त्वचा की उम्र बढ़ने में पोषण की भूमिका का निर्धारण

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सार:त्वचा की उम्र बढ़ने पर आहार का प्रभाव एक दिलचस्प शोध विषय बन गया है। पिछले अध्ययनों ने मौखिक रूप से प्रशासित होने पर उम्र बढ़ने वाली त्वचा पर समुद्री जीवों से प्राप्त कोलेजन पेप्टाइड्स के लाभकारी प्रभावों पर ध्यान केंद्रित किया है, जबकि उम्र बढ़ने वाली त्वचा पर पोल्ट्री से प्राप्त कोलेजन पेप्टाइड्स के लाभकारी प्रभाव शायद ही कभी रिपोर्ट किए गए हैं। इस अध्ययन में, एंजाइमी हाइड्रोलिसिस द्वारा चिकन की हड्डी से कोलेजन पेप्टाइड्स तैयार किए गए थे, और डी-गैलेक्टोज के साथ संयुक्त यूवी द्वारा प्रेरित त्वचा की उम्र बढ़ने को कम करने पर मौखिक रूप से प्रशासित कोलेजन पेप्टाइड्स की क्रिया के प्रभाव और तंत्र की जांच की गई थी। परिणामों से पता चला कि चिकन बोन कोलेजन में कोलेजन की विशिष्ट विशेषताएं थीं, और चिकन बोन कोलेजन पेप्टाइड्स (CPs) मुख्य रूप से आणविक भार वाले छोटे आणविक पेप्टाइड्स थे।<3000 da.="" in="" vivo="" experiments="" showed="" that="" cps="" had="" a="" significant="" relieving="" effect="" on="" aging="" skin,="" indicated="" by="" the="" changes="" in="" the="" compostion="" and="" structure="" of="" the="" aging="" skin,="" improvement="" of="" skin="" antioxidant="" level,="" and="" inhibition="" of="" inflammation;="" the="" relieving="" effect="" was="" positively="" correlated="" with="" the="" dose="" of="" cps.="" further="" investigation="" showed="" that="" cps="" first="" reduce="" the="" level="" of="" skin="" oxidation,inhibit="" the="" expression="" of="" the="" key="" transcription="" factor="" ap-1(c-jun="" and="" c-fos),="" then="" activate="" the="" tgf-β/smad="" signaling="" pathway="" to="" promote="" collagen="" synthesis,="" inhibit="" the="" expression="" of="" mmp-1/3="" to="" inhibit="" collagen="" degradation,and="" inhibit="" skin="" inflammation="" to="" alleviate="" skin="" aging="" in="" mice.="" moreover,="" the="" skin="" transcriptome="" found="" that="" lysosomes="" activated="" after="" oral="" administration="" of="" cps="" may="" be="" an="" important="" pathway="" for="" cps="" in="" anti-skin="" aging,="" and="" is="" worthy="" of="" further="" research.="" these="" results="" suggested="" that="" cps="" might="" be="" used="" as="" a="" functional="" anti-aging="" nutritional="">

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कीवर्ड:कोलेजन पेप्टाइड्स; बुढ़ापा विरोधी; त्वचा प्रतिलेख;कोलेजन संश्लेषणलाइसोसोम

1 परिचय

स्वास्थ्य युग, एक स्वस्थ आहार का सही ढंग से पालन करना, त्वचा की उम्र बढ़ने में पोषण की भूमिका का निर्धारण करना और युवा और स्वस्थ त्वचा को बनाए रखने के लिए क्या खाना चाहिए, यह तय करना कठिन समस्याएं हैं। त्वचा शरीर का सबसे बड़ा अंग है, जो एपिडर्मिस, डर्मिस और चमड़े के नीचे की परत से बना होता है। यह बाहरी कारकों से शरीर की रक्षा के लिए एक बाधा के रूप में कार्य करता है और स्वास्थ्य और सुंदरता में भी भूमिका निभाता है। त्वचा की उम्र बढ़ना एक जटिल प्रक्रिया है, जो कालानुक्रमिक उम्र बढ़ने और फोटो-एजिंग में विभाजित है और आंतरिक और बाहरी दोनों कारकों से प्रभावित होती है।सिस्टैंच स्टेममुख्य विशेषताओं में कोशिका में मैक्रोमोलेक्यूलर क्षति का संचय, स्टेम सेल फ़ंक्शन में गिरावट (ऊतक नवीकरण को बढ़ावा देना), और त्वचा की भौतिक अखंडता का क्रमिक नुकसान शामिल है। मुख्य आणविक तंत्र जो त्वचा की उम्र बढ़ने का कारण बनते हैं, उनमें मुख्य रूप से ऑक्सीडेटिव तनाव, टेलोमेयर छोटा, डीएनए क्षति, आनुवंशिक उत्परिवर्तन, माइक्रो-आरएनए विनियमन, उन्नत ग्लाइकेशन एंड-प्रोडक्ट संचय, और सूजन-उम्र बढ़ने 3 शामिल हैं। फोटो-एजिंग त्वचा एपिडर्मल हाइपरप्लासिया, सुखाने, और पराबैंगनी विकिरण से प्रेरित बाह्य मैट्रिक्स गिरावट है। फोटो-एजिंग का मुख्य कारण पराबैंगनी विकिरण द्वारा उत्पन्न प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियां (आरओएस) है जो माइटोजेन-सक्रिय प्रोटीन किनेज (एमएपीके) सिग्नलिंग जैसे सिग्नल पथों के माध्यम से मैट्रिक्स मेटालोप्रोटीनिस (एमएमपी) और टाइप-आई प्रो-कोलेजन की अभिव्यक्ति में मध्यस्थता करता है। मार्ग, इस प्रकार त्वचा में बाह्य मैट्रिक्स (ईसीएम) के क्षरण और फाइब्रोब्लास्ट्स के एपोप्टोसिस की ओर जाता है [4]। हाल के वर्षों में, त्वचा के स्वास्थ्य को बनाए रखना और उम्र बढ़ने में देरी करना लोकप्रिय हो गया है, और एंटीऑक्सिडेंट और एंटी-एजिंग कार्यों के साथ बायोएक्टिव पेप्टाइड्स और पॉलीफेनोल्स जैसे प्राकृतिक अवयवों को खोजना एक शोध हॉटस्पॉट बन गया है [5]।

सिस्टैन्च एंटी-एजिंग कर सकता है

हालांकि, कोलेजन का एक बड़ा आणविक भार होता है और इसे सीधे अवशोषित और उपयोग करना मुश्किल होता है, जबकि कोलेजन हाइड्रोलिसिस के बाद छोटे आणविक कोलेजन पेप्टाइड्स में मजबूत जैविक गतिविधि और उच्च अवशोषण दर [6] होती है। इस बीच, भोजन, दवा, ऊतक इंजीनियरिंग, सौंदर्य प्रसाधन, और अन्य क्षेत्रों में कोलेजन के व्यापक अनुप्रयोग ने कम आणविक भार, उच्च अवशोषण दक्षता और मजबूत जैविक गतिविधि वाले कोलेजन पेप्टाइड्स को कार्यात्मक भोजन और चिकित्सा अनुसंधान में एक नया पसंदीदा बना दिया है [{{1 }}]. कोलेजन पेप्टाइड्स छोटे होते हैं, जिनमें कोलेजन हाइड्रोलिसिस के बाद प्राप्त 2-20 अमीनो एसिड अवशेष होते हैं। उनके संभावित विरोधी भड़काऊ और एंटीऑक्सीडेंट कार्यों और प्रतिरक्षा विनियमन और त्वचा फाइब्रोब्लास्ट्स [10] पर एंटीऑक्सीडेशन और प्रसार के प्रभाव के कारण त्वचा की उम्र बढ़ने के उपचार के लिए उन्हें आहार पूरक के रूप में उपयोग किया जाता है।

मौखिक प्रशासन के बाद, कोलेजन पेप्टाइड्स को छोटे पेप्टाइड्स के रूप में अवशोषित किया जाता है और जल्दी से रक्त में ले जाया जाता है, और अंत में, गुर्दे, त्वचा, जोड़ों और अन्य ऊतकों को संग्रहीत और उपयोग किया जाता है। 14 दिनों के बाद, चूहों की त्वचा में रेडियोधर्मिता का स्तर उच्च बना रहा, जिसे C14-लेबल वाले कोलेजन पेप्टाइड्स से प्रभावित किया गया था।सिस्टैंच ट्यूबुलोसा के फायदे और साइड इफेक्टकोलेजन पेप्टाइड्स को शरीर द्वारा लगभग पूरी तरह से अवशोषित और उपयोग किया जा सकता है, जबकि कोलेजन का अवशोषण और उपयोग दर केवल 50-60 प्रतिशत [6,11-13] है। हाल के वर्षों में, मछली की त्वचा, मछली के पैमाने, गाय की हड्डी, गाय की खाल और सुअर की त्वचा से कोलेजन हाइड्रोलाइज़ेट्स को व्यापक रूप से त्वचा की उम्र बढ़ने को कम करने पर लाभकारी प्रभाव के बारे में बताया गया है और शोधकर्ताओं ने काफी ध्यान आकर्षित किया है। उदाहरण के लिए, सिल्वर कार्प त्वचा से पृथक कोलेजन पेप्टाइड्स प्रो-कोलेजन संश्लेषण को बढ़ावा देते हैं और टीजीएफ-/स्मैड मार्ग को सक्रिय करके एपी -1, एमएमपी -1, और एमएमपी -3 प्रोटीन अभिव्यक्ति को रोकते हैं। कोलेजन क्षरण को रोकने और फोटोयुक्त त्वचा कोशिकाओं की मरम्मत करने के लिए [14]। गोजातीय कोलेजन पेप्टाइड्स का मौखिक प्रशासन त्वचा को आराम देने में सुधार कर सकता है, कोलेजन सामग्री और एंटीऑक्सीडेंट एंजाइम गतिविधि को बढ़ा सकता है, कोलेजन फाइबर की मरम्मत कर सकता है, और उम्र बढ़ने वाले चूहों में त्वचा के कोलेजन अनुपात को सामान्य कर सकता है [15]। हालांकि, विभिन्न स्रोतों से कोलेजन पेप्टाइड्स के अलग-अलग प्रभाव होते हैं। कोलेजन पेप्टाइड्स के मौखिक प्रशासन के बाद रक्त में अत्यधिक सक्रिय पेप्टाइड्स की मात्रा और संरचना कोलेजन के स्रोत पर निर्भर करती है [10]। यूवीए-प्रेरित फाइब्रोब्लास्ट की चोट के खिलाफ मुर्गियों की त्वचा से निकाले गए कोलेजन पेप्टाइड का सुरक्षात्मक प्रभाव सुअर, गाय या तिलपिया की त्वचा से निकाले गए कोलेजन पेप्टाइड से बेहतर था, और इसका प्रभाव कोलेजन-व्युत्पन्न ट्रिपपेप्टाइड (ग्लाइ-प्रो) के बराबर था। -हाइप) [16]।

धार्मिक विश्वासों और रोग संबंधी चिंताओं (जैसे पागल गाय रोग) ने लोगों को धीरे-धीरे कोलेजन और उसके उत्पादों के विकास की दिशा को स्थलीय स्तनधारियों से मुर्गी और समुद्री जीवों में स्थानांतरित करने के लिए प्रेरित किया है|17I.कुक्कुट प्रसंस्करण के मुख्य उप-उत्पाद के रूप में, चिकन हड्डी कोलेजन उत्पादों का एक आशाजनक स्रोत है। यह न केवल संसाधनों की बर्बादी और पर्यावरण प्रदूषण को कम करता है बल्कि उप-उत्पादों के कुशल उपयोग की भी अनुमति देता है। इसलिए, इस अध्ययन में, हमने त्वचा की उम्र बढ़ने को कम करने के लिए कोलेजन पेप्टाइड के मौखिक प्रशासन के प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए मॉडल के रूप में, त्वचा की उम्र बढ़ने को प्रेरित करने के लिए डी-गैलेक्टोज और यूवी के साथ इलाज किए गए नग्न चूहों के साथ कच्चे माल के रूप में चिकन बोन कोलेजन पेप्टाइड्स का उपयोग किया। चूहों और प्रासंगिक तंत्र का निर्धारण।

2। सामग्री और प्रणालियां

2.1.सामग्री, रसायन, और पशु

युन्नान कृषि विश्वविद्यालय (कुनमिंग, चीन) के चिकन फार्मों ने खर्च की गई मुर्गियाँ प्रदान कीं, जिन्हें चिकन की हड्डी का भोजन प्राप्त करने के लिए अलग, सुखाया और कुचला गया था। Su-peroxide dismutase (SOD), catalase (CAT), और glutathione peroxidase (GSH-PX) किट Soleibao Biotechnology Co., Ltd. (बीजिंग, चीन) से खरीदे गए थे। हाइड्रोक्सीप्रोलाइन (HYP), इंटरल्यूकिन-1 (IL-1x), मैट्रिक्स मेटालोप्रोटीनस-1/3 (MMP-1/3), टाइप I प्रो-कोलेजन, और हाइलूरोनिक एसिड (एचए) एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसे (एलिसा) किट नानजिंग जियानचेंग बायोइंजीनियरिंग इंस्टीट्यूट (नानजिंग, चीन) से खरीदे गए थे। स्वस्थ मादा BALB/C बाल रहित चूहे (18 ± 2g, छह सप्ताह पुराने) को नानजिंग जंक बायोइंजीनियरिंग कॉर्पोरेशन, लिमिटेड (नानजिंग, चीन) से परमिट संख्या: SCXK (SU) 2016-0010 के साथ खरीदा गया था।सिस्टैंच ट्यूबुलोसा अर्कपेप्सिन और पपैन अलादीन बायोकेमिकल टेक्नोलॉजी कं, लिमिटेड (शंघाई, चीन) से खरीदे गए थे, और अन्य रसायन विश्लेषणात्मक ग्रेड के थे। युन्नान प्रांत की प्रयोगशाला पशु देखभाल के नियमों के बाद सभी चूहों को संभाला गया और युन्नान कृषि विश्वविद्यालय पशु देखभाल और उपयोग समिति (अनुमोदन आईडी: YAUACUC01) द्वारा अनुमोदित किया गया।

2.2. Collgen तैयारी और अमीनो एसिड संरचना

चिकन बोन कोलेजन के निष्कर्षण और अमीनो एसिड संरचना ने लियूएट अल द्वारा वर्णित विधि का पालन किया। [18] थोड़े संशोधनों के साथ। चिकन बोन पाउडर को 0.05 M NaOH,10 प्रतिशत n-hexane, और 0.25 M EDTA घोल (pH7.5) में हिलाया और भिगोया गया। ) 1/10 (एम/ओ) के अनुपात में। प्रत्येक चरण में, नमूने का 36 घंटे के लिए इलाज किया गया था, और हड्डी के पाउडर को सूजने के लिए हर 6 घंटे में भिगोने के घोल को बदल दिया गया था, हड्डी के पाउडर से गैर-कोलेजन प्रोटीन, वसा और खनिजों को हटा दिया गया था। नमूना प्रत्येक चरण के बाद तटस्थता के लिए शुद्ध पानी से धोया गया था। प्री-ट्रीटेड चिकन बोन मील को 0.5 एम ग्लेशियल एसिटिक एसिड युक्त 0.1 प्रतिशत (डब्ल्यू/वी) पेप्सिन के साथ 1:10 (डब्ल्यू/वी) के ठोस-से-तरल अनुपात में मिश्रित किया गया था और लगातार हिलाया गया और 4 डिग्री पर निकाला गया। 48 घंटे फिर इसे फ़िल्टर किया गया, और छानना 15, 000 × g पर 15 मिनट के लिए 4 डिग्री पर सेंट्रीफ्यूज किया गया। सतह पर तैरनेवाला के pH को NaOH समाधान के साथ 7.5-7.8 में समायोजित किया गया था, और NaCl को 1.5 M की अंतिम सांद्रता में जोड़ा गया था। मिश्रण को बाहर निकालने के लिए 4 डिग्री पर 12 घंटे के लिए अबाधित रखा गया था, कोलेजन अवक्षेप को 15 मिनट के लिए 15, {37}} × g पर 4 डिग्री पर सेंट्रीफ्यूज किया गया, फिर 0.5 एम एसिटिक एसिड के साथ भंग कर दिया गया, शुद्ध पानी में डायल किया गया, फ्रीज-ड्राय किया गया, और तैयार उत्पाद चिकन बोन कोलेजन था।

चिकन बोन कोलेजन की अमीनो एसिड संरचना Sykam S433D एमिनो एसिड स्वचालित विश्लेषक (म्यूनिख, जर्मनी) द्वारा निर्धारित की गई थी। परीक्षण किए जाने वाले कोलेजन नमूने की एक निश्चित मात्रा को एक सीलबंद ट्यूब में लिया गया, जिसमें 10 mL6 M HCl मिलाया गया, और 24 घंटे के लिए 110C पर हाइड्रोलव्ड किया गया। हाइड्रोलाइज़ेट को नाइट्रोजन उड़ाने और 20 एमएल साइट्रिक एसिड बफर में फिर से भंग करके केंद्रित किया गया था। 0.22 um माइक्रोपोरस झिल्ली के साथ माइक्रोफिल्ट्रेशन के बाद, अमीनो एसिड स्पेक्ट्रम विश्लेषण के लिए 20 μL हाइड्रोलाइज़ेट लिया गया था। नमूने में अमीनो एसिड की मात्रा प्रतिशत में व्यक्त की गई थी।

2.3. कोलेजन पेप्टाइड्स (सीपी) की तैयारी और आणविक भार वितरण

हमारी पिछली अनुकूलन प्रक्रिया के परिणामों के अनुसार, 1:4 0 (द्रव्यमान अनुपात) के एंजाइम-से-सब्सट्रेट अनुपात में पपैन का उपयोग करके सीपी तैयार किए गए थे। पीएच to7 और एंजाइमी हाइड्रोलिसिस को 5 घंटे के लिए 63 डिग्री पर समायोजित करने के बाद, एंजाइम को 15 मिनट के लिए उबलते पानी के स्नान में निष्क्रिय कर दिया गया था। एंजाइम हाइड्रोलाइज़ेट को डिसाल्टेड और lyophilized किया गया था, 0.1 प्रतिशत फॉर्मिक एसिड समाधान में फिर से भंग कर दिया गया था, और सतह पर तैरनेवाला प्राप्त करने के लिए सेंट्रीफ्यूज किया गया था। AQ Exactive HF Orbitrap उच्च-रिज़ॉल्यूशन मास स्पेक्ट्रोमीटर-QE-HF (थर्मो फिशर, Waltham, MA, USA), इलेक्ट्रोस्प्रे आयनीकरण (ESI) से लैस, 350-1800 m के पूर्ण स्कैन मोड में कोलेजन हाइड्रोलाइज़ेट का विश्लेषण करने के लिए उपयोग किया गया था। / z, और परिणाम प्रोटीन खोजकर्ता 2.1 सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके पुनर्प्राप्त और विश्लेषण किए गए थे।

2.4.पशु परीक्षण

मादा BALB/C बाल रहित चूहों (n{{0}}) को तापमान (24°1 डिग्री), आर्द्रता (60 ±5 प्रतिशत) की नियंत्रित परिस्थितियों में एक कमरे में रखा गया था। एक सप्ताह के लिए 12 घंटे दिन-रात चक्र। उन्हें भोजन और पानी के लिए एड लिबिटम एक्सेस प्रदान किया गया था। अनुकूलन के एक सप्ताह के बाद, चूहों को बेतरतीब ढंग से निम्नलिखित पांच समूहों (एन =11 प्रति समूह) में विभाजित किया गया था: (i)। सामान्य समूह (एन): यूवी अनएक्सपोज्ड; 0.4 एमएल खारा प्रतिदिन का मौखिक प्रशासन। (ii)। मॉडल समूह (एम): यूवीएक्सपोज्ड प्लस डी-गैलेक्टोज (0.2 एमएल); प्रतिदिन 0.4 एमएल खारा का मौखिक प्रशासन।

(मैं)। कम खुराक वाले कोलेजन पेप्टाइड्स समूह (LCPs): UV एक्सपोज़्ड प्लस D-galactose(0.2 mL); मौखिक

प्रतिदिन 0.4 एमएल सीपी (खुराक: 200mg:kg-1 शरीर के वजन) का प्रशासन।

(iv)। मध्यम खुराक कोलेजन पेप्टाइड्स समूह (एमसीपी): यूवी उजागर प्लस डी-गैलेक्टोज; मौखिक

प्रतिदिन 0.4 एमएल सीपी (खुराक: 500 मिलीग्राम · किग्रा-1 शरीर के वजन) का प्रशासन।

(वी)। उच्च खुराक कोलेजन पेप्टाइड्स समूह (एचसीपी): यूवीएक्सपोज्ड प्लस डी-गैलेक्टोज; मौखिक प्रशासन-

प्रतिदिन 0.4 एमएल सीपी (खुराक: 1000 मिलीग्राम किग्रा-1 शरीर के वजन) का ट्रेशन।

डी-गैलेक्टोज उपचार माउस गर्दन के पीछे 0.2 एमएल 10 प्रतिशत डी-गैलेक्टोज समाधान के चमड़े के नीचे इंजेक्शन द्वारा किया गया था (खुराक:1.0g/ किग्रा-1शरीर का वजन) प्रतिदिन। यूवी विकिरण को 40 डब्ल्यू यूवीए -340 एलएएमआईपी (ओ-पैनल, क्लीवलैंड, यूएसए, पीक वेवलेंथ: 340 एनएम) के साथ किया गया था, दीपक और चूहों के पीछे की दूरी 30 सेमी (230 मीटर जे / सेमी) थी। -), और विकिरण सात सप्ताह (49 दिन) तक हर दिन 30 मिनट तक चला। विकिरण की तीव्रता को एक UVA365-रेडियोमीटर (Xinbao Keyi Electronic Technology Co., Ltd., Xi'an, China) द्वारा मापा गया था। डी-गैलेक्टोज और यूवी उपचार के एक घंटे बाद, चूहों को हर दिन मौखिक रूप से 0.4 एमएल सीपी दिया गया। अंतिम विकिरण के बाद, चूहों को संवेदनाहारी, तौला गया, और बाद के विश्लेषण के लिए ऊतकों का नमूना लिया गया।

2.5. त्वचा की नमी, आंत का सूचकांक, और शरीर का वजन बढ़ना

त्वचा की नमी आईएसओ 1442 द्वारा निर्धारित की गई थी, और आंत के सूचकांक की गणना निम्नलिखित समीकरण का उपयोग करके की गई थी: आंत का सूचकांक (g/kg)=आंत का वजन/शरीर का वजन।

2.6. ऑक्सीडेटियो तनाव, हा, और त्वचा की HYP सामग्री

एक ऊतक होमोजेनाइज़र (TGrinder OSE-Y30, Tiangen Biochemical Technology Co., Ltd., बीजिंग, चीन) के साथ बर्फ के स्नान में त्वचा के नमूनों को सामान्य खारा (w / w) की नौ गुना मात्रा के साथ समरूप बनाया गया और फिर 2000 में सेंट्रीफ्यूज किया गया। × जी और 10 मिनट के लिए 4 डिग्री। सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेज (एसओडी), कैटेलेज (सीएटी), और ग्लूटाथियोन पेरोक्सीडेज (जीएसएच-पीएक्स), और एकत्रित सतह पर तैरनेवाला में हयालूरोनिक एसिड (एचए) और हाइड्रॉक्सीप्रोलाइन (एचवाईपी) की सामग्री वर्णित विधि के अनुसार निर्धारित की गई थी। संबंधित किट के अनुरूप निर्देश।

2.7.त्वचा हिस्टोलॉजिकल

माउस त्वचा के नमूने 24 घंटे के लिए 4 प्रतिशत पैराफॉर्मलडिहाइड समाधान में तय किए गए थे, निर्जलित, पैराफिन में एम्बेडेड और कटा हुआ। त्वचा के वर्गों को हेमटॉक्सिलिन और ईओसिन (एचई) के साथ दाग दिया गया था और एक ईसीएलआईपीएसई सीआई-ई फॉरवर्ड प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप (निकॉन, जापान) के साथ देखा गया था। हैल्कॉन 13.0.1.1 सॉफ्टवेयर (एमवीटेक, म्यूनिख, जर्मनी) का उपयोग करके त्वचा के एपिडर्मिस और डर्मिस की मोटाई का मूल्यांकन किया गया था।

2.8. त्वचा प्रतिलेख अनुक्रमण

2.8.1. आरएनए एक्सट्रैक्शन, लाइब्रेरी निर्माण, और ट्रांसक्रिप्टोम सीक्वेंसिंग

निर्माता के निर्देशों के अनुसार RNeasy Mini Kit (टियांगेन बायो-केमिकल टेक्नोलॉजी कं, लिमिटेड, बीजिंग, चीन) का उपयोग करके चूहों की त्वचा से टोटल RNA निकाला गया। kaiaoK5500स्पेक्ट्रोफोटो-मीटर (Kaiao, बीजिंग, चीन) का उपयोग करके RNA की शुद्धता और एकाग्रता की जाँच की गई; आरएनए नैनो 6000 परख किट और बायोएनालाइजर 2100 सिस्टम (एगिलेंट टेक्नोलॉजीज, सांता क्लारा, सीए, यूएसए) का उपयोग करके आरएनए अखंडता का आकलन किया गया था। प्रत्येक नमूने का ट्रांसक्रिप्शनल अनुक्रमण विश्लेषण बायोलिंकर टेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड (कुनमिंग, चीन) द्वारा किया गया था। संक्षेप में, इंडेक्स-कोडेड नमूनों की क्लस्टरिंग निर्माता के निर्देशों के अनुसार HiSeq PE क्लस्टर किट v 4- cBot-HS (llu-mina) का उपयोग करके cBot क्लस्टर जनरेशन सिस्टम पर की गई थी। क्लस्टर पीढ़ी के बाद, पुस्तकालयों को एक इलुमिना प्लेटफॉर्म पर अनुक्रमित किया गया था, और 150 बीपी पेयर-एंड रीड जेनरेट किए गए थे।

2.8.2. आरएनए-अनुक्रमण डेटा का जैव सूचना विज्ञान विश्लेषण

जीन ओन्टोलॉजी (जीओ) और क्योटो एनसाइक्लोपीडिया ऑफ जीन्स एंड जीनोम्स (केईजीजी) विभेदित रूप से व्यक्त जीन (डीईजी) का एन-रिचमेंट विश्लेषण आर भाषा क्लस्टर विश्लेषक पैकेज का उपयोग करके किया गया था। जब पी-मान 0.05 से कम था, तो जीओ और केईजीजी द्वारा समृद्ध वस्तुओं और मार्गों को महत्वपूर्ण माना जाता था।

2.8.3. रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस-पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (क्यूआरटी-पीसीआर)

क्यूआरटी-पीसीआर को पहले वर्णित [19] के रूप में प्रदर्शित किया गया था।

2.9. वेस्टर ब्लॉट

पार्क एट अल द्वारा वर्णित विधि के अनुसार। [20], चूहों में त्वचा की उम्र बढ़ने से संबंधित प्रोटीन की अभिव्यक्ति की मात्रा निर्धारित करने के लिए पश्चिमी धब्बा (WB) विश्लेषण किया गया था। प्रत्येक उपचार समूह में त्वचा लाइसेट की प्रोटीन सांद्रता को बीसीए किट का उपयोग करके निर्धारित किया गया था, जिसे एसडीएस-पेज (10 प्रतिशत एक्रिलामाइड जेल) द्वारा अलग किया गया था, जिसे पीवीडीएफ झिल्ली में स्थानांतरित किया गया था, 5 प्रतिशत स्किम दूध से अवरुद्ध किया गया था, और उचित मात्रा में प्राथमिक के साथ ऊष्मायन किया गया था। एंटीबॉडी (TGF-b1, c-Fos, c-Jun, Samd2/3, और -actin) रात भर 4 डिग्री पर। टीबीएसटी से धोने के बाद, नमूनों को द्वितीयक एंटीबॉडी के साथ मिलाया गया और 1 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर ऊष्मायन किया गया।सिस्टैंच ट्यूबुलोसा समीक्षाविशिष्ट प्रोटीन का पता लगाने के लिए ChemiDoc XRS plus chemiluminescence gel इमेजर (BioRAD, Hercules, CA, USA) का उपयोग किया गया था। छवि] सॉफ्टवेयर का उपयोग प्रत्येक उपचार समूह में लक्ष्य प्रोटीन की अभिव्यक्ति की मात्रा निर्धारित करने के लिए किया गया था, और परिणामों को -एक्टिन प्रोटीन के लिए सामान्यीकृत घनत्व मूल्यों द्वारा दर्शाया गया था।

2.10.एलिसा

एमएमपी -1, एमएमपी -3, टाइप I प्रो-कोलेजन, और आईएल -1 और त्वचा लसीका द्रव में अभिव्यक्ति के स्तर एंजाइम से जुड़े इम्युनोसे द्वारा निर्धारित किए गए थे। परख किट के साथ दिए गए निर्देशों के अनुसार आयोजित की गई थी।

2.11.सांख्यिकीय विश्लेषण

सभी परिणामों का विश्लेषण SPSS 21 (IBM Inc., Armonk, NY, USA) सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके विचरण (ANOVA) और डंकन के मल्टीपल रेंज टेस्ट के एक-तरफ़ा विश्लेषण के माध्यम से किया गया था, जिसमें महत्व स्तर p पर सेट किया गया था।<0.05. originpro="" 2017(originlab,="" northampton,="" ma,="" usa)was="" used="" to="" plot="" the="" data.="" all="" data="" were="" expressed="" as="" the="" mean="" ±="" standard="" deviation="">

3) परिणाम और चर्चा

3.1. कोलेजन की अमीनो एसिड संरचना

चिकन बोन कोलेजन की अमीनो एसिड संरचना तालिका 1 में दिखाई गई है। नमूनों में ग्लाइ मुख्य अमीनो एसिड था, जो कुल अमीनो एसिड का लगभग एक-तिहाई (27.86 प्रतिशत) था, और हाइप था कोलेजन में विशेष अमीनो एसिड, 9.83 प्रतिशत के लिए लेखांकन। कोलेजन अणुओं की मुख्य विशेषताएं बार-बार ग्लाइ-एक्सवाई अनुक्रम और तीन श्रृंखलाओं से बना अद्वितीय ट्रिपल-पेचदार संरचना थी। ग्लाइक कुल अमीनो एसिड का लगभग एक-तिहाई हिस्सा होता है, एक्स और वाई अक्सर प्रोलाइन और हाइड्रॉक्सीप्रोलाइन होते हैं, या कोई अवशेष [21] हो सकते हैं। नमूने की अमीनो एसिड संरचना पिछले अध्ययनों में रिपोर्ट किए गए चिकन बोन कोलेजन के समान थी और इसमें कोलेजन की विशिष्ट विशेषताएं थीं [22]।

3.2. सीपी का आणविक भार वितरण

Molecular weight distribution reflects the degree of collagen hydrolysis. The molecular weight of the CPs was mainly below 3000 Da (Figure 1), accounting for about 87.61%of all collagen hydrolysates, indicating that almost all of the CPs were small peptides. Many studies claim that collagen peptides with a lower molecular weight have better biological activity [23]. For example, Song et al. [24]. reported that lower molecular weight (200-1000 Da, 65%)silver carp skin collagen peptides repaired UV-induced aging skin in mice more effectively than similar peptides with a higher molecular weight(>1000 दा, 72 प्रतिशत)। हालांकि, जर्मन गेलिटा कंपनी ने कई नैदानिक ​​अध्ययनों के माध्यम से दिखाया कि कोलेजन पेप्टाइड्स का प्रभाव मुख्य रूप से कोलेजन पेप्टाइड्स के आणविक भार के बजाय मानव कोलेजन के क्षरण के बाद कोलेजन पेप्टाइड्स के गुणों के साथ इसकी मिलान डिग्री से निर्धारित होता है। उन्होंने पाया कि 2000 Da के औसत आणविक भार वाले उत्पाद VERISOL③ का त्वचा के फाइब्रोब्लास्ट पर सबसे अधिक उत्तेजक प्रभाव पड़ता है, जबकि उत्पाद FortigelTM का औसत आणविक भार 3000 Da का उपास्थि की मरम्मत [25-27] पर विशेष प्रभाव पड़ता है।

3.3. त्वचा की उम्र बढ़ने को कम करने पर ओरल सीपी का प्रभाव

3.3.1.शरीर का वजन और अंग सूचकांक

शरीर-भार सूचकांक और अंग सूचकांक महत्वपूर्ण हैं और चूहों की स्वास्थ्य स्थिति को दर्शाते हैं। परीक्षण अवधि (तालिका 2) के दौरान प्रत्येक समूह में चूहों का वजन सामान्य रूप से बढ़ जाता है। एम समूह का औसत वजन एन समूह की तुलना में कम था, और सीपी उपचार समूहों की तुलना में एम समूह की तुलना में अधिक था, यह सुझाव देते हुए कि सीपी का चूहों पर कोई दुष्प्रभाव नहीं था। पिछली रिपोर्टों में, कोलेजन पेप्टाइड-उपचारित चूहों की खुराक ज्यादातर 100-1000 mg/kg.bw·d के बीच थी, और तिलापिया कोलेजन पेप्टाइड्स की सुरक्षित खुराक 4.07 g/kg.bw·d [{{6} तक पहुंच गई थी। }]. इसी तरह, तिलापिया स्केल कोलेजन पेप्टाइड्स (खुराक: 500 और 1000 मिलीग्राम/किग्रा · बीडब्ल्यू · डी) के साथ गैवेज के बाद त्वचा-वृद्ध चूहों की वृद्धि भी हमारे परिणामों के समान थी [29]। प्लीहा हास्य और सेलुलर प्रतिरक्षा में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, इस प्रकार, प्लीहा सूचकांक का उपयोग अक्सर प्रतिरक्षा प्रणाली के कार्य का मूल्यांकन करने के लिए किया जाता है।सिस्टैंच यूकेThe liver index was used to evaluate the toxicity of the tested sample. In these tests, the liver and spleen indices in the M group were lower than those in the N group, and both recovered after treatment with CPs, but there was no significant difference across the treatment groups (p >0.05). परिणाम पिछले अध्ययनों के समान थे [30], यह दर्शाता है कि सीपी सुरक्षित हैं और चूहों की प्रतिरक्षा में थोड़ा सुधार कर सकते हैं।

3.3.2.त्वचा की संरचना

यूवी और डी-गैलेक्टोज उपचार (एम समूह) ने एन समूह की तुलना में त्वचा में नमी, एचए और हाइप सामग्री को क्रमशः 13.36 प्रतिशत, 24.08 प्रतिशत और 15.83 प्रतिशत कम कर दिया।<0.05)(table 2).="" the="" contents="" of="" moisture,="" ha,="" and="" hyp="" in="" the="" skin="" were="" significantly="" higher="" in="" mice="" after="" the="" oral="" administration="" of="" cps="" compared="" to="" the="" contents="" of="" those="" in="" the="" mice="" of="" the="" m="" group=""><0.05). among="" the="" dose="" groups,="" the="" contents="" of="" the="" three="" skin="" components="" were="" significantly="" different="" between="" the="" lcp="" and="" hcp="" groups="" and="" were="" dependent="" on="" the="" dose="" of="" intake="" of="" cps.="" the="" hcp="" group="" had="" even="" higher="" contents="" than="" the="" n="" group,="" and="" ha="" and="" hyp="" were="" significantly="" different="" between="" the="" two="" groups="" (p=""><>

त्वचा की नमी की मात्रा में परिवर्तन के कारण झुर्रियाँ और त्वचा ढीली हो जाती है और मैट्रिक्स घटकों जैसे त्वचा कोलेजन और HA [31] से प्रभावित होते हैं। हाइड्रोक्सीप्रोलाइन कोलेजन में एक स्थिर, समृद्ध और विशेष अमीनो एसिड है, और इसकी सामग्री परोक्ष रूप से त्वचा में कोलेजन की सामग्री को प्रतिबिंबित कर सकती है, साथ ही त्वचा की उम्र बढ़ने के साथ-साथ, एचए, जो त्वचा ईसीएम में अत्यधिक व्यक्त किया जाता है, एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है जल भंडारण प्रणाली और त्वचा के संरचनात्मक घटक के रूप में त्वचा के जल संतुलन, आसमाटिक दबाव, नमी प्रतिधारण, और लोच को नियंत्रित करने में [32]। इस अध्ययन में, सीपी सेवन के बाद त्वचा में नमी, HYP और HA की मात्रा में काफी वृद्धि हुई, जो कि CPs द्वारा कोलेजन और HA संश्लेषण को बढ़ावा देने से संबंधित हो सकता है। इसके अलावा, HYP और HA में वृद्धि ने नमी की मात्रा को बढ़ा दिया।

3.3.3. त्वचा ऊतकीय परिवर्तन

सात सप्ताह के निरंतर उपचार के बाद चूहों की पीठ की त्वचा के ऊतकीय परिवर्तन चित्र 2 में दिखाए गए हैं। एम समूह की उम्र बढ़ने वाली त्वचा ने त्वचा की तुलना में खुरदरी सतह, मोटी एपिडर्मिस, पतली डर्मिस और विरल कोशिकाओं की विशेषताओं को दिखाया। एन समूह। हालांकि, सीपी के मौखिक प्रशासन के बाद चूहों में उम्र बढ़ने की त्वचा की स्थिति में सुधार हुआ, एन समूह के चूहों के समान एक चिकनी, व्यवस्थित और पूर्ण संरचना बनाए रखी। इस प्रकार, त्वचा की त्वचा काफी पतली थी, और एपिडर्मिस एम समूह में एन समूह (पी) की तुलना में काफी मोटा था।<0.05). the="" change="" in="" skin="" dermis="" and="" epidermal="" thickness="" was="" significantly="" better="" after="" treatment="" with=""><0.05), and="" the="" effect="" was="" more="" obvious="" with="" the="" increase="" in="" the="" dose="" of="" cps="" (figure="" 2).the="" effect="" of="" oral="" cps="" on="" the="" histological="" structure="" of="" aging="" skin="" was="" similar="" to="" that="" reported="" previously="" [4,28,31].="" the="" increase="" in="" the="" thickness="" of="" the="" epidermis="" might="" be="" an="" adaptive="" change="" to="" protect="" the="" skin="" from="" external="" stimuli,loss="" of="" skin="" moisture,="" and="" uv="" damage,="" possibly="" due="" to="" the="" increase="" in="" uv-activated="" epidermal="" growth="" factor="" receptor="" (egfr)="" that="" induces="" keratinocyte="" proliferation="" and="" epidermal="" hyperplasia[4].="" however,="" the="" mechanism="" by="" which="" oral="" cps="" alleviate="" the="" increase="" in="" epidermal="" thickness="" remains="" unclear.="" the="" dermis="" imparts="" elasticity="" and="" strength="" to="" the="" skin,="" and="" the="" degradation="" of="" ecm="" and="" the="" reduction="" in="" the="" ability="" to="" repair="" fibroblasts="" are="" the="" main="" causes="" of="" dermal="" thinning="" in="" aging="" skin.="" dermal="" thickness="" increased="" after="" the="" treatment="" with="" cps,="" which="" might="" be="" due="" to="" the="" removal="" of="" ros="" from="" the="" skin="" and="" inhibition="" of="" the="" increase="" of="" mmps="" by="" cps.="" this,="" in="" turn,="" inhibited="" the="" degradation="" of="" skin="" collagen="" and="" elastin="" (figure="" 3),="" the="" entry="" of="" cps="" in="" the="" skin,="" and="" their="" participation="" in="" the="" synthesis="" of="" collagen="" and="" ha="" [6],="" which="" was="" confirmed="" by="" the="" increase="" in="" the="" content="" of="" hyp="" and="" ha="" in="" the="" skin="" (table="">

3.3.4. त्वचा एंटीऑक्सीडेंट और सूजन स्तर

एंटीऑक्सिडेंट एंजाइम की गतिविधि का निर्धारण शरीर में एंटीऑक्सीडेंट स्तर का मूल्यांकन करने के लिए सबसे अधिक इस्तेमाल किया जाने वाला तरीका है [28]। जैसा कि चित्र 3 में दिखाया गया है, एम समूह में कैट, एसओडी, जीएसएच-पीएक्स और एमडीए सामग्री की गतिविधियां एन समूह (पी) की तुलना में काफी कम थीं।<0.05). administering="" cps="" effectively="" inhibited="" the="" decrease="" of="" cat,="" sod,="" gsh-pxactivities,and="" the="" mda="" content="" in="" the="" skin="" of="" mice,="" compared="" to="" those="" in="" the="" mice="" skin="" of="" the="" m="" group,="" and="" was="" positively="" correlated="" with="" the="" dose="" of="" cps;="" there="" were="" significant="" differences="" among="" the="" different="" dose="" groups=""><0.05). when="" ros,="" accumulated="" by="" skin="" oxidative="" stress,="" exceed="" the="" antioxidant="" defense="" ability="" of="" the="" body,="" they="" destroy="" the="" ecm,="" which="" is="" the="" key="" cause="" of="" skin="" aging.="" ros="" can="" cause="" the="" oxidation="" of="" lipids="" and="" proteins="" in="" the="" skin,="" resulting="" in="" fibroblast="" degeneration="" and="" changes="" in="" the="" skin.="" ros="" activate="" the="" mapk="" signaling="" pathway="" and="" the="" ap-1="" protein="" to="" upregulate="" the="" expression="" of="" mmps="" and="" promote="" the="" degradation="" of="" matrixcollagen="" [21].="" although="" the="" antioxidant="" enzymes="" and="" antioxidants="" in="" the="" body="" can="" remove="" ros="" to="" protect="" the="" skin="" from="" damage,="" when="" the="" content="" of="" rosexceeds="" the="" defense="" (antioxidant)="" ability="" of="" the="" body="" or="" the="" body's="" defense="" ability="" declines,="" it="" causes="" oxidative="" stress="" and="" skin="">

इसके अतिरिक्त, आरओएस के कारण होने वाली सेलुलर भड़काऊ प्रतिक्रिया भी त्वचा की उम्र बढ़ने में योगदान करती है। यूवी और डी-गैलेक्टोज उपचार (एमग्रुप) के बाद, चूहों की त्वचा में आईएल-लो की सामग्री एन समूह (चित्रा 3 डी) की तुलना में काफी बढ़ जाती है। ), यह दर्शाता है कि त्वचा ने एक महत्वपूर्ण भड़काऊ प्रतिक्रिया दिखाई (p<0.05). the="" cps="" significantly="" reduced="" the="" content="" of="" il-1α="" in="" the="" skin="" in="" a="" dose-dependent="" manner,="" compared="" to="" that="" in="" the="" skin="" of="" mice="" in="" the="" m="" group.="" there="" was="" a="" significant="" difference="" between="" hcps="" and="" lcps=""><0.05),indicating that="" cps="" alleviated="" skin="" inflammation.="" the'o,="" produced="" by="" ultraviolet="" irradiation="" stimulated="" the="" expression="" of="" mmp-1="" in="" dermal="" fibroblasts="" through="" the="" secretion="" of="" il-1α="" and="" il-6,="" thereby="" disrupting="" the="" ecm="" [33].="" therefore,="" this="" study="" suggested="" that="" cps="" significantly="" increased="" the="" activity="" of="" skin="" antioxidant="" enzymes="" and="" inhibited="" inflammatory="" responses,="" which="" might="" be="" important="" in="" delaying="" skin="" aging="" in="">

3.4. त्वचा की उम्र बढ़ने को कम करने में आहार सीपी की क्रिया का तंत्र

3.4.1. RNA-Seq डेटा का विश्लेषण और सत्यापन

Analysis techniques, such as PCA, HCA, gene GOenrichment, and KEGG pathway enrichment were used to analyze the transcriptome data. Based on the PCA analysis (Figure 4A) and hierarchical clustering analysis (heat map)of 4303 differential genes with average channel strength greater than 100, the relative expression levels of total DEGs between the two treatment groups are shown to provide an overview of the changes in gene expression(Figure 4B). The M group and the HCP group were significantly separated, and the expression patterns of most DEGs in the M and HCP groups were opposite, indicating that there were significant differences between the mouse skin after HCP treatment and the M group (Figure 4A,B). Pairwise comparisons showed that after feeding HCPs,4303 genes were significantly expressed in the mice skin, including 1790 upregulated genes and 2513 downregulated genes(Foldchange>2,p<0.05)(figure 4c).among="" the="" sixgenes="" associated="" with="" skin="" aging="" quantified="" by="" qrt-pcr,="" five="" genes="" (including="" fos,="" jun,="" cxcll,and="" egr1)were="" downregulated,="" and="" one="" gene="" was="" upregulated="" (figure="" 4d),="" which="" was="" consistent="" with="" the="" overall="" trend="" of="" transcriptomic="" data.="" the="" rna="" expression="" levels="" of="" fos,="" jun,="" and="" cxcll="" were="" significantly="" upregulated="" in="" damaged="" skin="" compared="" to="" that="" in="" intact="" skin="" [34],="" and="" inhibition="" of="" egr1="" expression="" alleviated="" skin="" inflammation="" [35].="" these="" results="" reflected="" the="" reliability="" of="" transcriptome="" sequencing="" data,="" and="" oral="" cps="" effectively="" alleviated="" skin="">

GOenrichment विश्लेषण और KEGG डेटाबेस संवर्धन विश्लेषण ने DEGs के जैविक कार्यों की और जाँच के लिए सहायता प्रदान की। जीओ विश्लेषण से पता चला कि डीईजी जैविक प्रक्रियाओं जैसे डीएनए प्रतिकृति, हेमोपोइजिस के विनियमन, हाइड्रोलेस गतिविधि के विनियमन और साइटोकिन उत्पादन में काफी समृद्ध थे; सेल कंपोनेंट्स में, जिसमें लिटिक वेक्यूल और लाइसोसोम शामिल थे, कोलेजन युक्त और अन्य संबंधित जीन काफी समृद्ध थे; आणविक कार्य के संदर्भ में, रिसेप्टर-लिगैंड सक्रियता, साइटोकाइन गतिविधि, और अन्य संबंधित जीन काफी समृद्ध थे (चित्र 5)। DEG द्वारा महत्वपूर्ण रूप से परिवर्तित किए गए पहले 20 सिग्नल पथों का KEGG संवर्धन विश्लेषण चित्र 5 में दिखाया गया है। साइटोकाइन-रिसेप्टर इंटरैक्शन, लाइसोसोम, न्यूरोएक्टिव लिगैंड-रिसेप्टर इंटरैक्शन, सेल साइकिल, सिस्टमिक ल्यूपस एरिथेमेटोसस, और टीजीएफ-पाथवे (पी)<05) were="" closely="" related="" to="" aging,="" especially="" cytokine-receptor="" interactions,="" lysosomes,="" and="" tgf-βsignaling.="" an="" important="" feature="" of="" cellular="" senescence="" is="" the="" accumulation="" of="" damaged="" or-ganelles="" and="" protein="" aggregates.="" lysosomes="" play="" an="" important="" role="" in="" degrading="" damaged="" organelles="" and="" protein="" aggregates="" in="" senescent="" cells="" [36].="" cytokine-receptor="" interaction="" is="" the="" main="" pathway="" of="" enrichment="" in="" the="" skin="" after="" being="" affected="" by="" various="" factors="" such="" as="" inflammation="" [37],="" sulfur="" mustard="" exposure="" [38],="" and="" terahertz="" pulse="" [39].="" cytokines,="" as="" small="" molecular="" proteins="" synthesized="" and="" secreted="" by="" various="" tissue="" cells,="" maintain="" skin="" homeostasis="" by="" controlling="" the="" balance="" between="" keratinocyte="" proliferation,="" diferentiation,="" and="" apoptosis="" through="" complex="" interactions="" with="" growth="" factors[40].="" the="" tgf-β="" signaling="" pathway="" is="" also="" important="" for="" regulating="" skin="" aging[14].="" gene="" functional="" enrichment="" anal-ysis="" showed="" that="" tgf-β="" was="" highly="" expressed="" during="" cytokine-receptor="" interaction="" and="" in="" the="" tgf-β="" signaling="" pathway.="" tgf-β="" is="" a="" major="" pro-fibrotic="" cytokine="" that="" regulates="" cell="" differentiation="" and="" proliferation="" while="" inducing="" extracellular="" matrix="" protein="" synthesis="" [41].="" therefore,="" we="" verified="" the="" tgf-β="" signaling="" pathway="" and="" some="">

3.4.2. त्वचा की उम्र बढ़ने को कम करने में सीपी की कार्रवाई के तंत्र का सत्यापन

मौखिक सीपी द्वारा त्वचा की उम्र बढ़ने को कम करने में टीजीएफ-सिग्नलिंग पाथवे और साइटोकाइन-रिसेप्टर इंटरैक्शन की भूमिका को सत्यापित करने के लिए, टीजीएफ-सिग्नलिंग मार्ग में टीजीएफ- और ट्रांसक्रिप्शन फैक्टर स्मैड2/3 को सत्यापित करने के लिए डब्ल्यूबी विश्लेषण किया गया था, साथ ही साथ कुंजी भी। प्रतिलेखन कारक एपी -1 (सी-फॉस और सी-जून) जो साइटोकिन्स को नियंत्रित करता है। एमएमपी-1, एमएमपी-3, टाइप I प्रो-कोलेजन, और आईएल-1 की सामग्री एलिसा द्वारा निर्धारित की गई थी। WB विश्लेषण के परिणामों से पता चला है कि समूह M में TGF-, Smad2 और Smad3 की अभिव्यक्ति समूह N (p) की तुलना में काफी कम थी।<0.05). the="" expression="" levels="" of="" tgf-β="" and="" smad3="" were="" significantly="" higher="" in="" mice="" after="" the="" oral="" administration="" of="" cps="" compared="" to="" their="" levels="" in="" group="" m="" mice;="" additionally,="" smad2="" also="" increased=""><0.05), except="" for="" in="" the="" lcps="" in="" a="" dose-dependent="" manner(figure="" 6).="" on="" the="" contrary,="" the="" expression="" of="" c-fos="" and="" c-jun="" in="" the="" mgroup="" was="" significantly="" higher="" than="" that="" in="" the="" n="" group.="" the="" expression="" of="" c-fos="" and="" c-jun="" in="" the="" cp="" group="" was="" significantly="" lower="" than="" that="" in="" the="" m="" group,="" except="" for="" the="" expression="" of="" c-jun="" in="" the="" lcp="" group=""><0.05), and="" the="" change="" was="" dose-dependent.="" these="" results="" indicated="" that="" the="" tgf-β="" signaling="" pathway="" was="" activated="" and="" ap-1="" was="" inhibited="" after="" feeding="">

एपी-1 प्रोटीन जून और फॉस परिवार के प्रोटीन का एक डिमेरिक कॉम्प्लेक्स है और त्वचा की सूजन और साइटोकिन अभिव्यक्ति का एक महत्वपूर्ण नियामक है। आम तौर पर, सी-जून और सी-फॉस से बना कॉम्प्लेक्स त्वचा में उच्चतम ट्रांसक्रिप्शनल गतिविधि दिखाता है [41, ए42]। उम्र बढ़ने वाली त्वचा कोशिकाओं में उत्पादित आरओएस पहले एपी -1 प्रोटीन को सक्रिय करता है और फिर डाउनस्ट्रीम साइटोकिन्स (जैसे आईएल -1), एमएमपी और टीजीएफ- सिग्नलिंग मार्ग को ट्रांसक्रिप्शन और अनुवाद के माध्यम से नियंत्रित करता है, इस प्रकार त्वचा की उम्र बढ़ने की सुविधा प्रदान करता है [43 ,44]। TGF- / Smad सिग्नलिंग प्रतिक्रिया एक शास्त्रीय कोलेजन संश्लेषण मार्ग है, और Smad प्रतिलेखन कारक इस संकेत पारगमन मार्ग के मूल में है। TGF- रिसेप्टर से जुड़कर डाउनस्ट्रीम Smad2 और Smad3 के फॉस्फोराइलेशन और सक्रियण को ट्रिगर करता है, जिससे COLI [14] का संश्लेषण बढ़ जाता है।

इसके अतिरिक्त, एलिसा परिणामों से पता चला कि एम समूह की त्वचा में एमपी-1, एमएमपी-3, और आईएल-1ए की सामग्री एन समूह की तुलना में काफी अधिक थी, और टाइपल प्रो-कोलेजन की सामग्री काफी कम थी (पी .)<0.05). however,="" the="" contents="" of="" mmp-1,mmp-3,and="" il-1α(figure="" 3d)in="" the="" skin="" after="" oral="" administration="" of="" cps="" were="" significantly="" lower="" than="" those="" in="" the="" m="" group=""><0.05); type="" i="" pro-collagen="" increased="" significantly,="" and="" all="" the="" changes="" were="" dose-dependent="" with="" cps="" (figure="" 7).="" mps="" are="" involved="" in="" the="" decomposition="" of="" skin="" collagen,="" il-1o="" shows="" the="" level="" of="" inflammation="" of="" the="" skin,="" and="" type="" i="" pro-collagen="" reflects="" the="" synthesis="" of="" skin="" collagen.="" accumulating="" evidence="" suggests="" that="" the="" role="" of="" the="" jun/ap-1="" protein="" pathway="" has="" also="" been="" proposed="" to="" regulate="" skin="" inflammation="" [40].="" the="" elisa="" results="" showed="" that="" the="" combined="" treatment="" of="" uv="" and="" d-galactose="" caused="" skin="" collagen="" degradation,="" decreased="" collagen="" synthesis,="" and="" caused="" skin="" inflammation,="" leading="" to="" skin="" aging.="" however,="" these="" changes="" were="" reversed="" after="" the="" oral="" administration="" of="">

उपरोक्त रास्तों के अलावा, इस अध्ययन में, सीपी उपचार के बाद अप-विनियमित जीन को लाइसोसोम मार्ग में काफी समृद्ध किया गया था, यह दर्शाता है कि सीपी उपचार त्वचा में लाइसोसोम को सक्रिय करता है (चित्र 5)। पिछले अध्ययनों से संकेत मिलता है कि सक्रिय लाइसोसोम उम्र बढ़ने के दौरान समुच्चय को साफ करते हैं और पुराने तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं की सक्रियता को बढ़ाते हैं [45]। इनके अलावा, लाइसोसोम का वृद्धि कार्य कोशिका निष्क्रियता को रोकने के लिए इंट्रासेल्युलर आरओएस की एकाग्रता को कम कर सकता है। इसी तरह, लाइसोसोम फ़ंक्शन में कोई भी कमी इंट्रासेल्युलर आरओएस एकाग्रता को बढ़ा सकती है जो अंततः सेल डॉर्मेंसी को बढ़ावा देती है [46] हालांकि हमने इसे इस पेपर में व्यवस्थित रूप से सत्यापित नहीं किया है, इन परिणामों और पिछली रिपोर्टों का अर्थ है कि लाइसोसोमल फ़ंक्शन का सक्रियण मुख्य तरीका हो सकता है सीपी त्वचा की उम्र बढ़ने को कम करने के लिए, और हम इसे सत्यापित करने का लक्ष्य जारी रखेंगे।

इसलिए, इस अध्ययन से पता चला है कि आहार सीपी खुराक पर निर्भर तरीके से यूवी और डी-गैलेक्टोज से प्रेरित त्वचा की उम्र बढ़ने को कम कर सकते हैं। सीपी त्वचा के ऑक्सीकरण स्तर को कम करके त्वचा की उम्र बढ़ने को कम करते हैं, प्रमुख प्रतिलेखन कारकों एपी -1 (सी-जून और सी-फॉस) की अभिव्यक्ति को रोकते हैं, कोलेजन संश्लेषण को बढ़ावा देने के लिए टीजीएफ- / स्मैड सिग्नलिंग मार्ग को सक्रिय करते हैं, की अभिव्यक्ति को रोकते हैं। एमएमपी -1 और एमएमपी -3 (जो कोलेजन क्षरण को रोकते हैं), और त्वचा की उम्र बढ़ने को कम करने के लिए त्वचा की सूजन को रोकते हैं (चित्र 8)। इसके अलावा, वर्तमान अध्ययन में हमारे निष्कर्ष यह भी बताते हैं कि सक्रिय लाइसोसोम एक हो सकता है त्वचा की उम्र बढ़ने को नियंत्रित करने के लिए सीपी के लिए महत्वपूर्ण मार्ग, जो विशेष ध्यान देने योग्य है।

4। निष्कर्ष

सारांश में, इस अध्ययन ने पुष्टि की कि चिकन बोन कोला-जेन पेप्टाइड्स के आहार पूरकता कई मार्गों के माध्यम से पराबैंगनी विकिरण और डी-गैलेक्टोज से प्रेरित त्वचा की उम्र बढ़ने को कम कर सकती है, जिसमें प्रो-कोलेजन संश्लेषण को बढ़ावा देना, कोलेजन गिरावट को रोकना, त्वचा के एंटीऑक्सीडेंट स्तर में सुधार करना शामिल है। और सूजन-टियोन को रोकना; उन्मूलन सीपी के साथ खुराक पर निर्भर था। एक विस्तृत जांच से पता चला है कि सीपी पहले त्वचा के ऑक्सीकरण के स्तर को कम करते हैं, प्रमुख प्रतिलेखन कारक एपी -1 (सी-जून और सी-फॉस) की अभिव्यक्ति को रोकते हैं, और फिर टीजीएफ- / स्मैड सिग्नलिंग मार्ग को बढ़ावा देने के लिए सक्रिय करते हैं। कोलेजन संश्लेषण, एमएमपी -1 और एमएमपी -3 की अभिव्यक्ति को रोकता है, कोलेजन क्षरण को रोकता है, और चूहों में त्वचा की उम्र बढ़ने को कम करने के लिए त्वचा की सूजन को रोकता है। इसके अलावा, त्वचा की उम्र बढ़ने को कम करने के लिए सीपी के लिए लाइसोसोम की सक्रियता भी मुख्य मार्ग हो सकती है, जो अनुवर्ती अनुसंधान और सत्यापन के योग्य है। ये परिणाम त्वचा की उम्र बढ़ने को कम करने और कार्यात्मक खाद्य पदार्थों में पशु उप-उत्पादों के व्यापक उपयोग के दायरे को व्यापक बनाने के लिए कोलेजन पेप्टाइड्स को लागू करने के लिए एक सैद्धांतिक आधार प्रदान करते हैं।

यह लेख पोषक तत्वों 2022, 14, 1622 से निकाला गया है। https://doi.org/10.3390/nu14081622 https://www.mdpi.com/journal/nutrients