्रेट (3 wt प्रतिशत) है।

इस काम के लिए चुने गए कॉडफिश फ्रेम (सीएफ1, सीएफ2, सीएफ3, और सीएफ4) और सार्डिन कचरे (एस1, एस2, और एस3) के अर्क को लैब-स्केल उपकरण में उच्च दबाव तकनीक द्वारा प्राप्त किया गया था जैसा कि पहले बताया गया है [11,22 ,24] तालिका 1 में संक्षेपित शर्तों का उपयोग करते हुए। संक्षेप में, 60 ग्राम ग्राउंड कॉडफिश फ्रेम या सार्डिन अपशिष्ट (वसा रहित या गैर-वसा रहित) को एक उच्च दबाव रिएक्टर में लोड किया गया था जिसे एक ओवन के अंदर रखा गया था। पानी पंप को वांछित प्रवाह दर (लगभग 10 एमएल/मिनट) पर चालू किया गया और दबाव 100 बार पर सेट किया गया। जैसे ही दबाव उस मान तक पहुंच गया, विद्युत ओवन चालू कर दिया गया और प्रयोग शुरू हो गया। अलग-अलग अर्क को अलग-अलग तापमान (90-250 डिग्री सेल्सियस) पर 30 मिनट तक एकत्र किया गया। SW निष्कर्षण से पहले ScCO2 द्वारा सार्डिन अपशिष्ट की डीफ़ैटिंग प्रक्रिया के बाद S1 और S3 अर्क प्राप्त किए गए थे। सबक्रिटिकल जल निष्कर्षण प्रयोगों को दोहराया गया। प्रत्येक निकाले गए नमूने के लिए, 25 एमएल को तीन प्रतियों में लिया गया, लियोफिलाइज़ किया गया, और संबंधित निष्कर्षण उपज की गणना करने के लिए तौला गया। विश्लेषणात्मक डेटा-प्रोटीन सामग्री-तीन प्रतियों के माध्य ± मानक विचलन (एसडी) के रूप में व्यक्त की जाती है। प्रोटीन सामग्री, अमीनो एसिड प्रोफाइल, प्रमुख खनिज यौगिकों, या विषाक्त और भारी धातुओं के संदर्भ में इन अर्क के लक्षण वर्णन के बारे में जानकारी हमारे पिछले कार्यों [11,22] में वर्णित है।

सीएफ1, सीएफ2, सीएफ3, सीएफ4 और एस2 के स्टॉक समाधान मिल्ली-क्यू एच2ओ में 100 मिलीग्राम/एमएल की सांद्रता पर तैयार किए गए थे। अन्य नमूने, अर्थात् एस1 और एस3, पानी में उनकी कम घुलनशीलता के कारण डीएमएसओ (क्रमशः 300 और 550 मिलीग्राम/एमएल) में घुल गए थे। नमूनों को फ्रीज कर दिया गया और अगले उपयोग तक -20 ◦C पर रखा गया। सेलुलर परख के लिए, नमूनों को पहले एक आटोक्लेव (टुटनाउर 3870 एल, ब्रेडा, नीदरलैंड) में गर्मी (121 ◦C, 15 मिनट) द्वारा निष्फल किया गया था।

2.3. ऑक्सीजन रेडिकल अवशोषण क्षमता (ओआरएसी) परख

हुआंग एट अल द्वारा विकसित विधि का पालन करते हुए, पेरोक्सिल रेडिकल्स (आरओओ•) के प्रति नमूनों की एंटीऑक्सीडेंट क्षमता का मूल्यांकन करने के लिए ओआरएसी परख की गई थी। [25], जैसा कि पहले बताया गया था, कुछ समायोजनों के साथ [26]। संक्षेप में, एक काले रंग के 96-वेल माइक्रोप्लेट में, 150 µL डिसोडियम फ्लोरेसिन (0.3 µM) को 25 µL नमूना तनुकरण में जोड़ा गया और 37 ◦C पर 10 मिनट के लिए इनक्यूबेट किया गया। इसके बाद, प्रतिक्रिया 25 µL 2,20 - एज़ोबिस (2-एमिडिनोप्रोपेन) डाइहाइड्रोक्लोराइड (AAPH, 153 mM), और प्रतिदीप्ति (Ex/Em 485 ± 20/528 ± 20) को जोड़कर शुरू की गई। एनएम) को FLx800 प्रतिदीप्ति माइक्रोप्लेट रीडर (FL800 बायो-टेक इंस्ट्रूमेंट्स, विनोस्की, वीटी, यूएसए) में 37 ◦C पर 40 मिनट के लिए मापा गया था। 5, 10, 20, 30, और 40 µM (6-हाइड्रॉक्सी-2,5,7,8-टेट्रामिथाइलक्रोमैन{{33%) कार्बोक्जिलिक एसिड (ट्रोलॉक्स) का उपयोग करके एक मानक वक्र तैयार किया गया था )). सभी समाधान फॉस्फेट-बफ़र्ड सलाइन (पीबीएस), 75 एमएम, पीएच 7.4 में तैयार किए गए थे। परिणाम प्रति ग्राम अर्क (µ mol TEAC/g अर्क) ट्रॉलोक्स समकक्ष एंटीऑक्सीडेंट क्षमता के माइक्रोमोल्स के रूप में व्यक्त किए जाते हैं।

2.4. एंजाइमैटिक परख

2.4.1. इलास्टेज निषेध परख

यह परख विटेनॉयर एट अल के काम पर आधारित थी। [27] जैसा कि पहले बताया गया है कुछ संशोधनों के साथ [6]। इलास्टेज निरोधात्मक गतिविधि 41 पर पी-नाइट्रोएनिलिन की रिहाई की निगरानी करके, एंजाइम-सब्सट्रेट के रूप में पोर्सिन अग्न्याशय इलास्टेज (पीपीई) और एन-स्यूसिनिल-अला-अला-अला-पी-नाइट्रोएनिलाइड (एएएपीवीएन) का उपयोग करके एक स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक विधि द्वारा निर्धारित की जाती है। {19}} एनएम। पीपीई को 1 {{22 } ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ 32 ‍ ‍ एमएम ट्रिस ({{12 ‍एमिनो ‍ ‍अमीनो ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ कि ‍ 1 ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ कि ‍ पीपीई 1 ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍च ‍ ‍ ‍ य ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍कि ‍- पीपीई 1-{22 ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍ ‍च ‍ ‍ ‍ ‍कि ‍=8.0) 1 मिलीग्राम/एमएल की सांद्रता तक और 20 ◦C पर एलिकोट्स में संग्रहित किया जाता है। परख के दिन, एक एलिकोट लिया गया और बफर में 0.03 यू/एमएल की सांद्रता तक पतला किया गया, 10 μL को ट्रिस-एचसीएल बफर के 100 μL और 30 μL के साथ माइक्रोटिटर प्लेटों के कुओं में लोड किया गया। प्रत्येक नमूने का. 25 ◦C पर 20 मिनट के प्री-इन्क्यूबेशन के बाद, सब्सट्रेट AAAPVN (0.55 mM) के 40 µL को जोड़कर प्रतिक्रिया शुरू की गई थी। बायोटेक इंस्ट्रूमेंट्स ईपीओसीएच 2 स्पेक्ट्रोफोटोमीटर माइक्रोप्लेट रीडर में एएएपीवीएन जोड़ने के बाद 20 मिनट तक अवशोषण मापा गया। गणना समीकरण (1) में वर्णित अनुसार की गई थी, जहां ए नियंत्रण और नमूना क्रमशः नमूने की अनुपस्थिति या उपस्थिति में 410 एनएम पर अवशोषण का प्रतिनिधित्व करते हैं। चूँकि DMSO का उपयोग नमूने S1 और S3 को घोलने के लिए किया गया था, इस विलायक का भी परीक्षण किया गया और इन नमूनों के लिए नियंत्रण के रूप में उपयोग किया गया। इलास्टेज को रोकने के लिए अर्क की क्षमता का मूल्यांकन खुराक पर निर्भर संबंधों को निर्धारित करने और आधे-अधिकतम निरोधात्मक सांद्रता (IC50) मूल्यों को स्थापित करने के लिए बढ़ती सांद्रता के साथ किया गया था, जो 50 प्रतिशत की सीमा तक एंजाइमेटिक गतिविधि निषेध में प्रत्येक नमूने की क्षमता को दर्शाता है।

सभी परिणाम कम से कम तीन स्वतंत्र प्रयोगों से प्राप्त 95 प्रतिशत विश्वास अंतराल की निचली और ऊपरी सीमा के साथ IC50 माध्य मानों के रूप में व्यक्त किए गए हैं।

2.4.2. टायरोसिनेस निषेध परख

अर्क की टायरोसिनेस निरोधात्मक क्षमता का सब्सट्रेट के रूप में मशरूम टायरोसिनेज और एल-डीओपीए का उपयोग करके स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक रूप से मूल्यांकन किया गया था [28]। टायरोसिनेस एल-डीओपीए को डोपाक्विनोन में परिवर्तित करता है, जो क्रमिक रूप से डोपाक्रोम बनाने के लिए चक्रित होगा। डोपाक्रोम गठन को 475 एनएम पर अवशोषण के माप द्वारा देखा जा सकता है। सब्सट्रेट को नमूना तनुकरण की उपस्थिति में एंजाइम में 30 यू/एमएल टायरोसिनेज और 2.5 एमएम एल-डीओपीए की अंतिम सांद्रता में जोड़ा गया था। चूँकि DMSO का उपयोग नमूने S1 और S3 को घोलने के लिए किया गया था, इस विलायक का भी परीक्षण किया गया और इन नमूनों के लिए नियंत्रण के रूप में उपयोग किया गया। 30 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन के बाद, बायोटेक इंस्ट्रूमेंट्स ईपीओसीएच 2 माइक्रोप्लेट स्पेक्ट्रोफोटोमीटर पर अवशोषण को 475 एनएम पर मापा गया था। सभी अभिकर्मकों को सोडियम फॉस्फेट बफर (एसपीबी; 0.1 एम, पीएच 6.8) में तैयार किया गया था, जो सोडियम फॉस्फेट डिबासिक डाइहाइड्रेट और सोडियम फॉस्फेट मोनोबैसिक मोनोहाइड्रेट को मिलाकर तैयार किया गया था, और गणना समीकरण (1) में वर्णित अनुसार की गई थी। सभी परिणाम कम से कम तीन स्वतंत्र प्रयोगों से प्राप्त 95 प्रतिशत विश्वास अंतराल की निचली और ऊपरी सीमा के साथ IC50 माध्य मानों के रूप में व्यक्त किए गए हैं।

2.5. रोगाणुरोधी संवेदनशीलता परीक्षण

जीवाणुरोधी गतिविधि परख के लिए चुने गए लक्ष्य सूक्ष्मजीव ग्राम-नकारात्मक बैक्टीरिया क्लेबसिएला निमोनिया सीईसीटी 8453 और ग्राम-पॉजिटिव बैक्टीरिया स्टैफिलोकोकस ऑरियस एटीसीसी 6538 और कटिबैक्टीरियम एक्ने एटीसीसी 6919टी थे। के. निमोनिया सीईसीटी 8453 और एस. ऑरियस एटीसीसी 6538 के लिए, परख सीएलएसआई एम 07-ए10 दिशानिर्देशों की शोरबा माइक्रोडिल्यूशन विधि के अनुसार की गई थी जैसा कि पहले रोड्रिग्स एट अल द्वारा वर्णित किया गया था। [29]. संक्षेप में, एक्स्ट्रेक्ट स्टॉक सॉल्यूशंस को एक राउंड बॉटम माइक्रोटिटर वेल प्लेट में वितरित किया गया और कैल्शियम-समायोजित म्यूएलर हिंटन शोरबा (सीएएमएचबी; बीडी, स्पार्क्स, एमडी, यूएसए) में क्रमिक रूप से पतला किया गया। समाधानों की सांद्रता सीमा. खारे घोल में एक समरूप निलंबन प्राप्त करने के लिए विकास विधि का उपयोग करके इनोकुलम तैयार किया गया था। समायोजित इनोकुलम को CAMHB में अतिरिक्त रूप से पतला किया गया था ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि टीकाकरण के बाद, प्रत्येक कुएं में लगभग 5 × 104 CFU हो। प्लेटों को 16 से 20 घंटे के लिए 37 ◦C पर एरोबिक परिस्थितियों में इनक्यूबेट किया गया था। सी. एक्ने के लिए, पहले वर्णित अनुसार CAMHB के बजाय मस्तिष्क-हृदय जलसेक (BHI) (एवंतोर, रेडनर, PA, यूएसए) शोरबा का उपयोग करके और 37 ◦ पर 70-74 घंटे के लिए माइक्रोटिटर प्लेटों को इनक्यूबेट करके परीक्षण किया गया था। सी अवायवीय जार में जिसमें वायुमंडल निर्माण प्रणाली एनाएरोजेन™ कॉम्पैक्ट (ऑक्सॉइड, हैम्पशायर, यूके) शामिल है।

विश्लेषण किए गए प्रत्येक स्टॉक समाधान के लिए, एक सकारात्मक नियंत्रण (CAMHB या BHI और पतला इनोकुलम), एक मध्यम बाँझपन नियंत्रण (uninoculated CAMHB या BHI), और एक अर्क बाँझपन नियंत्रण (CAMHB या BHI में uninoculated 2- गुना अर्क स्टॉक समाधान) तदनुसार प्रदर्शन किया गया। न्यूनतम निरोधात्मक सांद्रता (एमआईसी) मान एक नमूने की सबसे कम सांद्रता थी जो ऊष्मायन के बाद स्पष्ट रूप से माइक्रोबियल विकास को बाधित करती थी। आवश्यकता पड़ने पर, निर्माता के दिशानिर्देशों का पालन करते हुए सेल व्यवहार्यता अभिकर्मक प्रेस्टोब्लू™ (इनविट्रोजन, सैन डिएगो, सीए यूएसए) का उपयोग करके एमआईसी मूल्यों की पुष्टि की गई। एक अतिरिक्त एमआईसी मान, जिसे एमआईसी* नामित किया गया था, भी स्थापित किया गया था और इसे एक नमूने की सबसे कम सांद्रता के रूप में परिभाषित किया गया था, जिस पर सकारात्मक नियंत्रण की तुलना में बैक्टीरिया की वृद्धि दृष्टिगत और भिन्न रूप से प्रभावित हुई थी। न्यूनतम जीवाणुनाशक सांद्रता (एमबीसी) मूल्यों को एक नमूने की सबसे कम सांद्रता के रूप में रिपोर्ट किया गया, जिससे प्रारंभिक इनोकुलम की तुलना में और समान ऊष्मायन समय के लिए व्यवहार्य जीवाणुओं की संख्या में कम से कम 99.9 प्रतिशत की कमी आई। परिणाम तीन जैविक प्रतिकृति के बाद प्राप्त मूल्यों के माध्यिका के रूप में व्यक्त किए गए थे। चूँकि DMSO का उपयोग नमूनों S1 और S3 को भंग करने के लिए किया गया था, इसलिए इस विलायक का परीक्षण यह सुनिश्चित करने के लिए भी किया गया था कि उपयोग की गई अंतिम सांद्रता लक्ष्य सूक्ष्मजीव के साथ हस्तक्षेप नहीं करती है, इसलिए परख।

2.6. कोशिका-आधारित परीक्षण

2.6.1. कोश पालन

मानव केराटिनोसाइट सेल लाइन HaCaT (CLS, जर्मनी) को 10 प्रतिशत (v/v) भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS) और 1 प्रतिशत (v/v) पेनिसिलिन-स्ट्रेप्टोमाइसिन के साथ पूरक मानक डुलबेको के संशोधित ईगल मीडियम (DMEM) में संवर्धित किया गया था। कोशिकाओं को नियमित रूप से 75 सेमी2 कल्चर फ्लास्क में मोनोलेयर्स के रूप में बनाए रखा गया और आर्द्र वातावरण में 5 प्रतिशत CO2 के साथ 37 ◦C पर इनक्यूबेट किया गया।

2.6.2. इन विट्रो साइटोटॉक्सिसिटी

साइटोटोक्सिसिटी परख पिछले कार्यों के अनुसार की गई थी [6]। संक्षेप में, HaCaT कोशिकाओं को 96 वेल प्लेटों में 1.4 × 105 कोशिकाओं/सेमी2 के घनत्व पर रखा गया था। 3 दिनों के बाद, कोशिकाओं को प्रत्येक नमूने की विभिन्न सांद्रता (Cf1; Cf2; Cf3; Cf4; S2—50, 25, 12.5, 6.25, 3.13, 1.56, {{30}) के साथ ऊष्मायन किया गया। }.78, 0.39; एस1—3, 1.5, 0.75, 0.38, {{40}}.19, {{51 }}.09, 0.05, 0.02; एस3—5.5, 2.75, 1.38, 0.69, 0.34, 0.17, 0.09, 0.04 मिलीग्राम/एमएल) कल्चर माध्यम में पतला (डीएमईएम माध्यम जिसमें 0.5 प्रतिशत एफबीएस होता है)। केवल 0.5 प्रतिशत (वी/वी) एफबीएस के साथ पूरक संस्कृति माध्यम के साथ ऊष्मायन की गई कोशिकाओं वाले कुओं को नियंत्रण के रूप में उपयोग किया गया था। विलायक विषाक्तता को बाहर करने के लिए एक संस्कृति माध्यम में 50 प्रतिशत पानी या 1 प्रतिशत डीएमएसओ के साथ विलायक नियंत्रण भी किया गया था। ऊष्मायन के 24 घंटे के बाद, निर्माता के निर्देशों के अनुसार, 37 ◦C, 5 प्रतिशत CO2 पर 2 घंटे के लिए PrestoBlue® (कल्चर माध्यम में 5 प्रतिशत v/v) का उपयोग करके सेल व्यवहार्यता का मूल्यांकन किया गया था। इसके बाद, प्रत्येक कुएं की प्रतिदीप्ति को FLx800 प्रतिदीप्ति माइक्रोप्लेट रीडर (बायोटेक इंस्ट्रूमेंट्स, विनोस्की, वीटी, यूएसए) में मापा गया (उदा./ईएम. 560 ± 20/590 ± 20 एनएम)। सेल व्यवहार्यता को नियंत्रण के सापेक्ष व्यवहार्य कोशिकाओं के प्रतिशत के रूप में व्यक्त किया गया था। तीन स्वतंत्र प्रयोग तीन प्रतियों में किए गए।

2.6.3. सेलुलर एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि

सेलुलर एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि का मूल्यांकन कुछ संशोधनों के साथ पहले वर्णित तरीकों [6,30] के बाद किया गया था। संक्षेप में, HaCaT कोशिकाओं को 96 वेल प्लेटों में 1.4 × 1 0 5 कोशिकाओं / सेमी 2 के घनत्व पर रखा गया था और इंट्रासेल्युलर आरओएस के गठन की निगरानी 2 {{16 }}, 70 - डाइक्लोरोफ्लोरेसिन डायसेटेट का उपयोग करके की गई थी। DCFH-DA) एक फ्लोरोसेंट जांच के रूप में। बीजारोपण के 72 घंटे बाद, कोशिकाओं को पीबीएस से धोया गया और नमूनों की गैर विषैले सांद्रता (0.1875 मिलीग्राम/एमएल; 0.375 मिलीग्राम/एमएल; 0.75 मिलीग्राम/एमएल) प्लस 25 µM डीसीएफएच-डीए के साथ पीबीएस में 1 घंटे के लिए डाला गया। इसके बाद, कोशिकाओं को फिर से पीबीएस से धोया गया और 1 घंटे के लिए स्ट्रेस इंड्यूसर (पीबीएस में 600 माइक्रोएम एएपीएच) के साथ इनक्यूबेट किया गया। उसके बाद, प्रतिदीप्ति को FL800 माइक्रोप्लेट प्रतिदीप्ति रीडर (बायो-टेक इंस्ट्रूमेंट्स, विनोस्की, वीटी, यूएसए) (एक्स/ईएम 485 ± 20/528 ± 20 एनएम) में मापा गया था। परिणाम अनुपचारित नियंत्रण (DCFH-DA और AAPH से उपचारित कोशिकाएं) के सापेक्ष ROS प्रतिशत के रूप में व्यक्त किए जाते हैं। तीन स्वतंत्र प्रयोग तीन प्रतियों में किए गए।

2.6.4. आईएल-6 और आईएल-8 स्राव का मूल्यांकन

प्रयोग कई संशोधनों के साथ पहले वर्णित [31] के अनुसार किए गए थे। संक्षेप में, HaCaT कोशिकाओं को 12 वेल प्लेटों में 1 × 1{8}}5 कोशिकाओं/सेमी2 के घनत्व पर रखा गया था। 3 दिनों के बाद, कोशिकाओं को एस्चेरिचिया कोली से 15 µg/mL लिपोपॉलीसेकेराइड (LPS) से उत्तेजित किया गया और प्रत्येक अर्क के तीन अलग-अलग सांद्रता के साथ सह-ऊष्मायन किया गया ({{10}}.1875 mg/mL; {{ 14}}.375 मिलीग्राम/एमएल; 0.75 मिलीग्राम/एमएल) संस्कृति माध्यम में पतला (डीएमईएम माध्यम जिसमें 0.5 प्रतिशत एफबीएस होता है)। केवल एलपीएस के साथ इनक्यूबेट की गई कोशिकाओं और केवल कल्चर मीडिया के साथ इनक्यूबेट की गई कोशिकाओं का उपयोग क्रमशः सकारात्मक और नकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया गया था। 24 घंटे के बाद, सतह पर तैरनेवाला एकत्र किया गया, 2000 ग्राम पर 10 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज किया गया, और आगे के विश्लेषण तक -80 ◦C पर संग्रहीत किया गया। निर्माता के निर्देशों के अनुसार, व्यावसायिक रूप से उपलब्ध किट (पेप्रोटेक; लंदन, यूके) का उपयोग करके एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख (एलिसा) द्वारा आईएल -6 और आईएल -8 स्तरों का मूल्यांकन किया गया था, जिसमें अवशोषण 450 एनएम मापा गया था। माइक्रोप्लेट स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (ईपीओसीएच 2, बायोटेक इंस्ट्रूमेंट्स, विनोस्की, वीटी, यूएसए) में 620 एनएम पर तरंग दैर्ध्य सुधार सेट के साथ। परिणाम सकारात्मक नियंत्रण (एलपीएस से प्रेरित कोशिकाएं) के सापेक्ष आईएल -6 या आईएल -8 प्रतिशत के रूप में व्यक्त किए जाते हैं। तीन स्वतंत्र प्रयोग तीन प्रतियों में किए गए।

2.7. सांख्यिकीय विश्लेषण

ओआरएसी और सेल-आधारित परख परिणामों को कम से कम तीन स्वतंत्र प्रयोगों से प्राप्त औसत मान ± एसडी के रूप में व्यक्त किया जाता है। एंजाइमैटिक और साइटोटोक्सिसिटी परख के लिए, IC50 मान ग्राफपैड प्रिज्म 8.4.3 का उपयोग करके लॉग10 प्लॉट के माध्यम से खुराक-प्रतिक्रिया घटता से निर्धारित किए गए थे। सॉफ्टवेयर (ग्राफपैड सॉफ्टवेयर, इंक., ला जोला, सीए, यूएसए)। परिणाम 95 प्रतिशत विश्वास अंतराल के साथ IC50 के रूप में प्रस्तुत किए जाते हैं। परिणामों का सांख्यिकीय विश्लेषण पूर्व सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके किया गया था। जब सजातीय विचरण और डेटा के सामान्य वितरण को सत्यापित किया गया, तो परिणामों का विश्लेषण विचरण (एनोवा) के एक-तरफ़ा विश्लेषण द्वारा किया गया, इसके बाद कई तुलनाओं के लिए तुकी परीक्षण किया गया। विषम भिन्नताओं के मामले में या यदि डेटा सामान्य रूप से वितरित नहीं किया गया था, तो यह निर्धारित करने के लिए एक उपयुक्त अयुग्मित छात्र का टी-टेस्ट किया गया था कि क्या साधन काफी भिन्न थे। सभी मामलों में 0.05 से कम या उसके बराबर पी-वैल्यू को सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण माना गया। रोगाणुरोधी संवेदनशीलता परीक्षण के परिणाम औसत मूल्य के रूप में व्यक्त किए जाते हैं, जो कम से कम तीन स्वतंत्र प्रयोगों से प्राप्त होते हैं।

3) परिणाम और चर्चा

This study aims to investigate the cosmeceutical potential of protein-rich extracts that were produced by high-pressure technologies from fishery industry wastes, namely sardine wastes and codfish frames [11,22]. The selection of extracts was based on previous results regarding their characterization and process conditions. For codfish, all extracts were selected aiming at evaluating the impact of the extraction temperature on the recovery of compounds with promising bioactive effects on the skin. For sardine extracts, only three extracts derived from both defatted and non-defatted raw materials, processed at higher temperatures (190  and 250 ◦C) and with the highest extraction yield (>45.7 ग्राम/100 ग्राम) चुना गया। प्रत्येक अर्क की कुल प्रोटीन सामग्री से संबंधित परिणाम तालिका 1 में प्रस्तुत किए गए हैं।

3.1. एंटीऑक्सीडेंट, एंटी-एजिंग और एंटी-हाइपरपिग्मेंटेशन गतिविधियाँ

अर्क के संभावित कॉस्मीस्यूटिकल प्रभाव को शुरू में उनके एंटीऑक्सिडेंट, एंटी-एजिंग और एंटी-हाइपरपिग्मेंटेशन प्रभावों का मूल्यांकन करने के लिए रासायनिक और एंजाइमैटिक परीक्षणों का उपयोग करके जांचा गया था। एंटीऑक्सीडेंट क्षमता के लिए, ओआरएसी परख का चयन किया गया था क्योंकि यह जैविक रूप से प्रासंगिक आरओएस, अर्थात् पेरोक्सिल रेडिकल्स को साफ करने के लिए नमूनों की क्षमता को मापता है, जिन्हें त्वचा की उम्र बढ़ने के मुख्य प्रेरकों में से एक माना जाता है [2,32]। एंटी-एजिंग प्रभाव का मूल्यांकन इलास्टेज निषेध के माध्यम से भी किया गया था क्योंकि यह एंजाइम इलास्टिन और अन्य ईसीएम प्रोटीन के क्षरण के लिए जिम्मेदार बताया गया है [6]। एंटी-हाइपरपिग्मेंटेशन प्रभाव के लिए, मेलेनिन उत्पादन को रोकने के लिए नमूनों की क्षमता का मूल्यांकन करने के लिए टायरोसिनेस परख का उपयोग किया गया था। तालिका 2 सभी अर्क के ORAC और IC50 मूल्यों का सारांश प्रस्तुत करती है।

हमारे परिणाम बताते हैं कि सार्डिन और कॉडफिश के अर्क ने एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि और इलास्टेज और टायरोसिनेस एंजाइम की गतिविधि पर अवरोधक प्रभाव प्रस्तुत किया। सार्डिन नमूनों में, S1 ने उच्चतम ORAC मान (1.94 ± 0.08 µmol TEAC/mg अर्क) दिखाया, इसके बाद S3 और S2 का स्थान रहा। ये परिणाम एक वैकल्पिक विधि (2,{8}}डिफेनिल-1-पिक्रिलहाइड्राजाइल-डीपीपीएच परख) के माध्यम से पिछले एंटीऑक्सीडेंट मूल्यांकन के हैं, जहां अर्क एस1 ने सबसे कम आईसी50 मान प्रस्तुत किया था [22]। एस1 नमूने के पेरोक्सिल रेडिकल्स के प्रति उच्च सफाई क्षमता अर्क में मौजूद विभिन्न अमीनो एसिड अनुक्रम वाले पेप्टाइड्स से प्राप्त की जा सकती है क्योंकि उनके बीच की बातचीत कट्टरपंथी सफाई क्षमता को प्रभावित कर सकती है [33]। इसके अतिरिक्त, माइलार्ड या अन्य थर्मो-ऑक्सीकरण प्रतिक्रियाओं में उत्पन्न यौगिक नमूनों की एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि को प्रभावित कर सकते हैं [34]। सबसे कम ORAC मान के बावजूद, नमूने S2 और S3 क्रमशः टायरोसिनेस और इलास्टेज गतिविधियों को रोकने की उच्चतम क्षमता वाले थे।

कॉडफिश के अर्क में, Cf4 में सबसे अधिक एंटीऑक्सीडेंट और एंटीहाइपरपिग्मेंटेशन गतिविधियां पाई गईं। अर्क के एसईसी-जीपीसी विश्लेषण से पता चला है कि निष्कर्षण तापमान को 250 ◦C [11] तक बढ़ाने पर घटते आणविक भार के पेप्टाइड प्राप्त हुए थे। इस नमूने की इलास्टेज निषेध क्षमता अन्य सीएफ अर्क, अर्थात् सीएफ1 और सीएफ3 के लिए पाए गए मूल्यों की सीमा के भीतर है। हालाँकि, परीक्षण की गई सांद्रता के लिए, इन दोनों अर्कों ने टायरोसिनेस के प्रति कोई अवरोधक गतिविधि नहीं दिखाई।

साहित्य में, कुछ रिपोर्टें दिखा रही हैं कि समुद्री उप-उत्पादों के अर्क में प्रासंगिक एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि और टायरोसिनेस का निषेध मौजूद है। उदाहरण के लिए, क्षारीय हाइड्रोलिसिस द्वारा समुद्री (स्कोफ्थाल्मस मैक्सिमस) उप-उत्पादों से प्राप्त अर्क ने विभिन्न रासायनिक परीक्षणों द्वारा प्राप्त एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि का प्रदर्शन किया है: 1, 1-डिफेनिल-2- पिक्रिलहाइड्राजाइल (डीपीपीएच) रेडिकल-स्कैवेंजिंग क्षमता ( नियंत्रण के बारे में 36.12 प्रतिशत), एबीटीएस (2,{9}}एज़िनोबिस-(3-एथिल-बेंजोथियाज़ोलिन-6-सल्फ़ोनिक एसिड) विधि (12.81 µg BHT/mL) और क्रोसिन ब्लीचिंग परख (8.{ {28}}3 माइक्रोग्राम ट्रॉलोक्स/एमएल) [35]। एक अन्य अध्ययन में, फिटकरी-नमकीन जेलीफ़िश (लोबोनेमा स्मिथी) के एंजाइमैटिक निष्कर्षण से उच्च एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि (आईसी{{20}} के साथ हाइड्रोलाइज़ेट्स का उत्पादन होता है। एबीटीएस ई डीपीपीएच परख के लिए 9 मिलीग्राम/एमएल) और टायरोसिनेस निरोधात्मक क्षमता, आईसी50 मानों के साथ 14.1 और 24.5 मिलीग्राम/एमएल [36] के बीच, जो इस कार्य में प्राप्त परिमाण के समान क्रम में हैं इसके अतिरिक्त, समान एंटीऑक्सीडेंट मूल्यों (ORAC मान - {{41%).4 से 3.5 µmol TEAC/mg अर्क) वाले अर्क एक अन्य प्रकार के खाद्य उद्योग के अवशेषों, अर्थात् वाइनमेकिंग अपशिष्ट धाराओं [6] से प्राप्त किए गए थे। हालाँकि, इन वाइनरी अवशेषों के अर्क ने इस काम में प्राप्त की तुलना में उच्च टायरोसिनेस (IC50 से 4.0 से 0.14 मिलीग्राम अर्क/एमएल) और इलास्टेज (IC50 से 3.4 से 0.1 मिलीग्राम अर्क/एमएल) निरोधात्मक क्षमता प्रस्तुत की, संभवतः फेनोलिक यौगिकों की उपस्थिति के कारण जो कई जैव गतिविधियों के लिए पहचाने जाते हैं। यह उल्लेख करना महत्वपूर्ण है कि हमारे अध्ययन में हमने अर्क के एंटी-हाइपरपिग्मेंटेशन प्रभाव की जांच के लिए मशरूम टायरोसिनेस का उपयोग किया, क्योंकि इस एंजाइम का व्यापक रूप से उच्च थ्रूपुट परख में उपयोग किया गया है [37]। फिर भी, चूंकि स्तनधारी/मानव टायरोसिनेस [38-40] के साथ इस एंजाइम की समानता और समरूपता के बारे में कुछ विवाद हैं, इसलिए सार्डिन और कॉडफ़िश अर्क के संभावित एंटी-हाइपरपिग्मेंटेशन प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए स्तनधारी कोशिका लाइनों से जुड़े भविष्य के अध्ययनों पर विचार किया जाना चाहिए।

यह पहचानने के लिए कि अर्क की बायोएक्टिव प्रतिक्रिया के लिए कौन से यौगिक जिम्मेदार हो सकते हैं, बायोएक्टिविटी डेटा और पहले बताई गई अर्क की अमीनो एसिड संरचना के बीच सहसंबंध अध्ययन किया गया [11,22] (तालिका एस1)। एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि के लिए, ओआरएसी मूल्य और कुल थ्रेओनीन, मुक्त वेलिन, साथ ही सभी अर्क के लिए मुक्त और कुल ल्यूसीन के बीच उच्चतम सहसंबंध (आर2 इससे अधिक या 0.7 के बराबर) प्राप्त किए गए थे। सार्डिन नमूनों के मामले में, मुफ़्त और कुल ट्रिप्टोफैन सामग्री के लिए एक उच्च सहसंबंध (R2, 0.94 से अधिक या उसके बराबर) भी प्राप्त किया गया था। तदनुसार, इन सभी अमीनो एसिड में पहले कई मॉडल प्रणालियों [41-43] में एंटीऑक्सीडेंट गुण होने की सूचना मिली है। इलास्टेज और टायरोसिनेस निषेध गतिविधियों के लिए, क्रमशः कुल प्रोटीन सामग्री और मुक्त आर्जिनिन के लिए उच्चतम सहसंबंध गुणांक (आर2, 0.8 से अधिक या उसके बराबर) प्राप्त किए गए थे, जिससे पता चलता है कि इन यौगिकों की क्षमता में महत्वपूर्ण भूमिका हो सकती है। मछली उद्योग अपशिष्ट धाराओं के अर्क का एंटी-एजिंग और एंटी-हाइपरपिग्मेंटेशन प्रभाव।

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