नींद की कमी वाले मॉडल चूहों में अनुभूति और सिनैप्टिक प्लास्टिसिटी सीखने पर सिस्टैंच के ग्लियोसाइड्स का प्रभाव

अमूर्त

उद्देश्य:यह पता लगाने के लिए कि क्या सिस्टैंच के ग्लाइकोसाइड सिनैप्टिक प्लास्टिसिटी को विनियमित करके नींद की कमी वाले मॉडल चूहों के सीखने और संज्ञानात्मक कार्य में सुधार कर सकते हैं।

विधियाँ: पचास नर विस्टार चूहों को यादृच्छिक रूप से एक रिक्त नियंत्रण समूह (नियंत्रण), प्लेटफ़ॉर्म नियंत्रण समूह (पीसी), मॉडल समूह (मॉडल), में विभाजित किया गया था।सिस्टैंच समूह के ग्लाइकोसाइड (जीसी), और एस्टाज़ोलम समूह (एस्ट)। चूहों का नींद अभाव मॉडल एक संशोधित बहु-प्लेटफ़ॉर्म जल पर्यावरण विधि द्वारा तैयार किया गया था। चूहों के स्थानिक संज्ञानात्मक कार्य और भावनात्मक परिवर्तनों का पता लगाने के लिए मॉरिस वॉटर भूलभुलैया और खुले क्षेत्र परीक्षण का उपयोग किया गया था। निस्सल स्टेनिंग का उपयोग तंत्रिका कोशिकाओं की आकृति विज्ञान और मात्रा में परिवर्तन का निरीक्षण करने के लिए किया गया थाचूहों का हिप्पोकैम्पस सीएएल क्षेत्र. वेस्टर्न ब्लॉट और आर'टी - पीसीआर का उपयोग सिनैप्टोफिसिन (एसवाई'एन), पोस्टसिनेप्टिक झिल्ली घने पदार्थ 95 (पीएसडी -95), और के अभिव्यक्ति स्तर का पता लगाने के लिए किया गया था।मस्तिष्क-व्युत्पन्न न्यूरोट्रॉफिक कारक (बीडीएनएफ). 

परिणाम;मॉरिस जल भूलभुलैया परिणामों से पता चला कि नियंत्रण समूह की तुलना में,चूहों की सीखने और संज्ञानात्मक क्षमतामॉडल समूह में काफी कमी आई (पी<0. 05 ), and the learning and memory function of rats wasजीसी उपचार में सुधार ( P <0. 05). The results of the open field test showed that compared with the Control group, the movement distance and standing times of the Model group were significantly increased ( P <0. 05 ), the resting time was significantly shortened( P <0.05 ), and the anxiety was increased, while after GCs treatment, the movement distance and standing times decreased ( P <0. 05 ), the resting time increased ( P <0. 05), and the anxiety was improved. The results of Western blot and R'T - PCR showed that the बीडीएनएफ के प्रोटीन और जीन अभिव्यक्ति स्तरMlodel समूह में , SYN, और PSD -95 में उल्लेखनीय रूप से कमी आई ( P<0. 05 ), while after treatment with GCs, the expression levels ofBDNF, SYN and PSD -95 were significantly up-regulated ( P <0.05). Conclusion: Glycosides of cistanche may af. feet synaptic plasticity by regulating the expression of synaptic-related markers, thereby improving the learning and cognitive function of sleep deprivation model rats.

हर्बल सिस्टांचे फॉर्मूलेशन सप्लीमेंट्स के लिएसीखने और संज्ञानात्मक कार्य में सुधार

प्रमुख शब्दसिस्टैंच के ग्लाइकोसाइड; हिप्पोकैम्पस; सोने का अभाव; सीखना और स्मृति; चिंता; सूत्रयुग्मक सुनम्यता

नींद संबंधी विकार (एसडी)एक हैअसामान्य नींद का कार्यात्मक विकारजैसे जटिल कारकों की एक श्रृंखला के कारणअनिद्रा, स्वप्नदोष, औरआसान जागृति. हाल के वर्षों में,एसडी की घटनाधीरे-धीरे बढ़ रहा है. संबंधित अध्ययनों से पता चला है कि एसडी कारण बन सकता हैहृदय रोग,चयापचय संबंधी शिथिलता,प्रतिरक्षा रोग, औरकेंद्रीय तंत्रिका तंत्रअल्जाइमर रोग जैसे अपक्षयी रोग [1]। एसडी हिप्पोकैम्पस न्यूरॉन्स को ऑक्सीडेटिव क्षति पहुंचा सकता है, संज्ञानात्मक शिथिलता का कारण बन सकता है, और चिंता और अवसाद जैसे मूड में बदलाव पैदा कर सकता है [2]। सिस्टैंच डेजर्टिकोला एक बहुमूल्य औषधीय सामग्री है जिसका उपयोग चीन में दवा और भोजन दोनों के रूप में किया जा सकता है। इसमें किडनी को टोन करने और क्यूई को फिर से भरने, आंतों को नम करने, मल त्याग को बढ़ावा देने और यांग को मजबूत करने का प्रभाव होता है। सिस्टैंच डेजर्टिकोला का मुख्य अर्क, सिस्टैंच के ग्लाइकोसाइड्स (जीसी) में एंटीऑक्सीडेंट, एंटी-एपोप्टोटिक, लीवर-सुरक्षा और न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव होते हैं [3]। हमारे पिछले शोध में पाया गया कि जीसी एक एंटीऑक्सिडेंट और एंटी-एपोप्टोटिक भूमिका निभाकर SAMP8 चूहों के सीखने और संज्ञानात्मक कार्य में सुधार कर सकता है [4]।

संबंधित अध्ययनों से पता चला है कि एसडी के कारण होने वाली संज्ञानात्मक शिथिलता का सिनैप्टिक प्लास्टिसिटी से गहरा संबंध है [5]। हालाँकि, उस तंत्र पर कुछ रिपोर्टें हैं जिसके द्वारा जीसी सिनैप्टिक प्लास्टिसिटी को नियंत्रित करते हैं और नींद की कमी से प्रेरित चूहों में सीखने और स्मृति हानि और संज्ञानात्मक गिरावट में सुधार करते हैं। इसलिए, इस अध्ययन का उद्देश्य यह पता लगाना है कि क्या जीसी सिनैप्टिक-संबंधित मार्करों की अभिव्यक्ति को विनियमित करके सिनैप्टिक प्लास्टिसिटी को प्रभावित करता है, जिससे नींद की कमी वाले मॉडल वाले चूहों के सीखने और संज्ञानात्मक कार्य में सुधार होता है, और सीखने और संज्ञानात्मक उपचार के लिए जीसी के लिए नए उपचार विचार और योजनाएं प्रदान की जाती हैं। नींद संबंधी विकारों के कारण होने वाली हानि.

1 सामग्री और विधियाँ

1.1 प्रायोगिक जानवर

6 से 8 सप्ताह की उम्र के नर विस्टार चूहों, जिनका वजन 280 से 300 ग्राम था, को पशु उत्पादन लाइसेंस [एससीएक्सके (बीजिंग) 2019-0010] के साथ बीजिंग सिबेफू से खरीदा गया था। सभी जानवरों को निम्नलिखित शर्तों के तहत बाओटौ मेडिकल कॉलेज के पशु प्रयोग केंद्र में रखा गया था: तापमान (24 ± 1) डिग्री, आर्द्रता 50% से 55%, 12 घंटे प्रकाश और 12 घंटे अंधेरा, और भोजन और पानी पर कोई प्रतिबंध नहीं। इस प्रयोग को स्कूल आचार समिति [बाओयी लुनशेन 2022 नंबर (63)] द्वारा अनुमोदित किया गया था।

1. 2 मुख्य अभिकर्मक और उपकरण

सिस्टैंच डेजर्टिकोला के कुल ग्लाइकोसाइड्स चेंगदू ज़ियू सिस्टैंच बायोटेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड (बैच संख्या: KSM20220609011) से खरीदे गए थे; एस्टाज़ोलम टैबलेट सीएसपीसी फार्मास्युटिकल ग्रुप औयी फार्मास्युटिकल (बैच संख्या: 044220343) से खरीदे गए थे; प्रोटीन लोडिंग बफर (P1015), RIPA लिसीस बफर (R0010), केमिलुमिनसेंट सॉल्यूशन (PE0010), आदि सभी बीजिंग सोलेबाओ से खरीदे गए थे; 95 में पोस्टसिनेप्टिक घनत्व पदार्थ (पीएसडी-95) एंटीबॉडी (एबी192757) और सिनैप्टोफिसिन (एसवाईएन) एंटीबॉडी (एबी32127) एबकैम, यूएसए कंपनी से खरीदे गए थे; मस्तिष्क-व्युत्पन्न न्यूरोट्रॉफिक कारक (बीडीएनएफ) (48503-2) और -एक्टिन (52901) एसएबी कंपनी, यूएसए से खरीदे गए थे; बकरी विरोधी खरगोश आईजीजी माध्यमिक एंटीबॉडी (एसए 00001-20) प्रोटीनटेक कंपनी, यूएसए से खरीदा गया था; रैट मेलाटोनिन (एमटी) और एलिसा साइंटिफिक रिसर्च किट (एमएम-0657आर1) को जियांग्सू एंजाइम इम्यूनोएसे इंडस्ट्री कंपनी लिमिटेड, पैराफिन स्लाइसर (लीका, जर्मनी) से खरीदा गया था; ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप (लीका, जर्मनी);

मॉरिस वॉटर भूलभुलैया, ओपन फील्ड टेस्ट बॉक्स (शंघाई ज़िनरुआन); ऊर्ध्वाधर वैद्युतकणसंचलन उपकरण (बीजिंग लियूई कंपनी); डीकोलोराइजेशन शेकर (बीजिंग लियूई कंपनी); प्रोटीन इमेजिंग विश्लेषण प्रणाली (शंघाई टैनोन टेक्नोलॉजी); प्रतिदीप्ति मात्रात्मक पीसीआर उपकरण (शीआन तियानलोंग टेक्नोलॉजी कं, लिमिटेड)।

1.3 प्रायोगिक तरीके

1.3.1 पशु समूहन और औषधि प्रशासन

50 नर विस्टार चूहों को यादृच्छिक रूप से रिक्त नियंत्रण समूह (नियंत्रण समूह), प्लेटफ़ॉर्म नियंत्रण समूह (प्लेट-फ़ॉर्म नियंत्रण, पीसी समूह), मॉडल समूह (मॉडल समूह), सिस्टैंच डेजर्टिकोला समूह के कुल ग्लाइकोसाइड्स (जीसी समूह) में विभाजित किया गया था। , 50 मिलीग्राम/किग्रा), और एस्टाज़ोलिन समूह (एस्ट समूह, 0.54 मिलीग्राम/किग्रा), प्रत्येक समूह में 10 चूहों के साथ। नियंत्रण समूह और पीसी समूह को गैवेज द्वारा 0.9% खारा दिया गया था। मॉडलिंग शुरू होने के बाद सभी समूहों को हर दिन सुबह 7 बजे गैवेज दिया जाता था और यह गैवेज 21 दिनों तक चलता था।

1.3. 2. नींद की कमी वाले पशु मॉडल की तैयारी

नींद की कमी का मॉडल संशोधित मल्टी-प्लेटफ़ॉर्म जल पर्यावरण पद्धति [6] का उपयोग करके स्थापित किया गया था। प्रायोगिक उपकरण 130 सेमी × 50 सेमी × 45 सेमी आयताकार पॉलीथीन राल पानी की टंकी थी। पानी की टंकी में 5 सेमी व्यास और 20 सेमी ऊंचाई वाला एक छोटा मंच रखा गया था। पीसी ग्रुप के प्लेटफॉर्म का व्यास 10 सेमी और ऊंचाई 20 सेमी थी। पानी की टंकी को लगभग 18 सेमी की गहराई तक पानी से भरा गया था और पानी का तापमान (20 ± 1) डिग्री पर बनाए रखा गया था। प्रयोग शुरू होने से एक सप्ताह पहले, चूहों को पर्यावरण से परिचित कराने के लिए हर दिन 60 मिनट के लिए स्लीप डेप्रिवेशन बॉक्स में रखा गया था। मॉडल स्थापित होने के बाद, नियंत्रण समूह को छोड़कर, प्रत्येक समूह के चूहों को लगातार 21 दिनों तक नींद की कमी के लिए प्रतिदिन सुबह 8 बजे से रात 8 बजे तक समय पर छोटे मंच पर रखा गया।

सभी चूहों को भोजन और पानी तक मुफ्त पहुंच थी और वे मंच पर स्वतंत्र रूप से घूम सकते थे। प्रकाश और अंधकार का चक्र प्रतिदिन 12 घंटे का था।

1.3.3 मॉरिस जल भूलभुलैया प्रयोग

मॉरिस जल भूलभुलैया को 4 क्षेत्रों में विभाजित किया गया था, पानी से भरा हुआ था, और मंच को चौथे चतुर्थांश में रखा गया था। पानी की सतह मंच से लगभग 2 सेमी ऊपर थी। खाद्य ग्रेड खाद्य मेलेनिन को पानी में जोड़ा गया था, और पानी का तापमान (25 ± 1) डिग्री पर बनाए रखा गया था। (1) पोजिशनिंग नेविगेशन प्रयोग: प्रत्येक क्षेत्र का केंद्र चुना गया और चूहों को धीरे से पानी में रखा गया। उन्हें स्वतंत्र रूप से अन्वेषण करने की अनुमति दी गई। चूहों को 60 सेकंड के भीतर लक्ष्य मंच खोजने में लगा समय रिकॉर्ड किया गया। जिन चूहों को मंच नहीं मिला उन्हें मंच पर निर्देशित किया गया और वे 20 सेकंड तक रुके रहे। प्रशिक्षण 5 दिनों तक जारी रखा गया। (2) स्थानिक अन्वेषण परीक्षण: 6वें दिन, मंच को हटा दिया गया और चूहों को दीवार के सामने दूसरे चतुर्थांश के केंद्र से पानी में रखा गया। चूहों ने 120 सेकंड के भीतर प्लेटफ़ॉर्म को कितनी बार पार किया और चौथे चतुर्थांश में कितने समय तक रुके, इसे रिकॉर्ड किया गया।

1. 3. 4 खुले मैदान का प्रयोग

एक 100 सेमी × 100 सेमी × 50 सेमी प्रयोगात्मक बॉक्स का उपयोग किया गया था, और बॉक्स के निचले हिस्से को 9 ग्रिडों में विभाजित किया गया था। चूहों के प्रत्येक समूह को 60 मिनट के लिए इनडोर वातावरण में अनुकूलित करने के लिए पहले से खुले मैदान के प्रयोगात्मक कमरे में रखा गया था। प्रयोग की शुरुआत में, परीक्षण चूहों को बारी-बारी से खुले क्षेत्र के प्रयोगात्मक बॉक्स के निश्चित कोनों में रखा गया था, और व्यवहार विश्लेषण सॉफ्टवेयर का उपयोग करके 5 मिनट के भीतर चूहों के खड़े होने के समय, आंदोलन की दूरी और स्थिर समय की संख्या दर्ज की गई थी। प्रयोग के दौरान वातावरण को शांत रखना आवश्यक था, और पहले चूहे की गंध को अगले चूहे के व्यवहार संबंधी निर्णय को प्रभावित करने से रोकने के लिए प्रयोगात्मक उपकरण को दो प्रयोगों के बीच क्रमशः पानी और अल्कोहल से पोंछा गया था।

1. 3. 5 एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख (एलिसा)

चूहों में सीरम एमटी स्तर का पता लगाना चूहों को इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन द्वारा संवेदनाहारी किया गया था, और पेट की महाधमनी से 5 एमएल रक्त एकत्र किया गया था। कमरे के तापमान पर 30 मिनट तक इंतजार करने के बाद, सीरम प्राप्त करने के लिए रक्त को सेंट्रीफ्यूज किया गया। प्रत्येक कुएं में 40 μL नमूना मंदक मिलाया गया, और फिर परीक्षण किए जाने वाले नमूने का 10 μL जोड़ा गया। सीलिंग फिल्म से सील करने के बाद, प्लेट को 30 मिनट के लिए 37 डिग्री पर इनक्यूबेट किया गया। 5 बार धोया गया, 50 μL एंजाइम लेबलिंग समाधान जोड़ा गया, और प्लेट को एक सीलिंग फिल्म के साथ सील कर दिया गया और 30 मिनट के लिए 37 डिग्री पर इनक्यूबेट किया गया। 5 बार धोया गया, और फिर रंग विकसित करने वाला घोल और प्रतिक्रिया समाप्ति घोल बारी-बारी से मिलाया गया। प्रत्येक कुएं का OD मान 450 एनएम की तरंग दैर्ध्य पर एक एंजाइम लेबलर द्वारा मापा गया था।

1. 3. 6 निस्सल धुंधलापन

प्रत्येक समूह से तीन चूहों का चयन किया गया, और मस्तिष्क के ऊतकों को सिर काटकर हटा दिया गया और 4% पॉलीऑक्सीएथिलीन समाधान के साथ ठीक किया गया। ऊतक को निर्जलित किया गया, मोम के घोल में डुबोया गया, एम्बेडेड किया गया और पारंपरिक तरीकों से काटा गया। स्लाइस को 5 माइक्रोन की मोटाई के साथ रखा गया, पीबीएस से धोया गया, 0 से रंगा गया। 0.5 घंटे के लिए 1% टोल्यूडीन नीला, 95% अल्कोहल के साथ विभेदित, 100% अल्कोहल के साथ निर्जलित, पारदर्शी ज़ाइलीन के साथ, और तटस्थ गोंद से सील किया गया। चूहे के हिप्पोकैम्पस के CA1 क्षेत्र में आकृति विज्ञान और न्यूरॉन्स की संख्या में परिवर्तन को माइक्रोस्कोप के तहत देखा गया और चित्र एकत्र किए गए।

1. 3. 7 पश्चिमी धब्बा प्रयोग

प्रत्येक समूह से चार चूहों का चयन किया गया और हिप्पोकैम्पस को सिर काटकर अलग कर दिया गया। हिप्पोकैम्पस ऊतक को बर्फ स्नान वातावरण में आरआईपी ए लिसीस बफर के साथ मिलाया गया था और सतह पर तैरनेवाला प्राप्त करने के लिए ऊतक को सेंट्रीफ्यूज किया गया था। बीसीए विधि द्वारा प्रोटीन सांद्रता का पता लगाया गया। वैद्युतकणसंचलन के लिए प्रोटीन लोडिंग बफर के साथ 20 ग्राम प्रोटीन जोड़ा गया था। प्रोटीन वैद्युतकणसंचलन पूरा होने के बाद, झिल्ली को 300 एमए निरंतर प्रवाह पर स्थानांतरित किया गया था, 5% स्किम दूध पाउडर के साथ अवरुद्ध किया गया था, प्राथमिक एंटीबॉडी को रात भर 4 डिग्री पर ऊष्मायन किया गया था, और द्वितीयक एंटीबॉडी को 2 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर ऊष्मायन किया गया था। रंग विकास समाधान का उपयोग करने के बाद, प्रोटीन बैंड का कैमिल्यूमिनेसेंस इमेजिंग विश्लेषण प्रणाली का उपयोग करके सांख्यिकीय रूप से विश्लेषण किया गया।

1. 3. 8 आरटी-पीसीआर प्रयोग

हिप्पोकैम्पस ऊतक समरूपता तैयार करने के लिए प्रत्येक समूह से तीन चूहों का चयन किया गया। ऊतक द्रव में कुल आरएनए को ट्राइज़ोल विधि द्वारा निकाला गया और एकाग्रता को मापा गया। रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन के लिए एक फास्टकिंग सीडीएनए संश्लेषण किट का उपयोग किया गया था, और सिनैप्टिक-संबंधित प्रोटीन एमआरएनए के सापेक्ष अभिव्यक्ति स्तर का पता लगाने के लिए एक प्रतिदीप्ति मात्रात्मक किट का उपयोग करके एक प्रतिदीप्ति मात्रात्मक प्रवर्धन प्रतिक्रिया की गई थी। परिणामों का विश्लेषण 2-ΔΔCt का उपयोग करके किया गया। प्राइमर अनुक्रम तालिका 1 में दिखाए गए हैं।

तालिका 1 आरटी-पीसीआर प्राइमर अनुक्रम

1.4 सांख्यिकीय तरीके

सामान्य वितरण के अनुरूप डेटा परिणाम माध्य ± मानक विचलन (x ± s) के रूप में व्यक्त किए गए थे, और ग्राफपैड प्रिज्म 9.5 सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके सांख्यिकीय विश्लेषण किया गया था। कई नमूनों के बीच तुलना के लिए विचरण का एक-तरफ़ा विश्लेषण किया गया था, और P <{3}}.05 ने संकेत दिया कि अंतर सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण था।