वुचांग ब्रीम (मेगालोब्रामा एंब्लीसेफला) के प्लीहा और सिर-किडनी पर मौजूद प्रतिरक्षा सुरक्षा में अमोनिया नाइट्रोजन एक्सपोजर का मूल्यांकन Ⅱ

3. चर्चा

मछली की प्रतिरक्षा प्रणाली विभिन्न प्रकार के पर्यावरणीय प्रदूषकों पर कैसे प्रतिक्रिया करती है यह एक गर्म विषय बन गया है [34–37]. एक सर्वव्यापी विषैले पदार्थ के रूप में, अमोनिया जलीय जानवरों के स्वास्थ्य पर अप्रत्याशित प्रभाव डाल सकता है क्योंकि यथार्थवादी स्थितियों में मछलियाँ अक्सर क्रोनिक अमोनिया तनाव से पीड़ित होती हैं। हमारे वर्तमान अध्ययन ने मछली की प्रतिरक्षा और उसके तंत्र पर अमोनिया के दीर्घकालिक संपर्क के प्रभावों को स्पष्ट किया।

हमारे वर्तमान प्रयोग में, अमोनिया एक्सपोज़र एकाग्रता में वृद्धि के साथ सीरम कोर्टिसोल में काफी वृद्धि हुई है, जो वुचांग ब्रीम में तनाव की घटना का संकेत देता है। इसी तरह के परिणाम टर्बोट (स्कोफ्थाल्मस मा. इमस), कॉमन कार्प (साइप्रिनसकार्पियो), और जुवेनाइल ब्लंट थूथन ब्रीम (मेगालोब्रामा) में देखे गए। एंबलीसेफला) [32,38,39. इस अध्ययन में क्रोनिक अमोनिया एक्सपोज़र के कारण सीरम लाइसोजाइम, पूरक और सी4 में भी महत्वपूर्ण कमी आई। लाइसोजाइम, जन्मजात प्रतिरक्षा कार्य के एक संकेतक के रूप में, संक्रमण से लड़ने के लिए प्राथमिक प्रतिरक्षा एंजाइम है (40]। पूरक प्रणाली, जन्मजात प्रतिरक्षा और अर्जित प्रतिरक्षा के बीच पुलों में से एक के रूप में, प्रतिरक्षा परिसरों को साफ करने और रोग पैदा करने वाले को मारने में आवश्यक भूमिका निभाती है। बैक्टीरिया और वायरस [41,42)। पिछले कुछ अध्ययनों में बताया गया है कि तीव्र अमोनिया तनाव लाइसोजाइम गतिविधियों को बाधित कर सकता है (17,43] और मछली में सी3 और सी4 के प्रोटीन और एमआरएनए स्तर को कम कर सकता है (44-46]। इस प्रकार, हमारे वर्तमान परिणामों से पता चला है कि क्रोनिक अमोनिया तनाव ने मछली की जन्मजात प्रतिरक्षा। वर्तमान अध्ययन में, अमोनिया सांद्रता में एकाग्रता-निर्भर वृद्धि प्लीहा और सिर के गुर्दे दोनों में पाई गई, लेकिन एक महत्वपूर्ण अंतर केवल प्लीहा में पाया गया। इसी तरह की वृद्धि प्लीहा और में पाई गईसिर-गुर्दा सूचकांक, यह दर्शाता है कि अमोनिया तनाव ने दो मुख्य प्रतिरक्षा अंगों को गंभीर नुकसान पहुंचाया है। हिस्टोलॉजिकल निष्कर्षों से पता चला कि अमोनिया का संचय प्लीहा में रोग संबंधी चोटों का मुख्य कारण हो सकता है औरसिर की किडनी, जो बढ़े हुए मेलेनोमा-मैक्रोफेज केंद्रों और साइटोप्लाज्म वैक्यूलाइजेशन की विशेषता थी। मेलानो-मैक्रोफेज केंद्रों को मैक्रोफेज समुच्चय के रूप में जाना जाता है, और उनका मुख्य कार्य एरिथ्रोफैगोसाइटोसिस के बाद कोशिका-व्युत्पन्न फॉस्फोलिपिड्स और आयरन का भंडारण, प्रतिरोधी रोगजनकों का जमाव और प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं में एंटीजन प्रसंस्करण है [47-51]। मेलानो-मैक्रोफेज केंद्रों का बढ़ा हुआ आकार और आवृत्ति अक्सर संकेत देती है कि मछलियाँ तनाव या क्षति का अनुभव कर रही हैं या बड़ी हो रही हैं [36,48,52]। क्वोन और चांग के शोध में बताया गया है कि {{9}दिन के अमोनिया एक्सपोज़र (4.0~10.4 मिलीग्राम/लीटर कुल अमोनिया नाइट्रोजन) ने गंभीर हेमोसाइडरिन जमाव को प्रेरित किया और ब्लैक सीब्रीम के प्लीहा में मेलेनिन-मैक्रोफेज में वृद्धि की। 53]। इसी तरह का मेलानो-मैक्रोफेज संयोजन 1 और 5 मिलीग्राम/लीटर कुल अमोनिया नाइट्रोजन [17] के संपर्क में आने वाले पेल्टेओबैग्रस वेचेली की प्लीहा में देखा गया था। इसके अलावा, हिस्टोपैथोलॉजिकल परिवर्तनों के मात्रात्मक मूल्यांकन से पता चला कि लगातार अमोनिया तनाव के कारण होने वाली पैथोलॉजिकल चोट की डिग्री सिर की किडनी की तुलना में प्लीहा में अधिक थी।

किडनी संक्रमण के लिए 25% इचिनाकोसाइड और 9% एक्टीओसाइड के साथ कार्बनिक सिस्टान्च अर्क

मछली में प्रतिरक्षा अंग क्षति हमेशा प्रतिरक्षा अणुओं के परिवर्तन से जुड़ी होती है [35]। मेंजन्मजात प्रतिरक्षा प्रणाली, दसूजन संबंधी साइटोकिन्स आईएल-1और टीएनएफ- सूजन प्रतिक्रिया की शुरुआत और मॉड्यूलेशन के महत्वपूर्ण नियामक हैं [54-57]। साइटोकिन अणुओं (टीएनएफ-, आईएल -1) के घटते स्तर सेलुलर इम्यूनोलॉजिकल फ़ंक्शन में कमी का प्रतिनिधित्व करते हैं, जिसके परिणामस्वरूप अंततः बाहरी तनावों के तहत उच्च संक्रमण दर होती है [58-60]। सीमित अध्ययनों से पता चला है कि 40 मिलीग्राम/लीटर कुल अमोनिया नाइट्रोजन के तीव्र संपर्क से टर्बोट (स्कोफ्थाल्मस मैक्सिमस) में साइटोकिन्स जैसे आईएल -1 और टीएनएफ- के ट्रांसक्रिप्शनल स्तर बढ़ सकते हैं, जबकि उच्च अमोनिया (50 मिलीग्राम/लीटर) के लंबे समय तक संपर्क में रहने से कुल अमोनिया नाइट्रोजन) ने क्रूसियन कार्प (कैरासियस ऑराटस) में विपरीत प्रवृत्ति को प्रेरित किया [14,60]। हमारे वर्तमान परिणामों से पता चला है कि क्रोनिक अमोनिया एक्सपोज़र के कारण स्प्लेनिक आईएल -1 और टीएनएफ- के प्रोटीन और ट्रांसक्रिप्शनल स्तर में उल्लेखनीय कमी आई है, जिसे अमोनिया सांद्रता और स्प्लेनिक आईएल के स्तर के बीच स्पीयरमैन सहसंबंध विश्लेषण द्वारा आगे समर्थित किया गया था। } और टीएनएफ-। इसी तरह के परिणाम सिर की किडनी में भी पाए गए। हमारे वर्तमान डेटा से संकेत मिलता है कि क्रोनिक अमोनिया एक्सपोज़र ने दो प्रतिरक्षा अंगों, प्लीहा और सिर-गुर्दे में सूजन अणुओं आईएल -1 और टीएनएफ- के प्रतिलेखन और प्रोटीन संश्लेषण को रोककर जन्मजात प्रतिरक्षा रक्षा को बाधित कर दिया है।

जन्मजात प्रतिरक्षा रक्षा प्रणाली के अलावा, अनुकूली प्रतिरक्षा भी मछली की प्रतिरक्षा रक्षा में महत्वपूर्ण भूमिका निभाती है। आईजीएम किसी नए संक्रमण या विदेशी एंटीजन के प्रति अनुकूली प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया द्वारा स्रावित पहला एंटीबॉडी है, जो मुख्य रूप से मछली की प्लीहा और सिर-गुर्दे में व्यक्त होता है [61,62]। आईजीएम का निम्न स्तर कमजोर अनुकूली प्रतिरक्षा से जुड़ा हो सकता है [63]। वर्तमान अध्ययन में, प्लीहा में प्रोटीन और आईजीएम के ट्रांसक्रिप्शनल स्तर में महत्वपूर्ण कमी पाई गई, लेकिन सिर की किडनी में नहीं, यह दर्शाता है कि अमोनिया के संपर्क में प्लीहा आईजीएम के उत्पादन पर निरोधात्मक प्रभाव पड़ता है। किन एट अल. बताया गया है कि 48 घंटे और 96 घंटे के लिए 1 मिलीग्राम/एल कुल अमोनिया नाइट्रोजन के संपर्क में आने से पेल्टेओबैग्रस वेचेली के प्लीहा में आईजीएम के ट्रांसक्रिप्शनल स्तर में काफी कमी आई है, लेकिन सिर-किडनी में नहीं [17]। 96 घंटे तक 99 मिलीग्राम/लीटर अन-आयनीकृत अमोनिया के संपर्क में रहने वाले राइन्कोसिप्रिस लैगोव्स्की के गिल, प्लीहा और मस्तिष्क में भी आईजीएम के स्तर में कमी पाई गई। हमारे स्पीयरमैन सहसंबंध विश्लेषण ने आगे दिखाया कि अमोनिया एक्सपोज़र एकाग्रता स्प्लेनिक आईजीएम के साथ काफी नकारात्मक रूप से सहसंबद्ध थी, लेकिन सिर-किडनी आईजीएम के साथ महत्वपूर्ण रूप से सहसंबद्ध नहीं थी। इस प्रकार, हमारे अध्ययन ने सुझाव दिया कि क्रोनिक अमोनिया तनाव केवल प्लीहा में अनुकूली प्रतिरक्षा को कम कर देता है। इससे पता चलता है कि सिर की किडनी की तुलना में प्लीहा परिवेशीय अमोनिया तनाव के प्रति अधिक संवेदनशील है। इस परिकल्पना का एक कारण हमारे वर्तमान अध्ययन में अमोनिया तनाव से प्रेरित प्लीहा और सिर की किडनी की संरचना में विसंगतिपूर्ण हानि हो सकती है।

प्रतिरक्षा कोशिकाओं में व्यापक रूप से वितरित टीएलआर हमलावर रोगजनकों के प्राथमिक सेंसर हैं। वर्तमान अध्ययन में, वुचांग ब्रीम की तिल्ली और सिर-किडनी में टीएलआर के ट्रांसक्रिप्शनल स्तर में कमी पाई गई, जिसका अर्थ है कि अमोनिया टीएलआर सिग्नलिंग मार्ग के माध्यम से नकारात्मक प्रभाव पैदा कर सकता है। दरअसल, टीएलआर का अवरोध अमोनिया के संपर्क से प्रेरित सीरम कोर्टिसोल में वृद्धि से संबंधित हो सकता है। कैरिज़ो एट अल. साबित हुआ कि कोर्टिसोल उपचार से ओंकोरहिन्चस मायकिस मायोट्यूब में टीएलआर (टीएलआर1/5 एम/9/22) का एमआरएनए स्तर कम हो गया [64]। सुसरला एट अल. पाया गया कि कोर्टिसोल प्राथमिक मानव कॉर्निया फ़ाइब्रोब्लास्ट [65] के टीएलआर3 और टीएलआर4 दोनों उत्तेजनाओं के बाद साइटोकिन्स (वीईजीएफ, सीसीएल5, आईएफएन-, सीएक्ससीएल-10, आईएल-8 और जीसीएसएफ) के ट्रांसक्रिप्शनल स्तर को कम कर सकता है। इसके अलावा, टीएलआर निषेध का मतलब टीएलआर सिग्नलिंग मार्ग अवरुद्ध हो सकता है। MyD88-आश्रित मार्ग सभी टीएलआर द्वारा विनियमित होता है, और MyD88-स्वतंत्र मार्ग टीएलआर3 और टीएलआर4 सिग्नलिंग मार्गों के लिए विशिष्ट है [66]। टीएलआर सिग्नलिंग से पीआई3 के-एकेटी पाथवे सक्रियण भी होता है, जो बदले में बी कोशिकाओं को एंटीबॉडी का उत्पादन करने और एनएफ-κबी सिग्नलिंग पाथवे [67-69] के माध्यम से आईएल -1 और टीएनएफ- जैसे प्रिनफ्लेमेटरी अणुओं को संश्लेषित करने के लिए सक्रिय करता है। यह ध्यान देने योग्य है कि अमोनिया के संपर्क में आने के बाद प्लीहा और सिर की किडनी दोनों में ट्रैफ 6 का ट्रांसक्रिप्शनल स्तर कम हो गया था, जबकि myd88 और pi3 k की अभिव्यक्ति में कोई महत्वपूर्ण बदलाव नहीं पाया गया था। इस प्रकार, हमारे परिणामों ने संकेत दिया कि अमोनिया ने प्लीहा और सिर की किडनी दोनों में TRAF6 को रोककर MyD88- -स्वतंत्र मार्ग में हस्तक्षेप किया है। इसके अतिरिक्त, TRAF6 सक्रियण डाउनस्ट्रीम NF-κB सिग्नलिंग और MAPK सिग्नलिंग (p38, JNK, और ERK) के सक्रियण को ट्रिगर कर सकता है, जो अंततः TNF- और इंटरल्यूकिन सहित विभिन्न सूजन साइटोकिन्स के उत्पादन को प्रेरित करता है। (आईएल-1 /6/12) [70,71]। इसके अलावा, TRAF6 CD40 सिग्नलिंग के लिए भी महत्वपूर्ण मध्यस्थ है जो IL-6 और Ig स्राव [72] को नियंत्रित करता है। हमारे अध्ययन में, प्लीहा erk1 और nf-κb2 mRNAs के साथ-साथ हेड-किडनी erk1, jnk1 और nf-κb1 mRNAs के महत्वपूर्ण डाउन-रेगुलेशन ने सुझाव दिया कि अमोनिया के संपर्क ने प्लीहा और सिर में डाउनस्ट्रीम NF-κB और MAPK सिग्नलिंग अणुओं को दबा दिया। -किडनी। इसके अलावा, अमोनिया के संपर्क में आने से प्लीहा में जीन nf-κb1 लेकिन सिर-गुर्दे में जीन nf-κb2 को दबाकर NF-κB सिग्नलिंग को कम कर दिया जाता है, जो बीच में ऊतक-विशिष्ट सूजन प्रतिक्रिया को दर्शाता है।प्लीहा और सिर-गुर्दे. एमएपीके सिग्नलिंग मार्ग के लिए, अमोनिया एक्सपोज़र ने स्प्लेनिक एर्क1 और हेड-किडनी एर्क1 और जेएनके1 की अभिव्यक्ति को काफी हद तक बाधित कर दिया। स्पीयरमैन सहसंबंध विश्लेषण करने के बाद, हमने पाया कि अमोनिया एक्सपोज़र एकाग्रता को प्रतिरक्षा मापदंडों (आईएल -1, टीएनएफ- और आईजीएम) के स्तर के साथ-साथ प्लीहा में टीएलआर सिग्नलिंग-संबंधित जीन की अभिव्यक्ति के साथ नकारात्मक रूप से सहसंबद्ध किया गया था। सिर-गुर्दे. इसलिए, हमारे परिणामों ने सुझाव दिया कि क्रोनिक अमोनिया एक्सपोज़र TLRs/MyD88-स्वतंत्र सिग्नलिंग मार्ग के माध्यम से जन्मजात और अनुकूली प्रतिरक्षा को ख़राब कर सकता है।

उच्च आईबीआर मान जीवों की बढ़ी हुई जैविक प्रतिक्रियाओं और खराब स्वास्थ्य स्थिति को दर्शाते हैं [73]। आईबीआर मूल्यों के वर्तमान परिणाम तिल्ली और सिर के गुर्दे दोनों में परिवेशीय अमोनिया सांद्रता में वृद्धि के साथ बढ़े हैं। यह परिणाम हिस्टोपैथोलॉजी और सीरम-प्रतिरक्षा मापदंडों पर डेटा के अनुरूप था। इसके अलावा, अमोनिया तनाव की समान सांद्रता के तहत, सिर-गुर्दे की तुलना में प्लीहा में IBR मान अधिक था, जिसने आगे साबित किया कि वुचांग ब्रीम के सिर-किडनी की तुलना में प्लीहा पर अमोनिया तनाव का प्रभाव अधिक गंभीर था।

4. सामग्री और विधियाँ

4.1. पशु रखरखाव और प्रायोगिक प्रोटोकॉल किशोर

तुआनफेंग फिशरी (हुबेई, चीन) से 9.98 ± 0.48 ग्राम के औसत वजन के साथ वुचांग ब्रीम को 3 00 एल फाइबरग्लास टैंकों में ले जाया गया, जहां उन्हें डी-क्लोरीनयुक्त और लगातार वातित चलने वाली आपूर्ति की गई थी पानी। उन्हें दिन में दो बार (9:{{10}} पूर्वाह्न और 15:00 अपराह्न) व्यावसायिक आहार खिलाकर 14 दिन के लिए अभ्यस्त किया गया। प्रारंभिक प्रयोग के बाद, ब्रीम किशोरों के लिए 96 घंटे एलसी50 और कुल अमोनिया नाइट्रोजन की सुरक्षित सांद्रता क्रमशः 46.013 मिलीग्राम/लीटर और 4.601 मिलीग्राम/लीटर पाई गई। इसलिए, अमोनिया की एक्सपोज़र रेंज 0 mg/L, 5 mg/L, 10 mg/L, 20 mg/L और 30 mg/L कुल अमोनिया नाइट्रोजन निर्धारित की गई थी। मछलियों को तीन प्रतियों वाले टैंकों के साथ 5 उपचार समूहों में यादृच्छिक रूप से वितरित किया गया था, और प्रति टैंक स्टोकिंग घनत्व 20 किशोर था। अमोनिया की प्रायोगिक सांद्रता अभिकर्मक-ग्रेड अमोनिया क्लोराइड (बीएएसएफआर, 99.5%) से बने 10 ग्राम/लीटर के स्टॉक समाधान से प्राप्त की गई थी। स्थिर अमोनिया उपचार सांद्रता बनाए रखने के लिए, 1/2 प्रयोग समाधान को अमोनिया नाइट्रोजन समाधान की एक नई और समान सांद्रता द्वारा हर दिन नवीनीकृत किया गया था। इस बीच, नियंत्रण समूह ने वातित नल के पानी के साथ इसी तरह का हेरफेर किया। प्रत्येक उपचार के लिए वास्तविक कुल अमोनिया नाइट्रोजन स्तर को हर दिन नेस्लेराइज़ेशन द्वारा मापा गया था। संपूर्ण प्रायोगिक अवधि के दौरान, HQ40 D वॉटर एनालाइज़र (Hach, Loveland, CO, USA) द्वारा दैनिक निगरानी डेटा से पता चला कि पानी का तापमान 25.0 ± 0.60 ◦C था, घुलित ऑक्सीजन सांद्रता 5.0 mg/L से ऊपर थी, और pH को बनाए रखा गया था। 7.55 ± 0.04, 10% H2SO4 और 10% NaOH का उपयोग करके मामूली समायोजन के साथ। मछलियों को अनुकूलन के अनुसार दिन में दो बार व्यावसायिक आहार दिया गया।

4.2. नमूना संग्रह और तैयारी

एक 30-दिन के प्रायोगिक प्रदर्शन के बाद, मछली को पहले 48 घंटे तक भूखे रखा गया और फिर एमएस{2}} घोल में एनेस्थेटाइज किया गया। विच्छेदन से पहले प्रत्येक किशोर के शरीर का वजन मापा गया था, और बाद के जैव रासायनिक पैरामीटर निर्धारण के लिए सीरम को अलग करने के लिए दुम की नसों से तुरंत रक्त एकत्र किया गया था। ऊतकों (तिल्ली और सिर-गुर्दे) को निकाला गया और उनका वजन किया गया। प्लीहा और सिर-गुर्दा सूचकांक की गणना सूत्र [ऊतक का वजन (जी) / शरीर का वजन (जी) * 100%] का उपयोग करके की गई थी। प्रत्येक समूह से तीन व्यक्तिगत प्लीहा और सिर-गुर्दे का उपयोग हिस्टोपैथोलॉजिकल विश्लेषण के लिए किया गया था, और अन्य को ऊतक अमोनिया सांद्रता, प्रतिरक्षा मापदंडों और जीन ट्रांसक्रिप्शनल स्तरों के विश्लेषण के लिए -80 ◦C पर तुरंत फ्रीज कर दिया गया था। एम. एंबलीसेफला पर किए गए इस कार्य को हुआज़होंग कृषि विश्वविद्यालय, वुहान, चीन (HZAUFI-2019-018) ​​की पशु देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) द्वारा अनुमोदित किया गया था।

4.3. प्लीहा और सिर-किडनी में अमोनिया का पता लगाना

अमोनिया के स्तर के विश्लेषण के लिए, पिछले अध्ययनों [74,75] के अनुसार ऊतक के नमूनों का पूर्व उपचार और अमोनिया का पता लगाया गया था। विस्तृत परीक्षण चरण सहायक सूचना (पूरक पाठ S1) में पाए जा सकते हैं।

4.4. सीरम इम्यून पैरामीटर्स परख

सीरम के नमूने तैयार करने के लिए रक्त के नमूनों को सेंट्रीफ्यूज किया गया (845 ग्राम, 20 मिनट, 4 ◦C)। प्रत्येक प्रायोगिक समूह में छह प्रतिकृति थीं और एक प्रतिकृति में एक ही टैंक के 10 व्यक्तियों का सीरम शामिल था। पिछले अध्ययन के अनुसार सीरम कोर्टिसोल को बीजिंग नॉर्थ इंस्टीट्यूट ऑफ बायोटेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड (बीजिंग, चीन) (www.bnibt.com, 15 मार्च 2020 को एक्सेस किया गया) की किट का उपयोग करके रेडियोइम्यूनोएसे (आरआईए) द्वारा निर्धारित किया गया था [76]। पूरक सी3 और पूरक सी4 की सामग्री और लाइसोजाइम की गतिविधि को जियानचेंग बायोइंजीनियरिंग इंस्टीट्यूट (नानजिंग, चीन) (www.njjcbio.com, 15 मार्च 2020 को एक्सेस किया गया) द्वारा उत्पादित वाणिज्यिक किट का उपयोग करके मापा गया था।

4.5. ऊतक प्रतिरक्षा पैरामीटर्स परख

एक ही समूह की पांच मछलियों के ऊतक के नमूनों को एक डुप्लिकेट के रूप में एकत्र किया गया और 0.85% सोडियम क्लोराइड के साथ समरूप बनाया गया, फिर सतह पर तैरनेवाला के संग्रह के लिए 15 मिनट (4 ◦C) के लिए 845× ग्राम पर सेंट्रीफ्यूज किया गया। प्रत्येक प्रायोगिक समूह में छह प्रतिकृतियाँ थीं। जैसा कि पिछले अध्ययनों में वर्णित है [77,78], सतह पर तैरनेवाला का उपयोग वाणिज्यिक किट का उपयोग करके आईजीएम, आईएल -1, टीएनएफ- और कुल प्रोटीन की सांद्रता का परीक्षण करने के लिए किया गया था। सभी किट जियानचेंग बायोइंजीनियरिंग इंस्टीट्यूट (नानजिंग, चीन) से खरीदे गए थे (www.njjcbio.com, 15 मार्च 2020 को एक्सेस किया गया)।

4.6. जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण

पिछले अध्ययन में विधि के अनुसार प्लीहा और सिर-गुर्दे में प्रतिरक्षा से जुड़े जीन के एमआरएनए स्तर का परीक्षण किया गया था [79]। परीक्षण प्रक्रिया पर विस्तृत जानकारी सहायक सूचना (पूरक पाठ S2) में प्रदान की गई है। प्राइमर अनुक्रम तालिका 3 में सूचीबद्ध हैं। प्रतिक्रिया विशिष्टता प्रदर्शित करने के लिए प्रतिक्रिया के अंत में प्रत्येक प्राइमर के लिए पिघल वक्र विश्लेषण किया गया था। यह सत्यापित करने के बाद कि सभी चयनित जीनों की प्रवर्धन क्षमता 90-110% के बीच है, सापेक्ष एमआरएनए स्तरों की गणना आंतरिक नियंत्रण के रूप में -एक्टिन के साथ 2−∆∆Ct की विधि द्वारा की गई थी [80]।

4.7. हिस्टोपैथोलॉजिकल मूल्यांकन

प्लीहा और सिर-गुर्दे के नमूनों को 10% तटस्थ-बफ़र्ड फॉर्मेलिन में तय किया गया, फिर इथेनॉल में निर्जलित किया गया और पैराफिन में एम्बेडेड किया गया। अंत में, ऊतक के टुकड़ों को हेमेटोक्सिलिन और ईओसिन (एच एंड ई) से रंग दिया गया। पिछले अध्ययनों [82,83] के अनुसार पैथोलॉजिकल परिवर्तनों का और अधिक मात्रात्मक विश्लेषण किया गया था। विस्तृत विश्लेषण प्रोटोकॉल सहायक सूचना (पूरक पाठ S3) में प्रदान किया गया है।

4.8. एकीकृत बायोमार्कर प्रतिक्रिया विश्लेषण

आईबीआर विश्लेषण तनाव के स्तर का आकलन करने के लिए सभी मापी गई बायोमार्कर प्रतिक्रियाओं को एक एकीकृत सूचकांक में एकीकृत करने की एक विधि है [84-86]। वर्तमान अध्ययन में, इसे 30- दिन के एक्सपोज़र के बाद वुचांग ब्रीम की तिल्ली और सिर की किडनी पर विभिन्न अमोनिया सांद्रता के विषाक्त प्रभावों का मूल्यांकन करने के लिए लागू किया गया था। गणना प्रक्रिया पर विस्तृत जानकारी सहायक सूचना (पूरक पाठ S4) में प्रदान की गई है।

4.9. सांख्यिकीय आंकड़े

सभी मूल्यों को विचरण के एक-तरफ़ा विश्लेषण के अधीन किया गया, जिसके बाद साधनों के बीच अंतर का मूल्यांकन करने के लिए डननेट का पोस्ट हॉक परीक्षण किया गया (एसपीएसएस 22. 0, शिकागो, आईएल, यूएसए)। कुल अमोनिया सांद्रता, प्रतिरक्षा मापदंडों और जीन अभिव्यक्ति स्तरों के बीच संबंध निर्धारित करने के लिए स्पीयर मैन सहसंबंध विश्लेषण को चुना गया था। सामान्यता और विचरण समरूपता को पहले सत्यापित किया गया था। अंतरों को मापा गया और पी-मान <{4}}.05 पर महत्वपूर्ण माना गया।

प्र. 5। निष्कर्ष

हमारा अध्ययन इस बात का प्रमाण देता है कि दीर्घकालिक अमोनिया तनाव ने सीरम सीओआर को बढ़ा दिया, सीरम लाइसोजाइम और सी3/सी4 को कम कर दिया, और आईएल-1, टीएनएफ- और आईजीएम के प्रोटीन और ट्रांसक्रिप्शनल स्तर के साथ-साथ टीएलआर से जुड़े जीनों के अभिव्यक्ति स्तर को कम कर दिया। /MyD88- एम की प्लीहा और सिर-गुर्दे में स्वतंत्र सिग्नलिंग मार्ग।एंब्लीसेफला. इसके अलावा, और के सूचकांकपैथोलॉजिकल क्षतिऊतक में अमोनिया संचय के साथ दो प्रतिरक्षा अंगों में वृद्धि हुई। इन निष्कर्षों से संकेत मिलता है कि प्लीहा और सिर-गुर्दे में अमोनिया संचय ने हिस्टोपैथोलॉजिकल क्षति का कारण बना और टीएलआर/MyD88-स्वतंत्र सिग्नलिंग के निषेध के माध्यम से प्रतिरक्षा दमन को प्रेरित किया। इसके अलावा, प्लीहा पर क्रोनिक अमोनिया तनाव के प्रतिकूल प्रभाव वुचांग ब्रीम के सिर-गुर्दे की तुलना में अधिक गंभीर पाए गए।

फंडिंग: इस कार्य को चीन के राष्ट्रीय कुंजी अनुसंधान एवं विकास कार्यक्रम (2019 YFD0900303), MOF और MARA की चीन कृषि अनुसंधान प्रणाली (CAS-45-24) और चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (नंबर 32071621) द्वारा संयुक्त रूप से समर्थित किया गया था। .

संस्थागत समीक्षा बोर्ड का वक्तव्य: हमने सभी स्थानीय, राष्ट्रीय और अंतर्राष्ट्रीय नियमों और सम्मेलनों का पालन किया, और हम सामान्य वैज्ञानिक नैतिक प्रथाओं का सम्मान करते हैं। इस अध्ययन में उपयोग किए गए नमूने मुख्य रूप से मानव उपभोग के लिए व्यावसायिक रूप से मछली पकड़ने वाले व्यक्तियों की आबादी से आए थे। पशु प्रोटोकॉल को हुआज़होंग कृषि विश्वविद्यालय (वुहान, चीन) की संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग आचार समिति (HZAUFI-2019-018) द्वारा अनुमोदित किया गया था।

सूचित सहमति वक्तव्य: अध्ययन में शामिल सभी विषयों से सूचित सहमति प्राप्त की गई थी।

डेटा उपलब्धता विवरण: इस अध्ययन के लिए तैयार किए गए सभी डेटासेट लेख/अनुपूरक सामग्री में शामिल हैं।

हितों का टकराव: लेखक हितों के टकराव पर घोषणा करते हैं।

संदर्भ

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