सिस्टैंच ट्यूबुलोसा के सक्रिय तत्व अल्जाइमर रोग में कैसे भूमिका निभाते हैं?

जियानहुआ यांग1*, बोवेई जू1,2*, याओ यान1, हुआनहुआन एक्सयू1, शानशान वू1, दंदन झू1, दंदन सीएओ1 और जुनपिंग एचयू2

सार।वर्तमान अध्ययन का उद्देश्य के न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभावों की जांच करना हैफेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स(PhGs) H2O पर 2- और -एमाइलॉइड पेप्टाइड (A )1-42- इन विट्रो मॉडल के रूप में PC12 कोशिकाओं की चोट को प्रेरित करता हैअल्जाइमर रोग (विज्ञापन) विभिन्न ऊष्मायन समय और सांद्रता की स्क्रीनिंग के माध्यम से इष्टतम प्रेरण की स्थिति स्थापित की गई थी। PC12 कोशिकाओं को 24 घंटे के लिए PhG की उपस्थिति में 0.5 µM A 1-42 और H2O2 के साथ इलाज किया गया था और सेल व्यवहार्यता का मूल्यांकन MTT परख द्वारा किया गया था; लैक्टेट डिहाइड्रोजनेज (LDH) रिलीज और malondialdehyde (MDA) सामग्री को भी मापा गया। स्थापित करने के लिए इष्टतम शर्तेंविज्ञापनमॉडल 48 घंटे के लिए 0। 5, 25 और 50 माइक्रोग्राम/एमएल की सांद्रता पर पीएचजी ने व्यवहार्यता में वृद्धि की और ए 1-42 या एच2ओ2 से घायल पीसी12 कोशिकाओं द्वारा एलडीएच और एमडीए रिलीज को कम किया। अंत में, A 1-42- और H2O 2- प्रेरित PC12 सेल की चोट का मॉडल सफलतापूर्वक स्थापित किया गया। PhGs को A 1-42- या H2O 2- प्रेरित कोशिका क्षति के विरुद्ध एक महत्वपूर्ण न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव दिखाया गया था।

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परिचय

अल्जाइमर रोग (विज्ञापन), प्रगतिशील स्मृति हानि और संज्ञानात्मक कार्य हानि (1) की नैदानिक ​​विशेषताओं के साथ एक न्यूरोडीजेनेरेटिव विकार, दुनिया भर में मनोभ्रंश का सबसे आम कारण है (2)। AD (3) की व्यापकता के कारण वित्तीय लागत बहुत अधिक है। इसलिए, इसके प्रबंधन और रोकथाम के लिए उपयुक्त साधन विकसित करना अत्यावश्यक हैविज्ञापन.

रोगजननविज्ञापनप्रभावित मस्तिष्क क्षेत्रों (4,5) में न्यूरोफिब्रिलरी टेंगल्स और सेनील प्लेक (एसपी) के संचय के साथ निकटता से जुड़ा हुआ है। -एमाइलॉइड पेप्टाइड (ए), एसपी के प्रमुख घटक, की प्रगति में एक प्रेरक भूमिका होने की सूचना मिली हैविज्ञापनजैसा कि न्यूरोनल कोशिकाओं (6) पर विषाक्त प्रभाव पड़ता है। ए 1-40, ए 25-35 और ए 1-42 सहित एक टुकड़े, अमाइलॉइड अग्रदूत प्रोटीन (7) के विभाजन के माध्यम से उत्पन्न हुए हैं। ए 1-42 की न्यूरोटॉक्सिसिटी ए 25-35 और ए 1-40 की तुलना में काफी अधिक पाई गई, और ए 1-42 एक को प्रेरित करने में सक्षम है।विज्ञापनमॉडल (1,8-10)। ऑक्सीडेटिव तनाव के रोगजनन में शामिल हो सकता हैविज्ञापनऔर ए-प्रेरित न्यूरोटॉक्सिसिटी (11-13) में अंतर्निहित प्रमुख तंत्र है। कई अध्ययनों ने सुझाव दिया कि ए 1-42 ने प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (आरओएस) के इंट्रासेल्युलर संचय का कारण बना, जिससे लिपिड और प्रोटीन ऑक्सीकरण, डीएनए क्षति और सेल चक्र चेकपॉइंट सिग्नलिंग (1,14,15) की सक्रियता हो गई। H2O2 की अत्यधिक मात्रा ऑक्सीडेटिव क्षति का कारण बन सकती है और PC12 कोशिकाओं (16) के एपोप्टोसिस को प्रेरित कर सकती है। इसलिए, एडी में ए-प्रेरित न्यूरोटॉक्सिसिटी को रोकने के लिए चिकित्सीय रणनीतियों के विकास के लिए ऑक्सीडेटिव तनाव को लक्षित करना एक आशाजनक दृष्टिकोण हो सकता है।

हर्बा (एच।)सिस्टांचे, एक चीनी हर्बल दवा जो आमतौर पर मुख्य भूमि चीन में गुर्दे को पोषण देने और सार और रक्त को फिर से भरने के लिए उपयोग की जाती है, का उपयोग स्मृति हानि और बूढ़ा कब्ज (17) के इलाज के लिए किया गया है। फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड (पीएचजी), एच में प्रमुख घटकों में से एक है।सिस्टांचे, इसके एंटी-ऑक्सीडेंट प्रभाव (18,19) के माध्यम से ए 25-35 के कारण होने वाले न्यूरोनल एपोप्टोसिस की हानि में सुधार करता है। पिछले अध्ययन ने कुल पीएचजी से पांच प्रमुख घटकों की पहचान की, अर्थात्:एक्टोसाइड, 2'-एसिटाइलैक्टोसाइड,इचिनाकोसाइड, सिस्टानोसाइड्स और आइसोएक्टोसाइड (20)। इन घटकों में,एक्टोसाइडतथाइचिनाकोसाइडA 25-35- या H2O2-प्रेरित न्यूरोटॉक्सिसिटी (21-23) पर न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव होने की सूचना मिली है। उदाहरण के लिए, वू एट अल (24) ने सुझाव दिया कि एक्टोसाइड औरइचिनाकोसाइड

कीवर्ड:फेनिलएथेनॉयडग्लाइकोसाइड, PC12 कोशिकाएं, H2O2, -एमाइलॉइड पेप्टाइड 1-42, न्यूरोप्रोटेक्शन, सिस्टैंच

सामग्री और तरीके

पीएचडी की तैयारी। एच से कुल पीएचजी निकाले गए।सिस्टांचेजैसा कि पहले बताया गया है (25)। हवा में सुखाया हुआ तना H.सिस्टांचेचूर्ण किया गया और 80 प्रतिशत EtOH के साथ परकोलेशन द्वारा निकाला गया। पेरकोलेट को कम दबाव में वाष्पित किया गया था, इसके बाद उचित मात्रा में H2O2 (1{{20}}0 µmol/l) में पुन: निलंबन किया गया था। मिश्रण को एक एसपी -825 मैक्रोपोरस रेजिन कॉलम (मित्सुबिशी केमिकल, टोक्यो, जापान) पर अलग किया गया था और पानी में 0, 30, 50, 70 और 90 प्रतिशत EtOH के साथ मिलाया गया था। PhG-समृद्ध अंश प्राप्त करने के लिए, 30-50 प्रतिशत EtOH एलुएंट्स को कम दबाव में केंद्रित और सुखाया गया। कुल PhGs निर्धारित करने के लिए पराबैंगनी (UV) स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री का प्रदर्शन किया गया। इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड की सामग्री को पिछले प्रोटोकॉल (26) के अनुसार उच्च दबाव वाले तरल क्रोमैटोग्राफी द्वारा निर्धारित किया गया था। एक हाइपरसिल ओडीएस -2 कॉलम (4.6x250 मिमी, 5 माइक्रोन; डालियान एलीट एनालिटिकल इंस्ट्रूमेंट्स, कं, लिमिटेड, डालियान, चीन) का उपयोग और रखरखाव कमरे के तापमान पर किया गया था। मोबाइल चरण मिथाइल साइनाइड और 0.4 प्रतिशत फॉस्फोरिक एसिड (v / v; सिग्मा-एल्ड्रिच; मर्क केजीए, डार्मस्टाड, जर्मनी) युक्त पानी थे। प्रवाह दर 0.75 मिली/मिनट थी और तरंग दैर्ध्य 333 एनएम पर सेट किया गया था।

सेल कल्चर और ड्रग ट्रीटमेंट। PC12 चूहा फीयोक्रोमोसाइटोमा सेल लाइन डॉ. हे चुन्हुई, मेडिकल स्कूल, झिंजियांग मेडिकल यूनिवर्सिटी (उरुमकी, चीन) द्वारा प्रदान की गई थी। कोशिकाओं को उच्च ग्लूकोज डल्बेको के संशोधित ईगल माध्यम (DMEM; थर्मो फिशर साइंटिफिक, इंक।, वॉलथम, एमए, यूएसए) में सुसंस्कृत किया गया था जिसमें 1 0 प्रतिशत भ्रूण गोजातीय सीरम (सैंगोन बायोटेक कंपनी लिमिटेड, शंघाई, चीन) था। , 100 यू/एमएल पेनिसिलिन, और 100 यू/एमएल स्ट्रेप्टोमाइसिन एक इन्क्यूबेटर में 37 डिग्री सेल्सियस पर जिसमें 5 प्रतिशत सीओ2 और 95 प्रतिशत हवा होती है। 80 प्रतिशत संगम पर पहुंचने पर, कोशिकाओं को 0.25 प्रतिशत ट्रिप्सिन के साथ इलाज किया गया और पारित किया गया।

PC12 कोशिकाओं की वृद्धि पर दवा के हस्तक्षेप को समाप्त करने के लिए, एक विषाक्तता प्रयोग किया गया था। संक्षेप में, PC12 कोशिकाओं (3x104 कोशिकाओं / एमएल) को 96-अच्छी तरह से प्लेटों में 100 μl / कुएं में डाला गया और रात भर 37˚C पर इनक्यूबेट किया गया। सतह पर तैरनेवाला को त्यागने के बाद, 200 μl पूर्ण DMEM को रिक्त समूह में जोड़ा गया था, जबकि हस्तक्षेप समूहों में कोशिकाओं को विभिन्न खुराक (5, 25, 50, 75, 100, 125, 150, 175, और 200 माइक्रोग्राम /) पर पीएचजी द्वारा इलाज किया गया था। एमएल)। 48 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर कोशिकाओं के ऊष्मायन के बाद, प्रत्येक कुएं में 20 μl एमटीटी समाधान (सिग्मा-एल्ड्रिच; मर्क केजीए) जोड़ा गया था। 4 घंटे के लिए ऊष्मायन के बाद, सतह पर तैरनेवाला त्याग दिया गया था और 150 μl डाइमिथाइलसल्फॉक्साइड प्रति कुएं में जोड़ा गया था, इसके बाद 10 मिनट के लिए आंदोलन किया गया था। एलिसा प्लेट रीडर का उपयोग करके 490 एनएम पर ऑप्टिकल घनत्व (ओडी) मूल्यों का पता लगाया गया था।

एक 1-42-प्रेरित पीसी12 सेल की चोट। बायोस बायोटेक (बीजिंग, चीन) से खरीदा गया एक 1-42 पेप्टाइड पानी (100 माइक्रोग्राम / एमएल) में भंग कर दिया गया था। इसके बाद, मिश्रण को 4 दिनों के लिए 37˚C पर इनक्यूबेट किया गया और उपयोग करने से पहले 4˚C पर संग्रहीत किया गया।

PC12 कोशिकाओं को 96-वेल प्लेट्स (3xl04 कोशिकाओं में 100 प्रति कुएं) में रखा गया था। पालन ​​के लिए 24 घंटे के लिए संस्कृति के बाद, सीरम मुक्त डीएमईएम में भंग विभिन्न अंतिम सांद्रता (0, 0.25, 0.5, 1, 1.5 या 2 माइक्रोन) पर 5 0 μl ए 1-42 जोड़ा गया था, इसके बाद 24, 48, 72 या 96 घंटे के लिए ऊष्मायन। सेल व्यवहार्यता का मूल्यांकन एमटीटी परख द्वारा किया गया था। इष्टतम ए 1-42 एकाग्रता 0.5 µ एम होने के लिए निर्धारित किया गया था।

PC12 कोशिकाओं (3xl04 कोशिकाओं प्रति कुएं) का उपचार PhGs (0, 0.5, 5, 25, या 50 µg/ml) की विभिन्न खुराकों के साथ किया गया। 24 घंटे के लिए 0.5 µ एम ए 1-42 । सेल व्यवहार्यता का मूल्यांकन एमटीटी परख द्वारा किया गया था।

H2O2- प्रेरित PC12 सेल की चोट। PC12 कोशिकाओं को 96-वेल प्लेट्स (3xl04 कोशिकाओं में 100 μl प्रति कुएं) में चढ़ाया गया। पालन ​​के लिए 24 घंटे के लिए संवर्धन के बाद, विभिन्न अंतिम सांद्रता (0, 25, 50, 100, 200, 300, 400, और 500 माइक्रोन) पर 100 μl एच 2 ओ 2 डीएमईएम में पीबीएस के साथ या बिना पीबीएस (0.01 मोल / एल) के साथ जोड़ा गया था, 24 घंटे के लिए ऊष्मायन के बाद। सेल व्यवहार्यता का मूल्यांकन एमटीटी परख द्वारा किया गया था। इष्टतम H2O2 सांद्रता और विलायक AD के इन विट्रो मॉडल को स्थापित करने के लिए निर्धारित किए गए थे।

PC12 कोशिकाओं (3xl 0 4 कोशिकाओं प्रति कुएं) का इलाज PhGs (0, 0.5, 5, 25 और 50 माइक्रोन) की विभिन्न खुराक के साथ किया गया था। पालन ​​के लिए 24 घंटे के लिए संवर्धन के बाद, पीसी 12 कोशिकाओं को 24 घंटे के लिए पीएचजी की उपस्थिति में पीबीएस के साथ डीएमईएम में भंग 100 μl एच 2 ओ 2 के साथ इलाज किया गया था। सेल व्यवहार्यता का मूल्यांकन MTT परख द्वारा किया गया था।

लैक्टेट डिहाइड्रोजनेज (एलडीएच) रिलीज परख। निर्माता के प्रोटोकॉल (बिल्ली नं। 2 0 15 0 604; नानजिंग जियानचेंग बायोइंजीनियरिंग इंस्टीट्यूट, नानजिंग) के अनुसार एलडीएच किट का उपयोग करके पीसी 12 कोशिकाओं के सतह पर तैरनेवाला में एलडीएच गतिविधि को मापकर सेल की चोट का आकलन किया गया था। चीन)। संक्षेप में, दवा उपचार के बाद 48 घंटे में डबल-डिस्टिल्ड एच 2 ओ, 0.2 माइक्रोमोल / एमएल पाइरुविक एसिड, मैट्रिक्स बफर और कोएंजाइम I बफर को क्रम में जोड़ा गया। 15 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन के बाद, 2,4-डिनिट्रो-फेनिलहाइड्राजाइन जोड़ा गया। इसके बाद, प्रत्येक कुएं में 0.4 एम NaOH समाधान के 250 µ l को जोड़ा गया। कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए ऊष्मायन के बाद सतह पर तैरनेवाला एकत्र किया गया था। 450 एनएम पर अवशोषण को फिर माइक्रोप्लेट रीडर से मापा गया।

malondialdehyde (एमडीए) का मापन। एमडीए को निर्माता के प्रोटोकॉल के अनुसार एक वाणिज्यिक किट (कैट नं। 20150604; नानजिंग जियानचेंग बायोइंजीनियरिंग इंस्टीट्यूट) का उपयोग करके पीसी12 कोशिकाओं के सतह पर तैरनेवाला में मापा गया था। संक्षेप में, निर्जलित अल्कोहल और अन्य अभिकर्मकों को क्रम में जोड़ा गया था, इसके बाद पानी के स्नान में ऊष्मायन किया गया था। 40 मिनट के लिए 95 डिग्री सेल्सियस पर। मिश्रण को ठंडा करने के बाद 10 मिनट के लिए 1,006 xg और 25˚C पर सेंट्रीफ्यूज किया गया था। तब सतह पर तैरनेवाला का उपयोग एमडीए सामग्री को निर्धारित करने के लिए किया गया था। अवशोषण को बाद में 532 एनएम पर एक माइक्रोप्लेट रीडर से मापा गया।

इन विट्रो में एडी के खिलाफ इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड के सुरक्षात्मक प्रभावों का आकलन। PC12 कोशिकाओं को 3xl 04 कोशिकाओं/अच्छी तरह से 96-वेल प्लेट्स (100 µl/वेल) के घनत्व पर रखा गया था। कोशिकाओं को इचिनाकोसाइड (बिल्ली नं। 111670-200503; खाद्य और औषधि नियंत्रण के लिए राष्ट्रीय संस्थान, बीजिंग, चीन) और एसीटोनाइड (बिल्ली संख्या। 111530-200505; खाद्य और औषधि नियंत्रण के लिए राष्ट्रीय संस्थान) सहित दवाओं के साथ जोड़ा गया था। ) विभिन्न सांद्रता (0.5, 25 और 50 माइक्रोग्राम / एमएल) पर। इसके बाद, कोशिकाओं को 24 घंटे के लिए A 1-42 या H2O2 के साथ इलाज किया गया और सेल व्यवहार्यता को MTT परख द्वारा मापा गया।

सांख्यिकीय विश्लेषण। मान ± मानक विचलन के माध्य के रूप में व्यक्त किए जाते हैं। अंतर-समूह तुलना के लिए छात्र के t -est का उपयोग किया गया था। SPSS 18.0 (SPSS, Inc., शिकागो, IL, USA) का उपयोग करके सांख्यिकीय विश्लेषण किए गए। पी<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

परिणाम

एच. सिस्टांचेस से पीएचडी की मात्रा का ठहराव। के यूवी स्पेक्ट्रापीएचजीनिकाले गए और साथ ही मानक समाधानइचिनाकोसाइडतथाएक्टोसाइडदर्ज किए गए, और परिणामों से पता चला कि यूवी स्पेक्ट्रा सुसंगत थे (चित्र 1)। यूवी स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री

ने दिखाया कि पीएचजी सामग्री 87.6 प्रतिशत थी। एचपीएलसी परिणामों से पता चला है कि इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड की सामग्री क्रमशः 37.7 और 17.8 प्रतिशत थी (चित्र 2)।

आदर्श पीएचजी एकाग्रता का निर्धारण। रिक्त समूह की तुलना में, पीएचजी 75, 100, 125, 150, 175 और 200 माइक्रोग्राम / एमएल पर पीसी 12 कोशिकाओं (पी) पर एक महत्वपूर्ण निरोधात्मक प्रभाव था।<0.05), while="" phg="" at="" 5,="" 25="" and="" 50="" µg/ml="" showed="" low="" toxicity="" on="" pc12="" cells,="" and="" the="" cell="" viability="" was="">80 प्रतिशत (चित्र 3)। इस प्रकार, सेल व्यवहार्यता को प्रभावित नहीं करने के कारण बाद के प्रयोगों में पीसी12 कोशिकाओं के उपचार के लिए 5, 25, और 50 माइक्रोग्राम / एमएल की एकाग्रता पर पीएचजी का उपयोग किया गया था।

1-42-प्रेरित PC12 सेल की चोट। इसकी तुलना में नियंत्रण समूह में, 0.5 µM A 1-42 चोट समूह में सेल व्यवहार्यता 63 प्रतिशत (P) थी<0.05). the="" cell="" viability="" was="" decreased="" by="" aβ1-42="" in="" a="" concentration-dependent="" manner,="" and="" the="" viability="" was=""><50% in="" the="" 1,="" 1.5,="" and="" 2="" µm="" aβ1-42="" injury="" groups="" (fig.="" 4).="" thus,="" treatment="" with="" 0.5="" µm="" aβ1-42="" for="" 48="" h="" was="" determined="" to="" be="" the="" optimal="" condition="" for="" establishing="" the="" in="" vitro="" ad="">

24 घंटे के लिए पीएचजी (5, 25, और 50 माइक्रोग्राम/एमएल) की सुरक्षित खुराक की उपस्थिति में 0.5 माइक्रोन ए 1-42 के साथ इलाज किए गए पीसी12 कोशिकाओं की गतिविधि भी निर्धारित की गई थी। मॉडल समूह (पी .) के साथ तुलना<0.01), phgs="" showed="" a="" significant="" neuroprotective="" effect="" on="" pc12="" cells.="" the="" cell="" viability="" was="" rescued="" by="" phgs="" in="" a="" dose-dependent="" manner="" (fig.="">

H2O2- प्रेरित PC12 सेल की चोट। पीबीएस के साथ डीएमईएम में भंग 25 माइक्रोन एच2ओ2 के साथ इलाज किए गए पीसी12 कोशिकाओं की व्यवहार्यता 56.43 प्रतिशत थी। पीबीएस के बिना डीएमईएम में भंग 200 माइक्रोन एच 2 ओ 2 के साथ इलाज किए गए पीसी 12 कोशिकाओं की व्यवहार्यता 71.64 प्रतिशत (तालिका I) थी। इस प्रकार, पीबीएस के साथ डीएमईएम में भंग 25 माइक्रोन एच 2 ओ 2 के साथ इलाज किए गए पीसी 12 कोशिकाओं को एडी मॉडल स्थापित करने के लिए इष्टतम स्थिति के रूप में चुना गया था।

नियंत्रण समूह की तुलना में, मॉडल समूह में सेल व्यवहार्यता 48.8 प्रतिशत (पी .) थी<0.05). compared="" with="" the="" model="" group,="" phgs="" had="" a="" significant="" neuroprotective="" effect="" on="" pc12="" cells.="" the="" cell="" viability="" was="" dose-dependently="" increased="">

PhGs, और 5, 25 और 50 µg/ml की सांद्रता पर PhGs से उपचारित PC12 कोशिकाओं की व्यवहार्यता क्रमशः 54, 57 और 64 प्रतिशत थी (तालिका II)।

PhGs PC12 कोशिकाओं द्वारा चोट-प्रेरित LDH रिलीज़ को रोकते हैं। नियंत्रण समूह की तुलना में, घायल PC12 कोशिकाओं के सतह पर तैरनेवाला की LDH सामग्री में वृद्धि हुई थी, जिसे PhG द्वारा एकाग्रता-निर्भर तरीके से बाधित किया गया था। इस परिणाम ने संकेत दिया कि PhGs का PC12 कोशिकाओं (चित्र 6) पर एक महत्वपूर्ण न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव है।

तालिका I. H2O2 उपचार के बाद सेल व्यवहार्यता (प्रतिशत)।

तालिका II। दवा के हस्तक्षेप के बाद सेल व्यवहार्यता।

पीएचजी द्वारा एकाग्रता-निर्भर तरीके से बाधित। इस परिणाम ने संकेत दिया कि PhGs का PC12 कोशिकाओं (चित्र 7) पर एक महत्वपूर्ण न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव है।

PhG और इसके घटक इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड घायल PC12 कोशिकाओं की व्यवहार्यता को बचाते हैं। मॉडल समूह की तुलना में, एक्टोसाइड के साथ उपचार ने खुराक पर निर्भर तरीके से ए 1-42- घायल PC12 कोशिकाओं की व्यवहार्यता में काफी वृद्धि की। PhGs और इचिनाकोसाइड ने भी परीक्षण किए गए सभी सांद्रता (चित्र 8A) में A 1-42- घायल PC12 कोशिकाओं की व्यवहार्यता में काफी वृद्धि की।

**P<0.05, vs.="" model="" group.="" aβ,="" â-amyloid="" peptide;="" phgs,="" phenylethanoid="" glycosides;="" ech,="" echinacoside;="" as,="">

मॉडल समूह की तुलना में, एक्टोसाइड ने H2O2 के साथ इलाज किए गए PC12 कोशिकाओं की व्यवहार्यता में काफी वृद्धि की। PhGs ने H2O2 के साथ इलाज किए गए PC12 कोशिकाओं की व्यवहार्यता में भी वृद्धि की, जबकि प्रभाव 5 और 25 माइक्रोग्राम / एमएल (छवि 8 बी) की सांद्रता में महत्वपूर्ण नहीं था। इसके अलावा, इचिनाकोसाइड ने सेल व्यवहार्यता को 25 माइक्रोग्राम / एमएल पर बढ़ाया।

अंत में, एक्टोसाइड, PhGs और इचिनाकोसाइड ने A 1-42 या H2O2 के साथ चोट के अधीन PC12 कोशिकाओं पर महत्वपूर्ण न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव डाला।

बहस

ऑक्सीडेटिव तनाव AD (11-13) में A-मध्यस्थता न्यूरोटॉक्सिसिटी अंतर्निहित प्रमुख तंत्र है। इसलिए, ऑक्सीडेटिव तनाव को लक्षित करना एडी के उपचार के लिए एक दृष्टिकोण का प्रतिनिधित्व कर सकता है। वर्तमान अध्ययन में, AD के इन विट्रो मॉडल में A 1-42- और H2O 2- प्रेरित PC12 सेल की चोट को सफलतापूर्वक स्थापित किया गया था। MTT, LDH, और MDA assays के परिणामों से पता चला है कि PhGs ने सेल व्यवहार्यता में वृद्धि की, और PC12 कोशिकाओं द्वारा LDH और MDA रिलीज़ को कम किया जो चोट के अधीन थे। यह निष्कर्ष निकाला जा सकता है कि PhGs का PC12 कोशिकाओं पर महत्वपूर्ण न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव पड़ता है।

PC12 सेल की वृद्धि पर PhG के प्रभाव को कम करने और असामान्य प्रसार को रोकने के लिए, एक स्क्रीनिंग परख में PhG की सुरक्षित खुराक निर्धारित की गई थी। परिणामों से पता चला कि 75, 100, 125, 150, 175 और 200 माइक्रोग्राम / एमएल पर पीएचजी का पीसी12 कोशिकाओं (पी) पर एक महत्वपूर्ण निरोधात्मक प्रभाव था।<0.05,><0.01), while="" cell="" viability="" remained="">5, 25 और 50 माइक्रोग्राम / एमएल की सांद्रता पर 80 प्रतिशत। इस प्रकार, 5, 25, और 50 माइक्रोग्राम/एमएल की सांद्रता पर पीएचजी पीसी12 कोशिकाओं के लिए सुरक्षित थे।

ए {{0}} की चोट कुछ कारकों से प्रभावित थी, जिसमें विलायक, ऊष्मायन समय और उत्पाद की गुणवत्ता शामिल है। वर्तमान अध्ययन में, ए 1-42 पेप्टाइड को पानी (100 माइक्रोग्राम / एमएल) में भंग कर दिया गया था और उपयोग करने से पहले सीओ 2 इनक्यूबेटर में 4 दिनों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया गया था। PC12 कोशिकाओं का इलाज A 1-42 के साथ 0.5, 1, 1.5, और 2 µM की सांद्रता में किया गया। परिणामों से पता चला कि ए 1-42 की वृद्धि के साथ सेल व्यवहार्यता कम हो गई थी, और व्यवहार्यता थी<50% in="" the="" 1,="" 1.5,="" and="" 2="" µm="" aβ1-42="" injury="" groups.="" thus,="" treatment="" of="" pc12="" cells="" with="" 0.5="" µm="" aβ1-42="" for="" 48="" h="" was="" determined="" to="" be="" the="" optimal="" condition="" for="" establishing="" the="" ad="" model.="" aβ25-35="" has="" been="" commonly="" used="" to="" establish="" ad="" models="" due="" to="" its="" low="" cost="" and="" simple="" operation="" (27-29).="" the="" neurotoxicity="" of="" aβ1-42="" is="" significantly="" higher="" than="" that="" of="" aβ25-35,="" and="" aβ1-42="" is,="" therefore,="" the="" optimal="" aβ="" fragment="" for="" establishing="" an="" ad="" model="">

H2O2 एक ऑक्सीडाइज़र है और अत्यधिक H2O2 ऑक्सीडेटिव क्षति का कारण बन सकता है और सेल एपोप्टोसिस (30) को प्रेरित कर सकता है। वर्तमान अध्ययन में, PC12 कोशिकाओं का इलाज 25-500 µM H2O2 के साथ DMEM में पीबीएस के साथ या उसके बिना किया गया था। परिणामों से पता चला कि पीबीएस के बिना डीएमईएम में भंग एच 2 ओ 2 पीसी 12 कोशिकाओं के असामान्य प्रसार का कारण बना। इस प्रकार, पीबीएस के साथ डीएमईएम में भंग 25 माइक्रोन एच 2 ओ 2 के साथ पीसी 12 कोशिकाओं का उपचार एडी मॉडल की स्थापना के लिए इष्टतम स्थिति थी। एक 1-42-प्रेरित चोट H2O से अधिक थी2-H2O2 की खराब स्थिरता और विलायक प्रभाव के कारण प्रेरित चोट।

जब सेल क्षतिग्रस्त हो जाता है, तो संस्कृति माध्यम में एलडीएच रिसाव काफी बढ़ जाता है। आरओएस को एमडीए के उत्पादन का कारण माना जाता है। इसलिए एमडीए और एलडीएच की सामग्री ऑक्सीडेटिव क्षति की मात्रा को दर्शाती है। वर्तमान अध्ययन में, पीएचजी की बढ़ती खुराक के साथ क्षति-प्रेरित एलडीएच और एमडीए गतिविधि को कम किया गया था। इन परिणामों ने संकेत दिया कि PhGs का PC12 कोशिकाओं पर एक महत्वपूर्ण न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव है। MTT परख ने दिखाया कि PhGs ने PC12 कोशिकाओं पर एक खुराक पर निर्भर न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव प्रदर्शित किया।

अंत में, AD का एक इन विट्रो मॉडल जिसमें A 1-42- और H2O2-प्रेरित PC12 सेल की चोट शामिल है, को सफलतापूर्वक स्थापित किया गया था। PhGs के साथ उपचार ने सेल व्यवहार्यता में वृद्धि की और A 1-42 या H2O2 से उपचारित PC12 कोशिकाओं द्वारा LDH और MDA रिलीज़ को कम किया। PhGs का A 1-42- या H2O 2- प्रेरित कोशिका क्षति पर महत्वपूर्ण न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव था।

संदर्भ

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