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सिस्टैंच न्यूरोप्रोटेक्शन में मदद कर सकता है

सारा मार्मोलेजो-मार्टिनेज-आर्टेसेरो 1, कैटी कैस 1,† और डेविड रोमियो-गिटार्ट1,2,*

1 सेल बायोलॉजी, फिजियोलॉजी, और इम्यूनोलॉजी विभाग, इंस्टीट्यूट डी न्यूरोसाइंसेज (आईएनसी),

यूनिवर्सिटैट ऑटोनोमा डी बार्सिलोना (यूएबी), बेलाटेरा, 08193 बार्सिलोना, स्पेन; Sara.Marmolejo@uab.cat

2 प्रयोगशाला "मस्तिष्क विकास और कार्यों का हार्मोनल विनियमन" -टीम 8, इंस्टिट्यूट नेकर एनफेंट्स-मैलाडेस (आईएनईएम), आईएनएसईआरएम यू 1151, यूनिवर्सिटी पेरिस डेसकार्टेस, सोरबोन पेरिस सिटी,

75015 पेरिस, फ्रांस

*पत्राचार: david.romeo-guitart@inserm.fr; दूरभाष: प्लस 33-01-40-61-53-57 29 जून 2020 को मृत्यु हो गई।

सार: न्यूरॉन्स की तरह पोस्टमायोटिक कोशिकाओं को जीवन भर जीवित रहना चाहिए। इस कारण से, जीव/कोशिकाएं स्व-मरम्मत तंत्र के साथ विकसित हुई हैं जो उन्हें एक लंबा जीवन जीने की अनुमति देती हैं। पिछले वर्षों के दौरान न्यूरोप्रोटेक्टर्स की खोज कार्य ने पैथोफिजियोलॉजिकल तंत्र को अवरुद्ध करने पर ध्यान केंद्रित किया है जो न्यूरोडीजेनेरेशन में न्यूरोनल नुकसान का कारण बनता है। दुर्भाग्य से, इन अध्ययनों से केवल कुछ रणनीतियाँ न्यूरोडीजेनेरेशन को धीमा या रोकने में सक्षम थीं। यह प्रदर्शित करने वाले सम्मोहक साक्ष्य हैं कि स्व-उपचार तंत्र का समर्थन करते हैं जो जीवों / कोशिकाओं में अंतर्जात रूप से होते हैं, जिन्हें आमतौर पर सेलुलर लचीलापन कहा जाता है, न्यूरॉन्स को बांध सकते हैं और उनके आत्म-उपचार को बढ़ावा दे सकते हैं। हालांकि इन तंत्रों को बढ़ाने पर अभी तक पर्याप्त ध्यान नहीं दिया गया है, ये रास्ते न्यूरोनल मौत को रोकने और न्यूरोडीजेनेरेशन को बेहतर बनाने के लिए नए चिकित्सीय रास्ते खोलते हैं। यहां, हम सुरक्षा के मुख्य अंतर्जात तंत्रों पर प्रकाश डालते हैं और न्यूरोडीजेनेरेशन के दौरान न्यूरॉन के अस्तित्व को बढ़ावा देने में उनकी भूमिका का वर्णन करते हैं।

कीवर्ड: ऑटोफैगी; सेलुलर लचीलापन; अंतर्जात तंत्र; तंत्रिका संरक्षण; न्यूरोनल उत्तरजीविता; खुला प्रोटीन प्रतिक्रिया

1. न्यूरोडीजेनेरेटिव प्रक्रियाएं

विकसित देशों में बढ़ती जीवन प्रत्याशा के साथ, अल्जाइमर रोग (एडी), पार्किंसंस रोग (पीडी) या हंटिंगटन रोग (एचडी), या हमारे तंत्रिका तंत्र के प्रदर्शन में उम्र से संबंधित गिरावट जैसे न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों की आवृत्ति बढ़ने की संभावना है। यद्यपि साक्ष्य की कई पंक्तियाँ हैं जो दर्शाती हैं कि इन विकृति में न्यूरोनल, ज्योतिषीय और माइक्रोग्लियल घटक हैं, दैनिक कार्यों में गिरावट प्रगतिशील न्यूरोनल हानि के कारण होती है। उनके कम कारोबार के कारण, न्यूरॉन्स पोस्टमायोटिक कोशिकाएं हैं जिन्हें जीवन भर जीवित रहना चाहिए। इस कारण से, उन्हें बाहरी और आंतरिक अपमान से निपटने के लिए एक शक्तिशाली आंतरिक सुरक्षात्मक तंत्र की आवश्यकता होती है, जो उनके निधन का कारण बनेगा। ये बाहरी/आंतरिक खतरे दर्दनाक चोटें या एक्साइटोटॉक्सिक यौगिक, प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियां (आरओएस), प्रोटीन समुच्चय और अन्य जहरीले अणु हैं। सौभाग्य से, कोशिकाओं में आंतरिक तंत्र होता है जो लचीलापन तंत्र को सक्रिय करके या पुनर्जनन मार्गों को बढ़ावा देकर मृत्यु को रोकता है। जबकि युवा न्यूरॉन्स में इन स्व-उपचार सुरक्षात्मक तंत्रों का उचित कार्य होता है, वृद्धावस्था उन्हें परेशान करती है, जिससे न्यूरॉन्स असुरक्षित हो जाते हैं। उसी दिशा में, न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों में इन स्व-उपचार तंत्रों की शिथिलता का भी वर्णन किया गया है।

पिछले दशकों के दौरान, उपन्यास और प्रभावी न्यूरोप्रोटेक्टिव उपचार प्राप्त करने में भारी प्रयास किए गए हैं। हालांकि, उनका उद्देश्य पैथोफिजियोलॉजिकल तंत्र को लक्षित करना है, जो अंत में न्यूरोनल निधन के त्वरण में बदल जाता है। इसलिए, एक प्रभावी न्यूरोप्रोटेक्टिव दृष्टिकोण प्राप्त करने के लिए न्यूरॉन्स के पास स्वाभाविक रूप से तंत्र को बढ़ावा क्यों नहीं दिया जाता है?

यह सुरक्षात्मक नेटवर्क विभिन्न सेलुलर प्रक्रियाओं (यानी, अनफोल्डेड प्रोटीन रिस्पॉन्स (यूपीआर), ऑटोफैगी, आदि) के क्रॉसस्टॉक द्वारा संचालित होता है, लेकिन वे एक ही प्रक्रिया में परिवर्तित हो जाते हैं: सेल को तनाव के अनुकूल होने और जीवित रहने की अनुमति देता है [1-3] . हाल ही में, हमने न्यूरोप्रोटेक्टेंट्स की खोज के लिए एक उपन्यास तर्क पर विचार किया है: यह समझना कि आणविक तंत्र न्यूरॉन्स दो अलग-अलग तंत्रिका चोटों के बाद विपरीत फेनोटाइप, उत्तरजीविता या मृत्यु के साथ संलग्न होते हैं, जो स्वास्थ्य और न्यूरोडीजेनेरेशन / उम्र बढ़ने के साथ समानताएं साझा करते हैं। ऐसा करने के लिए, हमने विवो-आधारित परिधीय तंत्रिका चोट मॉडल में दो का उपयोग किया जो सुरक्षा के अंतर्जात तंत्र की कार्यक्षमता या शिथिलता की नकल करते हैं। वे सोम-चोट की दूरी [2] के आधार पर या तो मोटोन्यूरॉन (एमएन) मौत (रूट एवल्शन (आरए)) या उत्तरजीविता (डिस्टल एक्सोटॉमी (डीए)) को भड़काते हैं। इन मॉडलों की मदद से और सिस्टम बायोलॉजी-आधारित दृष्टिकोण का उपयोग करते हुए, हमने पुष्टि की कि आरए के बाद एमएन की मृत्यु न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों में देखे गए न्यूरोनल नुकसान के साथ समानताएं साझा करती है, और हमने यह भी बताया कि तंत्रिका चोट के बाद जीवित रहने के लिए एमएन द्वारा कौन से तंत्र का उपयोग किया जाता है। [2]। अपक्षयी प्रक्रियाएं एपोप्टोसिस, नेक्रोसिस, एनोइकिस, एंडोप्लाज्मिक रेटिकुलम (ईआर) तनाव, न्यूक्लियर स्ट्रेस, साइटोस्केलेटल पुनर्व्यवस्था और माइटोकॉन्ड्रियल डिसफंक्शन हैं, जबकि उत्तरजीविता के चालक हैं: एक सही यूपीआर, हीट-शॉक रिस्पांस, ऑटोफैजिक पाथवे, यूबिकिटिन- प्रोटीसम सिस्टम, चैपरोन सिस्टम, ईआर-संबंधित डिग्रेडेशन मशीनरी और एंटीऑक्सिडेंट रक्षा (तालिका 1)। दिलचस्प बात यह है कि इन सभी तंत्रों को अलग-अलग वर्षों पहले वर्णित किया गया है और इन्हें प्री-कंडीशनिंग इंजरी (नीचे देखें) के रूप में संदर्भित किया गया है।

तालिका 1. प्रत्येक अंतर्जात तंत्र के लिए शामिल प्रोटीन का सारांशतंत्रिका संरक्षण, आणविक तंत्र सहित जिसके द्वारा उनके प्रभावों की मध्यस्थता की जाती है।

हमने प्रदर्शित किया है कि औषधीय उपचार के माध्यम से न्यूरोप्रोटेक्शन के इन अंतर्जात तंत्रों को बढ़ावा देने से एमएन विभिन्न मृत्यु-समर्थक परिदृश्यों में जीवित रहने की अनुमति देता है, विभिन्न प्रजातियों से लेकर विकास के विभिन्न चरणों तक [23,54,55]।

2. अंतर्जात तंत्र का पहला साक्ष्य: पूर्व कंडीशनिंग

संरक्षण के अंतर्जात तंत्र के फेनोटाइपिक प्रभावों का वर्णन 40 साल पहले किया गया था। 1986 में। मुरी एट अल। वर्णन किया है कि सुबलेथल शारीरिक तनाव, जिसे पूर्व शर्त चोट के रूप में भी जाना जाता है, हृदय में ऊतक की वसूली को बढ़ाता है [56]। यहाँ से, मस्तिष्क और रीढ़ की हड्डी (SC) [57] में भी इन उपचार तंत्रों को देखा गया। उदाहरण के लिए, इन सेलुलर प्रतिक्रियाओं को तंत्रिका की चोट के बाद या हृदय पुनर्जनन के दौरान देखा जाता है, जहां क्रमशः आरओएस या बाह्य पुटिकाओं का उत्पादन, कार्यात्मक वसूली को चलाता है [58-60]। हैरानी की बात है कि किसी विशेष अंग की पूर्व-कंडीशनिंग दूसरों को चोट से सुरक्षा प्रदान करती है [61]। इन प्रभावों के लिए कई विशिष्ट प्रभावक जिम्मेदार हैं। पूर्व शर्त चोट के बाद, विभिन्न मध्यस्थों (नाइट्रिक ऑक्साइड या आरओएस) का उत्पादन सिग्नलिंग मार्ग फॉस्फेटिडाइलिनोसिटोल 3-किनेज (पीआई3के)/प्रोटीन किनसे बी (एकेटी), प्रोटीन किनेज सी (पीकेसी), और अन्य सिग्नलिंग मार्ग को सक्रिय करेगा। हाइपोक्सिया-इंड्यूसीबल फैक्टर 1-अल्फा (Hif1- ) या NF-kB जैसे ट्रांसक्रिप्शन कारकों को संशोधित करेगा। इनके परिणामस्वरूप नाइट्रिक ऑक्साइड सिंथेस (iNOS), हीट-शॉक प्रोटीन (HSPs), और साइक्लोऑक्सीजिनेज -2 (COX-2) का उत्पादन होगा, जिन्हें "अंतिम प्रभावकारक" के रूप में वर्णित किया गया है, और बढ़ावा देंगे भविष्य के अपमान के खिलाफ ऊतक के भीतर सुरक्षात्मक प्रभाव [61]। साथ में, इन अध्ययनों से पता चलता है कि जीवों / कोशिकाओं में अंतर्जात सुरक्षात्मक तंत्र होते हैं, और उन्हें बढ़ावा देना एक प्रभावी चिकित्सीय रणनीति हो सकती है।

3. न्यूरोप्रोटेक्शन के अंतर्जात तंत्र

3.1. फाइन-ट्यूनिंग ऑटोफैगी

होमोस्टैसिस को बनाए रखने के लिए न्यूरॉन्स को इंट्रासेल्युलर सामग्री के निरंतर पुनर्चक्रण की आवश्यकता होती है। मैक्रो-ऑटोफैगी, इसके बाद ऑटोफैगी के रूप में संदर्भित, यूकेरियोटिक कोशिकाओं में एक उच्च समन्वित आणविक नेटवर्क है जो लाइसोसोमल गिरावट के माध्यम से साइटोप्लाज्मिक सामग्री को रीसायकल करने का प्रयास करता है। हालाँकि यह गिरावट तंत्र शुरू में केवल भुखमरी के तहत देखा गया था, हाल के अध्ययनों से पता चला है कि प्रोटीन होमियोस्टेसिस को विनियमित करने के लिए कोशिकाओं में ऑटोफैगी का एक बेसल स्तर होता है। सामान्य परिस्थितियों में एक्सोनल रखरखाव और न्यूरॉन्स के अस्तित्व के लिए ये बेसल स्तर आवश्यक हैं [62,63]। एक कार्यात्मक ऑटोफैजिक प्रवाह एक प्रक्रिया है जो विभिन्न ऑटोफैगी-संबंधित (एटीजी) जीन, किनेसेस और अन्य नियामक प्रोटीन द्वारा अत्यधिक समन्वित होती है। वे सभी साइटोसोलिक लोड [64] को नीचा दिखाने के लिए लाइसोसोम के साथ ऑटोफैगोसोम के सही दीक्षा, न्यूक्लियेशन, बढ़ाव, क्लोजर और फ्यूजन को व्यवस्थित करने के लिए मिलकर काम करते हैं। उम्र बढ़ने के दौरान हिप्पोकैम्पस में स्वरभंग का कम प्रवाह देखा जाता है, जबकि इसके स्तरों की पुन: स्थापना से नई यादों के निर्माण में मदद मिलती है [65]। न्यूरॉन्स में बिगड़ा हुआ या निष्क्रिय ऑटोफैगी न्यूरोडीजेनेरेशन से जुड़ा होता है, जबकि ऑटोफैगी की सक्रियता पैदा करती हैतंत्रिका संरक्षण[5,54]। एमियोट्रोफिक लेटरल स्क्लेरोसिस (एएलएस) [66,67] में प्रारंभिक और बढ़ाव चरणों से संबंधित प्रोटीन में बदलाव देखा गया है, और ऑटोफैगी के संकेतक, जैसे रैपामाइसिन, एक्सर्टतंत्रिका संरक्षणसेरेब्रल इस्किमिया के बाद, दर्दनाक मस्तिष्क की चोट (TBI), और AD [68-70]। ATG5 या ATG7 का न्यूरॉन-विशिष्ट नॉकआउट (KO) न्यूरोडीजेनेरेशन, साइटोप्लाज्मिक समावेशन निकायों के संचय और न्यूरॉन्स की मृत्यु [62,71] का कारण बनता है, जबकि पीडी [4] के एक मॉडल में उनका अतिअभिव्यक्ति फायदेमंद है। अंत में, p62, जो ऑटोफैगोसोम में चार्ज का प्रबंधन करता है और ऑटोफैगोसोम गठन के देर के चरणों में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, प्रोटीन समुच्चय द्वारा विशेषता y मॉडल में न्यूरोप्रोटेक्टिव है, जो न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों की एक बानगी है [6]।

कई अध्ययनों ने न्यूरोडीजेनेरेशन के दौरान ऑटोफैगोसोम और ऑटोलिसोसोम के संचय को दिखाया है, यह सुझाव देते हुए कि ऑटोफैगी अतिसक्रिय है और न्यूरोनल मौत को ट्रिगर कर सकती है। साइटोप्लाज्म के भीतर ऑटोफैजिक प्रक्रियाओं का अचानक संचय, लाइसोसोमल डिसफंक्शन के कारण हो सकता है, न कि ओवरएक्टिव ऑटोफैगी [72]। टीबीआई के बाद ऑटोफैगी को ठीक से शुरू किया जाता है, लेकिन लाइसोसोमल डिसफंक्शन के कारण ऑटोफैगोसोम को समाप्त नहीं किया जाता है, जिससे अनसुलझे ऑटोफैगी की ओर जाता है जो न्यूरोनल डेथ को बढ़ावा देता है [73]। ये गैर-कार्यात्मक लाइसोसोमल मार्ग रीढ़ की हड्डी की चोट (एससीआई) के बाद भी देखे जाते हैं, जो कार्यात्मक वसूली में बाधा डालते हैं [74]। ऑटोफैगोसोम की निकासी में इसी तरह की रुकावट का वर्णन न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों (यानी, ईस्वी सन् के मानव मस्तिष्क) [75] में भी किया गया है। इन सभी सबूतों के एकीकरण से पता चलता है कि ऑटोफैगी के संकल्प को बढ़ाने से सुरक्षा मिल सकती है। प्लाट ने हाल ही में न्यूरोडीजेनेरेशन [76] को रोकने के लिए लाइसोसोमल प्रोटीन के कार्य में सुधार के चिकित्सीय मार्ग पर प्रकाश डाला। ट्रांसक्रिप्शन फैक्टर ईबी (टीएफईबी) का ओवरएक्प्रेशन, जो लाइसोसोम बायोजेनेसिस और फ़ंक्शन के लिए आवश्यक ट्रांसक्रिप्शनल नेटवर्क को नियंत्रित करता है, ने पीडी [7] और एक एडी चूहों मॉडल [8] के चूहे के मॉडल में न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव को बढ़ावा दिया है।

ऑटोफैगी का इंडक्शन उतना अच्छा नहीं है जितना हम चाहेंगे। यद्यपि यह एक विहित सुरक्षात्मक तंत्र है, इसकी मशीनरी या अतिसक्रियता कोशिका मृत्यु [77,78] की सुविधा प्रदान कर सकती है। मानव प्राणियों के संपर्क में आने के बाद ऑटोफैगी का निषेध न्यूरोनल क्षति को कम करता है, यह दर्शाता है कि ऑटोफैगी के शामिल होने से मृत्यु भी होती है [79], और ऑटोफैगी दीक्षा को कम करने से एससी हेमिसेक्शन के बाद कार्यात्मक वसूली को बढ़ावा मिलता है, एपोप्टोसिस को रोकता है, और नवजात शिशुओं में इस्किमिया के बाद पिरामिडल मौत को कम करता है। और वयस्क चूहे [80-82]। यदि हम एक्सोटोमाइज्ड न्यूरॉन्स पर ध्यान केंद्रित करते हैं, तो रूब्रोस्पाइनल [80] के लिए ऑटोफैगी को अवरुद्ध करना न्यूरोप्रोटेक्टिव है, जबकि एटीजी 5 के स्तर में वृद्धि स्पाइनल एमएन [5] की रक्षा करती है। विवाद को जोड़ते हुए, कीमोथेरेपी से उपचारित कैंसर कोशिकाएं उपचार-प्रेरित एपोप्टोटिक मृत्यु पर काबू पाने के लिए ऑटोफैगी को सक्रिय करती हैं, जबकि एमएन-आश्रित ऑटोफैगी एपोप्टोसिस [54] को रोकती है। इसके अलावा, एटीजी न्यूरोनल डेथ को भी ट्रिगर करते हैं। ATG5 क्लीवेज होने पर अपनी प्रो-ऑटोफैजिक क्षमताओं को खो देता है, अपनी गतिविधि को कोशिका मृत्यु के प्रेरण की ओर ले जाता है [83-85]। बीक्लिन1 में सामान्य परिस्थितियों में एपोप्टोटिक विरोधी प्रभाव होते हैं, लेकिन सी-टर्मिनस पर इसकी दरार कोशिकाओं को एपोप्टोटिक संकेतों के प्रति संवेदनशील बनाती है [9]। इसलिए, दोनों सेलुलर प्रक्रियाओं के बीच एक क्रॉसस्टॉक है, और कोशिकाएं अपमान से निपटने के लिए उनके जीवित रहने की संभावना बढ़ाने के लिए उन्हें पुनर्निर्देशित कर सकती हैं [83]।

तो, के लिए क्या महत्वपूर्ण हैतंत्रिका संरक्षण? ऑटोफैगी को बूस्ट करना या ब्लॉक करना? फ़ाइन-ट्यूनिंग इसका उत्तर है [86]। एक ट्यून-ट्यून ऑटोफैगी के प्रेरण से लाभकारी प्रभाव उत्पन्न होते हैं: (i) गैर-कार्यात्मक प्रोटीन/ऑर्गेनेल को हटाकर, (ii) सेल को नई स्थिति के लिए पुन: अनुकूलित करने की अनुमति देता है, और (iii) अपमानजनक हानिकारक प्रभावों जैसे कि सूजन या एपोप्टोटिक इंड्यूसर [ 87,88], जो न्यूरोनल निधन की मध्यस्थता करता है। हालांकि, इस ऑटोफैगी को समय की एक बहुत ही विशिष्ट खिड़की में सक्रिय किया जाना चाहिए, अत्यधिक गिरावट से बचना चाहिए जो कोशिका मृत्यु को भड़काती है।

अंत में, ऑटोफैगी में गैर-कैनोनिकल / डिग्रेडेटिव कार्य भी होते हैं, जैसे कि भड़काऊ प्रतिक्रिया का मॉड्यूलेशन, नई यादों का निर्माण [65], सिनैप्टिक होमोस्टेसिस का रखरखाव [89], और सेल के भीतर कार्गो का परिवहन [ 90]. तो, इसे पूरी तरह से अवरुद्ध करने से तंत्रिका तंत्र और/या न्यूरॉन्स को अपरिवर्तनीय क्षति होगी।

सिस्टैंच न्यूरोप्रोटेक्शन में मदद कर सकता है

3.2. अनफोल्डेड प्रोटीन रिस्पांस के सेक्सी हिस्से से निपटना

न्यूरॉन्स मिसफोल्डेड प्रोटीन और समुच्चय के प्रति बेहद संवेदनशील होते हैं। ईआर सेलुलर प्रोटियोस्टेसिस के लिए जिम्मेदार है, जो प्रोटीन का संश्लेषण, तह और छँटाई है। इसकी स्थिरता में कोई भी परिवर्तन मिसफोल्डेड प्रोटीन के संचय को बढ़ावा देगा, ईआर तनाव को प्रेरित करेगा और ईआर-अधिभार प्रतिक्रिया (ईआरओ), ईआर-संबंधित गिरावट (ईआरएडी) मार्ग, या यूपीआर को सक्रिय करेगा, जो एक अत्यधिक संरक्षित सेलुलर प्रतिक्रिया है। ईआर और यूपीआर के वितरण और आकारिकी में परिवर्तन न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों [91-93] में देखा गया है और जब तंत्रिका चोट [16,94] के बाद न्यूरॉन को अलग कर दिया जाता है। बाइंडिंग इम्युनोग्लोबुलिन प्रोटीन (बीआईपी), जिसे जीआरपी78 भी कहा जाता है, एक ईआर-निवासी चैपरोन है जो यूपीआर का मुख्य सेंसर है। निष्क्रिय अवस्था में, BIP तीन ma से बंधा रहता है-

जोर यूपीआर प्रभावकारक: आरएनए-सक्रिय प्रोटीन किनेज-जैसे ईआर किनेज (पर्क) जो सी/ईबीपी समरूप प्रोटीन (सीएचओपी), इनोसिटोल-आवश्यक प्रोटीन -1 अल्फा (आईआरई 1) को प्रेरित करता है, जो एक्स-बॉक्स बाध्यकारी प्रोटीन को विभाजित करता है। 1 (Xbp1) mRNA, और सक्रिय प्रतिलेखन कारक -6 अल्फा (ATF6) [95,96]। जब बीआईपी मिसफोल्डेड प्रोटीन का पता लगाता है, तो ये ट्रांसड्यूसर सक्रिय हो जाते हैं और जीन अभिव्यक्ति को संशोधित करके प्रोटीन को सही ढंग से फोल्ड करने के लिए सेल की क्षमता को बढ़ाने के उद्देश्य से विशिष्ट प्रोटीन (यानी, चैपरोन, ट्रांसक्रिप्शन कारक) की जीन अभिव्यक्ति में परिवर्तन करते हैं, मिसफॉल्ड की निकासी को बढ़ाते हैं। प्रोटीन की निकासी, या प्रोटीन संश्लेषण को रोकना, कोशिका को तनाव के अनुकूल होने और जीवित रहने की अनुमति देता है [97]। अवधारणा के प्रमाण के रूप में, डोपामाइन न्यूरॉन्स में बीआईपी ओवरएक्प्रेशन उनके अस्तित्व को बढ़ाता है, जबकि इसका डाउनरेगुलेशन नाइग्रल डोपामाइन न्यूरॉन्स [10] की मृत्यु को प्रेरित करता है। इसके अलावा, बीआईपी प्लस / - चूहों ने प्रियन रोगजनन का त्वरित प्रसार दिखाया [98]। कुल मिलाकर, यूपीआर मॉडुलन न्यूरोडीजेनेरेशन [94] पर सुरक्षात्मक प्रभाव डाल सकता है, जैसा कि हमारे समूह [99] द्वारा हाल ही में समीक्षा की गई है। यूपीआर सक्रियण न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों में एक प्रारंभिक घटना है, और इसके सटीक मॉडुलन का पैथोलॉजी प्रगति [100,101] पर लाभकारी प्रभाव पड़ता है। यद्यपि यूपीआर कोशिका सुरक्षा के अंतर्जात तंत्र के रूप में कार्य कर सकता है, इसकी (ओवर) सक्रियता एपोप्टोसिस को बढ़ावा देती है [102] (यानी, पर्क अक्ष में प्रो- या एपोप्टोटिक क्षमताएं [91] हैं)। इसके अलावा, हाल के साक्ष्य बताते हैं कि ईआर के विभिन्न गड़बड़ी यूपीआर की 3 शाखाओं को अलग-अलग सक्रिय करेंगे, यह दर्शाता है कि उनमें से समन्वित सह-सक्रियण हमेशा मौजूद नहीं होता है।

इसलिए, एक विशिष्ट अपमान का जवाब देने के लिए सेल के पास एक विशिष्ट कार्यक्रम है। उदाहरण के लिए, CHOP ब्लॉकेज या Xbp1 ओवरएक्प्रेशन तंत्रिका की चोट के बाद न्यूरॉन के अस्तित्व को बढ़ाता है, यह दर्शाता है कि न्यूरॉन डेथ [16] में प्रत्येक शाखा की अलग-अलग भूमिकाएँ हैं।

मस्तिष्क की चोट के बाद पर्क की प्रारंभिक सक्रियतातंत्रिका संरक्षण, जबकि इस मार्ग के माध्यम से निरंतर संकेतन कोशिका हानि को बढ़ा देता है [11]। ओवरएक्प्रेशन या फार्माकोलॉजिकल पर्क एक्टिवेशन ताऊ पैथोलॉजी [12] को कम करता है, जबकि इसके निरंतर सक्रियण को रोकने से न्यूरोनल डेथ कम हो जाती है [13] और उम्र से संबंधित मेमोरी में गिरावट [14] में सुधार होता है। एस्ट्रोसाइट्स में पेरक का निषेध विवो मॉडल में एक प्रियन-रोग में न्यूरोनल नुकसान में देरी करता है। दिलचस्प बात यह है कि एस्ट्रोसाइट्स में पेरक सक्रियण स्राव को परेशान करता है, इसके सिनैप्टोजेनिक फ़ंक्शन को बदल देता है और सिनैप्टिक नुकसान का कारण बनता है [15]। उन्हीं लेखकों ने वर्णन किया है कि मुख्य

पर्क के इस हानिकारक प्रभाव में शामिल डाउनस्ट्रीम तंत्र बाह्य मैट्रिक्स-सेल आसंजन मार्ग हैं, जो यूपीआर को एनोइकिस के साथ क्रॉसलिंक करते हैं (नीचे देखें, धारा 3.4)। सक्रिय प्रतिलेखन कारक 5 (ATF5) स्तर सीधे PERK/यूकेरियोटिक अनुवाद दीक्षा कारक 2a (eIF2a) के सक्रियण पर निर्भर हैं। ATF5 को सीधे उन न्यूरॉन्स से जोड़ा गया है जो मानव मिर्गी [26] में मृत्यु के लिए अधिक लचीला हैं। हालांकि, इन प्रभावों के बाद के परिणाम उतने स्पष्ट नहीं हैं। ATF5 दो एंटी-एपोप्टोटिक प्रभावकों (नीचे देखें), बी-सेल लिंफोमा 2 (बीसीएल -2) और प्रेरित मायलोइड ल्यूकेमिया सेल भेदभाव प्रोटीन (एमसीएल -1) [103] की अभिव्यक्ति को प्रेरित करता है, जो बाधित करेगा एपोप्टोसिस। ATF5 गैर-न्यूरोनल ऊतकों में रैपामाइसिन (एमटीओआर) के यंत्रवत लक्ष्य को भी नियंत्रित करता है, जो ऑटोफैगी का मुख्य न्यूनाधिक है, जो यूपीआर और ऑटोफैगी को परस्पर जोड़ता है।

IRE1 के सक्रिय होने से लीवर की विफलता में सुधार होता है [17], और इसका डाउनस्ट्रीम इफ़ेक्टर Xpb1 हृदय की सुरक्षा को बढ़ावा देता है [18],तंत्रिका संरक्षणAD में, PD में, और स्ट्रोक के बाद [19-21]। आश्चर्यजनक रूप से, मधुमेह और इस्किमिया-प्रेरित रेटिनोपैथी में एक अध्ययन से पता चला है कि यूपीआर के सुरक्षात्मक प्रभावों की मध्यस्थता Xbp1 [22] द्वारा की जाती है। बहरहाल, IRE1 शाखा की पुरानी सक्रियता से ट्यूमर नेक्रोसिस फैक्टर-ए (TNF-) रिसेप्टर-संबंधित कारक 2 (TRAF2) का फॉस्फोराइलेशन हो जाएगा, जिससे एपोप्टोटिक कोशिका मृत्यु अलग-अलग तरीकों से शुरू हो जाएगी [104-106]। Ire1 के एक्टोपिक ओवरएक्प्रेशन से पीडी ड्रोसोफिला मॉडल [107] में ऑटोफैगी-आश्रित न्यूरोनल मौत हो जाएगी। इसलिए, एक विशिष्ट विंडो के दौरान IRE1 -Xbp1 का एक समायोजित मॉडुलन सुरक्षा प्रदान कर सकता है [108]।

हमने हाल ही में वर्णन किया है कि न्यूरोहील फार्माकोलॉजिकल ट्रीटमेंट या सिर्टुइन1 (एसआईआरटी1) ओवरएक्प्रेशन तंत्रिका चोट के बाद एमएन के अस्तित्व को प्रेरित करता है, और आईआरई 1 फॉस्फोराइलेशन [23] को कम करते हुए क्लीवेड एटीएफ 6 की उपस्थिति को बढ़ाता है। ATF6 का औषधीय सक्रियण प्रोटियोस्टेसिस [24] को सक्रिय करके विभिन्न इस्किमिया मॉडल में सुरक्षा को प्रेरित करता है, और इस प्रतिलेखन कारक के रुकावट का हानिकारक प्रभाव पड़ता है। विस्तार से, ATF6 एंटीऑक्सिडेंट-प्रतिक्रिया-संबंधित प्रोटीन की अभिव्यक्ति को नियंत्रित करता है, ROS हार्मोन को संशोधित करता है [109]। एटीएफ 6 की जबरन अभिव्यक्ति स्ट्रोक के बाद कार्यात्मक परिणाम में सुधार करती है, और लेखकों का सुझाव है कि इस प्रभाव को ऑटोफैगी [25] के शामिल होने से मध्यस्थ किया जा सकता है।

तो, यूपीआर को चिकित्सीय रूप से दिलचस्प, सक्रिय करने या क्षीण करने वाला क्या है? यूपीआर की विशिष्ट शाखाओं का सक्रिय होना प्रमुख बिंदु है। यूपीआर की सटीक सक्रियता कोशिका को प्रोटियोस्टेसिस को बहाल करने में मदद करके सुरक्षात्मक प्रभावों को बढ़ावा दे सकती है। फिर भी, इस अवधारणा को सावधानी के साथ लिया जाना चाहिए क्योंकि यदि तनाव बना रहता है और प्रोटिओस्टेसिस को बहाल नहीं किया जाता है, तो यूपीआर न्यूरोनल एपोप्टोसिस को ट्रिगर करता है जिसकी मध्यस्थता पर्क या आईआरई 1 शाखा [110] द्वारा की जाती है। इसके अलावा, यूपीआर ऑटोफैगी और इसके विपरीत भी जुड़ा हुआ है। बीआईपी ऑटोफैजिक प्रतिक्रिया की मध्यस्थता करता है, न्यूरोनल उत्तरजीविता को बढ़ावा देता है [111]। अंत में, यूपीआर की 3 शाखाएं एटीजी के [112] के प्रतिलेखन को व्यवस्थित करती हैं, जो दोनों सेलुलर प्रक्रियाओं के बीच एक जटिल कड़ी का सुझाव देती हैं।

3.3. "आज नहीं" एपोप्टोसिस

एपोप्टोसिस एक कस्पासे-आश्रित क्रमादेशित कोशिका मृत्यु (PCD) है जो कोशिका प्लाज्मा झिल्ली और जीवों की अखंडता को बनाए रखता है [113]। इसका नियमन कई कैंसर, न्यूरोडीजेनेरेटिव या सूजन संबंधी विकृतियों का कारण है। कैसपेज़-प्रेरित मृत्यु एक अत्यधिक नियंत्रित प्रक्रिया है जिसमें अंतिम कोशिका मृत्यु का कारण बनने के लिए कई खिलाड़ियों के समन्वित कार्य की आवश्यकता होती है [114]। एपोप्टोसिस-जैसे डेथ हॉलमार्क एमियोट्रोफिक लेटरल स्क्लेरोसिस (एएलएस) चूहों के मॉडल, एडी, या पीडी में पाए जाते हैं, हालांकि यह स्पष्ट नहीं है कि यह न्यूरोनल डेथ का अंतिम निष्पादक है [115]। विकास के दौरान, कोशिकाओं ने अपनी मृत्यु को रोकने के लिए या समय से पहले पीसीडी से बचने के लिए कई तंत्र विकसित किए हैं। कोशिकाएं केवल एक प्रभावी एपोप्टोटिक मृत्यु को ट्रिगर करती हैं जब प्रो- या एंटी-एपोप्टोसिस मशीनरी के बीच संतुलन उन्हें मृत्यु की ओर धकेलता है। हमारे विवो मॉडल के आधार पर, हमने देखा कि आरए एपोप्टोटिक मार्गों को प्रेरित करता है, लेकिन एपोप्टोटिक विरोधी भी है, और उनका संतुलन एक वैकल्पिक और अज्ञात मृत्यु की ओर जाता है जो शास्त्रीय एपोप्टोसिस [2] नहीं है। फील्ड में अंतिम प्रकाशनों से पता चलता है कि कैसपेज़ कोशिका मृत्यु [116] को बढ़ावा दिए बिना तंत्रिका तंत्र को फिर से तैयार करके भी कार्य करते हैं, और उनकी गतिविधि इसकी उप-कोशिकीय स्थिति पर निर्भर करती है। इसलिए, न्यूरोडीजेनेरेटिव ऊतकों में पाए जाने वाले कैसपेज़ के सक्रिय रूपों में गैर-मृत्यु-संबंधी भूमिका हो सकती है और अंतिम न्यूरॉन मृत्यु अन्य घातक तंत्रों के माध्यम से होती है।

एपोप्टोसिस को एपोप्टोटिक विरोधी मार्गों द्वारा बाधित किया जा सकता है, जो तीन प्रोटीन परिवारों द्वारा संचालित होते हैं: फ्लिस-निरोधात्मक प्रोटीन, बीसीएल -2, और एपोप्टोसिस प्रोटीन के अवरोधक (आईएपी)। आईएपी प्रयास करते हैंतंत्रिका संरक्षणएक इस्किमिया मॉडल में [27] या नवजात अवस्था के दौरान तंत्रिका चोट के बाद एमएन की मृत्यु से बचें [28]। वयस्कता [29] के दौरान एक्सोटॉमी के बाद न्यूरोनल मौत की रुकावट के लिए IAP को जिम्मेदार माना जाता है। उसी दिशा में, एक्स-लिंक्ड-आईएपी (एक्सआईएपी) का एक पोस्ट-ट्रांसलेशनल मॉडिफिकेशन, जो इसके एंटी-कस्पेज़ 3 फ़ंक्शन को अवरुद्ध करता है, को पीडी रोगजनन [117] में योगदानकर्ता के रूप में वर्णित किया गया है।

इस्केमिक प्रीकंडीशनिंग, जो आंशिक रूप से इस्किमिया के हानिकारक प्रभावों को कम करता है, आईएपी के माध्यम से कार्य करता है, और कैसपेज़ कैस्केड सक्रियण [30] के बाद कोशिकाओं को जीवित रहने में सक्षम बनाता है। आईएपी नवजात एक्सोटॉमी [28] के बाद एमएन पर ग्लियाल सेल-व्युत्पन्न न्यूरोट्रॉफिक कारक (जीडीएनएफ) के उत्तरजीविता प्रभाव का भी मध्यस्थता करते हैं। अन्य आणविक मार्ग जो प्रो-एपोप्टोटिक प्रोटीन को संशोधित करके कोशिका मृत्यु से बचते हैं, वे बाह्य संकेत-विनियमित किनेसेस (ईआरके) और एकेटी हैं। इस अर्थ में, AKT मार्ग को एपोप्टोसिस [31] को अवरुद्ध करके एक उत्तरजीविता खिलाड़ी के रूप में वर्णित किया गया है। AKT इसके क्षरण को बढ़ावा देकर एपोप्टोसिस इंड्यूसर p53 को रोकता है और इसलिए इसकी प्रो-एपोप्टोटिक क्षमताओं को रोकता है [32-34]। अन्यथा, कैसपेज़ AKT को अपनी दरार से बाधित करने में सक्षम हैं, जो कोशिका के अस्तित्व और मृत्यु के एक ट्यून-ट्यून मॉड्यूलेशन को इंगित करता है [118]। दूसरी ओर, AKT गतिविधि फोर्कहेड बॉक्स प्रोटीन O (FOXO) प्रतिलेखन कारकों को फास्फोराइलेट करती है। वे एपोप्टोसिस [119] से संबंधित हैं और उनका संशोधन एक बढ़ी हुई कोशिका अस्तित्व [35] को चालू करता है। FOXOs का AKT-निर्भर फॉस्फोराइलेशन नाभिक में इसके प्रवेश से बचता है, प्रो-एपोप्टोटिक जीन जैसे Bcl -2- को शामिल करने से रोकता है, जो कोशिका मृत्यु (BIM) या Bcl -2 के मध्यस्थ मध्यस्थ हैं। प्रोटीन 3 (बीएनआईपी3) [119-121]। दूसरी ओर, फॉक्सो के पोस्ट-ट्रांसडक्शनल मॉडिफिकेशन सेल के भीतर उनके ट्रांसक्रिप्शनल नेटवर्क को ट्यून-ट्यून करते हैं, इसे एपोप्टोसिस के बजाय ऑटोफैगी इंडक्शन की ओर ले जाते हैं [54,121-123]। इसलिए, फॉक्सो परिवार का विशिष्ट मॉडुलन एपोप्टोसिस [54,124] को रोककर न्यूरोनल उत्तरजीविता को बढ़ावा देने का एक नया तरीका है।

अंत में, न्यूरोनल गतिविधि भी NMDA पर निर्भर एंटी-एपोप्टोटिक जीन के अपग्रेडेशन [125,126] द्वारा एपोप्टोसिस-विरोधी का एक प्रमोटर है। इनमें से कुछ अपग्रेड किए गए जीन माइटोकॉन्ड्रिया को तनाव के प्रति अधिक प्रतिरोधी बनने की अनुमति देते हैं [126], जिससे कोशिका को अपमान से बचने में मदद मिलती है।

3.4. एंटी-एनोइकिस द्वारा रीटेटिंग

ऊतक के भीतर इसके सही कार्यात्मक एकीकरण के लिए कोशिका और बाह्य मैट्रिक्स (ईसीएम) के बीच बातचीत आवश्यक है। जब इस क्रॉसस्टॉक को टाल दिया जाता है, तो कोशिका एक पीसीडी के माध्यम से मर जाती है जिसे एनोइकिस कहा जाता है, जो एपोप्टोसिस के साथ मार्ग साझा करता है। दिलचस्प बात यह है कि आंतरिक एनोइकिस कार्यक्रमों का टूटना ट्यूमर कोशिकाओं को दुर्दमता प्रदान करता है, जिससे उन्हें बचने के लिए पर्याप्त सेलुलर लचीलापन मिलता है और बिना मरने के अन्य ऊतकों पर फिर से जुड़ जाता है [127,128]। इन अंतःक्रियाओं के प्रमुख प्रभावक इंटीग्रिन प्रोटीन हैं, जो और सबयूनिट्स के संयोजन से बनते हैं। यह संयोजन लिगैंड की विशिष्टता और इंट्रासेल्युलर सिग्नलिंग का निर्धारण करेगा। ईसीएम संकेतों को इंटीग्रिन के माध्यम से न्यूरॉन्स में प्रेषित किया जाता है, जो सेल आकार, अस्तित्व, गतिशीलता, प्रसार, विकास, न्यूरोनल कनेक्टिविटी और सिनैप्टिक प्लास्टिसिटी [129] के लिए आवश्यक है। इंटीग्रिन विकास कारकों [130] के इंट्रासेल्युलर सिग्नलिंग के लिए भी महत्वपूर्ण हैं, जो कि मृत्यु-समर्थक तंत्र को अवरुद्ध करके न्यूरोनल उत्तरजीविता के जाने-माने न्यूनाधिक हैं। 1 इंटीग्रिन सबयूनिट सेल-ईसीएम इंटरैक्शन के लिए आवश्यक है, और इसकी रुकावट एनोइकिस [36] और न्यूरोनल एपोप्टोसिस [131] को ट्रिगर करने के लिए पर्याप्त है। इसके अलावा, इस सबयूनिट का इंट्रासेल्युलर सिग्नलिंग रेटिनल गैंग्लियन कोशिकाओं [132] के अस्तित्व से संबंधित है, और उनके दोष न्यूरोडीजेनेरेटिव विकारों में मौजूद हैं [133]।

फिर भी, कोशिकाओं ने मौत का मुकाबला करने के लिए एंटी-एनोइकिस सबरूटीन्स विकसित किए हैं, जो टाइरोसिन किनेसेस, छोटे GTPases [128], NF-kB [134], PI3K/AKT, प्रोटो-ऑनकोजीन टाइरोसिन-प्रोटीन किनेज (Src) या ERK कुल्हाड़ियों द्वारा शुरू किए गए हैं। , और ऑटोफैगी द्वारा [135,136]। NF-kB एंटी-एपोप्टोटिक प्रोटीन जैसे Bcl-2 और IAP- 1 [135] को ट्रिगर करके एंटी-एनोइकिस को नियंत्रित करता है, इस बीच सेल अस्तित्व में PI3K / AKT की भूमिका व्यापक रूप से प्रलेखित है और अस्तित्व में योगदान करती है। विभेदित कोशिकाओं की [36,37]। ईसीएम टुकड़ी भी ऑटोफैगी को प्रेरित करती है, जो एक आत्म-सुरक्षा तंत्र है जो एपोप्टोसिस को बायपास करता है [135]। सबूत के ये टुकड़े फिर से आत्म-सुरक्षा तंत्र के बीच एक जटिल नेटवर्क का सुझाव देते हैं।

मैट्रिक्स मेटल-लोप्रोटीनेज (एमएमपी) की वृद्धि के कारण टीबीआई के बाद न्यूरोनल मौत में एनोइकिस भी मौजूद है जो ईसीएम प्रोटीन को नष्ट कर देता है [137]। एमएमपी की अभिव्यक्ति और स्तरों को न्यूरोट्रामा के बाद संशोधित किया जाता है, और अक्षीय अध: पतन, ग्लियाल निशान गठन और सिनैप्टिक रीमॉडेलिंग में उनकी अलग-अलग भूमिका होती है। न्यूरोनल उत्तरजीविता के संबंध में, MMP9 का निषेध लेमिनिन क्षरण को कम करके सेरेब्रल इस्किमिया में सुरक्षात्मक प्रभाव डालता है [38]। एमएमपी को न्यूरोडीजेनेरेशन [138] में भी फंसाया जाता है। हाल के अध्ययनों में बताया गया है कि MMP9 के निषेध का मोटर इकाई में ALS चूहों के मॉडल [39,40] और AD मॉडल [41] से सुरक्षात्मक प्रभाव पड़ता है। इसलिए, विशिष्ट एमएमपी को बाधित करने के उपचार परोक्ष रूप से न्यूरॉन्स के भीतर एनोइकिस कार्यक्रम को बनाए रखेंगे जिससे इसके अस्तित्व को सुगम बनाया जा सके।

3.5. साइटोस्केलेटन और मोटर ट्रांसपोर्टर

न्यूरोनल साइटोस्केलेटन तीन अलग-अलग संरचनात्मक परिसरों से बना है: सूक्ष्म-नलिकाएं (एमटी), इंटरमीडिएट इलमेंट (आईएफ), और एक्टिन माइक्रो-लामेंट्स। उनके अलग-अलग सेलुलर कार्य हैं: एमटी न्यूराइट और डेंड्राइट गतिकी को नियंत्रित करता है [139], एक्टिन कोशिका आकृति विज्ञान का प्रभारी है [140], और आईएफ साइटोस्केलेटन संरचना के लिए यांत्रिक और स्थिरता को चलाता है [141]। संरचनात्मक परिसरों में दोष न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों में, परिधीय न्यूरोपैथी में, सिनैप्टिक डिसफंक्शन में देखे जाते हैं, और परिपक्व रीढ़ की हानि [141-146] की ओर ले जाते हैं।

एमटी की गतिशीलता एक अत्यधिक नियंत्रित प्रक्रिया है, और इसका असंतुलन न्यूरॉन के अस्तित्व या अक्षतंतु प्रदर्शन [142] के लिए विनाशकारी परिणाम दे सकता है, जबकि इसका स्थिरीकरण न्यूरोनल मौत को रोकता है [147] और केंद्रीय तंत्रिका तंत्र में अक्षीय वृद्धि को तेज करता है [148]। अधिक विस्तार से, साइटोस्केलेटल संरचनाएं रेलवे हैं, जबकि किनेसिन और डायनेन मोटर प्रोटीन वे ट्रेनें हैं जो कार्गो को क्रमशः एंट्रोग्रेड या प्रतिगामी परिवहन द्वारा स्थानांतरित करती हैं। इसलिए, न्यूरॉन्स के अस्तित्व के लिए मोटर कॉम्प्लेक्स भी आवश्यक हैं। kinesin परिवार kinesin-1 (ऐतिहासिक रूप से KIF5c नामित) और kinesin-3 (KIF1A, KIF1B, और KIF1B) सदस्यों [149] द्वारा बनता है। KIF5c MNs [150] में समृद्ध है, और इसका आनुवंशिक पृथक्करण MN रोगों और पक्षाघात [149,151] से जुड़ा हुआ है। इसे हाल ही में ALS [152] के रोगजनन में निहित किया गया है। एमटी के साथ इसके संपर्क में कमी से एक्सोनल डिजनरेशन और बाद में न्यूरोनल डेथ होता है [153]। KIF5c व्यवधान से माइटोकॉन्ड्रियल गतिकी विकार होते हैं, जिसके परिणामस्वरूप उत्तेजनाओं के आधार पर न्यूरोनल उत्तरजीविता या मृत्यु होती है। इसके अलावा, KIF5c माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन को ट्यून करता है, सेलुलर स्वास्थ्य में बदल जाता है (नीचे देखें, धारा 3.6।) [42], और इसका मॉड्यूलेशन बढ़ावा दे सकता हैतंत्रिका संरक्षण. प्रोटीन समुच्चय, जैसे कि अमाइलॉइड-, का KIF5a स्थिरता पर हानिकारक प्रभाव पड़ता है, जिससे बिगड़ा हुआ माइटोकॉन्ड्रियल आंदोलन और अच्छी तरह से कार्य होता है [154]।

प्रतिगामी प्रोटीन भी कार्य करते हैंतंत्रिका संरक्षण. वे डायनेइन हैं और विभिन्न प्रोटीनों द्वारा गठित मल्टीप्रोटीन कॉम्प्लेक्स हैं, जिसमें p150glue (dynactin1/DCNT1) सबसे प्रचुर मात्रा में सबयूनिट हैं। एक निष्क्रिय डायनेक्टिन सबयूनिट 1 (DCTN1) का उपयोग ALS चूहों के मॉडल के रूप में किया गया है, और इसका उत्परिवर्तन एक दोषपूर्ण अक्षीय परिवहन का कारण बनता है जो चूहों में ALS- जैसे फेनोटाइप की ओर जाता है [155,156]। KO चूहों में आयु-निर्भर MN मृत्यु दिखाई देती है, जो एक ऑटोफैगी रुकावट [157] के साथ होती है। DCTN1 की न्यूरोनल बॉडी के भीतर ऑटोफैजिक रिक्तिका परिवहन में एक स्पष्ट भूमिका है, और इसकी गड़बड़ी के कारण डिस्टल एक्सोन में एम्फीसोम संचय होता है, जिससे AD- जैसे फेनोटाइप [158] हो जाते हैं। डायनेन एडेप्टर रैब-इंटरेक्टिंग लाइसोसोमल प्रोटीन (आरआईएलपी) ऑटोफैगोसोम बायोजेनेसिस, ट्रांसपोर्ट में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, और इसके अवरोध से ऑटोफैजिक प्रक्रियाओं का संचय होता है [44]। कुल मिलाकर, यह देखा गया है कि एमटी की शिथिलता, काइनेसिन और डायनेइन एबेरेंट स्थानीयकरण के साथ, लाइसोसोमल डिसफंक्शन की ओर ले जाती है, जो एडी [159] में ऑटोफैगोसोम संचय और प्रीसानेप्टिक डिस्ट्रोफी को भड़काती है। ऑस्टियोक्लास्ट में DCTN1 की अधिकता एपोप्टोटिक मृत्यु को रोकती है, यह सुझाव देती है कि अन्य प्रकार की कोशिकाओं और ऊतकों में कोशिकीय मृत्यु से बचने में मोटर प्रोटीन की भी भूमिका होती है [43]।

संक्षेप में, कई न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों और तंत्रिका तंत्र की चोट के बाद अक्षीय परिवहन में कमी मौजूद है। उस दोष के परिणामस्वरूप अक्षीय परिवहन [5] के लिए आवश्यक एमटी संरचना और/या आणविक मोटर्स में परिवर्तन होगा। न्यूरॉन्स के सामान्य कामकाज के लिए उचित अक्षीय परिवहन महत्वपूर्ण है, और इस प्रक्रिया में हानि न्यूरोनल निधन में योगदान करती है। कोशिका के परिवहन तंत्र को बढ़ावा देना, या तो साइटोस्केलेटन को स्थिर करके या मोटर प्रोटीन के स्तर / गतिविधि को बढ़ाकर, न्यूरॉन [5] के भीतर एक सही ऑटोफैगी फ्लुक्स को फिर से स्थापित करके न्यूरोप्रोटेक्टिव होने का प्रदर्शन किया है।

3.6. माइटोकॉन्ड्रियल वेल-फंक्शन

न्यूरॉन्स का कार्य ऊर्जा और कैल्शियम (Ca2 प्लस) संतुलन पर निर्भर करता है, इसलिए माइटोकॉन्ड्रिया का प्रदर्शन उनके लिए महत्वपूर्ण है। माइटोकॉन्ड्रिया स्थिर अंग नहीं हैं। वे सेल के अंदर आकार, आकार, संख्या या स्थानीयकरण बदलते हैं और सेल्युलर मांग के अनुकूल होने के लिए फ़्यूज़ या फ़्यूज़ द्वारा विभाजित करने की क्षमता रखते हैं। वे इलेक्ट्रॉन परिवहन श्रृंखला (ईटीसी) के माध्यम से ट्राइकारबॉक्सिलिक एसिड चक्र (टीसीए) और ऑक्सीडेटिव फास्फारिलीकरण (ओएक्सपीएचओएस) के माध्यम से ऊर्जा का उत्पादन करते हैं। OXPHOS सक्रियण ROS को जन्म देगा, जिसमें शारीरिक स्तरों [160] और अक्षीय उत्थान [60] पर कार्यों की एक विस्तृत श्रृंखला (भेदभाव, स्वरभंग, प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया) है। बहरहाल, सुपर-फिजियोलॉजिकल स्तरों पर, आरओएस हानिकारक हैं क्योंकि वे लिपिड, डीएनए और प्रोटीन को नुकसान पहुंचाते हैं। इन परिवर्तनों को न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों, एससीआई और टीबीआई से जोड़ा गया है। माइटोकॉन्ड्रिया न्यूरोनल उत्तरजीविता के एक मुख्य नियामक के रूप में भी कार्य करता है, जो कि न्यूरोनल डेथ को नियंत्रित करने वाले मार्गों में उनकी भागीदारी के माध्यम से होता है।

माइटोकॉन्ड्रिया को कोशिका के चारों ओर साइटोस्केलेटन, मोटर प्रोटीन और उपयुक्त एडेप्टर द्वारा ले जाया जाता है। न्यूरॉन्स में, वे मुख्य रूप से एडेप्टर Miro और Milton/trafficking kinesin-binding प्रोटीन 1 (TRAK) प्रोटीन [161] द्वारा MT पर तस्करी करते हैं। न्यूरॉन्स के भीतर ये माइटोकॉन्ड्रिया आंदोलनों, सिनेप्स के भीतर इष्टतम स्थिरता बनाए रखने के लिए आवश्यक हैं, ऊर्जा का उत्पादन करते हैं, Ca2 प्लस को बफर करते हैं, आदि। [162]। माइटोकॉन्ड्रिया अक्सर ईआर के करीब स्थानीयकृत होते हैं, माइटोकॉन्ड्रिया से जुड़े ईआर झिल्ली, या माइटोकॉन्ड्रिया से जुड़े झिल्ली (एमएएम) बनाते हैं। ये झिल्ली माइक्रोडोमेन प्रतिवर्ती टेथर हैं जो विभिन्न प्रकार की सेलुलर प्रक्रियाओं को सह-विनियमित और प्रभावित करते हैं, अर्थात, लिपिड का संश्लेषण / परिवहन, सीए 2 प्लस डायनेमिक्स / सिग्नलिंग, ऑटोफैगी, माइटोकॉन्ड्रियल आकार और आकार, एपोप्टोसिस और ऊर्जा चयापचय [163]। एडी, पीडी, और एएलएस [164] जैसे तंत्रिका संबंधी विकारों में एमएएम को बदल दिया जाता है। माइटोकॉन्ड्रिया एटीजी के केंद्र के रूप में कार्य करता है, ऑटोफैगोसोम के निर्माण के लिए झिल्लियों की आपूर्ति करता है, और ऑटोफैजिक ux को संशोधित करता है [165]। माइटोकॉन्ड्रिया भी यूपीआर (एमटी) से पीड़ित हैं, और सक्रिय मार्ग के आधार पर, इसे कीड़े और चूहों [166] में विस्तारित जीवनकाल के साथ जोड़ा गया है, लेकिन इसके अधिक सक्रिय होने से न्यूरोडीजेनेरेशन [167] होता है।

माइटोकॉन्ड्रियल डिसफंक्शन माइटोकॉन्ड्रिया की अपर्याप्त संख्या, उन्हें आवश्यक सब्सट्रेट प्रदान करने में असमर्थता, या उनके इलेक्ट्रॉन परिवहन और एटीपी-संश्लेषण मशीनरी में शिथिलता से उत्पन्न होता है। आरओएस के उच्च स्तर और संबंधित प्रतिक्रियाशील प्रजातियों (आरएनएस) को डिसम्यूटेज एंजाइम और एंटीऑक्सिडेंट [168] द्वारा बेअसर किया जा सकता है। एएलएस और पीडी [169] जैसे न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों में इन एंजाइमों और कुछ माइटोकॉन्ड्रियल श्वसन परिसरों में परिवर्तन देखा गया है। माइटोकॉन्ड्रियल संख्या और कार्य में गड़बड़ी सेलुलर होमियोस्टेसिस को गंभीर रूप से प्रभावित करती है और रोग की शुरुआत को ट्रिगर करती है। इसलिए, कोशिकाएं माइटोकॉन्ड्रियल जैवजनन और निकासी की विरोधी प्रक्रियाओं के बीच एक गतिशील संतुलन बनाए रखने का प्रयास करती हैं। निष्क्रिय माइटोकॉन्ड्रिया का संचय और/या इसके जैवजनन के नुकसान से कोशिका मृत्यु होती है। न्यूरोडीजेनेरेशन को रोकने के लिए हाल के चिकित्सीय रास्ते का उद्देश्य एनएडी प्लस [170], एपिजेनेटिक निशान [171] को संशोधित करके या मस्तिष्क में सेरोटोनिन अक्ष को संशोधित करके माइटोकॉन्ड्रियल बायोजेनेसिस को बढ़ावा देना है [172]। माइटोफैगी द्वारा निष्क्रिय माइटोकॉन्ड्रियल निकासी भी उपज देती हैतंत्रिका संरक्षण. पीटीईएन-प्रेरित किनेज 1 (PINK1) की अधिकता, जो माइटोफैगी प्रक्रिया शुरू करने के लिए आवश्यक है, HD [45] के y मॉडल में न्यूरोनल उत्तरजीविता को बढ़ाता है। इसके अलावा, एनएडी प्लस पूरक एक पिंक 1-पीडी के उत्परिवर्ती मॉडल [173] में न्यूरोटॉक्सिसिटी को कम करता है।

माइटोकॉन्ड्रिया फ़ंक्शन आरओएस और सेलुलर एंटीऑक्सिडेंट प्रतिक्रिया के साथ जुड़ा हुआ है। इस तरह, प्रतिलेखन कारक परमाणु कारक एरिथ्रोइड-व्युत्पन्न कारक 2- संबंधित कारक 2 (Nrf2) ऑक्सीडेटिव तनाव और न्यूरोइन-अमेशन का मुकाबला करने के लिए साइटोप्रोटेक्टिव और डिटॉक्सिफाइंग जीन की अभिव्यक्ति को नियंत्रित करता है, जिसका उद्देश्य तंत्रिका क्षति को कम करना है। इसलिए, यह न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों [174-176] में रोग की प्रगति में देरी के लिए एक प्रभावी हेरफेर हो सकता है। ROS की उत्तेजना के तहत, Nrf2 केल्च-जैसे ECH- संबद्ध प्रोटीन (Keap1) से अलग हो जाता है, जिससे एंटीऑक्सीडेंट एंजाइमों की अभिव्यक्ति को विनियमित किया जाता है [177]। यह वर्णित किया गया है कि Keap1 p62 [178] के सर्वव्यापीकरण की मध्यस्थता करता है। जब Keap1 को डाउनग्रेड किया जाता है, तो p62 कोशिकाओं में जमा हो जाता है और साइटोटोक्सिसिटी का कारण बनता है, जबकि इसका ओवरएक्प्रेशन ऑटोफैगी मार्ग के माध्यम से p62 के क्षरण को बढ़ावा देता है। दूसरी ओर, p62 ऑटोफैगी मार्ग के माध्यम से Nrf2 को सक्रिय करके p62-Keap1-Nrf2-एंटीऑक्सीडेंट रेस्पॉन्सिव एलिमेंट (ARE) पाथवे बनाता है और ROS के कारण होने वाले ऑक्सीडेटिव क्षति का प्रतिकार करता है। [179]. इसके अलावा, Nrf2 माइटोकॉन्ड्रियल बायोजेनेसिस के नियमन में शामिल नियामक लूप बनाता है। Nrf2 पेरोक्सीसोम प्रोलिफ़रेटर-सक्रिय रिसेप्टर-गामा कोएक्टीवेटर 1-अल्फ़ा (PGC-1) और न्यूक्लियर रेस्पिरेटरी फ़ैक्टर (NRF1) की अभिव्यक्ति को बढ़ाता है, जो सीधे mtDNA ट्रांसक्रिप्शन के नियमन में शामिल होते हैं। अंत में, Nrf2 PINK1 की अभिव्यक्ति को नियंत्रित करता है, जो माइटोफैगी इंडक्शन [180] में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, यह सुझाव देता है कि सेल की एंटीऑक्सीडेंट क्षमता माइटोकॉन्ड्रिया अवस्था पर भी प्रभाव डालती है।

न्यूरोडीजेनेरेटिव रोग एनआरएफ 2 मार्ग के अवरोध और ऑटोफैगी की शिथिलता दोनों से संबंधित हैं, जो आरओएस, सेनेसेंट ऑर्गेनेल और मिसफॉल्ड प्रोटीन [181,182] के संचय की ओर जाता है। न्यूरोडीजेनेरेटिव रोग बहुत सारे प्रोटीन समुच्चय और ROS से संबंधित हैं, जो p62-Keap1-Nrf2 सकारात्मक प्रतिक्रिया अक्ष को प्रेरित करते हैं, जो न्यूरॉन्स में एक सुरक्षात्मक तंत्र है [183,184]। AD पशु मॉडल और AD रोगी मस्तिष्क [185] में Nrf2 की अभिव्यक्ति कम है। Nrf2 ARE के लिए बाध्यकारी रोग की प्रगति के दौरान जल्द ही होता है, जो ROS उत्पादन में वृद्धि के साथ मेल खाता है [186]। एनआरएफएक्सएनएक्स न्यूरोप्रोटेक्ट्स आरओएस पीढ़ी और ए-मध्यस्थता वाले आरओएस-प्रेरित विषाक्तता को कम करके [187,188]। एचडी में, माइटोकॉन्ड्रियल कॉम्प्लेक्स II की शिथिलता होती है, जिससे आरओएस [48] में वृद्धि होती है। HD के प्रारंभिक चरण में, Nrf2 एगोनिस्ट के साथ उपचार से Keap1-Nrf2-ARE एस्ट्रोसाइट्स और माइक्रोग्लिया [189] के माध्यम से महत्वपूर्ण साइटोप्रोटेक्टिव जीन की वृद्धि होती है। एस्ट्रोसाइट्स में छोटे अणुओं द्वारा Keap1-Nrf2-ARE मार्ग का सक्रियण गैर-एक्सिटोटॉक्सिक ग्लूटामेट विषाक्तता [46-48] के लिए न्यूरॉन्स के प्रतिरोध को तेज करता है। पीडी में परिवर्तित माइटोकॉन्ड्रिया फ़ंक्शन, बायोजेनेसिस और माइटोफैगी महत्वपूर्ण रोग संबंधी विशेषताएं हैं, और Nrf2 एक महत्वपूर्ण प्रतिलेखन कारक है जो माइटोकॉन्ड्रियल गुणवत्ता नियंत्रण और होमियोस्टेसिस [190] को नियंत्रित करता है। PD में, Nrf2-ARE सिस्टम [191,192] की सक्रियता होती है और इसकी औषधीय सक्रियता पीडी की प्रगति को रोकती है [49,50]। Nrf2 सक्रियण सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेज 1 (SOD1) उत्परिवर्ती प्रोटीन के कारण ROS और कोशिका मृत्यु के खिलाफ एक सुरक्षात्मक भूमिका निभाता है। इसके अलावा, एस्ट्रोसाइट एनआरएफएक्सएनएक्स ओवरएक्प्रेशन एससी एमएन के अस्तित्व को बढ़ाता है और एसओडी 1 ट्रांसजेनिक चूहों [51,52] में जीवनकाल बढ़ाता है। इसके अलावा, ऑटोफैगी के संदर्भ में p62 और Keap1-Nrf2 मार्ग के बीच क्रॉसस्टॉक आरओएस को हटाने, ऑक्सीडेटिव क्षति को रोकने और सेरेब्रल इस्किमिया-रीपरफ्यूजन चोट [53] के दौरान ईआर तनाव को संशोधित करने में महत्वपूर्ण भूमिका निभा सकता है।

अंत में, माइटोकॉन्ड्रिया न्यूरोनल उत्तरजीविता को संचालित करता है, क्योंकि वे आंतरिक और बाहरी मृत्यु सर्जक को महसूस करते हैं, सिग्नलिंग कैस्केड को ट्रिगर करते हैं जो माइटोकॉन्ड्रिया में परिवर्तित होते हैं और फिर एक या एक से अधिक सेल डेथ पाथवे में फिर से अलग हो जाते हैं जो एक अलग प्रकार की कोशिका मृत्यु (जैसे आंतरिक एपोप्टोसिस) की ओर ले जाते हैं। ) [193]।

4. प्रणालीगत मॉडुलन को लक्षित करना

4.1. कैलोरी प्रतिबंध

कैलोरी प्रतिबंध (सीआर) विभिन्न जीवों में जीवनकाल बढ़ाता है और कई अंगों पर सुरक्षात्मक प्रभाव डालता है। सीआर पूरे जीव को प्रभावित करता है: प्रणालीगत परिवेश से लेकर विभिन्न उप-कोशिकीय आबादी तक। 2010 में, क्रॉमर और सहयोगियों ने सुझाव दिया कि सीआर लाभ एसआईआरटी पर निर्भर हैं1-आश्रित ऑटोफैगी [194]। दूसरी ओर, यह बताया गया है कि सीआर पीडी रोग में एक घ्रेलिन-एएमपीके अक्ष द्वारा न्यूरोप्रोटेक्टिव है, जिसमें एएमपीके ऑटोफैगी का एक प्रमुख संकेतक है [195]। लंबे समय तक सीआर बनाए रखने की स्पष्ट असंभवता को देखते हुए, उपन्यास सीआर "मिमेटिक्स" (सीआरएम) की खोज के लिए चिकित्सीय रुचि उठाई गई, जो जीव में सीआर के शारीरिक प्रभावों की नकल करते हैं [196]। सीआर और सीआर-मिमेटिक्स दोनों ने ऑटोफैगी इंडक्शन [197] के माध्यम से संज्ञानात्मक कार्य में सुधार करके एडी चूहे के मॉडल में प्रभावशीलता की जांच की है, इसलिए वे न्यूरोडीजेनेरेशन के इलाज के लिए उपन्यास चिकित्सीय रास्ते हैं।

4.2. व्यायाम

न्यूरोपैथिक दर्द जैसे पैथोफिजियोलॉजिकल स्थितियों को कम करने या स्ट्रोक मॉडल [198] में कार्यात्मक परिणामों में सुधार करने की क्षमता के कारण शारीरिक व्यायाम रुचि प्राप्त कर रहा है। यह भड़काऊ प्रतिक्रिया के निषेध और एंटीऑक्सीडेंट संतुलन को बढ़ाकर पीडी की प्रगति को धीमा कर देता है [199]। यह वर्णित है कि व्यायाम न्यूरोट्रॉफिक कारकों [200,201] के अंतर्जात स्तर को बढ़ाकर कार्य करता है। इसके अलावा, यह मांसपेशियों के हार्मोन स्राव को नियंत्रित करता है, मस्तिष्क में सुरक्षात्मक प्रभावों को बढ़ावा देता है, न्यूरोजेनेसिस, और मस्तिष्क की उम्र बढ़ने में सुधार करता है [202]। वास्तव में, यह हाल ही में वर्णित किया गया है कि एक ही हार्मोन, आईरिसिन, की हड्डी के निर्माण में भूमिका होती है [203], यह दर्शाता है कि व्यायाम पूरे शरीर को प्रभावित करता है।

5. प्रभावी न्यूरोप्रोटेक्टेंट ढूँढना: वहाँ क्या है और हम कहाँ जाते हैं

न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों के सामान्य लक्षण यूपीआर का एक गैर-सही सक्रियण, ऑटोफैजिक प्रक्रियाओं का संचय, एक माइटोकॉन्ड्रियल वेल-फंक्शन विफलता, अन्य हैं। कुल मिलाकर, वे न्यूरॉन्स को अभिभूत कर देंगे, जिससे उनकी मृत्यु हो जाएगी। एक प्रभावी न्यूरोप्रोटेक्टेंट को उम्र बढ़ने / अपमान के प्रति पूर्ण लचीलापन के साथ कोशिका को बढ़ाकर इन तंत्रों को ठीक करना चाहिए। हमें सेल के भीतर आणविक नेटवर्क को पूरी तरह से संशोधित करने की आवश्यकता है, इसे कार्यों की पूर्ण बहाली की ओर धकेलना। एएलएस [204] के लिए रिलुज़ोल जैसी स्वीकृत दवाएं, या क्लिनिकल परीक्षण चल रहे हैं, जैसे एएलएस [204] के लिए रैपामाइसिन, एडी के लिए स्पर्मिडीन, और डीएच [205,206], केवल इन अपक्षयी प्रक्रियाओं में से एक को लक्षित करते हैं, और न्यूरॉन अभिभूत होता है अन्य लोग। यद्यपि वे लाभकारी प्रभाव उत्पन्न कर सकते हैं, हम केवल एक लक्ष्य के बजाय विभिन्न आणविक मार्गों- बहु-लक्ष्य चिकित्सा- का समर्थन करने के लिए एक आनुवंशिक या औषधीय दृष्टिकोण खोजने का प्रस्ताव करते हैं।

एसआईआरटी1, बीआईपी, और/या एटीजी5 जैसे कुछ प्रोटीनों की विशिष्ट अतिअभिव्यक्ति तंत्रिका चोट के बाद न्यूरोनल अस्तित्व की सुविधा प्रदान करती है औरतंत्रिका संरक्षणन्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों में। वे मुख्य रूप से यूपीआर या ऑटोफैगी नेटवर्क को ट्यून करते हैं। ट्रांसजेनिक चूहों या वायरल वैक्टर के उपयोग से SIRT1 सक्रियण ने विभिन्न न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों जैसे ALS, AD, और HD [207-209] और तंत्रिका चोट [55] के बाद भी सुरक्षा का प्रदर्शन किया। SIRT1 डीएसेटाइलेज़ गतिविधि सुरक्षा के विभिन्न अंतर्जात तंत्रों का समर्थन करती है: ऑटोफैगी, PERK को क्षीण करके UPR को नियंत्रित करता है, और ATF6 दरार को बढ़ाता है [23,210], इसमें एपोप्टोटिक प्रभाव होता है, और एनोइकिस को बाधित करने के लिए AKT गतिविधि को नियंत्रित करता है [211,212]। इसलिए, इसका सटीक मॉड्यूलेशन सेलुलर लचीलापन बढ़ा सकता है। हमारे हाल के अध्ययन से, हम यह निष्कर्ष निकालते हैं कि सेलुलर लचीलापन [54,55] प्राप्त करने के लिए आणविक नेटवर्क के लिए SIRT1 डीएसेटाइलेज़ गतिविधि को संशोधित करना एक आवश्यक नोड है। अंत में, बीआईपी ओवरएक्प्रेशन समुच्चय से बचाता है और ऑटोफैगी और माइटोफैगी [99] को प्रेरित करता है, इसलिए इसका मॉड्यूलेशन भी विभिन्न न्यूरोप्रोटेक्टिव पथों को क्लस्टर करने के लिए एक प्रभावी दृष्टिकोण है।

6. समापन टिप्पणी

के अंतर्जात तंत्र को बढ़ावा देनातंत्रिका संरक्षणन्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों के इलाज के लिए रोमांचक चिकित्सीय रास्ते खोलता है या न्यूरो-ट्रॉमा के बाद ऊतक होमियोस्टेसिस को बनाए रखता है। यद्यपि यह आजकल एक अस्पष्टीकृत क्षेत्र है, यह एक ठोस पैथोफिजियोलॉजिकल हॉलमार्क को अवरुद्ध करने की तुलना में अधिक प्रभावी जैव चिकित्सा परिणामों को बढ़ावा दे सकता है। इसलिए, आनुवंशिक, औषधीय, या प्रणालीगत-मॉड्यूलेशन उपचारों द्वारा उनका समर्थन करने से पैथोलॉजी की प्रगति में देरी हो सकती है और कार्यात्मक वसूली में वृद्धि हो सकती है। इष्टतम चिकित्सीय रणनीति में संपूर्ण नेटवर्क को फिर से मॉडल करने और सुरक्षा प्राप्त करने के लिए सुरक्षा के अंतर्जात तंत्र का एक ठोस मॉड्यूलेशन शामिल होना चाहिए।

लेखक योगदान: डीआर-जी। और एसएम-एम-ए। पांडुलिपि लिखी और सीसी ने एक आलोचनात्मक समीक्षा की। सभी लेखकों ने पांडुलिपि के प्रकाशित संस्करण को पढ़ लिया है और सहमत हैं।

फंडिंग: इस शोध को कोई बाहरी फंडिंग नहीं मिली।

डेटा उपलब्धता विवरण: इस अध्ययन में कोई नया डेटा नहीं बनाया गया या उसका विश्लेषण नहीं किया गया। डेटा साझाकरण इस लेख पर लागू नहीं है।

हितों के टकराव: लेखक हितों के टकराव की घोषणा नहीं करते हैं।