एक इम्यूनोरेगुलेटर और एक सहायक के रूप में सिस्टैंच डेजर्टिकोला वाईसी मा से क्रूड पॉलीसेकेराइड्स

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सार:Cistanche डेजर्टिकोला YC Ma (CD) स्वास्थ्य समस्याओं के लिए आदर्श हर्बल उपचार हैं। इस अध्ययन में, सक्रिय करने पर सीपीसीडी की न्यूनाधिक गतिविधियांद्रुमाकृतिक कोशिकाएं(डीसी) और पैर और मुंह की बीमारी के टीके (एफएमडीवी) के लिए सहायक क्षमता का मूल्यांकन किया गया। सीपीसीडी बिनाcytotoxicityफेनोटाइपिक मार्करों और एंटीजन अपटेक को अपग्रेड करके डीसी सक्रियण को प्रेरित किया। TLR-2 या TLR-4 एंटीबॉडी ने CPCD की मध्यस्थता वाले CD40 और CD86 के स्तर के साथ-साथ DC में IL-6 और IL-1 को दबा दिया। CPCD ने MAPK से संबंधित अणुओं और NF-κB के फॉस्फोराइलेशन को प्रेरित किया। जब चूहों में एफएमडीवी के साथ इंट्रामस्क्युलर रूप से सह-इंजेक्शन किया जाता है, तो सीपीसीडी ने एफएमडीवी-विशिष्ट एंटीबॉडी, लिम्फोसाइट प्रसार, प्रभावकारी टी-कोशिकाओं को बढ़ाया। विशेष रूप से, CPCD ने Th1 प्रतिक्रिया प्राप्त की, जैसा कि CD4 प्लस IFN-, CD8 प्लस IFN- और CTL प्रतिक्रिया के उच्च भावों से संकेत मिलता है। CPCD ने DC में MHC-II, CD80, CD86, और CD40 के भावों को बढ़ाया और Tregs की आवृत्ति कम की। इसलिए, सीपीसीडी टीएलआर -2/टीएलआर-4 संबंधित एमएपीके और एनएफ-κबी मार्गों के माध्यम से डीसी सक्रियण को संशोधित करके मजबूत विनोदी और सेलुलर प्रतिक्रियाओं को प्रभावी ढंग से उत्तेजित कर सकता है।

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1 परिचय

अधिकतरपॉलीसैकराइडऔषधीय जड़ी बूटियों से व्युत्पन्न ने अपनी कम विषाक्तता और व्यापक स्पेक्ट्रम प्रतिरक्षा बूस्टर (चेन एंड हुआंग, 2018; हे एट अल।, 2020) के कारण सहायक के क्षेत्र में बढ़ती रुचि को आकर्षित किया है। कई जांचकर्ताओं ने कई टीकों के लिए सहायक उम्मीदवारों के रूप में औषधीय जड़ी-बूटियों का सफलतापूर्वक उपयोग किया है। Astragalus polysaccharide, Panax ginseng polysaccharide, Poria cocos polysaccharide, और lentinan सहित विशिष्ट पॉलीसेकेराइड का व्यापक रूप से कई संक्रामक रोगों के टीके के लिए सहायक के रूप में उपयोग किया गया है (P. Li & Wang, 2015; Rey Ladino, Ross, Cripps, McManus, & Quinn, 2011; बी सन एट अल।, 2018)। चीनी फार्माकोपिया के अनुसार सदियों से पारंपरिक चीनी चिकित्सा (टीसीएम) में रोगों के उपचार के लिए सिस्टैंच डेजर्टिकोला वाईसी मा (सी। डेजर्टिकोला, "रू कांग-रोंग") को पारंपरिक रूप से टॉनिक हर्बल सप्लीमेंट के रूप में इस्तेमाल किया जाता रहा है (एस ली, वू, एंड ले, 2021; योंग एंड टू, 2009)। विवो और इन विट्रो अध्ययनों से पता चला है कि सी। डेजर्टिकोला के अर्क ने कई का प्रदर्शन कियाऔषधीय कार्यथकान को कम करने सहित औरसूजनरोधी, न्यूरोप्रोटेक्टिव, एंटीवायरल और इम्यूनोमॉड्यूलेटरी फ़ंक्शंस (फू, फैन, वांग, और गाओ, 2018; तियान वांग, 2012)। सी. डेजर्टिकोला के पॉलीसेकेराइड, सी. डेजर्टिकोला के सक्रिय घटक, प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया और एंटीऑक्सीडेटिव विरोधी भड़काऊ, और विरोधी थकान कार्यों (डोंग, याओ, फेंग, और डिंग) के मॉड्यूलेशन सहित व्यापक श्रेणी की जैविक गतिविधियों के लिए साबित हुए हैं। , 2007; डब्ल्यू झांग एट अल।, 2016)। 2018 और 2019 में, हमने दिखाया कि C. डेजर्टिकोला (CPCD) के कच्चे पॉलीसेकेराइड्स ने Th1/Th2 प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं के पक्ष में OVA एंटीजन के लिए एक सहायक के रूप में काम किया। सीपीसीडी टोल-जैसे रिसेप्टर 4 (टीएलआर -4) (झांग एट अल।, 2018) के माध्यम से डीसी सक्रियण को प्रेरित कर सकता है। सीपीसीडी को चूहों में इन्फ्लूएंजा के टीके (झाओ, लियान, वांग, ली और झांग, 2019) के खिलाफ IFN- स्राव और IgG2a पीढ़ी सहित Th1 प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं को प्राप्त करने के लिए भी पाया गया था। इसलिए, सीपीसीडी-प्राप्त प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के अंतर्निहित तंत्र और निष्क्रिय एफएमडीवी पर सीपीसीडी के प्रतिरक्षा शक्तिशाली प्रभाव को उजागर करना आवश्यक है।

पैर और मुंह की बीमारी (एफएमडी) जानवरों में एक महत्वपूर्ण वायरल बीमारी है क्योंकि इससे उच्च आर्थिक नुकसान और सामाजिक परिणाम हो सकते हैं। निष्क्रिय एफएमडी टीके (एफएमडीवी) एफएमडी के सबसे प्रभावी नियंत्रण उपाय हैं। वर्तमान निष्क्रिय एफएमडीवी कम एंटीबॉडी उत्पादन, एंटीबॉडी दृढ़ता की कम अवधि के साथ-साथ सूअर में खराब प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं के कारण सुरक्षित लेकिन खराब इम्युनोजेनिक हैं (वाई। काओ, लू, और लियू, 2016; डोएल, 2003)। टीकों की सुरक्षात्मक प्रभावकारिता में सुधार के लिए उच्च टीके खुराक या बढ़े हुए उपचार के समय, विभिन्न इंजेक्शन मार्ग (इंट्रामस्क्युलर बनाम इंट्राडर्मल टीकाकरण), और त्वरित खुराक कार्यक्रमों का उपयोग महत्वपूर्ण रणनीतियों के रूप में किया गया है। बढ़ते हुए प्रमाणों ने प्रदर्शित किया है कि सहायक संक्रामक रोगों के खिलाफ टीके की प्रभावशीलता को बढ़ा सकते हैं (स्टीवन जी। रीड, ऑर, और फॉक्स, 2013; एन। झांग एट अल।, 2010)। उपन्यास सहायक और एफएमडीवी में उनके समावेश से प्रतिरक्षा में वृद्धि हो सकती है और यहां तक ​​​​कि सुरक्षा की अवधि में भी सुधार हो सकता है (वाई। काओ, 2014; डार, कलाइवानन, सीड, मामो, और कोंडाबट्टुला, 2013)। वर्तमान में, सुरक्षित और प्रभावी सहायक विकसित करने के लिए कई प्रयास समर्पित किए जा रहे हैं जो एक अनुरूप प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया (पुलेंद्रन और ओ'हागन, 2021) के साथ प्रतिरक्षण क्षमता को अधिकतम कर सकते हैं। टीकों के लिए विविध सहायकों की आवश्यकता होती है। पारंपरिक सहायक की तुलना में, टीसीएम से पॉलीसेकेराइड सहायक लिम्फोसाइट्स, साइटोकिन्स और एंटीबॉडी स्तरों को संशोधित करके और मजबूत सेलुलर और हास्य प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया उत्पन्न करके एफएमडीवी पर प्रतिरक्षा शक्तिशाली प्रभाव डालने में सहायक हो सकते हैं।

डेंड्राइटिक कोशिकाओं (डीसी) की सक्रियता अनुकूली प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया शुरू करने और Th1 / Th2 प्रतिरक्षा संतुलन (कैप्सेनबर्ग, 2003) को विनियमित करने के लिए सिद्ध हुई है। DCS पर नए सहायकों के प्रभाव को स्पष्ट करने की आवश्यकता है। टीसीएम पॉलीसेकेराइड डीसी पर सतह के अणुओं की अभिव्यक्ति में सुधार कर सकते हैं, जिसमें एमएचसी II, सीडी 80, सीडी 86, और सीडी 40 शामिल हैं, और प्रो-इंफ्लेमेटरी साइटोकिन्स के स्तर को बढ़ा सकते हैं, जैसे कि आईएल -6 और आईएल {{ 8}} (जे ली, ली, और झांग, 2015)। टीसीएम पॉलीसेकेराइड की इम्यूनोमॉड्यूलेटरी गतिविधियों को डीसी (जियांग, झू और जियांग, 2010) पर सीधे बाध्यकारी झिल्ली रिसेप्टर्स के माध्यम से प्राप्त किया जाता है। दूसरे शब्दों में, सीपीसीडी की प्रतिरक्षात्मक गतिविधि डीसी पर इम्युनोमोडायलेटरी प्रभाव से जुड़ी है। इसके अतिरिक्त, टीएलआर डीसी की सक्रियता और भर्ती को बढ़ावा देने और बी सेल और टी सेल प्रतिक्रियाओं को ट्रिगर करने वाले प्रहरी रिसेप्टर्स हैं। माइटोजेन-एक्टिवेटेड प्रोटीन किनेज (MAPK) और न्यूक्लियर फैक्टर कप्पा-बी (NF-κB) पाथवे टीएलआर के महत्वपूर्ण डाउनस्ट्रीम पाथवे हैं और इन पाथवे को सक्रिय करने से आईएल -6 और आईएल {{15} सहित प्रिनफ्लेमेटरी साइटोकिन्स का उत्पादन प्रेरित हो सकता है। } (अकीरा और टाकेडा, 2004)। इसलिए, संक्रमण के लिए प्रतिरक्षा सेल प्रतिक्रियाओं को समझने के उद्देश्य से टीएलआर से संबंधित डाउनस्ट्रीम मार्गों की जांच करना आवश्यक है। इस अध्ययन में, ICR माउस को आमतौर पर FMDV के लिए प्रयोगशाला में एक मॉडल जानवर के रूप में चुना गया था ताकि लक्षित जानवरों के असुविधाजनक उपयोग के कारण सहायक और वैक्सीन शक्ति के बीच संबंध का निर्धारण किया जा सके, और CPCD को FMDV सहायक के रूप में इन विट्रो और विवो में जांच की गई। TLR-2/TLR-4-संबंधित डाउनस्ट्रीम MAPK और NF-κB पाथवे द्वारा DCs सक्रियण में इसकी भूमिका का पता लगाने के लिए। यह अध्ययन सीपीसीडी द्वारा इम्यूनोमॉड्यूलेटरी गतिविधियों के प्रेरण तंत्र के साथ-साथ लक्षित जानवरों में एफएमडीवी के लिए पॉलीसेकेराइड सहायक के रूप में सीपीसीडी की क्षमता को समझने का आधार प्रदान करता है।

2: सामग्री और तरीके

C. डेजर्टिकोला (नंबर CD17042001) को प्रोफेसर जियांग हे द्वारा पहचान प्रदान की गई थी। निष्क्रिय FMD वायरल O-सीरोटाइप 146S प्रतिजन और ISA-206 सहायक कृपया Tecon Biology Co., Ltd. (चीन) द्वारा प्रदान किए गए। भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS) जैविक उद्योग से था। RPMI 1640 मीडियम को GIBCO (USA) से खरीदा गया था। पॉलीमीक्सिन बी (पीएमबी), लिपोपॉलीसेकेराइड (एलपीएस), 3-(4,5-डाइमिथाइल थियाजोल-2-यल)-2,5- डिपेनिलटेट्राजोलियम ब्रोमाइड (एमटीटी) थे सिग्मा उत्पाद। सेल काउंटिंग किट-8 (CCK-8) Biosharp (चीन) की थी। मरीन ग्रैनुलोसाइट-मैक्रोफेज कॉलोनी-उत्तेजक कारक (जीएम-सीएसएफ) पेप्रोटेक (यूएसए) से था। IL-6 और IL-1 किट Boster (चीन) की थीं।

Golgistop, Cytofix/Cytoperm, Perm/Wash बफर, और CD3, CD4, CD8, CD44, CD11c, MHC-II, CD80, CD 86, CD40 के खिलाफ एंटीबॉडी BD बायोसाइंसेज (यूएसए) से थे। न्यूक्लियर और साइटोप्लाज्मिक एक्सट्रैक्शन किट और बीसीए प्रोटीन क्वांटिटेशन किट Cwbiotech (चीन) से थे। एंटी-टीएलआर -2 और एंटी- टीएलआर -4 एंटीबॉडी नोवस बायोलॉजिकल (यूएसए) से खरीदे गए थे। MAPK और NF-κB पाथवे किट सेल सिग्नलिंग टेक्नोलॉजी (USA) से थे। सदर्न बायोटेक (यूएसए) से हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज-लेबल एंटी-माउस/खरगोश एंटीबॉडी (IgG/IgG1/IgG2a)। eBiosciences (यूएसए) से ट्रेग स्टेनिंग किट।

3: परिणाम

तटस्थ कार्बोहाइड्रेट सामग्री 50.53 प्रतिशत ± 1.28 प्रतिशत और अम्लीय कार्बोहाइड्रेट सामग्री 17.81 ± 0.51 प्रतिशत निर्धारित की गई थी। CPCD के औसत आणविक भार (Mw) की गणना अवधारण समय (चित्र 1A) के साथ 46.77 kDa की गई थी। CPCD की मोनोसैकराइड संरचना से पता चलता है कि CPCD के प्रमुख चीनी घटक Glc, Ara, Gal, Rha, GlaA और मैन इन मोलर प्रतिशत 33.17 प्रतिशत, 28.98 प्रतिशत, 16.39 प्रतिशत, 10.97 प्रतिशत, 8.05 प्रतिशत, 2.42 प्रतिशत (चित्र। 1बी)। अंजीर। 1C CPCD के FT-IR स्पेक्ट्रम को दर्शाता है। 3383.64 सेमी-1 पर ब्रांड हाइड्रॉक्सिल समूह के कारण थे। एल्काइल समूह के अवशोषण बैंड 2926.97 सेमी-1 और 1417.99 सेमी-1 पर देखे गए।कार्बोनिलसमूह 1635.56 सेमी− 1 पर देखे गए। 1257.06 से 1032.02 सेमी−1 के संकेतों ने पाइरोज के छल्ले की उपस्थिति का संकेत दिया। आगे की जाँच करने के लिए कि क्या MAPK और NF-pathB पाथवे CPCD उपचार द्वारा सक्रिय किए गए थे, DC को अलग-अलग समय पर CPCD से प्रेरित किया गया था और दो रास्तों में शामिल प्रमुख प्रोटीनों के भावों की जांच की गई थी। CPCD ने समय-निर्भर तरीके से JNK, ERK, और p38 के फॉस्फोराइलेशन को प्रेरित किया और JNK, ERK, और p38 के फॉस्फोराइलेशन स्तर 15-30 मिनट (छवि 5AD) के बाद उच्चतम थे। इसके अलावा, साइटोप्लाज्मिक NF-κB p65, IκB, IKK / और परमाणु NF-κB p65 के फॉस्फोराइलेशन को भी समय-निर्भर तरीके से प्रेरित किया गया था। साइटोप्लाज्मिक p65, IκB, और IKK / का फॉस्फोराइलेशन स्तर, और नाभिक में p65 का अनुपात अलग-अलग समय के बाद उच्चतम था: p65 के लिए 15-30 मिनट, IκB के लिए 30 मिनट, IKK / के लिए 60 मिनट, और के लिए 20 मिनट नाभिक में p65 का अनुपात (चित्र 5E-5 J)।

यह लेख जर्नल ऑफ फंक्शनल फूड्स 87 (2021) 104800 जर्नल होमपेज से निकाला गया है: www.elsevier.com/locate/jff