आहार कोको फ्लेवनॉल्स कंकाल की मांसपेशियों में माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन को बढ़ाते हैं और स्वस्थ चूहों में पूरे शरीर के चयापचय को संशोधित करते हैं

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सार: माइटोकॉन्ड्रियल डिसफंक्शन व्यापक रूप से विभिन्न रोगों में सूचित किया जाता है और उनके रोगजनन में योगदान देता है। हमने के प्रभाव का आकलन कियाकोको फ्लेवनॉल्समाइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन और संपूर्ण चयापचय पर पूरकता, और हमने पता लगाया कि माइटोकॉन्ड्रियल डीएसेटाइलेज़ सिर्टुइन -3 (Sirt3) शामिल है या नहीं। हमने जंगली प्रकार और Sirt3-/चूहों में 15 दिनों के CF पूरकता के प्रभावों का पता लगाया। अप्रत्यक्ष कैलोरीमेट्री द्वारा पूरे शरीर के चयापचय का मूल्यांकन किया गया था, और आकलन करने के लिए एक मौखिक ग्लूकोज सहिष्णुता परीक्षण किया गया थाग्लूकोज चयापचय. माइटोकॉन्ड्रियल श्वसन क्रिया का मूल्यांकन पारगम्य तंतुओं में किया गया था और पाइरीडीन न्यूक्लियोटाइड्स सामग्री (एनएडी प्लस और एनएडीएच) की मात्रा निर्धारित की गई थी। जंगली प्रकार में, CF पूरकता ने कार्बोहाइड्रेट के उपयोग को बढ़ावा देकर और ग्लूकोज सहिष्णुता में सुधार करके पूरे शरीर के चयापचय को महत्वपूर्ण रूप से संशोधित किया। CF अनुपूरण ने माइटोकॉन्ड्रियल द्रव्यमान की उल्लेखनीय वृद्धि को प्रेरित किया, जबकि H2O2 उत्पादन और सेलुलर ऑक्सीडेटिव तनाव को बनाए रखने के लिए महत्वपूर्ण गुणात्मक अनुकूलन हुआ। CF अनुपूरण ने NAD plus और NADH सामग्री में उल्लेखनीय वृद्धि को प्रेरित किया। ऊपर बताए गए सभी प्रभाव Sirt3-7चूहों में कुंद हो गए थे। सामूहिक रूप से, CF अनुपूरण ने NAD चयापचय को बढ़ावा दिया जो कि सिर्टुइन चयापचय को उत्तेजित करता है और माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन में सुधार करता है, जो संभवतः पूरे शरीर के चयापचय अनुकूलन में योगदान देता है, कार्बोहाइड्रेट का उपयोग करने की अधिक क्षमता के साथ, कम से कम आंशिक रूप से Sirt3 के माध्यम से।

कीवर्ड: कोको फ्लेवनॉल्स; एनएडी चयापचय; माइटोकॉन्ड्रियल द्रव्यमान; ग्लूकोज चयापचय; कंकाल की मांसपेशी

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1 परिचय

माइटोकॉन्ड्रिया उपकोशिकीय अंग हैं जो कई सेलुलर कार्यों में शामिल होते हैं, जैसे कि माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव फास्फारिलीकरण के माध्यम से ऊर्जा पारगमन और माइटोकॉन्ड्रियल हाइड्रोजन पेरोक्साइड उत्पादन या माइटोकॉन्ड्रियल-मध्यस्थता कोशिका मृत्यु सक्रियण [1-3]। उभरते हुए सबूत बताते हैं कि माइटोकॉन्ड्रियल डिसफंक्शन कई विकृति में शामिल है और उनके रोगजनन में एक केंद्रीय भूमिका निभाता है [4]। हमारे समूह ने नैदानिक ​​​​जटिलताओं [5] से बहुत पहले टाइप 1 मधुमेह वाले रोगियों में माइटोकॉन्ड्रियल हानि की सूचना दी थी। इसके अलावा, स्वस्थ लोगों में भी उम्र बढ़ने के साथ माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव क्षमता में कमी होती है [6]। इसलिए, इन विकारों को कम करने या माइटोकॉन्ड्रियल द्रव्यमान को बढ़ाने के लिए रणनीतियों की पहचान, कई विकारों की घटनाओं को रोकने या कम करने या स्वस्थ विषयों की एरोबिक क्षमता को बढ़ाने के अवसर हैं।

इस संदर्भ में, सीमित साइड इफेक्ट के साथ या बिना माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन और पूरे शरीर के चयापचय को बढ़ाने वाले सुरक्षित और प्राकृतिक यौगिकों की पहचान रुचि की है। प्राकृतिक यौगिकों में,कोको फ्लेवनॉल्स(सीएफ) को आशाजनक अणु माना जाता है क्योंकि उनके सेवन से हृदय स्वास्थ्य, इंसुलिन प्रतिरोध या प्रतिरक्षा समारोह [7] पर सकारात्मक प्रभाव पड़ता है। वास्तव में, सीएफ को ग्लूकोज चयापचय में सुधार के लिए दिखाया गया था, और सीएफ के अल्पकालिक प्रशासन के बाद ग्लूकोज-असहिष्णु उच्च रक्तचाप वाले रोगियों [8,9] में भी इंसुलिन संवेदनशीलता में वृद्धि हुई है।

फ्लेवनॉल्स में, (-) - एपिकटेचिन (EPI) CF में सबसे अधिक पाया जाने वाला मोनोमर है, और EPI को CF [10] का प्रमुख जैवउपलब्ध और बायोएक्टिव अणु माना जाता है। साक्ष्य का एक सुसंगत निकाय इंगित करता है कि ईपीआई पूरकता माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन और / या कंकाल की मांसपेशी में सामग्री में सुधार करती है [11]। ईपीआई अनुपूरण पेरॉक्सिसोम प्रोलिफ़रेटर-सक्रिय रिसेप्टर गामा कोएक्टीवेटर 1-अल्फ़ा (पीजीसीएल) और प्रमुख परमाणु ट्रांसक्रिप्शनल कॉम्प्लेक्स पर अभिसरण करने वाले कई मार्गों को उत्तेजित करता है। ईपीआई सीधे नाइट्रिक ऑक्साइड पीढ़ी को बढ़ाता है, जो माइटोकॉन्ड्रियल बायोजेनेसिस को उत्तेजित करता है [11]। साथ ही, ईपीआई पूरकता [11] द्वारा सिर्टुइन 1 और 3 को भी प्रेरित किया जाता है। प्रोएंथोसायनिडिन, ओलिगोमेरिक का उपयोगflavonoidsजिसमें EPI होता है, NADbiosynthesis के लिए कई अग्रदूतों की वृद्धि के माध्यम से इंट्रासेल्युलर निकोटीनैमाइड एडेनिन डाइन्यूक्लियोटाइड (NAD प्लस) के स्तर को बढ़ाने के लिए दिखाया गया था और चूहे के जिगर में सिर्टुइन -1 mRNA स्तर को अपग्रेड किया गया था [12]। सिर्टुइन परिवार (सिर्ट), एक एनएडी-आश्रित डीएसेटाइलेज़, में सात सदस्य होते हैं जो उनके उप-कोशिकीय वितरण, सब्सट्रेट विशिष्टता और सेलुलर कार्यों [13] से भिन्न होते हैं। इस परिवार का एक व्यापक रूप से अध्ययन किया गया सदस्य Sirt1, PGCl के डीसेटाइलेशन को बढ़ावा देकर माइटोकॉन्ड्रियल बायोजेनेसिस को उत्तेजित करता है, जिससे इसकी ट्रांसक्रिप्शनल गतिविधि [14] बढ़ जाती है। ईपीआई प्रशासन [12, 15-17] के बाद एक प्रमुख मेटाबोलिक सेंसर सिर्टे को प्रेरित किया गया था। हालांकि, अन्य सिर्टुइन पर ईपीआई के प्रभाव का पता नहीं चला है। EPI प्रभाव का आकलन विशेष रूप से माइटोकॉन्ड्रिया (Sirt3, Sirt 4, और Sirt5) के भीतर स्थित सिर्टुइन पर दिलचस्प होगा, जो क्रेब्स चक्र और श्वसन श्रृंखला एंजाइम [18] की गतिविधि को संशोधित करने के लिए जाने जाते हैं। Sirt3, जो उच्च चयापचय टर्नओवर और माइटोकॉन्ड्रियल सामग्री वाले ऊतकों में अत्यधिक व्यक्त किया जाता है, प्रतिवर्ती प्रोटीन लाइसिन डीसेटाइलेशन के माध्यम से सामान्य माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन को बनाए रखने में अपनी महत्वपूर्ण भूमिका के संबंध में विशेष रुचि रखता है [19-21] इसके अलावा, Sirt3 एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। पूरे शरीर के चयापचय का विनियमन [20. Sirt3 को टाइप 1 और टाइप 2 मधुमेह और हृदय रोगों [22,23] के मॉडल के कंकाल की मांसपेशी में परिवर्तित दिखाया गया था। इसके अलावा, यह सुझाव दिया गया था कि Sirt3 की सक्रियता माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन और चयापचय [23,24] में सुधार के लिए एक आशाजनक चिकित्सीय रणनीति का प्रतिनिधित्व कर सकती है। इसलिए, यह निर्धारित करना कि क्या Sirt3 पूरे शरीर के चयापचय और माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन पर CF पूरकता के लाभकारी प्रभावों का हिस्सा है, रुचि का है।

इस अध्ययन में, हमने चूहों में 15-दिन CF अनुपूरण के प्रभाव की जांच करने के लिए एक एकीकृत दृष्टिकोण का उपयोग किया। हमने अनुमान लगाया कि CF अनुपूरण: (i) पूरे शरीर के चयापचय को संशोधित करेगा औरग्लूकोज चयापचय, (ii) पारगम्य तंतुओं में ऑक्सीडेटिव और ग्लाइकोलाइटिक मांसपेशियों में माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन को बढ़ाता है, और (ii) एनएडी चयापचय को बढ़ावा देता है। हमने सीएफ-प्रेरित माइटोकॉन्ड्रियल बायोजेनेसिस और पूरे शरीर के चयापचय में Sirt3 की पुटेटिव भागीदारी का भी पता लगाया। हमारी परिकल्पना थी कि पूरे शरीर के चयापचय और माइटोकॉन्ड्रियल द्रव्यमान पर CF का प्रभाव Sirt3-7चूहों में धुंधला हो जाएगा।

2. तरीके

2.1. पशु और आहार

इस अध्ययन के लिए, 129S1/SvlmJ 10-सप्ताह के नर चूहों को जैक्सन लेबोरेटरीज (बार हार्बर, एमई, यूएसए) से खरीदा गया था। यह निर्धारित करने के लिए कि क्या सिर्टुइन सीएफ प्रशासन-प्रेरित माइटोकॉन्ड्रियल द्रव्यमान और कार्य अनुकूलन में शामिल हैं, हमने 10-सप्ताह पुराने Sirt3 पूरे शरीर के नॉक-आउट नर चूहों को जंगली-प्रकार [25] के समान तनाव पर इस्तेमाल किया। Sirt3 / चूहों का उपयोग CF- प्रेरित माइटोकॉन्ड्रियल जैवजनन और पूरे शरीर के चयापचय अनुकूलन में Sirt3 की भागीदारी का पता लगाने के लिए किया गया था। चूहों को एक कमरे में 23-25 डिग्री और नियंत्रित प्रकाश व्यवस्था (12-एच प्रकाश और अंधेरे चक्र) के विनियमित तापमान पर रखा गया था। जानवरों के पास कृंतक चाउ और नल के पानी के एड लिबिटम तक पहुंच थी।

पशु सुविधा में कम से कम एक सप्ताह के निवास के बाद, प्रायोगिक जानवरों को एक कार्बोक्सिमिथाइलसेलुलोज (सिग्मा-एल्ड्रिच, सेंट लुइस) में एक प्राकृतिक अर्क (15 दिनों के लिए दिन में दो बार 302.1 मिलीग्राम / किग्रा शरीर के वजन) के मौखिक गैवेज के माध्यम से सीएफ पूरकता प्राप्त हुई। , मो, यूएसए)। कोको पाउडर की संरचना तालिका 1 में वर्णित है और नेचरक्स (क्वार्ट डी पोबलेट, स्पेन) से प्राप्त की गई है। संरचना को उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी विधि द्वारा स्थापित किया गया है और 100 मिलीग्राम अर्क औसतन 475 मिलीग्राम सूखे कोको बीज के बराबर है। नियंत्रण चूहों को मौखिक गावेज द्वारा कार्बोक्सिमिथाइलसेलुलोज में भंग थियोब्रोमाइन और कैफीन की समान सामग्री से बना एक वाहन प्राप्त हुआ। दैनिक खुराक को उद्योग के मार्गदर्शन के अनुसार निर्धारित किया गया था जो शरीर की सतह क्षेत्र के आधार पर मानव खुराक को पशु समकक्ष खुराक में परिवर्तित करता है, और हमने मानव खुराक को 12.3 [26] से गुणा किया है। मौखिक गैवेज एक अनुभवी तकनीशियन द्वारा किया गया था।

2.2. ऊतक संग्रह1

अंतिम मौखिक गैवेज के चौबीस घंटे बाद, केटामाइन और जाइलाज़िन (क्रमशः: 100 और 10 मिलीग्राम / किग्रा) का उपयोग करके बिना पके जानवरों को संवेदनाहारी किया गया। संज्ञाहरण प्राप्त करने के तुरंत बाद ऊतकों का संग्रह किया गया था। गैस्ट्रोकेनमियस के एकमात्र और सफेद हिस्से को एक्साइज किया गया। नमूने या तो तुरंत तरल नाइट्रोजन में जमे हुए थे और बाद के विश्लेषण के लिए -80 डिग्री पर संग्रहीत किए गए थे या चमड़ी वाले मांसपेशी फाइबर तैयार करने के लिए उपयोग किए गए थे।

2.3. चयापचय और शारीरिक गतिविधि आकलन

अप्रत्यक्ष कैलोरीमेट्री और सहज शारीरिक गतिविधि को व्यापक प्रयोगशाला पशु निगरानी प्रणाली (CLAMS; कोलंबस इंस्ट्रूमेंट्स, कोलंबस, ओएच, यूएसए) का उपयोग करके मापा गया। कक्षों में चूहों को अलग-अलग 28 डिग्री पर रखा गया था, जिसमें 07h00 से 19h00 तक प्रकाश और कृंतक चाउ और नल के पानी के लिए विज्ञापन का उपयोग किया गया था। डेटा संग्रह के एक दिन पहले तीन दिनों के लिए चूहे को चयापचय पिंजरों के लिए उपार्जित किया गया था। पूरकता के पंद्रहवें दिन डेटा संग्रह किया गया था। ऑक्सीजन की खपत (VO2), कार्बन डाइऑक्साइड उत्पादन (VCO2), और श्वसन विनिमय अनुपात (RER) को 0.5 L/मिनट के वायु प्रवाह और 0.4 L/ की एक नमूना हवा के साथ मापा गया था। मि. आरईआर की प्रतिशत सापेक्ष संचयी आवृत्ति (पीसीआरएफ) एक 24- घंटे की अवधि में निर्धारित की गई थी जैसा कि पहले रियाची एट अल द्वारा वर्णित किया गया था। (2004)। संक्षेप में, पीसीआरएफ को प्रत्येक डेटा बिंदु की आवृत्ति को पिछले वेतन वृद्धि अनुक्रम (0.65 से 1.20 तक 0.01 की वृद्धि के साथ) [27] में जोड़कर निर्धारित किया गया था। चयापचय लचीलेपन को पहाड़ी ढलान (H मान) और PRCF वक्र के 50वें प्रतिशतक (EC50) द्वारा निर्धारित किया गया था और 24 घंटे (Riachi et al.2004) से अधिक RER आयाम को मापकर। एक इन्फ्रारेड बीम-संचालित सेंसर सिस्टम का उपयोग करके सामान्य शारीरिक गतिविधि की निगरानी की गई जिसने x- और z- अक्ष गतिविधि का पता लगाया। दोनों कुल गणना (हर बार एक बीम टूट जाती है) और चलने की गणना (हर बार एक नई बीम टूट जाती है) का मूल्यांकन किया गया था। एक एक्स-टोटल (एक्स-टीओटी) गिनती तब दर्ज की जाती है जब जानवर क्षैतिज रूप से 0.5 इंच से अधिक चलता है और छोटे पैमाने पर, दोहराव वाली गतिविधियों का प्रतिनिधि होता है, जैसे कि खरोंच और संवारना। एक्स-एम्बुलेटरी काउंट (एक्स-एएमबी) केवल एक गिनती दर्ज करके वास्तविक हरकत को मापता है जब जानवर एक नया बीम तोड़ता है। एक Z-कुल (Z-TOT) गिनती तब दर्ज की जाती है जब 1.5 इंच ऊर्ध्वाधर गति होती है, यानी, पालन (अब्रे-विएरा 2016)। कार्बोहाइड्रेट और वसा के आकलन के लिएऑक्सीकरणVO2 और VCO2 से, हमने Péronnet और Massicotte से गैर-प्रोटीन श्वसन भागफल तालिका का उपयोग पहले चूहों में किया था [28,29]।

2.4. कुल शरीर और वसा द्रव्यमान

इकोएमआरआई पूरे शरीर चुंबकीय अनुनाद विश्लेषक (इको मेडिकल सिस्टम, ह्यूस्टन, TX, यूएसए) का उपयोग करके मात्रात्मक अनुनाद हस्तक्षेप विश्लेषण द्वारा कुल वसा द्रव्यमान और कुल दुबला द्रव्यमान अनैस्थेटाइज्ड चूहों में निर्धारित किया गया था। कुल वसा द्रव्यमान शरीर में सभी वसा के योग का प्रतिनिधित्व करता है। कुल दुबले द्रव्यमान में मुख्य रूप से मांसपेशी और आंतरिक अंग शामिल थे। कंकाल की मांसपेशियों को कुल दुबले द्रव्यमान के सबसे बड़े हिस्से के लिए जाना जाता है।

2.5. ओरल ग्लूकोज टॉलरेंस टेस्ट (ओजीटीटी)

ग्लाइसेमिया को एक ग्लूकोमीटर (एक्यू-चेक परफॉर्मा, रोश, अर्जेंटीना) के साथ पूंछ से एकत्रित रक्त की एक बूंद का उपयोग करके मापा गया था। OGTT चूहों पर किया गया था जिनका 5 से 6 घंटे तक उपवास किया गया था। माप CF पूरकता के अंतिम दिन किया गया था। बेसल ग्लाइसेमिया (समय ओ) की माप के बाद, चूहों को 1.5 ग्राम ग्लूकोज · किग्रा शरीर के वजन -1 की खुराक पर बाँझ पानी में 20 प्रतिशत ग्लूकोज के घोल के साथ प्रति ओएस इंजेक्ट किया गया। ग्लूकोज समाधान के इंजेक्शन के बाद ग्लाइसेमिया को 15, 30, 60,90 और 120 मिनट में मापा गया। ग्लूकोज वक्र के वृद्धिशील क्षेत्र की गणना तब ग्लूकोज सहिष्णुता के माप के रूप में की गई थी।

2.6.qRT-पीसीआर विश्लेषण

The forward (F) and reverse (R) primers of the selected genes used in this study are presented in Table 2. Total RNA was obtained from pulverized frozen white gastrocnemius muscle using Trizol reagent (Invitrogen Life Technologies, Rockville, MD, USA). The purity, integrity, and quantity of RNA were evaluated using a microplate reader (Synergy H1(Biotek Instruments, Winooski, Vermont). The sample was considered pure when the ratio OD260/OD280 was>1.8. सीडीएनए को आरटी-क्यूपीसीआर (बायोरैड, हरक्यूलिस, सीए, यूएसए) के लिए आईस्क्रिप्ट रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन सुपरमिक्स का उपयोग करके कुल आरएनए （2 μL-से संश्लेषित किया गया था। निर्माता के विनिर्देशों (Invitrogen Lige Technologies, Burlington, Canada) के अनुसार 2x प्लैटिनम SYBR ग्रीन qPCR सुपरमिक्स-UDG का उपयोग करके कुल RT उत्पादों का मात्रात्मक पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (PCR) द्वारा विश्लेषण किया गया था। CFX96 साइक्लर (बायोरैड, हरक्यूलिस, कैलिफ़ोर्निया; शर्तें: 10 मिनट के लिए 95 डिग्री सेल्सियस और 30 एस के लिए 95 डिग्री के 40 चक्र, 45 एस के लिए 55 डिग्री और 45 एस के लिए 72 डिग्री) में साइकिलिंग हासिल की गई थी। प्रत्येक रन के अंत में, प्राइमर-डिमर गठन की अनुपस्थिति और एक अद्वितीय एम्प्लिकॉन की उपस्थिति की पुष्टि पिघलने की अवस्था का उपयोग करके की गई थी। थ्रेशोल्ड चक्र (सीटी) मूल्यों का उपयोग 2- ए-सीटी पद्धति के बाद क्यूपीसीआर डेटा का विश्लेषण करने के लिए किया गया था, या तो-एक्टिन या एचपीआरटी1 को हाउसकीपिंग जीन -30】 के रूप में। मात्रात्मक आरटी-पीसीआर मान नियंत्रण समूह से संबंधित थे, जिन्हें 1 पर सेट किया गया था।

2.7. एंजाइम गतिविधियां

इलेक्ट्रॉन परिवहन श्रृंखला परिसरों और साइट्रेट सिंथेज़ की विशिष्ट गतिविधि का मापन स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक रूप से पहले वर्णित [31] के रूप में किया गया था। चूर्णित जमे हुए सफेद गैस्ट्रोकेनमियस मांसपेशियों (~ 30 मिलीग्राम) को होमोजिनाइज़ेशन बफर के 500 यूएल (120 मिमी KCl, HEPES के 20 मिमी, MgCl के 2 मिमी, ईजीटीए के 2 मिमी, और 5 मिलीग्राम · एमएल-आईओओफ़ बीएसए में एक कंपन माइक्रोबीड होमोजेनाइज़र के साथ समरूप बनाया गया था। , pH7.4) के बाद 500 μL हाइपोटोनिक मीडिया （25 mM पोटेशियम फॉस्फेट और 5 mM MgCl, pH 7.2)। नमूने तब तरल नाइट्रोजन में फ्रीज-पिघलना चक्र के तीन दौर में जमा किए गए थे। नमूने 10 मिनट के लिए 600 × g पर 4 डिग्री पर सेंट्रीफ्यूज किए गए थे, और विश्लेषण तक सतह पर तैरनेवाला बर्फ पर रखा गया था। पियर्स बीसीए प्रोटीन परख किट (थर्मो साइंटिफिक, रॉकफोर्ड, आईएल, यूएसए) का उपयोग करके तीन प्रतियों में सतह पर तैरनेवाला में प्रोटीन सामग्री निर्धारित की गई थी।

साइट्रेट सिंथेज़ (सीएस) की गतिविधि को 412 एनएम पर स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक रूप से निर्धारित किया गया था, 2 मिमी 5,5'-डिथियो-बीआईएस (2- नाइट्रोबेंजोइक एसिड) की कमी के बाद 0 की उपस्थिति में। 1 एमएम एसिटाइल 200 एमएम ट्रिस बफर (पीएच 7.4) में -सीओए और 12 एमएम ऑक्सैलोएसेटिक एसिड। रोटेनोन-संवेदी एनएडीएच-डेसील्यूबिकिनोन ऑक्सीडोरक्टेज (जटिल I) परख को 340 एनएम पर स्वीकर्ता 2, 3- डाइमेथॉक्सी -5- मिथाइल -6- एन-डेसिल -14- बेंजोक्विनोन का उपयोग करके किया गया था। 80 μM） और NADH इलेक्ट्रॉन दाता के रूप में 200 μM） 10 मिमी ट्रिस बफर-पीएच 8.0） में। रोटेनोन के प्रति संवेदनशील गतिविधि को निर्धारित करने के लिए 4μM रोटोनोन का उपयोग किया गया था। साइटोक्रोम ऑक्सीडेज 'कॉम्प्लेक्स IV' की गतिविधि को दाता के रूप में 10μM कम साइटोक्रोम सी का उपयोग करके 550 एनएम पर और 100 मिमी पोटेशियम फॉस्फेट बफर (पीएच 7.0) में दोनों माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली को पारगम्य करने के लिए एन-डोडेसिल-ß-माल्टोसाइड के 2.5 मिमी का प्रदर्शन किया गया था।

सभी एंजाइम परख तीन प्रतियों में निर्धारित किए गए थे, और परिणाम नियंत्रण समूह के उन लोगों से संबंधित थे, जिन्हें 100 पर सेट किया गया था।

2.8. माइटोकॉन्ड्रियल आकलन

माइटोकॉन्ड्रियल श्वसन और माइटोकॉन्ड्रियल एच 2 ओ 2 उत्पादन का अध्ययन सफेद गैस्ट्रोकेनमियस और एकमात्र मांसपेशियों का उपयोग करके सैपोनिन पारगम्य फाइबर में सीटू में किया गया था।1]। संक्षेप में, फाइबर को द्विनेत्री माइक्रोस्कोप के तहत 4 डिग्री (एमएम में: 2.77 CaK2 EGTA, 7.23 K, EGTA, 6.56 MgCl2, 2 0 टॉरिन, 0 .5 DTT, 5 { {50}} K-मीथेन सल्फोनेट्स, 20 इमिडाजोल, 5.7 Na2 ATP और 15 क्रिएटिन-फॉस्फेट, pH 7.1) और घोल A में 50 ug·mL-Iof सैपोनिन के साथ 4 डिग्री पर 30 मिनट के लिए पारगम्य। माइटोकॉन्ड्रियल श्वसन क्रिया को क्लार्क-प्रकार के इलेक्ट्रोड (ऑक्सीग्राफ, हैन्सटेक इंस्ट्रूमेंट्स, ग्लासगो) से लैस ऑक्सीमीटर में निर्धारित किया गया था। चैम्बर 1 एमएल सॉल्यूशन बी (एमएम में: 2.77 सीएके, ईजीटीए, 7.23 के, ईजीटीए, 6.56 एमजीसीएल ,, 20 टॉरिन, 0.5 डीटीटी, 50 के-मीथेन सल्फोनेट्स, और 20 इमिडाजोल, पीएच 7.1) से भरा था। चैम्बर में बेसलाइन ऑक्सीजन सामग्री, 1-2 मिलीग्राम सूखे वजन के पारगम्य मायोफाइबर के एक बंडल को कक्ष में रखा गया था, जिसे बाद में बंद कर दिया गया था। बेसलाइन रीडिंग के बाद, निम्नलिखित जोड़ क्रमिक रूप से किए गए: पामिटॉयल कार्निटाइन और मैलेट-160 μM∶5 mM）, ग्लूटामेट 10 mM）, सक्सेनेट （25 mM）, रोटेनोन （0.5 μm）, अनकप्लर CCCP （1 μM）, एंटीमाइसीन -ए 8 uM）, और N, N', N'-tetramethyl-p-phenylenediamine dihydrochloride and ascorbate(0.9:9 mM)। लगातार हिलाते रहने पर श्वसन 23 डिग्री पर मापा गया। प्रत्येक परीक्षण के अंत में, फाइबर वजन के निर्धारण के लिए फाइबर को जाइलोग्राफिक सेल से सावधानीपूर्वक हटा दिया गया था, और कम से कम 24 घंटे ~ 80C पर सुखाया गया था। O2 खपत (JO2) की दरें nmol O2 min-1.(mg dry weight)-I में व्यक्त की गईं। सभी माप कम से कम डुप्लिकेट में किए गए थे।

माइटोकॉन्ड्रिया को श्वसन द्वारा शुद्ध H2O2 रिलीज को फ्लोरोसेंट जांच Amplex Red（20 μM∶उत्तेजना-उत्सर्जन∶563-587 nm） के साथ पारगम्य फाइबर बंडलों में मापा गया था, जैसा कि पहले बताया गया था [32]। पारगम्य तंतुओं की तैयारी के बाद, नमूने

H2O2 माप के लिए नियत तीन बार बफर Z (mM: 11 0 K-Mes, 35 KCl, 1 EGTA, 5 K2HPO4, 3MgCl, 6H2O, और 0.5 मिलीग्राम: एमएल {में रिंस किया गया था। {14}} बीएसए, pH7.3 4 डिग्री पर)। फाइबर बंडलों ({{20}}.3-1.0 मिलीग्राम शुष्क वजन) को क्वार्ट्ज माइक्रोक्यूवेट में 37 डिग्री पर बफर जेड (पीएच 7.3 पर 37 डिग्री सेल्सियस) के 600 यूएल में निरंतर चुंबकीय सरगर्मी के साथ ऊष्मायन किया गया था। 1.2 U·mL-I हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज के साथ पूरक। किसी भी बहिर्जात श्वसन सब्सट्रेट की अनुपस्थिति में बेसलाइन प्रतिदीप्ति रीडिंग ली गई थी। निम्नलिखित परिवर्धन तब क्रमिक रूप से किए गए थे: ग्लूटामेट (5 मिमी), सक्सेनेट (5 मिमी), रोटेनोन (0.5 यूएम), एडीपी (10 मिमी), और एंटीमाइसीन-ए （8 μM）। प्रत्येक परीक्षण के अंत में, फाइबर थे क्युवेट से सावधानीपूर्वक हटाया गया, दागदार, और फाइबर वजन निर्धारित करने के लिए सुखाया गया। H2O2 उत्पादन की दरें AU·min-1.(mg शुष्क भार)-I और प्रति ऑक्सफोस क्षमता में व्यक्त की गईं जो फास्फारिलीकरण अवस्था के तहत अधिकतम माइटोकॉन्ड्रियल श्वसन के अनुरूप थीं। सभी माप कम से कम डुप्लिकेट में किए गए थे।

माइटोकॉन्ड्रियल कैल्शियम प्रतिधारण क्षमता (सीआरसी) का मूल्यांकन सफेद गैस्ट्रोकेनमियस मांसपेशी भूत फाइबर में किया गया था जैसा कि पहले वर्णित [33] था। संक्षेप में, फाइबर को एक क्वार्ट्ज माइक्रोक्यूवेट में 6 0 0 μL CRC बफर in mM∶250 सुक्रोज, 10 MOPS, 0.005 EGTA, और 10P; -ट्रिस, pH7.3) में निरंतर सरगर्मी के तहत ऊष्मायन किया गया था। फाइबर को तब Ca2 प्लस के 20 एनएम के एकल पल्स के संपर्क में लाया गया था। कैल्शियम ग्रीन 5N(1 mM: उत्तेजना-उत्सर्जन:505-535 nm) का उपयोग करके एक्स्ट्रामिटोकॉन्ड्रियल कैल्शियम सांद्रता में परिवर्तन की निगरानी फ्लोरोमेट्रिक रूप से की गई। पारगम्यता संक्रमण ताकना संवेदनशीलता (पीटीपी) का आकलन पीटीपी खोलने के लिए आवश्यक समय को मापकर किया गया था, और सीआरसी को रिलीज होने से पहले माइटोकॉन्ड्रिया द्वारा संचित सीए की कुल राशि के रूप में लिया गया था। प्रत्येक परीक्षण के अंत में, फाइबर वजन निर्धारित करने के लिए फाइबर को क्यूवेट से सावधानीपूर्वक हटा दिया गया, ब्लॉट किया गया और सूख गया। सीआरसी मूल्यों को सीए 2 प्लस प्रति मिलीग्राम सूखे वजन के एनएम में व्यक्त किया गया था।

2.9. वेस्टर्न ब्लॉट विश्लेषण

सफेद जठराग्नि और एकमात्र मांसपेशियों के प्रोटीनों को लेम्मली बफर में पतला किया गया और मिनी-प्रोटियन टीजीएक्स स्टेन-फ्री 1 0 प्रतिशत प्रीकास्ट पॉलीएक्रिलामाइड जैल (बायोरैड) पर अलग किया गया; प्रत्येक जेल पर एक आंतरिक मानक लोड किया गया था। माइग्रेशन बफर (25 मिमी ट्रिसबेस, 0 .2 एम ग्लाइसिन, और 1 प्रतिशत एसडीएस (पी/वी)) में 35 मिनट के लिए 2 0 0 वी पर इलेक्ट्रोफोरेटिक पृथक्करण किया गया था। स्टेन-फ्री (एसएफ) तकनीक में एक मालिकाना त्रि हेलो यौगिक होता है जो प्रोटीन के साथ प्रतिक्रिया करता है, जिससे उन्हें यूवी एक्सपोजर के माध्यम से पता लगाया जा सकता है। एसएफ इमेजिंग केमीडॉक एमपी इमेजर और इमेज लैब4 का उपयोग करके किया गया था। 0 .1 सॉफ्टवेयर (बायोरैड, हरक्यूलिस, कैलिफोर्निया, यूएसए) एक 5- मिनट के दाग सक्रियण समय के साथ, और कुल प्रोटीन पैटर्न की कल्पना की गई थी। प्रोटीन को तब ट्रांस-ब्लॉट टर्बो ट्रांसफर सिस्टम (बायोरैड) का उपयोग करके 0.2 um नाइट्रोसेल्यूलोज शीट पर स्थानांतरित किया गया था। स्थानांतरण की गुणवत्ता को एसएफ तकनीक का उपयोग करके इमेजिंग झिल्ली द्वारा नियंत्रित किया गया था। स्थानांतरण कदम के बाद, कार्बोनिल प्रोटीन को 2N HCL में डाइनाइट्रोफेनिलहाइड्राज़िन के साथ व्युत्पन्न किया गया और अंत में बड़े पैमाने पर मेथनॉल से धोया गया। झिल्ली को 5 प्रतिशत गैर-वसा वाले सूखे दूध के साथ ट्रिस-बफर खारा युक्त ट्वीन -20 (टीबीएसटी: 15 मिमी ट्रिस / एचसीएल, पीएच 7.6,140 मिमी NaCl, और 0.05 प्रतिशत ट्वीन -20) के साथ अवरुद्ध किया गया था। कमरे के तापमान पर 1 घंटे। निम्नलिखित प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ झिल्ली को रात भर 4 डिग्री या कमरे के तापमान पर 2 घंटे में ऊष्मायन किया गया था: प्रोटीन कार्बोनिल प्राथमिक एंटीबॉडी (एंटी-डीएनपी; # एसटीए -308, सेल बायोलैब्स) और एसओडी 2 (# एबी 13533, एबकैम)। टीबीएसटी में तीन 10 मिनट धोने के बाद, प्रोटीन कार्बोनिल (एचआरपी-संयुग्म; # एसटीए -308, सेल बायोलैब्स) और एसओडी 2 (खरगोश विरोधी आईजीजी-एचआरपी से जुड़े; # 7074, सेल सिग्नलिंग) के लिए माध्यमिक एंटीबॉडी के साथ झिल्ली की जांच की गई। कमरे के तापमान पर 2 घंटे के लिए अवरुद्ध समाधान में और अंत में बड़े पैमाने पर टीबीएसटी से धोया गया। प्रत्येक एंटीबॉडी के लिए प्राथमिक और माध्यमिक एंटीबॉडी के कमजोर पड़ने को अनुकूलित किया गया था। ECL Clarity (Biorad) का उपयोग करके Chemiluminescence का पता लगाया गया था, और छवियों को कैप्चर करने के लिए ChemiDocMP का उपयोग किया गया था। इमेज लैब 4.0.1 सॉफ्टवेयर का उपयोग करके सभी छवियों का विश्लेषण किया गया। एसएफ छवियों, नमूना नियंत्रण और आंतरिक मानकों पर संबंधित कुल प्रोटीन स्तरों की मात्रा का ठहराव के बाद प्रोटीन संकेत तीव्रता का सामान्यीकरण किया गया था।

2.10. एनएडी मापन

एक व्यावसायिक किट (#K337-100, Biovision, USA) का उपयोग करके और निर्माता के निर्देशों का पालन करते हुए कुल NAD और NADH स्तरों को समरूप सफेद गैस्ट्रोकेनमियस में मापा गया। संक्षेप में, NAD (NADt= NADt और NADH) का कुल पूल निकाला गया। निकाले गए प्रत्येक नमूने के लिए, एनएडीएच को बरकरार रखते हुए एनएडीटी को विघटित करने के लिए आधे नमूने को 30 मिनट के लिए 60 डिग्री तक गर्म किया गया था। NADt और NADH दोनों नमूनों को NAD साइकलिंग एंजाइम के साथ मिलाया गया था, और अवशोषण को 450nm पर मापा गया था। एनएडीएच मानक वक्र के साथ तुलना करके और मिलीग्राम प्रोटीन को सामान्य करके एनएडीटी और एनएडीएच की मात्रा निर्धारित की गई थी। अंत में, एनएडी प्लस (एनएडीटी-एनएडीएच) से एनएडीएच के अनुपात की गणना की गई। सभी assays तीन प्रतियों में किए गए थे।

2.11. आंकड़े

डेटा को माध्य ± मानक विचलन (एसडी) के रूप में सूचित किया जाता है। D'Agostino-Pearson सामान्यता परीक्षण का उपयोग करके डेटा सामान्यता का मूल्यांकन किया गया था। बार-बार माप के लिए छात्र के टी-टेस्ट और टू-वे एनोवा (समूह और समय) का उपयोग करके डेटा विश्लेषण किया गया था, इसके बाद प्रिज्म 8.4.1 (ग्राफपैड सॉफ्टवेयर, सैन डिएगो, सीए, यूएसए) का उपयोग करके बोनफेरोनी के पोस्ट हॉक टेस्ट किया गया था। टाइप I त्रुटि के लिए 5 प्रतिशत का दो तरफा स्तर लागू किया गया था।

3। परिणाम

3.1. शारीरिक संरचना और पूरे शरीर का चयापचय

जंगली प्रकार (डब्ल्यूटी) चूहों में सीएफ पूरकता के पंद्रह दिनों में, शरीर के वजन (पी =0। 0 91), दुबला द्रव्यमान (पी =0) को संशोधित नहीं किया। {{24} }73) और वसा द्रव्यमान का मूल्यांकन EchoMRI (p=0.89; चित्र 1A) द्वारा किया जाता है। प्रति दुबले द्रव्यमान में व्यक्त O2 खपत दर अंधेरे चक्र (8 ± 8 प्रतिशत, पी =0। 0 42) में काफी अधिक थी, जबकि यह प्रकाश चक्र में समान रही (पी =0 .392; चित्रा 1बी।)। लोकोमोटर गतिविधि में कोई बदलाव नहीं हुआ (डेटा नहीं दिखाया गया)। सीएफ चूहों ने पूरे शरीर के ऊर्जा व्यय में 15 ± 15 प्रतिशत (पी =0। 0 42; चित्रा 1 सी) और में उल्लेखनीय वृद्धि दिखाई। भोजन का सेवन (0.08 ± 0.01 बनाम 0.11 ± 0.01 ग्राम प्रति दुबले शरीर के वजन, क्रमशः सीएफ समूह और डब्ल्यूटी, पी=0 .013, चित्रा 1डी)।

CF अनुपूरण ने पूरे शरीर के चयापचय को महत्वपूर्ण रूप से संशोधित किया: CF समूह में उच्च RER का मुख्य प्रभाव 24 h(p=0.023, चित्र 2A) से अधिक देखा गया और इसका मतलब RER 12 h से अधिक था प्रकाश और अंधेरे चक्रों में CF समूह में (प्लस 5±3 प्रतिशत,p=0.035 और प्लस 9±4 प्रतिशत, क्रमशः, p=0.026)। इसके अलावा, CF पूरक ने कार्बोहाइड्रेट (CHO) के उपयोग को बढ़ावा दिया (51% 13 प्रतिशत ऊर्जा खपत CF समूह में CHO ऑक्सीकरण पर निर्भर करता है बनाम प्रकाश चक्र के दौरान नियंत्रण समूह में 37 ± 12 प्रतिशत, p=0.108 और सीएफ समूह में 71 ± 21 प्रतिशत बनाम अंधेरे चक्र के दौरान नियंत्रण समूह में 47 ± 24 प्रतिशत, पी=0.004; चित्रा 2बी।)। हालांकि, जब केजे में व्यक्त किया गया, तो सीएचओ ऑक्सीकरण में कोई अंतर नहीं था और न ही फैटी एसिड ऑक्सीकरण (सीएचओऑक्सीडेशन: 3.7 ± 1.4 किलो कैलोरी · डी -1 नियंत्रण में बनाम 4.4 ± 1.7 किलो कैलोरी। दुबला शरीर द्रव्यमान -1। d-1 CF में,p=0.33 और फैटी एसिड ऑक्सीकरण: 2.3±1.0 kcal·d-Iin नियंत्रण बनाम 2.6±0.87 kcal.दुबला शरीर द्रव्यमान-1.d{{ 50}} CF में, p=0.608)। RER के PRCF के विश्लेषण से CF समूह में EC50 मानों की वृद्धि का पता चला (p=0,009; चित्र 2D) जिसका अर्थ है कि CF एक बदलाव को प्रेरित करता है कार्बोहाइड्रेट के अधिक से अधिक उपयोग की ओर। CF समूह में पहाड़ी ढलान में कमी देखी गई (H मान: 25.16 ± 4.44 नियंत्रण में बनाम CF समूह में 12.79 ± 3.96, p)<0.001). moreover,="" the="" rer="" amplitude="" over="" 24h="" was="" increased="" by="" 31±="" 31%="" in="" the="" cf="" group="" (p="0.035)." cf="" supplementation="" improved="" glucose="" tolerance="" following="" oral="" glucose="" administration="" from="" unchanged="" baseline="" blood="" glucose="" levels="" after="" an="" overnight="" fast="" (figure="" 2e,p="0.003)." the="" area="" under="" the="" capillary="" blood="" glucose="" curve="" was="" lower="" in="" the="" cf="" group(1018±135="" vs.="" 1181±="" 170="" mm·120="" min,="" p="0.005;" figure="">

3.2. माइटोकॉन्ड्रियल बायोएनेरगेटिक्स

हमने सफेद जठराग्नि में माइटोकॉन्ड्रिया के ऊर्जावान और डब्ल्यूटी चूहों में एकमात्र मांसपेशी पर सीएफ पूरकता के प्रभाव का परीक्षण किया। सफेद जठराग्नि और एकमात्र मांसपेशियों में जटिल IV सबस्ट्रेट्स का उपयोग करते हुए उच्च माइटोकॉन्ड्रियल श्वसन देखा गया था (पी=0.004 और पी=0.028, क्रमशः; चित्रा 3ए, बी)। सीआईआई/सीआई और सीआईवी/सीआई श्वसन अनुपात में कोई संशोधन नहीं देखा गया (पी =0.899 और पी =0.701 सफेद गैस्ट्रोकेनमियस के लिए और पी=0.693 और पी{{ 11}}.912 एकमात्र मांसपेशियों के लिए, क्रमशः, डेटा नहीं दिखाया गया)। इसके अलावा, सफेद गैस्ट्रोकेनमियस पेशी में जटिल, I, IV, और साइट्रेट सिंथेज़ गतिविधियों में काफी वृद्धि हुई थी (क्रमशः: प्लस 31 ± 27 प्रतिशत, पी =0 .004; प्लस 28 ± 38 प्रतिशत, पी =0 .027; प्लस 35 ± 38 प्रतिशत, पी=0 .009; प्लस 14 ± 13 प्रतिशत, पी =0 .040; चित्रा 3 सी)। माइटोकॉन्ड्रिया की पामिटॉयल-कार्निटाइन को ऑक्सीकरण करने की क्षमता में वृद्धि होती है सफेद जठराग्नि (प्लस 24 ± 12 प्रतिशत, पी =0.096; चित्रा 3डी), जबकि एकमात्र (पी =0 .363) में कोई अंतर नहीं देखा गया था। पामिटॉयल-कार्निटाइन-उत्तेजित श्वसन की सापेक्ष दर अपरिवर्तित थी जब जटिल I श्वसन के कार्य में व्यक्त किया गया था (62 ± 11 नियंत्रण समूह में बनाम 64 ± 20 सफेद गैस्ट्रोकेनमियस में सीएफ समूह में और 70 ± 18 बनाम 72 ± 16 एकमात्र में)। इसके बाद, हमने सफेद जठराग्नि में सीए प्लस -इन्फेक्टेड पीटीपी खोलने की संवेदनशीलता का पता लगाया। जैसा कि चित्र 3ई में दिखाया गया है, न तो पीटीपी खोलने का समय और न ही सीए-रिटेंशन क्षमता को सीएफ पूरकता (क्रमशः पी =0.608 और पी =0.943) के बाद संशोधित किया गया था।

माइटोकॉन्ड्रियल बायोजेनेसिस में शामिल जीनों के mRNA मूल्यांकन ने NRF1 mRNA के 70 प्रतिशत अपग्रेडेशन को दिखाया, जबकि PGCl , Tfam, CS, ND1, ND2, SDHa और Cox2 (तालिका 3) के लिए कोई अंतर नहीं बताया गया। हमने कुछ नमूनों पर, माइटोकॉन्ड्रियल सुपरकंपलेक्स (चित्रा S1, अनुपूरक सामग्री) पर CF पूरकता के प्रभाव का पता लगाया। डेंसिटोमेट्रिक विश्लेषण से पता चलता है कि सीएफ पूरकता ने गुणात्मक अनुकूलन या पुनर्व्यवस्था के बिना समग्र सुपरकंपलेक्स सामग्री को बढ़ाया। वास्तव में, जटिल I और जटिल जांच का उपयोग करके श्वसन घनत्व में 58 प्रतिशत और जटिल I जांच का उपयोग करके 93 प्रतिशत तक सुधार किया गया था। इसी तरह, जटिल I और जटिल III सामग्री सुपरकॉम्प्लेक्स में एम्बेडेड CF समूह में अधिक थी।

CF अनुपूरण माइटोकॉन्ड्रियल ROS उत्सर्जन को कम करता है। जबकि सूखे वजन (चित्रा 4ए, बी, क्रमशः) के अनुसार व्यक्त किए जाने पर सफेद गैस्ट्रोकेनमियस और एकमात्र दोनों में एच 2 ओ 2 उत्सर्जन अपरिवर्तित रहा, प्रति माइटोकॉन्ड्रियल सामग्री (चित्रा 4 सी) व्यक्त किए जाने पर दरों में कमी आई थी। सफेद जठराग्नि में विभिन्न स्थितियों में CF अनुपूरण का एक मुख्य सकारात्मक प्रभाव देखा गया<0.048; figure="" 4c).="" the="" mitochondrial="" h2o2="" emission="" was="" also="" significantly="" reduced="" when="" expressed="" peroxidative="" phosphorylation="" capacity="" assessed="" by="" state="" 4="" respiration="" using="" complex="" i+ii="" substrates="" by="" 26±13%="" in="" the="" white="" gastrocnemius="" (p="0.044)and" by="" 29±12%="" in="" the="" soleus(p="0.024;" figure="">

3.3. कंकाल की मांसपेशियों में ऑक्सीडेटिव तनाव मार्कर

WT चूहों में सेलुलर प्रोटीन ऑक्सीडेटिव तनाव स्तर CF पूरक-उल्लेखन से अप्रभावित था क्योंकि SOD2 की सेलुलर सामग्री सफेद जठराग्नि और एकमात्र (चित्रा 4E) में प्रयोगात्मक और नियंत्रण समूहों में समान थी। इसके अलावा, सफेद जठराग्नि और एकमात्र (चित्रा 4F) में प्रोटीन कार्बोनिलेशन में कोई अंतर नहीं देखा गया था। इसके अतिरिक्त, CF पूरकता (तालिका 3) के बाद उत्प्रेरित और MnSod mRNA अभिव्यक्ति में कोई अंतर नहीं देखा गया।

3.4.एनएडी चयापचय

सीएफ अनुपूरण के बाद पाइरीडीन न्यूक्लियोटाइड्स के कुल पूल में 36 ± 33 प्रतिशत (पी =0 .012) की वृद्धि हुई। विशेष रूप से, सफेद गैस्ट्रोकेनमियस में एनएडी और एनएडीएच सामग्री में वृद्धि हुई (क्रमशः 69 ± 60 प्रतिशत, पी {{6 }}.026 और 29±42 प्रतिशत,p=0.017;चित्र 5ए,बी)और एनएडी प्लस/एनएडीएच अनुपात सीएफ़ समूह (पी =0.084) में वृद्धि करने के लिए प्रवृत्त हुआ। नहीं Sirt3 mRNA (p=0.096), NMNAT mRNA (p=0.094), और Sirt1 mRNA (p =0।869; तालिका 3 के लिए महत्वपूर्ण प्रभाव देखा गया। )

3.5. पूरे शरीर और सेलुलर चयापचय प्रतिक्रिया Sirt में CF अनुपूरक के बाद 3-/ चूहे

हमने Sirt{{0}}चूहों में CF अनुपूरण के प्रभाव की जांच की। वजन, दुबले द्रव्यमान और वसा द्रव्यमान के रूप में शरीर की संरचना CF और नियंत्रण समूहों (p= 0.52,p=0.66,p=0.45, क्रमशः के बीच भिन्न नहीं थी; चित्रा 6ए)। इसी तरह, दैनिक ऊर्जा व्यय सीएफ पूरकता ({{10}}.38 ± 0 से अप्रभावित था। {{4 0}} 1 किलो कैलोरी। दुबला शरीर द्रव्यमान-1.दिन-1 नियंत्रण में बनाम 0.39 ± 0.01 किलो कैलोरी · दुबला शरीर द्रव्यमान-1.दिन-1 सीएफ़ में, पी=0.502; चित्रा 6बी)। आरईआर प्रकाश और अंधेरे चक्र (पी =0 .301; चित्रा 6 सी) में दोनों समूहों के बीच समान था, और सब्सट्रेट ऑक्सीकरण सीएफ पूरकता से प्रभावित नहीं था (44 ± 17 प्रतिशत ऊर्जा खपत सीएचओ ऑक्सीकरण पर निर्भर थी। प्रकाश चरण के दौरान सीएफ समूह में नियंत्रण समूह बनाम 50 ± 11 प्रतिशत, पी=0.209 और नियंत्रण समूह में 65±19 प्रतिशत बनाम अंधेरे चरण के दौरान सीएफ समूह में 77±21 प्रतिशत, पी=0.395; चित्र 6डी)। 24 घंटे से अधिक आरईआर आयाम द्वारा मूल्यांकन किया गया चयापचय लचीलापन दो समूहों (0.19 ± 0.05 नियंत्रण में बनाम 0.20 ± 0.03 सीएफ, पी =0 .604 में) के बीच समान रहा, जबकि सीएफ समूह में पीआरसीएफ ढलान कम हो गया था। (एच मान: 17.77 ± 4.38 नियंत्रण में बनाम 12.79 ± 3.93 सीएफ़ में, पी =0.039)।

इसके बाद, हमने माइटोकॉन्ड्रियल एंजाइम गतिविधियों पर सीएफ पूरकता के प्रभाव की तुलना की। CF अनुपूरण, Sirt में जटिल I, I, IV और CS की एंजाइम गतिविधि को बढ़ाने में विफल रहा3-/चूहे जैसा कि पहले WT में देखा गया था (क्रमशः: p=0.623,p=0 .629,p=0.283, और p=0.791, चित्र 6E)। CF अनुपूरण के बाद Sirt3-7चूहों की तुलना में WT में जटिल और IV की अधिक एंजाइम गतिविधि देखी गई ( क्रमशः:p=0.027 और P=0.045)

4। चर्चा

इस अध्ययन में, हम CF अंतर्ग्रहण के प्रभाव का एक एकीकृत विश्लेषण प्रदान करते हैं। हमने देखा कि क्रोनिक CF अंतर्ग्रहण ने माइटोकॉन्ड्रियल श्वसन में सुधार किया और H2O2 उत्पादन को कम किया, उनके मायोफाइबर वातावरण में मूल्यांकन किया गया, जबकि PTP खोलने की संवेदनशीलता अपरिवर्तित थी। सीएफ अंतर्ग्रहण ने एनएडीमेटाबोलिज्म को बढ़ाया, मनाया माइटोकॉन्ड्रियल अनुकूलन पर सिर्टुइन मार्गों की भागीदारी का समर्थन किया। हमने मुख्य सब्सट्रेट के रूप में कार्बोहाइड्रेट का उपयोग करने की अधिक क्षमता के लिए पूरे शरीर के चयापचय संशोधनों का भी अवलोकन किया, यह सुझाव देते हुए कि माइटोकॉन्ड्रियल अनुकूलन ने पूरे शरीर के चयापचय अनुकूलन में योगदान दिया।

4.1. चयापचय

कोको फ्लेवनॉल्स के आहार प्रशासन को ग्लूकोज असहिष्णुता को कम करने के लिए एक प्रभावी रणनीति के रूप में पहचाना गया है, जिससे चयापचय संबंधी रोगों को ठीक करने के अवसर मिलते हैं [34]। हमारे परिणाम पिछले अध्ययनों के अनुसार हैं, जिसमें फ्लेवनॉल्स के सेवन के बाद ग्लूकोज सहिष्णुता में वृद्धि हुई है [35,36]। इस आशय के लिए प्रस्तावित तंत्र में कोशिका झिल्ली की ओर GLUT4 के स्थानान्तरण में वृद्धि, AMPK के फॉस्फोराइलेशन में वृद्धि, और कंकाल की मांसपेशी में UCP-2 जीन अभिव्यक्ति का अप-विनियमन शामिल है [8,37] . इसके अलावा, CF अंतर्ग्रहण मनुष्यों में इंसुलिन संवेदनशीलता में सुधार के साथ जुड़ा हुआ था [8]। डार्क चॉकलेट की खपत के 15 दिनों के बाद, स्वस्थ विषयों में इंसुलिन प्रतिरोध सूचकांक के होमोस्टैसिस मॉडल मूल्यांकन में कमी देखी गई, साथ ही मात्रात्मक इंसुलिन संवेदनशीलता जांच सूचकांक और इंसुलिन संवेदनशीलता सूचकांक [8] में वृद्धि के साथ। हमने डब्ल्यूटी चूहों में ग्लूकोज सहिष्णुता और चयापचय लचीलेपन में एक सहवर्ती वृद्धि देखी, जो ईंधन की उपलब्धता के लिए ईंधन ऑक्सीकरण को अनुकूलित करने के लिए एक जीव की क्षमता को संदर्भित करता है [38]। दिलचस्प है, जबकि बिगड़ा हुआ माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव क्षमता और संबंधित सब्सट्रेट ऑक्सीकरण इंसुलिन प्रतिरोध 39 से जुड़े थे, धीरज व्यायाम प्रशिक्षण ने माइटोकॉन्ड्रियल सामग्री, इंसुलिन संवेदनशीलता और चयापचय लचीलेपन में वृद्धि की [38]। इसलिए, वर्तमान परिणाम CF अनुपूरण के लिए विशिष्ट हैं और स्वतःस्फूर्त गतिविधि से प्रभावित नहीं हैं।

चयापचय लचीलेपन पर CF का सकारात्मक प्रभाव, साथ ही माइटोकॉन्ड्रियल परिसरों की गतिविधि में वृद्धि, Sirt3-7चूहों में धुंधला हो गई थी, यह दर्शाता है कि CF का सकारात्मक प्रभाव कम से कम आंशिक रूप से Sirt3 के माध्यम से होता है। ये परिणाम पिछले निष्कर्षों और चयापचय लचीलेपन विनियमन [24] पर Sirt3 की महत्वपूर्ण भूमिका का समर्थन करते हैं। हमारे परिणाम बताते हैं कि माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन में वृद्धि से चयापचय लचीलेपन में वृद्धि हो सकती है। हालांकि, माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन के अलावा, बेसल श्वसन भागफल, ग्लूकोज निपटान दर, वसा ऊतक लिपिड भंडारण क्षमता, और प्लाज्मा मुक्त फैटी एसिड एकाग्रता को भी चयापचय लचीलेपन के निर्धारक कारकों के रूप में पहचाना गया था और इस पर विचार किया जाना चाहिए [40]। भविष्य के अध्ययनों को सीएफ अनुपूरण के बाद चयापचय लचीलेपन में वृद्धि के अंतर्निहित कारणों की हमारी समझ को गहरा करने के लिए चयापचय लचीलेपन के सेलुलर निर्धारकों का अधिक गहराई से आकलन करना चाहिए।

पूरे शरीर के चयापचय मूल्यांकन ने सीएफ पूरकता के बाद सापेक्ष सीएचओ ऑक्सीकरण में वृद्धि का खुलासा किया। यह परिणाम पिछले अध्ययन के विपरीत है जिसमें तीव्र फ्लेवनॉल्स अंतर्ग्रहण के बाद लिपोलिसिस में वृद्धि या चूहों में फ्लेवन -3- ओल्स [36] के साथ दो सप्ताह के पूरक की सूचना दी गई थी। अर्क संरचना अंतर के अलावा, ये विरोधाभासी निष्कर्ष NO के फुफ्फुसीय प्रभावों के परिणामस्वरूप हो सकते हैं। यह अच्छी तरह से स्वीकार किया जाता है कि CF अंतर्ग्रहण NO चयापचय [7] के उत्पादन या जैवउपलब्धता को उत्तेजित करता है। एक तरफ, NO ग्लूकोज परिवहन को उत्तेजित करता है और कंकाल की मांसपेशी में तेज होता है। इंसुलिन या हाइड्रोजन पेरोक्साइड द्वारा सेल लाइन-व्युत्पन्न मायोट्यूब में NO उत्पादन की उत्तेजना के परिणामस्वरूप GLUT4 ट्रांसलोकेशन में वृद्धि हुई, जिसे nNOS निषेध [41] के साथ कम किया गया। इसके अलावा, NO इंसुलिन-स्वतंत्र मार्ग में ग्लूकोज परिवहन को बढ़ा सकता है जिससे चक्रीय GMP और AMPK [42] के स्तर में वृद्धि हो सकती है, जो फैटी एसिड की उपलब्धता और ऑक्सीकरण से स्वतंत्र चूहे के कंकाल की मांसपेशी में ग्लूकोज ऑक्सीकरण को बढ़ावा देता है [43]। दूसरी ओर, NO, एसिटाइल-सीओए कार्बोक्सिलेज के निषेध और कंकाल की मांसपेशी में मैलोनील-सीओए डिकार्बोक्सिलेज के सक्रियण के माध्यम से मैलोनील-सीओए के स्तर को कम करके फैटी एसिड ऑक्सीकरण को बढ़ावा देता है [44]। जबकि हमने सीएफ के साथ सब्सट्रेट के रूप में फैटी एसिड का उपयोग करने के लिए एक कम सापेक्ष अनुपात की ओर एक बदलाव देखा, केजे में व्यक्त पूर्ण मूल्यों के संबंध में कोई अंतर नहीं था। इससे पता चलता है कि CF अनुपूरण के साथ देखे गए ऊर्जा व्यय में वृद्धि ग्लूकोज ऑक्सीकरण में वृद्धि पर निर्भर करती है। इसलिए, ये परिणाम इस विचार का समर्थन करते हैं कि सीएफ खपत इंसुलिन संवेदनशीलता को बढ़ाती है और फैटी एसिड ऑक्सीकरण क्षमता पर सहवर्ती प्रभाव के बिना ग्लूकोज ऑक्सीकरण को बढ़ावा देती है। ये परिणाम उच्च वसा वाले आहार के संदर्भ में कोको फ्लेवनॉल्स के उपयोग की प्रासंगिकता पर सवाल उठाते हैं। भविष्य के अध्ययनों को सीएफ पूरकता और उच्च वसा वाले आहार के संबंध के संभावित हानिकारक प्रभाव का मूल्यांकन करना चाहिए।

4.2. माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन

कोको फ्लेवनॉल्स के आहार प्रशासन को माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन में सुधार करने के लिए दिखाया गया है, जिसमें (i) माइटोकॉन्ड्रियल श्वसन और इलेक्ट्रॉन परिवहन श्रृंखला एंजाइम गतिविधियां शामिल हैं; (i) माइटोकॉन्ड्रियल H2O2 रिलीज, जो माइटोकॉन्ड्रियल प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (आरओएस) उत्पादन को दर्शाता है; और (i) माइटोकॉन्ड्रियल कैल्शियम प्रतिधारण क्षमता जो माइटोकॉन्ड्रियल पारगम्यता संक्रमण ताकना (mPTP) खोलने की संवेदनशीलता को दर्शाती है (समीक्षा के लिए देखें [11]। हमारे परिणाम पिछले अध्ययनों के अनुसार हैं; फिर भी, हमारे अध्ययन के प्रभाव का मूल्यांकन करने वाला पहला था माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन पर सीएफ अनुपूरण पारगम्य फाइबर और विभिन्न मांसपेशी प्रकारों में सीटू में मूल्यांकन किया गया। पृथक माइटोकॉन्ड्रिया पर पिछले अध्ययनों के विपरीत, पारगम्य फाइबर में माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन का आकलन माइटोकॉन्ड्रियल आकारिकी को संरक्षित करता है, अन्य इंट्रासेल्युलर घटकों के साथ कार्यात्मक बातचीत [1] और माइटोकॉन्ड्रियल संरचना से बचा जाता है माइटोकॉन्ड्रियल अलगाव प्रक्रिया के दौरान व्यवधान [32] इसलिए, ऊतक की तैयारी में माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन का अध्ययन करना महत्वपूर्ण है जहां माइटोकॉन्ड्रियल संरचना संरक्षित है, और उपचार के प्रति प्रतिक्रिया का बेहतर मूल्यांकन करने के लिए सभी माइटोकॉन्ड्रियल पूल का प्रतिनिधित्व किया जाता है।

सेल संस्कृति या चूहों में विवो में किए गए पिछले अध्ययनों से पता चला है कि ईपीआई के साथ पूरक, जिसे सीएफ में मुख्य जैव सक्रिय अणु माना जाता है, अधिकतम एडीपी-उत्तेजित श्वसन (जैसे, राज्य 3 श्वसन) को बढ़ाता है जब माइटोकॉन्ड्रिया ऊर्जा के संयोजन से सक्रिय होते हैं। श्वसन श्रृंखला [45-49] के साथ विभिन्न साइटों को खिलाने वाले सब्सट्रेट। इन परिणामों के अनुरूप, हमने ऑक्सीडेटिव और ग्लाइकोलाइटिक मांसपेशियों में माइटोकॉन्ड्रियल श्वसन पर CF पूरकता का एक मुख्य प्रभाव देखा। यह निर्धारित करने के लिए कि क्या यह वृद्धि माइटोकॉन्ड्रियल द्रव्यमान वृद्धि या माइटोकॉन्ड्रियल श्वसन परिसरों के रीमॉडेलिंग से संबंधित है, हमने क्वाड्रिसेप्स मांसपेशी से माइटोकॉन्ड्रियल सुपरकंपलेक्स का आकलन किया। इन सुपरमॉलेक्यूलर संरचनाओं को आरओएस उत्पादन को कम करने, अलग-अलग परिसरों के संयोजन में स्थिर या सहायता करने, श्वसन श्रृंखला गतिविधि को विनियमित करने और प्रोटीन युक्त आंतरिक माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली [50-52] में प्रोटीन एकत्रीकरण को रोकने के लिए माना जाता है। उपायों की एक सीमित संख्या के बावजूद, परिणामों के दृश्य विश्लेषण (पूरक सामग्री) से पता चलता है कि सीएफ अनुपूरण माइटोकॉन्ड्रियल द्रव्यमान की वृद्धि को प्रेरित करता है, जैसा कि विशिष्ट श्वसन श्रृंखला जटिल पुनर्गठन के बजाय सभी सुपरकंपलेक्स प्रजातियों में वृद्धि से परिलक्षित होता है। सामूहिक रूप से, ये परिणाम बताते हैं कि सीएफ श्वसन श्रृंखला जटिल व्यवस्था के गुणात्मक अनुकूलन के बिना माइटोकॉन्ड्रियल द्रव्यमान वृद्धि को बढ़ावा देता है।

माइटोकॉन्ड्रियल श्वसन के दौरान, सुपरऑक्साइड की परिवर्तनशील मात्राएँ बनती हैं और अन्य प्रकार के ROS [53] बनाने के लिए इसे मेटाबोलाइज़ किया जा सकता है। यद्यपि माइटोकॉन्ड्रिया से अत्यधिक आरओएस उत्पादन विकृति के व्यापक स्पेक्ट्रम में शामिल है, आरओएस की कम शारीरिक सांद्रता के लाभकारी प्रभाव हो सकते हैं, जैसे कि संक्रामक एजेंटों से बचाव और सेलुलर सिग्नलिंग में भाग लेना [2,54]। कृन्तकों और मनुष्यों और सेल संस्कृति मॉडल में विवो में किए गए पिछले अध्ययनों ने आरओएस उत्पादन और विभिन्न एंटीऑक्सीडेंट सिस्टम [11] पर लाभकारी सीएफ पूरक प्रभाव की सूचना दी। उदाहरण के लिए, 15 दिनों के दौरान EPI के साथ ओरल गैवेज SOD2 को बढ़ाता है और चूहों की क्वाड्रिसेप्स मांसपेशियों में उत्प्रेरित गतिविधि [17] करता है। जबकि माइटोकॉन्ड्रियल आरओएस उत्पादन का व्यापक रूप से मूल्यांकन नहीं किया गया है, हमने देखा कि आरओएस उत्पादन स्तर समान थे जब मूल्य प्रति मांसपेशी वजन व्यक्त किए गए थे, जबकि प्रति माइटोकॉन्ड्रियल द्रव्यमान व्यक्त किए जाने पर उत्पादन कम हो गया था, यह सुझाव देते हुए कि आरओएस की शारीरिक सांद्रता को बनाए रखने के लिए गुणात्मक अनुकूलन होते हैं। इसके अलावा, हमने SOD2 पर CF के किसी भी प्रभाव का अवलोकन नहीं किया और न ही प्रोटीन कार्बोनिलेशन द्वारा मूल्यांकन किए गए ROS- प्रेरित नुकसान। जबकि CF एंटीऑक्सिडेंट प्रोटीन पूल को बढ़ाता है, जिसमें व्यापक रूप से रिपोर्ट किए गए SOD2 और उत्प्रेरित स्तर [16,17,55] शामिल हैं, यह अनुकूलन हमेशा ROS-प्रेरित क्षति [56-59] में कमी से जुड़ा नहीं था। ये डेटा इस सिद्धांत का समर्थन करते हैं कि सामान्य सेल होमियोस्टेसिस [2] के लिए आरओएस उत्पादन के निम्न स्तर की आवश्यकता होती है। सामूहिक रूप से, इन परिणामों से पता चलता है कि, माइटोकॉन्ड्रियल द्रव्यमान की वृद्धि के साथ, CF अपनी एंटीऑक्सीडेंट क्षमता को बढ़ाने और ROS उत्पादन के निम्न स्तर को बनाए रखने के लिए गुणात्मक माइटोकॉन्ड्रियल अनुकूलन को बढ़ावा देता है।

4.3. माइटोकॉन्ड्रियल बायोजेनेसिस

माइटोकॉन्ड्रियल द्रव्यमान माइटोकॉन्ड्रियल बायोजेनेसिस और माइटोफैगी के बीच परस्पर क्रिया का परिणाम है। हमारा अध्ययन पॉलीफेनोल्स की खपत [60] द्वारा सक्रिय माइटोकॉन्ड्रियल बायोजेनेसिस पर केंद्रित है। माइटोकॉन्ड्रियल बायोजेनेसिस सेलुलर प्रक्रिया है जो माइटोकॉन्ड्रियल द्रव्यमान में सुधार करती है। इस जटिल और अत्यधिक विनियमित प्रक्रिया में कई ट्रांसक्रिप्शन कारक, परमाणु हार्मोन रिसेप्टर्स और ट्रांसक्रिप्शन कोएक्टीवेटर शामिल होते हैं जो परमाणु और माइटोकॉन्ड्रियल डीएनए एन्कोडेड जीन [61] की अभिव्यक्ति में परिवर्तनों को समन्वयित करने के लिए सामूहिक रूप से कार्य करते हैं। पिछले अध्ययनों ने यह पहचानने का प्रयास किया है कि कौन सा मार्ग सीएफ पूरकता-प्रेरित माइटोकॉन्ड्रियल बायोजेनेसिस से गुजर सकता है। NO- डिपेंडेंट सिग्नलिंग का स्टिमुलेशन माइटोकॉन्ड्रियल बायोजेनेसिस में शामिल एक केंद्रीय मार्ग के रूप में उभरा है। CF अनुपूरण, arginine degrading एंजाइम arginase को रोककर NO की पीढ़ी को बढ़ाता है, जिससे NO जैवसंश्लेषण के लिए L-arginine की उपलब्धता बढ़ जाती है [62,63]। इसके अलावा, एक ईएनओएस अवरोधक का उपयोग करते हुए, माइटोकॉन्ड्रियल बायोजेनेसिस पर एपिक्टिन के उत्तेजक प्रभाव को आंशिक रूप से धुंधला कर दिया गया था [17]। ये परिणाम माइटोकॉन्ड्रियल बायोजेनेसिस को प्रोत्साहित करने के लिए अन्य सिग्नलिंग मार्ग की भागीदारी का सुझाव देते हैं।

हाल ही में, अरागोन्स एट अल। (2016) ने बताया कि आहार प्रोएंथोसायनिडिन, पॉलीफेनोल्स परिवार के सदस्य, चूहों में खुराक पर निर्भर तरीके से एनएडी प्लस बायोसिंथेसिस मार्ग और सिर्टे गतिविधि को बढ़ाकर यकृत एनएडी प्लस चयापचय को बढ़ावा देते हैं [12]। इसके अलावा, लीवर अन्य अंगों को NADt अग्रदूतों का निर्यात करता है, जैसे कि कंकाल की मांसपेशी, जिसमें NAD को संश्लेषित करने की कम क्षमता होती है, जिससे लीवर में देखे गए प्रभावों को पूरे जीव में विस्तारित करने की संभावना बढ़ जाती है [64]। जबकि कुछ अध्ययनों ने Sirt1 प्रोटीन सामग्री, गतिविधि, या mRNA [12, 15-17, 65,66] पर CF अनुपूरण के प्रभाव की सूचना दी, CF अनुपूरण के बाद माइटोकॉन्ड्रियल जैवजनन में NAD चयापचय की भागीदारी के नुकसान या लाभ का उपयोग करते हुए समारोह का परीक्षण कभी नहीं किया गया है। जबकि हमारे अध्ययन में इस्तेमाल किए गए पूरे शरीर के Sirt3 KO चूहों पर एक मांसपेशी-विशिष्ट नॉक-आउट बेहतर होता, हमारे परिणाम बताते हैं कि CF NAD चयापचय में सुधार करता है, और Sirt3 इस पूरक-प्रेरित माइटोकॉन्ड्रियल इलेक्ट्रॉन परिवहन श्रृंखला गतिविधि में सुधार में शामिल है। सीएफ सप्लिमेंटेशन के बाद माइटोकॉन्ड्रियल कॉम्प्लेक्स गतिविधि पर देखे गए सकारात्मक प्रभाव Sirt 3-7 चूहों का उपयोग करके नहीं देखे गए थे और जटिल I और IV गतिविधियों की एक बड़ी गतिविधि केवल WT में CF पूरकता के बाद देखी गई थी। ये अवलोकन पिछले कार्यों का विस्तार करते हुए दिखाते हैं कि Sirt3 माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है] 67। सामूहिक रूप से, इन निष्कर्षों से पता चलता है कि एनएडी चयापचय के मॉड्यूलेशन के माध्यम से सिर्टुइन, सीएफ पूरकता के बाद देखे गए माइटोकॉन्ड्रियल बड़े पैमाने पर सुधार में शामिल हैं। 4.4. सीमाएं

कोको बीन्स मोनोमेरिक, ओलिगोमेरिक और पॉलीमेरिक फ्लेवनॉल्स के मिश्रण से बने होते हैं। फ्लैवनॉल्स में, ईपीआई कोको उत्पादों में पाया जाने वाला सबसे प्रचुर मात्रा में पॉलीफेनोलिक मोनोमर प्रतीत होता है, जो पॉलीफेनॉल सामग्री [68] के 35 प्रतिशत तक का प्रतिनिधित्व करता है। ईपीआई को कोको और चॉकलेट पूरकता [47,69] से जुड़े मुख्य बायोएक्टिव अणु अंतर्निहित लाभों के रूप में स्थापित किया गया था। हालांकि, ईपीआई मेटाबोलाइट्स (ईपीआईम) विवो अध्ययनों में देखे गए ईपीआई-प्रेरित जैविक प्रभावों में शामिल हो सकते हैं। EPIm, EPI से अधिक प्लाज्मा सांद्रता तक पहुँच सकता है [70]। इसके अलावा, प्रजातियों में EPIm में प्रमुख अंतर देखे गए। वास्तव में, मनुष्यों में मौजूद 80 प्रतिशत EPIm चूहों में नहीं पाया गया था, जबकि चूहों और मनुष्यों के बीच समानता थोड़ी अधिक अनुकूल पाई गई क्योंकि दो प्रमुख मानव चयापचयों का पता चला था [70]। हमने गैर-किण्वित कोकोआ की फलियों की तुलना में पांच गुना अधिक ईपीआई युक्त समृद्ध सीएफ अर्क का उपयोग किया है [71]। इसके अलावा, किण्वन द्वारा ईपीआई सामग्री 10-20 प्रतिशत कम हो गई और भूनने के दौरान तापमान पर निर्भर तरीके से घट गई [71,72]। सामूहिक रूप से, इन आंकड़ों से पता चलता है कि मानव स्वास्थ्य पर ईपीआई पूरकता के लाभों का आकलन करते समय केवल ईपीआई सामग्री पर ध्यान दिया जाना चाहिए, और मनुष्यों में देखे गए अंतर्निहित तंत्र को एक्सट्रपलेशन करने से पहले वर्तमान परिणामों पर सावधानी से विचार किया जाना चाहिए।

5। निष्कर्ष

15 दिनों के लिए दैनिक सीएफ अनुपूरण से ऑक्सीडेटिव और ग्लाइकोलाइटिक मांसपेशियों में माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन में सुधार होता है। वर्तमान परिणाम बताते हैं कि माइटोकॉन्ड्रियल श्वसन में वृद्धि से माइटोकॉन्ड्रियल द्रव्यमान में वृद्धि होती है जबकि आरओएस उत्पादन का सेलुलर स्तर बनाए रखा गया था, जो माइटोकॉन्ड्रिया के भीतर गुणात्मक अनुकूलन का सुझाव देता है। पहले वर्णित [73] NO चयापचय पर सेलुलर प्रभाव के सहवर्ती, CF NAD चयापचय को नियंत्रित करता है, जो सिर्टुइन गतिविधि को उत्तेजित करता है। Sirt3 CF अनुपूरण के बाद माइटोकॉन्ड्रियल अनुकूलन और चयापचय लचीलेपन में एक केंद्रीय भूमिका निभाता है। जैसा कि मधुमेह या अस्थमा [74,75l] जैसे विभिन्न रोग रोगजनन में सिर्टुइन हाल के लक्ष्य हैं, आगे के अध्ययन सीएफ को सिर्टुइन के प्राकृतिक उत्प्रेरक के रूप में उपयोग करने की संभावित रुचि का पता लगाएंगे।

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