चावल प्रोटीन हाइड्रोलिसेट्स के एंटीऑक्सिडेंट, सफेदी और एंटी-एजिंग गुणों का मूल्यांकन

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हुई-जू चेन 1,2, फैन-जेन दाई 2, चेंग-यू चेन 3, सियाओ-लिंग फैन 2, जी-होंग झेंग 4, यू-चुन हुआंग 2, ची-फाई चाऊ 1, युंग-शेंग लिन 3, 4,5,* और चिन-शुह चेन 1,*

सार:पौध-व्युत्पन्न प्रोटीन हाइड्रोलिसेट्स के पोषण में संभावित अनुप्रयोग हैं। राइस प्रोटीनहाइड्रोलिसेट्स (RPHs), प्रोटीन का एक उत्कृष्ट स्रोत, ने कॉस्मीक्यूटिकल्स के विकास के लिए ध्यान आकर्षित किया है। हालांकि, कुछ अध्ययनों ने आरपीएच विश्लेषण के संभावित अनुप्रयोग की सूचना दी है, और इस अध्ययन ने उनकी जांच की हैएंटीऑक्सिडेंटगतिविधियों और त्वचा एंजाइमों की निरोधात्मक गतिविधियों। परिणामों ने संकेत दिया कि कुल फेनोलिक और फ्लेवोनोइड सांद्रता 2 थे। 0 6 ± 0.13 मिलीग्राम गैलिक एसिड समकक्ष/जी आरपीएच और 25.96 ± 0.52 माइक्रोग्राम क्वार्सेटिन समकक्ष/जी आरपीएच, क्रमश। RPHs ने 1,1-डिपेनिल-2-picrylhydrazyl [आधा-अधिकतम निरोधात्मक एकाग्रता (IC50)=42.58 ± 2.1 mg/g RPHs] और 2 से मुक्त कणों की सफाई के लिए खुराक पर निर्भर गतिविधि का प्रदर्शन किया। ,20-एज़िनो-बीआईएस (3-एथिलबेनज़ोथियाज़ोलिन-6-सल्फोनिक एसिड) (आईसी50=2.11 ± 0.88 मिलीग्राम/जी आरपीएच), खुराक पर निर्भर कमी क्षमता (6.95 ± 1.40) मिलीग्राम विटामिन सी समकक्ष/जी आरपीएच) और ऑक्सीजन कट्टरपंथी अवशोषण क्षमता (473 माइक्रोमोल ट्रोलॉक्स समकक्ष/जी आरपीएच)। आरपीएच समाधान की सांद्रता हयालूरोनिडेस के 50 प्रतिशत निषेध को प्राप्त करने के लिए आवश्यक है औरटायरोसिनेसगतिविधियों को क्रमशः 8.91 और 107.6 मिलीग्राम/एमएल निर्धारित किया गया था। इस अध्ययन से पता चला है कि आरपीएच के पास हैएंटीऑक्सिडेंट, भविष्य के कॉस्मेटिक अनुप्रयोगों के लिए एंटीहायलूरोनिडेस और एंटीटायरोसिनेस गतिविधियाँ।

कीवर्ड:चावल प्रोटीन हाइड्रोलाइज़ेट;एंटीऑक्सिडेंट; हयालूरोनिडेस;टायरोसिनेस; अंगराग

सिस्टैंचेसफेदप्रभावत्वचा परविरोधी ऑक्सीकरण

1 परिचय

पराबैंगनी विकिरण जोखिम फोटोएजिंग (या बाहरी उम्र बढ़ने) के लिए जिम्मेदार है; कोशिका चयापचय में उत्पन्न विपरीत, प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियां और जैविक कार्यों का बिगड़ना आंतरिक उम्र बढ़ने के लिए जिम्मेदार हैं [1,2]। प्रसंस्कृत खाद्य पदार्थों में अक्सर प्राकृतिक होते हैंएंटीऑक्सीडेंटजैसे कैटेचिन, एस्कॉर्बिक एसिड, टोकोफेरोल, रोस्मारिनिक एसिड, और विभिन्न पौधों से फेनोलिक अर्क। प्राकृतिक एंटीऑक्सिडेंट में किए गए शोध अब गैर-पारंपरिक उत्पत्ति पर विचार करते हैं। स्वाभाविक रूप से सोर्स किया गयाएंटीऑक्सीडेंटरासायनिक रूप से उत्पादित की तुलना में अधिक वांछनीय हैंएंटीऑक्सीडेंटचूंकि कुछ सिंथेटिक एंटीऑक्सिडेंट को कार्सिनोजेनिक होने की सूचना दी गई है [3]। चावल (ओरिज़ा सैटिवा) दुनिया भर के लोगों, विशेष रूप से एशिया में रहने वाले लोगों के लिए एक प्रमुख आहार प्रधान है। विश्व का वार्षिक चावल उत्पादन लगभग 741 मिलियन टन [4] है। एशियाई देशों में, चावल 2 अरब से अधिक लोगों की ऊर्जा खपत का 75 प्रतिशत स्रोत है [5]। व्यापक चावल उत्पादन के परिणामस्वरूप उप-उत्पाद उत्पादन की एक समान मात्रा होती है। चावल उत्पादन प्रक्रिया के अवशिष्ट उत्पाद में अनाज का अधिकांश प्रोटीन (~ 60-85 प्रतिशत) होता है, लेकिन इसे फेंक दिया जाता है या जानवरों को खिलाने के लिए उपयोग किया जाता है [6–8]। विभिन्न प्रोटीन हाइड्रोलाइज़ेट्स से प्राप्त पेप्टाइड्स संभावित रूप से कार्य करते हैंएंटीऑक्सीडेंट[9]। इसलिए प्राकृतिक और गैर-विषैले एंटीऑक्सिडेंट संभावित रूप से खाद्य प्रोटीन हाइड्रोलिसेट्स से निकाले जा सकते हैं। कई विद्वानों ने लिपिड-समृद्ध मॉडल को नियोजित किया है और प्रोटीन हाइड्रोलिसेट्स के साथ-साथ दूध, ज़ीन और सोया प्रोटीन पेप्टाइड्स को महत्वपूर्ण एंटीऑक्सीडेंट विशेषताओं की सूचना दी है, जिसमें मुक्त कणों की सफाई, भोजन और इन-विट्रो लिपिड पेरोक्सीडेशन, और संक्रमण धातुओं के केलेशन शामिल हैं। 12].

Hyaluronic एसिड (HA) त्वचा को फिर से जीवंत करने में मदद करता है क्योंकि यह चिपचिपाहट बढ़ाता है, नमी रखता है, और बाह्य तरल पदार्थ को कम पारगम्य बनाता है। इसकी उत्कृष्ट जल धारण क्षमता के कारण, HA त्वचा की यौवन, नमी और चिकनाई को बढ़ाता है और झुर्रियों की डिग्री को कम करता है [13,14]। दुर्भाग्य से, उम्र के साथ त्वचा में HAin का स्तर स्वाभाविक रूप से कम हो जाता है। Hyaluronidase एक एंजाइम है जो HA को नष्ट कर देता है, जिससे त्वचा की ताकत, लचीलापन और नमी का नुकसान होता है, जो बदले में त्वचा की उम्र बढ़ने की ओर जाता है। इसलिए, झुर्रियों का इलाज hyaluronidase को रोककर और त्वचा की HA सामग्री को बनाए रखते हुए किया जा सकता है [15,16]। मेलेनिन-उत्पादक एंजाइमटायरोसिनेसउस प्रक्रिया के दर-सीमित कदम में महत्वपूर्ण योगदान देता है जिसके माध्यम से मेलेनिन का उत्पादन होता है। इसलिए, रंजकता विकारों का आमतौर पर इलाज किया जाता है और त्वचा की चमक को बाधित या डाउनरेगुलेट करके प्राप्त किया जाता हैटायरोसिनेसगतिविधि [17,18]।

कई अध्ययनों में, अनाज प्रोटीन हाइड्रोलाइज़ेट्स और उनसे प्राप्त किए जा सकने वाले पेप्टाइड्स में एंटीऑक्सिडेंट, एंटीहाइपरटेन्सिव और एंटीट्यूमोरएक्टिविटी [19,20] पाए गए हैं। खाद्य-उत्पन्न पेप्टाइड्स और प्रोटीन के मानव स्वास्थ्य में सकारात्मक योगदान को धीरे-धीरे पहचाना जा रहा है [21]। उपभोक्ता तेजी से मांग कर रहे हैं कि कॉस्मेटिक और स्वास्थ्य देखभाल उद्योग प्राकृतिक बायोएक्टिव यौगिकों का उपयोग करें। चावल प्रोटीनहाइड्रोलिसेट्स (आरपीएच) ने प्रोटीन के उत्कृष्ट स्रोत के रूप में ध्यान आकर्षित किया है। हालांकि, कुछ अध्ययनों ने आरपीएच के लक्षण वर्णन और कार्यात्मक विश्लेषण की सूचना दी है। इसलिए, इस अध्ययन ने एंटीऑक्सिडेंट गतिविधि और हाइलूरोनिडेस और का मूल्यांकन कियाटायरोसिनेस-आरपीएच की निरोधात्मक गतिविधियां।

2. परिणाम और चर्चा

2.1. कुल फेनोलिक एकाग्रता (टीपीसी) और कुल फ्लेवोनोइड सामग्री (टीएफसी)

टीपीसी परख में मानक कई सांद्रता का गैलिक एसिड था। उच्च अवशोषण ने उच्च टीपीसी का संकेत दिया। आरपीएच नमूनों का टीपीसी गैलिक एसिड अंशांकन वक्र में आरपीएच नमूनों के ऑप्टिकल अवशोषण मूल्यों को इनपुट करके प्राप्त किया गया था। फेनोलिक एकाग्रता (चित्रा 1ए) के खिलाफ आरपीएच एकाग्रता की साजिश रचकर, 2. का औसत टीपीसी 2. 0 6 ± 0.13 मिलीग्राम जीएई / जी आरपीएच प्राप्त किया गया था। 25.96 ± 0.52 माइक्रोग्राम QE/gRPH का एक TFC एक समान प्रक्रिया का पालन करके प्राप्त किया गया था (चित्र 1b)। चित्र 1c आगे RPHs नमूनों के TPC और TFC से संबंधित है। इससे पता चलता है कि TPC और TFC के बीच संबंध को y=0.0121x जमा 0.0659 के रूप में व्यक्त किया जा सकता है, जहां x और y क्रमशः TPC और TFC हैं।

आरपीएच के टीपीसी में फेनोलिक अमीनो एसिड और पेप्टाइड्स के फेनोलिक यौगिकों की सांद्रता शामिल थी। प्रोटीन-फेनोलिक यौगिक बातचीत में आम तौर पर सहसंयोजक और गैर-सहसंयोजक बंधन शामिल होते हैं। एंजाइमैटिक हाइड्रोलिसिस के दौरान फेनोलिक यौगिक निकलते हैं। विशिष्ट एंजाइम प्रोटीन-पॉलीफेनोल परिसरों को नष्ट करने में सबसे अधिक सक्षम हो सकते हैं; इसके परिणामस्वरूप फेनोलिक यौगिकों और पेप्टाइड्स की अधिक संख्या में फेनोलिक समूह, जैसे टाइरोसिन, जारी किए जा रहे हैं [22]। अनाज की कुल पॉलीफेनोल सामग्री और उनकी जैविक गतिविधि के बीच एक मजबूत संबंध बताया गया है। पॉलीफेनोल्स को मजबूत एंटीऑक्सीडेंट गतिविधियों के लिए जाना जाता है [23]। हालांकि कम मात्रा में पाया जाता है, चावल में terpenes [24] orsesquiterpenes [25] भी एंटीऑक्सीडेंट गतिविधियों में योगदान कर सकते हैं।

2.2. एंटीऑक्सीडेंट की गतिविधि

2.2.1. डीपीपीएच फ्री रेडिकल्स की रेडिकल स्कैवेंजिंग गतिविधि

चित्र 2 आरपीएच समाधान में डीपीपीएच मुक्त कट्टरपंथी मैला ढोने की गतिविधि को दर्शाता है। उच्च गतिविधि में परिणाम के लिए समाधान की उच्च सांद्रता की खोज की गई थी। अर्ध-अधिकतम निरोधात्मक सांद्रता (IC50), जो कि अर्क सांद्रता है जिसके लिए सभी DPPH मुक्त कणों का आधा भाग साफ किया जा सकता है, चावल पेप्टाइड्स का 42.58 ± 2.1 mg/mL था।

2.2.2. एबीटीएस फ्री रेडिकल्स की सफाई गतिविधि

आरपीएच की एबीटीएस मुक्त कट्टरपंथी मैला ढोने की गतिविधि, चित्र 3 में सचित्र, अधिक थी जब एक अधिक अर्क एकाग्रता कार्यरत थी। IC50 चावल पेप्टाइड्स का 2.11 ± 0.88 mg/mL था। इस परिणाम ने संकेत दिया कि आरपीएच में मजबूत एबीटीएस मुक्त कट्टरपंथी मैला ढोने की गतिविधि थी। सल्फर युक्त अमीनो एसिड, जिसमें Met और Cys शामिल हैं, और हाइड्रोफोबिक अमीनो एसिड, जिनमें Ala, Val, Ile, Leu, Met, Cys, Tyr, Phe, Try, और Pro शामिल हैं, ABTS फ्री रेडिकल के संबंध में महत्वपूर्ण कारक हो सकते हैं। सफाई गतिविधि।

इस अध्ययन में, ABTS मुक्त कट्टरपंथी मैला ढोने की गतिविधि का IC50 मूल्य DPPH मुक्त कट्टरपंथी मैला ढोने की गतिविधि से कम था, जो जटरोफा करकस L. बीज खोल और गिरी [28] और बेर के फल के बीज और छिलके के गूदे [29] के परिणामों से सहमत था। यह खोज 43.98-66.25 µmoL ट्रॉलॉक्स समतुल्य/g नमूने और 403.28-430.12 µmoL ट्रोलॉक्स समकक्ष/g नमूना DPPH मुक्त कट्टरपंथी मैला ढोने की गतिविधि और ABTS मुक्त मूलक मैला ढोने की गतिविधि के लिए क्रमशः [27] के साथ राइस ब्रान प्रोटीन हाइड्रोलाइज़ेट्स की रिपोर्ट से मेल खाती है।

एक संभावित कारण DPPH मुक्त मूलक (तेल में घुलनशील) और ABTS मुक्त मूलक (तेल/पानी में घुलनशील) [30,31] के बीच घुलनशीलता में अंतर है। राइस ब्रान प्रोटीन हाइड्रोलाइज़ेट्स की एंटीऑक्सीडेंट क्षमता इसके आणविक भार प्रोफ़ाइल, अमीनो एसिड संरचना और हाइड्रोफोबिसिटी [32] से प्रभावित थी।

2.2.3. कमी क्षमता

आरपीएच के लिए कमी क्षमता परख निष्कर्ष चित्रा 4 में प्रस्तुत किए गए हैं। आरपीएच एकाग्रता के साथ कमी क्षमता में वृद्धि हुई है। कमी क्षमता 6.95 ± 1.40 मिलीग्राम वीसीई/जी आरपीएच थी, यह दर्शाता है कि आरपीएच एक प्रभावी एंटीऑक्सीडेंट है।

2.2.4। ऑक्सीजन रेडिकल अवशोषण क्षमता (ओआरएसी)

ओआरएसी परख में एंटीऑक्सिडेंट गतिविधि निर्धारण के अन्य तरीकों पर फायदे हैं, जिसमें प्रतिक्रिया के समान तंत्र के साथ पेरोक्सी रेडिकल होने वाले अभिकारक और शारीरिक ऑक्सीडेंट के लिए रेडॉक्स क्षमता शामिल हैं; कुल चार्ज और प्रोटोनेशनस्टेट जिसके साथएंटीऑक्सीडेंटप्रतिक्रिया मानव शरीर के समान होती है [33]। मानव शरीर में एंटीऑक्सिडेंट की प्रभावकारिता के लिए ओआरएसी पद्धति की जैविक प्रासंगिकता भी है। चित्र 5 में आरपीएच के ओआरएसी विश्लेषण और विभिन्न सांद्रता में ट्रोलॉक्स मानक के परिणामों को दर्शाया गया है। ORAC, शुद्ध AUC को Trolox एकाग्रता से संबंधित अंशांकन वक्र के प्रतिगमन समीकरण से प्राप्त किया गया था। परिणामों ने संकेत दिया कि आरपीएच के पास 473 माइक्रोमोल टीई/जी आरपीएच का ओआरएसी था।

एंटीऑक्सिडेंट पेप्टाइड्स या अमीनो एसिड एंजाइमेटिक प्रोटीन हाइड्रोलिसिस द्वारा प्राप्त किया जा सकता है, जिसके परिणामस्वरूप ऑक्सीडेंट के खिलाफ अत्यधिक सक्रिय होता है [34]। धातु आयन केलेशन, लिपिड पेरोक्सीडेशन निषेध, और जैविक रूप से सक्रिय पेप्टाइड्स की मुक्त कट्टरपंथी सफाई उनकी एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि के लिए जिम्मेदार हैं। मुक्त कणों को बुझाया जा सकता है और एंटीऑक्सिडेंट पेप्टाइड्स द्वारा अपग्रेड किए गए ऑक्सीडेटिव-तनाव-घटाने वाले प्रोटीन और एंजाइम की अभिव्यक्ति। प्रोटीन हाइड्रोलिसेट्स और पेप्टाइड्स की एंटीऑक्सीडेंट प्रभावकारिता कथित तौर पर अमीनो एसिड के अनुक्रम और पेप्टाइड के आकार पर निर्भर होती है, जो हाइड्रोलिसिस की स्थिति, प्रोटीन स्रोत और प्रोटीज के प्रकार [35] से प्रभावित होते हैं। अदेबियाई एट अल के अनुसार। [36], सबसे बड़े सुपाच्य चावल की भूसी के प्रोटीन को सबटिलिसिन द्वारा छोटे टुकड़ों में तोड़ा जा सकता है, जिसके परिणामस्वरूप अधिक प्रोटीन उपज और सामग्री प्राप्त होती है। एक हाइड्रोलाइज़ेट की टीपीसी और एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि शायद एंजाइमों की विशिष्टता से प्रभावित होती है। इसलिए, पेप्टाइड की एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि प्रोटीन स्रोत की विशेषताओं, एंजाइम की विशिष्टता और हाइड्रोलिसिस के स्तर [37] से प्रभावित हो सकती है।

एंटीऑक्सीडेंट पेप्टाइड्स प्राप्त करने के लिए पौधों से प्राप्त प्रोटीनों को हाइड्रोलाइज करने के लिए प्रोटीज (जैसे एल्केलेस, बैसिलस प्रजाति से एसुबटिलिसिन ए का एक व्यावसायिक नाम) का उपयोग करने वाली कई रिपोर्टें हैं। इस संबंध में, सोया प्रोटीन सबसे अधिक सूचित प्रोटीन [38] में से एक है। इसके अलावा, चावल की भूसी के प्रोटीन का एल्केलेस हाइड्रोलिसिस भी पाया जाता है। इष्टतम परिस्थितियों में, चिपचिपा चावल की भूसी के एल्केलेसेहाइड्रोलिसिस ने डीपीपीएच मुक्त कट्टरपंथी मैला ढोने में IC5 0 मूल्य 0 .87 ± 0.02 मिलीग्राम / एमएल के साथ प्रोटीन हाइड्रोलिसेट्स का उत्पादन किया। [39]। हमारे अध्ययन में, RPH का IC50 मान 42.58 ± 2.1 मिलीग्राम/एमएल था। हालांकि इस अध्ययन में DPPH मुक्त मूलक मैला ढोने में IC50 मान उतना प्रभावी नहीं था जितना कि चावल की भूसी के प्रोटीन से, ABTS मुक्त मूलक मैला ढोना (IC 50=2.11 mg/mL) एल्केलेसेहाइड्रोलिसिस द्वारा प्राप्त सोया प्रोटीन हाइड्रोलाइज़ेट्स की तुलना में अधिक प्रभावी था। आईसी50=2.93 मिलीग्राम/एमएल) [40]।

2.3. Hyaluronidase निरोधात्मक गतिविधि

एक प्रोटीयोलाइटिक एंजाइम, हाइलूरोनिडेस, डर्मिस में पाया जाता है और बाह्य मैट्रिक्स [41] में HA के क्षरण को उत्प्रेरित करता है। इस अध्ययन ने तुलनात्मक उद्देश्यों के लिए टैनिक एसिड को सकारात्मक नियंत्रण के रूप में नियोजित किया। चित्र 6 से पता चलता है कि टैनिक एसिड में हाइलूरोनिडेस गतिविधि अवरोध था; IC50 0.14 mg/mL था, जो निशिदा एट अल द्वारा प्राप्त मूल्य के समान है। (0.121 मिलीग्राम/एमएल; 71.1 मिमी) [42]। इसके विपरीत, आरपीएच समाधान के लिए 8.91 मिलीग्राम/एमएल के एक IC50 की गणना की गई थी। RPH समाधान का यह परिणाम हमारे पिछले IC50 मान, 7.61 mg/mL [43] के अनुरूप है। प्रोटीन, पॉलीसेकेराइड और पौधे से उत्पन्न होने वाले और सिंथेटिक यौगिक उन यौगिकों की श्रेणी में शामिल हैं जिनमें हयालूरोनिडेज़ इनहिबिटर मौजूद होते हैं। ये अवरोधक HA संश्लेषण-क्षरण संतुलन [44] को बनाए रखने में मदद करते हैं। त्वचा में कम HA सांद्रता के परिणामस्वरूप सूखापन और झुर्रियाँ होती हैं। इसलिए, hyaluronidase गतिविधि का निषेध एक मार्ग है जिसके माध्यम से त्वचा की आकृति विज्ञान में सुधार किया जा सकता है और इसकी उम्र बढ़ने में देरी हो सकती है।

2.4. टायरोसिनेस-निरोधात्मक गतिविधि

प्राकृतिक स्रोतों से प्रोटीन हाइड्रोलाइज़ेट को बाधित करने की क्षमता रखता हैटायरोसिनेस गतिविधि. इन-विट्रो टायरोसिनेस इनहिबिशन टेस्ट का उपयोग आमतौर पर यह मूल्यांकन करने के लिए किया जाता है कि त्वचा को गोरा करने वाले एजेंट सीधे टायरोसिनेस गतिविधि को कैसे प्रभावित करते हैं [45]। मेलेनिनसिंथेसिस दर-सीमित कदम में भाग लेकर, टायरोसिनेस एल-टायरोसिन हाइड्रॉक्सिलेशन को एल-डीओपीए में उत्प्रेरित करता है और फिर बाद के ऑक्सीकरण को ओ-डोपाक्विनोन में बदल देता है। जब मेलेनिन के जैवसंश्लेषण को रोकना वांछनीय हो, तो एल-टायरोसिनेस गतिविधि का निषेध महत्वपूर्ण हो सकता है। यहां,टायरोसिनेसआरपीएच एंटीटायरोसिनेस गतिविधि को मापने के लिए इस्तेमाल किया गया था। जैसा कि चित्र 7 में दर्शाया गया है, सांद्रता107.6 mg/mL ने tyrosinase गतिविधि का 50 प्रतिशत निषेध प्राप्त किया। एस्कॉर्बिक एसिड ने हाईटाइरोसिनेज-निरोधात्मक गतिविधि (आईसी 50=0 .098 मिलीग्राम / एमएल) का प्रदर्शन किया, जो कि 0.102 मिलीग्राम / एमएल एसईओ एट अल के समान था। सूचना दी [46]।

चावल की भूसी का प्रोटीन हाइड्रोलाइज़ेट्स काफी उच्च प्रदर्शित करता हैटायरोसिनेस-निरोधात्मक गतिविधि [47,48]। आरपीएच समाधान की टायरोसिनेस-निरोधात्मक गतिविधि पेप्टाइड्स के थियामिनो एसिड प्रोफाइल के परिणामस्वरूप हो सकती है। शूरिंक एट अल। वर्णन किया है कि प्रभावीटायरोसिनेस-इनहिबिटरीपेप्टाइड्स में आर्जिनिन अवशेष और फेनिलएलनिन [49] होते हैं। टायरोसिनेस-निरोधात्मक गतिविधि को हाइड्रोफोबिक अमीनो एसिड अवशेषों (जैसे, अलैनिन) द्वारा सुधारा जा सकता है, और मेलेनिन के उत्पादन को एलेनिन द्वारा बाधित किया जा सकता है [50]। इसके अलावा, झांग एट अल। यह भी बताया कि चावल प्रोटीन हाइड्रोलाइज़ेट यूवीबी-प्रेरित सेल मॉडल [51] में मेलेनिन सामग्री और टायरोसिनेस गतिविधि को कम कर सकता है।

शरीर सौष्ठव

2.5. एमिनो एसिड प्रोफाइल और आरपीएच के मेगावाट

वर्तमान अध्ययन में स्टार्च हटाने के बाद चावल की प्रोटीन सामग्री वजन के अनुसार 23.56 प्रतिशत थी, और प्रोटीज द्वारा हाइड्रोलाइज्ड नमूने के हाइड्रोलिसिस की डिग्री 9.36 प्रतिशत थी। तालिका 1 में आरपीएच में अमीनो एसिड की संरचना का विवरण दिया गया है। नमूने में, प्रत्येक 100 ग्राम में 5.18 ग्राम अमीनो एसिड होता है। अमीनो एसिड घटकों के संबंध में, आरपीएच एलानिन, ल्यूसीन, आर्जिनिन, ग्लूटामिक एसिड और एसपारटिक एसिड से भरपूर थे। नमूने के प्रत्येक 100 ग्राम में कुल मिलाकर 1.73 ग्राम हाइड्रोफोबिक अमीनो एसिड (एलेनिन, वेलिन, ल्यूसीन, आइसोल्यूसीन, प्रोलाइन, फेनिलएलनिन और सिस्टीन) होता है। यह परिणाम हमारी पिछली रिपोर्ट [43] से एमाइलेज घोल और स्टार्च को हटाने के लिए उसके उपचार के तापमान से बिल्कुल अलग था। हाइड्रोफोबिक अमीनो एसिड की सामग्री हमारी पिछली रिपोर्ट की तुलना में 1.90 गुना अधिक थी। इस अध्ययन में कम उपचार तापमान (60 डिग्री सेल्सियस) प्रोटीन के विकृतीकरण को बड़ी मात्रा में रोक सकता है, ताकि अमीनो एसिड की गतिविधि को बेहतर ढंग से संरक्षित किया जा सके। इसके अलावा, सफेद चावल की भूसी [52] में स्टार्च को सैचुरिफाई करने के लिए अन्य कवक एमाइलेज और ग्लूकोमाइलेज से भी इसी तरह का निष्कर्ष प्राप्त होता है।

शोध में हाइड्रोफोबिक अमीनो एसिड मिलते-जुलते पाए गए हैंएंटीऑक्सीडेंटविभिन्न प्रोटीन स्रोतों से प्रोटीन हाइड्रोलिसेट्स और पेप्टाइड्स में लिपिड-आधारित घुलनशीलता को बढ़ाकर, इस प्रकार मुक्त कणों के साथ बातचीत को बढ़ावा देता है [38,53]। चेन एट अल द्वारा कुछ अमीनो एसिड की सूचना दी गई थी। [54] आम तौर पर होने के लिएएंटीऑक्सीडेंट; उल्लिखित एसिड में ट्रिप्टोफैन, सिस्टीन, मेथियोनीन, टायरोसिन और हिस्टिडीन शामिल थे। वर्तमान अध्ययन में, सुगंधित अमीनो एसिड (फेनिलएलनिन, टाइरोसिन और ट्रिप्टोफैन) में 0.53 ग्राम/100 ग्राम आरपीएच शामिल थे। इसलिए, ये पेप्टाइड-उत्पत्ति अमीनो एसिड संभवतः आरपीएच की एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि के लिए जिम्मेदार थे।

इसके अलावा, प्रोटीन जो छोटे पेप्टाइड्स में हाइड्रोलाइज्ड होते हैं, उनका एक अलग MW वितरण होता है, और कुछ हाइड्रोफोबिक समूह जो पूर्ण प्राकृतिकप्रोटीन अणुओं के आंतरिक भाग में मुड़े होते हैं, आमतौर पर जलीय चरण के संपर्क में आते हैं। यह प्रोटीन अणुओं के संरचनात्मक रूप से पुनर्व्यवस्थित होने और इसलिए प्रोटीन के कार्यात्मक गुणों [55,56] से संबंधित है। ट्राइसीन-एसडीएस-पेज डेटा ने संकेत दिया कि आरपीएच की मेगावाट 5-35 केडीए (चित्र 8ए) की सीमा में थी।

चित्र 8ख आरपीएच में विभिन्न मेगावाट की सापेक्ष सामग्री को दर्शाता है। कुल मिलाकर, प्रोटीन का 45.24 प्रतिशत मुख्य बैंड (मेगावाट 2.4 केडीए) में था। इसी तरह के परिणाम चावल की भूसी के प्रोटीन हाइड्रोलाइज़ेट्स 'पेप्टाइड के संबंध में प्राप्त किए गए थे। थमनारथिप एट अल द्वारा प्राप्त उच्चतम एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि। [37] यह था कि मेगावाट के पेप्टाइड्स के लिए=6-50 kDa। इसके अलावा, प्रोटीन हाइड्रोलिसेट्स के कार्य और मेगावाट वितरण और अमीनो एसिड की संरचना के बीच संबंध मौजूद हैं [57]। यह वर्तमान अध्ययन में देखे गए आरपीएच की एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि की व्याख्या करता है।

2.6. सेल विषाक्तता परीक्षण

भविष्य के अनुप्रयोगों के लिए कम सेल विषाक्तता आवश्यक है। आरपीएच की साइटोटोक्सिसिटी और बायोकम्पैटिबिलिटी का मूल्यांकन करने के लिए, आरपीएच समाधान में कच्चे 264.7 कोशिकाओं की सेल व्यवहार्यता को एमटीटी विधि के माध्यम से मापा गया था। जैसा कि चित्र 9 में दिखाया गया है, 24 घंटे और 48 घंटे के लिए 25-2000 माइक्रोग्राम / एमएल आरपीएच के साथ इलाज करने पर सेल व्यवहार्यता 100 प्रतिशत से ऊपर थी। परिणाम आरपीएच की उल्लेखनीय रूप से कम साइटोटोक्सिसिटी का संकेत देते हैं। इसलिए, आरपीएच को संभावित रूप से बहुत कम साइटोटोक्सिसिटी के साथ कॉस्मेटिक अनुप्रयोगों के रूप में उपयोग किया जा सकता है।

3. सामग्री और तरीके

3.1. अभिकर्मकों

आयरन (III) क्लोराइड, 2,20-एज़िनो-बीआईएस(3-एथिलबेनज़ोथियाज़ोलिन-6-सल्फ़ोनिक एसिड) (ABTS), ट्रोलॉक्स(6-हाइड्रॉक्सी-2,5 ,7,8-टेट्रामेथिलक्रोमन-2-कार्बोक्जिलिक एसिड), एल-3,4-डायहाइड्रोक्सीफेनिलएलनिन (एल-डीओपीए), 1,1-डिपेनिल-2- पिक्रिलहाइड्राज़िल (DPPH), और ट्राइक्लोरोएसेटिक एसिड अल्फा एसर (Tewksbury, MA, USA) से प्राप्त किए गए थे। 2,20-एज़ोबिस(2-मेथिलप्रोपियोनामिडीन) डाइहाइड्रोक्लोराइड (एएपीएच), फोलिन-सियोकाल्टू के फिनोल अभिकर्मक, गैलिक एसिड, एस्कॉर्बिक एसिड, मशरूमटायरोसिनेस, और फ़्लोरेसिन सोडियम को सिग्मा-एल्ड्रिच (सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) से प्राप्त किया गया था। सोडियम कार्बोनेट रिडेल-डी हैन (सेल्ज़, जर्मनी) से प्राप्त किया गया था। अंत में, शोआ केमिकल (टोक्यो, जापान) से पोटेशियम फेरिकैनाइड, सोडियम हाइड्रोजन फॉस्फेट और सोडियम डाइहाइड्रोजन फॉस्फेट प्राप्त किया गया।

3.2. आरपीएच की तैयारी

आरपीएच को पहले वर्णित के रूप में तैयार किया गया था, सिवाय इसके कि चावल के आटे में स्टार्च को पवित्र करने के लिए फंगल एमाइलेज को अपनाया गया था, उच्च तापमान [43,58] पर बैक्टीरियल एमाइलेज हाइड्रोलिसिस के कारण होने वाले अमीनो एसिड को नुकसान से बचाता है। एक सौ ग्राम चावल के आटे को 1000 एमएल आसुत जल में 0.5 प्रतिशत कवक एमाइलेज (जेनेंकोर, एनवाई, यूएसए) में भिगोया गया था; बाद में मिश्रण को 24 घंटे से 60 डिग्री सेल्सियस तक गर्म किया गया था। पीएच 4.2), जिसके बाद इसे कमरे के तापमान पर ठंडा होने दिया गया। शेष सतह पर तैरनेवाला को हटाने के लिए 1968 × g पर 10 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूजेशन किया गया था। अघुलनशील हिस्से में 20- गुना पानी और 0.1 प्रतिशत हाइड्रोलाइटिकप्रोटीज (हेल्थमेट, चांगहुआ, ताइवान) के 2 एमएल को मिलाने के बाद, घोल को हिलाया गया और 55 डिग्री सेल्सियस पर 4 घंटे के लिए ऊष्मायन किया गया। पीएच-स्टेट विधि को इष्टतम स्तर पर समाधान के पीएच को बनाए रखने के लिए नियोजित किया गया था, और 85 डिग्री सेल्सियस हीटिंग को 10 मिनट फोरेंजाइम निष्क्रियता के लिए किया गया था। शेष अघुलनशील अंश को 3075 × g पर 15 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूजेशन के माध्यम से हटा दिया गया था। सतह पर तैरनेवाला पर Lyophilization किया गया था, जिसे उपयोग करने से पहले −20 C पर संग्रहीत किया गया था।

3.3. आरपीएच की एंटीऑक्सीडेंट गतिविधियां

3.3.1. कुल फेनोलिक एकाग्रता (टीपीसी)

RPH के TPC की खोज के लिए Folin-Ciocalteu विधि को नियोजित किया गया था [59]। पहले, 20Folin-Ciocalteu के फिनोल अभिकर्मक (0.3M) के 0 µL को समान रूप से 5- मिनट मिलाते हुए 200 के साथ मिलाया गया था। RPH घोल का µ l, और इस मिश्रण में 400 µ l विआयनीकृत (DI) पानी और 200 µ l का 10 प्रतिशत (w/v) सोडियम कार्बोनेट घोल मिलाया गया। मिश्रित घोल कमरे के तापमान पर अंधेरे में 60 मिनट ऊष्मायन से गुजरता है। इसके बाद इसे 3000 आरपीएम पर 15 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज किया गया। माप में सतह पर तैरनेवाला के 100 µ l का उपयोग किया गया था । गैलिक एसिड समकक्ष (जीएई) प्रति ग्राम शुष्क आरपीएच नमूना (इकाई: मिलीग्राम जीएई/जी आरपीएच) के टीपीसी (इकाई: मिलीग्राम) को निर्धारित करने के लिए, ऑप्टिकल अवशोषण डेटा गैलिक एसिड का प्रतिनिधित्व करने वाले मानक वक्र में इनपुट थे। एपोचमाइक्रोप्लेट स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (बायोटेक, वीटी, यूएसए) का उपयोग करके 700 एनएम पर अवशोषण प्राप्त किया गया था।

3.3.2. कुल फ्लेवोनोइड सामग्री (टीएफसी)

वाथोनी एट अल के दृष्टिकोण के बाद टीएफसी प्राप्त किया गया था। मामूली संशोधनों के साथ [60]। सबसे पहले, प्रत्येक नमूने में 500 µ l और 2 प्रतिशत (w/v) एल्युमिनियम क्लोराइड घोल मिलाया गया। प्रतिक्रिया समाधान अच्छी तरह से मिलाया गया था और 10 मिनट के लिए छोड़ दिया गया था, और अवशोषक 415 एनएम का मूल्यांकन किया गया था। परिणाम सूखे आरपीएच नमूने (माइक्रोग्राम क्यूई / जी आरपीएच) के प्रति ग्राम क्वेरसेटिन समकक्ष (क्यूई) के माइक्रोग्राम में रिपोर्ट किया गया है।

शरीर सौष्ठव

3.3.3. डीपीपीएच फ्री रेडिकल स्कैवेंजिंग गतिविधि

सबसे पहले, 198 माइक्रोन डीपीपीएच इथेनॉल समाधान (5 0 μL) और आरपीएच समाधान या डीआई पानी (0.5 μL; नमूना और नियंत्रण, क्रमशः) मिलाया गया और फिर कमरे के तापमान पर 30 मिनट के अंधेरे के लिए खड़े होने दें। 517 एनएम पर समाधान का अवशोषण बाद में प्राप्त किया गया था। सापेक्ष मैला ढोने की गतिविधि की गणना नमूना और नियंत्रण के बीच अवशोषण अंतर को निर्धारित करके की गई थी। उच्च डीपीपीएच मुक्त कट्टरपंथी मैला ढोने की गतिविधि कम ऑप्टिकल अवशोषण द्वारा परिलक्षित होती थी। आरपीएच समाधान के डीपीपीएच मुक्त कट्टरपंथी मैला ढोने की गतिविधि मूल्यांकन में, नियोजित मानक विटामिन सी [61-63] था।

3.3.4. एबीटीएस फ्री रेडिकल्स की सफाई गतिविधि

वू एट अल द्वारा रिपोर्ट किया गया दृष्टिकोण। आरपीएच समाधान की एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि का मूल्यांकन करने के लिए नियोजित किया गया था [64]। सबसे पहले, 7 mM ABTS स्टॉक सॉल्यूशन (250 µL) को 2.45 mM पोटैशियम परसल्फेट (250 µL) के साथ प्रतिक्रिया करके ABTS फ्री रेडिकल केशन (ABTS• प्लस) प्राप्त किया गया, जिसमें मिश्रण रखा गया था। 16 घंटे के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर अंधेरे में काम करने से पहले। कमरे के तापमान पर अंधेरे में संतुलन के बाद, 0.1 एम फॉस्फेट-बफर खारा (पीबीएस; पीएच 7.4) को 734 एनएम पर 0.70 ± 0.02 अवशोषण के समाधान को पतला करने के लिए नियोजित किया गया था। फिर, पतला ABTS समाधान के 180 µ l में, Trolox (सकारात्मक नियंत्रण) के 20 µ l या RPH समाधान (नमूना) को जोड़ा गया। मिश्रण को तब कमरे के तापमान ऊष्मायन के 10 मिनट के अधीन किया गया था। इस अध्ययन ने 734 एनएम पर ऑप्टिकल अवशोषण निर्धारित किया; कम अवशोषण उच्च एबीटीएस मुक्त कट्टरपंथी मैला ढोने की गतिविधि के अनुरूप है। आरपीएचसॉल्यूशन की एबीटीएस फ्री रेडिकल मैला ढोने की गतिविधि का आकलन करने के लिए उपयोग किया जाने वाला मानक एंटीऑक्सिडेंट ट्रॉलॉक्स था।

3.3.5. कमी क्षमता

आरपीएच समाधान की कुल एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि को निर्धारित करने के लिए फेरिक-घटाने वाले एंटीऑक्सीडेंट पावर परख को नियोजित किया गया था। जैसा कि लिन एट अल द्वारा रिपोर्ट किया गया है। [29], आरपीएच समाधान (200 μL) समान रूप से 1 प्रतिशत (w/v) K3Fe (CN) 6 और 0.2 M पीबीएस बफर (पीएच 6.6; 100 µ एल प्रत्येक) के साथ समान रूप से मिलाया गया था। .20 मिनट के लिए, मिश्रण को गर्म करने के लिए 50 C पानी के स्नान का इस्तेमाल किया गया था; स्नान से मिश्रण को हटाने के बाद, इसे 3 मिनट के लिए जल्दी से ठंडा कर दिया गया। इसके बाद, 10 प्रतिशत (w/v) ट्राइक्लोरोएसेटिक एसिड (100 µ l) और 10- 3000 rpm पर मिनट सेंट्रीफ्यूजेशन किया गया। इसके बाद supernatant (400 µ l) का निष्कर्षण और इसके साथ 0. 1 प्रतिशत (w/v) FeCl3 (100 µ l) और DI पानी (400 µ l) । Fe4[Fe(CN)6]3 को अंधेरे में इस मिश्रण की न्यूनतम प्रतिक्रिया 10- के माध्यम से प्राप्त किया गया था। इसके बाद, एक उच्च ऑप्टिकल अवशोषण (700 एनएम पर मापा गया) ने उच्च कमी क्षमता का संकेत दिया। आरपीएच के प्रति ग्राम विटामिन सी समकक्ष (वीसीई) सामग्री को निर्धारित करने के लिए मानक विटामिन सी का उपयोग किया गया था।

3.3.6. ऑक्सीजन रेडिकल अवशोषण क्षमता (ओआरएसी)

इस अध्ययन ने पहले बताई गई विधि [65] को संशोधित करके ओआरएसी प्राप्त किया। आसुत जल में आरपीएच नमूने के विघटन के बाद, आरपीएच समाधान (50 µ एल) को एक 96- अच्छी तरह से माइक्रोटिटर प्लेट में फ्लोरेसिन (10 माइक्रोन) के साथ मिलाया गया था। समाधान 15- मिनट ऊष्मायन 37 C से गुजरा और इसके बाद AAPH (500 मिमी) के 50 µ l को जोड़ा गया। प्रत्येक 5 मिनट और कुल 120 मिनट से अधिक, प्रतिदीप्ति दर्ज की गई (λex और em=485 और 528 एनएम, क्रमशः)। आरपीएच की एंटीऑक्सीडेंट क्षमता वक्र के नीचे क्षेत्र की गणना करके प्रतिदीप्ति क्षय कैनेटीक्स से खोजी गई थी (एयूसी) ) RPH ORAC की गणना में, मानक 15-250 µm Trolox था। ओआरएसी को सूखे आरपीएच नमूने (माइक्रोन टीई/जी आरपीएच) के ट्रोलॉक्स समकक्ष (टीई) परग्राम के माइक्रोमोल्स के रूप में सूचित किया जाता है।

3.4. Hyaluronidase निरोधात्मक गतिविधि

हयालूरोनिडेस निषेध परीक्षण एक {0}}अच्छी तरह से माइक्रोप्लेट और पहले से बताए गए तरीके का उपयोग करके मामूली संशोधनों के साथ किया गया था [4 0]। N-acetylglucosamine HA सब्सट्रेट के साथ hyaluronidase प्रतिक्रिया करके जारी किया गया था। किसी भी अवरोधक की उपस्थिति में, एन-एसिटाइलग्लुकोसामाइन रिलीज कम हो गया था, इस रिलीज के साथ 600-एनएम अवशोषण प्राप्त करके पता लगाया गया था। हा 0.1 एम एसीटेट बफर (पीएच 3.9) और गोजातीय सीरम एल्ब्यूमिन (1 मिलीग्राम/एमएल) से बना अम्लीय एल्ब्यूमिन समाधान के साथ अवक्षेपित किया गया था। नमूना समाधान और 5 मिलीग्राम/एमएल हयालूरोनिडेस 37 डिग्री सेल्सियस पर 20- मिनट ऊष्मायन से गुजरा। ऊष्मायन मिश्रण में, HA (1{{20}}0 µL; 0.1 M एसीटेट बफर में 5.0 mg/mL) को बाद में जोड़ा गया। 40 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर आगे ऊष्मायन किया गया था। एंजाइमी प्रतिक्रिया को रोकने के लिए 0.1 एमएल 0.4 एम क्षारीय बोरेट समाधान जोड़ा गया था।

3.5. टायरोसिनेस-निरोधात्मक गतिविधि

वर्तमान अध्ययन ने संशोधनों के साथ पहले बताए गए प्रोटोकॉल का उपयोग करके आरपीएच की एंटीटायरोसिनेस गतिविधि का मूल्यांकन किया [66]। 20 मिमी फॉस्फेट बफर (पीएच 6.8) में टायरोसिनेस को भंग करके एक एंजाइम समाधान (135 यू/एमएल) तैयार किया गया था। इसके अतिरिक्त, DIwater को 1.25 mM L-DOPA समाधान तैयार करने के लिए नियोजित किया गया था। फिर, RPH नमूना समाधान के विभिन्न सांद्रता के 40 µ l को 40 µ l tyrosinase घोल और 120 µ l के L-DOPA समाधान के साथ मिलाया गया। 30 मिनट के लिए, इस मिश्रण को आरपीएच के निषेध के परीक्षण में 37 डिग्री सेल्सियस पर रखा गया थाटायरोसिनेसगतिविधि। एक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (FLUOstar Omega MicroplateReader, BMG Labtech GmbH, जर्मनी) को 475-nm अवशोषकता प्राप्त करने के लिए नियोजित किया गया था। सभी माप तीन बार किए गए थे। संगत समूह का अवशोषण जबटायरोसिनेसमौजूद नहीं था घटाया गया। एंजाइम निषेध दर के रूप में निर्धारित किया गया था

3.6. आरपीएच की विशेषता

3.6.1. अमीनो एसिड प्रोफाइल

इस अध्ययन ने आरपीएच की अमीनो एसिड संरचना की खोज की। सबसे पहले, 24 घंटे और at115 C के लिए, 4 एम मीथेनसल्फोनिक एसिड को खाली सील ट्यूबों में नमूनों को हाइड्रोलाइज करने के लिए नियोजित किया गया था। दो वाटर्स 51 0 सॉल्वेंट डिलीवरी सिस्टम और एक एमिनो एसिड एनालाइज़र (L 89 0 0; हिताची, टोक्यो, जापान) को 25 मीटर मापने वाले aSpherisorb ODS2 कॉलम पर व्युत्पन्न अमीनो एसिड पृथक्करण के लिए नियोजित किया गया था। × 64.6 मिमी। इस अध्ययन ने निम्नलिखित सॉल्वैंट्स को नियोजित किया: (ए) सोडियम एसीटेट (0.14 एम) और ट्राइथाइलमाइन (850 µ एल/एल; पीएच 5.6) और (बी) 60 प्रतिशत एसीटोनिट्राइल, जिसके लिए ग्रेडिएंट 2 मिनट के लिए 0 प्रतिशत था; 15.5 मिनट (उत्तल वक्र) के लिए 0-42 प्रतिशत; और 4 मिनट के लिए 100 प्रतिशत। 254 एनएम [67,68] पर अमीनो एसिडप्रोफाइल की माप के लिए डुप्लिकेट नमूने लिए गए थे।

3.6.2. प्रोटीन का आणविक भार (मेगावाट)

शैगर की विधि [69] के अनुसार और कम करने की स्थिति के तहत, इस अध्ययन ने मामूली संशोधनों के साथ ट्राइसीन-सोडियम डोडेसिल सल्फेट (एसडीएस) -पॉलीक्रिलामाइडगेल वैद्युतकणसंचलन (पेज) के माध्यम से मेगावाट वितरण प्राप्त किया। एक नमूना बफर (30 g/L SDS, 0.375 MTris-HCl, 0.125 g/L Coomassie Brilliant Blue G-250, और 75 g/ एल ग्लिसरॉल; पीएच 7) फ्रीज-सूखे नमूने को फैलाने के लिए नियोजित किया गया था, सेंट्रीफ्यूजेशन के साथ फिर लोड करने से पहले प्रदर्शन किया गया। ट्राईसीन-एसडीएस-पेज सैंपल के 1 एमएल में कुल 20 µL 2-मर्कैप्टोएथेनॉल मिलाया गया। नमूना 90 एस के लिए 100 C पर गरम किया गया था । एक नमूना कुएं को माइक्रोसिरिंज का उपयोग करके प्रत्येक नमूने और बिना दाग वाले प्रोटीन मानक ब्रॉड रेंज (बायो-रेड लैबोरेट्रीज, जर्मनी) से भरा गया था। तब वैद्युतकणसंचलन किया गया था - पहले लगातार 30 एमवी पर जब तक कि पूरा नमूना स्टैकिंग जेल के भीतर समाहित नहीं हो जाता और बाद में एक निरंतर 100 एमवी तक पूरा हो जाता है। इसके बाद, जेल धुंधला होने के लिए 0.02 प्रतिशत Coomassie Brilliant Blue R -250 घोल लगाया गया। जैल की निरपेक्ष पृष्ठभूमि को रात भर 10 प्रतिशत एसिटिक एसिड में जैल को हिलाकर प्रदर्शित किया गया था। अंत में, गलियों में प्रोटीन बैंड की पहचान करने के लिए जेल छवि का विश्लेषण किया गया; यह विश्लेषण ImageJ (USNational Institute of Health, Bethesda, MD, USA) में किया गया था। मानक मार्करों को एक अंशांकन वक्र प्राप्त करने के लिए नियोजित किया गया था जिससे मेगावाट का अनुमान लगाया गया था। संक्षेप में, पहला कदम अलग करने वाले जेल के ऊपर से प्रत्येक बैंड की माइग्रेशन (आरएफ) की लंबाई निर्धारित करना था। दूसरा चरण किसी दिए गए मेगावाट के साथ मानक मार्कर आरएफ और लॉग (मेगावाट) फोरा को नियोजित करके अंशांकन वक्र की गणना था। आरपीएच में प्रोटीन बैंड के आरएफ का उपयोग करके मेगावाट का निर्धारण किया गया था।

3.7. साइटोटोक्सिसिटी परख

कच्चे 264.7 कोशिकाओं को उच्च ग्लूकोज डल्बेको के संशोधित ईगल माध्यम (डीएमईएम) में सुसंस्कृत किया गया था जिसमें 1 0 प्रतिशत भ्रूण गोजातीय सीरम (एफबीएस), 4.5 ग्राम/एल ग्लूकोज, 1 प्रतिशत एंटीबायोटिक समाधान (1 0 0 यूनिट/ एमएल पेनिसिलिन और 100 माइक्रोग्राम/एमएल स्ट्रेप्टोमाइसिन), 4 मिमी एल-ग्लूटामिन और 1.5 ग्राम/सोडियम बाइकार्बोनेट 37 डिग्री सेल्सियस और 5 प्रतिशत CO2 पर। RPHs के लिए कच्चे 264.7 कोशिकाओं की कोशिका विषाक्तता एक 3-(4,5-डाइमिथाइलथियाज़ोल-2-yl)-2,5 डिपेनिल-टेट्राजोलियम ब्रोमाइड (एमटीटी) प्रसार परख विधि द्वारा मापी गई . लगभग 1 × 104 सेल प्रति कुँए 96-वेल प्लेट्स में चढ़ाए गए थे। 24 घंटे के बाद, कोशिकाओं में आरपीएच (0-2000 माइक्रोग्राम/एमएल) के विभिन्न सांद्रता जोड़े गए। ऊष्मायन के 24 और 48 घंटे के बाद, 100 µ एल एमटीटी समाधान (0.5 मिलीग्राम/एमएल) जोड़ा गया था। एक माइक्रोस्कोप के तहत जाँच करने पर नीले रंग के फॉर्मैज़ान क्रिस्टल देखे गए। DMEM को हटा दिया गया और प्रति कुएं में 100 µL डाइमिथाइल सल्फ़ोक्साइड (DMSO) मिलाया गया। एक माइक्रोटिटर प्लेट रीडर का उपयोग करके अवशोषण को मापा गया था। तब सेल व्यवहार्यता (प्रतिशत) की गणना [A570 (ट्रीटेड सेल) - A570 (बैकग्राउंड)] / [A570 (अनुपचारित सेल) - A570 (बैकग्राउंड)] × 100 प्रतिशत [70] के रूप में की गई थी।

3.8. सांख्यिकीय विश्लेषण

प्रत्येक हाइड्रोलाइज़ेट नमूने की रिपोर्ट तीन स्वतंत्र दोहराए गए प्रयोगों और निर्धारणों से औसत मूल्य थी। माध्य ± मानक विचलन (एसडी) में व्यक्त किए गए परिणामों का विश्लेषण एकतरफा एनोवा और डंकन के पोस्ट हॉक टेस्ट द्वारा सांख्यिकीय विश्लेषण प्रणाली (संस्करण 2 0। 0; एसपीएसएस, अर्मोनक, एनवाई, यूएसए) का उपयोग करके किया गया था। p <0.05 के="" मानों="" को="" सांख्यिकीय="" महत्व="" माना="" जाता="">

4। निष्कर्ष

इस अध्ययन ने आरपीएच के कार्यों की जांच की। प्रायोगिक परिणामों से पता चला है कि आरपीएच में फेनोलिक यौगिक और फ्लेवोनोइड होते हैं और डीपीपीएच और एबीटीएस मैला ढोने की गतिविधियों, कमी क्षमता और ओआरएसी जैसी कई एंटीऑक्सीडेंट गतिविधियों का प्रदर्शन करते हैं। इसके अलावा, आरपीएच प्रभावी रूप से बाधितटायरोसिनेसऔर हयालूरोनिडेस गतिविधियाँ। प्रोटीज आरपीएच के मेगावाट पैटर्न को प्रभावित करने वाला एक महत्वपूर्ण कारक था। आरपीएच का विश्लेषण सौंदर्य प्रसाधनों में एक घटक के रूप में उपयोग करने की उनकी क्षमता को इंगित करता है।

शरीर सौष्ठव

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