बहिर्जात नाइट्रिक ऑक्साइड विट्रो में प्राथमिक चिकन किडनी कोशिकाओं से ईमेरिया टेनेला स्पोरोज़ोइट्स के प्रारंभिक निकास को उत्तेजित करता है

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सार-इमेरिया टेनेला सहित एपिकोम्पलेक्सन परजीवियों के जीवन चक्र में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, जो विभिन्न शोध समूहों से ध्यान आकर्षित कर रहा है। कई हालिया अध्ययनों ने एपिकोम्पलेक्सन परजीवी उन्मूलन की एक नई विधि विकसित करने के लिए प्रतिरक्षा अणुओं द्वारा प्रेरित प्रारंभिक निकास पर ध्यान केंद्रित किया है। इस अध्ययन में, हमने जांच की कि क्या नाइट्रिक ऑक्साइड (NO), साइटोकाइन उत्तेजना के जवाब में विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं द्वारा निर्मित एक प्रतिरक्षा अणु है, जो इन विट्रो में अमेरिकी स्पोरोज़ोइट्स के प्रारंभिक निकास को प्रेरित कर सकता है। ईमेरिया टेनेला स्पोरोज़ोइट्स को प्राथमिक चिकन किडनी कोशिकाओं में निकाला और सुसंस्कृत किया गया था। सोडियम नाइट्रोफेरिकैनाइड (II) डाइहाइड्रेट द्वारा जारी NO के साथ उपचार के बाद फ्लो साइटोमेट्री द्वारा संक्रमित कोशिकाओं से निकाले गए स्पोरोज़ोइट्स की संख्या का विश्लेषण किया गया था। परिणामों से पता चला कि बहिर्जात NO ने परजीवी की प्रतिकृति से पहले प्राथमिक चिकन किडनी कोशिकाओं से E.tenella sporozoites के तेजी से बाहर निकलने को प्रेरित किया। हमने यह भी पाया कि निकास इंट्रा-परजीवी कैल्शियम आयन (Ca2) स्तरों पर निर्भर था और बाहर निकलने के बाद मेजबान कोशिकाओं को कोई नुकसान नहीं हुआ, निर्गमित स्पोरोज़ोइट्स का विषाणु ताजा स्पोरोज़ोइट्स की तुलना में काफी कम था। इस अध्ययन के परिणाम एक नए क्षेत्र में योगदान करते हैं। एपिकोम्पलेक्सन परजीवियों और उनकी मेजबान कोशिकाओं के बीच अंतःक्रियाओं की जांच करना, साथ ही मेजबान द्वारा इंट्रासेल्युलर रोगजनकों की निकासी की जांच करनाप्रतिरक्षा तंत्र.

कीवर्ड: इग्रेशन, एमेरिया टेनेला स्पोरोज़ोइट्स, नाइट्रिक ऑक्साइड।

सिस्टैंच ट्यूबुलोसामें अमीर हैइचिनाकोसाइडतथावर्बास्कोसाइड, इसलिए प्रतिरक्षा में सुधार पर इसका अच्छा प्रभाव पड़ता है। सिस्टैंच ट्यूबुलोसा एक मूल्यवान औषधीय सामग्री है जो पिट्यूटरी ग्रंथि, और अधिवृक्क प्रांतस्था को उत्तेजित कर सकती है या अधिवृक्क प्रांतस्था के समान एक हार्मोन जैसा प्रभाव डाल सकती है, और शरीर के प्रतिरक्षा कार्य को नियंत्रित कर सकती है। यह दिखाया गया है कि सिस्टैंच ट्यूबुलोसा के पॉलीसेकेराइड शरीर के प्रतिरक्षा कार्य को बढ़ा सकते हैं; का प्रतिरक्षा-बढ़ाने वाला प्रभावबहुशर्करासिस्टैंच ट्यूबुलोसा के सुदृढ़ीकरण और टॉनिक प्रभाव में घटक प्रमुख भूमिका निभा सकते हैं। सिस्टैंच ट्यूबुलोसा के सक्रिय तत्वों में से एक वर्बेसिन, विशेषज्ञों द्वारा प्रतिरक्षा विनियमन पर भी सकारात्मक प्रभाव डालने के लिए सिद्ध किया गया है। एकेडेमिया में मौजूदा शोध डेटा के अनुसार, यह माना जा सकता है कि पारंपरिक चीनी दवा सिस्टैंच के इम्यूनोमॉड्यूलेटरी फ़ंक्शन और रेचक कार्य का शरीर की प्रतिरोधक क्षमता बढ़ाने और COVID के रोगियों के ठीक होने के लिए बहुत नैदानिक ​​महत्व है।-19।

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परिचय

एपिकोम्पलेक्सन फाइलम के सदस्य इंट्रासेल्युलर रोगजनकों को बाध्य करते हैं और इसमें टोक्सोप्लाज्मा गोंडी, प्लास्मोडियम एसपीपी और क्रिप्टोस्पोरिडियम एसपीपी शामिल हैं, जो मनुष्यों सहित कई कशेरुक मेजबानों को संक्रमित करता है, जिससे गंभीर बीमारी होती है [9,25,33]। Apicomplexan परजीवी अपने अलैंगिक चरणों में आक्रमण, प्रतिकृति और निष्कासन सहित जटिल प्रक्रियाओं से गुजरते हैं [28]। इन प्रक्रियाओं में, निकास एक महत्वपूर्ण कदम है जो परजीवी को आगे के विकास के लिए एक और मेजबान सेल पर आक्रमण करने में सक्षम बनाता है [14]। निकास आमतौर पर मेजबान कोशिकाओं के विश्लेषण में परिणत होता है, जिससे हानिकारक परिणाम होते हैं [5, 6]। चूंकि यह प्रक्रिया इस संघ और मेजबान दोनों के रोगजनकों के लिए महत्वपूर्ण है, इस क्षेत्र में कई अध्ययन किए गए हैं [29, 30]। हालांकि, इनमें से अधिकतर रिपोर्ट प्लास्मोडियम एसपीपी तक ही सीमित हैं। और टोक्सोप्लाज्मा गोंडी [6]। ईमेरिया एसपीपी। एपिकोम्पलेक्सन परजीवी का एक अन्य महत्वपूर्ण जीनस है जो दुनिया भर में पोल्ट्री उद्योग पर गंभीर नकारात्मक प्रभाव डालता है, लेकिन इस जीनस [11] की निकासी प्रक्रिया के बारे में बहुत कम जानकारी है।

ईमेरिया एसपीपी। मुर्गियों में गंभीर आंतों की बीमारी हो सकती है, जिससे वैश्विक पोल्ट्री उद्योग को प्रति वर्ष लगभग 3 बिलियन अमरीकी डालर का नुकसान होता है [16, 31]। ईमेरिया एसपीपी के बीच संबंध को समझना। और उनके मेजबान coccidiosis के नियंत्रण के लिए बहुत रुचि रखते हैं। हमारे पिछले अध्ययन से पता चला है कि कैल्शियम आयन (Ca2t) और माइक्रोनेम 2 प्रोटीन (EtMic 2) स्राव ईमेरियन परजीवी [35, 36] के बाहर निकलने के लिए महत्वपूर्ण थे।

हाल के कई अध्ययनों ने एपिकोम्पलेक्सन परजीवियों [12,27,37] के उपचार के लिए रणनीति विकसित करने के लिए प्रतिरक्षा अणुओं द्वारा प्रेरित प्रेरक उत्सर्जन पर ध्यान केंद्रित किया है। उदाहरण के लिए, इंटरफेरॉन-वाई-प्रेरित कोशिका मृत्यु से टी। गोंडी टैचीज़ोइट्स का शीघ्र निष्कासन होता है, जो मेजबान कोशिकाओं के जीवन चक्र को बाधित कर सकता है और इस रोगज़नक़ के उन्मूलन को बढ़ावा दे सकता है [26]। हमने हाल ही में रिपोर्ट किया था कि नाइट्रिक ऑक्साइड (NO) संक्रमित मैक्रोफेज (प्रतिरक्षा कोशिकाओं) और मानव चमड़ी फाइब्रोब्लास्ट कोशिकाओं (गैर-प्रतिरक्षा कोशिकाओं) से टी। गोंडी टैचीज़ोइट्स के तेजी से बाहर निकलने को प्रोत्साहित कर सकता है [19,34]।

NO कई प्रकार की कोशिकाओं द्वारा निर्मित होता है, जैसे कि डेंड्रिटिक, मस्तूल, प्राकृतिक हत्यारा, और फागोसाइटिक कोशिकाएं, साइटोकाइन उत्तेजना के जवाब में और प्रोटोजोअन सहित इन विट्रो और पशु मॉडल में कई प्रकार के रोगजनकों के खिलाफ प्रतिरक्षात्मक रूप से मध्यस्थता संरक्षण में महत्वपूर्ण भूमिका निभाती हैं। ,17]। प्रोटोजोआ जैसे प्लास्मोडियम एसपीपी द्वारा संक्रमण के दौरान। और टोक्सोप्लाज्मा गोंडी ने या तो सीधे परजीवियों को मारकर या परजीवी वृद्धि को सीमित करके कोई उत्पादन मध्यस्थ मेजबान संरक्षण नहीं बढ़ाया। पिछले अध्ययनों ने प्राथमिक ई। टेनेला संक्रमण के दौरान उच्च NO उत्पादन की सूचना दी है, जैसे कि NO एक एंटीकोसिडियल प्रभावकारक के रूप में कार्य करता है [1]। इसलिए, हमने यह पता लगाने की कोशिश की कि क्या NO, ईमेरिया एसपीपी के अध्ययन के लिए अधिक जानकारी की आपूर्ति करने के लिए इन विट्रो में मेजबान कोशिकाओं से ई। टेनेला स्पोरोज़ोइट्स के शुरुआती निकास को उत्तेजित कर सकता है। मेजबानों द्वारा इंट्रासेल्युलर रोगजनकों की निकासी में बाहर निकलने और उपन्यास अंतर्दृष्टि प्रस्तुत की।

सामग्री और तरीके

परजीवी, मुर्गियां और कोशिका संवर्धन

ई. टेनेला एम2ई स्ट्रेन, एक ट्रांसजेनिक स्ट्रेन, जो इस अध्ययन में इस्तेमाल किए गए संवर्धित पीले फ्लोरोसेंट प्रोटीन (ईवाईएफपी) [21] को स्पष्ट रूप से व्यक्त करता है, को कोसीडियन-मुक्त आर्बर एकर्स ब्रॉयलर में प्रचारित करके बनाए रखा गया था जिसे बीजिंग आर्बर एकर्स पोल्ट्री ब्रीडिंग कंपनी से खरीदा गया था। , लिमिटेड .; बीजिंग चाइना। ईमेरिया एसपीपी की अन्य प्रजातियों द्वारा संदूषण से बचने के लिए सभी पक्षियों को आइसोलेटर्स में रखा गया था। स्थापित प्रोटोकॉल [22] के अनुसार oocysts का अलगाव, शुद्धिकरण और स्पोरुलेशन आयोजित किया गया था। सभी पशु प्रयोगों को चीन कृषि विश्वविद्यालय प्रयोगशाला पशु कल्याण और पशु प्रायोगिक नैतिक निरीक्षण समिति (अनुमोदन संख्या 20160921-2) द्वारा अनुमोदित पशु नैतिकता प्रक्रियाओं के अनुसार आयोजित किया गया था। स्पोरोज़ोइट शुद्धिकरण पहले वर्णित [35] के रूप में किया गया था। हौसले से शुद्ध किए गए स्पोरोज़ोइट्स को फॉस्फेट-बफर सलाइन (पीबीएस) के साथ निलंबित कर दिया गया था और रक्त कोशिका की गिनती प्लेट का उपयोग करके परजीवियों की संख्या की गणना की गई थी। प्राथमिक चिकन गुर्दा कोशिकाओं (पीसीके) को पहले वर्णित [12] के रूप में तैयार किया गया था और डल्बेको के संशोधित ईगल माध्यम (डीएमईएम) के साथ पूरक 24- अच्छी तरह से संस्कृति प्लेटों में बीजित किया गया था जिसमें भ्रूण गोजातीय सीरम (10 प्रतिशत, वी / वी), पेनिसिलिन ( 200 यू/एमएल), और स्ट्रेप्टोमाइसिन (100 कुग/एमएल)। सेल घनत्व को 1 × 10 डिग्री कोशिकाओं / कुएं में समायोजित किया गया था।

कोई एकाग्रता का मापन

एसएनपी द्वारा जारी NO की सांद्रता का मूल्यांकन NO,/NO को मापकर किया गया था; निर्माता के निर्देशों के अनुसार, NO परख किट (Applygen Tech Inc., बीजिंग, चीन) का उपयोग करके Griess प्रतिक्रिया द्वारा अनुपात।

नो-प्रेरित इग्रेशन परख

पीसीके को 41 डिग्री और 5 प्रतिशत सीओ पर सुसंस्कृत किया गया, इसके बाद गैर-पक्षपाती कोशिकाओं को हटाने के लिए पीबीएस के साथ तीन वॉश किए गए। 2 दिनों के बाद, पीसीके को संक्रमण की बहुलता पर EtM2e स्पोरोज़ोइट्स के साथ जोड़ा गया (MOIof 2.0(परजीवी/कोशिका अनुपात 2:1) 37 डिग्री पर 12 घंटे के लिए। गैर-इनवेसिव स्पोरोज़ोइट्स को धोकर हटा दिया गया था। पीबीएस के साथ। कोशिकाओं को तब या तो विभिन्न सांद्रता (10,20, और 40 मिमी) सोडियम नाइट्रोफर-रिकैनाइड (आई) डाइहाइड्रेट (एसएनपी; सिग्मा) या डीएमईएम वाहक के साथ अलग-अलग उपचार समय (10,20, और 30) के लिए ऊष्मायन किया गया था। मिनट। उपचार के बाद, 500 μL DMEM में बहिष्कृत परजीवियों को निलंबित कर दिया गया था, और 10 uL निलंबन का विश्लेषण प्रवाह cytometry (C6, Accuri Cytometers, Inc. Ann Arbor, MI, United State) द्वारा किया गया था।

वीडियो माइक्रोस्कोपी

2.0 के MOI पर EtM2e स्पोरोज़ोइट्स के साथ ऊष्मायन के 12 घंटे के बाद PCK को 4 0 mM SNP के साथ इलाज किया गया। एक प्रकाश माइक्रोस्कोप (कार्ल जीस, ओलिंप) का उपयोग करके प्रगति की प्रगति दर्ज की गई थी।

परजीवी विकास चरण पर प्रभाव का पता लगाना

30 मिनट के लिए 40 मिमी एसएनपी के साथ उपचार से पहले, स्पोरोज़ोइट्स को 24 या 36 घंटे के लिए पीसीके में विकसित करने की अनुमति दी गई थी, जो इस परजीवी का ट्रोफोज़ोइट चरण है। उपचार के बाद, 500 uL DMEM में निकाले गए परजीवियों को निलंबित कर दिया गया था, और 10 μL निलंबन का प्रवाह साइटोमेट्री द्वारा विश्लेषण किया गया था।

मेजबान सेल व्यवहार्यता का निर्धारण

पीसीके को NO- प्रेरित बहिष्कार, स्पोरोज़ोइट आक्रमण, एसएनपी उपचार, और अनुपचारित समूह में क्रमशः धोया गया था, और सेल व्यवहार्यता को प्रोपीडियम आयोडाइड (PI; eBioscience) का उपयोग करके मापा गया था। संक्षेप में, प्रत्येक समूह में पीसीके को पीबीएस से धोया गया और उपचार के बाद धीरे से ट्रिप्सिनाइज़ किया गया, और निर्माता के निर्देशों के अनुसार एकल कोशिकाओं को पीआई के साथ दाग दिया गया। व्यवहार्य कोशिकाओं के प्रतिशत का विश्लेषण फ्लो साइटोमेट्री द्वारा किया गया था।

निषेध परख

निषेध परख के लिए, इंट्रा सीए2 प्लस चेलेटर बाप्टा-एएम (सिग्मा, सेंट लुइस, एमओ, यूनाइटेड स्टेट्स) और फॉस्फॉइनोसाइटाइड विशिष्ट फॉस्फोलिपेज़ सी इनहिबिटर यू -73122 (सिग्मा) का उपयोग स्पोरोज़ोइट पर सीए 2 प्लस के प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए किया गया था। निकास। एक अन्य प्रयोग में, परजीवी गतिशीलता को अवरुद्ध करने के लिए साइटोकैलासिन डी (CyoD; MerckDarmstadt। जर्मनी) का उपयोग किया गया था। संक्रमित पीसीके को 10 माइक्रोन बाप्टा-एएम के साथ पूर्व-उपचार किया गया था। U-73122.या CytoD को डाइमिथाइल सल्फ़ोक्साइड (सिग्मा) में 30 मिनट के लिए तैयार किया जाता है। फिर, सेल संस्कृतियों को 30 मिनट के लिए 40 मिमी एसएनपी के साथ जोड़ा गया। और ऊपर बताए अनुसार निकाले गए स्पोरोज़ोइट्स की संख्या का मूल्यांकन किया गया था।

निकाले गए परजीवियों का विषाणु

पीसीके को 12 घंटे के लिए स्पोरोज़ोइट्स के साथ जोड़ा गया और उसके बाद 30 मिनट के लिए 40 मिमी एसएनपी के साथ इलाज किया गया। एसएनपी उपचार के बाद मुक्त परजीवी युक्त सेल संस्कृति माध्यम को पीबीएस के साथ तीन बार एकत्र और धोया गया। और परजीवी व्यवहार्यता का परीक्षण 4 प्रतिशत ट्रिपैन ब्लू डाई अपवर्जन का उपयोग करके किया गया था। रक्त कोशिकाओं की गिनती प्लेटों का उपयोग करके निकाले गए परजीवियों की गिनती की गई। विषाणु का पता लगाने के लिए, 30 मिनट के लिए 40 एमएम नं द्वारा उपचार के बाद परजीवियों के पुन: आक्रमण और प्रजनन क्षमताओं का परीक्षण किया गया। पीसीके को परजीवियों के साथ उकेरा गया था

निकाले गए परजीवियों का विषाणु

पीसीके को 12 घंटे के लिए स्पोरोज़ोइट्स के साथ जोड़ा गया और उसके बाद 30 मिनट के लिए 40 मिमी एसएनपी के साथ इलाज किया गया। एसएनपी उपचार के बाद मुक्त परजीवी युक्त सेल संस्कृति माध्यम को पीबीएस के साथ तीन बार एकत्र और धोया गया। और परजीवी व्यवहार्यता का परीक्षण 4 प्रतिशत ट्रिपैन ब्लू डाई अपवर्जन का उपयोग करके किया गया था। रक्त कोशिकाओं की गिनती प्लेटों का उपयोग करके निकाले गए परजीवियों की गिनती की गई। विषाणु का पता लगाने के लिए, 30 मिनट के लिए 40 एमएम नं द्वारा उपचार के बाद परजीवियों के पुन: आक्रमण और प्रजनन क्षमताओं का परीक्षण किया गया। पीसीके को एक नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किए गए परजीवियों के साथ ऊष्मायन किया गया था। मेजबान की प्रजनन क्षमता का मूल्यांकन करने के लिए, 2 × 10 "ताजा तैयार स्पोरोज़ोइट्स और समान मात्रा में निकाले गए परजीवी को क्लोकल मार्ग के माध्यम से 3- सप्ताह पुराने एए ब्रोइलर मुर्गियों में लगाया गया था और सभी पक्षियों को आइसोलेटर्स में रखा गया था [13] ]. संक्रमण के बाद 6-9 दिनों में मैकमास्टर एग काउंटिंग चैंबर का उपयोग करके प्रति पक्षी oocysts का कुल उत्पादन मापा गया था [15]।

सांख्यिकीय आंकड़े

SPSS 20.0 सॉफ़्टवेयर (SPSS Inc.) का उपयोग उपचार और नियंत्रण समूहों के बीच अंतर का विश्लेषण करने के लिए किया गया था। अन्य सभी सांख्यिकीय विश्लेषण ग्राफपैड प्रिज्मा 5.01 सॉफ्टवेयर (ग्राफपैड सॉफ्टवेयर) का उपयोग करके किए गए थे। डेटा को माध्य (SEM) की ± मानक त्रुटि के रूप में व्यक्त किया जाता है। प्रायोगिक समूहों की तुलना विचरण (ANOVA) के एक तरफ़ा विश्लेषण का उपयोग करके की गई थी।

सांख्यिकीय महत्व का मूल्यांकन p < 0.05 (महत्वपूर्ण) और p . के स्तरों पर किया गया था<0.01 (highly="">

परिणाम

ई. टेनेला स्पोरोजोइट्स का बहिर्जात सं उत्तेजित निर्गमन

इग्रेशन एसेज़ आयोजित करने से पहले, हमने सत्यापित किया कि क्या एसएनपी से जारी NO की सांद्रता को स्थिर रखा जा सकता है जब डीएमईएम में 30 मिनट के भीतर ग्रिज़ रिएक्शन (छवि 1 ए) द्वारा भंग कर दिया जाता है। फिर, हमने अलग-अलग अवधि के लिए एसएनपी के विभिन्न सांद्रता के साथ स्पोरोज़ोइट-संक्रमित सेल संस्कृतियों को इनक्यूबेट किया, जैसा कि ऊपर वर्णित है। मुक्त स्पोरोज़ोइट्स की संख्या में वृद्धि हुई जब संक्रमित पीसीके को एसएनपी (छवि 1 बी) के साथ जोड़ा गया। हमने वीडियो रिकॉर्डिंग (चित्र 1C) द्वारा परजीवी के बाहर निकलने की प्रक्रिया का भी अवलोकन किया।

नो-उत्तेजित निकास पर परजीवी विकास चरण का प्रभाव

हमें इस बात में दिलचस्पी थी कि क्या पीसीके में इस परजीवी के विकास के चरणों से NO से प्रेरित बहिष्कार प्रभावित हो सकता है। 30 मिनट के लिए 40 मिमी एसएनपी के साथ इलाज करने से पहले, हमने स्पोरोज़ोइट्स को क्रमशः 24 या 36 घंटे के लिए मेजबान कोशिकाओं में विकसित करने की अनुमति दी, जो इस पैरा-साइट का ट्रोफोज़ोइट चरण है। हमने आश्चर्यजनक रूप से पाया कि परजीवी (चित्र 2) के विकास के समय के विस्तार के साथ बहिष्कृत परजीवियों की संख्या में काफी कमी आई थी, यह दर्शाता है कि परजीवी का विकास चरण NO- प्रेरित बहिष्कार का एक महत्वपूर्ण तत्व है।

परजीवी Ca2 प्लस और गतिशीलता पर निर्भर परजीवियों का निष्कासन

पिछले एक अध्ययन से पता चला है कि इंट्रा-परजीवी Ca2 ने ई. टेनेला स्पोरोज़ोइट्स [12, 34] के निष्कासन के दौरान एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाई थी। हमने परजीवी के NO- प्रेरित निष्कासन में Ca2t के महत्व को निर्धारित करने के लिए प्रयोग किए। जैसा कि आंकड़े 3ए और 3बी में दिखाया गया है, एनओ-प्रेरित निकास को बाप्टा-एएम और यू -73122 दोनों के साथ पूर्व-उपचार द्वारा अवरुद्ध किया गया था, जो इंट्रा-परजीवी सीए 2 प्लस की महत्वपूर्ण भूमिका को दर्शाता है और यह कि सीए 2 प्लस का स्रोत है।

एंडोप्लाज्मिक रेटिकुलम (ईआर)। इसके अलावा, परजीवी की गतिशीलता को अवरुद्ध करने के लिए साइटो-डी के साथ पूर्व-उपचार ने समान परिणाम दिखाए (अंजीर। 4 ए और 4 बी), यह दर्शाता है कि परजीवी की गतिशीलता स्पोरोज़ोइट के निकास के लिए एक और महत्वपूर्ण कारक है।

परजीवी बहिष्कार मेजबान सेल क्षति से जुड़ा नहीं है

इस संभावना की जांच करने के लिए कि मेजबान कोशिकाओं के लिए NO- प्रेरित बहिष्कार विषाक्त था, सेल व्यवहार्यता को PI धुंधला द्वारा मापा गया था। परिणामों से पता चला कि एसएनपी के साथ उपचार के बाद पीआई कोशिकाओं का प्रतिशत बढ़ गया, और गैर-संक्रमित और संक्रमित समूहों के बीच कोई अंतर नहीं था, यह दर्शाता है कि एसएनपी के ऊष्मायन से कोशिका क्षति हुई, लेकिन परजीवी निकास नहीं (अंजीर। 5 ए और 5 बी)।

NO- प्रेरित निष्कासन के बाद परजीवी का विषाणु कम हो गया

Egressed parasites were collected and shown to remain viable by trypan blue exclusion (>85 प्रतिशत व्यवहार्यता)। फिर हमने पीसीके में निकाले गए परजीवियों को जोड़ा या उन्हें क्लोकल मार्ग के माध्यम से व्यक्तिगत रूप से 3-सप्ताह पुराने एए ब्रायलर मुर्गियों में टीका लगाया। दोनों आक्रामक प्रभावकारिता (पी<0.01)(fig.6a)and productivity="" in="" chickens=""><0.01)(fig.6b)of the="" parasites="" after="" no-induced="" egress="" decreased="" dramatically="" compared="" to="" that="" of="" freshly="" prepared="">

बहस

इस अध्ययन में, हमने पाया कि बहिर्जात NO ने Ca2-आश्रित प्रक्रिया में संक्रमित PCK से ई. टेनेला स्पोरोज़ोइट्स के प्रारंभिक निकास को प्रेरित किया। परजीवी के निष्कासन के परिणामस्वरूप मेजबान कोशिकाओं को कोई नुकसान नहीं हुआ, और पुन: आक्रामक क्षमता और निर्वासित परजीवियों की पौरुष में काफी कमी आई। साथ में, ये परिणाम ईमेरियन परजीवी निकास के तंत्र का अध्ययन करने के लिए एक उपन्यास मॉडल का सुझाव देते हैं और मेजबान कोशिकाओं में इंट्रासेल्युलर रोगजनकों को कम करने के लिए NO द्वारा मध्यस्थता वाली एक नई विधि प्रदान करते हैं।

इग्रेशन एक महत्वपूर्ण प्रक्रिया है जो ईमेरियन पैरा-साइट्स को मेजबान कोशिकाओं से बाहर निकलने और पड़ोसी कोशिकाओं पर आक्रमण करने के लिए एक नया इंट्रासेल्युलर जीवन चक्र शुरू करने में सक्षम बनाता है; इस प्रकार, निकास मेजबान के भीतर रोगजनन में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। हमारी पिछली रिपोर्ट इमेरियन परजीवी के प्रारंभिक यांत्रिकी अध्ययन [35,36] पर केंद्रित थी। इस अध्ययन में, NO को शामिल किया गया था। हमने पाया कि NO, आक्रमण के पूरा होने के तुरंत बाद और परिपक्व मेरो-ज़ोइट इग्रेशन की घटना से बहुत पहले परजीवियों के निष्कासन को प्रेरित कर सकता है, जिसने इस रोगज़नक़ के जीवन चक्र को बाधित कर दिया। वर्तमान अध्ययन में, संक्रमित पीसीके को बाहर निकलने के दौरान कोई नुकसान नहीं हुआ, जो टी। गोंडी टैचीज़ोइट इग्रेशन [19, 20] के समान अध्ययनों में होस्ट सेल नेक्रोसिस की रिपोर्ट से अलग है। इस अंतर के लिए एक प्रशंसनीय व्याख्या यह है कि स्पोरोज़ोइट्स ने इग्रेशन परख आयोजित किए जाने से पहले दोहराया नहीं था। इसलिए, दो से अधिक परजीवियों ने मेजबान कोशिकाओं का निवास नहीं किया, जो पिछले अध्ययनों [19, 32] में रिपोर्ट किए गए टैचीज़ोइट्स की तुलना में बहुत कम है। एक अन्य संभावित व्याख्या यह है कि, टी.गोंडी टैचीज़ोइट्स या ईमेरियन मेरोज़ोइट्स के विपरीत, परजीवी में स्पोरोज़ोइट चरण में प्राकृतिक निकास के लिए मेजबान कोशिकाओं को नष्ट करने के लिए एक विशिष्ट प्रोटीन की कमी होती है। हालाँकि, हमें इन परिकल्पनाओं का समर्थन करने के लिए कोई प्रत्यक्ष प्रमाण नहीं मिला। हमारे परिणामों ने टी। गोंडी टैचीज़ोइट्स के विपरीत, निर्वासित स्पोरोज़ोइट्स के विषाणु में उल्लेखनीय कमी दिखाई, जो कि निर्वासन के बाद सामान्य पौरुष बनाए रखते हैं [27, 37]। हम मानते हैं कि परजीवी स्पोरोज़ोइट्स से स्किज़ोंट्स तक विकसित हो रहा था जब इग्रेशन परख किया गया था और परजीवी में चरण-विशिष्ट प्रोटीन को विनियमित करने वाली जीन अभिव्यक्ति बदल गई होगी। ईमेरियन स्पोरोज़ोइट्स के विपरीत, टी। गोंडी टैचीज़ोइट्स मेजबान कोशिकाओं में द्विआधारी विखंडन से गुजरते हैं, जिससे सामान्य पौरुष बना रहता है। इसलिए, हमने सोचा कि अगर कुछ उत्तेजक होते हैं जो ईमेरिया एसपीपी के बहिष्कार को प्रेरित कर सकते हैं। आक्रमण के बाद बाहर निकले परजीवी इन विट्रो प्रयोगों की तरह विवो में अपने सामान्य पौरुष को बनाए नहीं रख सके। यह प्रतिरक्षा-मध्यस्थ निकास परजीवी जीवनचक्र को बाधित कर सकता है और अंततः प्रतिरक्षा कोशिकाओं द्वारा परजीवी की निकासी को बढ़ावा देता है।

हाल के अध्ययनों ने एपिकोम्पलेक्सन रोगजनकों के निष्कासन में Ca2 की महत्वपूर्ण भूमिका का खुलासा किया है [7,18]। द्वितीयक संदेशवाहक इनोसिटोल 1,4,5-ट्राइफॉस्फेट (IP3), IP3 रिसेप्टर बाइंडिंग [3] के माध्यम से ER से साइटोप्लाज्म में Ca2 की रिहाई को उत्तेजित करता है। IP3 को टी.गोंडी [24] और प्लास्मोडियम फाल्सीपेरम [2] दोनों में इंट्रासेल्युलर पूल से Ca2 की रिहाई को प्रेरित करने के लिए दिखाया गया है; हालांकि, एपिकोम्पलेक्सन परजीवी [4,23] में IP3 रिसेप्टर्स की जीनोमिक उपस्थिति के बारे में बहुत कम जानकारी है। वर्तमान अध्ययन में, इंट्रासेल्युलर Ca² और IP3 मार्गों को BAPTA-AM और U -73122 का उपयोग करके अवरुद्ध किया गया था, यह जांचने के लिए कि क्या स्पोरोज़ोइट्स का NO- प्रेरित बहिर्वाह सीए प्लस-निर्भर है और Ca2t के स्रोत का निर्धारण करने के लिए। हमारे परिणामों से पता चला है कि BAPTA-AM और U -73122 दोनों द्वारा बहिष्कार को रोक दिया गया था, यह दर्शाता है कि इंट्रासेल्युलर कैप्ले ई। टेनेला स्पोरोज़ोइट इग्रेशन में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। यद्यपि हमने दिखाया कि इंट्रासेल्युलर सीए 2 प्लस परजीवी के बहिष्कार के लिए महत्वपूर्ण है, मार्ग और संबंधित प्रोटीन के कार्य को और अधिक उन्नत और सटीक तरीकों का उपयोग करके आगे के अध्ययन की आवश्यकता है।

संक्षेप में, इस अध्ययन के परिणामों से संकेत मिलता है कि NO संक्रमित पीसीके से ई. टेनेला स्पोरोज़ोइट्स के प्रारंभिक निकास को उत्तेजित कर सकता है और इस निकास के तंत्र पर प्रारंभिक जानकारी प्रदान कर सकता है। भविष्य के अध्ययनों में, हम अतिरिक्त प्रतिरक्षा अणुओं की पहचान करने की कोशिश करेंगे जो ई। टेनेला स्पोरोज़ोइट्स के शुरुआती निष्कासन को प्रेरित करते हैं और जांच करते हैं कि क्या NO इन विट्रो और विवो में चिकन आंतों के उपकला कोशिकाओं से ईमेरियन परजीवी के शुरुआती निष्कासन को प्रेरित कर सकता है।