Glucocorticoid मान्यता स्मृति की वृद्धि Basolateral Amygdala के माध्यम से-संचालित सुविधा के प्रीलिम्बिक कॉर्टेक्स इंटरैक्शन

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Areg Barsegyana, b, Gabriele Mironea, b, Giacomo Ronzonia, b, b, Chunan Guoa, b, Qi Songa, b, Daan van Kuppevelda, b, Evelien H. S. Schuta, b, Piray Atsaka, b, Selina Teurlingsa,b, James L. McGaughc,d,1, Dirk Schuberta,b, b,

और बेनो Roozendaala, बी, 1

संज्ञानात्मक तंत्रिका विज्ञान विभाग, Radboud University Medical Center, 6500 HB Nijmegen, नीदरलैंड; मस्तिष्क, अनुभूति और व्यवहार के लिए bonders संस्थान, Radboud विश्वविद्यालय, 6525 EN Nijmegen, नीदरलैंड; सीखने के न्यूरोबायोलॉजी के लिए केंद्र औरयाद, कैलिफोर्निया विश्वविद्यालय, इरविन, सीए 92697-3800; और न्यूरोबायोलॉजी और व्यवहार विभाग, कैलिफोर्निया विश्वविद्यालय, इरविन, सीए 92697-3800

जेम्स एल मैकगॉघ द्वारा योगदान दिया गया, 15 फरवरी, 2019 (28 जनवरी, 2019 की समीक्षा के लिए भेजा गया; इवान इज़क्विएर्डो और बैरी सेतलो द्वारा समीक्षा की गई)

व्यापक सबूत इंगित करता है कि basolateral अमिगडाला (BLA) तनाव हार्मोन और भावनात्मक उत्तेजना प्रभावों की मध्यस्थता में अन्य मस्तिष्क क्षेत्रों के साथ बातचीत करता हैयादसमेकन। मस्तिष्क सक्रियण अध्ययनों से पता चला है कि उत्तेजित करने वाली स्थितियों से बड़े पैमाने पर तंत्रिका नेटवर्क के सक्रियण और बीएलए से परे मस्तिष्क क्षेत्रों के बीच कई कार्यात्मक कनेक्शन होते हैं। क्या इस तरह के डिस्टल इंटरैक्शन परयादसमेकन भी बीएलए गतिविधि पर निर्भर करता है के रूप में अभी तक ज्ञात नहीं है. हमने जांच की, पुरुष स्प्राग-डॉली चूहों में, क्या बीएलए गतिविधि पूर्वकाल इंसुलर कॉर्टेक्स (एट) और पृष्ठीय हिप्पोकैम्पस (एचपीसी) के साथ प्रीलिम्बिक कॉर्टेक्स (पीआरएल) इंटरैक्शन को ऑब्जेक्ट मान्यता के विभिन्न घटकों पर ग्लूकोकोर्टिकोइड प्रभावों को विनियमित करने में सक्षम बनाती हैयाद. Glucocorticoid रिसेप्टर (GR) एगोनिस्ट RU 28362 को PrL में प्रशासित किया गया था, लेकिन infralimbic कॉर्टेक्स नहीं, ऑब्जेक्ट मान्यता प्रशिक्षण के तुरंत बाद 24 घंटे बढ़ाया गयायाददोनों की पहचान और वस्तु के स्थान पर और DHCP के साथ कार्यात्मक बातचीत के माध्यम से, क्रमशः. महत्वपूर्ण रूप से, noradrenergic विरोधी प्रोप्रानोलोल द्वारा BLA के पोस्टट्रेनिंग निष्क्रियता ने PrL में GR एगोनिस्ट प्रशासन के प्रभाव को समाप्त कर दियायाददोनों की पहचान और ob-jack के स्थान की वृद्धि. प्रोप्रानोलोल द्वारा बीएलए निष्क्रियता ने भी पीआरएल में जीआर एगोनिस्ट प्रशासन के प्रभाव को अवरुद्ध कर दिया, जो सीखने के बाद की समेकन अवधि के दौरान एट और डीएचपीसी के भीतर न्यूरोनल गतिविधि में परिवर्तन को प्रेरित करने के साथ-साथ रीढ़ की हड्डी के आकारिकी में संरचनात्मक परिवर्तनों पर 24 घंटे बाद मूल्यांकन किया गया था। ये निष्कर्ष सबूत प्रदान करते हैं कि बीएलए नॉरएड्रीनर्जिक गतिविधि पीआरएल और एआईसी और डीएचपीसी के बीच तनाव हार्मोन और भावनात्मक उत्तेजना प्रभावों को विनियमित करने में कार्यात्मक बातचीत को सक्षम बनाती हैयाद.

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तनावपूर्ण और भावनात्मक अनुभव हार्मोनल और मस्तिष्क प्रणालियों को सक्रिय करते हैं जो मजबूत यादें बनाते हैं (1, 2). व्यापक सबूत इंगित करता है कि basolateral अमिगडाला (BLA) के noradrenergic सक्रियण, भावनात्मक उत्तेजना से प्रेरित है, महत्वपूर्ण रूप से दीर्घकालिक के समेकन को मजबूत करने में शामिल हैयाद(2). हमने व्यापक सबूतों की सूचना दी है जो इंगित करते हैं कि बीएलए के नॉरएड्रीनर्जिक सक्रियण भी अधिवृक्क तनाव हार्मोन के बढ़ते प्रभावों को सक्षम करने में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, अर्थात्, एपिनेफ्रीन और ग्लूकोकोर्टिकोइड्स, परयादसमेकन (3-5)। कई पिछले अध्ययनों ने जांच की है कि इस तरह के बीएलए सक्रियण के समेकन को कैसे बढ़ाता हैयादविशिष्ट लक्ष्य क्षेत्रों के भीतर तंत्रिका प्लास्टिसिटी और सूचना भंडारण प्रक्रियाओं को प्रभावित करके, जैसे हिप्पोकैम्पस (2, 6-10). मस्तिष्क सक्रियण अध्ययनों से सबूत जमा करने से संकेत मिलता है कि उत्तेजना की स्थिति बड़े पैमाने पर तंत्रिका नेटवर्क (11-13) के सक्रियण को बढ़ाती है और अमिगडाला (14, 15) से परे मस्तिष्क क्षेत्रों के बीच कई कार्यात्मक बातचीत को भी प्रभावित करती है। हालांकि, यह ज्ञात नहीं है कि क्या बीएलए गतिविधि ऐसे डिस्टल मस्तिष्क क्षेत्रों के बीच कार्यात्मक बातचीत पर भावनात्मक उत्तेजना प्रभावों को विनियमित करने के लिए आवश्यक है।

हमने जांच की कि क्या बीएलए नॉरएड्रीनर्जिक गतिविधि औसत दर्जे के प्रीफ्रंटल कॉर्टेक्स (एमपीएफसी) और पूर्वकाल इंसुलर कॉर्टेक्स (एआईसी) और पृष्ठीय हिप्पोकैम्पस (डीएचपीसी) के बीच कार्यात्मक बातचीत को मान्यता के ग्लूकोकोर्टिकोइड हार्मोन वृद्धि की मध्यस्थता में सक्षम बनाती हैयादवस्तुओं और उनके स्थान के लिए। पिछले निष्कर्षों से संकेत मिलता है कि mPFC में योगदान देता हैयादपर संज्ञानात्मक या रणनीतिक नियंत्रण के माध्यम सेयादअन्य मस्तिष्क क्षेत्रों (16, 17) के भीतर प्रक्रियाएं और यह कि एआईसी किसी वस्तु की पहचान के लिए स्मृति में शामिल है (18). एमपीएफसी और एआईसी के बीच कार्यात्मक इंटरैक्शन तब हो सकता है जब उपन्यास वस्तुओं सहित भावनात्मक रूप से मुख्य जानकारी का पता लगाया जाता है (19, 20). पिछले निष्कर्षों से यह भी संकेत मिलता है कि dHPC किसी वस्तु को अपने संदर्भ या स्थान (21-23) के साथ जोड़ने में शामिल है और यह कि प्रासंगिक जानकारी का प्रसंस्करण एमपीएफसी और डीएचपीसी (24-26) के बीच एक कार्यात्मक क्रॉस-टॉक को संलग्न करता है। महत्वपूर्ण रूप से, एमपीएफसी (27), एआईसी (28), और डीएचपीसी (29) सभी को बीएलए से मजबूत इनपुट प्राप्त होते हैं। हम दिखाते हैं कि एक glucocorticoid रिसेप्टर (जीआर) एगोनिस्ट prelimbic प्रांतस्था (PrL) में प्रशासित है, लेकिन नहीं एक वस्तु मान्यता प्रशिक्षण अनुभव के बाद एमपीएफसी के infralimbic प्रांतस्था (आईएल) क्रमशः एआईसी और dHPC के साथ कार्यात्मक क्रॉस-टॉक के माध्यम से एक वस्तु की पहचान और स्थान दोनों की स्मृति के समेकन को बढ़ाता है। सबसे महत्वपूर्ण बात, हम दिखाते हैं कि बीएलए नॉरएड्रिनर्जिक गतिविधि इन डिस्टल मस्तिष्क क्षेत्रों के बीच कार्यात्मक बातचीत को चलाती है। इन निष्कर्षों से संकेत मिलता है कि बीएलए बड़े पैमाने पर मस्तिष्क नेटवर्क को प्रभावित करता है

अर्थ

तनाव हार्मोन सुविधा के लिए जाना जाता हैयादभावनात्मक रूप से उत्तेजित करने वाले अनुभवों का, एक प्रभाव जो बेसोलेटरल अमिगडाला (बीएलए) और अन्य मस्तिष्क क्षेत्रों के साथ इसकी बातचीत द्वारा मध्यस्थता की जाती है। मस्तिष्क सक्रियण अध्ययन यह भी इंगित करते हैं कि भावनात्मक उत्तेजना बीएलए से परे कई कार्यात्मक कनेक्शन को सक्रिय करती है। हालांकि, यह काफी हद तक अज्ञात है कि क्या बीएलए गतिविधि इन कनेक्शनों को प्रभावित करती है। यहां, हम रिपोर्ट करते हैं कि बीएलए गतिविधि मान्यता पर ग्लूकोकोर्टिकोइड हार्मोन प्रभावों को विनियमित करने में प्रीलिम्बिक कॉर्टेक्स, पूर्वकाल इंसुलर कॉर्टेक्स और पृष्ठीय हिप्पोकैम्पस के बीच कार्यात्मक बातचीत को सक्षम बनाती हैयाद. ये निष्कर्ष हमारी समझ को बढ़ाते हैं कि बीएलए गतिविधि भावनात्मक रूप से कैसे प्रभावित करती हैयादबड़े मस्तिष्क networks.in तनाव हार्मोन और स्मृति पर भावनात्मक उत्तेजना प्रभाव को विनियमित करने के भीतर (13).

परिणाम

जीआर प्रतिपक्षी के पोस्टट्रेनिंग इन्फ्यूजन के साथ जीआर गतिविधि की, आरयू 38486 (0.5 μL में 3 या 10 एनजी) बिगड़ा हुआ हैयादउस प्रशिक्षण का। यह निर्धारित करने के लिए कि क्या जानवर ऑब्जेक्ट (ऑब्जेक्ट रिकग्निशन मेमोरी, ओआरएम) की पहचान के लिए एक मेमोरी प्रदर्शित करते हैं, कुछ चूहों को 24-एच प्रतिधारण परीक्षण दिया गया था जिसमें एक वस्तु परिचित थी और दूसरी वस्तु उपन्यास थी। इस प्रोटोकॉल को चित्र में दर्शाया गया है। 1A. यह निर्धारित करने के लिए कि क्या जानवर एक प्रदर्शित करते हैंयादऑब्जेक्ट (ऑब्जेक्ट लोकेशन मेमोरी, ओएलएम) के स्थान के लिए, अन्य चूहों को 24-एच प्रतिधारण परीक्षण दिया गया था जिसमें दोनों वस्तुएं परिचित थीं लेकिन एक को एक उपन्यास स्थान (चित्र 1 ई) में रखा गया था।

ORM कार्य. जीआर एगोनिस्ट प्रशासन 3 मिनट के प्रशिक्षण परीक्षण के तुरंत बाद पीआरएल में 24-एच बढ़ाया गयायादवस्तु की पहचान के लिए (भेदभाव सूचकांक के लिए एक तरफा एनोवा: F2,33 = 10.02, P = 0.0004)। जैसा कि चित्र 1B में दिखाया गया है, वाहन-उपचारित नियंत्रण चूहों ने वस्तु के 24-h प्रतिधारण को व्यक्त नहीं किया (एक-नमूना t परीक्षण: t11 = 0.40, P = 0.69), और GR एगोनिस्ट की दोनों खुराकों ने प्रतिधारण में काफी वृद्धि की (3 ng: P< 0.05;="" 10="" ng:="" p="">< 0.01="" vs.="" vehicle).="" in="" contrast,="" gr="" agonist="" infusions="" administered="" into="" the="" il="" did="" not="" affect="" 24-h="" retention="" (f2,33="0.25," p="0.78;" fig.="" 1c).="" as="" shown="" in="" fig.="" 1d,="" gr="" antagonist="" administration="" into="" the="" prl="" after="" a="" 10-min="" training="" session="" significantly="" impaired="" 24-h="">यादवस्तु की पहचान के लिए (F2,32 = 13.14, P< 0.0001).="" vehicle-treated="" rats="" expressed="" significant="" retention="" (t12="12.08," p="">< 0.0001),="" and="" both="" doses="" of="" the="" gr="" antagonist="" impaired="" retention="" performance="" (3="" and="" 10="" ng:="" p="">< 0.01).="" the="" treatment="" groups="" did="" not="" differ="" in="" total="" exploration="" time="" of="" the="" two="" objects="" during="" either="" training="" or="" 24-h="" retention="" test="" (si="" appendix,="" fig.="">

OLM कार्य. PrL में जीआर एगोनिस्ट प्रशासन ने भी 24-h को बढ़ायायादवस्तु के स्थान के लिए (F2,28 = 9.69, P = 0.0006)। जैसा कि चित्र 1F में दिखाया गया है, वाहन-उपचारित नियंत्रण चूहों ने महत्वपूर्ण व्यक्त नहीं कियायाद3-मिनट के प्रशिक्षण परीक्षण (एक-नमूना टी परीक्षण: t10 = -0.80, P = 0.44), और GR एगोनिस्ट की दोनों खुराक बढ़ी हुई प्रतिधारण (3 और 10 ng: P< 0.01).="" gr="" agonist="" administration="" into="" the="" il="" did="" not="" affect="" 24-h="" retention="" (f2,30="0.17," p="0.84;" fig.="" 1g).="" as="" shown="" in="" fig.="" 1h,="" the="" gr="" antagonist="" administered="" into="" the="" prl="" after="" a="" 10-min="" training="" session="" significantly="" impaired="">यादवस्तु के स्थान के लिए (F2,32 = 4.30, P = 0.02)। वाहन-उपचारित चूहों ने महत्वपूर्ण 24-एच प्रतिधारण (t12 = 4.57, P = 0.0006) व्यक्त किया, और जीआर विरोधी बिगड़ा प्रतिधारण प्रदर्शन (10 ng: P) की उच्च खुराक< 0.01).="" the="" treatment="" groups="" did="" not="" differ="" in="" total="" exploration="" time="" of="" the="" two="" objects="" during="" either="" training="" or="" 24-h="" retention="" test="" (si="" appendix,="" fig.="" s2).="" these="" findings="" thus="" indicate="" that="" gr="" agonist="" administration="" into="" the="" prl="" but="" not="" the="" il,="" despite="" similar="" gr="" expression="" levels="" (fig.="" 1j),="" enhances="" the="" consolidation="" of="" memory="" of="" both="" the="" “what”="" (object="" identity)="" and="" “where”="" (object="" location)="" components="" of="" object="" recognition="">

ओआरएम पर जीआर एगोनिस्ट प्रभावों को विनियमित करने में एआईसी के साथ पीआरएल इंटरैक्शन।हमने जीआर एगोनिस्ट प्रभावों की मध्यस्थता में पीआरएल और एआईसी के बीच बातचीत की जांच कीयादORM और OLM कार्यों में। पीआरएल, लेकिन आईएल नहीं, एआईसी (31) को प्रत्यक्ष शारीरिक अनुमान भेजता है, और एआईसी को पहचान के लिए स्मृति में फंसाया जाता है लेकिन किसी वस्तु के स्थान पर नहीं (22, 23). हमने जांच की कि क्या फॉस्फोराइलेटेड एक्स्ट्रासेल्युलर सिग्नल-विनियमित किनेज 1/2 (पीईआरके 1/2) के निषेध द्वारा एआईसी की एक कार्यात्मक नाकाबंदी, न्यूरोनल गतिविधि और सिनैप्टिक प्लास्टिसिटी (32) में गंभीर रूप से फंसाए गए सिग्नलिंग कैस्केड, इंट्रा-पीआरएल जीआर एगोनिस्ट प्रशासन के प्रभाव को रोकता हैयादORM और OLM दोनों कार्यों में वृद्धि. जैसा कि चित्र 2A में दिखाया गया है, पोस्टट्रेनिंग जीआर एगोनिस्ट (0.5 μL में 3 या 10 ng) प्रशासन को बाएं PrL में प्रशासन (SI परिशिष्ट, चित्र देखें)। इन-फ्यूजन साइटों के लिए S3A) ORM कार्य (3 ng:P) में ऑब्जेक्ट की पहचान के लिए 24-h स्मृति को बढ़ाया< 0.05;="" 10="" ng:="" p="">< 0.01).="" the="" mek="" inhibitor="" pd98059="" (50="" ng="" in="" 0.5="" μl)="" administered="" into="" the="" ipsilateral="" aic="" after="" the="" training="" blocked="" the="" gr="" agonist="" effect="" on="" memory="" enhancement="" for="" the="" identity="" of="" the="" object="" (3="" ng:="" p="">< 0.05;="" 10="" ng:="" p="">< 0.01).="" in="" contrast,="" functional="" blockade="" of="" the="" aic="" with="" this="" dose="" of="" the="" mek="" inhibitor="" did="" not="" prevent="" the="" modulatory="" effect="" of="" gr="" agonist="" administration="" into="" the="" prl="" on="">यादOLM कार्य में ऑब्जेक्ट के स्थान के लिए. जैसा कि चित्र 2B में दिखाया गया है, MEK अवरोधक

अकेले एआईसी में प्रशासन ने 24-एच प्रतिधारण को बढ़ाया

चित्र 1। PrL में पोस्टट्रेनिंग जीआर एगोनिस्ट और जीआर प्रतिपक्षी प्रशासन लेकिन आईएल ओआरएम और ओएलएम को संशोधित नहीं करता है। (ए) ओआरएम कार्य का प्रयोगात्मक डिजाइन (एसआई परिशिष्ट, पूरक विधियां)। (बी) जीआर एगोनिस्ट आरयू 28362 (0.5 μL में 3 या 10 एनजी) 3 मिनट के प्रशिक्षण परीक्षण के बाद पीआरएल में प्रशासित 24-एच ओआरएम को बढ़ाया गया। डेटा को भेदभाव सूचकांक के रूप में प्रस्तुत किया जाता है (मतलब ± SEM; विधियाँ देखें)। n = 11- 13 चूहे / समूह। (सी) 24-एच ओआरएम पर 3 मिनट के प्रशिक्षण परीक्षण के बाद आईएल में जीआर एगोनिस्ट प्रशासन का कोई प्रभाव नहीं। n = 12 चूहे / समूह। (डी) जीआर प्रतिपक्षी आरयू 38486 (0.5 μL में 3 या 10 एनजी) विज्ञापन- 10 मिनट के प्रशिक्षण परीक्षण के बाद पीआरएल में 24-एच ओआरएम बिगड़ा हुआ है। n = 10- 13 चूहे / समूह। (ई) ओएलएम कार्य का प्रयोगात्मक डिजाइन। (एफ) जीआर एगोनिस्ट को 3 मिनट के प्रशिक्षण परीक्षण के बाद पीआरएल में प्रशासित किया गया था, जिससे 24-एच ओएलएम में वृद्धि हुई थी। n = 9- 11 चूहे / समूह। (जी) 24-एच ओएलएम पर 3-मिनट के प्रशिक्षण परीक्षण के बाद आईएल में जीआर एगोनिस्ट प्रशासन का कोई प्रभाव नहीं। n = 10- 12 चूहे / समूह। (एच) जीआर प्रतिपक्षी को 10 मिनट के प्रशिक्षण परीक्षण के बाद पीआरएल में प्रशासित किया गया था, जो 24-एच ओएलएम को जोड़ा गया था। n = 11- 13 चूहे / समूह। * P< 0.05;="" **p="">< 0.01.="" (i)="" infusion="" sites="" in="" the="" prl="" (solid="" circles)="" and="" il="" (open="" circles)="" of="" rats="" included="" in="" fig.="" 1="" b="" and="" c.="" (j)="" fluorescence="" photomicrograph="" showing="" similar="" gr="" expression="" levels="" within="" the="" prl="" and="" il.="" cl,="" claustrum;="" fmi,="" forceps="" minor="" of="" the="" corpus="" callosum.="" (scale="" bar,="" 300="" μm.)="" (k)="" detailed="" picture="" showing="" coexpression="" of="" gr="" (green)="" and="" the="" neuron="" marker="" neun="" (red)="" in="" the="" prl.="" (scale="" bar,="" 100="">

(L) आईएल में जीआर (हरा) और न्यूएन (लाल) कोएक्सप्रेशन दिखाते हुए विस्तृत चित्र (स्केल बार, 100 μm.)

चित्र 2। एक एमईके अवरोधक के साथ एआईसी गतिविधि का निषेध चुनिंदा रूप से ओआरएम की वृद्धि पर पीआरएल में जीआर एगोनिस्ट उपचार के प्रभाव को अवरुद्ध करता है। चूहों को 3 मिनट का प्रशिक्षण परीक्षण दिया गया था, जिसके बाद एमईके अवरोधक (पीडी 98059, 0.5 μL में 50 एनजी) या जीआर एगोनिस्ट (आरयू 28362, 3 या 10 एनजी में 0.5 μL) के साथ बाएं एआईसी में वाहन प्रशासन या ipsilateral PrL में वाहन का परीक्षण किया गया था। ORM या OLM का परीक्षण 24 घंटे बाद किया गया था। (ए) पीडी 98059 प्रशासन में एआईसी एगोनिस्ट प्रशासन द्वारा प्रेरित ओआरएम की अवरुद्ध वृद्धि को पीआरएल में (एन = 8- 11 चूहों / समूह, दो-तरफा एनोवा: आरयू 28362 एफ 2, 51 = 3.44, पी = 0.04; PD98059 F1,51 = 16.45, P = 0.0002; इंटरैक्शन F2,51 = 5.03, P = 0.01)। (बी) पीडी 98059 प्रशासन में अकेले एआईसी में ओएलएम को बढ़ाया गया, लेकिन इसने जीआर एगोनिस्ट प्रशासन द्वारा प्रेरित मेमोरी मॉडुलन को पीआरएल (एन = 9- 14 चूहों / समूह, दो-तरफा एनोवा: आरयू 28362 एफ 2,60 = 0.13, पी = 0.88) में नहीं रोका; PD98059 F1,60 = 0.02, P = 0.88; इंटरैक्शन F2,60 = 5.38, P = 0.007)। * P< 0.05,="" **p="">< 0.01="" vs.="" vehicle;="" ◆p="">< 0.05,="" ◆◆p="">< 0.01="" vs.="" vehicle="" or="" ru="" 28362="">

वस्तु का स्थान (P)< 0.01),="" and,="" in="" this="" condition,="" gr="" agonist="" administration="" into="" the="" prl="" induced="" significant="" memory="" impairment="" (10="" ng:="" p="">< 0.05="" vs.="" vehicle).="" the="" treatment="" groups="" did="" not="" differ="" in="" total="" exploration="" time="" of="" the="" two="" objects="" during="" either="" training="" or="" 24-h="" retention="" test="" (siappendix,fig.s3="" b="" and="" c).="" these="" findings="" indicate="" that="" the="" prl="" interacts="" with="" the="" aic="" in="" regulating="" gr="" agonist="" effects="" on="" memory="" for="" the="" identity="" but="" not="" location="" of="" the="">

OLM पर जीआर एगोनिस्ट प्रभाव को विनियमित करने में dHPC के साथ PrL इंटरैक्शन।अगला, हमने PRL और dHPC के बीच कार्यात्मक इंटरैक्शन की जांच की, जिस पर GR एगोनिस्ट प्रभावों की मध्यस्थता मेंयादORM और OLM कार्यों में। यद्यपि परिचितता भेदभाव में डीएचपीसी की भूमिका विवादास्पद बनी हुई है (33), कई निष्कर्षों से संकेत मिलता है कि किसी वस्तु के अपने संदर्भ या स्थान के साथ संबंध के लिए डीएचपीसी (22, 23) की आवश्यकता होती है। जैसा कि चित्र 3A में दिखाया गया है, GR एगोनिस्ट (0.5 μL में 3 या 10 ng) प्रशिक्षण परीक्षण के बाद बाएं PrL में प्रशासन ने 24-h बढ़ायायादORM कार्य में ऑब्जेक्ट की पहचान के लिए (10 ng: P< 0.01),="" and="" concomitant="" blockade="" of="" the="" ipsilateral="" dhpc="" with="" the="" mek="" inhibitor="" pd98059="" (50="" ng="" in="" 0.5="" μl)="" (see="" si="" appendix,="" fig.="" s4a="" for="" infusion="" sites)="" did="" not="" prevent="" this="" gr="" agonist="" effect="" (3="" and="" 10="" ng:="" p="">< 0.01="" vs.="" vehicle).="" in="" contrast,="" dhpc="" inactivation="" completely="" blocked="" the="" gr="" agonist="" effect="" on="">यादOLM कार्य में ऑब्जेक्ट के स्थान के लिए एन्हांसमेंट. जैसा कि चित्र 3B में दिखाया गया है, PrL में GR एगोनिस्ट प्रशासन ने वस्तु के स्थान के 24-h प्रतिधारण को बढ़ाया (10 ng: P< 0.01),="" and="" this="" effect="" was="" blocked="" following="" mek="" inhibitor="" administration="" into="" the="" dhpc="" (3="" ng:="" p="">< 0.05;="" 10="" ng:="" p="">< 0.01="" vs.="" gr="" agonist).="" the="" treatment="" groups="" did="" not="" differ="" in="" total="" exploration="" time="" of="" the="" two="" objects="" during="" training="" or="" 24-h="" retention="" test="" (si="" appendix,="" fig.="" s4="" b="" and="" c).="" thus,="" these="" findings="" indicate="" that="" the="" prl="" interacts="" with="" the="" dhpc="" in="" regulating="" gr="" agonist="" effects="" on="" memory="" for="" the="" location="" but="" not="" the="" identity="" of="" the="">

ओआरएम और ओएलएम पर पीआरएल में जीआर एगोनिस्ट प्रशासन के प्रभाव पर बीएलए नोरएड्रिनर्जिक गतिविधि का प्रभाव।यह निर्धारित करने के लिए कि क्या बीएलए नॉरएड्रीनर्जिक गतिविधि गंभीर रूप से जीआर एगोनिस्ट प्रशासन के प्रभाव को विनियमित करने में शामिल है, पीआरएल मेंयादओआरएम और ओएलएम कार्यों में, जीआर एगोनिस्ट (0.5 μL में 3 या 10 एनजी) को बाएं पीआरएल में प्रशासित किया गया था, और β-एड्रेनोसेप्टर विरोधी प्रोप्रानोलोल (0.2 μL में 0.3 μg) को ipsilateral BLA में प्रशासित किया गया था (SIAppendix, चित्र देखें)। S5A, जलसेक साइटों के लिए) प्रशिक्षण परीक्षण के तुरंत बाद। जैसा कि चित्र 4A में दिखाया गया है, PrL में GR एगोनिस्ट प्रशासन ने 24-h को बढ़ायायादORM कार्य में ऑब्जेक्ट की पहचान के लिए (3 और 10 ng: P< 0.01),="" and="" propranolol="" ad-="" ministration="" into="" the="" bla="" blocked="" this="" gr="" agonist="" effect="" (3="" ng:p="">< 0.05;="" 10="" ng:="" p="">< 0.01="" vs.="" gr="" agonist="" alone).="" as="" shown="" in="" fig.="" 4b,="" gr="" agonist="" administration="" into="" the="" prl="" also="" enhanced="" 24-h="">यादOLM कार्य में ऑब्जेक्ट के स्थान के लिए (3 और 10 ng:P)< 0.01),="" and="" propranolol="" administration="" into="" the="" bla="" also="" blocked="" this="" gr="" agonist="" effect="" (10="" ng:="" p="">< 0.01="" vs.="" gr="" agonist="" alone).="" the="" treatment="" groups="" did="" not="" differ="" in="" total="" exploration="" time="" of="" the="" two="" objects="" during="" either="" training="" or="" 24-h="" retention="" test="" (si="" appendix,="" fig.="" s5="" b="" and="" c).="" thus,="" these="" findings="" indicate="" that="" bla="" noradrenergic="" activity="" is="" required="" for="" enabling="" the="" effect="" of="" gr="" agonist="" administration="" into="" the="" prl="" on="">यादएआईसी-निर्भर ओआरएम और डीएचपीसी-निर्भर ओएलएम दोनों की वृद्धि।

बीएलए Noradrenergic गतिविधि का प्रभाव जीआर एगोनिस्ट प्रशासन के प्रभाव पर न्यूरोनल गतिविधि परिवर्तन पर PrL में aIC और dHPC के भीतर परिवर्तन.आगे की जांच करने के लिए कि क्या बीएलए नोरएड्रेन-

ergic गतिविधि PrL और aIC और dHPC के बीच कार्यात्मक बातचीत को सक्षम बनाता है, हमने जांच की कि क्या जीआर एगोनिस्ट प्रशासन पीआरएल में ऑब्जेक्ट मान्यता प्रशिक्षण के बाद- duces गतिविधि-निर्भर न्यूरोनल गतिविधि परिवर्तन के बाद aIC और dHPC के भीतर aIC और dHPC के भीतर परिवर्तन के बाद सीखने के समेकन अवधि (34) और, सबसे महत्वपूर्ण बात, क्या ये प्रभाव BLA noradrenergic गतिविधि पर निर्भर हैं। न्यूरोनल गतिविधि का मूल्यांकन किया गया था, प्रशिक्षण और दवा उपचार के 1 घंटे बाद, सी-फॉस (35) के लिए इम्यूनोफ्लोरेसेंस द्वारा, एक तत्काल प्रारंभिक जीन उत्पाद जो हाल ही में सक्रिय कोशिकाओं (36) की पहचान करने के लिए एक अच्छी तरह से स्थापित आणविक मार्कर है और न्यूरोनल ensembles का मानचित्रण जो कार्य से संबंधित गतिविधि (37) में वृद्धि हुई है।

एआईसी के भीतर, सी-फॉस लेबलिंग को इसके तीन मुख्य उपखंडों के कॉर्टिकल परतों II / III के भीतर निर्धारित किया गया था (एसआई परिशिष्ट, चित्र। एस 6 ए)। वाहन-उपचारित प्रशिक्षित चूहों ने सी-फॉस-पॉजिटिव कोशिकाओं का एक उच्च संख्यात्मक घनत्व दिखाया, जो एग्रेन्युलर और डिस्ग्रेन्युलर उपखंडों (एसआई परिशिष्ट, चित्र) के भीतर सबसे अधिक था। एस 6 बी)। जैसा कि चित्र 5A में दिखाया गया है, GR एगोनिस्ट (0.5 μL में 10 ng) प्रशासन बाईं PrL में प्रशासन ने ipsilateral aIC (P) के भीतर c-Fos-positive cells के संख्यात्मक घनत्व में महत्वपूर्ण कमी का नेतृत्व किया।< 0.01)="" (see="" si="" appendix,="" fig.="" s6b,="" for="" analysis="" per="" subdivision).="" double="" staining="" for="" c-fos="" and="" for="" glutamic="" acid="" decarboxylase="" 67="" (gad67),="" a="" marker="" for="" gabaergic="" inhibitory="" neurons="" (38),="" revealed="" that="" c-fos="" was="" predominantly="" expressed="" in="">

चित्र 3. एक एमईके अवरोधक के साथ डीएचपीसी गतिविधि का निषेध चुनिंदा रूप से ओएलएम की वृद्धि पर पीआरएल में जीआर एगोनिस्ट उपचार के प्रभाव को अवरुद्ध करता है। चूहों को एमईके इनहिबिटर (पीडी 98059, 0.5 μL में 50 एनजी) या जीआर एगोनिस्ट (आरयू 28362, 3 या 10 एनजी में 0.5 μL) के साथ बाएं डीएचपीसी में वाहन प्रशासन के बाद 3-मिनट का प्रशिक्षण परीक्षण दिया गया था। (ए) DHPC में PD98059 प्रशासन ने PRL में GR एगोनिस्ट विज्ञापन-ministration द्वारा प्रेरित ORM की वृद्धि को अवरुद्ध नहीं किया (n = 9- 13 चूहों / समूह, दो-तरफ़ा एनोवा: RU 28362 F2,64 = 12.91, P< 0.0001;="" pd98059="" f1,64="0.20," p="0.66;" interaction="" f2,64="0.10," p="0.91)." (b)="" pd98059="" administration="" into="" the="" dhpc="" blocked="" en-="" hancement="" of="" olm="" induced="" by="" gr="" agonist="" administration="" into="" the="" prl="" (n="9–" 13="" rats/group,="" two-way="" anova:="" ru="" 28362="" f2,61="1.33," p="0.27;" pd98059="" f1,61="14.66," p="0.0003;" interaction="" f2,61="3.31," p="0.04)." **p="">< 0.01="" vs.="" vehicle;="" ◆p="">< 0.05,="" ◆◆p="">< 0.01="" vs.="" ru="" 28362="">

चित्र 6. बीएलए नॉरएड्रिनर्जिक गतिविधि की नाकाबंदी एआईसी के भीतर रीढ़ की हड्डी के आकारिकी परिवर्तनों पर पीआरएल में जीआर एगोनिस्ट उपचार के प्रभाव को रोकती है, वस्तु मान्यता प्रशिक्षण के बाद 24 घंटे का आकलन किया जाता है। (ए) एक गोल्गी-गर्भवती न्यूरॉन की छवि। (बी) डेंड्राइट विभिन्न रीढ़ की हड्डी के प्रकारों को दिखा रहा है (100× आवर्धन)। (सी) एपिकल डेंड्राइट्स में लंबे पतले, स्टबी, मशरूम और शाखित रीढ़ की हड्डी के प्रकारों के लिए रीढ़ की हड्डी का घनत्व। डेटा को प्रति माइक्रोमीटर स्पाइन की संख्या के रूप में प्रस्तुत किया जाता है (माध्य ± SEM) [n = 15–20 कोशिकाएं (पांच चूहों से)/ समूह: दो-तरफ़ा एनोवा, मशरूम स्पाइन: RU 28362 F1,69 = 7.72, P = 0.007; प्रोप्रानोलोल F1,69 = 1.38, P = 0.24; इंटरैक्शन F1,69 = 4.40, P = 0.04; 6.04, P = 0.04; 2.04; शाखित रीढ़ की हड्डी= 0.04; P = 0.11; इंटरैक्शन F1,69 = 9.21, P = 0.003]। (D) बेसल डेंड्राइट्स में स्पाइन घनत्व [n = 15- 18 कोशिकाएं (पांच चूहों से)/समूह: दो-तरफ़ा एनोवा, मशरूम स्पाइन्स: RU 28362 F1,62 = 1.46, P = 0.23; प्रोप्रानोलोल F1,62 = 1.84, P = 0.18; इंटरैक्शन F1,62 = 5.71, P = 0.02; शाखित स्पाइन= 0.02; शाखित स्पाइन: आरयू 28362 P = 0.04]। ** P< 0.01="" vs.="" vehicle;="" ◆◆p="">< 0.01="" vs.="" ru="" 28362="">

वस्तु पहचान प्रशिक्षण के बाद एआईसी के भीतर संरचनात्मक प्लास्टिसिटी में परिवर्तन औरयाद-enhanceing GR एगोनिस्ट उपचार।

चर्चा

वर्तमान अध्ययन ने जांच की कि क्या बीएलए नॉरएड्रीनर्जिक गतिविधि ऑब्जेक्ट मान्यता के विभिन्न घटकों पर ग्लूकोकॉर्टिकोइड प्रभावों की मध्यस्थता में एआईसी और डीएचपीसी के साथ पीआरएल इंटरैक्शन को नियंत्रित करती हैयाद. यह सवाल पिछले निष्कर्षों से उपजा है कि बीएलए गतिविधि अन्य मस्तिष्क क्षेत्रों के साथ बातचीत के माध्यम से भावनात्मक रूप से उत्तेजित करने वाले अनुभवों की स्मृति के समेकन की सुविधा प्रदान करती है (1, 2). हालांकि, विशेष रूप से मानव न्यूरोइमेजिंग अध्ययनों से सबूत जमा करना, इंगित करता है कि भावनात्मक उत्तेजना बीएलए (12) से परे कई कार्यात्मक कनेक्शन के साथ बड़े पैमाने पर तंत्रिका नेटवर्क के सक्रियण को प्रेरित करती है। क्या बीएलए गतिविधि इस तरह के डिस्टल मस्तिष्क क्षेत्रों के बीच कनेक्टिविटी में भावनात्मक उत्तेजना से जुड़े परिवर्तनों को संशोधित करती है, इसकी जांच नहीं की गई थी।

वर्तमान अध्ययन में, हमने पाया कि पीआरएल के भीतर जीआर के पोस्टट्रेनिंग सक्रियण लेकिन आईएल ने दीर्घकालिक नहीं बढ़ायायादORM और OLM कार्यों में ऑब्जेक्ट की पहचान और स्थान दोनों की। इसके विपरीत, PrL के भीतर GRs का विरोध दोनों कार्यों में स्मृति समेकन बिगड़ा हुआ है। ये निष्कर्ष अतिरिक्त सबूत प्रदान करते हैं कि एमपीएफसी में ग्लूकोकोर्टिकोइड प्रशासन विभिन्न प्रकार के प्रशिक्षण अनुभवों (50, 51) की स्मृति के दीर्घकालिक भंडारण की सुविधा प्रदान करता है। इसके अतिरिक्त, हमने पाया कि कार्यात्मक रूप से एआईसी और डीएचपीसी गतिविधि (32, 50) को अवरुद्ध करके, जीआर एगोनिस्ट प्रभाव परयादवस्तुओं की पहचान के लिए एआईसी के साथ पीआरएल की बातचीत की आवश्यकता होती है और यह कि ऑब्जेक्ट के स्थान के लिए स्मृति पर जीआर एगोनिस्ट प्रभाव डीएचपीसी के साथ एक पीआरएल इंटरैक्शन पर निर्भर करता है। ये निष्कर्ष व्यापक सबूतों के अनुरूप हैं कि एआईसी और डीएचपीसी मान्यता स्मृति में अलग-अलग योगदान देते हैं। स्मृति-निर्देशित व्यवहार के पूर्ण पूरक का समर्थन करने के लिए, दो प्रणालियों को बातचीत करनी चाहिए, और PrL दो प्रणालियों (17) के बीच एकीकरण की साइट के रूप में कार्य कर सकता है। एआईसी, जिसे भावनात्मक, संज्ञानात्मक और प्रेरक कार्यों (52) में स्वायत्त और आंत की जानकारी के एकीकरण में फंसाया गया है, मान्यता स्मृति और वस्तुओं के बारे में जानकारी के प्रसंस्करण में शामिल है (18, 22, 23). हमारी खोज, हालांकि, वस्तु के स्थान के लिए स्वयं प्रेरित स्मृति वृद्धि द्वारा एआईसी की कार्यात्मक नाकाबंदी से पता चलता है कि एआईसी स्थानिक और प्रासंगिक सूचना प्रसंस्करण (53) में भी योगदान कर सकता है। दूसरी ओर, dHPC अपने संदर्भ या स्थान (21-23) के साथ एक वस्तु के सहयोग में शामिल है, और प्रासंगिक जानकारी के प्रसंस्करण को महत्वपूर्ण रूप से एमपीएफसी और डीएचपीसी (24-26) के बीच एक कार्यात्मक क्रॉस-टॉक को संलग्न करने के लिए जाना जाता है। काफी सबूत इंगित करते हैं कि एमपीएफसी और डीएचपीसी ऑस्सिलेटरी सिंक्रनाइज़ेशन के माध्यम से युग्मित हो जाते हैं जो सूचना के द्विदिश प्रवाह को दर्शाता है (54).

इस तरह के कार्यात्मक इंटरैक्शन के आगे के समर्थन में, हमने पाया कि ऑब्जेक्ट मान्यता प्रशिक्षण के बाद पीआरएल में जीआर एगोनिस्ट प्रशासन एआईसी और डीएचपीसी के भीतर गतिविधि-निर्भर न्यूरोनल गतिविधि परिवर्तनों को प्रेरित करता है, पोस्टलर्निंग समेकन अवधि के दौरान और साथ ही रीढ़ की हड्डी के आकारिकी में संरचनात्मक परिवर्तनों का आकलन 24 घंटे बाद किया गया था। हमारी खोज है कि जीआर एगोनिस्ट-मान्यता की वृद्धि प्रेरितयादकम सी-फॉस अभिव्यक्ति, और संभवतः न्यूरोनल गतिविधि के साथ जुड़ा हुआ है, एआईसी के पिछले निष्कर्षों के साथ समझौते में है जो चूहों में निरोधात्मक परिहार प्रशिक्षण के बाद प्रणालीगत कॉर्टिकोस्टेरोन उपचार के बाद एआईसी न्यूरोनल गतिविधि को कम करने का संकेत देता है (55) या मानव विषयों में तनाव-प्रेरित ग्लूकोकॉर्टिकोइड रिलीज के बाद (56). स्थानीय समेकन प्रक्रियाओं को सुविधाजनक बनाने के लिए इस तरह की कम एआईसी गतिविधि की आवश्यकता हो सकती है, संभवतः अस्थायी रूप से मुख्य उत्तेजनाओं का पता लगाने के लिए दहलीज को बढ़ाकर (23, 57). वैकल्पिक रूप से, जैसा कि एआईसी विभिन्न तंत्रिका नेटवर्क प्रणालियों (58) के बीच एक "स्विच" के रूप में काम कर सकता है, कम एआईसी गतिविधि तंत्रिका संसाधनों के पुनर्आवंटन को प्रतिबिंबित कर सकती है और इसलिए वस्तु की जानकारी और उच्च-क्रम संज्ञानात्मक प्रक्रियाओं के भंडारण में शामिल अन्य मस्तिष्क प्रणालियों का विघटन (56). इसके विपरीत, जीआर एगोनिस्ट प्रशासन ने डीएचपीसी के डीडीजी क्षेत्र के भीतर सी-फॉस अभिव्यक्ति को प्रभावित किए बिना, सीए 1 के भीतर सी-फॉस-पॉजिटिव पिरामिडल कोशिकाओं की संख्या में वृद्धि की। इस विचार के समर्थन में कि CA1 पर इस PrL प्रभाव में अप्रत्यक्ष NRE मार्ग (40-42) शामिल है, हमें एनआरई के भीतर सी-फॉस-पॉजिटिव कोशिकाओं की एक इन-क्रीज्ड संख्या भी मिली। साथ में, ये निष्कर्ष इस बात के सबूत प्रदान करते हैं कि पीआरएल में जीआर एगोनिस्ट प्रशासन एआईसी और डीएचपीसी के साथ कार्यात्मक युग्मन के माध्यम से मान्यता स्मृति के विभिन्न घटकों के समेकन को बढ़ाता है।

हमारी प्राथमिक खोज यह है कि बीएलए के भीतर नॉरएड्रीनर्जिक ट्रांसमिशन की नाकाबंदी ने इन इंट्रा-पीआरएल जीआर एगोनिस्ट विज्ञापन-मिनिस्ट्रेशन प्रभावों को अवरुद्ध कर दिया हैयादवृद्धि के रूप में के रूप में अच्छी तरह से न्यूरोनल गतिविधि और संरचनात्मक plasticity aIC और dHPC के भीतर परिवर्तन पर. कई पूर्व अध्ययनों में, हमने बताया कि उत्तेजना उत्तेजित करने से बीएलए (2, 59) के भीतर नॉरपेनेफ्रिन की रिहाई होती है और ऊंचा बीएलए नॉरपेनेफ्रिन का स्तर समेकन को बढ़ाता हैयादएमपीएफसी, एआईसी और डीएचपीसी (2, 7, 9, 57, 60) सहित अलग-अलग मस्तिष्क क्षेत्रों में तंत्रिका प्लास्टिसिटी और सूचना भंडारण को प्रभावित करके विभिन्न प्रशिक्षण अनुभवों का। वर्तमान निष्कर्ष इस बात के सबूत प्रदान करते हैं कि बीएलए नॉरएड्रीनर्जिक सक्रियण ऐसे अन्य मस्तिष्क क्षेत्रों के बीच कार्यात्मक बातचीत को सक्षम करने और बड़े पैमाने पर मस्तिष्क नेटवर्क गतिशीलता पर भावनात्मक उत्तेजना प्रभावों को विनियमित करने में बीएलए की भूमिका की हमारी समझ को बढ़ाने के लिए भी आवश्यक है।

विधियाँ

विषयों। नर स्प्राग-डॉली चूहों (चार्ल्स नदी) को व्यक्तिगत रूप से तापमान-नियंत्रित (22 डिग्री सेल्सियस) विवेरियम कमरे (0700-1900 घंटे की रोशनी) में रखा गया था। प्रशिक्षण और परीक्षण 1000 और 1500 घंटे के बीच चक्र के प्रकाश चरण के दौरान किया गया था। सभी प्रयोगात्मक प्रक्रियाएं यूरोपीय संघ के निर्देश 2010/63/EU के अनुपालन में थीं और Radboud University, Nijmegen, नीदरलैंड की संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित थीं।

ऑब्जेक्ट पहचान कार्य. प्रशिक्षण परीक्षण में, चूहों ने 3 या 10 मिनट के लिए दो समान वस्तुओं (ए 1 और ए 2) का पता लगाया। प्रतिधारण 24 घंटे बाद परीक्षण किया गया था। ओआरएम के लिए, परिचित वस्तु (ए 3) की एक प्रति और एक नई वस्तु (बी) को प्रशिक्षण परीक्षण के दौरान उत्तेजनाओं के रूप में एक ही स्थान पर रखा गया था। OLM के लिए, परिचित ऑब्जेक्ट (A3) की एक प्रतिलिपि बॉक्स (उपन्यास स्थान) के बीच में रखी गई थी; अन्य परिचित वस्तु (A4) को प्रशिक्षण परीक्षण के दौरान के रूप में एक ही स्थान पर रखा गया था। एक भेदभाव सूचकांक की गणना उपन्यास और परिचित वस्तुओं (या स्थानों) की खोज के समय में अंतर के रूप में की गई थी, जिसे दोनों वस्तुओं की खोज में बिताए गए कुल समय के अनुपात के रूप में व्यक्त किया गया था (यानी, [(समय उपन्यास - समय परिचित)/(समय उपन्यास + समय परिचित)] × 100%) (संदर्भ 23); एसआई परिशिष्ट, अनुपूरक तरीके)।

दवा उपचार। आरयू 28362 (11π,17π-dihydroxy-6,21-dimethyl-17α-pregna-4,6- trien-20yn-3-one, 3 या 10 ng in 0.5 μL) और RU 38486 [17π-hydroxy-11π-(4- dimethylaminophenyl)-17α-(1-propynyl)-17α-(1-propynyl)-3 में 3-9-डायन-30 में घुल गए थे। प्रोप्रानोलोल (0.2 μL में 0.3 μg) खारा (60) में भंग कर दिया गया था। PD98059 [2-(2-amino-3-methoxyphenyl)-4 H-1-benzopyran-4-one, 0.5 μL में 50 ng] खारा में 6% DMSO में भंग कर दिया गया था (संदर्भ 50; एसआई परिशिष्ट, अनुपूरक तरीके)।

c-Fos अस्पष्टता. मस्तिष्क वर्गों को प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ ऊष्मायन किया गया था [सी-फॉस (खरगोश विरोधी-सी-फॉस; 1: 1,000; Synaptic Systems), GAD67 (माउस एंटी-GAD67; 1:250; Millipore), NeuN (चिकन विरोधी NeuN; 1:500; Millipore)], उचित fluorophore-संयुग्मित माध्यमिक एंटीबॉडी के बाद। सभी मस्तिष्क क्षेत्रों के लिए, प्रति जानवर तीन वर्गों को चित्रित किया गया था (20× या 40×; Leica DMI 6000B)। Immunofluorescent कोशिकाओं की संख्या ImageJ 1.47v सॉफ्टवेयर और क्षेत्र को सही करने के साथ परिमाणित किया गया था। GAD67-positive puncta के लिए, छवियों को confocal माइक्रोस्कोप (Olympus FV1000) पर 63× आवर्धन पर अधिग्रहित किया गया था, और NEUN-लेबल वाले उत्तेजक न्यूरॉन प्रति GAD67-positive puncta की संख्या को मैन्युअल रूप से गिना गया था (SI परिशिष्ट, पूरक तरीके)।

सांख्यिकी।

एक या दो-तरफ़ा ANOVAs का उपयोग किया गया था, जब उपयुक्त हो, तो पोस्ट हॉक तुलना परीक्षणों के बाद। एक-नमूना टी परीक्षणों ने निर्धारित किया कि क्या भेदभाव सूचकांक शून्य से अलग था और इस प्रकार क्या सीखना हुआ था। P< 0.05="" was="" accepted="" as="" statistical="">

पावती.

हम तकनीकी सहायता के लिए Chantal Schoenmaker और Masoud Ramuz को धन्यवाद देते हैं। अनुसंधान एक Radboud University Topfund (B.R.) द्वारा समर्थित था।