सिलिको और विवो में एंटीमेलेनोजेनिक गतिविधि और गैलांगिन के तंत्र का मूल्यांकन

संपर्क: ऑड्रे हू Whatsapp/hp: 0086 13880143964 ईमेल:audrey.hu@wecistanche.com

की वुंग चुंग, ए ह्योंग ओह जियोंग, ए यून कियॉन्ग ली, सु जियोंग किम, पुसून चुन, बीहे यंग चुंग, *, ए और ह्युंग रयोंग मून*, ए

अत्यधिक मेलेनिन संश्लेषण के कारण असामान्य रंजकता के परिणामस्वरूप झाई, उम्र के धब्बे और मेलेनोमा जैसी गंभीर समस्याएं हो सकती हैं। हाइपरपिग्मेंटेशन के उपचार के लिए टायरोसिनेस इनहिबिटर एक दिलचस्प लक्ष्य रहा है क्योंकि मेलेनिन संश्लेषण में टायरोसिनेज दर-सीमित एंजाइम है। मजबूत टायरोसिनेस अवरोधकों के लिए स्क्रीनिंग से फ्लेवोनोइड की खोज हुईगैलनिन, जिसने मशरूम टायरोसिनेस पर उल्लेखनीय निरोधात्मक प्रभाव दिखाया। गैलानिन का IC5 0 मूल्य (3.55 ± 0.39 माइक्रोन) कोजिक एसिड (48.55 ± 1.79 माइक्रोन) की तुलना में कम था, जिसे सकारात्मक नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया गया था। सिलिको डॉकिंग सिमुलेशन और मैकेनिस्टिक अध्ययनों से पता चला है कि गैलनिन ने टायरोसिनेस के उत्प्रेरक साइटों के साथ बातचीत की और टाइरोसिन के साथ प्रतिस्पर्धा की। B16F10 मेलेनोमा कोशिकाओं में -मेलानोसाइट-उत्तेजक हार्मोन से प्रेरित, गैलनिन ने टायरोसिनेस गतिविधि के साथ-साथ मेलेनिन उत्पादन को भी रोक दिया। हालांकि . की उच्च खुराकगैलनिनसाइटोटोक्सिक थे, कम खुराक पर कोई साइटोटोक्सिक प्रभाव नहीं देखा गया था। इसके अलावा, HRM2 मेलेनिन-युक्त बाल रहित चूहों में गैलानिन की विवो प्रभावकारिता का मूल्यांकन किया गया था। जैसा कि स्किन-व्हाइटनिंग इंडेक्स और मेलेनिन धुंधला द्वारा मापा जाता है, बार-बार यूवीबी एक्सपोजर ने त्वचा मेलेनिन संश्लेषण को बढ़ाया। गैलांगिन एप्लिकेशन ने यूवीबी एक्सपोजर से प्रेरित मेलानोजेनेसिस को काफी कम कर दिया। सामूहिक रूप से, हमारा डेटा इंगित करता है किगैलनिनमजबूत टायरोसिनेस अवरोध गतिविधि दिखाता है, जो बताता है कि यह एक प्रभावी त्वचा-सफेद करने वाला एजेंट हो सकता है।

कीवर्डगैलनिन; मेलेनोजेनेसिस; रंजकता; टायरोसिनेस

सिस्टैंच का सत्त

गैलांगिन, एक फ्लेवोनोइड यौगिक, एल्पिनिया ऑफ़िसिनारम और हेलिक्रिसम में उच्च सांद्रता में पाया जाता है) पिछले अध्ययनों से पता चला है कि गैलांगिन में विभिन्न औषधीय गतिविधियाँ होती हैं, जो पौधों को यूवी विकिरण, रोगजनकों और शाकाहारी जीवों से बचाती हैं, और एंटी-बैक्टीरियल और एंटीवायरल गतिविधियों को अंजाम देती हैं। 4) हालांकि, इसमें एंटीऑक्सीडेंट गुण भी होते हैं, जो इसके लाभकारी प्रभावों के कारण होते हैं। 5) गैलांगिन कैंसर कोशिकाओं के विकास को रोककर कैंसर विरोधी प्रभाव भी डालता है। 6,7)

मेलेनिन एक जैविक वर्णक है जो अधिकांश जीवों में पाया जाता है। त्वचा जीव विज्ञान में, मेलेनिन अमीनो एसिड टायरोसिन के ऑक्सीकरण द्वारा निर्मित होता है। सामान्य शरीर क्रिया विज्ञान में, मेलेनिन हानिकारक यूवी विकिरण के अवशोषण के माध्यम से त्वचा की चोट को रोकता है। 8) त्वचा मेलेनोसाइट्स में संश्लेषित मेलेनिन को केराटिनोसाइट्स में वितरित किया जाता है, जहां यह मुख्य रूप से हानिकारक यूवी विकिरण के खिलाफ सुरक्षा में भाग लेता है। 8) हालांकि, कुछ लाभों के बावजूद, अत्यधिक मेलेनिन सौंदर्य संबंधी समस्याएं और त्वचा रोग भी पैदा कर सकते हैं। 9) असामान्य रंजकता, जैसे कि झाईयां, उम्र के धब्बे, मेलास्मा, और सेनील लेंटिगिन, सामान्य त्वचा शरीर क्रिया विज्ञान के लिए गंभीर समस्याएं पैदा करते हैं। 10,11) इसलिए, मेलेनोजेनेसिस का मॉड्यूलेशन एक महत्वपूर्ण रणनीति है अत्यधिक त्वचा रंजकता का उपचार। मेलेनोजेनेसिस की प्रक्रियाओं में कई एंजाइम भाग लेते हैं। इन विभिन्न एंजाइमों में, टायरोसिनेज, जो एल-टायरोसिन की ऑक्सीकरण प्रक्रियाओं को 3,4-डायहाइड्रोक्सीफेनिलएलनिन (एल-डीओपीए) और एल-डीओपीए से डोपाक्विनोन को उत्प्रेरित करता है, सबसे महत्वपूर्ण है।12) टायरोसिनेस द्वारा मध्यस्थता वाली ये प्रक्रियाएं हैं दर-सीमित प्रक्रियाएं। असामान्य परिस्थितियों में, बढ़े हुए कुल मेलेनिन उत्पादन के साथ टायरोसिनेस के अतिसक्रियण का पता चला है। 13) मेलेनोजेनेसिस में इसकी महत्वपूर्ण भूमिका के कारण, टाइरोसिनेज एक डिपिगमेंटिंग एजेंट के लिए एक आकर्षक लक्ष्य है। 14) इस प्रकार, प्राकृतिक और सिंथेटिक दोनों से विभिन्न टायरोसिनेस अवरोधक सूत्रों का विकास किया गया है। हाइड्रॉक्सीक्विनोन, कोजिक एसिड और अर्बुटिन सहित कई टायरोसिनेस अवरोधक, पहले दवा और कॉस्मेटिक उद्योगों में उपयोग किए गए हैं। हालांकि कई टायरोसिनेस अवरोधक व्यावसायिक रूप से विकसित किए गए हैं, साइटोटोक्सिक दुष्प्रभाव स्पष्ट हो गए हैं। 12) इसलिए, प्रभावी और सुरक्षित त्वचा-सफेद करने वाले एजेंटों की आवश्यकता है।

इस अध्ययन का उद्देश्य विभिन्न प्रयोगात्मक विधियों का उपयोग करके गैलांगिन को एक शक्तिशाली टायरोसिनेस अवरोधक के रूप में चिह्नित करना था। प्राकृतिक स्रोतों से tyrosinase अवरोधकों की खोज के दौरान, हमने पाया कि galangin ने उच्च शक्ति के साथ tyrosinase गतिविधि को काफी कम कर दिया। क्योंकि टायरोसिनेस पर गैलनिन के निरोधात्मक प्रभाव पहले से ही बताए गए थे, हमने सेल और पशु प्रयोगों में निरोधात्मक तंत्र और शक्ति पर ध्यान केंद्रित किया। 1) सिलिको में विभिन्न का उपयोग करते हुए, इन विट्रो में, और विवो प्रयोगों में, हमारे डेटा ने संकेत दिया कि गैलांगिन एक हो सकता है त्वचा रंजकता के उपचार के लिए शक्तिशाली त्वचा-सफेद करने वाला एजेंट।

सिस्टैंच ट्यूबोलोसा स्वास्थ्य लाभ:त्वचा को सफ़ेदी प्रदान करने वाला

सामग्री और तरीके

सामग्री

गैलांगिन, कोजिक एसिड, मशरूम टायरोसिनेज, एल-टायरोसिन, -मेलानोसाइट-उत्तेजक हार्मोन (-एमएसएच), और अन्य रासायनिक अभिकर्मकों को सिग्मा केमिकल कंपनी (सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) से खरीदा गया था।

सेल-फ्री सिस्टम में टायरोसिनेस निरोधात्मक प्रभाव और निरोधात्मक तंत्र का मापन

टायरोसिनेस पर गैलांगिन की निरोधात्मक प्रभावकारिता और तंत्र का मूल्यांकन करने के लिए, मशरूम टायरोसिनेस का उपयोग पहले वर्णित रूप में किया गया था। संक्षेप में, मशरूम टायरोसिनेस की 1000 इकाइयों को 20 µ एल फॉस्फेट-बफर खारा (पीबीएस) में भंग कर दिया गया था और परख मिश्रण के 170 µ एल में जोड़ा गया था, जिसमें 1 मिमी एल-टायरोसिन, 50 मिमी फॉस्फेट बफर (पीएच 6.5), और 10 µ एल शामिल थे। परीक्षण सामग्री। मिश्रण 30 मिनट के लिए कमरे के तापमान (25 डिग्री) पर ऊष्मायन किया गया था। उत्पादित डोपाक्रोम की मात्रा को माइक्रोप्लेट रीडर में स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक रूप से 492 एनएम (OD492) पर मापा गया था। IC50 की गणना विभिन्न गैलांगिन खुराकों पर प्रयोग की पुनरावृत्ति से की गई थी। गैलनिन के निरोधात्मक तंत्र को निर्धारित करने के लिए, एक टायरोसिनेस गतिज परख किया गया था। निषेध परख के लिए एल-टायरोसिन (1, 2, 4, और 8 मिमी) के विभिन्न सांद्रता का उपयोग किया गया था। परीक्षा के बाद, प्रत्येक मान को लाइनविवर-बर्क प्लॉट्स के अनुसार उसके पारस्परिक में परिवर्तित किया गया था। परिणामों ने 1/वी बनाम 1/[एस] का प्लॉट दिखाया। निरोधात्मक तंत्र को निर्धारित करने के लिए प्रत्येक भूखंड के प्रतिच्छेदन का उपयोग किया गया था।

डॉकिंग सिमुलेशन

सिलिको प्रोटीन-लिगैंड डॉकिंग सिमुलेशन में, हमने AutoDock4.2 का उपयोग किया। प्रोटीन और लिगैंड के बीच सफल बंधन प्राप्त किया गया था। क्रिस्टल संरचना में प्रयुक्त टायरोसिनेस की त्रि-आयामी (3D) संरचना Agaricus bisporus (PDB ID: 2Y9X) से थी और tyrosine की एक पूर्वनिर्धारित बाइंडिंग साइट का उपयोग डॉकिंग पॉकेट के रूप में किया गया था। 15) डॉकिंग सिमुलेशन tyrosinase और galangin के बीच किए गए थे। /कोजिक एसिड। निम्नलिखित चरणों द्वारा डॉकिंग सिमुलेशन के लिए यौगिकों को तैयार किया गया था: (1) 2डी संरचनाओं को 3डी संरचनाओं में परिवर्तित किया गया था; (2) शुल्कों की गणना की गई, और (3) हाइड्रोजन परमाणुओं को केमऑफिस प्रोग्राम का उपयोग करके जोड़ा गया। यौगिकों और टायरोसिनेस और फार्माकोफोर्स की पीढ़ी के बीच संभावित हाइड्रोजन बॉन्डिंग अवशेषों की भविष्यवाणी लिगैंडस्काउट 3 द्वारा की गई थी। 0।

सेल कल्चर सिस्टम

अमेरिकन टाइप कल्चर कलेक्शन (रॉकविले, एमडी, यूएसए) से प्राप्त मरीन मेलेनोमा बी16एफ10 कोशिकाओं का उपयोग पहली बार टायरोसिनेस निषेध पर गैलनिन के प्रभावों का मूल्यांकन करने के लिए किया गया था। कोशिकाओं को 10 प्रतिशत भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS; WELGENE Inc., S 101-01) और पेनिसिलिन/स्ट्रेप्टोमाइसिन के साथ पूरक Dulbecco के संशोधित ईगल माध्यम (DMEM; WELGENE Inc., कोरिया, LM 001-05) में सुसंस्कृत किया गया था। (100 IU/50 µg/mL; WELGENE Inc., LS202-02) हवा में 5 प्रतिशत CO2 युक्त आर्द्र वातावरण में 37 डिग्री पर। सेल व्यवहार्यता पर गैलांगिन के प्रभावों का मूल्यांकन करने के लिए, एक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध किट (ईजेड -1000, डोजेन बायो, कोरिया) का उपयोग करके एक सेल व्यवहार्यता परख की गई थी। संक्षेप में, कोशिकाओं को 96-अच्छी तरह से प्लेटों में सुसंस्कृत किया गया था और गैलांगिन के विभिन्न सांद्रता के साथ इलाज किया गया था। संकेतित समय के बाद, माइक्रोप्लेट रीडर का उपयोग करके अवशोषण को 450 एनएम पर पढ़ा गया था। प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्यता सुनिश्चित करने के लिए सभी सेल प्रयोग कम से कम तीन बार किए गए।

टायरोसिनेस गतिविधि

B16F1 0 कोशिकाओं में टायरोसिनेस गतिविधि की जांच L-DOPA के ऑक्सीकरण की दर के मापन के माध्यम से की गई। कोशिकाओं को 60π-अच्छी तरह से व्यंजन में चढ़ाया गया था, 1 माइक्रोन -एमएसएच की उपस्थिति या अनुपस्थिति में ऊष्मायन किया गया था, और फिर 5 और 10 माइक्रोन गैलांगिन के साथ 24 घंटे के लिए इलाज किया गया था। सकारात्मक नियंत्रण के रूप में कोजिक एसिड के साथ उपचार का उपयोग किया गया था। कोशिकाओं को 50 एमएम सोडियम फॉस्फेट बफर (पीएच 6.8) के 500 µ एल में lysed किया गया था जिसमें 25 µ एल 1 प्रतिशत ट्राइटन एक्स -100 और 25 µ एल 0.1 एमएम फेनिलमेथाइलसल्फोनील फ्लोराइड था और फिर 30 मिनट के लिए −80 डिग्री पर जमे हुए थे। विगलन और मिश्रण के बाद, सेलुलर lysates को सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा 12000 × g पर 30 मिनट के लिए 4 डिग्री पर स्पष्ट किया गया था। सतह पर तैरनेवाला (80 µ एल) को एक 96- अच्छी तरह से प्लेट में रखा गया था, 20 µ एल एल-डोपा (2 मिलीग्राम/एमएल) जोड़ा गया था, और अवशोषण 492 एनएम पर 1 घंटे के लिए 37 डिग्री पर पढ़ा गया था। एक प्लेट रीडर।

सिस्टैंच एक्सट्रैक्ट: टायरोसिनेस एक्सप्रेशन को रोकता है

मेलेनिन सामग्री

वर्तमान अध्ययन में, मेलेनिन सामग्री का उपयोग मेलानोजेनेसिस के सूचकांक के रूप में किया गया था। संक्षेप में, B16 कोशिकाओं को 60π-डिश में चढ़ाया गया और 1 µM-MSH की उपस्थिति या अनुपस्थिति में इनक्यूबेट किया गया। कोशिकाओं को तब 5 और 10 माइक्रोन पर गैलांगिन के साथ या बिना 24 घंटे के लिए ऊष्मायन किया गया था। कोजिक एसिड के साथ उपचार का उपयोग सकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया गया था। पीबीएस के साथ दो धोने के बाद, नमूनों को 500 µ एल 1 एनएनएओएच में भंग कर दिया गया, 1 घंटे के लिए 60 डिग्री पर इनक्यूबेट किया गया, और मेलेनिन को घोलने के लिए मिलाया गया। 405 एनएम पर अवशोषण को माइक्रोप्लेट रीडर का उपयोग करके मापा गया था।

विवो प्रयोगों में

जानवरों के प्रयोगों में गैलांगिन की विवो डिपिगमेंटिंग प्रभावकारिता का मूल्यांकन किया गया था। जानवरों के अध्ययन को एजिंग टिशू बैंक द्वारा डिजाइन किया गया था, जिसे पुसान नेशनल यूनिवर्सिटी की संस्थागत पशु देखभाल समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था, और पुसान नेशनल यूनिवर्सिटी द्वारा जारी पशु प्रयोग के लिए दिशानिर्देशों के अनुसार प्रदर्शन किया गया था। छह-सप्ताह के पुरुष HRM2 मेलेनिन-युक्त बाल रहित चूहों को होशिनो प्रयोगशाला जानवरों (योशिनो, सैतामा, जापान) से प्राप्त किया गया था और नियंत्रित परिस्थितियों में रखा गया था (23 ± 1 डिग्री, 55 प्रतिशत ± 5 प्रतिशत आर्द्रता, 12- एच प्रकाश /डार्क साइकिल) पानी तक मुफ्त पहुंच और एक मानक प्रयोगशाला आहार के साथ। 1 सप्ताह की अनुकूलन अवधि के बाद, चूहों को बेतरतीब ढंग से छह जानवरों के चार समूहों में विभाजित किया गया था। गैलांगिन (10 माइक्रोन) और कोजिक एसिड (50 माइक्रोन) प्रोपलीन ग्लाइकोल और इथेनॉल (3: 7) से बने घोल में तैयार किए गए थे। भंग घोल (200 µ l) या वाहन को दिन में एक बार पशु की पृष्ठीय त्वचा पर शीर्ष रूप से लगाया जाता था। जानवरों को प्रायोगिक कार्यक्रम के अनुसार 50 mJ/cm2 पर एक क्रॉसलिंकर (BEX-800, Ultra-Lum Inc., CA, USA) से UVB द्वारा विकिरणित किया गया था। एक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर सीआर -10 (कोनिका मिनोल्टा सेंसिंग, इंक., सकाई, ओसाका, जापान) का उपयोग करके त्वचा की साइटों के रंगों को मापा गया था जिसमें रंगों को उनके एल *, ए * और बी * मानों द्वारा वर्णित किया गया था। आयोग इंटरनेशनल डी एल'एक्लेयरेज रंग प्रणाली के अनुसार। जानवरों की बलि देने के बाद, खाल को एकत्र किया गया, कमरे के तापमान पर रातोंरात 4 प्रतिशत पैराफॉर्मलडिहाइड में तय किया गया, और अमेरिकन मास्टर * टेक साइंटिफिक, इंक। (लोदी, सीए, यूएसए) से फोंटाना-मेसन स्टेनिंग किट का उपयोग करके मेलेनिन के लिए दाग दिया गया। निर्माता के निर्देशों के अनुसार। संक्षेप में, कटा हुआ खाल 60 डिग्री पर 60 मिनट के लिए एक अमोनियाकल चांदी के घोल के साथ दाग दिया गया था, 0.1 प्रतिशत सोने के क्लोराइड में ऊष्मायन किया गया था, और फिर 5 प्रतिशत सोडियम थायोसल्फेट में।

सांख्यिकीय आंकड़े

छात्र के t -est का उपयोग दो समूहों के बीच अंतर का विश्लेषण करने के लिए किया गया था और ANOVA का उपयोग अंतरसमूह अंतर का विश्लेषण करने के लिए किया गया था। p . का मान<0.05 were="" considered="" statistically="" significant.="" the="" analysis="" was="" performed="" using="" graphpad="" prism="" 5="" (graphpad="" software,="" la="" jolla,="" ca,="">

सिस्टैंच ट्यूबोलोसा

परिणाम

टायरोसिनेस पर गैलांगिन के सिलिको डॉकिंग सिमुलेशन में

गैलांगिन एक प्राकृतिक रूप से पाया जाने वाला फाइटोकेमिकल है और इसकी संरचना में एक फ्लेवोनोइड अंश होता है (चित्र 1)। प्रारंभ में, मशरूम टायरोसिनेस (तृतीयक संरचना) और यौगिकों (गैलैंगिन, कोजिक एसिड और टायरोसिन) के बीच एक डॉकिंग सिमुलेशन किया गया था। जिस डॉकिंग साइट से गैलांगिन और कोजिक एसिड बंधे थे, उसे पहले टायरोसिनेस की सक्रिय साइट के रूप में निर्धारित किया गया था। 15) यह सिमुलेशन सफल रहा और एक महत्वपूर्ण स्कोर हासिल किया गया। गैलांगिन और टायरोसिनेस के बीच बाध्यकारी ऊर्जा −7.67 kcal/mol थी, जैसा कि Autodock4.2 का उपयोग करके विश्लेषण द्वारा निर्धारित किया गया था। tyrosinase और kojic एसिड (सकारात्मक नियंत्रण) के बीच बाध्यकारी ऊर्जा −4.09 kcal/mol, और −5.13 kcal/mol tyrosinase और मूल सब्सट्रेट, tyrosine (तालिका 1) के बीच थी। इन परिणामों से पता चला कि गैलांगिन अन्य अंतःक्रियाओं की तुलना में उच्च आत्मीयता के साथ टायरोसिनेस को बांधता है। डॉकिंग सिमुलेशन परिणामों के आधार पर, हमने लिगैंडस्काउट प्रोग्राम का उपयोग करके टायरोसिनेस और यौगिकों के बीच बातचीत की खोज की। हमने पाया कि गैलांगिन ने ASN-260, VAL-283, ALA-286, और PHE-292 के साथ बातचीत की, जबकि kojic एसिड ने केवल ASN-260 और MET280 ( अंजीर। 2, तालिका 1)। इसलिए ये इंटरैक्शन अवरोधक गतिविधि के प्रमुख निर्धारक हो सकते हैं और डॉकिंग स्कोर पर महत्वपूर्ण प्रभाव डाल सकते हैं।

मशरूम टायरोसिनेस में एंटी-मेलेनोजेनिक प्रभाव और तंत्र का निर्धारण

सिलिकोरसल्ट्स और अन्य पहले बताए गए परिणामों के आधार पर, हमने मशरूम टायरोसिनेस का उपयोग करके एंटीमेलेनोजेनिक प्रभावों और तंत्रों का मूल्यांकन किया। जब कोशिका मुक्त प्रणाली में मशरूम टायरोसिनेस के साथ परीक्षण किया गया, तो गैलांगिन की निरोधात्मक प्रभावकारिता कोजिक एसिड (छवि 3 ए) की तुलना में अधिक मजबूत थी। इसके अलावा, गैलांगिन खुराक पर निर्भर रूप से टायरोसिनेस गतिविधि (छवि 3 बी) को कम कर देता है। गैलांगिन और कोजिक एसिड के IC5 0 मूल्यों की गणना की गई और उन्हें तालिका 2 में प्रस्तुत किया गया। गैलांगिन के निम्न IC5 0 मूल्य (3.55 ± 0.39 माइक्रोन) ने संकेत दिया कि शक्ति कोजिक की तुलना में काफी अधिक थी। एसिड (48.55 ± 1.79 µ एम). लाइनविवर-बर्क डबल-पारस्परिक भूखंडों का उपयोग करके गैलांगिन के निरोधात्मक तंत्र का और अधिक मूल्यांकन किया गया था। निषेध परख के लिए एल-टायरोसिन (1, 2, 4, और 8 मिमी) और गैलांगिन (0, 7.5, और 15 माइक्रोन) के विभिन्न सांद्रता का उपयोग किया गया था। अवशोषण में समय-निर्भर परिवर्तनों को मापा गया और दोहरे-पारस्परिक परिणाम प्लॉट किए गए (चित्र 3सी)। परिणामों ने संकेत दिया कि 1/वी बनाम 1/[एस] के प्लॉट ने अलग-अलग ढलानों के साथ तीन अलग-अलग रेखाएं बनाईं, जो एक ही ऊर्ध्वाधर अक्ष पर प्रतिच्छेद करती थीं। जैसे-जैसे यौगिक की सांद्रता बढ़ती गई, किमी का मान बढ़ता गया, लेकिन Vmax का मान वही बना रहा, जिससे पता चलता है कि गैलांगिन टायरोसिनेस के लिए बाध्यकारी का एक प्रतिस्पर्धी अवरोधक था। ये डेटा सिलिको परिणामों से सहमत थे जो गैलांगिन टायरोसिनेस की सक्रिय साइट से बंधे और बाधित थे।

अंजीर। 1. गैलांगिन, कोजिक एसिड और टायरोसिन की संरचनाएं

B16F10 मुराइन मेलानोमा कोशिकाओं में गैलांगिन की डिपिगमेंटिंग गतिविधि का मूल्यांकन

इसके बाद, B16F10 murine मेलेनोमा कोशिकाओं का उपयोग करके गैलांगिन की अपचयन गतिविधि का मूल्यांकन किया गया। सबसे पहले, B16F10 murine मेलेनोमा कोशिकाओं पर गैलांगिन के साइटोटोक्सिक प्रभावों का परीक्षण किया गया। जैसा कि अंजीर में दिखाया गया है। 4ए, गैलांगिन ने 25 माइक्रोन से ऊपर की खुराक पर सेल व्यवहार्यता में काफी कमी आई है। इसलिए, साइटोटोक्सिसिटी से बचने के लिए, हमने एंटीमेलेनोजेनिक प्रभावों का मूल्यांकन करने के लिए प्रयोगों में 5 माइक्रोन और 10 माइक्रोन गैलांगिन का इस्तेमाल किया। B16F10 कोशिकाओं को 1 माइक्रोन -MSH की उपस्थिति में गैलांगिन के साथ इलाज किया गया था। -एमएसएच उपचार के कारण होने वाला कुल मेलेनिन संश्लेषण नग्न आंखों को दिखाई दे रहा था और यह दर्शाता है कि गैलांगिन ने संभावित रूप से -एमएसएच-ट्रिगर मेलेनिन संश्लेषण (छवि 4 बी) को रोक दिया। -MSH उपचार ने टायरोसिनेस गतिविधि और B16F10 कोशिकाओं की मेलेनिन सामग्री में काफी वृद्धि की (अंजीर। 4C, D)। गैलांगिन उपचार ने सेलुलर मेलानोजेनेसिस को रोक दिया, जिसे -MSH द्वारा खुराक पर निर्भर तरीके से संवर्धित किया गया था (अंजीर। 4C, D)। सामूहिक रूप से, इन परिणामों ने संकेत दिया कि टायरोसिनेस के निषेध के माध्यम से मेलेनोजेनेसिस के दमन के लिए गैलांगिन एक शक्तिशाली एजेंट हो सकता है।

तालिका 1. डॉकिंग स्कोर और यौगिकों के मुख्य इंटरएक्टिव अवशेष

विवो स्किन पिग्मेंटेशन में गैलांगिन के प्रभाव

गैलांगिन के निरोधात्मक प्रभावों की बाद में मेलेनिन-युक्त बाल रहित चूहों में जांच की गई, जिन्हें अंजीर में अनुसूची द्वारा वर्णित किया गया था। 5 ए। एक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके त्वचा की साइटों के रंगों को सटीक रूप से मापा गया। चूहों के यूवीबी एक्सपोजर से एल * मान में कमी आई, जो पिग्मेंटेशन (छवि 5 बी) का प्रतिनिधि था। एल * मान में यूवीबी-प्रेरित घटने को गैलानिन-उपचारित पशुओं में वाहन के साथ इलाज किए गए नियंत्रण जानवरों की तुलना में महत्वपूर्ण रूप से अवरुद्ध कर दिया गया था, जिसने गैलनिन (छवि 5 बी) की शक्तिशाली अपचयन प्रभावकारिता का प्रदर्शन किया था। L* मान ने प्रयोगात्मक अवधियों के दौरान गैलांगिन की शक्ति का भी संकेत दिया (चित्र 5C)। इसके अलावा, 14 वें दिन नग्न आंखों से पता चला त्वचा के रंगों ने भी गैलांगिन (छवि 5 डी) की एंटीमेलेनोजेनिक शक्ति का संकेत दिया। फोंटाना-मास सोन स्टेनिंग, जो मेलेनिन को उजागर करता है, गैलांगिन के प्रभावों की पुष्टि करता है। यूवीबी-विकिरणित जानवरों के त्वचा के नमूनों ने बढ़े हुए मेलेनिन स्पॉट (छवि 5ई) का प्रदर्शन किया। स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री से संख्यात्मक डेटा के साथ समझौते में, गैलनिन-उपचारित जानवरों ने यूवीबी-विकिरणित नियंत्रण जानवरों (छवि 5 ई) की तुलना में दाग वाले मेलेनिन स्पॉट में कमी दिखाई। सामूहिक रूप से, इन आंकड़ों ने सुझाव दिया किगैलनिनविवो मेलानोजेनेसिस मॉडल में यूवीबी-प्रेरित में एक प्रभावी समय एंजियोजेनिक एजेंट था।

अंजीर। 2. टायरोसिनेस और उम्मीदवार यौगिकों के बीच सिलिको डॉकिंग सिमुलेशन परिणाम में

बहस

यह पहले बताया गया है कि गैलांगिन साइटोप्रोटेक्शन सहित विभिन्न जैविक प्रभाव डालती है। हालांकि गैलांगिन की एंटी-टाइरोसिनेस गतिविधि का पहले अध्ययन किया जा चुका है, सेल कल्चर सिस्टम में तंत्र और सटीक प्रभावकारिता का पूरी तरह से वर्णन नहीं किया गया था। 1,16) इसलिए, हमने गैलांगिन की शक्ति और निरोधात्मक तंत्र का पता लगाने का लक्ष्य रखा। गैलांगिन की निरोधात्मक प्रभावकारिता का मूल्यांकन शुरू में सिलिको डॉकिंग सिमुलेशन में उपयोग करके किया गया था। डॉकिंग सिमुलेशन से पता चला कि टाइरोसिनेस की सक्रिय साइट के लिए गैलांगिन का बंधन मूल सब्सट्रेट (टायरोसिन) या कोजिक एसिड (सकारात्मक नियंत्रण) की तुलना में अधिक स्थिर था। मशरूम टायरोसिनेस का उपयोग करके निरोधात्मक प्रभावकारिता और तंत्र की भी पुष्टि की गई। अंत में, मेलानोजेनेसिस के खिलाफ गैलांगिन की निरोधात्मक प्रभावकारिता का मूल्यांकन -MSH-उत्तेजित B16F10 murine मेलेनोमा कोशिकाओं में किया गया था। संक्षेप में, वर्तमान अध्ययन ने एक शक्तिशाली एजेंट के रूप में गैलनिन की पहचान की।

कम्प्यूटेशनल डॉकिंग सिमुलेशन को नए फार्माकोलॉजिकल एजेंटों को स्क्रीन और मूल्यांकन करने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण के रूप में स्थापित किया गया है। 17) डॉकिंग सिमुलेशन परिणाम न केवल बाध्यकारी साइट प्रदान करते हैं बल्कि यौगिक और एंजाइम के बीच बाध्यकारी संबंध भी प्रदान करते हैं, जो भौतिक आवश्यकता के बिना प्रारंभिक जानकारी प्रदान करता है। प्रयोग.18) हालांकि भविष्यवाणियां हमेशा सटीक नहीं होती हैं और इसके लिए और प्रयोगों की आवश्यकता होती है, डॉकिंग सिमुलेशन आवश्यक सामग्री और संसाधनों को कम करता है और जैविक प्रयोगात्मक डेटा का भी समर्थन कर सकता है। हमारे कम्प्यूटेशनल डॉकिंग सिमुलेशन ने संकेत दिया कि गैलांगिन टायरोसिन या कोजिक एसिड की तुलना में टायरोसिनेस को अधिक मजबूती से बांध सकता है। इसके अलावा, गैलांगिन और टायरोसिनेस के बीच अंतःक्रियात्मक अवशेषों की संख्या टाइरोसिन या कोजिक एसिड की तुलना में अधिक थी। प्रारंभिक डॉकिंग डेटा को टायरोसिनेस एंजाइम परख का उपयोग करके और अधिक सत्यापित किया गया, जिससे पता चला कि गैलांगिन का IC50 कोजिक एसिड से कम था; इस प्रकार, टायरोसिनेस पर गैलांगिन के निरोधात्मक प्रभाव कोजिक एसिड की तुलना में अधिक शक्तिशाली थे।

मशरूम टायरोसिनेस का उपयोग करके टायरोसिनेस पर गैलांगिन के निरोधात्मक तंत्र की और जांच की गई। चूंकि डॉकिंग सिमुलेशन डेटा ने सुझाव दिया था कि गैलांगिन उसी सक्रिय साइट से बांधता है जो टायरोसिनेस से बांधता है, यह अनुमान लगाया गया था कि गैलांगिन टायरोसिनेस का प्रतिस्पर्धी अवरोधक हो सकता है। प्रायोगिक परिणामों से पता चला कि गैलांगिन ने अपने मूल सब्सट्रेट, टायरोसिन को बांधने से प्रतिस्पर्धात्मक रूप से टायरोसिनेस को रोक दिया, जिसने डॉकिंग सिमुलेशन परिणामों की पुष्टि की। सामूहिक रूप से, परिणामों ने कम्प्यूटेशनल डॉकिंग सिमुलेशन की विश्वसनीयता और स्क्रीनिंग अवरोधकों के लिए इसकी क्षमता का प्रदर्शन किया।

गैलांगिन की प्रभावकारिता का मूल्यांकन B16F10 murine मेलेनोमा कोशिकाओं में भी किया गया था। उच्च खुराक पर प्रशासित होने पर गैलांगिन ने B16F10 कोशिकाओं में महत्वपूर्ण साइटोटोक्सिक प्रभाव दिखाया। यह कई कैंसर सेल लाइनों में गैलांगिन की एंटीकैंसर गतिविधि की पिछली रिपोर्टों के अनुरूप था। 19,20) साइटोटोक्सिक प्रभावों के कारण, कोशिकाओं के एंटी-मेलेनोजेनिक प्रभावों को सत्यापित करने के लिए स्थितियों के सावधानीपूर्वक चयन की आवश्यकता थी। हालांकि, गैलांगिन का IC50 मान बहुत कम था जब एक सेल-मुक्त प्रणाली में परीक्षण किया गया जिसमें कोई साइटोटोक्सिक प्रभाव नहीं दिखा। वास्तव में, मेलानोजेनेसिस के निषेध के लिए गैलांगिन की प्रभावकारिता कम खुराक पर स्वीकार्य थी जो साइटोटोक्सिसिटी को लागू नहीं करती थी। गैलांगिन की कम खुराक ने सेल कल्चर सिस्टम में मेलेनिन सामग्री, साथ ही टायरोसिनेस गतिविधि को प्रभावी ढंग से कम कर दिया। सेल-फ्री सिस्टम के साथ-साथ,गैलनिनसेल कल्चर सिस्टम में टायरोसिनेस पर एक मजबूत निरोधात्मक प्रभाव दिखाया गया था।

अंत में, HRM2 हेयरलेस माउस का उपयोग करके गैलांगिन के एंटीमेलेनोजेनिक प्रभाव का मूल्यांकन किया गया। HRM2 हेयरलेस माउस मॉडल ने विवो मेलानोजेनेसिस प्रयोगों के लिए एक उपयोगी आधार प्रदान किया, क्योंकि माउस मेलेनिन का उत्पादन कर सकता है, विशेष रूप से पर्यावरणीय तनाव के तहत। इस माउस मॉडल में, गैलांगिन ने यूवीबी-प्रेरित मेलेनिन संश्लेषण पर एक महत्वपूर्ण एंटीमेलेनोजेनिक प्रभाव दिखाया। हमारे ज्ञान के लिए, विवो मेलानोजेनेसिस मॉडल का उपयोग करके गैलांगिन की एंटीमेलेनोजेनिक प्रभावकारिता दिखाने वाला यह पहला अध्ययन है। विवो प्रभावकारिता में स्थापित करना महत्वपूर्ण है क्योंकि कई अन्य मेलानोजेनेसिस अवरोधक त्वचा के स्ट्रेटम कॉर्नियम को पार करने में असमर्थता के कारण विवो में कार्य करने में विफल रहे हैं। सारांश,गैलनिनविवो में एक शक्तिशाली पशु एंजियोजेनिक एजेंट के रूप में पहचाना गया था। हमने निष्कर्ष निकाला कि टायरोसिनेस अवरोधक गैलांगिन ने हाइपरपिग्मेंटेशन विकारों के उपचार के लिए एक उपन्यास दवा उम्मीदवार की पेशकश की।

सिस्टैंच कैप्सूल