प्रीक्लेम्पटिक गर्भावस्था के कारण गुर्दे की चोट एक ट्रांसजेनिक चूहा मॉडल में प्रसवोत्तर ठीक हो जाती है

संपर्क: ऑड्रे हू Whatsapp/hp: 0086 13880143964 ईमेल:audrey.hu@wecistanche.com

सारा एम. केडज़ियोरा 1,2,3,4,5, क्रिस्टिन क्रेकर 1,2,3,4,5, लाजोस मार्को1,2,3,4,5, जूलिया बाइंडर 6, मेरियम सुगले 7,8, मार्टिन गौस्टर 9 , डोमिनिक एन. मुलर 1,2,3,4,5, राल्फ डेचेंड 1,2,3,4,5,10, नादिन हासे 1,2,3,4,5,† और

फ्लोरियन हर्स 1,2,3,4,*

1 एक्सपेरिमेंटल एंड क्लिनिकल रिसर्च सेंटर (ईसीआरसी), ए जॉइंट कोऑपरेशन ऑफ चैरिटे-यूनिवर्सिटैट्समेडिज़िनबर्लिन और मैक्स डेलब्रुक सेंटर फॉर मॉलिक्यूलर मेडिसिन, 13125 बर्लिन, जर्मनी;sarah.kedziora@mdc-berlin.de (SMK); kristin.kraeker@charite.de (केके); lajos.marko@charite.de (एलएम);dominik.mueller@mdc-berlin.de (DNM); ralf.dechend@charite.de (आरडी); nadine.haase@mdc-berlin.de (एनएच)

2 मैक्स डेलब्रुक सेंटर फॉर मॉलिक्यूलर मेडिसिन (एमडीसी) हेल्महोल्ट्ज़ एसोसिएशन, 13125 बर्लिन, जर्मनी में

3 चैरिटे-यूनिवर्सिटैट्समेडिज़िन बर्लिन, फ़्री यूनिवर्सिटैट बर्लिन और हम्बोल्ट-यूनिवर्सिटात्ज़ु बर्लिन, 10117 बर्लिन, जर्मनी के कॉर्पोरेट सदस्य

4 बर्लिन इंस्टीट्यूट ऑफ हेल्थ चैरिटे-यूनिवर्सिटैट्समेडिज़िन बर्लिन, 10117 बर्लिन, जर्मनी में

5 DZHK (हृदय अनुसंधान के लिए जर्मन केंद्र), पार्टनर साइट बर्लिन, 13353 बर्लिन, जर्मनी

6 प्रसूति और स्त्री रोग विभाग, वियना के चिकित्सा विश्वविद्यालय, 1090 वियना, ऑस्ट्रिया

7 इंस्टीट्यूट फॉर क्लिनिकल मेडिसिन, फैकल्टी ऑफ मेडिसिन, ओस्लो विश्वविद्यालय, 0318 ओस्लो, नॉर्वे

8 प्रसूति और स्त्री रोग विभाग, ओस्लो विश्वविद्यालय अस्पताल, 0450 ओस्लो, नॉर्वे

9 डिवीजन ऑफ सेल बायोलॉजी, हिस्टोलॉजी, एंड एम्ब्रियोलॉजी, गॉटफ्राइड शेट्ज रिसर्च सेंटर, मेडिकल यूनिवर्सिटी ऑफ ग्राज़, 8036 ग्राज़, ऑस्ट्रिया;

10 हेलिओस क्लिनिकम, 13125 बर्लिन, जर्मनी

इन लेखकों ने पांडुलिपि में समान रूप से योगदान दिया।

सार:

Preeclampsia (PE) is characterized by the onset of hypertension (≥140/90 mmHg) and the presence of proteinuria (>300 मिलीग्राम / एल / 24 घंटे मूत्र) या अन्य मातृ अंग रोग। मानव पीई के दौरान, गुर्दे की चोटें देखी गई हैं। कुछ अध्ययनों से पता चलता है कि पीई निदान वाली महिलाओं में बाद में जीवन में गुर्दे की बीमारियों के विकास का जोखिम बढ़ जाता है। हालांकि, मानव अध्ययन में, इस विकास के एक कारण के रूप में पीई की जांच नहीं की जा सकती है। यहां, हमने एक स्थापित ट्रांसजेनिक पीई चूहा मॉडल में प्रसवोत्तर गुर्दे की क्षति पर पीई के प्रभाव की जांच करने का लक्ष्य रखा है। मानव-एंजियोटेंसिनोजेन जीन को आश्रय देने वाली मादा चूहों में मानव-रेनिन जीन को आश्रय देने वाले नर चूहों के साथ संभोग के बाद एक प्रीक्लेम्पटिक फेनोटाइप विकसित होता है, लेकिन गर्भावस्था से पहले और बाद में आदर्शवादी होते हैं। गर्भावस्था के दौरान चूहों ने हिस्टोलॉजिक विश्लेषण द्वारा मूल्यांकन किए गए हल्के ट्यूबलर और ग्लोमेरुलर परिवर्तन विकसित किए, गुर्दे की क्षति मार्करों की जीन अभिव्यक्ति में वृद्धि हुई जैसे किगुर्दाचोटमार्कर 1 और संयोजी ऊतक वृद्धि कारक, और मादा जंगली प्रकार के चूहों (डब्ल्यूटी) की तुलना में एल्बुमिनुरिया। हालांकि, चार सप्ताह के प्रसवोत्तर, अधिकांश पीई-संबंधित गुर्दे की विकृति अनुपस्थित थी, जिसमें एल्बुमिनुरिया और उन्नत बायोमार्कर अभिव्यक्ति शामिल हैं। ग्लोमेरुलर टफ्ट के केवल हल्के इज़ाफ़ा का पता लगाया जा सकता है। कुल मिलाकर, ट्रांसजेनिक पीई चूहे में गर्भावस्था के दौरान ग्लोमेरुलर और ट्यूबलर कार्य प्रभावित हुए। हालांकि, पीई के दौरान देखे गए लगभग ये सभी विकृति प्रसवोत्तर ठीक हो गए।

कीवर्ड: प्रीक्लेम्पसिया;गुर्दाचोट; प्रसवोत्तर; ट्रांसजेनिक चूहा मॉडल

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1 परिचय

Preeclampsia (PE) affects about 5–8% of all pregnancies worldwide, with a high maternal mortality rate due to complications such as eclampsia, HELLP-syndrome, or edema [1–3]. According to the International Society for the Study of Hypertension in Pregnancy, PE is characterized by the development of gestational hypertension (resting systolic blood pressure (BP) ≥ 140 and/or diastolic ≥ 90 mmHg) at or after 20 weeks of gestation in previously normotensive women [1]. Since proteinuria is present in only 75% of all cases [4], the American College of Obstetrics and Gynecology adapted guidelines for PE established in 2019 stated that "either proteinuria (>300 मिलीग्राम/लीटर प्रति 24-एच मूत्र) या अन्य मातृ अंग रोग" मौजूद होना चाहिए [1,5]। पीई की अंतर्निहित विकृति अभी तक पूरी तरह से समझ में नहीं आई है, लेकिन प्रतिरक्षा संबंधी शिथिलता और संवहनी परिवर्तन की विशेषता वाली एक अपरा उत्पत्ति एक भूमिका निभाती है माताओं और बच्चों के लिए पर्याप्त दीर्घकालिक हृदय और चयापचय जोखिम के परिणाम के साथ महत्वपूर्ण भूमिका [6-9]। विभिन्न अध्ययनों से पता चलता है कि पीई न केवल तीव्र से जुड़ा हैगुर्दाचोट लग सकती है, लेकिन गुर्दे की पर्याप्त बीमारी और प्रसवोत्तर विफलता के साथ-साथ जीवन में बाद में [10-12] हो सकती है। मानव पीई के दौरान गुर्दे की चोट का वर्णन सबसे पहले स्पार्गो एट अल द्वारा किया गया था। ग्लोमेर्युलर एंडोटिलिन के रूप में, जिसका अर्थ है केशिका लुमेन के विनाश के साथ बढ़े हुए ग्लोमेरुली [13], एंडोथेलियल या मेसेंजियल कोशिकाओं के अतिवृद्धि के लिए जिम्मेदार है [14]। प्रीक्लेम्पटिक महिलाओं [15-18] में ग्लोमेर्युलर स्केलेरोसिस की उपस्थिति, ग्लोमेरुलर केशिका की दीवार के मोटे होने के कारण केशिकाओं का रोड़ा, मैक्रोफेज की घुसपैठ और एंडोथेलियल फेनेस्ट्रे के घनत्व में कमी का वर्णन किया गया है। इन संरचनात्मक परिवर्तनों के साथ-साथ वाहिकासंकीर्णन और कम प्लाज्मा मात्रा एक कम गुर्दे की निस्पंदन क्षमता [15,19] में योगदान करती है। प्रीक्लेम्पटिक गर्भधारण के दौरान मौजूद संरचनात्मक गुर्दे की चोट प्रतिवर्ती प्रतीत होती है [19], जबकि एक कार्यात्मक प्रभाव वर्तमान प्रसवोत्तर और पीई का एक संघ है और जीवन में बाद में अंत-चरण वृक्क रोग (ईएसआरडी) के विकास के जोखिम की सूचना दी गई है [19] 20,21]। इस बात के प्रमाण हैं कि प्रीक्लेम्पटिक गर्भावस्था की घटना से पहले ज्ञात पुरानी उच्च रक्तचाप मनुष्यों में गुर्दे की बीमारी के बाद के जोखिम में वृद्धि में योगदान देता है [12,20,21]।

पीई गर्भधारण के दौरान गुर्दे की चोट को कई पशु मॉडल में चित्रित किया गया है। ग्लोमेरुलर परिवर्तनों में शामिल तंत्र में एक एंजियोजेनिक असंतुलन [9,22-24] शामिल है। पीई के लिए कम गर्भाशय छिड़काव दबाव (आरयूपीपी) चूहा मॉडल में, संवहनी एंडोथेलियल ग्रोथ फैक्टर (वीईजीएफ) उपचार [25,26] द्वारा गुर्दे की हानि को बहाल किया जा सकता है। इसके अलावा, प्रीक्लेम्पटिक गुर्दे की चोट में एक महत्वपूर्ण तंत्र ऑक्सीडेटिव और भड़काऊ तनाव में वृद्धि हुई प्रतीत होती है, जिससे प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (आरओएस) के उत्पादन में वृद्धि होती है और सक्रियण [27-30] होता है। यद्यपि ये तंत्र गर्भावस्था के दौरान गंभीर गुर्दे के परिवर्तन का कारण बनते हैं, इस बात की जानकारी का अभाव है कि क्या पीई पशु मॉडल में गुर्दे की हानि प्रसवोत्तर मौजूद है। प्रसवोत्तर गुर्दे की क्षति पर ध्यान केंद्रित करने वाले केवल कुछ पशु अध्ययन हुए हैं। आरयूपीपी मॉडल में, प्रसव के आठ सप्ताह बाद माध्य धमनी रक्तचाप और एल्बुमिनुरिया को बहाल कर दिया गया था। कोई ग्लोमेरुलर या ट्यूबलर क्षति मौजूद नहीं थी लेकिन ग्लोमेरुलर निस्पंदन दर कम हो गई थी [31]।

इस अध्ययन का उद्देश्य पीई के प्रसवोत्तर प्रभावों का आकलन करना थागुर्देमानव रेनिन-एंजियोटेंसिनोजेन ट्रांसजेनिक चूहे के मॉडल में। इस मॉडल में मानव एंजियोटेंसिनोजेन के लिए ट्रांसजेनिक मादा चूहों में गर्भावस्था से पहले और बाद में सामान्य रक्तचाप था। उन्होंने गर्भावस्था के अंतिम तिहाई के दौरान मानव रेनिन जीन की मेजबानी करने वाले नर चूहों के साथ संभोग करने पर उच्च रक्तचाप विकसित किया, जैसा कि पहले वर्णित है [32,33]। डैम्स ने गर्भावस्था के दौरान एक प्रीक्लेम्पटिक फेनोटाइप विकसित किया [34], जिसमें कार्डियक रीमॉडेलिंग पोस्टपार्टम [35] शामिल है। हमने अनुमान लगाया कि मनुष्यों और कृंतक मॉडल में पीई के लिए वर्णित दीर्घकालिक गुर्दे की चोट, प्रीक्लेम्पटिक गर्भावस्था के दौरान उच्च रक्तचाप (उच्च रक्तचाप से ग्रस्त संकट) द्वारा मध्यस्थता की जाती है और प्रसवोत्तर को पुनर्स्थापित करती है।

सिस्टैंच का अर्क लाभ: गुर्दे की बीमारियों का इलाज

2. परिणाम

2.1. ट्रांसजेनिक चूहा मॉडल में प्रीक्लेम्पटिक फेनोटाइप

गर्भवती ट्रांसजेनिक मादा चूहों ने पीई (चित्रा 1ए) के लक्षणों का प्रदर्शन किया, जबकि डब्ल्यूटी चूहों ने इन लक्षणों को विकसित नहीं किया। प्रीक्लेम्पटिक गर्भावस्था के दौरान बीपी एक पठार के बाद 12 से 14 दिन तक बढ़ गया, और गर्भावस्था के बाद दो दिनों के भीतर मानक मूल्यों में कमी आई। अध्ययन के अंत तक और चार सप्ताह के बाद प्रसवोत्तर (चित्रा 1बी) तक रक्तचाप आदर्श बना रहा। तुलना को सक्षम करने के लिए WT चूहों को एकल दिनों (d 0, 9, 15, 19, 28, 35, 42, 49) पर मापा गया। गर्भावस्था के दौरान WT चूहों में माध्य धमनी रक्तचाप 1 0 5.3 ± 4.6 mmHg और प्रीक्लेम्पटिक गर्भवती चूहों में क्रमशः 148.4 ± 2 0 .7 mmHg पर था। यह प्रीक्लेम्पटिक गर्भावस्था (जंगली प्रकार, WTd19 बनाम PEd19; p <0.0001) और="" सामान्यीकृत="" प्रसवोत्तर="" (ped19="" बनाम="" ped49,="" p=""><0.0001; चित्र="" 1c)="" में="" काफी="" ऊंचा="" था।="" पीई="" चूहों="" ने="" wt="" (wtd21="" बनाम="" ped21,="" p="0.0024)" की="" तुलना="" में="" गर्भावस्था="" के="" दौरान="" मूत्र="" क्रिएटिनिन="" के="" सापेक्ष="" काफी="" अधिक="" मूत्र="" एल्ब्यूमिन="" दिखाया,="" और="" एल्ब्यूमिन="" उत्सर्जन="" को="" pe="" चूहों="" (ped21="" बनाम="" ped49,="" p="" {{35)="" में="" प्रसवोत्तर="" बहाल="" किया="" गया="" था।="" }}.0004;="" चित्रा="" 1डी)।="" यद्यपि="" pe="" चूहों="" की="" तुलना="" में="" wt="" चूहों="" में="" मूत्र="" संबंधी="" एल्ब्यूमिन="" अधिक="" था,="" लेकिन="" कोई="" महत्वपूर्ण="" अंतर="" नहीं="" था="" (wtd49="" बनाम="" ped49,="" p="0.4917)।" अलग-अलग="" समय="" बिंदुओं="" (2w-anova:="" f(1;29)="16.15;" p="0.0004)" पर="" एल्ब्यूमिन="" स्तर="" पर="" pe="" का="" समग्र="" प्रभाव="">

जैसा कि हमारे पिछले अध्ययनों में दिखाया गया है, प्रीक्लेम्पटिक चूहों ने नियंत्रण चूहों [35] की तुलना में कम अपरा और भ्रूण के शरीर के वजन को दिखाया, जिससे गर्भ के अंत में मातृ शरीर का वजन कम हो गया। मतलबगुर्दाट्रांसजेनिक और WT चूहों के बीच वजन समान था (WTd{{0}}.8 g ± 0।{{10}}6; PEd21=0.7 g ± 0.07) और गर्भावस्था के बाद (WTd50=0.9 g ± 0.05; PEd50=1.0 g ± 0.06) (चित्र S1A)।गुर्दाWT (WTd21 बनाम PEd21 p=0.002; WTd50 बनाम PEd50 p=0.001; चित्र S1B) की तुलना में मातृ शरीर के वजन के लिए सामान्यीकृत वजन ने PE समूह में काफी अधिक मान दिखाया। यह प्रभाव था मुख्य रूप से पीई समूह के कम मातृ शरीर के वजन से प्रेरित है, जो मुख्य रूप से पीई समूह [35] में पिल्ले और प्लेसेंटा की कम संख्या और वजन के कारण था।

2.2. गुर्दे की चोट मार्कर जीन की परिवर्तित अभिव्यक्ति

ट्यूबलर चोट, एंजियोजेनेसिस, फाइब्रोसिस, ऊतक सूजन, या ऑक्सीडेटिव तनाव के लिए विशिष्ट जीन को एक परिकल्पना-आधारित तरीके से चुना गया था और पीई और डब्ल्यूटी गर्भावस्था के दौरान और बाद में विश्लेषण किया गया था। प्रीक्लेम्पटिक गर्भावस्था (चित्रा 2ए) के दौरान गुर्दे की जीन अभिव्यक्ति में सबसे महत्वपूर्ण परिवर्तनों का पता चला था। विशिष्ट ट्यूबलर चोट मार्करों की अभिव्यक्ति,गुर्दाचोट के अणु 1 (किम -1, चित्रा 2 बी), और न्यूट्रोफिल जिलेटिनस से जुड़े लिपोकेलिन 2 (नगल, चित्रा 2 सी) काफी 2 थे। 5- प्रीक्लेम्पटिक चूहे गर्भावस्था के दौरान गुना बढ़ गया। नेफ्रिन (Nphs -1), जो पॉडोसाइट स्लिट डायफ्राम का हिस्सा है, गर्भावस्था के दौरान पीई और डब्ल्यूटी चूहों में भी इसी तरह व्यक्त किया जाता है, जो स्लिट झिल्ली में कोई नुकसान नहीं होने का सुझाव देता है। एंजियोजेनेसिस और वाहिकासंकीर्णन से जुड़े अधिकांश जीन इसी तरह प्रीक्लेम्पटिक गर्भावस्था के दौरान व्यक्त किए गए थेगुर्दा. न तो एंडोटिलिन-1 (Et-1), संवहनी एंडोथेलियल ग्रोथ फैक्टर (VEGF-a), और न ही उनके रिसेप्टर्स (Flt-1, Flk-1, नमक-1 ) ने गर्भावस्था के दौरान महत्वपूर्ण रूप से परिवर्तित जीन अभिव्यक्ति को दिखाया। में फाइब्रोटिक परिवर्तनों की पहचान करने के लिएगुर्दाऊतक, मार्कर जीन जैसे कोलेजन प्रकार 1 और 4 (Col-1, Col4 -1), संयोजी ऊतक वृद्धि कारक (GF), और परिवर्तन कारक-बीटा 1 (Tgf -1) मापे गए थे। प्रीक्लेम्पटिक गर्भावस्था के दौरान कर्नल -1 और सीटीजीएफ में काफी बदलाव आया (चित्र 2ए, डी)। विशिष्ट मार्कर जीन CD68 (विभेदन 68 अणुओं का समूह) और Mcp -1 (मोनोसाइट कीमोअट्रेक्टेंट प्रोटीन 1) का उपयोग भड़काऊ प्रक्रियाओं को चिह्नित करने के लिए किया गया था। WT की तुलना में प्रीक्लेम्पटिक गर्भावस्था के दौरान CD68 की अभिव्यक्ति में काफी वृद्धि हुई थी। वृक्क ऑक्सीडेटिव तनाव के मार्करों में NADPH ऑक्सीडेज 2 (Ncf-1, Ncf-4, Cyb-a, Cyb-b) और वृक्क-विशिष्ट NADPH ऑक्सीडेज 4 (Nox-4) के घटक शामिल हैं। ) पीई (चित्रा 2ई) के दौरान एनसीएफ -4 अभिव्यक्ति थोड़ी लेकिन काफी बढ़ गई थी।

प्रीक्लेम्पटिक गर्भावस्था के बाद जीन अभिव्यक्ति पर ध्यान केंद्रित करते समय, केवल कुछ महत्वपूर्ण अंतर मौजूद थे (चित्र 2ए)। WT प्रसवोत्तर की तुलना में प्रीक्लेम्पटिक गर्भावस्था के बाद सूजन मार्कर CD68 में काफी वृद्धि हुई थी। नेफ्रॉन की चोट, एंजियोजेनेसिस और वाहिकासंकीर्णन और फाइब्रोसिस से जुड़े जीन इसी तरह गर्भावस्था के बाद पीई और डब्ल्यूटी चूहों में व्यक्त किए गए थे। ऑक्सीडेटिव तनाव मार्कर एनसीएफ -4 ने डब्ल्यूटी पोस्टपार्टम (चित्रा 2ई) की तुलना में पीई चूहों में थोड़ी अधिक अभिव्यक्ति दिखाना जारी रखा। इसके अलावा, पीई चूहों के प्रसवोत्तर (चित्रा 2एफ) में नॉक्स -4 अभिव्यक्ति में काफी वृद्धि हुई थी। जीन अभिव्यक्ति- और p-मान तालिका S2 में दिखाए गए हैं।

सिस्टैन्च निकालने के पाउडर का लाभ: विरोधी सूजन

2.3. हल्के संरचनात्मक गुर्दे की हानि

ग्लोमेरुली का बढ़ना और केशिका की दीवार का मोटा होना, ग्लोमेरुलर एंडोटिलिन की पहचान, मानव और चूहे के प्रीक्लेम्पटिक गर्भावस्था में एल्ब्यूमिन्यूरिया के साथ जाना [13,17,27]। सबसे पहले, हमने प्रीक्लेम्पटिक चूहे की गर्भावस्था के दौरान ग्लोमेरुलर क्षति का आकलन किया और आकार और घनत्व जैसे ग्लोमेरुली की विशेषताओं का निर्धारण किया। हिस्टोलॉजिक विश्लेषण (चित्रा 3ए) में पीई गर्भावस्था के दौरान ग्लोमेरुलर आकार नहीं बदला गया था। ग्लोमेरुलर केशिका क्षेत्र के लक्षण वर्णन के माध्यम से, केशिका की दीवार का मोटा होना और ग्लोमेरुलर स्केलेरोसिस का पता लगाया जा सकता है। पीई चूहों में आवधिक एसिड-शिफ (पीएएस) - सकारात्मक क्षेत्र (डब्ल्यूटीडी21 बनाम पीईडी21, पी=0.0293; चित्रा 3बी) का उच्च प्रतिशत था। शारीरिक रूप से कार्य करने के लिए गुर्दे की ट्यूबलर प्रणाली महत्वपूर्ण हैगुर्दा. प्रीक्लेम्पटिक चूहों में ट्यूबलर क्षति का मूल्यांकन ट्यूबलर चोट स्कोर, सूजन और पेरिवास्कुलर फाइब्रोसिस का विश्लेषण करके किया गया था। पीई गर्भावस्था के दौरान ट्यूबलर प्रणाली में काफी बदलाव नहीं किया गया था, फिर भी इन गर्भधारण के दौरान हल्की ट्यूबलर चोट की प्रवृत्ति थी। वृक्क नलिकाकार फैलाव और ब्रश की सीमा का पतला होना देखा गया (चित्र 3सी)। वृक्क मज्जा में मैक्रोफेज गणना द्वारा सूजन की मात्रा निर्धारित की गई थी। तुलना ने गर्भावस्था के दौरान कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं दिखाया, हालांकि पीई चूहों ने उच्च दिखाया, फिर भी सीडी की महत्वपूर्ण संख्या नहीं 68- सकारात्मक कोशिकाएं, देखने के क्षेत्र में 10 से 50 के बीच (चित्र 3डी)। सापेक्ष तंतुमय क्षेत्र की गणना पेरिवास्कुलर फाइब्रोसिस की मात्रा निर्धारित करने के लिए की गई थी, हालांकि पीई और डब्ल्यूटी चूहों में वाहिकाएं गर्भावस्था के दौरान समान दिखाई दीं (चित्र 3ई)।

इसके अलावा, ग्लोमेरुलर और ट्यूबलर क्षति का एक लक्षण वर्णन किया गया थागुर्देपीई और डब्ल्यूटी चूहों की गर्भावस्था के बाद। प्रसवोत्तर दोनों समूहों में ग्लोमेरुलर टफ्ट क्षेत्र में वृद्धि हुई थी; हालांकि, WT की तुलना में, ग्लोमेरुली काफी बढ़े हुए थे (WTd50 बनाम PEd50, p=0.0406; चित्र 3A)। डब्ल्यूटी चूहों (चित्रा 3बी) की तुलना में पीई चूहों में ग्लोमेरुलर टफ्ट क्षेत्र में प्रसवोत्तर परिवर्तन नहीं किया गया था। गुर्दे की ट्यूबलर क्षति की प्रवृत्ति मौजूद थीगुर्देगर्भावस्था के बाद पीई चूहों से, हालांकि काफी भिन्न नहीं है (चित्र 3सी)। गर्भावस्था के दौरान टिप्पणियों के समान,गुर्देपीई चूहों के प्रसवोत्तर ने देखने के क्षेत्र में अधिक सीडी68 प्लस कोशिकाओं को प्रदर्शित किया, लेकिन तुलना महत्वपूर्ण नहीं थी (चित्र 3डी)। पीई और डब्ल्यूटी चूहों (चित्रा 3ई) के बीच पेरिवास्कुलर फाइब्रोसिस में प्रसवोत्तर कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं थे।

2.4. पीई गर्भावस्था में गुर्दे का कार्य थोड़ा बदल जाता है

मूत्र मापदंडों को चिह्नित करने के लिए मापा गया थागुर्दानिस्पंदन और उत्सर्जन। गुर्दे की चोट पर, पुनर्अवशोषण प्रभावित हो सकता है। समूह-वार तुलना में, d49 की तुलना में WT और PE समूह में d19 की तुलना में प्रीक्लेम्पटिक गर्भावस्था के दौरान और बाद में मूत्र क्रिएटिनिन काफी कम हो गया था (प्रत्येक की तुलना p <0.0001; चित्र="" 4b)="" से="" की="" गई="">

इसी तरह, पीई डी19 में पीई डी49 (पी=0.0263; चित्रा 4सी) की तुलना में सोडियम काफी कम था। मापे गए इलेक्ट्रोलाइट्स में से केवल पोटेशियम और क्लोराइड सांद्रता प्रीक्लेम्पटिक गर्भावस्था (K प्लस p=0.0063; Cl− p=0.0034; चित्र 4D,E) के दौरान महत्वपूर्ण रूप से प्रभावित हुए थे। इसके अलावा, पोटेशियम WT d19 में WT d49 (K plus p=0.0042; चित्र 4D) की तुलना में काफी कम था। विशेष रूप से, पीई चूहों में गर्भवती डब्ल्यूटी या प्रसवोत्तर की तुलना में मूत्र का उत्सर्जन अधिक था।

3. चर्चा

हमने पीई के प्रभाव की जांच कीगुर्दाएक ट्रांसजेनिक चूहे के मॉडल में और विश्लेषण किया कि क्या गुर्दे में परिवर्तन प्रसवोत्तर प्रकट होता है। पीई के दौरान, वृक्क जीन अभिव्यक्ति को बदल दिया गया था। बढ़े हुए ग्लोमेरुलर घनत्व और ट्यूबलर परिवर्तनों के साथ हल्के ग्लोमेरुलर परिवर्तन मौजूद थे। बढ़े हुए एल्ब्यूमिन उत्सर्जन का पता लगाया जा सकता है। नेफ्रॉन चोट (किम-1, नगल), फाइब्रोसिस (Col-1, Ctgf), सूजन (CD68), और ऑक्सीडेटिव तनाव (Ncf-4) से जुड़े मार्कर जीन में परिवर्तित अभिव्यक्ति मौजूद थी। . ट्यूबलर चोट बायोमार्कर किम -1 [36] की अभिव्यक्ति पीई के दौरान बढ़ गई थी और गर्भावस्था के बाद सामान्य हो गई थी, यह दर्शाता हैगुर्दाकेवल पीई के दौरान नुकसान। केवल मामूली 2.5-नगल अभिव्यक्ति की गुना वृद्धि का पता चला, जिससे अन्य ने ट्यूबलर चोट पर तेजी से 1000-गुना वृद्धि की सूचना दी [37]। हमने पीई के दौरान किडनी में ऑक्सीडेटिव स्ट्रेस मार्कर जीन (Ncf-4, Nox-4) की अभिव्यक्ति में हल्के बदलाव देखे। ये अवलोकन उन अध्ययनों के साथ चलते हैं जो गर्भावस्था में उन्नत आरओएस और बिगड़ा हुआ माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन की रूपरेखा तैयार करते हैंगुर्दाअन्य पीई मॉडल [28,30]। यह दिखाया गया है कि एगोनिस्टिक ऑटोएंटिबॉडी (एटी 1- एए), जो प्रीक्लेम्पटिक महिलाओं के प्लाज्मा में होते हैं, विभिन्न ऊतकों में आरओएस उत्पादन से जुड़े होते हैं, जिनमें शामिल हैंगुर्दा[28,38]। पीई के लिए हमारे चूहे के मॉडल में, अधिकांश वृक्क परिवर्तनों ने प्रसवोत्तर बरामद किया। केवल ऑक्सीडेटिव स्ट्रेस मार्कर जीन (Ncf-4, Nox-4), हल्के ग्लोमेरुलर इज़ाफ़ा, और घटी हुई क्रिएटिनिन उत्सर्जन पीई के बाद बनी रहती है। कम प्लेसेंटल और भ्रूण के वजन के कारण पीई के दौरान मातृ शरीर का वजन कम हो गया था, लेकिन अलग-अलग प्रसवोत्तर नहीं जैसा कि पहले दिखाया गया था [34,35]। इसलिए, हम मानते हैं कि क्रिएटिनिन उत्सर्जन में परिवर्तन मांसपेशियों में अंतर के परिणामस्वरूप नहीं बल्कि बिगड़ा गुर्दे समारोह से हुआ।

हमने अनुमान लगाया कि केवल एक प्रीक्लेम्पटिक गर्भावस्था गुर्दे की क्षति की भविष्यवाणी करने के लिए पर्याप्त नहीं है और आगे हृदय क्षति को प्रभावित करती है, जैसा कि मनुष्यों में देखा गया है। अन्य पीई पशु मॉडल के अधिकांश अध्ययन गर्भावस्था के दौरान गुर्दे में परिवर्तन दिखाते हैं, जैसे कि ग्लोमेरुलर इज़ाफ़ा, फाइब्रोसिस, ग्लोमेरुलोस्केलेरोसिस और प्रोटीनुरिया [39-42]। हालांकि, पीई के गर्भावस्था के बाद के प्रभावों पर केवल कुछ ही ध्यान देते हैंगुर्दा. आरयूपीपी मॉडल में, प्रसव के आठ सप्ताह बाद बीपी और एल्बुमिनुरिया की पुनरावृत्ति हुई, और कोई ग्लोमेरुलर या ट्यूबलर क्षति का पता लगाने योग्य नहीं था [31]। डाहल नमक के प्रति संवेदनशील चूहों में, जन्म देने के आठ सप्ताह बाद मादा चूहों में ग्लोमेरुलर और ट्यूबलर चोटें मौजूद थीं, जो मूत्र में नेफ्रिन और केआईएम -1 के प्रोटीन स्तर में वृद्धि के रूप में पाई गईं [43]। हमारे निष्कर्षों के साथ, ये परिणाम इस सबूत का समर्थन करते हैं कि उच्च रक्तचाप बना रहना प्रीक्लेम्पटिक गर्भावस्था के बाद मनुष्यों में गुर्दे की क्षति का कारण हो सकता है। इसके अलावा, की दबाव निर्भरतागुर्दामोरी एट अल द्वारा क्षति पर प्रकाश डाला गया है। उन्होंने उच्च रक्तचाप के एंजियोटेंसिन II-प्रेरित मॉडल का उपयोग किया, जिसमें गुर्दे को अधिकांश गुर्दे की चोटों (फाइब्रोसिस, ट्यूबलर क्षति) से बचाया गया था, जब उच्च गुर्दे के धमनी दबाव को क्रोनिक सर्वो-नियंत्रण [44] द्वारा नियंत्रित किया गया था। ये निष्कर्ष हमारी समझ का समर्थन करते हैं कि पीई में गर्भावस्था से संबंधित गुर्दे की चोट पीई में गर्भावस्था से संबंधित उच्च रक्तचाप की प्रतिवर्तीता पर निर्भर करती है।

हमारी प्रारंभिक परिकल्पना पीई के इतिहास वाली महिलाओं में टिप्पणियों से प्रेरित थी, जिन्होंने बाद में जीवन में ईएसआरडी या सीकेडी के विकास के लिए एक उच्च जोखिम दिखाया [12,45]। अधिकांश महिलाओं के पास नहीं थागुर्दापीई [45] से पहले फंक्शन टेस्ट। हमारे परिणाम इस बात का प्रमाण दिखाते हैं कि अकेले पीई गुर्दे की बीमारी का कारण बनने के लिए पर्याप्त नहीं हो सकता है। दाई एट अल। यह बताता है कि पहले से मौजूद उच्च रक्तचाप वाली महिलाओं को पीई द्वारा आरोपित किया गया था, उनमें पहले से मौजूद उच्च रक्तचाप या पीई [20] की तुलना में ईएसआरडी विकसित होने का सबसे अधिक जोखिम था। कट्टा एट अल। ने दिखाया कि पीई के इतिहास वाली महिलाओं में ईएसआरडी विकसित होने का जोखिम चार गुना अधिक था और उनमें से 20 प्रतिशत में कमी देखी गईगुर्दागर्भावस्था से पहले कार्य [21]। ये अध्ययन पहले से ज्ञात उच्च रक्तचाप की संभावित भूमिका को रेखांकित करते हैं जिसके परिणामस्वरूप सुपरिंपोज्ड पीई गुर्दे की बीमारी में योगदान देता है। इसके अलावा, हम सुझाव देते हैं कि प्रीक्लेम्पटिक गर्भावस्था के बाद गुर्दे की बीमारी का विकास गुर्दे के कार्य को प्रभावित करने वाली कई बीमारियों के कारण होता है। बहु-हिट परिकल्पना के अनुसार, दो या दो से अधिक घटनाएं गुर्दे की बीमारी के विकास में योगदान देंगी और पीई केवल एक योगदानकर्ता हो सकता है।

हमारा अध्ययन प्रायोगिक प्रक्रिया के संबंध में सीमाओं को प्रदर्शित करता है क्योंकि हमने गर्भावस्था और प्रसवोत्तर के अंत में दो-समय के बिंदुओं को शामिल किया था। अंगों को क्रमशः दोनों समय बिंदुओं से काटा और विश्लेषण किया गया था, लेकिन अनुदैर्ध्य बीपी माप केवल उन बलिदान किए गए प्रसवोत्तर के लिए किया जा सकता था। दोनों समूहों ने गर्भावस्था के दौरान तुलनीय बीपी मान प्रस्तुत किया। इसके अलावा, पशु प्रयोगों में 3R सिद्धांत को पूरा करने के लिए अनुदैर्ध्य बीपी को केवल कभी-कभी डब्ल्यूटी में मापा जाता था। हमारे समूह के पिछले अध्ययनों से पता चला है कि डब्ल्यूटी चूहों में गर्भावस्था के दौरान उच्च रक्तचाप विकसित नहीं होता है [34]।

अंत में, पीई के लिए ट्रांसजेनिक चूहे के मॉडल ने गर्भावस्था के दौरान हल्के गुर्दे की हानि को दिखाया जो ज्यादातर प्रसवोत्तर हल करता है। प्रीक्लेम्पटिक चूहे गर्भावस्था के दौरान ऑक्सीडेटिव तनाव बायोमार्कर की ऊंचाई और ग्लोमेरुलर निस्पंदन के परिवर्तन के साथ मामूली गुर्दे की चोट मौजूद थी। इन परिणामों ने मामूली नुकसान की ओर इशारा कियागुर्दाप्रीक्लेम्पटिक गर्भावस्था के बाद और इसलिए प्रसवोत्तर गुर्दे की बीमारी के जोखिम कारक के रूप में पीई को पूरी तरह से बाहर नहीं कर सका। हमें संदेह है कि गुर्दे की क्षति और बाद में विफलता के लिए गुर्दे की क्रिया को प्रभावित करने वाली अतिरिक्त घटनाएं आवश्यक होंगी।

सिस्टैंच ट्यूबोलोसा टेस्टोस्टेरोन: सिस्टैंच गुर्दे की बीमारी का इलाज कर सकता है और यौन क्रिया में सुधार कर सकता है

4. सामग्री और तरीके

4.1. पशु अध्ययन

मानव एंजियोटेंसिनोजेन जीन (Tg (hAgt) L1623) के लिए ट्रांसजेनिक महिला एसडी चूहों को मानव रेनिन जीन (Tg (hRen) L10J) के लिए पुरुष एसडी चूहों के साथ ट्रांसजेनिक के रूप में पहले वर्णित किया गया था [32,35]। योनि प्लग के लिए मादा चूहों को प्रतिदिन नियंत्रित किया जाता था, जिसे गर्भावस्था के पहले दिन (d1) माना जाता था। ट्रांसजेनिक जानवरों के क्रॉसिंग के परिणामस्वरूप गर्भवती ट्रांसजेनिक मादा चूहों ने उच्च रक्तचाप और एल्बुमिनुरिया के साथ एक विशिष्ट प्रीक्लेम्पटिक फेनोटाइप (पीई) विकसित किया और प्रयोगात्मक प्रक्रिया [32] के लिए उपयोग किया गया। एसडी जंगली-प्रकार (डब्ल्यूटी) महिलाओं और पुरुषों को पार किया गया और एक नियंत्रण के रूप में परोसा गया। सभी चूहों को 22 ± 2 C के नियंत्रित तापमान, 55 ± 15 प्रतिशत की आर्द्रता और 12:12 घंटे के प्रकाश-अंधेरे चक्र के साथ मानक परिस्थितियों में रखा गया था। पूरे प्रयोग के दौरान जानवरों के पास भोजन (स्निफ वी 1324-300) और पानी का एड लिबिटम था। दो अलग-अलग समापन बिंदुओं पर चूहों की बलि दी गई, गर्भावस्था का अंत (दिन 21, n=9 WT; 8PE) और चार सप्ताह के प्रसवोत्तर गर्भावस्था (दिन 50, n=9 WT; 11PE) गहरे आइसोफ्लुरेन के तहत क्षय द्वारा संज्ञाहरण, बाद के समय-बिंदु लगभग के अनुरूप। मनुष्यों में दो साल [46]। अंगों और रक्त को एकत्र किया गया और आगे उपयोग किए जाने तक −80 C पर संग्रहीत किया गया। वृक्क कैप्सूल, वसा पैड और अधिवृक्क ग्रंथियों को से अलग किया गया थागुर्दा, जिसे आगे के विश्लेषण के लिए आधा काट दिया गया था। अध्ययन को स्थानीय अधिकारियों (स्वास्थ्य और सामाजिक मामलों के राज्य कार्यालय, बर्लिन) द्वारा अनुमोदित किया गया है।

4.2. रक्तचाप माप

DSI टेलीमेट्री डिवाइस (HD-T11) को आइसोफ्लुरेन (आइसोफ्लुरेन-एयर कम्पोजिट 2-2.5 प्रतिशत) के साथ इनहेलेशन एनेस्थीसिया के तहत प्रत्यारोपित किया गया था, जैसा कि पहले वर्णित [34] संभोग से 14 दिन पहले किया गया था। इस प्रकार, रक्तचाप (बीपी) को नियमित आधार पर 5-मिनट के अंतराल में गर्भावस्था के पहले, दौरान और प्रसवोत्तर मापा जा सकता है। बीपी रिकॉर्डिंग के दौरान जानवरों को सिंगल हाउस में रखा गया था।

4.3. मूत्र माप

जैसा कि पहले बताया गया है, 24- घंटे का मूत्र गर्भावस्था के दौरान 19 दिन और गर्भावस्था के बाद 49वें दिन एकत्र किया गया था [47]। निर्माता के निर्देशों का पालन करते हुए AU480 नैदानिक ​​​​रसायन विश्लेषक (बेकमैन कल्टर) के साथ मूत्र के नमूनों का विश्लेषण किया गया। एल्ब्यूमिन सांद्रता माप के लिए एक प्रत्यक्ष, प्रतिस्पर्धी एलिसा (सेलट्रेंड, लक्केनवाल्ड, जर्मनी) का प्रदर्शन किया गया। आयन-चयनात्मक इलेक्ट्रोड का उपयोग करके क्लोराइड, पोटेशियम और सोडियम की मात्रा का पता लगाया गया। क्रिएटिनिन को एंजाइमी रूप से परिवर्तित किया गया था और वर्णमिति परिमाणित किया गया था (नंबर OSR61204, बेकमैन कल्टर, क्रेफेल्ड, जर्मनी)। सभी मूत्र मापदंडों को या तो ड्यूरिसिस या क्रिएटिनिन एकाग्रता के लिए सामान्यीकृत किया गया था।

4.4. जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण

पहले वर्णित [48] के रूप में जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण किया गया था। संक्षेप में, जमे हुएगुर्दाऊतक को Qiazol Lysis Reagent (Qiagen) और Precellys सिरेमिक मोतियों (Peqlab Biotechnology, Erlangen, Germany) के साथ समरूप बनाया गया था। निर्माता के प्रोटोकॉल का पालन करते हुए कुल आरएनए को आरनेसी मिनी किट (क्यूजेन, हिल्डेन, जर्मनी) का उपयोग करके अलग किया गया था। उच्च क्षमता सीडीएनए रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन किट (एप्लाइड बायोसिस्टम्स, वॉलथम, यूएसए) एमआरएनए पूरक डीएनए (सीडीएनए) में। सापेक्ष जीन अभिव्यक्ति की मात्रा निर्धारित करने के लिए, एक रिवर्स-ट्रांसक्रिप्शन-क्वांटिटेटिव पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (RT-qPCR) क्वांटस्टूडियो 3 रियल-टाइम पीसीआर सिस्टम (एप्लाइड बायोसिस्टम्स) का उपयोग करके या तो TaqManFast Universal PCR मास्टर मिक्स या फास्ट SYBR ग्रीन मास्टर मिक्स के साथ किया गया था। दोनों थर्मो फिशर साइंटिफिक, वॉलथम, एमए, यूएसए)। प्राइमर और प्रोब को प्राइमर एक्सप्रेस3 का उपयोग करके डिजाइन किया गया था। 0 और बायोटेज़, जर्मनी (प्राइमर सीक्वेंस: टेबल एस 1) द्वारा संश्लेषित किया गया था। प्राइमरों को 10 मिमी की अंतिम सांद्रता, 5 मिमी की जांच के लिए पतला किया गया था। मानक वक्र विधि के साथ लक्ष्य mRNA अभिव्यक्ति का मात्रात्मक विश्लेषण किया गया था। हाउसकीपिंग जीन 18S के लिए सभी अभिव्यक्ति मूल्यों को सामान्य किया गया। विश्लेषण से पहले जीन को एक परिकल्पना-आधारित तरीके से चुना गया था।

4.5. इम्युनोहिस्टोकैमिस्ट्री

गुर्दास्लाइस 4 प्रतिशत फॉर्मेलिन (24 घंटे), निर्जलित, और पैराफिन में एम्बेडेड में तय किए गए थे।गुर्देएक इलेक्ट्रॉनिक रोटरी माइक्रोटोम (थर्मो फिशर) के साथ 2- और 4-μm-मोटी स्लाइस में ट्रांसवर्सली काटा गया।गुर्दापहले से वर्णित [35] के रूप में तुलनीयता की गारंटी देने के लिए उद्देश्य योजना-क्रोमेट 2 0 × / 0 .8 × (ज़ीस) के साथ स्लाइड स्कैनर पैनोरमिक मिडी का उपयोग करके स्लाइस को एक साथ दाग और स्कैन किया गया था। हिमालयन-एओसिन (एचई) धुंधला निर्माता के प्रोटोकॉल (टी 865, कार्ल रोथ, कार्लज़ूए, जर्मनी) के बाद किया गया था। ग्लोमेर्युलर एंडोटिलिन की पहचान करने के लिए प्रति किडनी (n=5) देखने के तीन कॉर्टिकल क्षेत्रों के भीतर ग्लोमेरुलर-केशिका टफ्ट क्षेत्र की परिधि को मापा गया। पहले वर्णित चोट स्कोर [49] का उपयोग करके ट्यूबलर क्षति का अर्ध-मात्रात्मक विश्लेषण किया गया था। पंद्रह मेडुलर इमेज (200 × आवर्धन) ट्यूबलर फैलाव, अध: पतन, परिगलन, कास्ट गठन, और ब्रश सीमा के नुकसान के प्रतिशत के संबंध में अंधाधुंध तरीके से बनाए गए थे। ग्लोमेरुली में कार्बोहाइड्रेट युक्त घटकों (ग्लाइकोजन) का पता लगाने के लिए आवधिक एसिड-शिफ (पीएएस) धुंधला का उपयोग किया गया था। स्लाइड्स को 0.5 प्रतिशत आवधिक एसिड (सिग्मा एल्ड्रिच, 5 मिनट।, स्टाइनहेम, जर्मनी) में ऊष्मायन किया गया था, और शिफ के अभिकर्मक (मर्क, डार्मस्टैड, जर्मनी) को लागू किया गया था (10- मिनट अंधेरा)। स्लाइड्स को हिमालयन (कार्ल रोथ, 5 मिनट) के साथ उलट दिया गया था। प्रति किडनी 8-10 ग्लोमेरुलर क्षेत्रों के पीएएस-पॉजिटिव क्षेत्र (एन=5) को इमेजजे [50] के रंग थ्रेशोल्ड प्लग-इन का उपयोग करके मापा गया था। मेसन-गोल्डनर ट्राइक्रोम (एमजीटी) धुंधला का उपयोग पेरिवास्कुलर फाइब्रोसिस को मापने के लिए किया गया था। किडनी स्लाइड्स (2 माइक्रोन) को निर्माता के प्रोटोकॉल (3459, कार्ल रोथ) के अनुसार दाग दिया गया था। प्रति किडनी तीन अच्छी तरह से तैयार धमनियों के संयोजी ऊतक, पोत और लुमेन की परिधि को मापा गया। फाइब्रोटिक क्षेत्र की गणना कुल पोत क्षेत्र के संबंध में की गई थी। गुर्दे के ऊतकों में मैक्रोफेज को माउस विरोधी चूहे CD68 एंटीबॉडी (क्लोन ED1; नंबर MCD341R, बायो-रेड, कोन 1:100) [51,52] के साथ दाग दिया गया था। द्वितीयक Cy3- संयुग्मित गधा विरोधी माउस-IgG एंटीबॉडी (नंबर 715-165-151, जैक्सन इम्यूनो रिसर्च) का उपयोग किया गया था (कॉन। 1:300) और नाभिक को DAPI (40,) के साथ वेक्टाशील्ड बढ़ते माध्यम से दाग दिया गया था। 6-डायमाइड-2-फिनाइल-लिंडल; नंबर एच-1200;वेक्टर लेबोरेटरीज, बर्लिंगम, यूएसए)। सीडी 68-सकारात्मक कोशिकाओं को मैन्युअल रूप से दस क्षेत्रों (आवर्धन 200 ×) प्रति किडनी (n=5) में गिना जाता था, जब एक नाभिक को Cy3 सिग्नल के लिए कोलोकलाइज़ किया गया था। सॉफ्टवेयर केस व्यूअर (3 डी हाईटेक लिमिटेड, बुडापेस्ट, हंगरी) और इमेज जे (नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ हेल्थ, बेथेस्डा, एमडी, यूएसए) का उपयोग करके हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण अंधाधुंध तरीके से किया गया था।

4.6. आंकड़े

सॉफ्टवेयर ग्राफपैड प्रिज्म 6 और 7 का उपयोग करके सांख्यिकीय विश्लेषण किया गया था। मान ± मानक विचलन (एसडी) के रूप में प्रस्तुत किए जाते हैं। परिणाम n=8–11प्रति उपचार समूह और समय बिंदु के रूप में प्रदर्शित होते हैं। आउटलेर्स की पहचान ROUT विधि से की गई थी जिसमें अधिकतम 1 प्रतिशत की झूठी खोज दर का उपयोग किया गया था, गाऊसी वितरण के लिए मूल्यों का परीक्षण किया गया था, और समूहों की तुलना एक साधारण दो-तरफ़ा एनोवा (विचरण का विश्लेषण) के साथ सिडक के कई तुलना परीक्षण के साथ की गई थी। एफ-मान स्वतंत्रता की संबंधित डिग्री के साथ इंगित किया गया है। p-मानों को * 0 से कम या उसके बराबर दर्शाया गया है।{{10}}5, ** 0.01 से कम या बराबर, *** से कम या 0.001 के बराबर, **** 0.0001 से कम या उसके बराबर।

डेजर्टलिविंग सिस्टैन्च: किडनी फंक्शन में सुधार