जलीय स्पंदित विद्युत क्षेत्रों द्वारा उत्पादित आइसलैंडिक समुद्री शैवाल के अर्क की क्षमता की खोज - कॉस्मेटिक अनुप्रयोगों के लिए सहायक निष्कर्षण भाग 2

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2.5.4. Hyaluronidase निषेध गतिविधि

सभी समुद्री शैवाल के अर्क काफी अधिक प्रदर्शित हुएएंटी-हयालूरोनिडेसगतिविधि (तालिका 4), टैनिक एसिड समाधान (हयालूरोनिडेस का एक प्रसिद्ध अवरोधक) के तुलनीय परिणाम दिखा रहा है। विशेष रूप से, A.esculenta के अर्क ने परीक्षण किए गए सभी तरीकों के लिए 100 प्रतिशत निषेध दिखाया। इसके अलावा, यू. लैक्टुका अर्क ने 90 प्रतिशत से अधिक अवरोधन गतिविधियों का प्रदर्शन किया, जहां पीईएफ (96.8 प्रतिशत) द्वारा उत्पादित अर्क का निषेध और पीईएफ प्लस एचडब्ल्यू (97.3 प्रतिशत) का संयोजन पारंपरिक गर्म पानी द्वारा उत्पादित अवरोध से अधिक था। विधि 93.4 प्रतिशत )(पी<0.05). all="" p.palmaria="" extracts="" exhibited="" similar="" activities="" (p=""><0.05), the="" inhibition="" of="" the="" extracts="" produced="" by="" pef="" was="" (91.9="" %)="" and="" the="" combination="" of="" pef+="" hw="" (89.5%)="" and="" the="" traditional="" hot="" water="" method="">

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अन्य लेखकों ने भी विभिन्न समुद्री शैवाल के अर्क की एंटी-हयालूरोनिडेस गतिविधि का वर्णन किया, विशेष रूप से समृद्ध अर्क के लिएफ़्लोरोटैनिन्सभूरे शैवाल [73,74] से। हालांकि, हमारे सर्वोत्तम ज्ञान के लिए, यह पहली बार है कि पीईएफ द्वारा उत्पादित पी। पामिटेट और यू.लैक्टुका अर्क की हयालूरोनिडेस निरोधात्मक गतिविधियों की सूचना दी गई है।

सिस्टैन्च इम्युनिटी में सुधार कर सकता है

Hyaluronic एसिड डर्मिस का एक प्रमुख घटक है, जहां यह ऊतक की मरम्मत में शामिल होता है, यह उम्र बढ़ने के साथ टूट जाता है, जिससे झुर्रियां और त्वचा की मजबूती का नुकसान होता है। इस अर्थ में, हयालूरोनिडेस अवरोधक उम्र बढ़ने की उपस्थिति में सुधार के लिए त्वचीय बाह्य मैट्रिक्स के हयालूरोनिक एसिड स्तर को बढ़ाते हैंचेहरे की त्वचा[13]। इसलिए, इस अध्ययन के परिणाम कॉस्मेटिक उत्पादों में संभावित उपयोग के साथ शैवाल संसाधनों से प्राकृतिक hyaluronidase अवरोधकों के शोषण के लिए नए रास्ते खोल सकते हैं।

सारांश में, एकत्र किए गए डेटा ने हमें यह निष्कर्ष निकालने की अनुमति दी कि ए.एस्कुलेंटा के अर्क ने परीक्षण किए गए एंजाइमों की ओर पी.पल्मारिया और यू। लैक्टुका की तुलना में समग्र बेहतर निरोधात्मक गतिविधियों का प्रदर्शन किया। इस प्रकार, उत्कृष्ट के साथ सबसे होनहार समुद्री शैवाल प्रजाति होने के नातेविरोधी एंजाइमीगतिविधियों और इसलिए इसे हमारी प्रयोगशाला में आगे के अध्ययन के लिए चुना गया था। हालांकि ए.एसकुलेंटा के कच्चे अर्क इन विट्रो प्रयोगों में अच्छे उम्मीदवार प्रतीत होते हैं, इन जैविक प्रभावों के लिए जिम्मेदार मेटाबोलाइट्स की पहचान को स्पष्ट करने के लिए आगे के अध्ययन किए जाने की आवश्यकता है।

2.6.रासायनिक यौगिकों और जैव सक्रिय गुणों के बीच संबंध

प्रमुख घटक विश्लेषण (पीसीए) के परिणामों से पता चला है कि समूहों के मुख्य पृथक्करण को पीसी1 और पीसी2 द्वारा परिभाषित किया गया था, जो डेटा में क्रमशः 71.9 प्रतिशत और 14.5 प्रतिशत विचरण के लिए जिम्मेदार था (चित्र 2)। A.esculenta के अर्क में फ्लेवोनोइड्स और फेनोलिक यौगिकों की उच्च सामग्री, एंजाइमों पर निरोधात्मक प्रभाव (कोलेजनेज, टायरोसिनेस और इलास्टेज), और DPPH और FRAP मूल्यों की विशेषता थी, अन्य प्रजातियों की तुलना में, पी। पालमाटा और उल। लैक्टुका। दूसरी ओर, A.esculenta में कार्बोहाइड्रेट की मात्रा कम थी, विशेष रूप से P. Palmitate (जो PC1 के विपरीत दिशा में स्थित था) की तुलना में। PC2 के साथ डेटा में भिन्नता मुख्य रूप से ABTS और . से संबंधित थीहयालूरोनिडेसनिषेध जैसा कि भूखंड पर स्थान से संकेत मिलता है, पी। पालमाता का एबीटीएस के साथ एक मजबूत संबंध था, जबकि यू। लैक्टुका से अधिक संबंधित था।हयालूरोनिडेसइन दो प्रजातियों की तुलना में निषेध प्रभाव।

टीपीसी, टीएफसी, डीपीपीएच, एफआरएपी, और कोलेजनेज, इलास्टेज और पर निरोधात्मक प्रभावों के बीच एक उच्च और महत्वपूर्ण सकारात्मक सहसंबंधटायरोसिनेसपियर्सन सहसंबंध विश्लेषण (तालिका 5) द्वारा प्रदर्शित किया गया था।

चित्रा 2. प्रमुख घटक विश्लेषण (पीसीए) कारक लोडिंग (काले घेरे) और शैवाल के अर्क के लिए स्कोर (पी। पालमेटा: ब्राउन डॉट्स (ऊपरी दाएं); यू। लैक्टुका: हरे त्रिकोण (मुख्य रूप से ऊपरी बाएं में); ए एस्कुलेंटा: नीला वर्ग (भूखंड का निचला हिस्सा)।

यह पिछले अध्ययनों के साथ एक समझौते में था, जिसमें बताया गया था कि फेनोलिक यौगिक (फ्लेवोनोइड्स सहित) विभिन्न समुद्री खरपतवारों की एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि में मुख्य योगदानकर्ता हैं [75-77]। ब्राउन मैक्रोएल्गे से अर्क की उच्च एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि पॉलीफेनोल्स, फ़्लोरोटैनिन के एक विशिष्ट समूह और उनकी अनूठी आणविक संरचना से संबंधित है। भूरे शैवाल के Phlorotannis में आठ इंटरकनेक्टेड फिनोल रिंग होने की सूचना है जो इलेक्ट्रॉन जाल [78,79] के रूप में कार्य करते हैं। यह उम्मीद की गई थी कि एबीटी टीपीसी, अन्य एंटीऑक्सीडेंट मापदंडों के साथ सहसंबद्ध होंगे। संभावित कारण यह हो सकते हैं कि विधियाँ विभिन्न प्रतिक्रिया स्थितियों पर आधारित होती हैं और यह कि प्रतिक्रियाशीलता समय और घटकों की सीमा दोनों के संबंध में भिन्न होती है। उदाहरण के लिए, ABTS अभिकर्मक की एक विस्तृत श्रृंखला के साथ प्रतिक्रिया करता हैएंटीऑक्सीडेंटडीपीपीएच रेडिकल [80] की तुलना में। दूसरी ओर, एबीटीएस के लिए उल्लिखित सीमाओं में से एक लंबी प्रतिक्रिया है और सामान्य प्रतिक्रिया समय एक समापन बिंदु तक पहुंचने की अनुमति नहीं दे सकता है।

परिणाम दर्शाते हैं कि कोलेजनेज, इलास्टेज, और टायरोसिनेस ({{0}}.93-0.99) की निरोधात्मक गतिविधि के लिए टीपीसी और टीएफसी का एक उच्च सकारात्मक सहसंबंध है, जबकि निषेध का संबंध हयालूरोनिडेस की मात्रा उतनी मजबूत नहीं थी (क्रमशः r=0.42 और 0.54,)। यह इंगित करता है कि अन्य घटकों ने अर्क के निरोधात्मक प्रभाव में योगदान दिया हो सकता है। अन्य अध्ययनों से पता चला है कि पॉलीसेकेराइड में हयालूरोनिडेस-निरोधात्मक गतिविधि होती है, उदाहरण के लिए भूरे शैवाल में एल्गिनिक एसिड [81,82]। प्रत्येक रासायनिक घटक के योगदान का मूल्यांकन करने के लिए एंजाइम पर पृथक यौगिकों के प्रभावों के लिए मैक्रोएल्गे प्रजातियों की रासायनिक संरचना पर आगे के अध्ययन की आवश्यकता है क्योंकि इस अध्ययन में कच्चे अर्क पर ध्यान केंद्रित किया गया था।

निष्कर्ष पिछले अध्ययनों के अनुरूप थे, जिसमें कहा गया था कि रासायनिक संरचना और अर्क की जैव-सक्रियता के स्तर तीन वंशों (लाल, हरे और भूरे रंग के शैवाल) और एक ही जाति से संबंधित विभिन्न प्रजातियों के बीच काफी भिन्न होते हैं और उम्र से प्रभावित होते हैं। और ऊतक प्रकार। इसके अलावा, संरचना और विशेषताएं मैक्रोएल्गे के वितरण और विकास को प्रभावित करने वाले कई पर्यावरणीय कारकों पर निर्भर करती हैं। उदाहरण के लिए, प्रकाश (यूवी-विकिरण), तापमान, पोषक तत्वों की उपलब्धता, हवा के संपर्क में, पानी की गति, तरंग जोखिम और लवणता। तापमान को वर्णक गठन और पोषक तत्वों की एकाग्रता, लवणता और यूवी विकिरण पर सबसे मजबूत प्रभाव वाले कारक के रूप में वर्णित किया गया है, जो टीपीसी [83] की एकाग्रता को प्रभावित करने वाले कारक हैं।

विभिन्न मैक्रोएल्गे प्रजातियों का वितरण पानी की गहराई के साथ बदलता रहता है। अंतर्ज्वारीय या तटवर्ती क्षेत्र में तट के ऊपर की स्थिति अधिक तनावपूर्ण होती है क्योंकि वहां उगने वाली प्रजातियों को ज्वारीय परिवर्तनों के कारण अजैविक कारकों में कई परिवर्तनों का सामना करना पड़ता है। उदाहरण के लिए, हवा का सुखाने का प्रभाव, उच्च सौर विकिरण (कम ज्वार पर), लवणता और तापमान में परिवर्तन और, ठंड सहित कम हवा के तापमान की स्थिति में। कम पानी के निशान के नीचे, गहराई बढ़ने से प्रकाश की तीव्रता में बहुत तेजी से कमी आती है और विकिरण के संपर्क में कमी आती है।

ज्वारीय सीमा में उगने वाले शैवाल में यूवी विकिरण के प्रति संवेदनशीलता कम होती है और सौर तनाव से अधिक तेजी से उबरते हैं। जबकि उप-क्षेत्र में उगने वाले शैवाल यूवी विकिरण के प्रति अधिक संवेदनशील होते हैं और सौर तनाव से कम वसूली करते हैं [84]। साथ ही जल स्तंभ सुरक्षा प्रदान करता है। वर्तमान अध्ययन में, अन्य प्रजातियों की तुलना में पी. पालमाटा के लिए सूर्य के प्रकाश का संपर्क संभवतः अधिक मजबूत था। अन्य अध्ययनों से पता चला है कि एमएए का गठन सीधे सूर्य के प्रकाश से संबंधित है [85], जो जीवों को यूवी-ए और यूवी-बी विकिरण से बचाता है। इसके अलावा, यह दिखाया गया था कि बढ़ती हुई गहराई के साथ एमएए की विशिष्ट मात्रा में कमी आई है। A.esculenta जैसे केल्प्स, ऊपरी उप-क्षेत्रीय क्षेत्र में बढ़ने के लिए जाने जाते हैं, लेकिन निम्न वॉटरमार्क के ठीक ऊपर सबसे निचले इंटरटाइडल में भी विस्तारित होते हैं। मतलब पानी के स्तंभ ने पी.पालमाता की तुलना में अधिक मजबूत सुरक्षा प्रदान की। इसके अलावा, रूपात्मक विशेषताएं अलग हैं, ए.एसकुलेंटा के ब्लेड अन्य दो प्रजातियों की तुलना में अधिक मोटे हैं। यूआई। लैक्टुका, मुख्य रूप से इंटरटाइडल और सबलिटोरल में बढ़ रहा है, बहुत कम विकिरणों के तहत प्रकाश संश्लेषण और बढ़ने में सक्षम है। यूवीबी प्रकाश के संपर्क में यूवीए प्रकाश के नकारात्मक प्रभावों से यू. लैक्टुका के प्रकाश संश्लेषक मापदंडों की वसूली में तेजी लाने के लिए कहा गया है। यह A.esculenta (5-7 veer) और P. Palmata दोनों की तुलना में छोटी, संरचना में सरल, और कम अवधि (3 महीने) है, जिसमें हर साल एक नई वृद्धि होती है।

संक्षेप में, यह अनुमान लगाया जा सकता है कि अर्क के गुणों में मुख्य अंतर जीवन काल में भिन्नता, रूपात्मक विशेषताओं और शैवाल प्रजातियों की वृद्धि की स्थिति है।

3. सामग्री और तरीके 3.1.सामग्री

आइसलैंडिक समुद्री शैवाल U.lactuca (हरा शैवाल), A.esculenta (भूरा शैवाल), और P. Palmitate (लाल शैवाल) आइसलैंडिक ब्लू मसल्स और समुद्री शैवाल द्वारा प्रदान किए गए थे, जिन्हें Breidafjordur (पश्चिम-आइसलैंड) में समुद्री-खरपतवार काटा गया था। कटाई के बाद समुद्री शैवाल को सुखाया गया (लगभग 90 प्रतिशत शुष्क सामग्री तक), मिल्ड किया गया, और वैक्यूम पैक किया गया। उपयोग किए जाने तक नमूनों को कमरे के तापमान पर एक सूखी और अंधेरी जगह में रखा गया था।

मशरूम से टायरोसिनेस, एल-3,4-डायहाइड्रोक्सीफेनिलएलनिन (एल-डीओपीए), पोर्सिन अग्न्याशय से इलास्टेज, एस्कॉर्बिक एसिड, एन-सुक्सिनिल-अला-अला-अला-पी-नाइट्रोएनिलाइड (एएएपीवीएन), हायलूरोनिडेस से गोजातीय वृषण, क्वेरसेटिन, -टोकोफेरोल, टैनिक एसिड, 2,2-डिपेनिल-1-पिक्रिलहाइड्राज़िल (DPPH),24,6-Tripyridyl-s-Triazine (TPTZ), ट्रोलॉक्स, फोलिन-सियोकाल्टु अभिकर्मक, गैलिक एसिड, और एक कोलेजनेज़ गतिविधि वर्णमिति परख किट (MAK293) सिग्मा-एल्ड्रिच कंपनी (सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) से खरीदे गए थे। Hyaluronic एसिड सोडियम नमक MakeCosmetics (Redmond, WA, USA) से खरीदा गया था। उपयोग किए गए अन्य सभी रसायन और अभिकर्मक विश्लेषणात्मक ग्रेड थे और वीडब्ल्यूआर इंटरनेशनल, एलएलसी से प्राप्त किए गए थे। पानी आधारित समाधान निकालने और तैयार करने के लिए विआयनीकृत पानी (एलिक्सएसेंशियल, मर्क, डार्मस्टैड, जर्मनी) का उपयोग किया गया था।

3.2. प्रयोगात्मक परिरूप

आइसलैंडिक समुद्री शैवाल प्रजातियों (U.lactuca, A.esculenta, P. Palmata) और निष्कर्षण उपचार (गर्म पानी निष्कर्षण (HW, 95 डिग्री C), PEF- सहायता प्राप्त निष्कर्षण (PEF) और के संयोजन के प्रभावों का मूल्यांकन करने के लिए एक फैक्टोरियल डिज़ाइन का उपयोग किया गया था। दोनों तकनीकों (पीईएफ प्लस एचडब्ल्यू), अर्क संरचना और बायोएक्टिविटी (तालिका 6) पर। निष्कर्षण प्रत्येक समूह के लिए तीन प्रतियों में किया गया था और प्रत्येक अर्क प्रतिकृति का तीन प्रतियों में विश्लेषण किया गया था।

3.3. आइसलैंडिक समुद्री शैवाल से बायोएक्टिव्स का निष्कर्षण

विभिन्न स्तरों पर मैक्रोएल्गल बायोमास के दोहन ने वैज्ञानिकों को हरित निष्कर्षण दृष्टिकोण के आधार पर अधिक पर्यावरण के अनुकूल, कुशल और लागत प्रभावी निष्कर्षण तकनीकों का पता लगाने के लिए प्रेरित किया है। इस काम में, पीईएफ-सहायता प्राप्त निष्कर्षण का मूल्यांकन कार्यात्मक अर्क के उत्पादन के लिए एक उपन्यास और हरी विधि के रूप में किया गया था, जबकि तुलना के लिए पारंपरिक गर्म पानी निष्कर्षण का उपयोग किया गया था। इसके अलावा, दोनों तकनीकों के संयोजन के प्रभाव, मैक्रोएल्गे के पीईएफ उपचार के बाद पारंपरिक गर्म पानी की निकासी, बायोएक्टिव रिकवरी पर अध्ययन किया गया था। भौतिक उपचार के बाद कोशिका झिल्लियों में उत्पन्न अपेक्षित विद्युतीकरण के कारण, गर्म पानी के साथ निम्नलिखित निष्कर्षण इंट्रासेल्युलर सामग्री [86] की निकासी को और अधिक सुविधाजनक बना सकता है, जिससे निष्कर्षण उपज बढ़ जाती है। सामग्री को कोशिकाओं से बाहर फैलाने के लिए उपचार के बाद एक समय की आवश्यकता होती है [87,88], और इस प्रयोग में, लुगदी से तरल (अर्क) के अलग होने तक निलंबन रात भर इंतजार करते रहे।

निष्कर्षण माध्यम के संबंध में, विषाक्त और कार्बनिक सॉल्वैंट्स के उपयोग से संबंधित सीमाओं को दूर करने के लिए समुद्री शैवाल के अर्क का उत्पादन करने के लिए आसुत जल का उपयोग किया गया था। समुद्री शैवाल [46,89-91] से कई जैव सक्रिय यौगिकों के निष्कर्षण के लिए पानी एक अच्छा विलायक साबित हुआ और पर्यावरण के अनुकूल है। इसके अलावा, पीईएफ-सहायता प्राप्त निष्कर्षण के लिए आमतौर पर पानी का उपयोग किया जाता है क्योंकि यह बिजली के लिए एक अच्छा संवाहक है।

3.3.1. निष्कर्षण प्रक्रिया

प्रत्येक समूह में प्रत्येक प्रतिकृति के लिए, समुद्री शैवाल (15 ग्राम) को रात भर कमरे के तापमान (22 डिग्री) पर विआयनीकृत पानी (300 एमएल) में भिगोया गया। फिर, निलंबन को पीईएफ (पीईएफ), गर्म (एचडब्ल्यू), या पीईएफ-उपचार और गर्म (पीईएफ प्लस एचडब्ल्यू) दोनों के साथ इलाज किया गया था। निलंबन को रात भर रेफ्रिजरेटर में रखा गया और उसके बाद मोटे 20 माइक्रोन） फिल्टर पेपर से छान लिया गया। तब छानना (अर्क) उनके विश्लेषण तक 4 डिग्री पर संग्रहीत किया गया था।

स्पंदित विद्युत क्षेत्र-सहायता प्राप्त निष्कर्षण घर में निर्मित पल्स जनरेटर का उपयोग करके किया गया था। इसमें एक FuGHCK-200-2000 कैपेसिटर (Fu.G.Elektronik GmbH, Rosenheim, Germany) और स्पार्क गैप (18.5 kV OG75, Perkin-Elmer Optoelectronics, GMBH, Wiese-baden, Germany) था। पीईएफ उपकरण ने घातीय क्षय दालों को 0.96 यूएस की चौड़ाई और 18 केवी के आयाम के साथ उत्पन्न किया। आयाम (एल × एच × डब्ल्यू) 20 × 8 × 2.5 सेमी के साथ एक प्लेक्सीग्लस उपचार कक्ष, प्लेट इलेक्ट्रोड के बीच सबसे कम दूरी के साथ 10 मिनट के लिए 1.2 हर्ट्ज पर 8 केवी / सेमी विद्युत क्षेत्र के साथ निलंबन का इलाज करने के लिए उपयोग किया जाता था। एक थर्मोस्टेटिक पानी के स्नान में एक बीकर में निलंबन को गर्म करके एचडब्ल्यू-अर्क तैयार किया गया था और 45 मिनट के लिए 95 डिग्री पर रखा गया था। संयुक्त स्पंदित विद्युत क्षेत्र और हीटिंग उपचार के लिए, निलंबन पीईएफ का इलाज किया गया और फिर एक बीकर में रखा गया, पानी के स्नान में गरम किया गया, और 45 मिनट के लिए 95 डिग्री पर रखा गया।

3.3.2. चालकता, पीएच, और तापमान माप

एक चालकता से लैस पीएच-मीटर (ओरियन स्टारटीएम ए215 पीएच / कंडक्टिविटी बेंचटॉप मीटर, थर्मो साइंटिफिक, वॉलथम, एमए, यूएसए) का उपयोग करके, कमरे के तापमान पर, भिगोने के बाद और निष्कर्षण उपचार के बाद, समुद्री शैवाल निलंबन की विद्युत चालकता और पीएच को मापा गया। सेंसर और पीएच/एआरसी ट्रायोड संयोजन इलेक्ट्रोड। इसके अलावा, उपचार के कारण तापमान में परिवर्तन दर्ज किया गया।

3.4. समुद्री शैवाल के अर्क के वर्णक्रमीय प्रोफाइल

विभिन्न समुद्री शैवाल के अर्क के यूवी-विज़ अवशोषण स्पेक्ट्रा को 1 सेमी क्वार्ट्ज क्यूवेट के साथ डबल बीम थर्मो साइंटिफिक इवोल्यूशन 350 यूवी-विज़ स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (थर्मो फिशर साइंटिफिक, वॉलथम, एमए, यूएसए) का उपयोग करके 200 से 450 एनएम की सीमा के लिए मापा गया था। प्रत्येक समुद्री शैवाल निकालने के लिए तीन स्कैन किए गए। 3.5. कुल पॉलीफेनोलिक सामग्री का निर्धारण

समुद्री शैवाल के अर्क में कुल फेनोलिक सामग्री (टीपीसी) को झांग [92] द्वारा एक मल्टीस्कैन स्काई माइक्रोप्लेट स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (थर्मो फिशर साइंटिफिक, वॉलथम, एमए, यूएसए）) का उपयोग करके वर्णित थोड़ी संशोधित विधि के बाद फोलिन-सियोकाल्टू अभिकर्मक का उपयोग करके निर्धारित किया गया था। 20 μL समुद्री शैवाल निकालने या सीरियल मानक समाधान को 100 μL फोलिन-सियोकाल्टू अभिकर्मक （10 प्रतिशत आसुत जल में मिलाया गया था। 5 मिनट के बाद, 7.5 प्रतिशत (ओ / डब्ल्यू) सोडियम कार्बोनेट समाधान का 80 μL जोड़ा गया था। प्रतिक्रिया मिश्रण 30 मिनट के लिए कमरे के तापमान और अंधेरे में ऊष्मायन किया गया था। अवशोषण को 760 एनएम की तरंग दैर्ध्य पर मापा गया था। आसुत जल को खाली के रूप में इस्तेमाल किया गया था। गैलिक एसिड के एक मानक वक्र का उपयोग कुल फेनोलिक सामग्री को निर्धारित करने के लिए किया गया था और इसे गैलिक एसिड समकक्षों के कुरूप के रूप में व्यक्त किया गया था। (जीएई) प्रति ग्राम सूखी सामग्री (यूजी जीएई/जी डीडब्ल्यू)।

3.6. कुल फ्लेवोनोइड सामग्री का निर्धारण

समुद्री शैवाल के अर्क में कुल फ्लेवोनोइड सामग्री (TFC) कामटेकर 93】 द्वारा वर्णित विधि द्वारा निर्धारित की गई थी और 96-अच्छी तरह से माइक्रोप्लेट्स के लिए अनुकूलित की गई थी। संक्षेप में, 25 μL समुद्री शैवाल निकालने या सीरियल मानक समाधान की मात्रा को 1 0 0 μL सोडियम नाइट्राइट （0.375 प्रतिशत w/v） के साथ मिलाया गया था। 5 मिनट के बाद, मिश्रण में 25 μL एल्यूमीनियम क्लोराइड 3 प्रतिशत w/v） मिलाया गया और कमरे के तापमान पर 6 मिनट के लिए इनक्यूबेट किया गया। फिर, मिश्रण में 100 uL सोडियम हाइड्रॉक्साइड (2 प्रतिशत w/v) मिलाया गया और मिलाया गया। तुरंत, अवशोषण को 510 एनएम के तरंग दैर्ध्य पर मापा गया। आसुत जल और इथेनॉल को रिक्त स्थान के रूप में उपयोग किया जाता था। क्वेरसेटिन का एक मानक वक्र (इथेनॉल में घुला हुआ) का उपयोग कुल फेनोलिक सामग्री को निर्धारित करने के लिए किया गया था और इसे क्वेरसेटिन समकक्षों के कुरूप के रूप में व्यक्त किया गया था। 3.7. कार्बोहाइड्रेट सामग्री का निर्धारण

मुक्त शर्करा की मात्रा को [94] द्वारा वर्णित विधि के अनुसार मामूली संशोधनों के साथ मापा गया था। 100μL नमूने या मानक घोल में 50 μL फिनोल घोल 4 प्रतिशत और 250 μL सल्फ्यूरिक एसिड （96 प्रतिशत मिलाया गया। कमरे के तापमान पर ऊष्मायन के 10 मिनट के बाद, मिश्रण का अवशोषण 490 एनएम पर पढ़ा गया था। ग्लूकोज के एक मानक वक्र का उपयोग कुल कार्बोहाइड्रेट सामग्री को निर्धारित करने के लिए किया गया था और इसे मिलीग्राम ग्लूकोज समकक्ष (ग्लूई) प्रति ग्राम सूखी सामग्री (मिलीग्राम ग्लूई / जी डीडब्ल्यू) के रूप में व्यक्त किया गया था।

3.8. समुद्री शैवाल के अर्क के एंटीऑक्सीडेंट गुण

3.8.1.2,2 डिपेनिल-1-पिक्रिलहाइड्राज़िल (DPPH) मुक्त रेडिकल मैला ढोने वाला परख

समुद्री शैवाल के अर्क की एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि (DPPH) कुछ संशोधनों के साथ पहले वर्णित कार्यप्रणाली 94】 के बाद निर्धारित की गई थी। संक्षेप में, 10.825 × 10-5 एम डीपीपीएच समाधान के 200 μL को मेथनॉल में 100 μLof नमूना （1∶1 में 96-वेल प्लेट में जोड़ा गया था। DPPH की समान मात्रा को 50μL मानक प्लस 50 μL मेथनॉल के साथ मिलाया गया था। फिर नमूनों और मानक को 30 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर एक अंधेरी जगह में ऊष्मायन किया गया। अवशोषण को 517 एनएम के तरंग दैर्ध्य पर मापा गया था। आसुत जल का उपयोग रिक्त के रूप में किया जाता था। DPPH रेडिकल को परिमार्जन करने की क्षमता की गणना निम्नलिखित समीकरण का उपयोग करके की गई थी:

जहां एक नियंत्रण नियंत्रण का अवशोषण है (नमूने के बिना डीपीपीएच समाधान), ए नमूना परीक्षण नमूने (डीपीपीएच समाधान प्लस परीक्षण नमूना) का अवशोषण है, एक नमूना रिक्त केवल नमूने का अवशोषण है (डीपीपीएच समाधान के बिना नमूना ) और अमेथेनॉल ब्लैंक केवल मेथनॉल का अवशोषण है। वाणिज्यिक एंटीऑक्सिडेंट (एस्कॉर्बिक एसिड, गैलिक एसिड और -टोकोफ़ेरॉल) का उपयोग सकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया गया था।

3.8.2. फेरिक आयन कम करने वाली एंटीऑक्सीडेंट शक्ति (FRAP) परख

FRAP गतिविधि को बेंजी और स्ट्रेन [95] की विधि के अनुसार मापा गया था। संक्षेप में, एसीटेट बफर (300 मिमी, पीएच 3.6), 2,4, 6- 40 मिमी एचसीएल में ट्रिपाइरिडिल-एस-ट्रायज़िन (टीपीटीजेड) 10 मिमी, और FeCl3 · 6H2O (20 मिमी) अनुपात में मिश्रित थे। 10:1:1 का कार्यशील FRAP अभिकर्मक प्राप्त करने के लिए। प्रतिक्रिया मिश्रण 37 डिग्री सेल्सियस पर 10 मिनट के लिए ऊष्मायन किया गया था। कमरे के तापमान पर 8 मिनट के लिए प्रत्येक अर्क से A50μL का नमूना 150μL काम कर रहे FRAP समाधान के साथ मिलाया गया था। रंगीन उत्पाद, फेरस-टीपीटीजेड का अवशोषण 593 एनएम के तरंग दैर्ध्य पर मापा गया था। समुद्री शैवाल के अर्क के FRAP मूल्यों को ट्रोलॉक्स समकक्षों के μM के रूप में व्यक्त किया गया था TE） प्रति ग्राम सूखी सामग्री।

3.8.3.2,2 एज़िनो-बीआईएस (3-एथिलबेनज़ोथियाज़ोलिन-6-सल्फोनिक एसिड) (एबीटीएस) परख

कुछ संशोधनों के साथ ABTS विरंजन प्रोटोकॉल [76] का उपयोग करके विश्लेषण किया गया था। एबीटीएस (66 मिलीग्राम) को 1 0 एमएल पोटेशियम पर्सल्फेट समाधान (2.45 मिमी) के साथ प्रतिक्रिया करके एक एबीटीएस कट्टरपंथी कटियन (एबीटीएस प्लस) का उत्पादन किया गया था। मिश्रण को कमरे के तापमान पर 12-16 के लिए अंधेरे में छोड़ दिया गया था। एच उपयोग करने से पहले। ABTS प्लस समाधान को पानी से 734 एनएम पर 0.700 के अवशोषण के लिए पतला किया गया था। प्रतिक्रिया मिश्रण (200 उल) को एक माइक्रोप्लेट में स्थानांतरित किया गया था, 50 यूएल नमूना जोड़ा गया था और फिर अभिकर्मक समाधान के 150 यूएल। मध्यम गति से प्लेट को 10 एस के लिए हिलाया गया था, और कमरे के तापमान पर ऊष्मायन के 5 मिनट के बाद अवशोषण को 734 एनएम पर मापा गया था। ट्रॉलॉक्स मानकों के A734nm के निषेध को उनकी सांद्रता के एक कार्य के रूप में प्लॉट करके एक मानक वक्र तैयार किया गया था। नमूनों के ट्रॉलॉक्स समकक्ष एंटीऑक्सीडेंट क्षमता (TEAC) मूल्य की गणना प्रत्येक नमूने के लिए A734nm मानों के स्थान पर मानक वक्र के रैखिक प्रतिगमन से प्राप्त समीकरण का उपयोग करके की गई थी:

एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि को टीईएसी सांद्रता, उमोल/जी शुष्क भार शैवाल के रूप में व्यक्त किया गया था।

3.9. समुद्री शैवाल के अर्क की एंटी-एंजाइमी गतिविधियां 3.9.1। Collagenase निषेध परख

सिग्मा-एल्ड्रिच से खरीदी गई एक कोलेजनेज़ गतिविधि वर्णमिति परख किट (MAK293) का उपयोग समुद्री शैवाल के अर्क के कोलेजनेज़ निषेध को निर्धारित करने के लिए किया गया था। किट ने एक सिंथेटिक पेप्टाइड (FALGPA) का उपयोग करके कोलेजनेज गतिविधि को मापा जो कोलेजन की संरचना की नकल करता है। प्रक्रिया किट निर्देशों के अनुसार की गई थी।

3.9.2। इलास्टेज निषेध परख

समुद्री शैवाल के अर्क के इलास्टेज निषेध की जांच टीआरआईएस बफर समाधान में संशोधित विधि के साथ की गई थी जैसा कि पहले 96】 में वर्णित है। संक्षेप में, 100μL 0.1 M TRISbuffer समाधान （pH8.0）, TRISbuffer） में elastase（1 U/mL का 25 μL और 25μL नमूना अर्क मिश्रित और 30 मिनट पर 15 मिनट के लिए ऊष्मायन किया गया था। सी प्रतिक्रिया शुरू करने के लिए सब्सट्रेट जोड़ने से पहले। ऊष्मायन समय के बाद, 2 मिमी एएएपीवीएन समाधान के 50 यूएल जोड़ा गया था। फिर, 30 डिग्री सेल्सियस के निरंतर तापमान के तहत माइक्रोप्लेट रीडर का उपयोग करके 20 मिनट के लिए 420 एनएम पर अवशोषण की निगरानी की गई। अंत में, समीकरण का उपयोग करके प्रतिशत में इलास्टेज निषेध की गणना की गई:

जहां ABS नियंत्रण अवरोधक (नमूना) के बजाय बफर का उपयोग करके परख का अवशोषण है और Abssampleis नमूना अर्क का अवशोषण है। क्वेरसेटिन का उपयोग सकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया गया था। ट्रिस बफर को खाली के रूप में इस्तेमाल किया गया था।

3.9.3। टायरोसिनेस निषेध परख

Tyrosinase निरोधात्मक परख सब्सट्रेट के रूप में L-DOPA का उपयोग करके पहले 66】 द्वारा वर्णित विधि के अनुसार किया गया था। नमूने का 20 μL, मशरूम टाइरोसिनेस घोल का 10 μL 50 U/mL फॉस्फेट बफर में और 80 μL फॉस्फेट बफर pH =6.8-को एक माइक्रोप्लेट में मिलाया गया और 37 डिग्री पर प्री-इनक्यूबेट किया गया। 5 मिनट के लिए फिर, L-DOPA का 90 μL (2 mg/mL) जोड़ा गया। 37 डिग्री के निरंतर तापमान के तहत माइक्रोप्लेट रीडर में 475 एनएम पर 20 मिनट के लिए डोपाक्रोम के गठन की तुरंत निगरानी की गई। टायरोसिनेस एंजाइम के प्रतिशत निषेध की गणना समीकरण का उपयोग करके की गई थी:

जहां एबीएस नियंत्रण अवरोधक (नमूना) के बजाय बफर का उपयोग करके परख का अवशोषण है और एबीएस नमूना नमूना निष्कर्षों का अवशोषण है। क्वेरसेटिन का उपयोग सकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया गया था। फॉस्फेट बफर का उपयोग रिक्त के रूप में किया गया था।

3.9.4. Hyaluronidase निषेध परख

Hyaluronidase निरोधात्मक गतिविधि को कुछ संशोधनों के साथ [66] द्वारा पहले वर्णित के रूप में मापा गया था। 100 यूलोफ़ टाइप-1-सबोवाइन टेस्ट्स हाइलूरोनिडेस（2100 U/mL） की मात्रा 0.1 M में घुली हुई है एसीटेट बफर-पीएच 3.5-को 100 μL अर्क के साथ मिलाया गया और 20 मिनट के लिए 37 डिग्री पर ऊष्मायन किया गया। प्रतिक्रिया मिश्रण में 6 मिमी कैल्शियम क्लोराइड के 200 μL की मात्रा को जोड़ा गया था, और फिर मिश्रण को 20 मिनट के लिए 37 डिग्री पर ऊष्मायन किया गया था। इस Ca2 प्लस सक्रिय hyaluronidase को 250 μL सोडियम हाइलूरोनेट-1.2 मिलीग्राम / एमएल-0.1 एम एसीटेट बफर (पीएच 3.5) में भंग कर दिया गया था और फिर 40 मिनट के लिए 37 डिग्री पर पानी के स्नान में ऊष्मायन किया गया था। 0.9 एम सोडियम हाइड्रोक्साइड का 50 μL और 0.2 एम सोडियम बोरेट के 100 μL को प्रतिक्रिया मिश्रण में जोड़ा गया, और फिर 5 मिनट के लिए उबलते पानी के स्नान में डाला गया। कमरे के तापमान को ठंडा करने के बाद, प्रतिक्रिया मिश्रण में 250 μL p-dimethylaminobenzaldehvde DAMB） घोल मिलाया गया। DAMB के 0.25 ग्राम को 100 प्रतिशत एसिटिक एसिड के 21.88 एमएल और 10N हाइड्रोक्लोरिक एसिड के 3.12 मिलीलीटर में घोलकर तैयार किया गया था। नियंत्रण समूह को निकालने के बजाय 5 प्रतिशत पानी के 100μL के साथ इलाज किया गया था। अवशोषण को 45 मिनट के बाद 585 एनएम के तरंग दैर्ध्य पर मापा गया था। प्रतिशत एंजाइम निषेध की गणना निम्नलिखित समीकरण का उपयोग करके की गई थी:

जहां एबीएस नियंत्रण अवरोधक (नमूना) के बजाय बफर का उपयोग करके परख का अवशोषण है और एबीएस नमूना नमूना निष्कर्षों का अवशोषण है। टैनिक एसिड का उपयोग संदर्भ मानक के रूप में किया जाता है।

3.10. सांख्यिकीय विश्लेषण

प्रत्येक अर्क के तीन प्रतियों के विश्लेषण के औसत की गणना की गई और प्रत्येक समूह (n=3) के लिए माध्य मान और मानक विचलन खोजने के लिए उपयोग किया गया। मापा चरों पर प्रायोगिक कारकों (प्रजातियों और निष्कर्षण विधियों) के मुख्य प्रभावों और दो-तरफा बातचीत का मूल्यांकन करने के लिए निश्चित कारकों के लिए सामान्य रैखिक मॉडल (जीएलएम) लागू किए गए थे। इसके अलावा, ANOVA और Tukey-Kramer परीक्षण का उपयोग महत्वपूर्ण (p .) की पहचान करने के लिए किया गया था<0.05)differences between="" the="" groups.="" pearson="" correlation="" was="" used="" to="" evaluate="" the="" linear="" relationship="" between="" the="" variables.="" principal="" component="" analysis(pca)was="" used="" to="" detect="" structure="" in="" the="" relationship="" between="" measured="" variables="" and="" experimental="" factors.="" the="" pca="" reduces="" voluminous="" data="" to="" a="" small="" set="" of="" linear="" combinations="" of="" related="" variables="" (i.e.,="" factors)="" based="" on="" patterns="" of="" correlation="" among="" the="" original="" variables.="" the="" resulting="" linear="" attribute="" combinations="" can="" be="" used="" for="" profiling="" specific="" product="" characteristics="" based="" on="" the="" variables="" studied.="" all="" statistical="" analyses="" were="" performed="" using="" ncss="" 2020="" statistical="" software="" (2020)="" (ncss,="" llc.,="" kaysville,="" ut,="">

4। निष्कर्ष

इस पहले स्क्रीनिंग प्रयोग के परिणामों ने कई मार्गों के माध्यम से प्रभावी लाभकारी प्रभाव प्रदान करके तीन आइसलैंडिक समुद्री शैवाल प्रजातियों की क्षमता को दिखाया। जलीय स्पंदित विद्युत क्षेत्रों का उपयोग करके विकसित हरे रंग के दृष्टिकोण ने पारंपरिक गर्म पानी निष्कर्षण के समान परिणाम प्रदर्शित किए, इसकी गैर-थर्मल प्रकृति और कम निष्कर्षण समय (10 मिनट बनाम 45 मिनट) जैसे कई फायदे दिखाए। तीन शैवाल प्रजातियों में से, ब्राउन मैक्रोएल्गे ए.एस्कुलेंटा ने टीपीसी और टीएफसी की उच्चतम सामग्री को भी सबसे बड़ी एंटीऑक्सीडेंट क्षमता का प्रदर्शन किया, इसके अलावा, ए। एस्कुलेंटा पानी के अर्क ने पी। पामेरिया और यू। लैक्टुका की तुलना में कोलेजनेज, इलास्टेज, की तुलना में बेहतर निरोधात्मक गतिविधियों का प्रदर्शन किया। टाइरोसिनेस, और हाइलूरोनिडेस सबसे होनहार समुद्री शैवाल प्रजाति है, जो त्वचा को गोरा करने, उम्र बढ़ने और त्वचा के स्वास्थ्य में उनके उपयोग के लिए उत्कृष्ट एंटी-एंजाइमी गतिविधियों के साथ है। दिलचस्प बात यह है कि पीईएफ विधि द्वारा उत्पादित ए। एस्कुलेंटा के अर्क में 91 प्रतिशत का कोलेजनेज निषेध दिखाया गया है, जो पारंपरिक गर्म पानी के निष्कर्षण द्वारा दिखाई गई निषेध गतिविधि से अधिक है और वाणिज्यिक किट द्वारा प्रदान किए गए अवरोधक से भी अधिक है। निष्कर्ष में, हमारे प्रारंभिक अध्ययन से पता चलता है कि आइसलैंडिक समुद्री शैवाल-आधारित अर्क, विशेष रूप से भूरे मैक्रोएल्गे ए.एसकुलेंटा से अर्क, जलीय स्पंदित विद्युत क्षेत्रों-सहायता प्राप्त निष्कर्षण द्वारा उत्पादित संभावित कार्यात्मक तत्व हैं जिनका उपयोग कॉस्मेटिक और कॉस्मीक्यूटिकल फॉर्मूलेशन के लिए सक्रिय यौगिकों के रूप में किया जा सकता है। निकट भविष्य में।

यह लेख मार्च ड्रग्स 2021, 19, 662 से निकाला गया है। https://doi.org/10.3390/md19120662 https://www.mdpi.com/journal/marinedrugs