स्ट्रेप्टोमाइसेस से बायोएक्टिव सामग्री का उपयोग करके बहुक्रियाशील कॉस्मेटिक क्रीम का विकास

राम हरि दहाली1 , तुआन मान गुयेन1,2, दांग सेप शिमो3, जून यंग किम4, जंग्युल ली4 और जैसू कि1,*

सार:एक ही कार्य वाले विभिन्न सौंदर्य प्रसाधनों का तेजी से उपयोग किया जा रहा है, लेकिन बहुक्रियाशील गतिविधियों वाले सौंदर्य प्रसाधन सीमित रहते हैं। हमने एक बहु-कार्यात्मक कॉस्मेटिक क्रीम विकसित करने का लक्ष्य रखा है जिसमेंएंटीऑक्सिडेंट, एंटी-टायरोसिनेज, एंटी-एजिंग और एंटीमाइक्रोबियल गतिविधियां। डिस्क प्रसार विधि द्वारा रोगाणुरोधी गतिविधियों का प्रदर्शन किया गया। सेल विषाक्तता और सेल प्रसार का मूल्यांकन एक 96-वेल प्लेट में विभिन्न सेल लाइनों जैसे HaCaT, RAW264.7, CCD-986Sk, B16F1, और B16F10 के साथ किया गया था। मशरूम टाइरोसिनेज निषेध, इलास्टेज निषेध, और 1,1-डिपेनिल-2-पिक्रिलहाइड्राज़िल (DPPH) कट्टरपंथी मैला ढोने की गतिविधियों का मूल्यांकन किया गया और IC50 की गणना की गई। मेसोपोरस सिलिका कण को ​​प्लुरोनिक P123 और टेट्राएथिल ऑर्थो-सिलिकेट (TEOS) का उपयोग करके संश्लेषित किया गया था। चेहरे की तस्वीरें VISIA-CR (फेशियल इमेजिंग सिस्टम फॉर क्लिनिकल रिसर्च) द्वारा कैप्चर की गईं। छवि की खुरदरापन का विश्लेषण PRIMOS सॉफ़्टवेयर द्वारा किया गया था और छवि की चमक का विश्लेषण Chromameter CR-400 द्वारा किया गया था। स्ट्रेन T65 के कच्चे उत्पाद ने विभिन्न मानव रोगजनक बैक्टीरिया जैसे बैसिलस सबटिलिस, एस्चेरिचिया कोलाई, प्रोपियोनीबैक्टीरियम एक्ने, स्टैफिलोकोकस ऑरियस, स्यूडोमोनास एरुगिनोसा और स्टैफिलोकोकस एपिडर्मिडिस को रोक दिया। मशरूम टायरोसिनेस, इलास्टेज, और डीपीपीएच रेडिकल मैला ढोने की गतिविधियों के लिए T65 कच्चे उत्पाद का IC50 क्रमशः 58.73, 14.68 और 6.31 ug/mL था। T65 क्रूड उत्पाद प्रोलिफ़ेरेटेड कोलेजन टाइप I में CCD-986Sk सेल 145.91 प्रतिशत ± 9.11 प्रतिशत (मतलब ± SD; 24, 48, और 72 h का माध्य) 250 pg/mL पर। सिंथेसाइज्ड मेसोपोरस पार्टिकल्स (SBA-15) ने तीन दिनों के लिए कंट्रोल-रिलीज़ द्वारा स्थायी प्रदर्शन की पुष्टि की। T65 एम्बेडेड SBA -15 युक्त कार्यात्मक कॉस्मेटिक क्रीम तैयार की, 4 सप्ताह के आवेदन के बाद त्वचा की खुरदरापन में 4.670 प्रतिशत की कमी आई और त्वचा की चमक में 0.472 प्रतिशत की वृद्धि हुई। T65 कच्चे उत्पाद ने ग्राम-पॉजिटिव और ग्राम-नेगेटिव दोनों रोगजनकों को रोक दिया। संश्लेषित मेसोपोरस कण, SBA -15, ने पुष्टि की कि शारीरिक रूप से सक्रिय पदार्थ स्थायी रिलीज की स्थिति में जारी किया गया था। T65 कच्चे उत्पाद ने त्रुटिहीन रोगाणुरोधी दिखाया,एंटीऑक्सिडेंटमानव त्वचा से संबंधित विभिन्न सेल लाइनों के लिए गैर-साइटोटॉक्सिक प्रभावों के साथ एंटी-एजिंग और व्हाइटनिंग गतिविधियां।

कीवर्ड: एंटीऑक्सीडेंट; साइटोटोक्सिसिटी; एंटी-टायरोसिनेस; बुढ़ापा विरोधी; रोगाणुरोधी; मेसोपोरस सिलिका कण; कॉस्मेटिक फॉर्मूलेशन; सौंदर्य अनुप्रयोग

सिस्टैंच ने साम्राज्य की जड़ी-बूटियाँ खो दींएक भी हैत्वचा को गोरा करने का प्रभाव.

1 परिचय

त्वचा मानव शरीर का सबसे बड़ा अंग और बाहरी आवरण है। त्वचा की दृश्य उपस्थिति उम्र, लिंग, स्वास्थ्य, आकर्षण और सुंदरता का आकलन करने की अनुमति देती है [1,2]। कॉस्मेटिक उत्पादों का व्यापक रूप से त्वचा की उपस्थिति को बढ़ाने और त्वचा की उम्र बढ़ने को कम करने के लिए उपयोग किया जाता है। इसके अलावा, सौंदर्य प्रसाधनों के सामयिक अनुप्रयोग से पता चलता है कि चेहरे के विपरीत से जुड़े सौंदर्य के कारकों में हेरफेर करके आकर्षण कैसे बढ़ाया जाए [3,4]। कॉस्मेटिक उद्योग स्किनकेयर दृष्टिकोणों को बेहतर बनाने के लिए कॉस्मीक्यूटिकल फॉर्मूलेशन के लिए एंटी-एजिंग, एंटीऑक्सिडेंट, एंटी-टायरोसिनेस और एंटीमाइक्रोबियल गुणों के साथ उपन्यास और प्राकृतिक बायोएक्टिव सामग्री की लगातार खोज कर रहे हैं [5,6]।

त्वचा की उम्र बढ़ना एक जटिल जैविक प्रक्रिया है जो विभिन्न आंतरिक और बाहरी कारकों के कारण होती है जो शारीरिक शिथिलता और त्वचा की संरचनात्मक अखंडता के नुकसान की ओर ले जाती है। आंतरिक उम्र बढ़ने, जिसे आमतौर पर त्वचा की प्राकृतिक उम्र बढ़ने (कालानुक्रमिक उम्र बढ़ने) के रूप में जाना जाता है, उम्र के आधार पर हार्मोनल परिवर्तनों से संबंधित है, जबकि बाहरी उम्र बढ़ने का संबंध मांसपेशियों की गति, प्रदूषण, निकोटीन, सौर विकिरण के संपर्क, कैफीन, तापमान, जीवन शैली से जुड़ा है। आहार (पोषण), नींद की कमी, तनाव और अन्य स्वास्थ्य स्थितियों [7–9] के रूप में। इलास्टिन आंदोलन के बाद त्वचा को उसकी मूल स्थिति में लौटने में मदद करता है, जबकि एसिनर कोशिकाओं में उत्पादित इलास्टेज इलास्टिन को नीचा दिखाता है और त्वचा की उम्र बढ़ने की ओर जाता है [9]। एंटी-इलास्टेज इलास्टेज को रोकता है और इलास्टिन को उसकी प्रारंभिक स्थिति में बनाए रखता है, जो त्वचा को उम्र बढ़ने से रोकता है। एंटी-एजिंग गुणों वाले कॉस्मेटिक या स्किनकेयर उत्पाद त्वचा की उम्र बढ़ने पर सकारात्मक प्रभाव डालते हैं [10-13]।

मुक्त कण आमतौर पर सेलुलर चयापचय के दौरान उत्पन्न होते हैं। प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियां (आरओएस) और प्रतिक्रियाशील नाइट्रोजन प्रजातियां (आरएनएस), जैसे कि आयन रेडिकल, सुपरऑक्साइड, पेरोक्साइड, हाइड्रॉक्सिल रेडिकल, नाइट्रिक ऑक्साइड (एनओ), पेरोक्सीनाइट्राइट और हाइपोक्लोरस एसिड कोशिकाओं, लिपिड, प्रोटीन को ऑक्सीडेटिव क्षति के लिए जिम्मेदार हैं। और डीएनए, एथेरोस्क्लेरोसिस, कार्सिनोजेनेसिस, हृदय रोग, सेलुलर उम्र बढ़ने, पुरानी सूजन, मधुमेह, उच्च रक्तचाप, उत्परिवर्तन, न्यूरोडीजेनेरेशन, रुमेटीइड गठिया, स्ट्रोक, सेप्टिक शॉक और अन्य अपक्षयी रोगों के लिए अग्रणी [7,14-17]। एंटीऑक्सिडेंट प्रोटीन के ऑक्सीकरण और आरओएस और आरएनएस की पीढ़ी को रोकते हैं जो ऑक्सीडेटिव तनाव [17-19] का मुकाबला करके सामान्य ऊतकों को मुक्त-कट्टरपंथी क्षति को कम कर सकते हैं।

त्वचा एक गहरे रंग का रंगद्रव्य पैदा करती है जिसे मेलेनिन कहा जाता है। मेलेनिन का उत्पादन त्वचा को यूवी-प्रेरित क्षति [9] से बचाता है। हालांकि, मेलेनिन का अधिक उत्पादन और संचय त्वचीय हाइपरपिग्मेंटेशन का कारण बनता है, जिससे मेलास्मा, झाई, सेनील लेंटिगिन्स, नेवस और एफेलिस [9,20] जैसी सौंदर्य संबंधी जटिलताएं होती हैं। टायरोसिनेस मेलेनोसोम की झिल्लियों में पाया जाने वाला एक ग्लाइकोप्रोटीन है जो एल-टायरोसिनेस के हाइड्रॉक्सिलेशन द्वारा 3,4-डायहाइड्रोक्सीफेनिलएलनिन (एल-डीओपीए) और बाद में एल-डीओपीए के डोपाक्विनोन [21] के ऑक्सीकरण द्वारा मेलेनिन जैवसंश्लेषण के लिए जिम्मेदार है। स्वतःस्फूर्त पोलीमराइजेशन के कारण, डोपाक्विनोन अंततः मेलेनिन [22] में परिवर्तित हो जाता है। त्वचा की अखंडता को बनाए रखने के लिए अधिक उत्पादित मेलेनिन को नियंत्रित किया जाना चाहिए। यही कारण है कि cosmeceutical योगों के विकास के लिए उपन्यास tyrosinase अवरोधकों की खोज में महत्वपूर्ण रुचि प्राप्त हुई है [23-25]।

उनके उपयोग की पूरी अवधि के दौरान सूक्ष्मजीवविज्ञानी शुद्धता बनाए रखने के लिए कॉस्मेटिक उत्पादों में रोगाणुरोधी परिरक्षकों को जोड़ा जाता है [26]। सौंदर्य प्रसाधन परिरक्षकों जैसे मिथाइलपरबेन का उपयोग करने के बजाय, अन्य कार्यों वाले प्राकृतिक रोगाणुरोधी यौगिक मानव स्वास्थ्य के लिए बेहतर और अधिक फायदेमंद होते हैं [27-29]। जीवाणु संसाधनों से पृथक द्वितीयक चयापचयों में परिरक्षक और रोगाणुरोधी दोनों गुण हो सकते हैं जो त्वचा में जीवाणु रोगजनकों (प्रोपियोनिबैक्टीरियम एक्ने, स्टैफिलोकोकस एपिडर्मिडिस और स्टैफिलोकोकस ऑरियस) के उपनिवेशण को रोकते हैं [9,26,28]।

मिट्टी या समुद्री बैक्टीरिया, विशेष रूप से एक्टिनोबैक्टीरिया द्वारा उत्पादित बायोएक्टिव यौगिकों का अभी तक दोहन नहीं किया गया है और अभी तक इसकी खोज नहीं की गई है [23,30]। एंटी-एजिंग, एंटीऑक्सीडेंट, एंटी-टायरोसिनेज, एंटीमाइक्रोबायल, और गैर-साइटोटॉक्सिक गुणों वाले कॉस्मीस्यूटिकल और कॉस्मेटिक उद्योग में लागू होने वाले विभिन्न बायोएक्टिव यौगिकों में उपन्यास उपयोग के लिए काफी संभावनाएं हैं।

पौधों से अलग किए गए बायोएक्टिव सामग्रियों पर कई अध्ययन हैं जो वर्तमान में कॉस्मीस्यूटिकल फॉर्मूलेशन में उपयोग किए जाते हैं, लेकिन बैक्टीरिया से बायोएक्टिव सामग्री पर बहुत कम अध्ययन उपलब्ध हैं [9,21,24-27,31]। इस अध्ययन का उद्देश्य बैक्टीरियल स्ट्रेन स्ट्रेप्टोमाइसेस एसपी से एथिल एसीटेट के अर्क की ब्रह्मांडीय क्षमता का मूल्यांकन करना है। एंटीऑक्सिडेंट, एंटी-एजिंग, एंटी-टायरोसिनेस और जीवाणुरोधी गतिविधियों और विभिन्न माउस और मानव सेल लाइनों पर किसी भी साइटोटोक्सिक प्रभाव के लिए T65। इसके अलावा, हमने मेसोपोरस सिलिका कणों को संश्लेषित करने का लक्ष्य रखा है। अंत में, इस अध्ययन का मुख्य लक्ष्य मिट्टी के सूक्ष्मजीवों से निकाले गए बायोएक्टिव सामग्री का उपयोग करके सामयिक अनुप्रयोग के लिए अंतिम कॉस्मेटिक उत्पाद विकसित करना था।

2। सामग्री और प्रणालियां

2.1. अभिकर्मक, सेल लाइन्स, और उपकरण

उपयोग किए गए सभी सॉल्वैंट्स विश्लेषणात्मक ग्रेड के थे। B16-F10 मेलेनोमा सेल लाइन, B16-F1 माउस मेलेनोमा सेल लाइन, और मानव केराटिनोसाइट सेल लाइन (HaCaT) अमेरिकन टाइप कल्चर कलेक्शन (ATCC, मानस, VA, यूएसए) से खरीदे गए थे। Dulbecco का संशोधित ईगल्स मीडियम (DMEM), पेनिसिलिन-स्ट्रेप्टोमाइसिन और हीट-इनएक्टिवेटेड भ्रूण गोजातीय सीरम (HI FBS) गिब्को (थर्मो फिशर साइंटिफिक कोरिया लिमिटेड, सियोल, दक्षिण कोरिया) से खरीदा गया था। सेल काउंटिंग किट-8 (CCK-8) Dojindo (कुमामोटो, जापान) से खरीदी गई थी। एक माउस मैक्रोफेज सेल लाइन RAW264.7 और CCD -986 Sk मानव फ़ाइब्रोब्लास्ट कोरियाई सेल लाइन बैंक (सियोल, दक्षिण कोरिया) से खरीदे गए थे। लिपोपॉलीसेकेराइड (LPS, एस्चेरिचिया कोलाई, सीरोटाइप O11:B4), सल्फ़ानिलमाइड, नेफ़थिल एथिलीनडायमाइन डाइहाइड्रोक्लोराइड, मशरूम टायरोसिनेस, पोर्सिन पैंक्रियाटिक इलास्टेज़, एल-टायरोसिन, एस्कॉर्बिक एसिड, अर्बुटिन, N-Succ-(Ala)3-p-नाइट्रोएनिलाइड , 3-(4,5-डाइमिथाइलथियाज़ोल-2-यल)-2,5-डिपेनिल टेट्राजोलियम ब्रोमाइड (एमटीटी), कोलेजन टाइप I, ट्वीन 20, टेट्रामेथिलबेन्ज़िडाइन (टीएमबी) ), टेट्राएथिल ऑर्थो-सिलिकेट (टीईओएस), प्लुरोनिक पी -123 (पॉली (एथिलीन ग्लाइकॉल) -ब्लॉक-पॉली (प्रोपलीन ग्लाइकॉल) -ब्लॉक-पॉली (एथिलीन ग्लाइकॉल); खूंटी-पीपीजी-पीईजी), और -मेलानोसाइट -स्टिम्युलेटिंग हार्मोन (-MSH) सिग्मा-एल्ड्रिच (सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) से खरीदे गए थे। 1,1-डिपेनिल-2-पिक्रिलहाइड्राज़िल (डीपीपीएच) और ओलीनोलिक एसिड एल्ड्रिच (सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) से खरीदे गए थे। COL1A1 (कोलेजन, टाइप I, अल्फा 1) प्राथमिक एंटीबॉडी और एचआरपी (हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज) के साथ संयुग्मित माध्यमिक एंटीबॉडी सांता क्रूज़ बायोटेक्नोलॉजी (सांता क्रूज़, सीए, यूएसए) से खरीदे गए थे। एक स्पेक्ट्रामैक्स 340PC384 माइक्रोप्लेट रीडर (आणविक उपकरण, सनीवेल, सीए, यूएसए) का उपयोग 96-वेल प्लेट रीडिंग के लिए किया गया था।

2.2. रोगजनक जीवाणु उपभेद

स्टैफिलोकोकस एपिडर्मिडिस KACC 13234 और स्यूडोमोनस एरुगिनोसा KACC 10185 कोरियाई कृषि संस्कृति संग्रह (KACC, Jeonju, दक्षिण कोरिया) से खरीदे गए थे; बेसिलस सबटिलिस केईएमबी 51201-001, एस्चेरिचिया कोलाई केईएमबी 212-234, और स्टैफिलोकोकस ऑरियस केईएमबी 7301-069 कोरिया पर्यावरण सूक्ष्मजीव बैंक (केईएमबी, सुवन दक्षिण कोरिया) से प्राप्त किए गए थे; और Propionibacterium acnes KCTC 3314 को कोरियन कलेक्शन फॉर टाइप कल्चर (KCTC, Jeongeup, South Korea) से खरीदा गया था।

2.3. अलगाव और संरक्षण

कोरिया में ह्वासेओंग (37◦16′10" एन 126◦45-43" ई), और क्योन्गी विश्वविद्यालय वन (37◦18′1" एन 127◦2′20" ई) में पुनः प्राप्त घास के मैदानों से विभिन्न मिट्टी के नमूने एकत्र किए गए थे। पहले वर्णित [9] विधि का उपयोग करके बैक्टीरिया को अलग किया गया था। अल्पकालिक संरक्षण के लिए प्रत्येक 1 सप्ताह में R2A प्लेटों पर कॉलोनियों को स्ट्रीक किया गया था और लंबे समय तक संरक्षण के लिए 20 प्रतिशत (v/v) ग्लिसरॉल के साथ पूरक R2A शोरबा में निलंबन के रूप में −80 C पर संग्रहीत किया गया था।

2.4. स्क्रीनिंग, पहचान, और पृथक उपभेदों की Phylogenetic स्थिति

पहले वर्णित [9] के रूप में पृथक उपभेदों के सौंदर्य प्रसाधन और रोगाणुरोधी गतिविधियों के लिए स्क्रीनिंग पूरी की गई थी। 16S rRNA जीन अनुक्रमण का उपयोग करके कार्य करने वाले जीवाणुओं की पहचान की गई। उपभेदों के जीनोमिक डीएनए को एक इंस्टाजीन मैट्रिक्स किट (बायो-रेड, हरक्यूलिस, सीए, यूएसए) का उपयोग करके निकाला गया था, और 16S rRNA जीन को पीसीआर द्वारा यूनिवर्सल बैक्टीरियल प्राइमर 27F और 1492R [32] का उपयोग करके प्रवर्धित किया गया था। पीसीआर उत्पाद को एक मल्टीस्क्रीन-फिल्टर प्लेट (मिलिपोर कॉर्प, बेडफोर्ड, एमए, यूएसए) के साथ शुद्ध किया गया था, और एक बिगडाई टर्मिनेटर साइकिल अनुक्रमण किट v.3.1 (एप्लाइड बायोसिस्टम्स, फोस्टर सिटी, एप्लाइड बायोसिस्टम्स, फोस्टर सिटी) का उपयोग करके एप्लाइड बायोसिस्टम्स 3770XL डीएनए विश्लेषक के साथ अनुक्रमित किया गया था। सीए, यूएसए)। SeqMan सॉफ्टवेयर (DNASTAR Inc., मैडिसन, WI, यूएसए) के साथ लगभग पूर्ण अनुक्रम का पालन किया गया। EzBioCloud [33] और एनसीबीआई जेनबैंक डेटाबेस [34] का उपयोग करके पृथक कार्यात्मक उपभेदों के निकटतम तनाव की पहचान की गई थी। संबंधित 16S rRNA अनुक्रम जेनबैंक से प्राप्त किए गए थे, और MEGA7 [35] का उपयोग करके फ़ाइलोजेनेटिक विश्लेषण पूरा किया गया था।

2.5. बैक्टीरिया की संस्कृति

पी। एक्ने को 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन द्वारा 3-4 दिनों के लिए एनारोबिक रूप से स्कैडलर एनारोब शोरबा (ऑक्साइड) में सुसंस्कृत किया गया था। एनारोबिक कल्चर के लिए, गैसपाक ईज़ी गैस जनरेटिंग कंटेनर सिस्टम (बेक्टन डिकिंसन, एनजे, यूएसए) के साथ बीबीएल एनारोबिक जार का उपयोग किया गया था। एस। एपिडर्मिडिस और एस। ऑरियस को टीएसबी (ट्राइप्टिक सोया शोरबा) माध्यम (ऑक्साइड) में 37 डिग्री सेल्सियस पर 24 घंटे एरोबिक रूप से सुसंस्कृत किया गया था। ई. कोलाई, पी. एरुगिनोसा, और बी. सबटिलिस को एलबी (लुरिया-बर्टानी) (ऑक्साइड) माध्यम में संवर्धित किया गया। पृथक जीवाणु उपभेदों को R2A में 28 C पर 4-5 दिनों के लिए सुसंस्कृत किया गया था।

2.6. किण्वन

किण्वन प्रक्रिया के लिए, इनोकुलम को R2A शोरबा में 28 डिग्री सेल्सियस पर 4-5 दिनों के लिए 150 बजे तैयार किया गया था। स्ट्रेन T65 को ISP2 (इंटरनेशनल स्ट्रेप्टोमाइसेस प्रोजेक्ट 2) माध्यम में 1-2 प्रतिशत इनोकुलम का उपयोग करके 28 डिग्री सेल्सियस पर 1 सप्ताह के लिए 140 बजे किण्वित किया गया था।

2.7. निष्कर्षण

कटे हुए कल्चर शोरबा को 1736R (LABOGENE, सियोल, कोरिया) की बड़ी क्षमता वाले सेंट्रीफ्यूज के साथ 4 C पर 20 मिनट के लिए 11,305 × g पर सेंट्रीफ्यूज किया गया था। सेल मलबे को खत्म करने और 40 डिग्री सेल्सियस पर एक रोटरी बाष्पीकरण के साथ केंद्रित करने के लिए संस्कृति सतह पर तैरनेवाला को 150 मिमी आकार के फिल्टर पेपर (व्हाटमैन 1001-150, जीई हेल्थकेयर, मेडस्टोन, यूके) के साथ फ़िल्टर किया गया था। केंद्रित कच्चे उत्पाद को तब पांच अलग-अलग सॉल्वैंट्स (एन-हेक्सेन, डाय-एथिल ईथर, डाइक्लोरोमेथेन, क्लोरोफॉर्म और एथिल एसीटेट) का उपयोग करके समान मात्रा के साथ दो बार निकाला गया था। एथिल एसीटेट को सबसे अच्छा विलायक पाया गया, और एथिल एसीटेट अर्क का उपयोग करके आगे के विश्लेषण किए गए। कार्बनिक परत को एक पृथक्करण फ़नल द्वारा अलग किया गया और सूखने के लिए वाष्पित किया गया। अंत में, सूखे कच्चे उत्पाद को आगे के मूल्यांकन के लिए मेथनॉल में भंग कर दिया गया था।

सिस्टैंच का सत्त

2.8. प्रारंभिक एचपीएलसी (प्रेप-एचपीएलसी) द्वारा सक्रिय अंशों का संग्रह

प्रारंभिक HPLC (Agilent 1200 श्रृंखला) का उपयोग करके T65 के क्रूड कल्चर अर्क के सक्रिय अंश एकत्र किए गए थे। शिम-पैक-पीआरईपी-ओडीएस (के) सी18 रिवर्स कॉलम (30 मिमी आईडी × 25 सेमी) 15 माइक्रोन कण आकार के साथ स्थिर चरण के रूप में इस्तेमाल किया गया था। मोबाइल चरण के लिए, 0.1 प्रतिशत एचसीएचओएचएच पानी (विलायक ए) और एसीटोनिट्राइल (विलायक बी) का उपयोग किया गया था। सॉल्वेंट बी की सांद्रता 0 मिनट से 60 मिनट तक 10 प्रतिशत से 100 प्रतिशत थी और 60 मिनट से 75 मिनट तक 100 प्रतिशत का उपयोग किया गया था। प्रवाह दर 15 एमएल/मिनट थी। मल्टी-वेव डिटेक्टर (MWD) का उपयोग 208, 230, 254 और 280 एनएम के साथ किया गया था। 14 मिनट से 21 मिनट तक के एकत्रित अंशों को सूखने के लिए वाष्पित कर दिया गया और आगे के मूल्यांकन के लिए मेथनॉल (T65 कच्चे उत्पाद) में भंग कर दिया गया।

2.9. एचसीएटी सेल की सेल व्यवहार्यता

HaCaT कोशिकाओं की सेल व्यवहार्यता निर्माता के निर्देशों के अनुसार CCK -8 (सेल काउंटिंग किट -8) परख के साथ निर्धारित की गई थी। HaCaT कोशिकाओं को 96-अच्छी तरह से प्लेटों में 104 कोशिकाओं प्रति कुएं में डाला गया और फिर 10 प्रतिशत भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS) युक्त Dulbecco के संशोधित ईगल्स माध्यम (DMEM) में 24 घंटे के लिए 37 C पर ऊष्मायन किया गया। कोशिकाओं को T65 कच्चे उत्पाद (10 मिलीग्राम / एमएल, 1 मिलीग्राम / एमएल, 100 कुरूप / एमएल, 10 कुरूप / एमएल, 1 कुरूप / एमएल, 100 एनजी / एमएल, और 1 एनजी / एमएल) के विभिन्न सांद्रता के साथ इलाज किया गया था, और ऊष्मायन किया गया था कमरे के तापमान पर 2 घंटे के लिए आर्द्र वातावरण में 5 प्रतिशत CO2 युक्त सीसीके के 10 μL -8 अभिकर्मक के साथ। प्रतिक्रिया मिश्रण के अवशोषण को 450 एनएम पर एक माइक्रोप्लेट स्पेक्ट्रोफोटोमीटर से मापा गया और सेल व्यवहार्यता के प्रतिशत की गणना की गई।

2.10. एंटीऑक्सीडेंट गतिविधियों का मूल्यांकन

2.10.1. RAW264.7 कोशिकाओं में विषाक्तता का मूल्यांकन

RAW264.7 कोशिकाओं को DMEM में बनाए रखा गया था जिसमें 5 प्रतिशत CO2 इनक्यूबेटर में 1 0 प्रतिशत FBS, 100 U/mL पेनिसिलिन, और 100 ug/mL स्ट्रेप्टोमाइसिन 37 डिग्री सेल्सियस पर था। RAW264.7 कोशिकाओं को एक 96-अच्छी तरह से फ्लैट-नीचे माइक्रोटिटर प्लेट में 104 कोशिकाओं के घनत्व पर T65 कच्चे उत्पाद के विभिन्न सांद्रता (0-1 मिलीग्राम/एमएल) के साथ रखा गया था और 24 के लिए 37 C पर इनक्यूबेट किया गया था। 5 प्रतिशत CO2 इनक्यूबेटर में। 24 घंटे के ऊष्मायन के बाद, कोशिकाओं को फॉस्फेट-बफर खारा (पीबीएस) के साथ दो बार धोया गया था, और 190 μL ताजा माध्यम और 10 μL एमटीटी काम करने वाले समाधान (5 मिलीग्राम / एमएल) को प्रत्येक कुएं में जोड़ा गया था, और प्लेट को ऊष्मायन किया गया था। 5 प्रतिशत CO2 इनक्यूबेटर में 4 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस। फिर, सतह पर तैरनेवाला हटा दिया गया था, और बनने वाले फॉर्मेज़ान क्रिस्टल को 5 प्रतिशत CO2 इनक्यूबेटर में 37 डिग्री सेल्सियस पर 10 मिनट के लिए प्रत्येक कुएं में 150 μL DMSO (डाइमिथाइल सल्फ़ोक्साइड) जोड़कर घोल दिया गया था। 570 एनएम पर एक माइक्रोप्लेट रीडर का उपयोग करके भंग किए गए फॉर्मेज़न क्रिस्टल की तीव्रता निर्धारित की गई थी।

2.10.2. नाइट्रिक ऑक्साइड निर्धारण

RAW264.7 कोशिकाओं (105 कोशिकाओं / एमएल) को 30 मिनट के लिए T65 कच्चे उत्पाद (15.5-125 कुरूप / एमएल) के विभिन्न सांद्रता के साथ दर्शाया गया था, इसके बाद 24 घंटे के लिए 1 कुरूप / एमएल एलपीएस के साथ उत्तेजना हुई। कोशिकाओं से जारी NO की सांद्रता ग्रिस अभिकर्मक द्वारा NO2- [36] के मानक वक्र का उपयोग करके निर्धारित की गई थी। अंधेरे में 20 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर एक सौ माइक्रोलिटर संस्कृति सतह पर तैरनेवाला को 100 μL ग्रिस अभिकर्मक (N-1-नेफ्थाइल एथिलीन एथिलीनडायमाइन डाइहाइड्रोक्लोराइड (NEDHC) और सल्फ़ानिलमाइड का मिश्रण) के साथ ऊष्मायन किया गया था। अवशोषण 540 एनएम मापा गया था।

2.10.3. डीपीपीएच फ्री रेडिकल स्कैवेंजिंग परख

DPPH मुक्त कट्टरपंथी मैला ढोने की गतिविधियाँ पहले वर्णित विधि [9] के अनुसार आयोजित की गईं। T65 कल्चर एक्सट्रेक्ट के कच्चे उत्पाद को मेथनॉल में 6 0 0, 200, 100, 20 और 4 ug/mL सांद्रता में पतला किया गया था। 180 μL का प्रतिक्रिया मिश्रण 0.1 मिमी DPPH के 90 μL (MeOH में भंग) और विभिन्न सांद्रता (तालिका S1) के नमूना समाधान के 90 μL के साथ बनाया गया था। परीक्षण प्रतिक्रियाओं को 96-अच्छी तरह से प्लेटों में अच्छी तरह मिलाया गया था, 30 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया गया था, और अवशोषण को स्पेक्ट्रोफोटोमीटर के साथ 516 एनएम पर मापा गया था। DPPH निषेध के प्रतिशत की गणना निम्नानुसार की गई:

निषेध(प्रतिशत)=[1 - (ओडीएक्सपी - ओडीकॉन) / (ओडीएसटीडी - ओडीबीएलएन)] × 100 (1)

जहां ODexp प्रयोगात्मक नमूने का अवशोषण है; ओडीकॉन नियंत्रण का अवशोषण है; ODstd, मानक का अवशोषण; और ODbln, रिक्त का अवशोषण।

2.11. बुढ़ापा रोधी गतिविधियों का मूल्यांकन

2.11.1. सीसीडी में साइटोटोक्सिसिटी का मूल्यांकन-986स्क सेल

मानव त्वचा फाइब्रोब्लास्ट कोशिकाओं (CCD-986Sk) में T65 कच्चे उत्पाद के विभिन्न सांद्रता (0–1 mg/mL) की सेल साइटोटोक्सिसिटी MTT परख द्वारा निर्धारित की गई थी जैसा कि पहले RAW264.7 के MTT परख के लिए वर्णित है। कोशिकाएं।

2.11.2. सीसीडी का उपयोग कर मानव फाइब्रोब्लास्ट प्रसार-986स्क सेल

मानव त्वचीय फ़ाइब्रोब्लास्ट (HDF) कोशिका प्रसार को CCD {0}}Sk कोशिकाओं में CCK-8 परख का उपयोग करके निर्धारित किया गया था। CCD-986Sk कोशिकाओं को 96-अच्छी तरह से प्लेटों में 5 × 103 कोशिकाओं / कुएं में डाला गया और फिर DMEM में 10 प्रतिशत FBS युक्त 37 C पर 24 घंटे के लिए ऊष्मायन किया गया। कोशिकाओं को T65 कच्चे उत्पाद (0–1 मिलीग्राम / एमएल) के विभिन्न सांद्रता के साथ इलाज किया गया था और कमरे के तापमान पर 2 घंटे के लिए एक आर्द्र वातावरण में ऊष्मायन किया गया था जिसमें सीसीके के 10 μL -8 अभिकर्मक के साथ 5 प्रतिशत CO2 था। प्रतिक्रिया मिश्रण का अवशोषण 450 एनएम पर एक माइक्रोप्लेट रीडर के साथ मापा गया था और अनुपचारित कोशिकाओं के अवशोषण की तुलना में व्यवहार्य कोशिकाओं का प्रतिशत निर्धारित किया गया था।

सिस्टैंच एंटी-एजिंग है।

2.11.3. कोलेजन प्रकार I संश्लेषण परख

कोलेजन प्रकार I संश्लेषण को एक एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख (एलिसा) द्वारा परख लिया गया था। CCD-986Sk कोशिकाओं को 96-वेल प्लेट्स में 5 × 1 के घनत्व पर 03 सेल/वेल में DMEM में 10 प्रतिशत FBS युक्त और 37 पर इनक्यूबेट किया गया था। 24 घंटे के लिए सी। T65 कच्चे उत्पाद की विभिन्न सांद्रता (31.25–25 {{3 0}} pg/mL) को 24 घंटे के लिए FBS-मुक्त माध्यम में जोड़ा गया। फिर, 1 0 0 μL संस्कृति माध्यम और कोलेजन प्रकार I को कोलेजन-लेपित 96- अच्छी तरह से प्लेटों में जोड़ा गया और 24, 48 और 72 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया गया। प्रत्येक कुएं को 0.1 प्रतिशत ट्वीन 20 (PBST) के साथ 0.05 प्रतिशत फॉस्फेट-बफर खारा से धोया गया था और COL1A1 प्राथमिक एंटीबॉडी को जोड़ा गया था और 1 घंटे के लिए ऊष्मायन किया गया था। फिर से, कुओं को 0.05 प्रतिशत पीबीएसटी से धोया गया, और एचआरपी (हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज) के साथ संयुग्मित एक माध्यमिक एंटीबॉडी को जोड़ा गया और 1 घंटे के लिए ऊष्मायन किया गया। प्रत्येक कुएं को 0.05 प्रतिशत PBST से धोया गया था, और TMB (tetramethylbenzidine) जोड़ा गया था। वांछित रंग तीव्रता (नीला) प्राप्त करने के बाद, 0.5N H2SO4 जोड़कर प्रतिक्रिया को समाप्त कर दिया गया, जिससे घोल का रंग पीला हो गया। एक माइक्रोप्लेट रीडर के साथ अवशोषण को 450 एनएम पर मापा गया था, और कोलेजन प्रकार I उत्पादन निर्धारित किया गया था।

2.11.4. इलास्टेज निषेध परख

पोर्सिन अग्नाशयी इलास्टेज (पीपीई) निषेध गतिविधियों को पहले वर्णित एक प्रक्रिया के अनुसार स्वीकार किया गया था [9]। T65 कच्चे उत्पाद को मेथनॉल में 30{{10}}0, 1000, 500, और 100 ug/mL की सांद्रता में पतला किया गया था। प्रतिक्रिया मिश्रण 0.2 M Tris-HCl बफर (pH 8.0), 0.5 mM N-Succ- (Ala) 3- -nitroanilide (SANA) के साथ एक सब्सट्रेट, पोर्सिन अग्नाशय इलास्टेज (3.5 U / mL) के रूप में तैयार किया गया था। 0.2 एम ट्रिस-एचसीएल बफर; पीएच 8.0), और अवरोधक (नमूना)। प्रत्येक नमूना 15 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर पूर्व-ऊष्मायन किया गया था, और कुल प्रतिक्रिया मिश्रण 20 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया गया था। अवशोषण 400 एनएम पर मापा गया था। 150 μL का कुल प्रतिक्रिया मिश्रण तैयार किया गया था जैसा कि तालिका S2 में दिखाया गया है। प्रतिक्रिया मिश्रण में नमूने की अंतिम सांद्रता 300, 100, 50, और 10 ug/mL थी। पीपीई निषेध के प्रतिशत की गणना फॉर्मूला (1) का उपयोग करके की गई थी।

2.12. व्हाइटनिंग गतिविधियों का मूल्यांकन

2.12.1. B16F1 कोशिकाओं में साइटोटोक्सिसिटी का मूल्यांकन

B16F1 मेलेनोमा कोशिकाओं के लिए T65 कच्चे उत्पाद की साइटोटोक्सिसिटी एक MTT परख द्वारा निर्धारित की गई थी। B16F1 कोशिकाओं को 96-अच्छी तरह से प्लेटों में 104 कोशिकाओं प्रति कुएं में डाला गया और फिर DMEM में 24 घंटे के लिए 37 C पर इनक्यूबेट किया गया जिसमें 10 प्रतिशत FBS था। कोशिकाओं को T65 कच्चे उत्पाद (0-1 मिलीग्राम / एमएल) के विभिन्न सांद्रता के साथ इलाज किया गया था और 5 प्रतिशत सीओ युक्त आर्द्र वातावरण में 2 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर ऊष्मायन किया गया था। प्रतिक्रिया मिश्रण के अवशोषण को 450 एनएम पर एक माइक्रोप्लेट स्पेक्ट्रोफोटोमीटर से मापा गया और सेल व्यवहार्यता के प्रतिशत की गणना की गई।

2.12.2. B16F10 कोशिकाओं में मेलेनिन संश्लेषण निषेध

B16F10 कोशिकाओं को -MSH के साथ 6-अच्छी तरह से प्लेटों में प्रति कुएं में 105 कोशिकाओं पर दर्शाया गया था और मेलेनिन संश्लेषण को बढ़ावा देने के लिए 10 प्रतिशत FBS युक्त DMEM में 24 घंटे के लिए 37 C पर ऊष्मायन किया गया था। कोशिकाओं को 48 घंटे के लिए -MSH की उपस्थिति या अनुपस्थिति में सकारात्मक नियंत्रण के रूप में T65 कच्चे उत्पाद (31.25-125 कुरूप / एमएल) और 100 कुरूप / एमएल आर्बुटिन के विभिन्न सांद्रता के साथ ऊष्मायन किया गया था। B16F10 मेलेनोमा कोशिकाओं में मेलेनिन संश्लेषण अवरोध देखा गया।

सिस्टैंच मेलेनिन के निर्माण को रोकता है।

2.12.3. मशरूम टायरोसिनेस निषेध परख

मशरूम टायरोसिनेस निषेध गतिविधियों को पहले वर्णित [9] के रूप में निर्धारित किया गया था। T65 कच्चे उत्पाद को मेथनॉल में 3000, 1000, 500, और 100 ug/mL की सांद्रता में पतला किया गया था। प्रतिक्रिया मिश्रण 0.1 एम पोटेशियम फॉस्फेट बफर (पीएच 6.8), 3 मिमी एल-टायरोसिन समाधान [डीडब्ल्यू (आसुत जल) में भंग], और 2000 यू / एमएल मशरूम टायरोसिनेज (0.05 एम पोटेशियम फॉस्फेट बफर, पीएच 6.8 में भंग) के साथ तैयार किया गया था। ; सिग्मा) 96-वेल प्लेट्स में। 150 μL (120 μL फॉस्फेट बफर, 10 μL l-tyrosine, 15 μL नमूना समाधान, और 5 μL मशरूम tyrosinase; तालिका S3) का कुल परीक्षण मिश्रण 10 मिनट के लिए 37 C पर ऊष्मायन किया गया था और अवशोषण 475 एनएम पर मापा गया था। प्रतिक्रिया मिश्रण में नमूने की अंतिम सांद्रता 300, 100, 50, और 10 ug/mL थी। मानक नमूना समाधान के बिना था, नियंत्रण एल-टायरोसिन के बिना था, और रिक्त एल-टायरोसिन और नमूना समाधान के बिना था। टायरोसिनेस निषेध के प्रतिशत की गणना फॉर्मूला (1) को लागू करके की गई थी।

2.13. अमीनो एसिड का विश्लेषण

T65 कच्चे उत्पाद का मुक्त अमीनो एसिड कोरिया पॉलिमर टेस्टिंग एंड रिसर्च इंस्टीट्यूट (कोप्त्री) में GC-FID (गैस क्रोमैटोग्राफी -फ्लेम आयनीकरण डिटेक्टर) विधि द्वारा निर्धारित किया गया था। GC-FID पद्धति के लिए, इस्तेमाल की गई मशीन Agilent 6890N GC-FID थी; कॉलम, जेडबी-एएए (10 मीटर × 0.25 मिमी); इंजेक्शन भाग तापमान, 250 C; इंजेक्शन कॉलम, 2 μL; विभाजित अनुपात, 5:1; तापमान की स्थिति, 110 C → 32 C/मिनट → 320 C; डिटेक्टर, एफआईडी @ 320 C; वाहक, नाइट्रोजन गैस, 1.5 मिलीलीटर/ निर्माता, फेनोमेनेक्स; अमीनो एसिड मानक; और एकाग्रता, 200 μmol / L।

T65 कच्चे उत्पाद के मिश्रित अमीनो एसिड को कोरिया पॉलिमर टेस्टिंग एंड रिसर्च इंस्टीट्यूट (कोप्त्री) में GC-FID (गैस क्रोमैटोग्राफी-फ्लेम आयनीकरण डिटेक्टर) विधि द्वारा निर्धारित किया गया था। GC-FID के लिए, इस्तेमाल की गई मशीन Agilent 6890N GC-FID थी; कॉलम, जेडबी-एएए (10 मीटर × 0.25 मिमी); इंजेक्शन भाग तापमान, 250 C; इंजेक्शन कॉलम, 2 μL; विभाजित अनुपात, 5:1; तापमान की स्थिति, 110 C → 32 C/मिनट → 320 C; डिटेक्टर, एफआईडी @ 320 C; वाहक, नाइट्रोजन गैस, 1.5 मिलीलीटर/ निर्माता, फेनोमेनेक्स; अमीनो एसिड मानक; और एकाग्रता, 200 μmol / L।

2.14. वसा अम्ल

T65 कच्चे उत्पाद का फैटी एसिड कोरिया पॉलिमर टेस्टिंग एंड रिसर्च इंस्टीट्यूट (कोप्त्री) में GC-FID (गैस क्रोमैटोग्राफी-फ्लेम आयनीकरण डिटेक्टर) विधि द्वारा निर्धारित किया गया था। GC-FID के लिए, इस्तेमाल की गई मशीन Agilent 6890N GC-FID थी; कॉलम, सुपेल्को एसपी-2500 (100 मीटर × 0.25 मिमी × 0.20 माइक्रोन); इंजेक्शन भाग तापमान, 250 C; इंजेक्शन कॉलम, 1 μL; विभाजित अनुपात, 50:1; तापमान की स्थिति, 100 C (4 मिनट) → 3 C/मिनट → 240 C (15 मिनट); डिटेक्टर, एफआईडी @ 285 C; वाहक, नाइट्रोजन गैस, 0.8 मिलीलीटर/ निर्माता, SUPELCO 37 कंपोनेंट FAME मिक्स; और एकाग्रता, 0.5 मिलीग्राम/एमएल।

2.15. रोगाणुरोधी गतिविधियां

डिस्क प्रसार विधि द्वारा रोगजनक बैक्टीरिया का निषेध किया गया था। 108 सीएफयू (कॉलोनी-फॉर्मिंग यूनिट)/एमएल पर पी. एक्ने कल्चर के एक सौ माइक्रोलीटर फैलाए गए थे और 35 डिग्री सेल्सियस पर 2-3 दिनों के लिए शैडलर एगर प्लेट्स पर 6 मिमी डिस्क (व्हाटमैन) के साथ 2-3 दिनों के लिए इनक्यूबेट किया गया था। मेथनॉल में घुले कच्चे तेल का अर्क, और निषेध के क्षेत्रों को मापा गया। इसी तरह, एस. एपिडर्मिडिस, एस. ऑरियस, बी. सबटिलिस, ई. कोलाई, और पी. एरुगिनोसा के 108 सीएफयू/एमएल पर फैले हुए थे और 1-2 के लिए आर2ए या एलबीए प्लेटों पर एरोबिक रूप से 35 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट किए गए थे। दिन और निषेध के क्षेत्रों को मापा गया।

2.16. मेसोपोरस सिलिका कण का संश्लेषण

संरचना-उत्प्रेरण बहुलक को मिसेल समाधान तैयार करने के लिए विआयनीकृत पानी में भंग कर दिया गया था। मेसोपोरस सिलिका सामग्री को साहित्य में वर्णित विधियों के अनुसार संश्लेषित किया गया था [37]। मेसोपोरस सिलिका कणों (SBA-15) के संश्लेषण के लिए, प्लूरोनिक P123 (EO20PO70EO20, BASF Corporation, Florham Park, NJ, USA) के 10 ग्राम को 2 M HCl के 55 mL में घोलकर कमरे में हिलाया गया। 30 मिनट के लिए तापमान। इसके अलावा, 22 ग्राम टेट्राएथिलोर्थोसिलिकेट (टीईओएस) को घोल में मिलाया गया और आगे 30 मिनट के लिए हिलाया गया और 24 घंटे के लिए 36 डिग्री सेल्सियस पर रखा गया और फिर ओवन में डाल दिया गया, जिसमें तापमान 100 डिग्री सेल्सियस पर बनाए रखा गया था, और छोड़ दिया गया था स्थिर स्थिति के तहत 4 दिन। 4 दिनों के बाद, बोतल में घोल बादल के घोल में बदल गया। बादल के घोल को सेल्यूलोज फिल्टर पेपर की दो परतों से फ़िल्टर किया गया और EtOH (दो बार) और DI (विआयनीकृत) पानी (दो बार) से धोया गया। परिणामी छना हुआ पाउडर 120 C संवहन ओवन में सुखाया गया और मफल फर्नेस (हयांग साइंटिफिक इक्विपमेंट कं, लिमिटेड, सियोल, दक्षिण कोरिया) में डाल दिया गया। छह नमूनों को समान परिस्थितियों में लेकिन एक अलग बैच में संश्लेषित किया गया था। संश्लेषित SBA -15 के ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोग्राफ (TEM) को सियोल नेशनल यूनिवर्सिटी में ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (Talos L120C; FEI) द्वारा लिया गया था।

2.17. शर्त सतह क्षेत्र विश्लेषण

सिलिका के कण आकार को मास्टर्साइज़र 2000 (मालवर्न इंस्ट्रूमेंट्स लेफ्टिनेंट, मालवर्न, यूनाइटेड किंगडम) द्वारा मापा गया था। बीईटी (ब्रुनॉयर-एम्मेट-टेलर) विश्लेषण की नमूना तैयार करने के लिए, 5 ग्राम पी -123 को 2 एम एचसीएल के 76 ग्राम में जोड़ा गया और 24 घंटे के लिए 250 आरपीएम पर हिलाया गया। 24 घंटे के बाद, जब पी -123 पूरी तरह से भंग हो गया था, 160 एमएल डीआई (विआयनीकृत) पानी और टीईओएस समान रूप से (15 एमएल/मिनट) जोड़ा गया और 24 घंटे के लिए 750 आरपीएम पर हिलाया गया। उसके बाद, गठित पाउडर को छानकर अलग किया गया और अलग किए गए पाउडर को एक थिम्बल में रखा गया और 24 घंटे के लिए सॉक्सलेट से धोया गया। फिर, इसे डीआई पानी से धोया गया और मफल फर्नेस (हयांग साइंटिफिक इक्विपमेंट कं, लिमिटेड, दक्षिण कोरिया) में जला दिया गया। SBA -15 संश्लेषण द्वारा उत्पादित पाउडर के प्रदर्शन की पुष्टि करने के लिए बीटा सतह क्षेत्र विश्लेषण आयोजित किया गया था। बीटा विश्लेषण इंहा विश्वविद्यालय और चांगवोन राष्ट्रीय विश्वविद्यालय द्वारा पूरा किया गया।

गैस सॉरशन एनालाइज़र (ऑटोसॉर्ब आईक्यू, क्वांटाक्रोम इंस्ट्रूमेंट्स, एशलैंड, ओआर, यूएसए) को तैयार मेसोपोरस सिलिका सामग्री के सतह क्षेत्र और ताकना आकार के वितरण की जांच करने के लिए नियोजित किया गया था। सतह क्षेत्र और छिद्र आकार के वितरण की गणना एएसआईक्यूविन सॉफ्टवेयर (एंटोन पार क्वांटा टेक इंक, बॉयटन बीच, एफएल, यूएसए) का उपयोग करके सोखना-उजाड़ने वाले इज़ोटेर्म पर आधारित थी। प्राचीन संश्लेषित कणों को 300 C / 3 h पर degassed किया गया था, फिर N2 सोखना और desorption isotherms को −196 C के तापमान पर मापा गया था। कुल सतह क्षेत्र की गणना के लिए मल्टीपॉइंट बीईटी विश्लेषण लागू किया गया था।

2.18. स्थिरता आकलन

एम्बेडेड SBA-15 में T65 की उपस्थिति की पुष्टि करने के लिए, निम्नलिखित प्रदर्शन निम्नानुसार आयोजित किया गया था: SBA के 12 ग्राम -15 और 1.2 ग्राम T65 कच्चे उत्पाद को 500 एमएल एसीटोनिट्राइल में मिलाया गया था। घोल को 30 C के तहत 18 घंटे के लिए उभारा गया था। छानने के बाद, मिश्रण को छान लिया गया और फ़िल्टर किए गए कणों को 100 C संवहन ओवन में सुखाया गया। SBA -15 में ही T65 कण को ​​खोजने के लिए, SBA -15 में एम्बेडेड सूखे T65 के 1 ग्राम को एसीटोनिट्राइल में भंग कर दिया गया था और 3 एम फ्लोरिक एसिड का 25 एमएल जोड़ा गया था। मिश्रण को 24 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर तब तक हिलाएं जब तक कि घोल साफ न हो जाए। फिर, समाधान फ़िल्टर किया गया था, और छानना समाधान एक नमूने के रूप में इस्तेमाल किया गया था। उपरोक्त प्रयोगों से प्राप्त नमूनों का विश्लेषण एचपीएलसी द्वारा किया गया था।

नियंत्रित रिलीज की संपत्ति का निर्धारण करने के लिए, 35 एमएल एम्बेडेड एसबीए -15 को 50 एमएल खनिज तेल (एम 3516; सिग्मा-एल्ड्रिच, सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) में डाला गया और अच्छी तरह मिलाया गया। फिर, मिश्रण में 50 एमएल डीआई पानी मिलाया गया और कमरे के तापमान के तहत 6 घंटे के लिए हिलाया गया, और फिर 12 घंटे के लिए डेस्क पर छोड़ दिया गया। जब तरल परत को अलग किया गया था, पानी की परत को त्याग दिया गया था, और एचपीएलसी विश्लेषण के लिए एक नमूने के रूप में 1 एमएल तेल परत एकत्र की गई थी। दूसरे और तीसरे दिन भी यही प्रयोग दोहराया गया और एचपीएलसी का उपयोग करके फिर से नमूने का विश्लेषण किया गया।

2.19. कॉस्मेटिक फॉर्मूलेशन और एप्लीकेशन

2.19.1. निरूपण और स्थिरता परीक्षण

एक इमल्सीफायर-प्रकार की क्रीम से एक कॉस्मेटिक उत्पाद तैयार किया गया था। कॉस्मेटिक उत्पाद को फ्रीजर, रेफ्रिजरेटर और कमरे के तापमान पर 28 दिनों तक विभिन्न तापमानों (37, 45, और 60 डिग्री सेल्सियस) पर रखकर कॉस्मेटिक फॉर्मूलेशन स्थिरता निर्धारित की गई थी। कॉस्मेटिक क्रीम की स्थिरता पहले, दूसरे, तीसरे और चौथे सप्ताह में देखी गई।

2.19.2। नैदानिक ​​परीक्षण, स्वयंसेवक, और आवेदन के तरीके

त्वचा की खुरदरापन और त्वचा की चमक के माध्यम से शिकन सुधार और सफेदी प्रभावकारिता के निर्धारण के लिए 21 महिला स्वयंसेवकों पर T65 क्रूड उत्पाद युक्त कार्यात्मक कॉस्मेटिक क्रीम लागू की गई थी। इस अध्ययन के लिए मानव भागीदारी के लिए सभी प्रायोगिक प्रक्रियाओं को एलाड इंस्टीट्यूशनल रिव्यू बोर्ड (आईआरबी) (ईएल-पी-7400) द्वारा अनुमोदित किया गया था। सभी व्यक्तिगत प्रतिभागियों से सूचित सहमति प्राप्त की गई थी। उत्पाद के आवेदन से पहले, 2 सप्ताह के बाद और 4 सप्ताह के बाद परीक्षण किए गए। लगभग 5 मिलीग्राम कॉस्मेटिक उत्पाद दिन में दो बार (सुबह और शाम) चेहरे की सफाई के बाद चेहरे पर लगाया जाता था, और त्वचा की बनावट के अनुसार इसे धीरे से फैलाया जाता था। परीक्षण से 1 सप्ताह पहले और परीक्षण के दौरान स्वयंसेवकों को किसी अन्य क्रीम या उत्पादों का उपयोग करने की अनुमति नहीं थी।

2.19.3। इमेज कैप्चरिंग और प्रोसेसिंग के तरीके

तस्वीरें VISIA-CR द्वारा कैप्चर की गईं। छवियों की खुरदरापन का विश्लेषण PRIMOS सॉफ्टवेयर (PRIMOS संस्करण 5.8E, कैनफील्ड साइंटिफिक, इंक।, Parsippany-Troy Hills, NJ, USA) द्वारा किया गया था। औसत खुरदरापन (Ra) और अधिकतम खुरदरापन गहराई (Rmax) की गणना निम्न सूत्र का उपयोग करके की गई:

रा या आरमैक्स दर (प्रतिशत)=(उपचार से पहले मूल्य - उपचार के बाद मूल्य)/उपचार से पहले मूल्य × 100 (2)

छवियों की चमक का विश्लेषण Chromameter CR-400 द्वारा किया गया था। L* ब्राइटनेस पैरामीटर है और इसे निम्न सूत्र द्वारा मापा जाता है:

एल* बढ़ती दर (प्रतिशत)=(उपचार से पहले मूल्य - उपचार के बाद मूल्य)/उपचार से पहले मूल्य × 100 (3)

2.20. सांख्यिकीय विश्लेषण

IC5 0 मूल्य की सांख्यिकीय गणना ओरिजिनप्रो 8.5 सांख्यिकीय सॉफ्टवेयर (ओरिजिनलैब कॉर्पोरेशन, नॉर्थम्प्टन, एमए, यूएसए) द्वारा की गई थी। सभी प्रयोग तीन प्रतियों में आयोजित किए गए थे, और सभी परिणाम तीन अलग-अलग प्रयोगों के औसत ± एसडी के रूप में प्रस्तुत किए गए थे। डेटा का विश्लेषण स्वतंत्र नमूना टी-टेस्ट वन-वे विश्लेषण विचरण (वन-वे एनोवा) द्वारा किया गया था, इसके बाद ओरिजिनप्रो 8.5 का उपयोग करके तुकी के पोस्ट-हॉक परीक्षण किया गया था। अंतर को p <0.05 पर="" महत्वपूर्ण="" माना="">

3. परिणाम और चर्चा

3.1. चयनित सक्रिय उपभेदों का अलगाव, चयन और फाइलोजेनी

एकत्रित मिट्टी के नमूनों से बैक्टीरिया के कुल 2285 उपभेदों को अलग किया गया। स्क्रीनिंग परिणामों से पता चला कि बैक्टीरिया के 102 उपभेदों में कॉस्मीक्यूटिकल्स (तालिका S4) पर लागू कार्य थे। प्राथमिक जांच के आधार पर, स्ट्रेप्टोमी एसपी। T65 में सभी कॉस्मेटिक अनुप्रयोगों, अर्थात् एंटी-ऑक्सीडेंट, एंटी-इलास्टेज, एंटी-टायरोसिनेज और एंटीमाइक्रोबियल गतिविधियों के लिए उच्च गतिविधियां पाई गईं। अंत में, स्ट्रेन T65 को कॉस्मीक्यूटिकल्स में इसके संभावित अनुप्रयोग की पहचान करने के लिए आगे के मूल्यांकन के लिए चुना गया था। Phylogenetic विश्लेषण से पता चला है कि तनाव T65 ने एक मजबूत बूटस्ट्रैप मान (चित्र S1) के साथ स्ट्रेप्टोमाइसेस बंगोएंसिस DSM 41781T (16S rRNA जीन अनुक्रम के आधार पर निकटतम तनाव) के साथ एक क्लैड का गठन किया।

3.2. बायोएक्टिव सामग्री का पता लगाना और संग्रह करना

T65 एथिल एसीटेट कल्चर एक्सट्रैक्ट से मिश्रित बायोएक्टिव सामग्री प्रेप-एचपीएलसी से एकत्र की गई थी। बायोएक्टिव सामग्री को डिटेक्टरों द्वारा 208, 230, 254 और 280 एनएम पर मापा गया। अंशों को समय के आधार पर (14 मिनट से 21 मिनट तक) एकत्र किया गया था। एकत्रित अंशों को सूखने के लिए वाष्पित कर दिया गया और मेथनॉल (T65 कच्चे उत्पाद) में भंग कर दिया गया और रोगाणुरोधी गतिविधियों सहित सभी आकलन के लिए उपयोग किया गया।

3.3. HaCaT सेल में साइटोटोक्सिसिटी

मानव केराटिनोसाइट सेल लाइन (HaCaT सेल) में सेल व्यवहार्यता T65 कच्चे उत्पाद से 10 मिलीग्राम / एमएल तक अप्रभावित रही। दूसरी ओर, सेल व्यवहार्यता एक खुराक पर निर्भर तरीके से बढ़ी जब T65 कच्चे उत्पाद के 10 एनजी/एमएल से 10 मिलीग्राम/एमएल की सांद्रता लागू की गई (चित्रा S2)। इस एकाग्रता रेंज के परिणामस्वरूप 100 प्रतिशत से अधिक सेल व्यवहार्यता हुई, यह दर्शाता है कि यह एचसीएटी कोशिकाओं के प्रसार को बढ़ावा देता है और इस प्रकार, एचसीएटी सेल लाइन के लिए गैर-विषाक्त था।

3.4. एंटीऑक्सीडेंट गतिविधियां

3.4.1. RAW264.7 सेल में साइटोटोक्सिसिटी

T65 कच्चे उत्पाद की साइटोटोक्सिसिटी का आकलन MTT परख विधि द्वारा RAW264.7 मैक्रोफेज में सेल व्यवहार्यता द्वारा किया गया था। T65 कच्चे उत्पाद ने RAW264.7 सेल लाइनों पर कोई साइटोटोक्सिक प्रभाव नहीं दिखाया।

इसके विपरीत, T65 कच्चे उत्पाद ने 13.5 से 1000 ug/mL के साथ इलाज किए जाने पर खुराक पर निर्भर तरीके से RAW264.7 कोशिकाओं को फैलाने में मदद की। जब 1000 ug/mL T65 कच्चे उत्पाद का उपयोग किया गया था, तो RAW264.7 कोशिकाओं की सेल व्यवहार्यता 118.7 प्रतिशत (p <0.05) थी।="" इन="" परिणामों="" से="" पता="" चला="" कि="" t65="" क्रूड="" कंपाउंड="" 1="" mg/ml="" तक="" गैर-विषाक्त="" था="" और="" इसे="" कॉस्मीस्यूटिकल="" फॉर्मूलेशन="" में="" इस्तेमाल="" किया="" जा="" सकता="">

3.4.2. नाइट्रिक ऑक्साइड (NO) उत्पादन का निषेध

NO स्तरों को निर्धारित करने के लिए Griess अभिकर्मक का उपयोग किया गया था। NO निषेध का निर्धारण करने के लिए, RAW264.7कोशिकाओं को T65 कच्चे उत्पाद की विभिन्न सांद्रता के साथ 1 ug/mL LPS (लिपोपॉलीसेकेराइड) के साथ इलाज किया गया था। RAW264.7 कोशिकाओं को LPS द्वारा सक्रिय किया गया था, और NO उत्पादन को संस्कृति माध्यम में नाइट्राइट सांद्रता के रूप में मापा गया था। अकेले LPS की तुलना में, T65 क्रूड उत्पाद महत्वपूर्ण रूप से (p <0.001) lps-उत्तेजित="" raw264.7="" कोशिकाओं="" में="" नाइट्राइट="" सांद्रता="" को="" 15.5="" से="" 125="" ug/ml="" (चित्र="" 2))।="" मैक्रोफेज="" एलपीएस-टोल-जैसे="" इंड्यूसिबल="" नो="" सिंथेज़="" (आईएनओ)="" की="" अभिव्यक्ति="" थे="" जो="" रिसेप्टर्स="" के="" माध्यम="" से="" सेल="" सक्रियण="" को="" संकेत="" देते="" थे="" [38]।="" lps="" मैक्रोफेज="" का="" एक="" सक्रियकर्ता="" है="" और="" स्तनधारी="" कोशिकाओं="" [39]="" में="" no="" के="" उत्पादन="" में="" महत्वपूर्ण="" भूमिका="" निभाता="" है।="" no="" एक="" मुक्त="" मूलक="" है="" जो="" मैक्रोफेज="" जैसे="" इम्युनोकोम्पेटेंट="" कोशिकाओं="" द्वारा="" निर्मित="" होता="" है="" [40]।="" no="" के="" उत्पादन="" का="" मैक्रोफेज="" पर="" फागोसाइटिक="" प्रभाव="" होता="" है।="" इस="" प्रकार,="" मैक्रोफेज="" सेल="" लाइन="" raw264.7="" को="" एंटीऑक्सिडेंट="" परख="" के="" लिए="" चुना="" गया="" था।="" लंबे="" समय="" से,="" no="" उत्पादन="" को="" बाधित="" करने="" के="" लिए="" प्राकृतिक="" एंटीऑक्सिडेंट="" की="" खोज="" पर="" काफी="" ध्यान="" दिया="" गया="" है="" [41]।="" 125="" ug/ml="" पर,="" t65="" क्रूड="" उत्पाद="" ने="" no="" स्तरों="" को="" 1="" ug/ml="" lps="" द्वारा="" उत्पादित="" no="" की="" तुलना="" में="" 57.4="" प्रतिशत="" तक="" पर्याप्त="" रूप="" से="" कम="" कर="" दिया।="" lps-="" प्रेरित="" raw264.7="" मैक्रोफेज="" सेल="" लाइन="" में="" उत्पादित="" no="" के="" निषेध="" के="" आधार="" पर,="" t65="" कल्चर="" एक्सट्रैक्ट="" को="" एक="" शक्तिशाली="" एंटीऑक्सिडेंट="" माना="" जा="" सकता="">

DPPPHrRaaddiciacal lsScavaveennggininggpAerccteivnitayges विभिन्न सांद्रता में और T65 कच्चे उत्पाद का IC50 मूल्य तालिका S5 में दिया गया है। एस्कॉर्बिक एसिड (विटामिन सी) को एक मानक के रूप में इस्तेमाल किया गया था क्योंकि इसका उपयोग लोशन, क्रीम, सीरम और पैच में किया जाता है, जो कि सामयिक अनुप्रयोगों के लिए शक्तिशाली एंटीऑक्सीडेंट गतिविधियों के लिए जाने जाते हैं [42]। विटामिन सी और टी65 माध्यमिक उत्पादों के लिए डीपीपीएच कट्टरपंथी मैला ढोने की गतिविधियों के लिए आईसी50 क्रमशः 5.01 और 6.31 ug/mL पाया गया (चित्र 3)।

पादप सामग्रियों की तुलना में बैक्टीरियल आइसोलेट्स से एंटीऑक्सीडेंट गतिविधियों के बारे में केवल कुछ अध्ययन हैं और अधिकांश अध्ययनों ने अच्छी तरह से स्थापित पौधों के उत्पादों [43-49] पर ध्यान केंद्रित किया है। 10 ug/mL उत्पाद की सांद्रता DPPH मुक्त मूलक के 68.66 ± 2.83 प्रतिशत को परिमार्जन करने में सक्षम थी। T65 कच्चे उत्पाद का IC50 लगभग सबसे मजबूत एंटीऑक्सिडेंट विटामिन सी के बराबर था, जिससे पता चलता है कि इसे कॉस्मेटिक्स के निर्माण में एक एंटीऑक्सिडेंट एजेंट के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है।

3.5.1. सीसीडी में साइटोटोक्सिसिटी-986स्क सेल

मानव त्वचीय फाइब्रोब्लास्ट (HDF) कोशिकाओं में T65 के कच्चे यौगिकों की साइटोटोक्सिसिटी का मूल्यांकन MTT परख का उपयोग करके CCD -986 Sk सेल लाइन में किया गया था। जब T65 कच्चे उत्पाद की सांद्रता 0 से 1 mg/mL की आपूर्ति की गई, तो HDF कोशिकाएं खुराक पर निर्भर तरीके से 500 ug/mL की सांद्रता तक फैल गईं। इस परिणाम से पता चला कि T65 से कच्चे यौगिक HDF कोशिकाओं के लिए गैर-साइटोटॉक्सिक थे। हालांकि, 1 मिलीग्राम/एमएल से अधिक की सांद्रता साइटोटोक्सिक पाई गई, और नियंत्रण की तुलना में केवल 81.34 प्रतिशत कोशिकाएं ही जीवित रहीं (चित्र 4)।

3.5.2. एचडीएफ का प्रसार

एचडीएफ कोशिकाओं के प्रसार को सीसीडी {0}} एसके सेल लाइन का उपयोग करके निर्धारित किया गया था। T65 क्रूड उत्पाद ने HDF कोशिकाओं को 0 से 500 ug/mL (चित्र 5) तक एकाग्रता-निर्भर तरीके से बढ़ाया। हालांकि, यह 1 मिलीग्राम/एमएल की एकाग्रता में साइटोटोक्सिक था। मानव त्वचीय उपकला कोशिका वृद्धि ने मानव त्वचीय कोशिकाओं और स्रावित कोलेजन [50,51] से पृथक प्राथमिक सुसंस्कृत कोशिकाओं में परिवर्तन के माध्यम से शिकन सुधार क्षमता की पुष्टि की।

3.5.3। कोलेजन प्रकार I संश्लेषण

एलिसा द्वारा कोलेजन प्रकार I के संश्लेषण का पता लगाया गया। 250 पीजी/एमएल पर टी65 के कच्चे उत्पाद ने खुराक पर निर्भर तरीके से कोलेजन प्रकार I की एकाग्रता को 145.91 प्रतिशत ± 9.11 प्रतिशत (मतलब ± एसडी; 24, 48, और 72 घंटे का मतलब) तक बढ़ा दिया। 24, 48, और 72 घंटे में तीन प्रयोगों के परिणाम ने टाइप I कोलेजन (चित्र 6) के संश्लेषण को दिखाया। इस प्रकार, मानव त्वचीय उपकला कोशिका वृद्धि के साथ कोलेजन के त्वचीय कोशिका स्राव ने T65 यौगिकों की शिकन-सुधार क्षमता की पुष्टि की।

3.6. सफेद करने वाली गतिविधियाँ

3.6.1. B16F1 कोशिकाओं में साइटोटोक्सिसिटी

MTT परख द्वारा B16F1 मेलेनोमा कोशिकाओं पर T65 कच्चे उत्पाद की साइटोटोक्सिसिटी का परिणाम चित्र 8 में दिखाया गया है। B16F1 कोशिकाओं में T65 कच्चे उत्पाद के ऊष्मायन के परिणाम ने 1 मिलीग्राम / एमएल एकाग्रता तक गैर-विषाक्त प्रभाव दिखाया। B16F1 कोशिकाएं खुराक पर निर्भर तरीके से 62.5 ug/mL की सांद्रता तक बढ़ीं, लेकिन सेल व्यवहार्यता में एक महत्वपूर्ण (p <{14}}.05) खुराक="" पर="" निर्भर="" कमी="" का="" मूल्यांकन="" 125="" से="" 1000="" ug/ml="" तक="" किया="" गया।="" हालांकि,="" 1="" मिलीग्राम/एमएल="" की="" एकाग्रता="" पर,="" 99.12="" प्रतिशत="" ±="" 4.16="" प्रतिशत="" व्यवहार्य="" कोशिकाओं="" को="" देखा="" गया="" था="" (चित्र="" 8)।="" प्रायोगिक="" परिणामों="" से="" पता="" चला="" है="" कि="" तनाव="" t65="" संस्कृति="" का="" एथिल="" एसीटेट="" अर्क="" b16f1="" मेलेनोमा="" सेल="" लाइन="" के="" लिए="" गैर-साइटोटॉक्सिक="" था="" और="" इसका="" उपयोग="" मानव="" त्वचा="" को="" गोरा="" करने="" के="" लिए="" कॉस्मेटिक="" उत्पादों="" के="" निर्माण="" में="" किया="" जा="" सकता="">

3.6.2. B16F10 कोशिकाओं में मेलेनिन संश्लेषण निषेध

श्वेत प्रभाव की पुष्टि के लिए, B16F10 कोशिकाएं, एक कोशिका रेखा जो स्रावित करती है और उत्पन्न करती हैकोशिकाओं में मेलेनिन का उपयोग किया गया था। मेलेनिन संश्लेषण को बढ़ावा देने के लिए, B16F10 को 1 ug of -MSH के साथ पूरक किया गया था। सकारात्मक नियंत्रण के रूप में Arbutin (100 ug/mL; एक व्यावसायिक विरंजन एजेंट) का उपयोग किया गया था। इस प्रयोग के सूक्ष्म अवलोकन ने 48 घंटे (चित्रा 9ए, बी) में टी65 संस्कृति के अर्क के 125 कुग/एमएल के आवेदन द्वारा मेलेनिन का लगभग पूर्ण निषेध दिखाया। इस प्रयोग ने साबित कर दिया कि T65 कल्चर एक्सट्रैक्ट में खुराक पर निर्भर तरीके से मेलेनिन संश्लेषण को बाधित करने की क्षमता है और सामयिक अनुप्रयोगों के लिए कॉस्मेटिक उत्पादों के निर्माण के लिए इसे व्हाइटनिंग एजेंट के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है।

3.7. मेसोपोरस सिलिका सामग्री

मेसोपोरस सामग्री एक ऐसी सामग्री है जिसमें आईयूपीएसी (इंटरनेशनल यूनियन ऑफ प्योर एंड एप्लाइड केमिस्ट्री) नामकरण के अनुसार 2 से 50 एनएम के व्यास वाले छिद्र होते हैं, और इस प्रकार मेसोपोरस सिलिका सामग्री एक सिलिका सामग्री होती है जिसमें छिद्र होते हैं जो व्यास में 2-50 एनएम होते हैं। इस सामग्री को 1970 के दशक में सबसे पहले अमेरिकी पेटेंट में रिपोर्ट किया गया था, लेकिन संबंधित क्षेत्रों में अच्छी तरह से ध्यान नहीं दिया गया था, और इस तरह इसी तरह की सामग्री का स्वतंत्र रूप से शोध किया गया था और 1990 में जापान द्वारा फिर से संश्लेषित किया गया था [69]। मोबिल कॉर्पोरेशन लेबोरेटरीज द्वारा अधिक विस्तृत शोध किया गया, और उन्होंने इस सामग्री को एमसीएम (मोबिल क्रिस्टलीय सामग्री) नाम दिया, एमसीएम -41 या एमसीएम -48 जैसे उदाहरणों के साथ, जिनमें से मेसोपोर व्यास 2 से 6 तक है। एनएम [70,71]. कैलिफोर्निया विश्वविद्यालय, सांता बारबरा में एक अन्य शोध समूह, 6 साल बाद एक बड़े छिद्र आकार (5-30 एनएम) मेसोपोरस सिलिका को संश्लेषित करने में सफल रहा, और उन्होंने इसे SBA (सांता बारबरा अनाकार सामग्री) नाम दिया -15 [72] . मेसोपोर सिलिका सामग्री को पहले अपने स्वयं के संरचनात्मक चरित्र के कारण आणविक चलनी के रूप में उपयोग करने के लिए डिज़ाइन किया गया था, लेकिन हाल ही में इसे दवा वितरण, उत्प्रेरक, बायोसेंसर, ऊर्जा भंडारण, और इसके आगे के अनुप्रयोगों की एक विस्तृत श्रृंखला मिली है।

SBA-15 और MCM-41 मेसोपोरस सामग्री में विभिन्न अंतर हैं। हालांकि, इन दोनों में अंतर करने का सबसे सरल तरीका सिलिका की दीवार की मोटाई है। SBA-15 मोटी सिलिका दीवार के साथ MCM-41 की तुलना में अधिक स्थिर और कठोर संरचना होती है, जिसकी दीवार की मोटाई पतली होती है। इसके अलावा, SBA-15 की सिंथेटिक विधि MCM-41 की तुलना में सरल है। इन अंतरों के कारण, SBA -15 को बायोएक्टिव T65 कच्चे उत्पाद को सिलिका सामग्री के मेसोपोर के अंदर ले जाने के लिए चुना गया था।

3.8. मेसोपोरस सिलिका कणों का संश्लेषण

लगातार 2 घंटे के लिए 200 डिग्री सेल्सियस और 3 घंटे के लिए 600 डिग्री सेल्सियस के तहत कैल्सीनेशन प्रक्रिया के बाद, परिणामस्वरूप सफेद सिलिका मेसोपोरस पाउडर प्राप्त किया गया था। इस प्रक्रिया में 8 एनएम छिद्रों में से SBA -15 को संश्लेषित किया गया। SBA-15 के कण आकार 11.539–13.630 मिमी व्यास (चित्र S4) पाए गए और दो अलग-अलग सुविधाओं द्वारा निर्धारित किए गए: इंहा विश्वविद्यालय प्रयोगशाला और चांगवोन राष्ट्रीय विश्वविद्यालय प्रयोगशाला। इसके अलावा, चित्र S4 में सभी छह नमूनों को एक ही विधि लेकिन एक अलग बैच द्वारा संश्लेषित किया गया था।

जब मिश्रण को 60 C पर बनाए रखा गया था और उपरोक्त विधि का पालन करते हुए स्थिर परिस्थितियों में 4 दिनों के लिए छोड़ दिया गया था, तो 5 एनएम छिद्र के SBA -15 को परिचित किया गया था। इसके अतिरिक्त, जब तापमान 120 C पर नियंत्रित किया गया था, तो 10 एनएम के एसबीए -15 को संश्लेषित किया गया था। परिणामों के अनुसार, उम्र बढ़ने की प्रक्रिया के आधार पर मेसोपोर के आकार को नियंत्रित किया जा सकता है [73]। 10 एनएम पोर (चित्र 11) के SBA-15 का उपयोग आगे की प्रक्रिया के लिए किया गया था क्योंकि बड़े छिद्र मेसोपोरस सिलिका नैनोमटेरियल्स में संकीर्ण छिद्र [74] की तुलना में बायोमोलेक्यूल्स के लिए बेहतर वितरण क्रियाएं होती हैं।

3.9. सतत प्रदर्शन मूल्यांकन

यह निर्धारित करने के लिए कि क्या मेसोपोरस SBA-15 में नियंत्रित-रिलीज़ क्षमता है, SBA-15 और T65 कच्चे उत्पाद को DI पानी, मेथनॉल, एसीटोनिट्राइल, या एथिलीन ग्लाइकॉल सॉल्वेंट में एक साथ जोड़ा गया था। जब SBA-15 और पानी मिलाया गया, तो सिलिका की सतह और पानी के बीच जमाव के कारण घोल एक घोल बन गया। मेथनॉल सिलिका और T65 कच्चे उत्पाद दोनों के लिए एक अच्छा विलायक था। हालांकि, विषाक्तता के कारण, एसीटोनिट्राइल के लिए मेथनॉल को प्रतिस्थापित किया गया था। T65 विसर्जन अनुपात के कण PV मान (तालिका S13) द्वारा निर्धारित किए गए थे। जैसा कि तालिका S13 में दिखाया गया है, T65 कच्चे उत्पाद के साथ विसर्जन के बाद SBA -15 का PV मान कम हो गया। इससे पता चला कि T65 सामग्री मेसोपोरस सिलिका कणों के अंदर अच्छी तरह से डूबी हुई थी।

यह निर्धारित करने के लिए कि कण के अंदर T65 था या नहीं, T65 की जांच HPLC (चित्र S5) द्वारा की गई थी। जैसा कि डेटा द्वारा दिखाया गया है, दो विशिष्ट चोटियाँ (लाल बॉक्स के अंदर) थीं जो हमेशा T65 संस्कृति के अर्क के मामले में दिखाई देती थीं, भले ही T65 तैयारी बैच को बदल दिया गया था। इन दो चोटियों में 230 एनएम पर 10 मिनट और 12 मिनट का अवधारण समय था। एचपीएलसी में छानने के नमूने की जांच यह निर्धारित करने के लिए की गई थी कि क्या टी 65 एम्बेडेड एसबीए -15 के अंदर मौजूद था। जैसा कि चित्र S6 में दिखाया गया है, दो विशिष्ट चोटियों को 10 मिनट और 12 मिनट के करीब देखा गया। इसके अलावा, 18 मिनट के अवधारण समय के पास एक छोटी सी चोटी देखी गई, जो कि समय-रिलीज़ होने वाले T65 उत्पादों का पता लगाने के लिए बहुत महत्वपूर्ण है।

चित्र 12 0 से 3 दिनों तक T65 एम्बेडेड SBA-15 के स्थायी परीक्षण की नियंत्रित रिलीज़ को दर्शाता है। T65 का विशिष्ट शिखर 0 से 3 दिनों तक 15 और 2 0 मिनट के करीब दिखाई दे रहा था। T65 कच्चे उत्पादों को ठीक से डुबोया गया और समय के साथ धीरे-धीरे स्रावित किया गया। इसके अलावा, इस अध्ययन में प्रस्तावित सिलिका मेसोपोरस सामग्री (एसबीए -15) T65 कच्चे उत्पाद में शारीरिक रूप से सक्रिय पदार्थों को ले जा सकती है और पुष्टि की है कि शारीरिक रूप से सक्रिय पदार्थ लोड होने के बाद निरंतर रिलीज तरीके से जारी किए गए थे। इसके अलावा, इस अध्ययन में प्रस्तावित सिलिका मेसोपोरस सामग्री, भविष्य में, विभिन्न कार्यात्मक सामग्रियों को संसेचन के लिए एक अच्छे वाहक के रूप में और विभिन्न शारीरिक रूप से सक्रिय पदार्थों का समर्थन करके एक निरंतर-रिलीज़ सामग्री के रूप में उपयोग की जा सकती है।

4। निष्कर्ष

मिट्टी के सूक्ष्मजीवों से निकाले गए द्वितीयक जैव सक्रिय पदार्थ अपने रोगाणुरोधी, एंटीऑक्सिडेंट, विरोधी शिकन, त्वचा को गोरा करने और रोगाणुरोधी गतिविधियों के कारण कॉस्मेटिक अनुप्रयोगों के लिए रुचि रखते हैं। यह अध्ययन कॉस्मेटिक फॉर्मूलेशन में कार्यात्मक अवयवों के लिए तनाव टी 65 संस्कृति के एथिल एसीटेट निकालने की उपन्यास गतिविधि का वर्णन करता है। T65 क्रूड उत्पाद विभिन्न सेल लाइनों के लिए गैर विषैले था, जैसे कि HaCaT (मानव केराटिनोसाइट), RAW264.7 (मैक्रोफेज सेल), CCD -986 Sk (मानव त्वचा फाइब्रोब्लास्ट सेल), और B16F1 और B16F10 मेलेनोमा कोशिकाएं . इसके अलावा, T65 क्रूड उत्पाद ने कोलेजन टाइप I सिंथेसिस के अपग्रेडेशन को दिखाया, जो त्वचा पर झुर्रियों को कम करने के लिए बहुत महत्वपूर्ण है। इसके अलावा, T65 कच्चे उत्पाद ने मानव रोगजनक बैक्टीरिया जैसे बी.सबटिलिस, ई. कोलाई, पी. एक्ने, एस. ऑरियस, और एस. एपिडर्मिडिस को पर्याप्त रूप से बाधित किया, जो कॉस्मेटिक उत्पाद के खराब होने और रोगजनक बैक्टीरिया के उपनिवेशण को रोकने में मदद कर सकते हैं। मानव त्वचा पर मुँहासे वल्गरिस का निर्माण। इसके अलावा, T65 कच्चे उत्पाद ने एंटी-एजिंग गतिविधियों के लिए सफेद प्रभाव और पोर्सिन अग्नाशयी इलास्टेज के लिए मशरूम टायरोसिनेस को बाधित किया, और एंटीऑक्सीडेंट गतिविधियों के लिए NO और मैला ढोने वाले DPPH रेडिकल्स को बाधित किया। मेसोपोरस सिलिका कणों के संश्लेषण, SBA-15 ने साबित किया कि T65 क्रूड उत्पाद प्रभावी नियंत्रित रिलीज गुणों के साथ cosmeceutical फॉर्मूलेशन में प्रभावी होगा। अंत में, स्वयंसेवकों के चेहरे पर T65 कच्चे उत्पाद के साथ तैयार कॉस्मेटिक उत्पाद के विवो अनुप्रयोग में T65 के श्वेत और विरोधी शिकन प्रभाव साबित हुए। हालांकि, विभिन्न जैव सक्रिय यौगिकों के रसायन विज्ञान और विभिन्न एंजाइम निषेध और रोगज़नक़ निषेध गतिविधियों से संबंधित आणविक तंत्र की खोज की जानी बाकी है। अंत में, हमारे अध्ययन ने इस विचार का पुरजोर समर्थन किया कि वाइटनिंग इफेक्ट, एंटी-रिंकल फॉर्मेशन, एंटी-ऑक्सीडेंट प्रभाव और एंटीमाइक्रोबियल गतिविधियों के लिए बैक्टीरियल संसाधनों को शीर्ष रूप से लागू कॉस्मेटिक उत्पादों में जोड़ा जा सकता है।

सिस्टैंच फार्मा स्पेशल

अधिक जानकारी के लिए यहां क्लिक करें।