सिस्टांचे लीवर की बीमारी को कैसे रोकता है

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सार

पॉलीसेकेराइड की प्रारंभिक विशेषताओं, एंटीऑक्सिडेंट और हेपेटोप्रोटेक्टिव गतिविधि का शोध करने के लिएसिस्टैंच डेजर्टिकोला (सीडीपी), तीन पॉलीसेकेराइड अंश, सीडीपी-ए, सीडीपी-बी, और सीडीपी-सी, क्रमिक रूप से झिल्ली निस्पंदन (माइक्रोफिल्ट्रेशन, अल्ट्राफिल्ट्रेशन और नैनोफिल्ट्रेशन) द्वारा प्राप्त किए गए थे। तीन अंशों के आणविक भार, मोनोसैकराइड रचनाएं, शुद्धता और आईआर स्पेक्ट्रा का विश्लेषण किया गया। परिणामों से पता चला कि सीडीपी-सी में सीडीपी-बी और सीडीपी-ए की तुलना में गैलेक्टुरोनिक एसिड (गैलुआ) का अनुपात अधिक था। एंटीऑक्सिडेंट गतिविधियों का भी विश्लेषण किया गया और परिणामों से पता चला कि सीडीपी-सी में उच्चतम गतिविधि थी। इस प्रकार, सीडीपी-सी की हेपेट्रोप्रोटेक्टिव गतिविधि का आगे अध्ययन किया गया। इन विट्रो अनुसंधान में, CDP-C ने HepG2 कोशिकाओं की व्यवहार्यता को बढ़ावा दिया। विवो अनुसंधान में, सीडीपी-सी ने मॉडल में सीरोलॉजिकल इंडेक्स (एलानिन ट्रांसएमिनेस, एसिड फॉस्फेट, -ग्लूटामाइल ट्रांसपेप्टिडेज़, और ट्राइग्लिसराइड) और यकृत संकेतक (सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेज, मालोंडिआल्डिहाइड, ग्लूटाथियोन एस-ट्रांसफरेज़, और ट्राइग्लिसराइड) सहित अल्कोहल से प्रेरित परिवर्तनों को संशोधित किया। जानवरों। मॉडल जानवरों के यकृत हिस्टोपैथोलॉजी में प्रमुख माइक्रोवेस्कुलर स्टीटोसिस और माइल्ड नेक्रोसिस को भी सीडीपी-सी प्रशासन द्वारा देखा गया था। इन निष्कर्षों ने संकेत दिया कि सीडीपी-सी में शराब से प्रेरित पुरानी यकृत की चोट के खिलाफ हेपेटोप्रोटेक्टिव गतिविधि थी। अंतर्निहित तंत्र यह हो सकता है कि सीडीपी-सी एमडीए और टीजी की सामग्री को कम कर सकता है, और सापेक्ष एंजाइम की गतिविधियों को संशोधित कर सकता है। यह संपत्ति CDP-C में GalUA के साथ संबद्ध हो सकती है।

कीवर्ड: सिस्टांचे डेजर्टिकोला; पॉलीसेकेराइड; प्रारंभिक लक्षण वर्णन; एंटीऑक्सीडेंट; हेपेटोप्रोटेक्टिव गतिविधि।

सिस्टैंचेबिएनफेट्सडेजर्टिकोला

1 परिचय

सिस्टांचे एक बारहमासी होलोपैरासाइट है और मुख्य रूप से उत्तर-पश्चिमी चीन के रेगिस्तानी क्षेत्र में वितरित किया जाता है [1, 2]। सिस्टैंच प्रजाति (ओरोबंचेसी) का तना सबसे पहले शेन नोंग की चीनी मटेरिया मेडिका में दर्ज किया गया था। गुर्दे की कमी, नपुंसकता, बूढ़ा कब्ज, कमर और घुटनों की पीड़ा और कमजोरी, और रक्त की कमी [3, 4] के उपचार के लिए सिस्टैंच का लंबे समय से एक पारंपरिक हर्बल दवा के रूप में उपयोग किया जाता रहा है। औषधीय शोधों से पता चला है कि सिस्टांच में सूजन-रोधी गतिविधि [5, 6], ऑस्टियोपोरोसिस विरोधी गतिविधि [7, 8], शामक प्रभाव [9], थकान रोधी गतिविधि [10], न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव [11] है। इसके अलावा, सिस्टैंच डेजर्टिकोला (सीडीपी) के पॉलीसेकेराइड में एंटी-हाइपरग्लाइसेमिक और हाइपोलिपिडेमिक प्रभाव [12], प्रतिरक्षात्मक गतिविधि [13] और लिम्फोसाइटों पर प्रसार प्रभाव [14] होता है।

शराब, दुनिया भर में खपत होने वाला पेय, और खाद्य योज्य ने दुनिया में हर साल लगभग 2.5 मिलियन लोगों की मृत्यु को प्रेरित किया [15, 16]। ये मौतें मुख्य रूप से शराब के दुरुपयोग [17, 18] से प्रेरित जिगर की बीमारी से संबंधित हैं। शराब से प्रेरित यकृत रोग एक जटिल बहु-चरणीय पुरानी प्रगति है, जो आम तौर पर मादक स्टीटोसिस से मादक हेपेटाइटिस और अंत में शराबी सिरोसिस [19] तक विकसित होती है। इस प्रकार, प्रारंभिक चरण में अल्कोहलिक जिगर की चोट की प्रगति को रोकने या धीमा करने के लिए उन शराब उपभोक्ताओं के लिए सक्रिय प्राकृतिक उत्पादों की पहचान करना एक लाभकारी प्रबंधन रणनीति है।

Cistanche डेजर्टिकोला YC Ma और Cistanche tubulosa (Schrenk) Wight दो औषधीय प्रजातियां हैं जो चीनी फार्माकोपिया [3] में दर्ज हैं। कई पत्रों ने सी. ट्यूबुलोसा [20-24] और सी. डेजर्टिकोला [25, 26] की हेपेटोप्रोटेक्टिव गतिविधियों को स्पष्ट किया है। लेकिन ये हेपेटोप्रोटेक्टिव शोध हमेशा कार्बन टेट्राक्लोराइड (CCl4) या डी-गैलेक्टोसामाइन और लिपोपॉलीसेकेराइड से प्रेरित जिगर की गंभीर चोट के उद्देश्य से होते हैं, लेकिन शराब के दुरुपयोग से संबंधित पुरानी जिगर की चोट के बारे में चिंतित नहीं होते हैं। इसके अलावा, ये रिपोर्ट मुख्य रूप से सीडीपी के बजाय फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स (पीएचजी) के तंत्र पर केंद्रित थीं। इसलिए, वर्तमान अध्ययन में, सीडीपी के प्रारंभिक लक्षण वर्णन और उनकी एंटीऑक्सीडेंट गतिविधियों (इन विट्रो में) की जांच की गई। इसके अलावा, व्हाइट स्पिरिट वाइन से प्रेरित आईसीआर चूहों के लीवर इंजरी मॉडल को अल्कोहल से प्रेरित क्रोनिक लीवर इंजरी के खिलाफ सीडीपी की हेपेटोप्रोटेक्टिव गतिविधि की जांच करने के लिए स्थापित किया गया था।

सिस्टैंच और टोंगकट अली हर्बा अर्क

2। सामग्री और प्रणालियां

2.1. सामग्री

सी. डेजर्टिकोला के तने अलशान लीग, चीन के इनर मंगोलिया से एकत्र किए गए थे।और प्रो. ज़ियाओडोंग वांग (बायोरिफाइनरी इंजीनियरिंग विभाग, प्रक्रिया इंजीनियरिंग संस्थान, चीनी विज्ञान अकादमी, बीजिंग, पीआर चीन) द्वारा पहचाना गया।

डाइमिथाइल सल्फ़ोक्साइड (डीएमएसओ), 2, 2-एज़िनो-बीआईएस (3-एथिलबेन्ज़थियाज़ोलिन-6-सल्फ़ोनिक एसिड) (एबीटीएस), 3-(4, 5-डाइमिथाइलथियाज़ोल{ {8}} yl) -2, 5- डाइफेनिलटेट्राजोलियम ब्रोमाइड (एमटीटी), और 1, 1- डिपेनिल -2- पिक्रिल-हाइड्राज़िल (डीपीपीएच) सिग्मा केमिकल कंपनी से खरीदे गए थे। (सेंट लुइस, एमओ, यूएसए)। Dulbecco का मॉडिफाइड ईगल मीडियम (DMEM) और भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS) Invitrogen, Inc. से खरीदा गया था। Er Guo-tou व्हाइट स्पिरिट को बीजिंग रेड स्टार कं, लिमिटेड से खरीदा गया था। Bicyclol को बीजिंग यूनियन फार्मास्युटिकल फैक्ट्री से खरीदा गया था। एक मिलि-क्यू जल शोधन प्रणाली (मिलिपोर, बेडफोर्ड, एमए, यूएसए) से अल्ट्रा-शुद्ध पानी के साथ जलीय घोल तैयार किया गया था। अन्य सभी अभिकर्मकों विश्लेषणात्मक स्तर के थे।

2.2. सीडीपी निष्कर्षण और भिन्नात्मक निस्पंदन

क्रूड सीडीपी हमारे समूह [27] के पहले बताए गए तरीके के अनुसार मामूली संशोधन के साथ तैयार किए गए थे। संक्षेप में, सी. डेजर्टिकोला (50 किग्रा) का पाउडर (40 जाल) अल्ट्रासोनिक रूप से (40 किलोहर्ट्ज़ और 6 किलोवाट) था, जिसे 120 मिनट के लिए 60 डिग्री सेल्सियस पर 1000 एल जलीय इथेनॉल समाधान (50 प्रतिशत, वी/वी) के साथ निकाला गया था। पॉलीसेकेराइड को मैक्रोपोरस रेजिन (एचपीडी 300) के साथ अर्क से अलग किया गया था। पॉलीसेकेराइड घोल को कम दबाव में केंद्रित किया गया था, सेवाग की विधि [28] का उपयोग करके डीप्रोटिनाइज़ किया गया था, और उत्पाद को फ्रीज-ड्राय किया गया था जिसे क्रूड सीडीपी कहा जाता था।

फिर 50 कच्चे CDPs को 2.5 L अल्ट्राप्योर पानी में घोल दिया गया और क्रमिक रूप से माइक्रोफिल्ट्रेशन, अल्ट्राफिल्ट्रेशन और नैनोफिल्ट्रेशन के साथ अलग कर दिया गया (नाममात्र आणविक भार कट-ऑफ 300 kDa, 10 kDa और 200 Da थे। प्रभावी झिल्ली क्षेत्र 0.625 एम 2) था। माइक्रोफिल्ट्रेशन के रिटेन्ड सॉल्यूशन को lyophilized किया गया और इसे CDP-A कहा गया। माइक्रोफिल्ट्रेशन के पारगम्य घोल को अल्ट्रा-निस्पंदन के साथ फ़िल्टर किया गया था, जबकि बनाए गए घोल को lyophilized किया गया था और इसे CDP-B नाम दिया गया था। अल्ट्रा-निस्पंदन के पारगम्य समाधान को नैनोफिल्ट्रेशन के साथ फ़िल्टर किया गया था, बनाए रखा समाधान को lyophilized किया गया था और इसे सीडीपी-सी नाम दिया गया था।

2.3. सीडीपी के प्रारंभिक लक्षण वर्णन

सीडीपी के आणविक आकार का मूल्यांकन पहले की रिपोर्ट की गई विधि के अनुसार किया गया थाहमारा समूह [29]। पी। झांग एट अल [30] द्वारा वर्णित विधि का उपयोग करके मोनोसैकराइड रचनाओं का विश्लेषण किया गया था। शुद्धता फिनोल-सल्फ्यूरिक एसिड विधि [31] के अनुसार निर्धारित की गई थी। ब्रैडफोर्ड और माजा कोजार्स्की [32, 33] द्वारा उल्लिखित विधि का उपयोग करके प्रोटीन सामग्री का निर्धारण किया गया था। सीडीपी के एफटी-आईआर स्पेक्ट्रा को फूरियर ट्रांसफॉर्म-इन्फ्रारेड स्पेक्ट्रोमीटर (एफटी / आईआर -660 प्लस, जैस्को) के साथ 400 ~ 4000 सेमी -1 की सीमा में कैप्चर किया गया था।

2.4. एंटीऑक्सीडेंट गतिविधियां

हाइड्रॉक्सिल, सुपरऑक्साइड ऑयन, डीपीपीएच, और एबीटीएस रेडिकल्स पर सीडीपी के मैला ढोने के प्रभावों का मूल्यांकन क्रमशः सन [34], वांग [35], याप [36] और फातिहा [37] द्वारा वर्णित विधियों के अनुसार किया गया था।

सिस्टैंच इरेक्टाइल डिसफंक्शनके लियेगुर्दा

2.5. इन विट्रो में सीडीपी-सी की हेपेटोप्रोटेक्टिव गतिविधि

एंटीऑक्सिडेंट परख के परिणामों के आधार पर, सीडीपी-सी को हेपेटोप्रोटेक्टिव गतिविधि का अध्ययन करने के लिए चुना गया था। हेपजी2 कोशिकाएं (चाइना सेंटर फॉर टाइप कल्चर कलेक्शन, बीजिंग, चीन से खरीदी गई) को डीएमईएम में सुसंस्कृत किया गया था जिसमें गर्मी-निष्क्रिय एफबीएस (1 0 प्रतिशत), स्ट्रेप्टोमाइसिन (0 .1 कुरूप/एमएल), पेनिसिलिन शामिल थे। (100 आईयू/एमएल), और गैर-आवश्यक अमीनो एसिड। कोशिकाओं को 37 डिग्री पर 5 प्रतिशत CO2 के आर्द्र वातावरण में ऊष्मायन किया गया था, घातीय विकास चरण में काटा गया, 96-वेल प्लेट्स (4×104 कोशिकाओं प्रति कुएं, 100 μL) में बीज दिया गया, और 24 घंटे के लिए ऊष्मायन। नकारात्मक समूह की कोशिकाओं को अल्कोहल के साथ इलाज किया गया था (अंतिम एकाग्रता 3.5 प्रतिशत, वी / वी) थी, जबकि भोले समूह को पानी के साथ इलाज किया गया था। सकारात्मक समूह की कोशिकाओं का इलाज अल्कोहल और बाइसिकल से किया गया (अंतिम सांद्रण 2 00 कुरूप/एमएल) था। चार परीक्षण समूहों की कोशिकाओं को अल्कोहल और सीडीपी-सी (सीडीपी-सी की अंतिम सांद्रता 0.11, 0.33333, 1.00, और 3.00 मिलीग्राम/एमएल) के साथ इलाज किया गया था। सभी कोशिकाओं को एक और 48 घंटे के लिए सुसंस्कृत किया गया था।

हेपजी2 कोशिकाओं की व्यवहार्यता जे. टोंग एट अल [38] द्वारा उल्लिखित एमटीटी परख विधि द्वारा मामूली संशोधन के साथ निर्धारित की गई थी। संक्षेप में, एमटीटी (5 मिलीग्राम/एमएल, 20 μL प्रति कुएं) को सेल-सीडेड 96-वेल प्लेट्स में जोड़ा गया था, और कोशिकाओं को 4 घंटे के लिए इनक्यूबेट किया गया था। समाधान हटा दिए गए और DMSO (150 μL/well) जोड़ा गया। प्रत्येक कुएं के अवशोषण को 96-वेल प्लेट रीडर (थर्मो साइंटिफिक, अमेरिका) का उपयोग करके 492 एनएम पर मापा गया था। सेल व्यवहार्यता की गणना निम्न सूत्र का उपयोग करके की गई थी:

सेल व्यवहार्यता (प्रतिशत)=(एक नमूना- खाली) ×100/ (एक अनुभवहीन- खाली)

जहां एक नमूना प्रयोगात्मक समूह का अवशोषण था; एक अनुभवहीन नमूना के बिना नियंत्रण समूह का अवशोषण था; एक रिक्त बिना किसी नमूने और बीज वाली कोशिका के संस्कृति माध्यम का अवशोषण था।

2.6. विवो में सीडीपी-सी की हेपेटोप्रोटेक्टिव गतिविधि

2.6.1. जानवरों

वयस्क मादा ICR चूहों (22-25 g, बीजिंग वाइटल रिवर लेबोरेटरी एनिमल टेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड से खरीदी गई। पशु लाइसेंस संख्या 11400700128 थी) का उपयोग किया गया। जानवरों को पर्यावरण-नियंत्रित कमरे में चारा और पानी के विज्ञापन के साथ रखा गया था (सापेक्ष आर्द्रता 40-60 प्रतिशत, 22-26 डिग्री), वायु वेंटिलेशन 12-18 बार / घंटा, और प्रकाश विकिरण की स्थिति थी। 150-300 लक्स का 12 घंटे का प्रकाश/अंधेरा चक्र था। प्रयोगों से पहले 7 दिनों के लिए चूहों को जानवरों के कमरे की स्थिति के अनुकूल बनाया गया था। प्रयोगों के दौरान जानवरों को शामिल करने वाली सभी प्रक्रियाओं को संयुक्त राज्य अमेरिका के राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान द्वारा अपनाया और प्रख्यापित प्रयोगशाला जानवरों के उपयोग के नियमों के अनुसार सख्ती से आयोजित किया गया था।

2.6.2. प्रयोगात्मक परिरूप

प्रत्येक समूह में 10 जानवरों के साथ ICR चूहों को बेतरतीब ढंग से छह समूहों (भोले समूह, नकारात्मक नियंत्रण समूह, सकारात्मक नियंत्रण समूह और तीन परीक्षण समूह) में विभाजित किया गया था। भोले समूह को आसुत जल के साथ मौखिक रूप से प्रशासित किया गया था। नकारात्मक नियंत्रण समूह को मौखिक रूप से अल्कोहल (एर गुओ-टू व्हाइट स्पिरिट, 56 प्रतिशत, 6 एमएल/किलोग्राम) के साथ प्रशासित किया गया था। सकारात्मक नियंत्रण समूह को मौखिक रूप से बाइसिकल (300 मिलीग्राम / किग्रा) और 5 घंटे बाद शराब के साथ प्रशासित किया गया था। तीन परीक्षण समूहों को मौखिक रूप से 200, 600, 1800 मिलीग्राम/किलोग्राम की खुराक पर सीडीपी-सी और 5 घंटे बाद शराब के साथ प्रशासित किया गया था। सभी चूहों को लगातार 31 दिनों तक प्रशासित किया गया था।

2.6.3. सीरोलॉजिकल इंडेक्स का निर्धारण

अंतिम अल्कोहल उपचार के लगभग 4 घंटे बाद, नेत्र सॉकेट से रक्त एकत्र किया गया और 15 मिनट के लिए 3000 ग्राम पर सेंट्रीफ्यूज किया गया। सीरम अलग होने के बाद, डायग्नोस्टिक किट का उपयोग करके एलेनिन ट्रांसएमिनेस (एएलटी), एसिड फॉस्फेट (एसीपी), -ग्लूटामाइल ट्रांसपेप्टिडेज़ (-जीटीपी), और ट्राइग्लिसराइड (टीजी) की एंजाइम गतिविधियों को निर्धारित किया गया था।
2.6.4. यकृत संकेतकों का निर्धारण

रक्त संग्रह के बाद, सभी चूहों को मार डाला गया। प्रत्येक माउस के जिगर को तुरंत शारीरिक खारा से धोया गया था। यकृत ऊतक का एक टुकड़ा बाएं लोब से अलग किया गया था। फिर ऊतक को कीमा बनाया हुआ और जलीय पोटेशियम क्लोराइड समाधान (1.15 प्रतिशत, w/v) के साथ एक गिलास होमोजेनाइज़र (Potter Elvehjem Teflon) में 60 सेकंड के लिए एक यकृत समरूप (10 प्रतिशत w/v) बनाने के लिए समरूप बनाया गया था। सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेज (एसओडी), मालोंडियलडिहाइड (एमडीए), ग्लूटाथियोन एस-ट्रांसफरेज़ (जीएसटी) के साथ-साथ ट्राइग्लिसराइड (टीजी) सामग्री की एंजाइम गतिविधियों को डायग्नोस्टिक किट का उपयोग करके मापा गया था।

2.6.5. हिस्टोपैथोलॉजिक अध्ययन

जिगर के अवशिष्ट भाग को 24 घंटे के लिए बोइन के फिक्सेटिव में तय किया गया था, जलीय इथेनॉल समाधान (50-100 प्रतिशत, v/v) का उपयोग करके निर्जलीकरण के बाद, जिगर के ऊतकों को xylene में साफ किया गया था और पैराफिन में एम्बेडेड किया गया था। हेपेटिक वर्गों (5 मिमी) को फिटकरी हेमटॉक्सिलिन और ईओसिन (एचई) के साथ दाग दिया गया था। जिगर वर्गों और हिस्टोपैथोलॉजिकल परिवर्तनों की छवियों को एक प्रकाश माइक्रोस्कोप (निकॉन-डीएस-एल 1-5 एम) द्वारा कब्जा कर लिया गया था।

2.7. सांख्यिकीय विश्लेषण

डेटा को तीन (रासायनिक संरचना विश्लेषण और एंटीऑक्सिडेंट परख), पांच (सेल व्यवहार्यता), या दस (विवो अनुसंधान में) स्वतंत्र प्रयोगों से माध्य (SEM) की मानक त्रुटि के रूप में व्यक्त किया गया था। समूहों के बीच अंतर के सांख्यिकीय महत्व का विश्लेषण विचरण (ANOVA) के एकतरफा विश्लेषण द्वारा किया गया, जिसके बाद SPSS 19.0 सॉफ्टवेयर का उपयोग करते हुए एक छात्र-न्यूमैन-केल्स की बहु-रेंज परीक्षण किया गया। सभी विश्लेषणों में, पी<0.05,><0.01, or=""><0.001 indicated="" statistical="">

3) परिणाम और चर्चा

3.1. सीडीपी के लक्षण

जैसा कि चित्र 1A में दिखाया गया है, CDP-A में दो समूह हैं, आणविक भार 4000 kDa और 3946 kDa हैं। CDP-B और CDP-C के आणविक भार 2400 kDa और 1300 kDa हैं, मोनोसैकराइड रचनाएँ चित्र 1B में दिखाई गई हैं। सीडीपी-ए, सीडीपी-बी, और सीडीपी-सी में अलग-अलग अनुपात के साथ छह आवश्यक मोनोसेकेराइड होते हैं, जिनमें मैनोज (मैन), रमनोज (आरएचए), गैलेक्टुरोनिक एसिड (गैलयूए), ग्लूकोज (जीएलसी), गैलेक्टोज (गैल) और अरबी शामिल हैं। आरा)। ऊपर बताए गए छह मोनोसैकेराइड के अलावा, जाइलोज (Xyl) भी CDP-C में दिखाई देता है। इसके अलावा, सीडीपी-सी में अन्य दो अंशों की तुलना में गैलुआ का बड़ा अनुपात होता है।

सीडीपी की शुद्धता और प्रोटीन सामग्री तालिका 1 में प्रदर्शित की गई है। तालिका 1 से पता चलता है कि सीडीपी-ए में उच्चतम शुद्धता है, जो कि 75.57 प्रतिशत है, जबकि सीडीपी-बी और सीडीपी-सी की शुद्धता क्रमशः 74.72 प्रतिशत और 68.92 प्रतिशत है। सीडीपी-ए, सीडीपी-बी और सीडीपी-सी की प्रोटीन सामग्री क्रमशः 1.27 प्रतिशत, 1.24 प्रतिशत और 1.05 प्रतिशत है।

तालिका एक।सीडीपी की शुद्धता और प्रोटीन सामग्री। डेटा तीन प्रतिकृति के माध्य ± SEM हैं।

कार्बोहाइड्रेट के एफटी-आईआर स्पेक्ट्रा का उपयोग उनकी संरचनात्मक विशेषताओं को निर्धारित करने के लिए किया जाता है और आमतौर पर कार्बनिक कार्यात्मक समूहों के गुणात्मक विश्लेषण के लिए उपयोग किया जाता है, विशेष रूप से ओएच, सीओ और सी=ओ [39] के लिए। CDPs का FT-IR स्पेक्ट्रा चित्र 1C में दिखाया गया है। प्रत्येक स्पेक्ट्रम OH स्ट्रेचिंग कंपन के लिए 3293 सेमी−1 के आसपास एक मजबूत और चौड़ी स्ट्रेचिंग चोटी दिखाता है और साथ ही सीएच स्ट्रेचिंग कंपन के लिए 2939 सेमी−1 पर एक कमजोर अवशोषण शिखर दिखाता है। 1650 सेमी−1 पर अवशोषण बैंड C=O असममित खिंचाव कंपन के कारण होता है। 1418 सेमी−1 पर व्यापक अवशोषण बैंड सीएच बांड के विकृत कंपन के लिए जिम्मेदार है। प्रत्येक विशेष पॉलीसेकेराइड में 1000-1200 cm−1 क्षेत्र में एक विशिष्ट बैंड होता है, जो (C-OH) साइड ग्रुप और (COC) ग्लाइकोसिडिक बैंड वाइब्रेशन के स्ट्रेचिंग वाइब्रेशन के साथ ओवरलैप किए गए रिंग वाइब्रेशन से प्रभावित होता है। 1036 सेमी−1 पर अवशोषण चीनी के पाइरानोज रूप को दर्शाता है। लगभग 829 सेमी−1 पर एक अवशोषण सीडीपी की आणविक संरचना में -ग्लाइकोसाइड्स के जुड़ाव का सुझाव देता है। जैसा कि चित्र 1 सी में दिखाया गया है, 1650 सेमी-1 पर सीडीपी-सी का अवशोषण बैंड सीडीपी-ए और सीडीपी-बी से अधिक मजबूत है, जिसका अर्थ है कि सीडीपी-सी में सी=ओ की सामग्री से अधिक है सीडीपी-ए और सीडीपी-बी में। यह परिणाम अंजीर। 1 ए के परिणामों के अनुरूप है, जिससे पता चलता है कि सीडीपी-सी में गैलुआ का अनुपात सीडीपी-ए और सीडीपी-बी की तुलना में बड़ा है।

3.2. सीडीपी की एंटीऑक्सीडेंट गतिविधियां

3.2.1. हाइड्रॉक्सिल रेडिकल परख

प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों में, हाइड्रॉक्सिल रेडिकल सबसे अधिक प्रतिक्रियाशील है और आसन्न बायोमोलेक्यूल्स [40] को गंभीर नुकसान पहुंचाता है। हाइड्रॉक्सिल रेडिकल के लिए, दो प्रकार के एंटीऑक्सीडेशन तंत्र हैं: एक पहले से उत्पन्न हाइड्रॉक्सिल रेडिकल को परिमार्जन कर रहा है, और दूसरा हाइड्रॉक्सिल रेडिकल की पीढ़ी को दबा रहा है। उत्तरार्द्ध के लिए, हाइड्रॉक्सिल रेडिकल हाइड्रोजन पेरोक्साइड के साथ Fe (II) कॉम्प्लेक्स की प्रतिक्रिया से उत्पन्न होता है। सीडीपी की एंटीऑक्सीडेंट गतिविधियां धातु आयनों से जुड़ी हो सकती हैं, जो एच 2 ओ 2 के साथ प्रतिक्रिया नहीं करते हैं और हाइड्रॉक्सिल रेडिकल का उत्पादन करते हैं लेकिन सीडीपी के साथ केलेट होते हैं और धातु परिसर बनाते हैं। हाइड्रॉक्सिल रेडिकल [41-43] देने के लिए मेटल कॉम्प्लेक्स H2O2 के साथ आगे प्रतिक्रिया नहीं कर सकता है। इसलिए, सीडीपी हाइड्रॉक्सिल रेडिकल मैला ढोने के प्रभाव दिखाते हैं।

अंजीर। 2 ए एकाग्रता-निर्भर तरीके से हाइड्रॉक्सिल रेडिकल पर सीडीपी की मैला ढोने की क्षमता को दर्शाता है। सीडीपी-ए, सीडीपी-बी और सीडीपी-सी की मैला ढोने की दर क्रमशः 29.56 प्रतिशत, 33.44 प्रतिशत और 38.22 प्रतिशत है। सीडीपी-सी उच्च हाइड्रॉक्सिल रेडिकल मैला ढोने की गतिविधि प्रदर्शित करता है। यह देखते हुए कि सीडीपी-सी में सीडीपी-ए और सीडीपी-बी की तुलना में गैलुआ का अधिक अनुपात होता है, सीडीपी के एंटीऑक्सिडेंट न केवल धातु आयनों की लिगेटिंग संपत्ति से संबंधित हो सकते हैं, बल्कि गैलुआ, आरा और गैल की सामग्री से भी संबंधित हो सकते हैं [{{15 }}].

3.2.2 सुपरऑक्साइड आयन रेडिकल परख

सुपरऑक्साइड ऑयन रेडिकल एक जहरीली प्रजाति है जो कई जैविक और फोटोकैमिकल प्रतिक्रियाओं से उत्पन्न होती है और इस तरह ऊतक क्षति को प्रेरित करती है [47]। हालांकि सुपरऑक्साइड आयन एक अपेक्षाकृत कमजोर ऑक्सीडेंट है, यह अन्य मजबूत प्रतिक्रियाशील ऑक्सीडेटिव प्रजातियों के निर्माण में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, जैसे सिंगलेट ऑक्सीजन और हाइड्रॉक्सिल रेडिकल [48]। अंजीर। 2 बी सुपरऑक्साइड आयनों रेडिकल्स पर सांद्रता और सीडीपी की मैला ढोने की क्षमता के बीच संबंध को दर्शाता है। जैसे-जैसे सांद्रता बढ़ती है, सीडीपी-सी सीडीपी-बी और सीडीपी-ए की तुलना में अधिक मैला ढोने की क्षमता प्रदर्शित करता है।

3.2.3. डीपीपीएच कट्टरपंथी परख

DPPH, स्थिर नाइट्रोजन-केंद्रित यौगिकों में से एक है जिसमें 517nm पर एक विशेषता अवशोषण के साथ एक प्रोटॉन-मुक्त कण होता है, प्रोटॉन कट्टरपंथी मैला ढोने वालों के संपर्क में आने पर यह काफी कम हो जाता है, इसलिए, इसका व्यापक रूप से एंटीऑक्सिडेंट की मुक्त-कट्टरपंथी मैला ढोने की गतिविधियों का अनुमान लगाने के लिए उपयोग किया जाता है। यह अच्छी तरह से स्वीकार किया जाता है कि डीपीपीएच मुक्त कट्टरपंथी एंटीऑक्सिडेंट द्वारा मैला किया जाता है, उनकी हाइड्रोजन-दान करने की क्षमता के कारण होता है। एंटीऑक्सिडेंट या तो इलेक्ट्रॉनों या हाइड्रोजन परमाणुओं को डीपीपीएच रेडिकल में स्थानांतरित करते हैं और डीपीपीएच-एच का गठन करते हैं, जो एक गैर-कट्टरपंथी गठन है [49]।

सभी नमूनों के कुल डीपीपीएच मैला ढोने के प्रभावों का परीक्षण किया गया और परिणाम चित्र 2 सी में दिखाए गए हैं। डीपीपीएच रेडिकल पर सीडीपी की मैला ढोने की क्षमता एक एकाग्रता-निर्भर तरीके से प्रदर्शित होती है। जैसे-जैसे एकाग्रता 1.0 से बढ़कर 5.0 mg/mL हो जाती है, CDP-C की मैला ढोने की क्षमता 52.5 प्रतिशत से बढ़कर 58.7 प्रतिशत हो जाती है, जो CDP-B (34.2 प्रतिशत से 56.8 प्रतिशत तक) से अधिक होती है। प्रतिशत) और सीडीपी-ए (12.5 प्रतिशत से 52.8 प्रतिशत)। सीडीपी-सी का डीपीपीएच मैला ढोने का प्रभाव गैलुआ में कार्बोनिल समूहों से जुड़ा हो सकता है।

3.2.4। एबीटीएस कट्टरपंथी परख

एबीटीएस रेडिकल परख अक्सर परीक्षण नमूनों के एक शक्तिशाली एंटीऑक्सीडेंट की कुल एंटीऑक्सीडेंट शक्ति को मापने के लिए प्रयोग किया जाता है [5 0]। सभी नमूनों के एबीटीएस मैला ढोने के प्रभाव अंजीर में दिखाए गए हैं। 2 डी। एबीटीएस रेडिकल्स पर सीडीपी की मैला ढोने की क्षमता एक खुराक पर निर्भर तरीके से प्रदर्शित होती है। CDP-A, CDP-B और CDP-C का IC50 क्रमशः 4.0 mg/mL, 2.5 mg/mL और 1.2 mg/mL है। परिणाम दर्शाते हैं कि सीडीपी के पास एबीटीएस मैला ढोने की गतिविधि है।

संक्षेप में, सीडीपी-सी की एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि सीडीपी-ए और सीडीपी-बी से अधिक थी। इसने बताया कि पॉलीसेकेराइड की कुछ औषधीय गतिविधियाँ इसके गैलुआ [51] से संबंधित थीं। इस प्रयोग में, CDP-C में GalUA का अनुपात CDP-A और CDP-B की तुलना में बड़ा था, CDP-C को अल्कोहल से प्रेरित पुरानी जिगर की बीमारी के खिलाफ हेपेटोप्रोटेक्टिव प्रभाव की जांच के लिए चुना गया था।

3.3. HepG2 सेल व्यवहार्यता पर CDP-C का प्रभाव

प्राकृतिक दवाओं की प्रभावकारिता का आकलन करने के लिए सेल व्यवहार्यता को मापना एक सामान्य तरीका है [52]। परिणामों के आधार पर कि CDP-C में उच्चतम एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि थी, HepG2 सेल व्यवहार्यता पर CDP-C के प्रभावों का मूल्यांकन किया गया था। परिणाम अंजीर में दिखाए गए हैं। 3. मादक उपचार-प्रेरित हेपजी 2 सेल व्यवहार्यता में उल्लेखनीय कमी। लेकिन नकारात्मक समूह की तुलना में सीडीपी-सी जीवित रहने की दर में उल्लेखनीय रूप से सुधार कर सकता है। जैसा कि चित्र 3 में दिखाया गया है, सेल व्यवहार्यता सीडीपी-सी के साथ एक सटीक एकाग्रता-निर्भर तरीके का प्रदर्शन नहीं करती है। इसके विपरीत, जब सीडीपी-सी की सांद्रता 3.00 मिलीग्राम/एमएल तक पहुंच जाती है, तो हेपजी2 सेल व्यवहार्यता नाटकीय रूप से घट जाती है। सेल व्यवहार्यता में कमी का कारण यह हो सकता है कि CDP-C की कम सांद्रता HepG2 कोशिकाओं के अस्तित्व के लिए सहायक थी। हालाँकि, जब संस्कृति माध्यम में पॉलीसेकेराइड की सांद्रता कोशिकाओं के सूक्ष्म वातावरण को बदलने के लिए पर्याप्त थी, तो HepG2 सेल व्यवहार्यता बाधित हो गई थी।

3.4. सीडीपी-सी . के औषधीय प्रभाव

3.4.1. सीरोलॉजिकल इंडेक्स पर सीडीपी-सी का प्रभाव

शराब का दुरुपयोग सभी मृत्यु दर का लगभग 4 प्रतिशत है, जो दुनिया में एक गंभीर सामाजिक समस्या बन गई है। मानव शरीर में, गैस्ट्रिक और छोटी आंतों के म्यूकोसा [53-55] के माध्यम से अवशोषित होने के बाद अल्कोहल को यकृत में चयापचय किया जाता है। शराब के सेवन के वर्षों के बाद आम तौर पर शराबी जिगर की बीमारियां होती हैं [56]। फैटी लीवर, हेपेटाइटिस, फाइब्रोसिस, और सिरोसिस [57] या यहां तक ​​कि कैंसर संबंधी बीमारियां जैसे कि हेपैटोसेलुलर कार्सिनोमा और कोलन कैंसर [58] जैसी सामान्य रोग संबंधी स्थितियां अल्कोहल से जुड़े यकृत विकारों में देखी जाती हैं। इसलिए, अल्कोहल एक विशिष्ट हेपेटॉक्सिक है और व्यापक रूप से वैज्ञानिक अनुसंधान [59] में जिगर की चोट के एक संकेतक के रूप में उपयोग किया जाता है। यह देखते हुए कि शराब से प्रेरित यकृत रोग अक्सर औद्योगिक इथेनॉल के बजाय मादक पेय और खाद्य योजक के कारण होते हैं, इस प्रकार इस अध्ययन में आईसीआर चूहों में जिगर की चोट के मॉडल को स्थापित करने के लिए एर गुओ-टू सफेद आत्मा का उपयोग किया गया था। बाइसाइक्लोल एक सामान्य एजेंट है जिसका उपयोग पुरानी जिगर की चोट के इलाज के लिए किया जाता है, इसलिए इसका उपयोग सकारात्मक नियंत्रण मॉडल स्थापित करने के लिए किया गया था।

हेपेटिक कोशिकाओं में साइटोप्लाज्म और माइटोकॉन्ड्रिया में एएलटी की उच्च सांद्रता होती है। विभिन्न यकृत कोशिका क्षति के कारण, साइटोसोल के रिसाव से सीरम में एएलटी की वृद्धि होगी। इस प्रकार एएलटी का प्रचार यकृत के सेलुलर रिसाव और कार्यात्मक विकारों का संकेतक है [60]। तो सीरम एएलटी स्तर आमतौर पर यकृत स्वास्थ्य [61] का आकलन करने के लिए संकेतक के रूप में निर्धारित किया जाता है। इसी तरह के कारणों के लिए, -जीटीपी, एसीपी, और टीजी का उपयोग जिगर की स्वास्थ्य स्थिति का आकलन करने के लिए संकेतक के रूप में भी किया जाता है [62]।

वर्तमान अध्ययन में, एएलटी, एसीपी, -जीटीपी, और टीजी के स्तरों के निर्धारण द्वारा सीडीपी-सी की हेपेटोप्रोटेक्टिव गतिविधि का मूल्यांकन किया गया था। परिणाम अंजीर में दिखाए गए हैं। 4 ए, बी, सी और डी। नकारात्मक समूह में मादक उपचार द्वारा चार सीरम संकेतकों को काफी बढ़ावा दिया गया है। लेकिन सीडीपी-सी मादक प्रशासन द्वारा प्रेरित इन परिवर्तनों को कम कर सकता है। हालांकि, सभी सीरोलॉजिकल इंडेक्स सीडीपी-सी के साथ खुराक पर निर्भर तरीके से प्रदर्शित नहीं होते हैं। अंजीर। 4 ए और बी में, कम सांद्रता पर सीडीपी-सी का एएलटी और एसीपी की बहाली पर महत्वपूर्ण प्रभाव पड़ता है, लेकिन उच्चतम एकाग्रता पर सीडीपी-सी का प्रभाव महत्वपूर्ण नहीं था। वास्तव में, कई प्राकृतिक उत्पाद कम मात्रा में स्वास्थ्य के लिए फायदेमंद होते हैं, लेकिन उच्च मात्रा में स्वास्थ्य के लिए हानिकारक होते हैं [60]। इसका कारण यह हो सकता है कि पॉलीसेकेराइड का अत्यधिक अंतर्ग्रहण जीवों के सामान्य चयापचय को प्रभावित करेगा, जैसे किशरीर के स्वास्थ्य पर प्रतिकूल प्रभाव डालने के लिए। हालांकि, विस्तृत तंत्र पर और शोध किए जाने की आवश्यकता है।

3.4.2. यकृत संकेतकों पर सीडीपी-सी का प्रभाव

ऑक्सीडेटिव तनाव के अधीन जीव आमतौर पर एक एंटीऑक्सिडेंट रक्षा तंत्र विकसित करते हैं, और एसओडी एक विशिष्ट एंजाइम-आधारित एंटीऑक्सिडेंट प्रणाली है [63]। SOD सुपरऑक्साइड आयनों के विघटन को O2 और H2O2 [64] में उत्प्रेरित करता है। जीएसटी, साइटोसोल में स्थित एक घुलनशील प्रोटीन, यकृत के विषहरण में भी महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। उपरोक्त कारणों से, एसओडी और जीएसटी अल्कोहल से प्रेरित हेपेटोटॉक्सिसिटी में संकेतक बन जाते हैं। जिगर में एमडीए और टीजी का उपयोग हेपेटोटॉक्सिसिटी [65] के संकेतक के रूप में भी किया जाता है।

वर्तमान अध्ययन में, जिगर समारोह पर सीडीपी-सी के प्रभाव को चित्र 5 में दिखाया गया है। चित्र ए, बी, सी, और डी क्रमशः एसओडी, एमडीए, जीएसटी और टीजी पर सीडीपी-सी के प्रभावों को प्रदर्शित करते हैं। इन चार चित्रों से पता चलता है कि शराब के साथ इलाज किए गए चूहों में एसओडी और जीएसटी के स्तर में कमी आई है, और एमडीए और टीजी के स्तर में वृद्धि हुई है, लेकिन सीडीपी-सी स्पष्ट रूप से इस परिवर्तन को कम कर सकता है। खंड 3.4.1 में दर्शाई गई घटनाओं के समान, यकृत संकेतक भी सीडीपी-सी के साथ खुराक पर निर्भर तरीके से नहीं थे। इसका कारण खंड 3.4.1 में सचित्र तंत्र के समान हो सकता है। पिछले अध्ययनों ने बताया कि एसओडी और उत्प्रेरित पर पॉलीसेकेराइड का प्रभाव एसओडी और उत्प्रेरित [66] के जीन अभिव्यक्तियों के शामिल होने से जुड़ा हो सकता है। हालांकि, सीडीपी-सी के हेपेटोप्रोटेक्टिव तंत्र और इसकी संरचना और कार्य के बीच संबंध को स्पष्ट करने के लिए अभी और अध्ययन की आवश्यकता है।

3.5. शराब से प्रेरित चूहों पर सीडीपी-सी के हिस्टोपैथोलॉजिक प्रभाव

यकृत वर्गों पर हिस्टोपैथोलॉजिक टिप्पणियों के आधार पर, भोले समूह ने अलग-अलग यकृत कोशिकाओं के साथ सामान्य सेलुलर वास्तुकला का प्रदर्शन किया और कोई हिस्टोलॉजिक असामान्यताएं नहीं (चित्र 6 ए)। इसकी तुलना में, मादक प्रशासन ने नकारात्मक समूह के चूहों में जिगर की गंभीर क्षति का कारण बना। यकृत वर्गों ने हेपेटोसाइट वसा जमाव, हेपेटोसाइट नेक्रोसिस और सूजन, कोशिकाओं में रिक्तिका का गठन दिखाया, और सेलुलर सीमाएं भी गायब हो गईं (चित्र 6 बी)। सीडीपी-सी (छवि 6 डीएफ) की अलग-अलग खुराक के साथ बाइसाइक्लोल (छवि 6 सी) के साथ प्रशासित चूहों के यकृत वर्गों ने नकारात्मक नियंत्रण समूह में दिखाई देने वाली विकृतियों की स्पष्ट रूप से बहाली का प्रदर्शन किया। इन परिणामों ने पुष्टि की कि शराब ने नकारात्मक नियंत्रण समूह के हेपेटोसाइट्स में एक निश्चित सीमा तक विकृति को प्रेरित किया। हालाँकि, CDP-C ने इन परिवर्तनों को बहाल कर दिया।

यह अच्छी तरह से स्वीकार किया जाता है कि पॉलीसेकेराइड का हेपेटोप्रोटेक्टिव प्रभाव उनकी एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि [67, 68] से जुड़ा है। पॉलीसेकेराइड [44, 45] के एंटीऑक्सीडेंट प्रभाव के लिए उच्च यूरोनिक एसिड सामग्री फायदेमंद साबित हुई थी। गैल और आरा में समृद्ध पॉलीसेकेराइड को भी उच्च एंटीऑक्सीडेंट प्रभाव [46] रखने के लिए सत्यापित किया गया था। हालांकि, बड़े आणविक पॉलीसेकेराइड के लिए आंतों के उपकला कोशिकाओं में सीधे प्रवेश करना मुश्किल है। CDP-C (1300kDa के आणविक भार के साथ) के लिए, सीधे शरीर में प्रवेश करना और हेपेटोप्रोटेक्टिव भूमिका निभाना आसान नहीं है। प्रकाशित रिपोर्टों से पता चला है कि गैस्ट्रिक और आंतों के पाचन के बाद पॉलीसेकेराइड के आणविक भार कम हो गए थे [69]। इस प्रकार, हमने माना कि सीडीपी-सी को कम आणविक भार वाले पॉलीसेकेराइड में अवक्रमित किया जा सकता है और आंतों के उपकला कोशिकाओं द्वारा अवशोषित किया जा सकता है। ग्लाइकोसिडिक बंधों के टूटने के कारण पॉलीसेकेराइड के कम करने वाले सिरों को बढ़ाया जा सकता है [69, 70]। सीडीपी-सी की मोनोसैकराइड संरचना के अनुसार, कम आणविक भार वाले उन अवक्रमित पॉलीसेकेराइड में गैलुआ, आरा और गैल होना चाहिए। इसलिए ये कम आणविक भार पॉलीसेकेराइड, जिनमें कम करने वाले सिरे होते हैं और जिनमें गैलुआ, आरा और गैल होते हैं, शरीर में जिगर की सुरक्षा की भूमिका निभा सकते हैं। हालांकि, विस्तृत तंत्र पर और शोध किए जाने की आवश्यकता है।

4। निष्कर्ष

मोनोसैकराइड रचना विश्लेषण और एफटी-आईआर स्पेक्ट्रा के अनुसार, सीडीपी के सभी तीन अंशों में मैन, आरएचए, गैलुआ, जीएलसी, गैल और आरा शामिल थे। CDP-C में GalUA का एक बड़ा हिस्सा था। सीडीपी-सी में उच्चतम एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि थी। इन विट्रो और वीवो दोनों शोधों के परिणामों से पता चलता है कि सीडीपी-सी में अल्कोहल से प्रेरित पुरानी यकृत की चोट के खिलाफ हेपेटोप्रोटेक्टिव गतिविधि है। अंतर्निहित तंत्र सापेक्ष एंजाइम गतिविधियों को संशोधित करने, जिगर में एमडीए और टीजी को कम करने से संबंधित था। CDP-C की शारीरिक गतिविधि GalUA के साथ संबद्ध हो सकती है। ये निष्कर्ष अल्कोहलिक लीवर रोग की रोकथाम में सी. डेजर्टिकोला के औषधीय लक्ष्यों में नई अंतर्दृष्टि प्रदान करते हैं।

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