अल्ट्रासाउंड-असिस्टेड एक्सट्रैक्शन का उपयोग करके मूंगफली के खोल से पृथक बायोएक्टिव यौगिकों के त्वचा-सफेदी और एंटी-रिंकल प्रभाव

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दा हाई गम 1, जी वू होंग 1, जून ही किम 1 और जिन वू किम 1,2,3,*

सार:प्रतिक्रिया सतह कार्यप्रणाली को डीपीपी रेडिकल मैला ढोने की गतिविधि (आरएसए), टायरोसिनेस गतिविधि निषेध (टीएआई), और मूंगफली के खोल के अर्क के कोलेजनेज गतिविधि निषेध (सीएआई) सहित आश्रित चर के एक साथ अनुकूलन के लिए अल्ट्रासाउंड-सहायता निष्कर्षण (यूएई) स्थितियों को अनुकूलित करने के लिए नियोजित किया गया था। निष्कर्षण समय (5.0~55.0 मिनट, X1), निष्कर्षण तापमान (26.0~94.0 C सहित मुख्य चरों के प्रभाव , X2), और इथेनॉल सांद्रता (0। 0 प्रतिशत ~ 99.5 प्रतिशत, X3) को अनुकूलित किया गया। प्रत्येक स्थिति से प्रयोगात्मक मूल्यों के आधार पर, इष्टतम स्थितियों की भविष्यवाणी के लिए द्विघात प्रतिगमन मॉडल व्युत्पन्न किए गए थे। स्वतंत्र चर का निर्धारण गुणांक (R2) 0.89~0.96 की सीमा में था, जो दर्शाता है कि प्रतिगमन मॉडल भविष्यवाणी के लिए उपयुक्त है। सुपरइम्पोज़िंग विधि के आधार पर इष्टतम संयुक्त अरब अमीरात की स्थितियों की भविष्यवाणी करने में, 31.2 मिनट का निष्कर्षण समय, 36.6 डिग्री सेल्सियस का निष्कर्षण तापमान और 93.2 प्रतिशत इथेनॉल सांद्रता की पहचान की गई। इन शर्तों के तहत, 74.9 प्रतिशत के आरएसए, 50.6 प्रतिशत के टीएआई और 86 के सीएआई की भविष्यवाणी की गई थी, जो प्रयोगात्मक मूल्यों के साथ अच्छा समझौता दिखा रहा है। एक रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन-पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन से पता चला है कि मूंगफली के खोल के अर्क ने mRNA के स्तर को कम कर दिया हैटायरोसिनेस-संबंधित प्रोटीन-1 और मैट्रिक्स मेटालोप्रोटीनस-3 जीन B16-F0 कोशिकाओं में। इसलिए, हमने पहचान कीत्वचा को सफ़ेदी प्रदान करने वालाऔर प्रोटीन के साथ-साथ जीन अभिव्यक्ति के स्तर पर मूंगफली के खोल के अर्क के विरोधी शिकन प्रभाव, और परिणाम बताते हैं कि मूंगफली का खोल एक प्रभावी कॉस्मेटिक सामग्री हैत्वचा को सफ़ेदी प्रदान करने वालाऔर विरोधी शिकन प्रभाव। इस अध्ययन के आधार पर, मूंगफली के खोल, जिसे एक उपोत्पाद माना जाता था, का उपयोग स्वस्थ खाद्य पदार्थों, दवाओं और सौंदर्य प्रसाधनों के विकास के लिए किया जा सकता है।

कीवर्ड:मूंगफली का खोल; अनुकूलन;त्वचा को सफ़ेदी प्रदान करने वाला; सिकुड़न प्रतिरोधी; एंटीऑक्सीडेंट;टायरोसिनेस; कोलेजनेज़; मानव टायरोसिनेस-संबंधित प्रोटीन-1 (TRP-1); मैट्रिक्स मेटालोप्रोटीनेज (एमएमपी)

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1 परिचय

मेलेनिन एक भूरे या काले रंग का बहुलक वर्णक है जो एपिडर्मिस में मेलानोसाइट्स के मेलेनोसोम से संश्लेषित होता है। इसका मुख्य कार्य त्वचा की रक्षा के लिए पराबैंगनी (यूवी) किरणों को रोकना है। वैकल्पिक रूप से, इसके अत्यधिक उत्पादन से मेलास्मा, मोल और उम्र के धब्बे [1-3] जैसे रंग काले पड़ सकते हैं। टायरोसिनेस एक प्रमुख एंजाइम है जो ऑटोऑक्सीडेशन और पोलीमराइजेशन प्रतिक्रियाओं को उत्प्रेरित करता है, जिसके माध्यम से टाइरोसिन को डाइहाइड्रॉक्सीफेनिलएलनिन के माध्यम से डोपाक्विनोन में परिवर्तित किया जाता है और मेलेनिन बायोसिंथेसिस के दौरान डोपाक्रोम के माध्यम से मेलेनिन का उत्पादन करता है। इस प्रकार, इसका व्यापक रूप से के निषेध के माध्यम से मेलेनिन उत्पादन को कम करने या क्षीण करने के लिए उपयोग किया जाता हैटायरोसिनेससौंदर्य प्रसाधनों के सफेदी प्रभाव को बढ़ाने के लिए गतिविधि [5]। तेजी से औद्योगीकरण और क्लोरोफ्लोरोकार्बन के बढ़ते उपयोग ने पृथ्वी की सुरक्षात्मक ओजोन परत को गंभीर रूप से क्षतिग्रस्त कर दिया, जिसके परिणामस्वरूप यूवी की अधिक मात्रा जमीन तक पहुंच गई और त्वचा को उजागर कर दिया। यूवी विकिरण में यह वृद्धि फलस्वरूप मानव शरीर में प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (आरओएस) की सक्रिय पीढ़ी को प्रेरित करती है, जैसे कि सुपरऑक्साइड आयन, हाइड्रोजन पेरोक्साइड और हाइड्रॉक्सिल रेडिकल। ऐसी प्रजातियों ने टायरोसिन के निरंतर ऑक्सीकरण को बढ़ावा दिया है, जिसके परिणामस्वरूप मेलेनिन का उत्पादन बढ़ गया है। इस संबंध में, के निषेध पर सक्रिय रूप से अध्ययन किए जा रहे हैंटायरोसिनेसगतिविधि के साथ-साथ विकसित करने के लिए ROS को हटानात्वचा को सफ़ेदी प्रदान करने वालाएजेंट [6]। कोलेजन एक प्रमुख बाह्य मैट्रिक्स है जिसमें 90 प्रतिशत डर्मिस शामिल हैं। कोलेजन त्वचा की रक्षा करता है और लोच देता है और त्वचा की यांत्रिक कठोरता, प्रतिरोध, संयोजी ऊतकों के बंधन और कोशिकाओं के प्रसार और विभेदन में शामिल होता है [7]। प्रोटीन जो बाह्य कोशिकीय मैट्रिक्स बनाते हैं, जैसे कोलेजन, मैट्रिक्स मेटालोप्रोटीनेज (एमएमपी) जैसे कोलेजनेज़ द्वारा विघटित होते हैं, जिससे झुर्रियाँ, कम लोच और त्वचा की शिथिलता [8] होती है। विभिन्न प्रकार के MMP जो ROS द्वारा व्यक्त किए जाते हैं, कोलेजन श्रृंखला, त्वचा संयोजी ऊतक को हाइड्रोलाइज़ करते हैं, और कोलेजन अपघटन को बढ़ाने और झुर्रियों के गठन में तेजी लाने के लिए इसकी असामान्य क्रॉसलिंकिंग उत्पन्न करते हैं [9]। इस कारण से, आरओएस पीढ़ी में कमी के माध्यम से मेलेनिन उत्पादन और कोलेजन अपघटन को रोकना त्वचा की सफेदी और शिकन की रोकथाम के लिए मुख्य फोकस रहा है [10]। अर्बुटिन, कोजिक एसिड, और लिनोलेनिक एसिड, सौंदर्य प्रसाधन और रेटिनॉल, गैलेट, और एडेनोसाइन को विरोधी के रूप में -शिकन सौंदर्य प्रसाधन, हाल के वर्षों में व्यापक रूप से उपयोग किए गए हैं। हालांकि, इन सामग्रियों का उपयोग सीमित है, प्रकाश और गर्मी की उपस्थिति के साथ-साथ त्वचा की जलन और संपर्क जिल्द की सूजन [11] सहित प्रतिकूल प्रतिक्रियाओं की उपस्थिति में उनकी अस्थिरता को देखते हुए। पारंपरिक वाइटनिंग और एंटी-रिंकल अवयवों की कमियों को दूर करने के लिए प्राकृतिक एंटीऑक्सिडेंट में बढ़ती रुचि के साथ, पौधों से प्राप्त अर्क का सक्रिय रूप से त्वचा के अनुकूल और सुरक्षित के लिए बायोएक्टिव यौगिकों को विकसित करने के लिए उपयोग किया गया है।सफेदऔर विरोधी शिकन सौंदर्य प्रसाधन [12,13]।

विभिन्न निष्कर्षण विधियां हैं जो वर्तमान में पौधों से बायोएक्टिव यौगिकों के निष्कर्षण के लिए उपयोग की जाती हैं। हालांकि, प्राकृतिक स्रोतों, विशेष रूप से पौधों से बायोएक्टिव यौगिकों का निष्कर्षण मुख्य रूप से विलायक, गर्म पानी और सॉक्सलेट निष्कर्षण विधियों के माध्यम से किया गया है, जिसमें कम निष्कर्षण दक्षता, घटक अपघटन, कम स्थिरता और संचालन की उच्च लागत सहित विभिन्न कमियां दिखाई गई हैं। [14]। इस प्रकार, निष्कर्षण विधियों का हाल ही में परीक्षण किया गया है, जिसमें अल्ट्रासाउंड-असिस्टेड, माइक्रोवेव-असिस्टेड और सुपरक्रिटिकल एक्सट्रैक्शन [15] शामिल हैं। विशेष रूप से, अल्ट्रासाउंड लगभग 20 kHz या उससे अधिक की आवृत्ति के साथ एक ध्वनि तरंग है, जिसके परिणामस्वरूप तरल का संपीड़न, गुहिकायन और दुर्लभ प्रतिक्रिया होती है, जिससे उच्च निष्कर्षण दक्षता प्राप्त करने के लिए थोड़े समय में आणविक गति को अधिकतम किया जाता है [16]। इसके अलावा, अल्ट्रासाउंड फायदेमंद है, क्योंकि इसका कम निष्कर्षण समय बायोएक्टिव यौगिकों के अपघटन को कम करता है और इसका मूल्यांकन एंटीऑक्सीडेंट के साथ प्राकृतिक अवयवों को निकालने के लिए एक प्रभावी विधि के रूप में किया जाता है,सफेद, औरकई पौधों और जड़ी बूटियों से झुर्रियों-रोधी गुण [17]। अल्ट्रासाउंड-सहायता प्राप्त निष्कर्षण (यूएई) की दक्षता बढ़ाने के लिए निष्कर्षण स्थिति अनुकूलन आवश्यक है, और अनुकूलन प्रक्रिया प्रयोगात्मक या सांख्यिकीय विधियों द्वारा की जा सकती है। पारंपरिक एक-कारक-एक-समय विधि, सभी चर स्थिर और बदलते रहते हैं एक समय में केवल एक कारक, यदि यह एक बहुभिन्नरूपी प्रयोग है, तो सहभागी प्रभावों को निर्धारित करने की सीमाएँ हैं। दूसरी ओर, आरएसएम बहुभिन्नरूपी प्रयोगों में चर के बीच सहसंबंध पर सांख्यिकीय जानकारी प्रदान करता है, साथ ही न्यूनतम संख्या में नमूनों का उपयोग करते हुए प्रभावी प्रयोगों के साथ-साथ प्रतिगमन मॉडल की प्रभावशीलता और उपयुक्तता के मूल्यांकन के लिए महत्वपूर्ण गणितीय और सांख्यिकीय तकनीकों को प्रदान करता है। सांख्यिकीय-आधारित अनुकूलन के लिए, विभिन्न आरएसएम डिजाइन, जैसे कि फुल फैक्टोरियल डिजाइन, बॉक्स-बेनकेन डिजाइन, और सेंट्रल कम्पोजिट डिजाइन (सीसीडी) का व्यापक रूप से उपयोग किया गया है। उनमें से, सीसीडी बहुत ही कुशल है और इस प्रकार प्रयोग चर प्रभाव और समग्र प्रयोगात्मक त्रुटि के बारे में अधिक जानकारी प्रदान करता है, जिसमें न्यूनतम आवश्यक रन [18] होते हैं। इसलिए, कई मौजूदा अध्ययनों में, सीसीडी का व्यापक रूप से विकास, सुधार और प्रक्रिया को अनुकूलित करने के लिए उपयोग किया गया है। प्राकृतिक उत्पादों से विभिन्न एंटीऑक्सिडेंट और अन्य मेटाबोलाइट्स निकालने के लिए स्थितियां।

मूंगफली (अरचिस हाइपोगिया) फलियां परिवार से संबंधित एक वार्षिक पौधा है। यह दक्षिण कोरिया, भारत, चीन और संयुक्त राज्य अमेरिका [19] सहित दुनिया भर के 50 से अधिक देशों में उगाया जाता है। मूंगफली प्रोटीन (25 प्रतिशत), लिपिड (47 प्रतिशत), और कार्बोहाइड्रेट (16 प्रतिशत), साथ ही साथ खनिज, विटामिन, नियासिन, असंतृप्त फैटी एसिड, एंडोलिक एसिड [20] के समृद्ध स्रोत हैं। उनका सेवन या तो असंसाधित या प्रसंस्कृत उत्पादों के रूप में किया जाता है, जिसमें अखरोट, मक्खन और खाना पकाने का तेल शामिल है। यह अनुमान लगाया गया है कि दुनिया का वार्षिक मूंगफली उत्पादन कुल मिलाकर 4.1 मिलियन टन है और मूंगफली का खोल मूंगफली के कुल वजन का 35 प्रतिशत ~ 40 प्रतिशत है [21]। यह अनुमान है कि उपोत्पाद के रूप में सालाना 1.5 मिलियन टन से अधिक मूंगफली के छिलके फेंक दिए जाते हैं। हालांकि, यह देखते हुए कि मूंगफली के छिलकों का केवल एक हिस्सा जानवरों के चारे के रूप में उपयोग किया जाता है और उनमें से ज्यादातर भस्म या भूमि से भरे होते हैं, जिससे निपटान लागत और पर्यावरणीय समस्याएं होती हैं, उपोत्पादों की समस्या को दूर करने के लिए मूंगफली के छिलके का उपयोग करके उच्च मूल्य वर्धित सामग्री का उत्पादन करना आवश्यक है [22] ]. एंटीऑक्सिडेंट पर पिछले अध्ययनों से पता चला है कि मूंगफली की त्वचा के अर्क की विरोधी भड़काऊ और मोटापा विरोधी गतिविधियों की सूचना दी गई है [23,24]। हालांकि, अभी तक सुधार के लिए कार्यात्मक कॉस्मेटिक सामग्री के उत्पादन पर कोई शोध नहीं हुआ हैसफेदऔर मूंगफली के छिलके से बायोएक्टिव यौगिकों का उपयोग करके झुर्रियों को कम करने वाले प्रभाव। इसलिए, इस अध्ययन ने मूंगफली के खोल से बायोएक्टिव यौगिकों को उनके एंटीऑक्सिडेंट, सफेदी और विरोधी शिकन प्रभावों की पुष्टि करने के लिए अल्ट्रासाउंड-असिस्टेड एक्सट्रैक्शन (यूएई) को नियोजित करके निकाला और आगे प्रतिक्रिया सतह विधि (आरएसएम) का उपयोग करके एक इष्टतम यूएई स्थिति प्रस्तुत की और अर्क की कार्यक्षमता में वृद्धि की। भोजन, सौंदर्य प्रसाधन और चिकित्सा सामग्री के रूप में इसके उपयोग की संभावना की पुष्टि करने के लिए।

2. परिणाम और चर्चा

2.1. आरएसएम मॉडल की फिटिंग

इस काम में, निष्कर्षण तापमान, निष्कर्षण समय और इथेनॉल एकाग्रता को संयुक्त अरब अमीरात (तालिका 1) को प्रभावित करने वाले महत्वपूर्ण चरों को निर्धारित करने के लिए प्रारंभिक एक-कारक-पर-एक-समय प्रयोग का उपयोग करके सीसीडी के मुख्य चर के रूप में चुना गया था।

फिर, 17 प्रायोगिक रन बनाए गए, जिनमें 3 प्रतिकृतियां केंद्र बिंदु पर 3-चर और 5 स्तर सीसीडी का उपयोग कर रही थीं। अस्पष्टीकृत परिवर्तनशीलता के प्रभाव को कम करने के लिए प्रयोगात्मक क्रम को यादृच्छिक बनाकर प्रायोगिक त्रुटियों को कम किया गया था। डीपीपीएच कट्टरपंथी मैला ढोने की गतिविधि (आरएसए) के लिए प्रयोगात्मक और अनुमानित परिणाम,टायरोसिनेसगतिविधि निषेध (TAI), और कोलेजिनेज़ गतिविधि अवरोध (CAI) तालिका 2 में दिखाए गए हैं।

सीसीडी प्रयोगात्मक स्थितियों के 17 प्रयोगात्मक रन और प्रयोगात्मक परिणामों के बीच सहसंबंध को निर्धारित करने के लिए, इन 3 चर के इष्टतम स्तरों की भविष्यवाणी करने के लिए कई प्रतिगमन मॉडल प्रस्तावित किए गए थे। प्रयोगात्मक डेटा के लिए कई प्रतिगमन विश्लेषण लागू करके, आश्रित चर (वाई) और परीक्षण किए गए चर निम्नलिखित द्विघात प्रतिगमन समीकरणों (तालिका 3) से संबंधित थे।

विचरण का विश्लेषण (ANOVA) प्रयोगात्मक डेटा के विश्लेषण के लिए एक सांख्यिकीय परीक्षण है। यह डेटासेट में कुल भिन्नता को घटक भागों में विभाजित करता है जो भिन्नता के विशिष्ट स्रोतों से जुड़े होते हैं ताकि विचरण घटकों का अनुमान लगाने के लिए मॉडलर के चर पर एक परिकल्पना का परीक्षण किया जा सके [25]। प्रतिक्रिया सतह विश्लेषण और एनोवा को गुणांक निर्धारित करने, मॉडल शर्तों के सांख्यिकीय महत्व का मूल्यांकन करने और प्रयोगात्मक डेटा के गणितीय मॉडल फिट करने के लिए नियोजित किया गया था जिसका उद्देश्य प्रतिक्रिया चर के लिए समग्र क्षेत्र को अनुकूलित करना था [26]। जैसा कि मॉडल द्वारा स्थापित किया गया था, प्रतिगमन मॉडल द्वारा प्रयोगात्मक और अनुमानित प्रतिक्रियाओं के बीच संबंध निर्धारित करने के लिए उपयोग किए जाने वाले सहसंबंध गुणांक (R2) 0.8862~0.9622 की सीमा में थे। इससे पता चलता है कि विश्लेषण किए गए प्रक्रिया चर स्वतंत्र चर के 88.6 प्रतिशत से अधिक की व्याख्या करते हैं। द्विघात प्रतिगमन समीकरणों के गुणांकों की गणना के लिए डिज़ाइन-विशेषज्ञ सॉफ़्टवेयर का उपयोग किया गया था और एनोवा द्वारा मॉडल उपयुक्तता का परीक्षण किया गया था। एकपदी गुणांक के अनुसार द्विघात प्रतिगमन समीकरणों का मान तालिका 4 में सूचीबद्ध है और स्वतंत्र चर के मुख्य प्रभाव के बीच प्राथमिकता का क्रम इथेनॉल एकाग्रता (X3)> निष्कर्षण तापमान (X2)> निष्कर्षण समय (X1) है।

2.2. आरएसए पर निष्कर्षण की स्थिति का प्रभाव

तालिका 2 यूएई की विभिन्न स्थितियों के अनुसार आरएसए के प्रयोगात्मक डेटा को दर्शाती है। मूंगफली के खोल के अर्क का आरएसए 7.6 प्रतिशत ~ 89.9 प्रतिशत की सीमा में निर्धारित किया गया था। निम्न निष्कर्षण स्थितियों के तहत उच्चतम आरएसए की पहचान की गई: 55 का निष्कर्षण समय। 0 मिनट, 6 का निष्कर्षण तापमान 0। {{1 0} C, और 5 की इथेनॉल एकाग्रता 0.0 प्रतिशत (रन #10)। 30.0 मिनट के निष्कर्षण समय के तहत 7.6 प्रतिशत का न्यूनतम आरएसए, 60.0 C का निष्कर्षण तापमान, और 0.0 प्रतिशत की इथेनॉल एकाग्रता, प्रयोगात्मक मूल्य के रूप में पहचाना गया था (रन #13) . बहु प्रतीपगमन विश्लेषण को लागू करके, प्रयोगात्मक डेटा और प्रतिक्रियाएं द्विघात प्रतिगमन समीकरणों (तालिका 3) से संबंधित थीं। सांख्यिकीय विश्लेषण से पता चला कि प्रतिगमन मॉडल का R2 0.9308 (p=0.0027) था, जो इंगित करता है कि यह समीकरण 93.0 प्रतिशत प्रयोगात्मक स्थितियों के परिणामों की व्याख्या कर सकता है, जिसका अर्थ है कि मॉडल अत्यधिक महत्वपूर्ण था और इसका सटीक अनुमान लगाने के लिए उपयोग किया जा सकता है प्रतिक्रिया समारोह।

आरएसए पर अन्य चर के निश्चित स्तरों पर एक व्यक्तिगत संयुक्त अरब अमीरात चर के प्रभाव की भविष्यवाणी की गई है और चित्र 1क में दिखाया गया है। जैसे-जैसे संयुक्त अरब अमीरात के सभी चर बढ़ते जाते हैं, आरएसए बढ़ता जाता है और फिर घटता जाता है। तीन यूएई चर के बीच आरएसए पर इथेनॉल एकाग्रता का सबसे बड़ा प्रभाव था, जबकि निष्कर्षण समय और निष्कर्षण तापमान का आरएसए पर सबसे कम प्रभाव था। यह परिणाम एनोवा परिणामों के अनुरूप है जिसमें इथेनॉल सांद्रता ने आरएसए पर अधिक महत्वपूर्ण प्रभाव दिखाया (पी=0। 0 002) जैसा कि तालिका 4 में दिखाया गया है। आरएसए पर स्वतंत्र चर के बीच बातचीत प्रभाव को 3 डी का उपयोग करके देखा गया था। प्रतिक्रिया सतह वक्र। निष्कर्षण तापमान और निष्कर्षण समय इथेनॉल एकाग्रता (चित्रा 2 ए) के निश्चित स्तर पर एक साथ बदल दिया गया था। जैसे-जैसे दो चर (निष्कर्षण तापमान और समय) बढ़े, RSA अधिकतम स्तर तक बढ़ा और फिर घट गया। उच्चतम आरएसए 56.1 C के निष्कर्षण तापमान पर प्राप्त किया गया था, जो इसलिए 56.1 C तक के तापमान पर, लिग्निन जैसे पौधों की दीवार के घटकों के विनाश के साथ एंटीऑक्सिडेंट क्षमता, जैसे पॉलीफेनोल्स के साथ बायोएक्टिव यौगिकों के निष्कर्षण का सुझाव देता है; हालांकि, उच्च तापमान पर, एंटीऑक्सीडेंट अवयवों के विघटन या पोलीमराइजेशन के कारण आरएसए कम हो गया था। चित्रा 2बी, सी से पता चलता है कि आरएसए निष्कर्षण समय या तापमान से महत्वपूर्ण रूप से प्रभावित नहीं था, जबकि आरएसए इथेनॉल एकाग्रता से काफी प्रभावित था, जो कि 61.0 प्रतिशत के इथेनॉल एकाग्रता में सबसे अधिक था और जो फिर से घट गया। यह परिणाम किम एट अल द्वारा लेस्पेडेज़ा कुनेटा के गर्म पानी के निष्कर्षण प्रयोग के अनुरूप है। जिसमें आरएसए निष्कर्षण तापमान की तुलना में इथेनॉल एकाग्रता से अधिक प्रभावित था, और आरएसए 60 प्रतिशत ~ 70 प्रतिशत [27] की इथेनॉल एकाग्रता सीमा पर अधिकतम था। इन परिणामों से संकेत मिलता है कि बाइनरी सॉल्वेंट (पानी और इथेनॉल) की निष्कर्षण दक्षता संयुक्त अरब अमीरात में मूंगफली के गोले के एकल विलायक निष्कर्षण के लिए अधिक प्रभावी है।

2.3. टीएआई पर निष्कर्षण की स्थिति का प्रभाव

टायरोसिनेसएक एंजाइम है जो एपिडर्मिस की तहखाने की परत में टाइरोसिन को ऑक्सीकरण करके मेलेनिन उत्पादन को बढ़ावा देता है और इस एंजाइम का निषेध आवश्यक है।त्वचा को सफ़ेदी प्रदान करने वाला [28]. The TAI of peanut shell extracted via UAE, according to 17 extraction conditions, ranged from 0.34% to 51.8% (Table 2). Based on experimental values, the relationship between independent variables (X1, X2, X3) and the dependent variable (TAI) was modeled using quadratic regression equations as shown in Table 3. To evaluate the agreement between the experimental and predicted values derived by the quadratic regression models, the goodness-of-fit of the model was evaluated based on ANOVA. The R2 was 0.9622, which is close to 1 and indicates a high degree of correlation between the experimental and predicted values. p-value is used as a tool to evaluate the significance of each coefficient and interactions between each independent variable. The UAE variables will be more significant if the p-value becomes smaller and significance was confirmed at the level of p < 0.05 [29,30]. In evaluating the effects of independent variables, the significance was determined in the order of ethanol concentration (p < 0.0001) >निष्कर्षण तापमान (पी <{0}}.0598)> निष्कर्षण समय (पी <0.4329), जिसने पुष्टि की कि इथेनॉल एकाग्रता का प्रभाव टीएआई में सबसे महत्वपूर्ण था।

टीएआई पर यूएई की स्थितियों के प्रभाव की तुलना करने के लिए, केंद्र बिंदु पर दो चर तय करके टीएआई पर अलग-अलग चर के प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए गड़बड़ी की साजिश का उपयोग किया गया था। जैसा कि चित्र 1 बी में दिखाया गया है, टीएआई ने पिछले आरएसए प्रयोग की तुलना में एक अलग पैटर्न दिखाया; जैसे-जैसे इथेनॉल की सांद्रता बढ़ती गई, यह बढ़ता गया, जबकि निष्कर्षण के समय ने टीएआई को महत्वपूर्ण रूप से प्रभावित नहीं किया। इथेनॉल एकाग्रता के साथ टीएआई की महत्वपूर्ण आनुपातिक वृद्धि को एनोवा परिणामों द्वारा समझाया जा सकता है। टीएआई इथेनॉल एकाग्रता (एक्स 3) के प्राथमिक शब्द से काफी प्रभावित था, और (पी <0। 05)="" द्विघात="" शब्द="" सांख्यिकीय="" रूप="" से="" महत्वपूर्ण="" नहीं="" है,="" इस="" प्रकार,="" टीएआई="" और="" इथेनॉल="" एकाग्रता="" के="" बीच="" एक="" मजबूत="" आनुपातिक="" संबंध="" दिखा="" रहा="" है।="" 3डी="" प्रतिक्रिया="" सतह="" वक्र="" द्विघात="" प्रतिगमन="" समीकरण="" और="" टीएआई="" के="" परिणामों="" का="" चित्रमय="" प्रतिनिधित्व="" है,="" जैसा="" कि="" निष्कर्षण="" तापमान="" (x1),="" निष्कर्षण="" समय="" (x2),="" और="" इथेनॉल="" एकाग्रता="" (x3)="" से="" प्रभावित="" होता="" है।="" चित्रा="" 3ए="" ताई="" पर="" निष्कर्षण="" समय="" और="" इथेनॉल="" एकाग्रता="" के="" अंतःक्रियात्मक="" प्रभाव="" की="" कल्पना="" करता="" है।="" परिणाम="" ने="" पुष्टि="" की="" कि="" निष्कर्षण="" समय="" ने="" टीएआई="" पर="" कोई="" महत्वपूर्ण="" प्रभाव="" नहीं="" दिखाया,="" जबकि="" इथेनॉल="" एकाग्रता="" का="" टीएआई="" के="" साथ="" एक="" मजबूत="" आनुपातिक="" संबंध="" था।="" इसी="" तरह,="" जैसा="" कि="" चित्र="" 3बी="" में="" दिखाया="" गया="" है,="" टीएआई="" निष्कर्षण="" तापमान="" की="" तुलना="" में="" इथेनॉल="" एकाग्रता="" पर="" अधिक="" निर्भर="" था="" और="" उच्चतम="" टीएआई="" प्राप्त="" किया="" गया="" था="" क्योंकि="" इथेनॉल="" एकाग्रता="" बढ़कर="" 99.5="" प्रतिशत="" हो="" गई="" थी।="" अधिकतम="" टीएआई="" के="" लिए="" संयुक्त="" अरब="" अमीरात="" की="" स्थितियों="" की="" खोज="" में,="" अधिकतम="" टीएआई="" स्थितियों="" के="" मूल्यों="" की="" भविष्यवाणी="" 3{{20}}.0="" मिनट,="" 26.3="" डिग्री="" सेल्सियस="" और="" 99.5="" प्रतिशत="" होने="" की="" भविष्यवाणी="" की="" गई="" थी।="" यह="" परिणाम="" नाकामुरा="" एट="" अल="" द्वारा="" रिपोर्ट="" किए="" गए="" समान="" है।="" [31]="" साइट्रोन="" के="" पत्तों="" की="" जैविक="" गतिविधि="" पर="" एक="" अध्ययन="" में,="" जब="" 20.0="" प्रतिशत="" ~="" 80.0="" प्रतिशत="" इथेनॉल="" को="" एक="" निष्कर्षण="" विलायक="" के="" रूप="" में="" इस्तेमाल="" किया="" गया="" था,="" टीएआई="" इथेनॉल="" एकाग्रता="" में="" वृद्धि="" के="" जवाब="" में="" अनुपात="" में="" वृद्धि="" हुई="" और="" 80="" प्रतिशत="" इथेनॉल="" का="" उपयोग="" करके="" निष्कर्षण="" में="" अधिकतम="" मूल्य="" दिखाया।="" इससे="" पता="" चलता="" है="" कि="" इथेनॉल="" की="" उच्च="" सांद्रता="" का="" उपयोग="" बायोएक्टिव="" यौगिकों="" को="" निकालने="" में="" फायदेमंद="">त्वचा को सफ़ेदी प्रदान करने वालामूंगफली के छिलके या अन्य पौधों से प्रभाव।

2.4. सीएआई पर निष्कर्षण की स्थिति का प्रभाव

Collagen is the most abundant protein in mammals and the main structural component of the extracellular matrix with gly-pro-hyp repeating units longer than 1400 amino acids. Collagenase is an enzyme that breaks down peptide bonds of collagen that form skin, bones, tendons, and ligaments. The collagen present in the dermis is decomposed by collagenase, which causes skin wrinkles and reduces skin elasticity; therefore, it is necessary to reduce the activity of collagenase to prevent skin wrinkles [32,33]. The optimization of the UAE condition was performed to maximize the CAI of peanut shell extract. A total of 17 runs were needed for optimizing the three individual variables and the experimental data of CAI obtained under experimental sets were 25.2%~92.3% (Table 2). Based on the 17 experimental runs, by applying multiple regression analysis on the experimental data, response and independent variables were related by the following quadratic regression equation in terms of the coded parameters given in Table 3. Then, ANOVA was applied to determine the regression coefficients, statistical significance, and to fit the mathematical models. The mean-square values were calculated by dividing the sum of the squares of each variation source by their degrees of freedom, and a 95% confidence level (α = 0.05) was applied to determine the statistical significance in the analysis of the quadratic model. The ANOVA results confirmed that R2 of the quadratic regression equation was 0.8862 and that the p-value was 0.0134, which is less than the significance level (p < 0.05), thus indicating a good model of fit and statistical significance for predicting CAI values. In the primary term, the X2 and X3 showed significant effects and the interaction effect terms were significant in the X1X2 and X2X3 (p < 0.05). The effect of UAE conditions on CAI production was confirmed to be in the order of: extraction temperature (p = 0.0236) >इथेनॉल सांद्रता (p=0.0240)> निष्कर्षण समय (p=0.8505), इस प्रकार यह दर्शाता है कि निष्कर्षण तापमान और इथेनॉल एकाग्रता का प्रभाव CAI पर महत्वपूर्ण था।

चित्र 1c एक गड़बड़ी की साजिश को दर्शाता है जिसमें दो चर निश्चित हैं और यह CAI पर एकल चर के प्रभाव की कल्पना करता है। सीएआई पर सभी तीन चर के प्रभाव समान दिखाए गए थे, और तीन चर ने महत्वपूर्ण प्रभाव दिखाया और वृद्धि हुई और बाद में सीएआई में कमी आई क्योंकि प्रत्येक स्वतंत्र चर में वृद्धि हुई। हमारे अध्ययन में, द्विघात प्रतिगमन समीकरणों (चित्रा 4) का उपयोग करके सीएआई में दो स्वतंत्र चरों की बातचीत की कल्पना करने के लिए 3डी सतह प्रतिक्रिया वक्र विकसित किए गए थे। जब केंद्र बिंदु पर इथेनॉल सांद्रता तय की गई थी, तो सीएआई पर निष्कर्षण समय और तापमान के प्रभाव का मूल्यांकन चित्र 4कमें किया गया था। जैसे-जैसे दो चर एक साथ बदलते गए, सीएआई बढ़कर 33.4 मिनट और 76.8 डिग्री सेल्सियस हो गया और 92.8 प्रतिशत की अधिकतम सीएआई के बाद फिर से घट गया। जैसा कि चित्र 4बी, सी में दिखाया गया है, सीएआई का इथेनॉल सांद्रता में उच्चतम मूल्य 64.3 प्रतिशत था, जो बाद में क्रमिक घटती प्रवृत्ति को दर्शाता है, जो बताता है कि एक द्विआधारी विलायक जिसमें 64.3 प्रतिशत इथेनॉल शामिल है, निष्कर्षण विलायक के रूप में अधिक उपयुक्त है। यह परिणाम पिछले शोध के अनुरूप है जिसमें बताया गया है कि पानी और इथेनॉल के एक द्विआधारी विलायक ने ऑरोस्टैचिस जैपोनिका से बायोएक्टिव यौगिकों के निष्कर्षण में पानी की तुलना में अधिक सीएआई दिखाया, जो बताता है कि निकालने में 50 प्रतिशत इथेनॉल अधिक फायदेमंद होगा।त्वचा को सफ़ेदी प्रदान करने वालासामग्री [34]। क्वाड्रैटिक्रिग्रेशन मॉडल द्वारा अनुमानित मूंगफली के खोल के अर्क का अधिकतम सीएआई 94.5 प्रतिशत था, जो 45.1 मिनट के निष्कर्षण समय, 93.6 डिग्री सेल्सियस के निष्कर्षण तापमान और 42.3 प्रतिशत इथेनॉल एकाग्रता की शर्तों के तहत प्राप्त किया गया था। हमारे अध्ययन में प्राप्त सीएआई 94.5 प्रतिशत था, जो कि ओह एट अल द्वारा रिपोर्ट की गई हरी चाय के अर्क के 39.4 प्रतिशत और सीएआई मूल्यों के 40.3 प्रतिशत के प्रभाव के दोगुने से अधिक है। [35]।

2.5. इष्टतम निष्कर्षण शर्तें

एंटीऑक्सीडेंट,त्वचा को सफ़ेदी प्रदान करने वालाऔर विरोधी शिकन प्रभाव सौंदर्य प्रसाधनों के लिए सभी महत्वपूर्ण कार्य हैं और ऐसी स्थितियां प्राप्त करना आवश्यक है जो संयुक्त अरब अमीरात की स्थितियों को अनुकूलित करने में इन तीन कार्यों को एक साथ अधिकतम कर सकें। चित्र 5 एक अनुकूलन प्रक्रिया दिखाता है जो द्विघात प्रतिगमन समीकरण के माध्यम से प्राप्त समोच्च ग्राफ़ की प्रत्येक इष्टतम स्थिति को ओवरलैप करके RSA (Y1), TAI (Y2) और CAI (Y3) को एक साथ अधिकतम कर सकती है। तीन चरों के अनुकूलन के लिए स्वतंत्र चरों की सीमा 5 के निष्कर्षण समय तक सीमित थी।0~55।0 मिनट, 26 का निष्कर्षण तापमान।{{10}}~94 .0 C, और इथेनॉल सांद्रता 0.0 प्रतिशत ~99.5 प्रतिशत (तालिका 5)। व्यक्तिगत इष्टतम निष्कर्षण स्थितियों के अनुसार, इष्टतम संयुक्त अरब अमीरात की स्थिति 31.2 मिनट निष्कर्षण समय, 36.6 डिग्री सेल्सियस निष्कर्षण तापमान, 93.2 प्रतिशत इथेनॉल एकाग्रता, और उपरोक्त शर्तों के तहत, 74.9 प्रतिशत का आरएसए, 50.6 प्रतिशत का टीएआई, और सीएआई 86.8 प्रतिशत की भविष्यवाणी की गई थी। जब अनुमानित आरएसए, टीएआई और सीएआई मूल्यों की तुलना सत्यापन के लिए प्रयोग से प्राप्त मूल्यों से की गई थी, तो सत्यापन परीक्षण के मूल्य अनुमानित मूल्यों के समान थे, जहां मान क्रमशः 78.2 प्रतिशत, 52.3 प्रतिशत और 87.7 प्रतिशत थे।

2.6. एसई और यूएई की तुलना

संयुक्त अरब अमीरात की निष्कर्षण प्रभावशीलता की पुष्टि करने के लिए, हम संयुक्त अरब अमीरात और सॉक्सलेट निष्कर्षण (एसई) तकनीकों का उपयोग करके उत्पादित मूंगफली खोल निकालने के आरएसए, टीएआई और सीएआई की तुलना करते हैं। जब एसई सामान्य एसई स्थितियों के तहत 99.5 प्रतिशत इथेनॉल का उपयोग 70 C पर 4 घंटे के निष्कर्षण समय के लिए किया गया था, तो आरएसए, टीएआई, और सीएआई 75.5 प्रतिशत, 60.2 प्रतिशत, और 74.4 प्रतिशत पाए गए थे, जो नहीं थे इष्टतम संयुक्त अरब अमीरात की स्थिति के तहत प्राप्त परिणामों से बहुत अलग। हालांकि, जब एसई की स्थिति 31.2 मिनट और 93.2 प्रतिशत इथेनॉल, आरएसए, टीएआई और सीएआई की यूएई इष्टतम स्थितियों के बराबर निर्धारित की गई थी, तो क्रमशः 62.0, 28.3 और 45.6 प्रतिशत की कमी आई। अनुकूलतम परिस्थितियों में संयुक्त अरब अमीरात की तुलना में। मूंगफली के छिलके से उपयोगी सामग्री के उत्पादन में अल्ट्रासाउंड के लाभ का मूल्यांकन कम विलायक खपत और कम निष्कर्षण समय के कारण उच्च उत्पादकता और औद्योगीकरण के लिए उपयुक्त प्रक्रिया के रूप में किया गया था।

2.7. एमएमपी की एमआरएनए अभिव्यक्ति-3 और टीआरपी-1

स्तनधारी मेलानोसाइट्स में, मेलानोजेनेसिस और कोलेजन हाइड्रोलिसिस क्रमशः टीआरपी और एमएमपी जीन द्वारा नियंत्रित होते हैं, और टीआरपी {0}} और एमएमपी -3 मेलानोजेनेसिस और कोलेजन हाइड्रोलिसिस के नियमन के लिए मेनजीन के रूप में जाने जाते हैं; इसलिए, बी 16- एफ 0 कोशिकाओं के पूरे सेल लाइसेट्स पर आरटी-पीसीआर विश्लेषण किया गया था और इष्टतम परिस्थितियों में संयुक्त अरब अमीरात से उत्पादित मूंगफली के खोल निकालने का प्रभाव (31.2 मिनट, 36.6 डिग्री, 93.2 प्रतिशत) एमएमपी की एमआरएनए अभिव्यक्ति पर -3 और टीआरपी -1 का अध्ययन किया गया। जैसा कि चित्र 6 दिखाता है, मूंगफली के खोल के अर्क ने एमएमपी -3 और टीआरपी -1 की अभिव्यक्ति को बी 16- एफ 0 कोशिकाओं में काफी कम कर दिया, जब जीन अभिव्यक्ति प्रयोगों को मूंगफली के साथ किया गया था। 0~1 मिलीग्राम/एमएल की खोल निकालने की एकाग्रता सीमा। मूंगफली के खोल के अर्क ने एमएमपी -3 और टीआरपी -1 की अभिव्यक्ति को 6.1-गुना और 8.7-गुना, क्रमशः 1.0 मिलीग्राम पर काफी कम कर दिया। /एमएल। इन परिणामों से पता चलता है कि मूंगफली के खोल का अर्क MMP3 को निष्क्रिय करके B16F0 कोशिकाओं में कोलेजन क्षरण को रोकता है और MMP-1 को निष्क्रिय करता है और MMP-9 [36] के सहयोग में हस्तक्षेप करता है। मौजूदा अध्ययनों से पता चला है कि पौधों के अर्क के साथ उपचार ने फॉस्फोराइलेटिंग एक्स्ट्रासेलुलर सिग्नल-रेगुलेटेड प्रोटीन किनेज (ईआरके) द्वारा माइक्रोफथाल्मिया-जुड़े ट्रांसक्रिप्शन फैक्टर (एमआईटीएफ) की अभिव्यक्ति को रोक दिया। इस प्रकार, मूंगफली के खोल के अर्क द्वारा मेलेनिन उत्पादन के निरोधात्मक प्रभाव को के निषेध के लिए जिम्मेदार ठहराया जाता हैटायरोसिनेसईआरके और एमआईटीएफ [37] के अभिव्यक्ति निषेध के माध्यम से गतिविधि। इस प्रकार, मूंगफली के खोल के अर्क ने टीआरपी -1 और एमएमपी -3 के mRNA अभिव्यक्ति स्तर को कम कर दिया, जो इंगित करता है कि मूंगफली के खोल के अर्क में कोलेजनोलिसिस और मेलानोजेनेसिस पर मजबूत निरोधात्मक गतिविधियाँ होती हैं, जिससे यह एक उत्कृष्ट कॉस्मेटिक सामग्री बन जाती हैत्वचा को सफ़ेदी प्रदान करने वालाऔर विरोधी शिकन प्रभाव।

3. सामग्री और तरीके

3.1. सामग्री और अभिकर्मक

मूंगफली के गोले 2 मार्च 019 में नोंगह्युप मार्ट (गोचांग, ​​जियोनबुक, कोरिया) से खरीदे गए थे और 24 घंटे के लिए सूखे ओवन (एफसी 49, लैब हाउस, सियोल, कोरिया) का उपयोग करके गोले को 60 डिग्री सेल्सियस पर सुखाया गया था। शुष्क भार स्थिर रहा। सूखे मूंगफली के छिलकों को एक खाद्य प्रोसेसर (हनिल एचएमएफ -3800, सियोल, कोरिया) का उपयोग करके चूर्णित किया गया और फिर 600 माइक्रोएम्सिव के माध्यम से पारित किया गया। इथेनॉल को सैमचुन केमिकल (95.0 प्रतिशत v/v, सियोल, कोरिया) से खरीदा गया था। Folin-Ciocalteu अभिकर्मक, गैलिक एसिड (97 प्रतिशत), और क्वेरसेटिन मर्क (केनिलवर्थ, एनजे, यूएसए) से खरीदे गए थे। 2,2-डिपेनिल-1-पिक्रिलहाइड्राज़िल (DPPH), एस्कॉर्बिक एसिड, और 3,4-डायहाइड्रोक्सी-L-फेनिलएलनिन (L-DOPA) सिग्मा-एल्ड्रिच (सेंट लुइस, से खरीदे गए थे। एमओ, यूएसए)। इस प्रयोग में प्रयुक्त अन्य सभी रसायन विश्लेषणात्मक ग्रेड के थे और सिग्मा-एल्ड्रिच से खरीदे गए थे। सभी स्टॉक समाधान aMilli-Q शुद्धि प्रणाली (मिलिपोर, बर्लिंगटन, वीटी, यूएसए) का उपयोग करके शुद्ध विआयनीकृत पानी द्वारा तैयार किए गए थे।

3.2. अल्ट्रासाउंड-असिस्टेड एक्सट्रैक्शन और सॉक्सलेट एक्सट्रैक्शन

पीसा हुआ मूंगफली का खोल (1 ग्राम) एक निष्कर्षण बर्तन में रखा गया था, प्रत्येक में 1 0 एमएल सॉल्वेंट और मिश्रित भंवर मिक्सर (वीएम -10, दाइहान साइंटिफिक कं, लिमिटेड, वोनजू, कोरिया) का उपयोग करके मिलाया गया था। 1 मिनट। अल्ट्रासोनिक एक्सट्रैक्टर (250 W, SD-D250H, Daihan वैज्ञानिक कं, लिमिटेड, वोनजू, कोरिया) में पानी को परिचालित करके एक बाहरी रेफ्रिजेरेटेड बाथसर्क्यूलेटर (CDRC8, Daihan वैज्ञानिक कं, लिमिटेड, वोनजू, कोरिया) का उपयोग करके निष्कर्षण किया गया था। ) एक डिजिटल टाइमर और तापमान नियंत्रक के साथ। निष्कर्षण एक डिजिटल टाइमर और एक तापमान नियंत्रक से लैस अल्ट्रासोनिक डिवाइस के साथ किया गया था। नमूना 40 kHz की कार्य आवृत्ति पर विभिन्न प्रायोगिक अवधियों और तापमानों के लिए ध्वनिबद्ध किया गया था। फिर, अर्क को 10 मिनट (236आर, लैबोजेन, सियोल, कोरिया) के लिए 10, 000 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज किया गया। सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद, नमूना मात्रा 5 एमएल तक बनाई गई थी और विश्लेषण से पहले 0.2 माइक्रोन झिल्ली फिल्टर के माध्यम से फ़िल्टर की गई थी। Soxhlet निष्कर्षण के लिए, पाउडर मूंगफली के खोल (5 ग्राम) को एक Soxhlet तंत्र में 70 डिग्री सेल्सियस के अधिकतम तापमान पर 4 घंटे (8 चक्र) के लिए 99.5 प्रतिशत इथेनॉल का उपयोग करके 100 एमएल के साथ लगातार निकाला गया था। अल्ट्रासाउंड-सहायता प्राप्त निष्कर्षण तकनीक को अंगूर के बीज से तेल निकालने में बहुत कुशल दिखाया गया था, तेल और पॉलीफेनॉल दोनों के लिए पारंपरिक निष्कर्षण विधियों की तुलना में अल्ट्रासाउंड के लाभ समान थे, क्योंकि कम विलायक खपत के साथ प्राप्त तेल/पॉलीफेनॉल उपज और कम निष्कर्षण समय।

3.3. प्रयोगात्मक परिरूप

प्रयोगात्मक रनों की संख्या को कम करने और कारकों के बीच बातचीत का अध्ययन करने के लिए सीसीडी, एक प्रकार का आरएसएम का उपयोग करके प्रयोगात्मक डिजाइन किया गया था। TheDesign-Expert® सॉफ़्टवेयर 8.0 (State-Ease, City, MN, USA) का उपयोग प्रयोगों के डिज़ाइन, डेटा विश्लेषण, और एंटीऑक्सिडेंट वाले बायोएक्टिव यौगिकों के निष्कर्षण को अधिकतम करने के लिए निष्कर्षण स्थितियों के अनुकूलन के लिए किया गया था।त्वचा को सफ़ेदी प्रदान करने वाला, और मूंगफली के खोल से विरोधी शिकन प्रभाव। प्रयोगों को सीसीडी के अनुसार डिजाइन किया गया था, प्रस्तुत किए गए तीन स्वतंत्र चर की सीमा और केंद्र बिंदु मान प्रारंभिक प्रयोगों (तालिका 1) के परिणामों पर आधारित थे। सीसीडी को मूंगफली के गोले से आरएसए, टीएआई और सीएआई सहित प्रतिक्रियाओं को अधिकतम करने के लिए इष्टतम यूएई स्थितियों की भविष्यवाणी करने के लिए लागू किया गया था। स्वतंत्र चर के रूप में, चुने गए तीन चर निष्कर्षण समय (X1), निष्कर्षण तापमान (X2), और इथेनॉल एकाग्रता (X3) थे। प्रजनन क्षमता का अनुमान लगाने के लिए केंद्रीय बिंदुओं पर तीन प्रतिकृति के साथ कुल 17 प्रायोगिक रन बनाए गए थे। द्विघात प्रतिगमन मॉडल का उपयोग प्रयोगात्मक डेटा को फिट करने के लिए किया गया था और प्रतिक्रिया चर की भविष्यवाणी करने के लिए लागू किया गया था, जैसा कि समीकरण (1) में दिखाया गया है:

वाई= 0 प्लस 1X1 प्लस 2X2 प्लस 3X3 प्लस 11X12 प्लस 22X22 प्लस 33X32 प्लस 12X1X2 प्लस 13X1X3 प्लस 23X2X3 (1)

जहां Y अनुमानित प्रतिक्रिया है; 0 स्थिरांक (अवरोधन) है; 1, 2, और 3 रैखिक प्रभाव पदों के लिए प्रतीपगमन गुणांक हैं; 11, 22, और 33 द्विघात प्रभाव पद हैं; और 12, 13, और 23 क्रमशः अंतःक्रियात्मक प्रभाव शब्द हैं। एक प्रतिक्रिया सतह विश्लेषण और एनोवा को मॉडल शर्तों के प्रतिगमन गुणांक और सांख्यिकीय महत्व को निर्धारित करने और प्रयोगात्मक [38] के गणितीय मॉडल को फिट करने के लिए नियोजित किया गया था।

3.4. डीपीपीएच रेडिकल स्कैवेंजिंग गतिविधि (आरएसए)

मूंगफली के खोल के अर्क का RSA परेरा-कारो एट अल द्वारा वर्णित किया गया था। [39]। समाधान 0। 0 मेथनॉल (95 प्रतिशत) में 1 मिमी डीपीपीएच तैयार किया गया था और 1.25 एमएल पतला निकालने के 0.25 एमएल में जोड़ा गया था। ऊष्मायन के 20 मिनट के बाद यूवी-विस्पेक्ट्रोफोटोमीटर (यूवी1650पीसी, शिमदज़ु, क्योटो, जापान) का उपयोग करके 517 एनएम पर अवशोषण को मापने के लिए आरएसए निर्धारित किया गया था। आसुत जल का उपयोग करके खाली तैयार किया गया था और आरएसए की गणना नीचे के अनुसार की गई थी। (समीकरण (2)):

आरएसए (प्रतिशत)={1 -एबीएस (नमूना) / एबीएस (नियंत्रण)} × 100 (2)

3.5. टायरोसिनेस गतिविधि निषेध (टीएआई)

TAI को संशोधित विधि के अनुसार L-DOPA को सब्सट्रेट byJo et al के रूप में उपयोग करके प्रदर्शित किया गया था। [40]। नमूने 200 µ एल एल-डोपा और 200 µ एल पोटेशियम फॉस्फेटबफर (पीएच 6.8) और 200 µ एल के साथ मिश्रित किए गए थे।टायरोसिनेस(125 यू/एमएल) को टेस्ट ट्यूब में जोड़ा गया और 20 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट किया गया। नमूना अवशोषण को यूवी-विज़ स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके 475 एनएम पर मापा गया था और परिणामों की तुलना नियंत्रण से की गई थी। प्रत्येक सांद्रता के लिए, एंजाइम गतिविधि की गणना किसी भी अवरोधक के बिना बफर का उपयोग करके परख की तुलना में प्रतिशत के रूप में की गई थी, और टीएआई की गणना निम्न सूत्र के आधार पर की गई थी। (समीकरण (3)):

टीएआई (प्रतिशत)={1 -एबीएस (नियंत्रण) - एबीएस (नमूना) / एबीएस (नियंत्रण)}× 100 (3)

जहां ABS (नियंत्रण) बफर प्लस कोलेजेनेज का अवशोषण है; एब्स (नमूना) बफर प्लस कोलेजेनेज प्लस नमूना/मानक का अवशोषण है।

3.6. Collagenase गतिविधि निषेध (CAI)

वुन्श और हेनड्रिच [41] के तरीकों को संशोधित करके अर्क के सीएआई का मापन किया गया था। सब्सट्रेट, 4-फेनिलज़ोबेज़ाइलोक्सिलकार्बोनिल-प्रो-लेउ-ग्लाइ प्रो-आर्ग (एफएएलजीपीए), 10 एमएल बफर में 1.2 मिलीग्राम/एमएल में भंग कर दिया गया था और फिर 125 µ एल समाधान जोड़ा गया था और 60 मिनट के लिए ऊष्मायन किया गया था। 37 डिग्री सेल्सियस पर कोलेजनेज को बफर में 0.4 मिलीग्राम/एमएल में भंग कर दिया गया था, और 75 µ एल एंजाइम समाधान को बफर समाधान में जोड़ा गया था। थेनजाइम-सब्सट्रेट मिश्रण को 37 डिग्री सेल्सियस पर 30 मिनट के लिए पानी के स्नान में ऊष्मायन किया गया था और 20 प्रतिशत साइट्रिक एसिड (डब्ल्यू/वी) के 75 µ एल को जोड़कर प्रतिक्रिया को रोक दिया गया था। एथिलसेटेट के 1.5 एमएल जोड़ने के बाद, एथिल एसीटेट परत को अलग किया गया था और अवशोषण को 320 एनएम पर मापा गया था। निषेध के प्रतिशत की गणना निम्न सूत्र के अनुसार की गई थी।

सीएआई (प्रतिशत)={1 - [एबीएस (नियंत्रण) - एबीएस (नमूना)] / एबीएस (नियंत्रण)} × 100 (4)

जहां ABS (नियंत्रण) बफर प्लस कोलेजेनेज का अवशोषण है; एब्स (नमूना) बफर प्लस कोलेजेनेज प्लस सैंपल/स्टैंडर्ड का एब्स सॉर्बेंस है।

3.7. सेल लाइनों का रखरखाव और संवर्धन

मेलानिन-उत्पादक बी16-F0 मेलेनोमा सेल कोरिया सेल लाइन बैंक (KCLB, चोंगनो, सियोल, कोरिया) से प्राप्त किया गया था और Dulbecco के संशोधित ईगल के माध्यम (DMEM, सिग्मा-एल्ड्रिच, सेंट लुइस, एमओ) में सुसंस्कृत किया गया था। लुइस, एमओ, यूएसए) भ्रूण गोजातीय सीरम (एफबीएस, 10 प्रतिशत, वेल्जीन, ग्योंगसन, कोरिया) और पेनिसिलिन-स्ट्रेप्टोमाइसिन (सिग्मा-एल्ड्रिच, सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) के एंटीबायोटिक समाधान के साथ पूरक। कोशिकाओं के ट्रिप्सिनाइजेशन के लिए ट्रिप्सिन-ईडीटीए (गिब्को, ग्रैंड आइलैंड, एनवाई, यूएसए) का उपयोग किया गया था। उपयोग की जाने वाली सभी सामग्रियां सेल कल्चर ग्रेड की थीं।

3.8. रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (RT-PCR)

आरटी-पीसीआर का प्रदर्शन एमएमपी-3 और टीआरपी-1 से जुड़े जीन अभिव्यक्ति स्तरों में परिवर्तन को मापने के लिए किया गया थासफेदऔर विरोधी शिकन प्रभाव, बी 16- एफ 0 कोशिकाओं को एक 24- अच्छी तरह से प्लेट में सीरम-फ्रीडीएमईएम में मूंगफली के खोल के अर्क के विभिन्न सांद्रता के साथ इलाज किया गया था, और 24 घंटे के लिए ऊष्मायन किया गया था। प्रयोग के दौरान परीक्षण किए गए समूह के समान परिस्थितियों में अनुपचारित कोशिका नियंत्रण बनाए रखा गया था। कोशिकाओं से आरएनए अलगाव AccuPrep® यूनिवर्सल आरएनए एक्सट्रैक्शन किट (बायोनियर, डेजॉन, कोरिया) का उपयोग करके किया गया था। पूरक डीएनए को AmfiRiert प्लेटिनम सीडीएनए संश्लेषण मास्टरमिक्स (जेनडीपोट, बार्कर, TX, यूएसए) का उपयोग करके संश्लेषित किया गया था। आरटी-पीसीआर विश्लेषण एमआरएनए स्तरों को निर्धारित करने के लिए सीएफएक्स 96 टच पीसीआर सिस्टम (बायो-रेड, हरक्यूलिस, सीए, यूएसए) का उपयोग करके किया गया था। इस्तेमाल किए गए प्राइमर इस प्रकार थे: एमएमपी -3 सेंस, {{1 0}} AGTTTGGTGTCGCGGAGCAC -30 और एंटीसेंस, 50-TACATGAGCGCTTCCGGCAC-30; और टीआरपी-1 सेंस, 50-जीसीटीजीसीएजीजीएजीसीसीटीटीसीटीटीटीसीटीसी 30 और एंटीसेंस, 50-एएजीएसीजीसीटीजीसीएटीजीसीटीजीजीटीसीटी-30। ऊपर बताए गए प्राइमरों का एक उपयुक्त सेट निम्नलिखित साइकिलिंग स्थितियों का उपयोग करके संबंधित जीनों को बढ़ाने के लिए उपयोग किया गया था: 5 मिनट के लिए 94 C, इसके बाद 5 एस के लिए 95 C पर 25 चक्र, 30 एस के लिए 60 C (forMMP -3) , और 60 C 30 सेकंड के लिए (TRP-1 के लिए), और 72 C 30 सेकंड के विस्तार के लिए। पीसीआर उत्पादों को 1 प्रतिशत agarose जेल पर इलेक्ट्रोफोरेस किया गया, एथिडियम ब्रोमाइड से सना हुआ, और जेल डॉक्टर टीएम एक्सआर प्लस सिस्टम और क्वांटिटी वन सॉफ्टवेयर 2.0 (बायो-रेड, हरक्यूलिस, सीए, यूएसए) का उपयोग करके कल्पना की गई। एक हाउसकीपिंग प्रोटीन, -एक्टिन, का उपयोग लोडिंग नियंत्रण के रूप में इस धारणा के साथ किया गया था कि इन प्रोटीनों की अभिव्यक्ति का स्तर स्थिर रहता है।

4। निष्कर्ष

इस अध्ययन में, कई उपयोगों के साथ अतिरिक्त मूल्य सामग्री विकसित करने के लिए मूंगफली के गोले के कृषि उपोत्पादों से जैव सक्रिय पदार्थों की वसूली और उपयोग के लिए पूरक दृष्टिकोण को नियोजित किया गया था। सबसे पहले, हमने यूएई प्रक्रिया को अनुकूलित करके एंटीऑक्सिडेंट, त्वचा को गोरा करने और एंटी-रिंकल इफेक्ट के साथ बायोएक्टिव यौगिकों की निकासी क्षमता बढ़ाने का प्रयास किया। इसलिए, इस अध्ययन ने संयुक्त अरब अमीरात को बायोएक्टिव यौगिकों के कुशल उत्पादन के लिए नियोजित कियात्वचा को सफ़ेदी प्रदान करने वालाऔर मूंगफली के छिलके से विरोधी शिकन प्रभाव और RSA, TAI और CAI को एक साथ अधिकतम करने के लिए सांख्यिकीय-आधारित अनुकूलन लागू किया। संयुक्त अरब अमीरात की स्थितियों को सीसीडी का उपयोग करके अनुकूलित किया गया था और यह पुष्टि की गई थी कि मूंगफली के गोले से बायोएक्टिव यौगिकों के निष्कर्षण में विलायक और एकाग्रता की पसंद पर विचार किया जाना चाहिए। प्रतिक्रिया सतहों को ओवरलैप करके, तीन निर्भर चर के वक्र, 31.2 मिनट का निष्कर्षण समय, 36.6 डिग्री सेल्सियस का निष्कर्षण तापमान, और 93.2 प्रतिशत की इथेनॉल एकाग्रता को संयुक्त अरब अमीरात की इष्टतम स्थिति के रूप में निर्धारित किया गया था। यह पुष्टि की गई है कि मूंगफली के खोल के अर्क का आरएसए बहुत अधिक है और टीएआई और सीएआई में वृद्धि की उम्मीद की जा सकती है, जो कि संकेतक हैंत्वचा को सफ़ेदी प्रदान करने वालाऔर विरोधी शिकन प्रभाव, क्रमशः। संयुक्त अरब अमीरात की स्थितियों के अनुकूलन ने मूंगफली के गोले में बायोएक्टिव पदार्थों के उत्पादन में वृद्धि की पुष्टि की, और मूंगफली के छिलके के अर्क की सफेदी और शिकन-रोधी गतिविधियों की पुष्टि की।टायरोसिनेसऔर कोलेजनेज़ गतिविधि में गिरावट। इसके आधार पर, एमएमपी और टीआरपी के अभिव्यक्ति स्तरों पर मूंगफली के छिलके के प्रभाव का मूल्यांकन यह आकलन करने के लिए किया गया था कि क्या उनके जीन अभिव्यक्ति स्तर पर सफेदी और विरोधी शिकन प्रभाव हैं। मूंगफली के खोल के अर्क के सफेदी और विरोधी शिकन प्रभावों की पुष्टि के डाउनरेगुलेशन के माध्यम से की गई थी। mRNA अभिव्यक्ति के साथ-साथ MMP-3 और TRP-1 के प्रोटीन भावों का निषेध। इसलिए, मूंगफली के खोल का अर्क प्रभावी दिखाया गया हैसफेदऔर प्रोटीन अभिव्यक्ति और जीन स्तर पर शिकन सुधार। संयुक्त अरब अमीरात का उपयोग करते हुए मूंगफली के अर्क में उच्च एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि और उत्कृष्ट त्वचा-सफेदी और विरोधी शिकन प्रभाव होते हैं, जिससे मूंगफली के खोल को प्राकृतिक कॉस्मेटिक और खाद्य सामग्री के रूप में काफी संभावनाएं मिलती हैं। इसके अलावा, यह माना जाता है कि पारंपरिक प्रक्रियाओं की तुलना में उच्च उत्पादन उपज और कम प्रसंस्करण लागत को देखते हुए, संयुक्त अरब अमीरात का उपयोग करके बायोएक्टिव यौगिकों के उत्पादन को सौंदर्य प्रसाधन, भोजन और दवा सामग्री के उत्पादन के लिए व्यावसायीकरण प्रक्रिया में लागू किया जा सकता है।