अमूर्त

पॉलीसेकेराइड का उच्च-मूल्य उपयोग प्राप्त करने के लिएसिस्टैंच डेजर्टिकोलाअवशेष, इस अध्ययन में फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स (पेटेंट झिल्ली पृथक्करण तकनीक पर आधारित एक औद्योगिक प्रक्रिया) के निष्कर्षण के बाद बचे अवशेषों का उपयोग किया गया।पेटेंट संख्या ZL200710102756.7, held by Hotan Dichen Pharmaceutical Biotechnology Co., Ltd., https://www.xjcistanche.com/about-us) as the raw material. We systematically investigated the differences in chemical structural characteristics and antioxidant activities among various polysaccharide fractions obtained through membrane separation. The results indicated significant variations in chemical composition and activity among polysaccharide fractions with different molecular weights. Utilising ultrafiltration membranes of varying molecular weight cutoffs (300 kDa, 50 kDa, 10 kDa) combined with alcohol precipitation, four distinct polysaccharide fractions were successfully prepared: >300 केडीए (सीटीपी 1 नाम दिया गया), 50-300 केडीए (सीटीपी 2), 10-50 केडीए (सीटीपी 3), और<10 kDa (CTP 4). Monosaccharide composition analysis indicated that all four fractions primarily contained mannose, rhamnose, galacturonic acid, glucose, galactose, and arabinose, but their proportional ratios differed. Fourier-transform infrared spectroscopy confirmed that all fractions exhibited typical characteristic polysaccharide absorption peaks. Scanning electron microscopy results demonstrated that ultrafiltration membranes with different pore sizes significantly altered the aggregation state and surface roughness of the polysaccharides by retaining components of varying molecular weights. This morphological difference may be related to intermolecular interactions and the sieving effect during ultrafiltration. In antioxidant activity assays, CTP 1 showed the optimal performance, achieving DPPH radical scavenging rates exceeding 61% and ABTS⁺ radical scavenging rates surpassing 95% at 8 mg/mL. All four fractions demonstrated appreciable antioxidant activity. This study confirms that membrane separation technology can effectively fractionate polysaccharides from सिस्टैंच डेजर्टिकोलाअवशेष. अनुसंधान हर्बल दवा अवशेषों के संसाधन पुनर्चक्रण और पॉलीसेकेराइड घटकों के उच्च-मूल्य विकास का समर्थन करने वाला एक सैद्धांतिक आधार और डेटा प्रदान करता है।

कीवर्ड: सिस्टैंच डेजर्टिकोला; पॉलिसैक्राइड; एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि; झिल्ली पृथक्करण प्रौद्योगिकी; संरचनात्मक विश्लेषण

 

वेसिस्टैंच मुख्यालय द्वारा मेम्ब्रेन सेपरेशन टेक्नोलॉजी पेटेंट होल्ड

 

 

 

 

 

 

परिचय

सिस्टैंच हर्बा(सिस्टैन्चे), स्केल पत्तियों वाला सूखा मांसल तनासिस्टैंच डेजर्टिकोलावाईसी मा (रेगिस्तान सिस्टान्चे) यासिस्टैंच ट्यूबुलोसा(शेंक) वाइट (सीटीपी), पहली बार रिकॉर्ड किया गया हैशेनॉन्ग बेनकाओ जिंग (मटेरिया मेडिका का शेनॉन्ग क्लासिक). चीन में पारंपरिक टॉनिक चीनी दवाओं के एक विशिष्ट प्रतिनिधि और एक खाद्य-चिकित्सा समजात पदार्थ के रूप में, यह मुख्य रूप से झिंजियांग और इनर मंगोलिया जैसे उत्तर-पश्चिमी रेगिस्तान और रेगिस्तानी क्षेत्रों में उत्पादित किया जाता है, जिससे इसे "डेजर्ट जिनसेंग" की प्रतिष्ठा मिलती है। इसमें किडनी यांग को टोन करने, किडनी यिन को पोषण देने, सार और रक्त को लाभ पहुंचाने और कब्ज से राहत देने के लिए आंतों को नम करने का प्रभाव होता है [2-3]। इसमें मौजूद फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स में महत्वपूर्ण जैविक गतिविधियां होती हैं और ये वर्तमान औद्योगिक उत्पादन में निकाले जाने वाले मुख्य पदार्थ हैं। हालाँकि, निष्कर्षण के बाद अवशेषों में बड़ी मात्रा में उपयोग योग्य पदार्थ रह जाते हैं, जिन्हें अपशिष्ट के रूप में त्याग दिया जाता है, जिससे न केवल संसाधनों की बर्बादी होती है बल्कि संभावित रूप से पर्यावरणीय बोझ भी पड़ता है। इसलिए, चीनी औषधीय संसाधनों के कुशल विकास और पर्यावरण के अनुकूल विकास के लिए अवशेषों का उच्च-मूल्य पुनर्चक्रण प्राप्त करना बहुत महत्वपूर्ण है।

पॉलीसेकेराइड, प्रमुख सक्रिय घटकों के रूप मेंCistanche, एंटीऑक्सिडेंट, एंटी-एजिंग, हेपेटोप्रोटेक्टिव, एंटी-इंफ्लेमेटरी, इम्यूनोमॉड्यूलेटरी और एंटी-ट्यूमर प्रभाव जैसी विभिन्न औषधीय गतिविधियों को प्रदर्शित करता है [4-7], और दवा विकास के साथ-साथ भोजन और स्वास्थ्य उत्पादों में व्यापक रूप से उपयोग किया जा सकता है। पिछले अध्ययनों ने निष्कर्षण प्रक्रिया को बड़े पैमाने पर अनुकूलित किया है और प्रारंभिक गतिविधि मूल्यांकन आयोजित किया हैCistancheपॉलीसेकेराइड, लेकिन फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड निष्कर्षण के बाद अवशेषों में पॉलीसेकेराइड पर व्यवस्थित शोध दुर्लभ बना हुआ है, विशेष रूप से अवशेष पॉलीसेकेराइड और विभिन्न अंशों के बीच गतिविधि अंतर के लिए कुशल पृथक्करण और अंशीकरण प्रौद्योगिकियों के गहन विश्लेषण का अभाव है, जो व्यापक उपयोग मूल्य के सुधार को बहुत सीमित करता है।Cistancheसंसाधन।

पॉलीसेकेराइड अनुसंधान के क्षेत्र में, अनग्रेडेड क्रूड पॉलीसेकेराइड में मिश्रित घटक, अस्पष्ट गतिविधि योगदान और अस्पष्ट लक्ष्य जैसी समस्याएं होती हैं, जिससे उनके एंटीऑक्सिडेंट, इम्यूनोमॉड्यूलेटरी और अन्य कार्यों के लिए भौतिक आधार को सटीक रूप से प्रकट करना मुश्किल हो जाता है। इस बीच, कच्चे पॉलीसेकेराइड में प्रोटीन, रंगद्रव्य और अकार्बनिक लवण जैसी अशुद्धियाँ भी उनके गतिविधि मूल्यांकन और अनुप्रयोग विकास में बाधा डालती हैं। कॉलम क्रोमैटोग्राफी जैसे पारंपरिक तरीकों में उच्च रिज़ॉल्यूशन होता है लेकिन इसे स्केल करना मुश्किल होता है, जबकि अल्कोहल अवक्षेपण अंशांकन कठिन होता है और इसमें पर्यावरणीय जोखिम होते हैं। झिल्ली पृथक्करण प्रौद्योगिकी, उच्च दक्षता, पर्यावरण मित्रता और सटीक विभाजन के अपने लाभों के साथ, पॉलीसेकेराइड के पृथक्करण और शुद्धिकरण में बड़ी क्षमता दिखाती है। यह विभिन्न आणविक भार कटऑफ के साथ झिल्ली के माध्यम से पॉलीसेकेराइड घटकों के सटीक विभाजन को सक्षम बनाता है, जो पॉलीसेकेराइड के "आणविक भार-गतिविधि" संरचना-गतिविधि संबंध को प्रकट करने के लिए एक आदर्श तकनीकी सहायता प्रदान करता है [8]। तांग एट अल. [9] तीन पॉलीसेकेराइड घटकों को सीधे सफलतापूर्वक शुद्ध किया गयालेंटिनस एडोड्स2.5 केडीए, 5 केडीए, और 10 केडीए अल्ट्राफिल्ट्रेशन झिल्ली के संयोजन का उपयोग करके पानी निकाला जाता है। विशेष रूप से, इस अध्ययन में नियोजित झिल्ली पृथक्करण तकनीक एक आविष्कार पेटेंट द्वारा संरक्षित है (पेटेंट संख्या ZL200710102756.7) हॉटन डिचेन फार्मास्युटिकल बायोटेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड (https://www.xjcistanche.com/about-us) द्वारा आयोजित, जो फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड युक्त कच्चे माल के उत्पादन पर केंद्रित है।Cistancheझिल्ली पृथक्करण का उपयोग करते हुए, हमारे शोध के लिए एक मजबूत औद्योगिक आधार प्रदान करता है। हमारे अनुसंधान समूह द्वारा विकसित उत्पाद फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स के व्यवस्थित अध्ययन पर आधारित हैंसिस्टैंच ट्यूबुलोसा[10] पायलट उत्पादन चरण में प्रवेश कर चुके हैं। इसके आधार पर, यह अध्ययन के अवशेषों का उपयोग करता हैCistancheकच्चे माल के रूप में फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड निष्कर्षण के बाद, अवशेषों में पॉलीसेकेराइड को विभाजित करने और शुद्ध करने के लिए अल्कोहल वर्षा के साथ संयुक्त अल्ट्राफिल्ट्रेशन झिल्ली का उपयोग किया जाता है, और विभिन्न आणविक भार के साथ पॉलीसेकेराइड अंशों की रासायनिक संरचनात्मक विशेषताओं और एंटीऑक्सीडेंट गतिविधियों में अंतर का व्यवस्थित रूप से विश्लेषण किया जाता है। इसका उद्देश्य संसाधन पुनर्चक्रण के लिए नए रास्ते खोलना हैCistancheअवशेष, औद्योगिक श्रृंखला में सुधार, और प्राकृतिक पॉलीसेकेराइड पर आधारित नए कार्यात्मक खाद्य पदार्थों या एंटीऑक्सिडेंट के विकास के लिए एक सैद्धांतिक और प्रायोगिक नींव रखना।

 

झिल्ली पृथक्करण प्रौद्योगिकी द्वारा निकाले गए 50% इचिनाकोसाइड 10% एक्टियोसाइड सिस्टैंच अर्क पूरक

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1 सामग्री और विधियाँ

1.1 सामग्री और उपकरण

सिस्टैंच डेजर्टिकोलाअवशेष द्वारा प्रदान किया गया थाहॉटन डिचेन फार्मास्युटिकल बायोटेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड (होटन, चीन), पेटेंट झिल्ली पृथक्करण तकनीक के माध्यम से फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड के औद्योगिक निष्कर्षण से उत्पन्न (पेटेंट संख्या ZL200710102756.7; https://www.xjcistanche.com/about-us)। ग्लूकोज मानक तियानजिन गुआंगफू फाइन केमिकल रिसर्च इंस्टीट्यूट से खरीदा गया था। एम-हाइड्रॉक्सीबिफेनिल (98%), कूमासी ब्रिलियंट ब्लू {{0%), डायलिसिस बैग (एमडी44), डीपीपीएच रेडिकल स्केवेंजिंग क्षमता परख किट, एबीटीएस रेडिकल स्केवेंजिंग क्षमता परख किट, सुपरऑक्साइड आयन स्केवेंजिंग क्षमता परख किट, और कुल एंटीऑक्सीडेंट क्षमता परख किट सभी बीजिंग सोलरबायो साइंस एंड टेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड से खरीदे गए थे। गैलेक्टुरोनिक एसिड (98%), बोवाइन सीरम एल्ब्यूमिन (98%), और एस्कॉर्बिक एसिड (वीसी) शंघाई युआनये बायो-टेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड से खरीदे गए थे। अन्य रासायनिक अभिकर्मक विश्लेषणात्मक ग्रेड के थे।

UV-19001 यूवी-विज़ स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (शिमदज़ु इंस्ट्रूमेंट्स कं, लिमिटेड); YP10002 इलेक्ट्रॉनिक बैलेंस (शंघाई हेंगजी साइंटिफिक इंस्ट्रूमेंट्स कं, लिमिटेड); एसक्यूपी इलेक्ट्रॉनिक बैलेंस (सार्टोरियस साइंटिफिक इंस्ट्रूमेंट्स कंपनी लिमिटेड); आइला जल स्नान (SB-1200); CA-1111 कूलिंग वॉटर सर्कुलेशन डिवाइस (शंघाई ऐलांग इंस्ट्रूमेंट्स कं, लिमिटेड); एसएचजेड-डी सर्कुलेटिंग वॉटर वैक्यूम पंप (शंघाई जिनफू एक्सपेरिमेंटल इंस्ट्रूमेंट इक्विपमेंट कं, लिमिटेड); N-1100 रोटरी बाष्पीकरणकर्ता; XCLD-10FE फ्रीज ड्रायर (शंघाई ज़िंगचुआंग साइंटिफिक इंस्ट्रूमेंट इक्विपमेंट कंपनी लिमिटेड); बोना-GM-18C कार्बनिक झिल्ली पृथक्करण प्रायोगिक मशीन; 300 केडीए, 50 केडीए, 10 केडीए अल्ट्राफिल्ट्रेशन झिल्ली (पॉलीइथर्सल्फोन, जिनान बोना कंपनी, लिमिटेड, शेडोंग); TGL-16A सेंट्रीफ्यूज (चांग्शा पिंगफैन इंस्ट्रूमेंट्स); BT25S विश्लेषणात्मक संतुलन (सार्टोरियस वैज्ञानिक उपकरण); डायोनेक्स U3000 उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफ (थर्मो फिशर साइंटिफिक, यूएसए); एलसी-DCY-12GK नाइट्रोजन ब्लोअर (शंघाई लाइकेन बैंगक्सी इंस्ट्रूमेंट टेक्नोलॉजी कं, लिमिटेड); यूपीएच-I-10T अल्ट्राप्योर जल प्रणाली (चेंगदू अल्ट्रा प्योर टेक्नोलॉजी कं, लिमिटेड); DF-101S इन्फ्रारेड स्पेक्ट्रोमीटर (शिमदज़ु इंस्ट्रूमेंट्स कं, लिमिटेड); Zeiss Supra55VP स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप (कार्ल Zeiss (शंघाई) मैनेजमेंट कंपनी लिमिटेड)।

 

सिस्टैंच स्पेक्स

1.2 प्रायोगिक तरीके

1.2.1 कच्चे तेल का निष्कर्षणCistancheपॉलिसैक्राइड

प्रारंभिक पूर्व परीक्षणों से प्राप्त निष्कर्षण प्रक्रिया के अनुसार 150 ग्रासिस्टैंच डेजर्टिकोलाअवशेषों को तौला गया, 1:20 ग्राम/एमएल के ठोस-तरल अनुपात के साथ 3 घंटे के लिए 100 डिग्री पर निकाला गया, 10 मिनट के लिए 4000 आर/मिनट पर सेंट्रीफ्यूज किया गया, और पॉलीसैकराइड अर्क प्राप्त करने के लिए सतह पर तैरनेवाला (पॉलीसेकेराइड सामग्री: 4.4 मिलीग्राम/एमएल) एकत्र किया गया।

1.2.2 का विखंडन और पृथक्करणCistancheपॉलिसैक्राइड

का जलीय अर्कCistancheपॉलीसेकेराइड को 0.18 एमपीए दबाव और 40 डिग्री तापमान की स्थितियों के तहत 300 केडीए, 50 केडीए और 10 केडीए अल्ट्राफिल्ट्रेशन झिल्ली का उपयोग करके अल्ट्राफिल्ट्रेशन अंशांकन के अधीन किया गया था। रिटेन्टेट्स और पर्मेट्स को अलग-अलग एकत्र किया गया था, रोटरी वाष्पीकरण द्वारा केंद्रित किया गया था, और 80% की अंतिम इथेनॉल एकाग्रता प्राप्त करने के लिए 95% इथेनॉल जोड़ा गया था। मिश्रण को 24 घंटे के लिए 4 डिग्री पर रखा गया, फिर 10 मिनट के लिए 4000 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज किया गया, और अवक्षेप प्राप्त करने के लिए सतह पर तैरनेवाला को हटा दिया गया। अवक्षेप को पानी में फिर से घोला गया, 48 घंटे के लिए 3500 दा डायलिसिस बैग के विरुद्ध डायलाइज़ किया गया, और प्राप्त करने के लिए फ्रीज में सुखाया गयाCistanche polysaccharides. Four fractions were obtained by collecting retentates and permeates: >300 केडीए (सीटीपी 1 नाम दिया गया), 50-300 केडीए (सीटीपी 2), 10-50 केडीए (सीटीपी 3), और<10 kDa (CTP 4).

1.2.3 पॉलीसेकेराइड रासायनिक घटकों का निर्धारण

1.2.3.1 कुल चीनी सामग्री का निर्धारण

नमूनों में पॉलीसेकेराइड सामग्री निर्धारित करने के लिए फिनोल-सल्फ्यूरिक एसिड विधि का उपयोग किया गया था [11]। 0.1 मिलीग्राम/एमएल ग्लूकोज मानक समाधान के साथ ग्लूकोज का उपयोग करके एक मानक वक्र तैयार किया गया था। मानक घोल की 0.4 एमएल, 0.8 एमएल, 1.2 एमएल, 1.6 एमएल और 2.0 एमएल की सटीक मात्रा को 10 एमएल स्टॉपर्ड टेस्ट ट्यूब में स्थानांतरित किया गया, और 2.0 एमएल की कुल मात्रा में पानी मिलाया गया। फिर, ताजा तैयार 6% फिनोल घोल का 1.0 एमएल जोड़ा गया, अच्छी तरह मिलाया गया, और 5.0 एमएल केंद्रित सल्फ्यूरिक एसिड को ट्यूब की दीवार के साथ तेजी से जोड़ा गया। मिश्रण को हिलाया गया, 15 मिनट के लिए 90 डिग्री पानी के स्नान में गर्म किया गया, फिर हटा दिया गया और कमरे के तापमान पर ठंडा किया गया। रिक्त स्थान के रूप में आसुत जल का उपयोग करते हुए, यूवी-विज़ स्पेक्ट्रोफोटोमीटर के साथ अवशोषण को 490 एनएम पर मापा गया था। प्राप्त मानक वक्र y=16.196x+0.0834 था, R2=0.999. के साथ एक 0.1 मिलीग्राम/एमएल पॉलीसेकेराइड समाधान तैयार किया गया था, और प्रत्येक पॉलीसेकेराइड अंश के अवशोषण को उसी विधि का उपयोग करके मापा गया था। प्रत्येक अंश की कुल चीनी सामग्री की गणना मानक वक्र में प्रतिस्थापित करके की गई थी।

1.2.3.2 प्रोटीन सामग्री का निर्धारण

नमूनों में प्रोटीन सामग्री निर्धारित करने के लिए कूमैसी ब्रिलियंट ब्लू विधि का उपयोग किया गया था [12]। 0.1 मिलीग्राम/एमएल मानक प्रोटीन समाधान के साथ गोजातीय सीरम एल्ब्यूमिन का उपयोग करके एक मानक वक्र तैयार किया गया था। मानक प्रोटीन घोल को 0.02, 0.03, 0.05, 0.07, और 0.09 मिलीग्राम/एमएल की सांद्रता तक पतला किया गया था। फिर, मानक प्रोटीन समाधान की प्रत्येक सांद्रता का 1 एमएल परीक्षण ट्यूबों में जोड़ा गया, इसके बाद 5.0 एमएल कूमासी ब्रिलियंट ब्लू क्रोमोजेनिक अभिकर्मक डाला गया और हिलाकर मिलाया गया। रिक्त स्थान के रूप में आसुत जल का उपयोग करते हुए, 10 मिनट की प्रतिक्रिया के बाद अवशोषण को 595 एनएम पर मापा गया। प्राप्त मानक वक्र y=0.0034x+0.7673 था, जिसमें R2=0.996. प्रत्येक पॉलीसेकेराइड अंश का अवशोषण उसी विधि का उपयोग करके मापा गया था, और प्रत्येक अंश की प्रोटीन सामग्री की गणना मानक वक्र में प्रतिस्थापित करके की गई थी।

1.2.3.3 यूरोनिक एसिड सामग्री का निर्धारण

नमूनों में यूरोनिक एसिड की मात्रा निर्धारित करने के लिए एम-हाइड्रॉक्सीबिफेनिल विधि का उपयोग किया गया था [13]। 0.1 मिलीग्राम/एमएल गैलेक्टुरोनिक एसिड मानक समाधान के साथ, गैलेक्टुरोनिक एसिड का उपयोग करके एक मानक वक्र तैयार किया गया था। मानक घोल को 0.01, 0.02, 0.03, 0.05 और 0.1 मिलीग्राम/एमएल की सांद्रता तक पतला किया गया था। फिर, मानक समाधान की प्रत्येक सांद्रता का 1 एमएल परीक्षण ट्यूबों में जोड़ा गया था, और 6 एमएल सोडियम टेट्राबोरेट-सल्फ्यूरिक एसिड समाधान को बर्फ-पानी के स्नान की स्थिति में जोड़ा गया था, हिलाकर मिलाया गया था, 5 मिनट के लिए उबलते पानी में गर्म किया गया था, कमरे के तापमान पर ठंडा किया गया था, और 0.1 एमएल एम-हाइड्रॉक्सीबाइफिनाइल अभिकर्मक जोड़ा गया था, अच्छी तरह से मिलाया गया था, और 30 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर खड़े रहने दिया गया था। रिक्त स्थान के रूप में आसुत जल का उपयोग करते हुए, अवशोषण 525 एनएम पर मापा गया था। प्राप्त मानक वक्र y=7.5339x+0.0494 था, R2=0.995. के साथ एक 0.1 mg/mL पॉलीसेकेराइड समाधान तैयार किया गया था, और प्रत्येक पॉलीसेकेराइड अंश के अवशोषण को उसी विधि का उपयोग करके मापा गया था। प्रत्येक अंश की यूरोनिक एसिड सामग्री की गणना मानक वक्र में प्रतिस्थापित करके की गई थी।

 

वेसिस्टैंच निर्माता

1.2.4 मोनोसैकेराइड संरचना का निर्धारण

क्रोमैटोग्राफ़िक स्थितियाँ: थर्मो U3000 तरल क्रोमैटोग्राफी प्रणाली, एक एगिलेंट ज़ोरबैक्स एक्लिप्स XDB-C18 कॉलम (4.6 मिमी × 250 मिमी, 5 माइक्रोन) से सुसज्जित। मोबाइल चरण एसिटोनिट्राइल था: फॉस्फेट बफर (12 ग्राम/एल पोटेशियम डाइहाइड्रोजन फॉस्फेट, पीएच 2 मोल/एल NaOH के साथ 6.8 पर समायोजित) 17:83 के आयतन अनुपात पर, आइसोक्रेटिक रेफरेंस के साथ। प्रवाह दर 0.8 एमएल/मिनट थी, स्तंभ तापमान 30 डिग्री था, पता लगाने की तरंग दैर्ध्य 250 एनएम थी, और इंजेक्शन की मात्रा 10 μL थी।

मानक समाधान की तैयारी: मानक स्टॉक समाधान तैयार करने के लिए 5 मिलीग्राम रेमनोज, अरेबिनोज, गैलेक्टोज, ग्लूकोज, जाइलोज, मैनोज, गैलेक्टुरोनिक एसिड, ग्लूकुरोनिक एसिड, ग्लूकोसामाइन हाइड्रोक्लोराइड, और गैलेक्टोसामाइन हाइड्रोक्लोराइड, और 10 मिलीग्राम फ्यूकोज को क्रमिक रूप से तौला गया, भंग किया गया और वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में 10 एमएल तक बनाया गया।

नमूना समाधान की तैयारी: चार पॉलीसेकेराइड अंशों में से प्रत्येक का 5 मिलीग्राम वजन किया गया, 2 मोल/एल टीएफए समाधान के 1 एमएल में जोड़ा गया, और 2 घंटे के लिए 121 डिग्री पर गर्म किया गया। घोल को सुखाने के लिए नाइट्रोजन को शुद्ध किया गया। फिर, धोने के लिए 3 एमएल मेथनॉल मिलाया गया और घोल को फिर से सुखाया गया; इस मेथनॉल धुलाई चरण को 2-3 बार दोहराया गया था। अवशेषों को 1 एमएल बाँझ पानी में घोल दिया गया और परीक्षण के लिए क्रोमैटोग्राफिक शीशी में स्थानांतरित कर दिया गया। फिर, 0.2 एमएल पॉलीसेकेराइड हाइड्रोलाइज़ेट को एक बंद शंक्वाकार सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में जोड़ा गया, इसके बाद 0.2 एमएल 0.5 एमओएल/एल सोडियम हाइड्रॉक्साइड समाधान और 0.5 एमएल 0.5 एमओएल/एल पीएमपी मेथनॉल समाधान मिलाया गया। मिश्रण को घुमाया गया और 1 घंटे के लिए 70 डिग्री पानी के स्नान में प्रतिक्रिया की गई। प्रतिक्रिया के बाद, सोडियम हाइड्रॉक्साइड को बेअसर करने के लिए 0.2 एमएल 0.5 मोल/एल हाइड्रोक्लोरिक एसिड मिलाया गया, 1 एमएल क्लोरोफॉर्म जोड़ा गया, और अतिरिक्त पीएमपी को हटाने के लिए मिश्रण को तीन बार निष्कर्षण के लिए घुमाया गया। क्लोरोफॉर्म परत को हटा दिया गया, 0.3 एमएल जलीय परत ली गई, और 1 एमएल तक पानी मिलाया गया। फिर, 11 मोनोसैकेराइड मानकों में से प्रत्येक का 0.2 एमएल उसी विधि [14-15] का उपयोग करके व्युत्पन्न किया गया था।

1.2.5 फूरियर-ट्रांसफॉर्म इन्फ्रारेड स्पेक्ट्रोस्कोपी (एफटी-आईआर) विश्लेषण

चार पॉलीसेकेराइड अंशों में से प्रत्येक की एक उचित मात्रा को इन्फ्रारेड स्पेक्ट्रोमीटर के एटीआर एक्सेसरी के नमूना चरण पर रखा गया था, और एफटी-आईआर माप 4000-400 सेमी⁻¹ की आवृत्ति रेंज में फूरियर-ट्रांसफॉर्म इन्फ्रारेड स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके किया गया था [16]।

1.2.6 स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (एसईएम) विश्लेषण

SEM [17] का उपयोग करके चार पॉलीसेकेराइड अंशों की आकृति विज्ञान का विश्लेषण किया गया था। प्रत्येक पॉलीसेकेराइड अंश की एक छोटी मात्रा को एक पतली तांबे की प्लेट पर समान रूप से तय किया गया था, और आयन स्पटर का उपयोग करके नमूना सतह पर सोने के पाउडर की एक परत वाष्पित की गई थी। सतह आकारिकी 5.00 केवी पर देखी गई।

1.2.7 इन विट्रो एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि का निर्धारण

1.2.7.1 डीपीपीएच · रेडिकल स्केवेंजिंग क्षमता का निर्धारण

चार पॉलीसेकेराइड अंशों की सांद्रता 1, 2, 3, 4, और 8 मिलीग्राम/एमएल पर सेट की गई थी, और सकारात्मक नियंत्रण समूह (वीसी) को भी समान सांद्रता पर सेट किया गया था। निर्धारण डीपीपीएच· रैडिकल स्केवेंजिंग क्षमता परख किट के निर्देशों के अनुसार किया गया था।

1.2.7.2 सुपरऑक्साइड आयन सफाई क्षमता का निर्धारण

चार पॉलीसेकेराइड अंशों की सांद्रता 0.5, 1, 2, 4, और 8 मिलीग्राम/एमएल पर सेट की गई थी, और सकारात्मक नियंत्रण समूह (वीसी) को भी समान सांद्रता पर सेट किया गया था। निर्धारण सुपरऑक्साइड आयन स्केवेंजिंग क्षमता परख किट के निर्देशों के अनुसार किया गया था।

1.2.7.3 कुल एंटीऑक्सीडेंट क्षमता का निर्धारण

चार पॉलीसेकेराइड अंशों की सांद्रता 0.5, 1, 2, 4, और 8 मिलीग्राम/एमएल पर सेट की गई थी, और सकारात्मक नियंत्रण समूह (वीसी) को भी समान सांद्रता पर सेट किया गया था। निर्धारण कुल एंटीऑक्सीडेंट क्षमता परख किट के निर्देशों के अनुसार किया गया था।

1.2.7.4 एबीटीएस का निर्धारण⁺ रेडिकल स्केवेंजिंग क्षमता

चार पॉलीसेकेराइड अंशों की सांद्रता 0.5, 1, 2, 4, और 8 मिलीग्राम/एमएल पर सेट की गई थी, और सकारात्मक नियंत्रण समूह (वीसी) को भी समान सांद्रता पर सेट किया गया था। निर्धारण एबीटीएस रेडिकल स्केवेंजिंग क्षमता परख किट के निर्देशों के अनुसार किया गया था।

1.3 डेटा प्रोसेसिंग

प्रत्येक प्रयोग को समान परिस्थितियों में तीन बार दोहराया गया, और परिणाम माध्य ± मानक विचलन के रूप में व्यक्त किए गए। एसपीएसएस 21.0 सॉफ्टवेयर का उपयोग महत्व विश्लेषण के लिए किया गया था, एकल-कारक विश्लेषण के लिए एक-तरफ़ा एनोवा के साथ; पी <0.05 को सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण माना जाता था। ग्राफ़िंग के लिए ओरिजिन 2024 और ग्राफपैड प्रिज्म 10.1.2 का उपयोग किया गया था।

 

उच्च गुणवत्ता वाले कच्चे माल

संदर्भ

[1] राज्य फार्माकोपिया आयोग।पीपुल्स रिपब्लिक ऑफ चाइना का फार्माकोपिया, खंड I[एम]। बीजिंग: चाइना फार्मास्युटिकल टेक्नोलॉजी प्रेस, 2020।

[2] गुओ वाई, सीएओ एल, झाओ क्यू, एट अल। पॉलीसेकेराइड की प्रारंभिक विशेषताएँ, एंटीऑक्सीडेंट और हेपेटोप्रोटेक्टिव गतिविधिसिस्टैंच डेजर्टिकोला [J]. जैविक मैक्रोमोलेक्युलस का अंतर्राष्ट्रीय जर्नल, 2016, 93: 678-685.

[3] झांग एक्सवाई, जियांग क्यूडब्ल्यू, यांग एसएच, एट अल। कच्चे और संसाधित के बीच प्रभाव और तंत्र को समझने के लिए केमोमेट्रिक्स विश्लेषण और एकीकृत फार्माकोलॉजी दृष्टिकोणसिस्टैंच ट्यूबुलोसा [J]. जर्नल ऑफ एथनोफार्माकोलॉजी, 2024, 328.

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