टीकाकृत सूअरों में माइकोप्लाज्मा हाइपोन्यूमोनिया-विशिष्ट प्रतिरक्षा का दीर्घकालिक अनुवर्ती

अमूर्त

माइकोप्लाज्मा हाइपोपेनिया मोबाइल सूअरों में एनज़ूटिक निमोनिया का प्राथमिक एजेंट है। इस बीमारी से होने वाले आर्थिक नुकसान को कम करने के लिए आमतौर पर एम. हाइपोपेनिया मोबाइल टीकाकरण का अभ्यास किया जाता है। हालाँकि, वध के क्षण तक एम. हाइपोन्यूमोनिया वैक्सीन-प्रेरित प्रतिरक्षा, विशेष रूप से कोशिका-मध्यस्थ प्रतिरक्षा की निरंतरता की अभी तक जांच नहीं की गई है। इसलिए, दो वाणिज्यिक फार्मों पर, 25 सूअरों (n=50) को 16 दिन की उम्र में इंट्रामस्क्युलर रूप से एक वाणिज्यिक जीवाणु प्राप्त हुआ। हर महीने, एम. हाइपोन्यूमोनिया-विशिष्ट सीरम एंटीबॉडी की उपस्थिति का विश्लेषण किया गया और टीएनएफ-, आईएफएन- और आईएल के प्रसार का आकलन किया गया। रक्त में विभिन्न टी सेल उपसमूहों द्वारा उत्पादन का मूल्यांकन रिकॉल एसेज़ का उपयोग करके किया गया था। दोनों फार्मों में एम. हाइपोन्यूमोनिया के साथ प्राकृतिक संक्रमण का अनुमान लगाया गया था। हालाँकि, अध्ययन किए गए सूअर लगभग पूरे परीक्षण के दौरान एम. हाइपोन्यूमोनिया नकारात्मक रहे। टीकाकरण के बाद सेरोकनवर्जन नहीं देखा गया और सभी सूअर दो महीने की उम्र में सेरोनेगेटिव हो गए। टी सेल सबसेट आवृत्तियों की गतिशीलता दोनों फार्मों पर समान थी। माइकोप्लाज्मा हाइपोपेनिया मोबाइल-विशिष्ट साइटोकिन-उत्पादक सीडी4+सीडी8+ एक महीने की उम्र में दोनों फार्मों के सूअरों के रक्त में टी कोशिकाएं पाई गईं लेकिन बढ़ती उम्र के साथ इसमें काफी कमी आई। दूसरी ओर, इन विट्रो एम. हाइपोन्यूमोनिया उत्तेजना के बाद मेद अवधि के अंत तक टी सेल प्रसार देखा गया। इसके अलावा, एम. हाइपोन्यूमोनिया टीकाकरण के बाद मातृजन्य एंटीबॉडी के साथ और उसके बिना सूअरों के बीच हास्य और कोशिका-मध्यस्थ प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं में अंतर नहीं देखा गया। यह अध्ययन क्षेत्र की परिस्थितियों में मोटे सूअरों में दीर्घकालिक एम. हाइपोपेनिया मोबाइल वैक्सीन-प्रेरित प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं का दस्तावेजीकरण करता है। इन प्रतिक्रियाओं पर प्राकृतिक संक्रमण के प्रभाव की जांच के लिए आगे के शोध की आवश्यकता है।

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कीवर्ड

माइकोप्लाज्मा हाइपोन्यूमोनिया, सूअर, अनुदैर्ध्य अध्ययन, टीका-प्रेरित प्रतिरक्षा, कोशिका-मध्यस्थ प्रतिरक्षा

परिचय

सूअरों में सबसे महत्वपूर्ण श्वसन रोगजनकों में से एक माइकोप्लाज्मा हाइपोन्यूमोनिया (एम. हाइपोन्यूमोनिया) है। यह एन्ज़ूटिक निमोनिया का प्राथमिक एजेंट है, जो अधिकांश खेतों में मौजूद स्थानिक है, और दुनिया भर में सुअर उत्पादन में महत्वपूर्ण आर्थिक नुकसान के लिए जिम्मेदार है [1, 2]। एम. हाइपोन्यूमोनिया को नियंत्रित करने के लिए टीकाकरण सबसे अधिक इस्तेमाल किया जाने वाला प्रबंधन अभ्यास है क्योंकि यह नैदानिक ​​​​संकेतों और प्रदर्शन हानि को कम कर सकता है, और उपचार की लागत को कम कर सकता है [3]। एम. हाइपोन्यूमोनिया टीकाकरण का लक्ष्य रोगज़नक़-विशिष्ट प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं को बढ़ाना है जो प्राकृतिक एम. हाइपोन्यूमोनिया संक्रमण पर तेजी से और प्रभावी ढंग से प्रतिक्रिया करते हैं। सूअरों के लिए अधिकांश व्यावसायिक रूप से उपलब्ध एम. हाइपोन्यूमोनिया टीके एक से तीन सप्ताह की उम्र के बीच प्रशासन के लिए पंजीकृत हैं [4]। एम. हाइपोपेनिया मोबाइल-विशिष्ट प्रतिरक्षा की शुरुआत एक से चार सप्ताह तक होती है और इसका उद्देश्य वध तक, पूर्ण मेद अवधि के दौरान संक्रमण से रक्षा करना है [4]। कुल मिलाकर, सूअरों का टीकाकरण या संक्रमण मेमोरी बी कोशिकाओं और सीडी {7} सीडी 8+ टी कोशिकाओं के भेदभाव को ट्रिगर करता है, जिससे रोगज़नक़ के साथ दूसरे संपर्क के बाद तेजी से एंटीबॉडी और सेल-मध्यस्थ प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया सुनिश्चित होती है [5] . एम. हाइपोन्यूमोनिया के खिलाफ टीकाकरण के परिणामस्वरूप सीरोकनवर्जन हो सकता है और श्वसन पथ में स्थानीय स्तर पर एम. हाइपोन्यूमोनिया विशिष्ट एंटीबॉडी में वृद्धि हो सकती है [6-9]। टीका लगाए गए जानवरों में, गैर-टीकाकरण वाले जानवरों की तुलना में इन विट्रो एम. हाइपोन्यूमोनिया उत्तेजना के बाद उच्च लिम्फोसाइट प्रसार दर के साथ-साथ आईएफएन - - उत्पादक लिम्फोसाइटों का उच्च स्तर देखा गया [9-11]। इसके अलावा, पॉलीफ़ंक्शनल CD4+CD8− और CD4−CD8+ T कोशिकाएं, जो INF- और TNF- का उत्पादन करती हैं, एम. हाइपोन्यूमोनिया टीकाकरण [12] के बाद पाई गईं। हालाँकि, यह पूरी तरह से स्पष्ट नहीं है कि एम. हाइपोपेनिया मोबाइल-विशिष्ट वैक्सीन-प्रेरित प्रतिरक्षा कितने समय तक बनी रहती है। अधिकांश एम. हाइपोन्यूमोनिया वैक्सीन प्रभावकारिता अध्ययनों में, सूअरों को खांसी, प्रतिरक्षा मापदंडों, रोगज़नक़ भार और फेफड़ों के घावों की जांच करने के लिए टीकाकरण के कुछ सप्ताह पहले ही चुनौती दी जाती है [13-16]। जब दीर्घकालिक प्रभावकारिता का अध्ययन किया गया, तो ज्यादातर क्षेत्रीय परीक्षणों में, अक्सर केवल उत्पादन मापदंडों और वध के समय फेफड़ों के घावों की जांच की गई और प्रतिरक्षा मापदंडों की जांच नहीं की गई या केवल खराब जांच की गई [17-20]। हमारी जानकारी के अनुसार, टीकाकरण के क्षण से लेकर क्षेत्रीय परिस्थितियों में वध तक एम. हाइपोन्यूमोनिया विशिष्ट टीका-प्रेरित कोशिका-मध्यस्थ प्रतिरक्षा की अभी तक जांच नहीं की गई है। पिगलेट टीकाकरण के अलावा, प्रजनन गिल्ट का एम. हाइपोन्यूमोनिया टीकाकरण आमतौर पर इस्तेमाल किया जाने वाला अनुकूलन अभ्यास है [21]। प्रजनन करने वाले जानवरों के टीकाकरण के बाद माइकोप्लाज्मा हाइपोन्यूमोनिया-विशिष्ट साइटोकाइन-उत्पादक सीडी4+सीडी8+ और पॉलीफंक्शनल सीडी4−सीडी8− टी कोशिकाएं मौजूद होती हैं [22]। प्रतिरक्षित सूअरों से कोलोस्ट्रम चूसने वाले पिगलेट के रक्त में एम. हाइपोन्यूमोनिया-विशिष्ट मातृ-व्युत्पन्न एंटीबॉडी (एमडीए) और कोशिका-मध्यस्थ प्रतिरक्षा का उच्च स्तर होता है जो दूध छुड़ाने तक या उससे भी लंबे समय तक बना रह सकता है [7, 22, 23]। जब पिगलेट को एमडीए (उच्च स्तर) की उपस्थिति में एम. हाइपोन्यूमोनिया के खिलाफ टीका लगाया जाता है, तो अक्सर सेरोकनवर्जन की कमी होती है [24-26]। हालाँकि, इन विट्रो उत्तेजना के बाद लिम्फोसाइटों की प्रसार प्रतिक्रिया एमडीए के स्तर की परवाह किए बिना, गैर-टीकाकरण वाले पिगलेट की तुलना में एम. हाइपोन्यूमोनिया टीकाकृत पिगलेट में काफी अधिक थी। हालांकि इन लेखकों ने दिखाया कि एमडीए के उच्च स्तर की उपस्थिति में कोशिका-मध्यस्थ प्रतिरक्षा एम. हाइपोन्यूमोनिया टीकाकरण पर आधारित थी, इन कोशिका-मध्यस्थ प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं में बेहतर अंतर्दृष्टि प्राप्त करने के लिए टी सेल उपसमुच्चय और उनके साइटोकिन उत्पादन के और अधिक विभेदन की आवश्यकता है। और अंततः इन प्रतिक्रियाओं पर प्राकृतिक संक्रमण का प्रभाव पड़ता है। वर्तमान अध्ययन का उद्देश्य दो वाणिज्यिक फार्मों पर सूअरों में एम. हाइपोन्यूमोनिया टीकाकरण पर हास्य और कोशिका-मध्यस्थ प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं की जांच करना था। इसके लिए, 16 दिन की उम्र में टीकाकरण के क्षण से लेकर वध की उम्र तक सीरम एंटीबॉडी और विभिन्न टी सेल उपसमूहों द्वारा प्रसार और साइटोकिन उत्पादन की निगरानी की गई। पिगलेट्स में हास्य और कोशिका-मध्यस्थ टीका प्रतिक्रियाओं पर एम. हाइपोन्यूमोनिया-विशिष्ट मातृ-व्युत्पन्न प्रतिरक्षा के संभावित प्रभाव की भी जांच की गई।

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सामग्री और तरीके

झुंड का विवरण और पशु चयन

Two commercial farrow-to-finish farms were included in the study based on the willingness of the farmer to participate. On both farms, circulation of M. hyopneumoniae was assumed based on the presence of the pathogen in tracheobronchial swabs (TBS) taken from fattening pigs in the past. Danbred breeding gilts were reared on farm A and purchased on farm B. On-farm A, the breeding gilts were vaccinated once against M. hyopneumoniae four weeks before first insemination with Ingelvac MycoFLEX® (Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH, Ingelheim am Rhein, Germany). On-farm B, breeding gilts were vaccinated with Stellamune® Mycoplasma (Elanco, Utrecht, The Netherlands) at six months of age upon arrival at the farm and a second time four weeks later. Furthermore, on-farm B gilts were also booster-vaccinated twice shortly before farrowing. On both farms, sows were not vaccinated against M. hyopneumoniae. Farm A practiced a 5-week batch-farrowing system and piglets were weaned and moved to the nursery unit at approximately 22 days of age. The piglets were vaccinated at 16 days of age against M. hyopneumoniae with an inactivated whole cell J strain-based bacterin (Ingelvac MycoFLEX®, Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH, Ingelheim am Rhein, Germany), porcine circovirus type 2 (PCV2) (Ingelvac CircoFLEX®, Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH) and porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) (UNISTRAIN® PRRS, HIPRA, Amer, Spain). Pigs were moved to the fattening unit at 9 weeks of age. Farm B worked in a 4-week batch-farrowing system and piglets were weaned and moved to the nursery unit at approximately 22 days of age. Tey was vaccinated at 16 days of age against M. hyopneumoniae with the same vaccine as in farm A (Ingelvac MycoFLEX®, Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH) and PRRSV (UNISTRAIN® PRRS, HIPRA). The piglets were moved to the fattening unit at 10 weeks of age. On both farms, five breeding animals (two gilts and three sows of mixed parity) were included in the study. The growing process was monitored by the main investigator and from each litter, five healthy piglets (birth weight>1 किग्रा) का चयन किया गया, कान काटा गया, और जन्म से लेकर वध तक मासिक रूप से निगरानी की गई (n=25 सूअर के बच्चे/फार्म)। कान-नुकीले सूअरों के क्रॉस-पालन की अनुमति नहीं थी और पूरे परीक्षण के दौरान सूअरों को दोनों फार्मों पर एम. हाइपोन्यूमोनिया के खिलाफ सक्रिय एंटीबायोटिक दवाएं नहीं मिलीं।

सिस्टैंच ट्यूबुलोसा-प्रतिरक्षा प्रणाली में सुधार

डिजाइन और नमूनाकरण का अध्ययन करें

अध्ययन को पशु चिकित्सा संकाय की नैतिक समिति और बायोसाइंस इंजीनियरिंग संकाय, गेन्ट विश्वविद्यालय द्वारा अनुमोदित किया गया था (अनुमोदन संख्या 2020/31)। सूअरों से, कोलोस्ट्रम को पालने की प्रक्रिया के दौरान एकत्र किया गया था। फैरोइंग के 6 घंटे के भीतर, सूअरों से एक टीबीएस (60 सेमी चूसने वाला कैथेटर, मेडिनोर्म जीएमबीएच, स्पाइसेन-एलवर्सबर्ग, जर्मनी) और एक बाँझ सीरम ट्यूब (क्लॉटेड रक्त) में रक्त एकत्र किया गया था। दो दिन की उम्र में, पिगलेट्स से सीरम ट्यूबों में रक्त लिया गया। एक से छह महीने की उम्र तक, हर महीने पिगलेट से बाँझ सीरम और ईडीटीए (बिना थक्के वाला रक्त) ट्यूबों में रक्त और एक टीबीएस लिया जाता था। फार्म ए पर, सूअरों को 177 दिन की उम्र में मार दिया गया था, और इसलिए, अंतिम नमूना 5.5 महीने की उम्र में लिया गया था। फार्म बी में, सूअरों को 191 दिन की उम्र में बूचड़खाने में भेजा गया था, इसलिए अंतिम नमूना 6 महीने की उम्र में लिया गया था। कोलोस्ट्रम और सीरम के नमूनों को अगले विश्लेषण तक -20 डिग्री पर और टीबीएस नमूनों को -80 डिग्री पर संग्रहीत किया गया था। कोशिका-मध्यस्थ प्रतिरक्षा विश्लेषण के लिए गैर-क्लॉटेड रक्त को तुरंत संसाधित किया गया। एम. हाइपोन्यूमोनिया डीएनए का पता लगाने के लिए डिजिटल पीसीआर एम. हाइपोन्यूमोनिया की उपस्थिति का परीक्षण करने के लिए, एक वाणिज्यिक किट (डीएनईज़ी® रक्त और ऊतक किट, क्यूजेन, वेनलो, नीदरलैंड) और एक डिजिटल पीसीआर (डीपीसीआर) का उपयोग करके टीबीएस नमूनों से डीएनए निकाला गया था। ) P102 जीन को लक्षित करने वाला प्रोटोकॉल पहले वर्णित प्रोटोकॉल [27] के बाद निष्पादित किया गया था। सीरम और कोलोस्ट्रम नमूनों में माइकोप्लाज्मा हाइपोन्यूमोनिया-विशिष्ट एंटीबॉडी माइकोप्लाज्मा हाइपोन्यूमोनिया-विशिष्ट एंटीबॉडी का निर्माता के निर्देशों का पालन करते हुए एक वाणिज्यिक अप्रत्यक्ष एलिसा (एम. ह्यो एब टेस्ट, आईडीईएक्सएक्स लेबोरेटरीज इंक, वेस्टब्रुक, एमई, यूएसए) का उपयोग करके विश्लेषण किया गया था। यदि नमूना-से-सकारात्मक (एस/पी) अनुपात 0.40 से अधिक था तो नमूनों को सकारात्मक माना जाता था और यदि एस/पी अनुपात 0.40 के बराबर या उससे कम था तो नमूनों को नकारात्मक माना जाता था।

टी सेल साइटोकिन उत्पादन

ताजा, बिना थक्का बने रक्त से, परिधीय रक्त मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं (पीबीएमसी) को एक Lym phoprep™ घनत्व ग्रेडिएंट (स्टेमसेल टेक्नोलॉजीज, वैन - - कूवर, कनाडा) का उपयोग करके अलग किया गया था। पीबीएमसी के अलगाव, उत्तेजना और धुंधलापन को कुछ मामूली संशोधनों के साथ पहले बताए अनुसार निष्पादित किया गया था [22]। कोशिकाओं को रात भर (20 घंटे) घर में बने एम. हाइपोन्यूमोनिया जे स्ट्रेन बैक्टीरिन से उत्तेजित किया गया और प्रत्येक जानवर के लिए, एक नकारात्मक माध्यम और सकारात्मक कॉनकेनवेलिन ए (कॉनए) नियंत्रण शामिल किया गया। एम. हाइपोन्यूमोनिया जे स्ट्रेन बैक्टीरिन एम. हाइपोन्यूमोनिया एफ7.2 सी बैक्टीरिन [16] के उत्पादन के लिए प्रोटोकॉल के आधार पर बनाया गया था। साइटोकिन उत्पादन की जांच करने के लिए, प्रोटीन स्राव को रोकने के लिए उत्तेजना के अंतिम 4 घंटों के लिए प्रत्येक कुएं में ब्रेफेल्डिन ए (ईबायोसाइंस ™, सैन डिएगो, सीए, यूएसए) जोड़ा गया था। बाह्यकोशिकीय धुंधलापन के लिए, पीबीएमसी को एंटी-सीडी3 (क्लोन पीपीटी3), एंटी-सीडी4 (क्लोन 74-12-4), और एंटी-सीडी8 (क्लोन 11-295-33) मोनोक्लोनल एंटीबॉडी के साथ जोड़ा गया था। इसके बाद, संबंधित द्वितीयक एंटीबॉडी एंटी-माउस IgG1 APC-Cy7 (Abcam, कैम्ब्रिज, यूके), एंटी-माउस IgG2b FITC (बायोलेजेंड, सैन डिएगो, CA, यूएसए) और एंटी-माउस IgG2a PE-Cy7 (Abcam, कैम्ब्रिज, यूके) हैं। जोड़ा गया था। इसके बाद, माउस IgG1 (10 µg/mL) के साथ एक अवरोधक कदम उठाया गया। सतह के धुंधलापन के बाद, कोशिकाओं को ठीक किया गया, और पारगम्य बनाया गया, और टीएनएफ-, आईएफएन-, और आईएल -17ए के लिए इंट्रासेल्युलर धुंधलापन किया गया [22]। डेटा को साइटोफ्लेक्स फ्लो साइटोमीटर (बेकमैन कूल्टर, बी, सीए, यूएसए) के साथ हासिल किया गया था और परिणामों का आगे विश्लेषण साइटएक्सपर्ट सॉफ्टवेयर (बेकमैन कूल्टर) के साथ किया गया था। गेटिंग पदानुक्रम अतिरिक्त फ़ाइल 1 में दिखाया गया है।

टी-सेल प्रसार परख

टी कोशिकाओं के प्रसार का आकलन करने के लिए पृथक पीबीएमसी को इन-हाउस निर्मित एम. हाइपोन्यूमोनिया जे स्ट्रेन बैक्टीरिया के साथ इन विट्रो में उत्तेजित किया गया था। उपयोग किए गए प्रोटोकॉल का पिछले अध्ययन [22] में विस्तार से वर्णन किया गया था। सतह के धुंधलापन के लिए, कोशिकाओं को पहले एंटी-सीडी3, एंटी-सीडी4 और एंटी-सीडी8 मोनोक्लोनल एंटीबॉडी के साथ और बाद में संबंधित माध्यमिक एंटीबॉडी एंटी-माउस आईजीजी1 एपीसी-साइ7 (एबीकैम, कैम्ब्रिज, यूके), एंटी-माउस आईजीजी2बी के साथ इनक्यूबेट किया गया। FITC (बायोलेजेंड, सैन डिएगो, सीए, यूएसए), और एंटी-माउस आईजीजी2ए एलेक्साफ्लोर 647 (बायोलेजेंड, सैन डिएगो, सीए, यूएसए) प्रोपीडियम आयोडाइड के साथ। डेटा को साइटोफ्लेक्स प्रवाह साइटोमीटर के साथ हासिल किया गया था और परिणामों का आगे विश्लेषण साइटएक्सपर्ट सॉफ्टवेयर के साथ किया गया था। गेटिंग पदानुक्रम अतिरिक्त फ़ाइल 2 में दिखाया गया है।

सिस्टैंच ट्यूबुलोसा-प्रतिरक्षा प्रणाली में सुधार

डेटा विश्लेषण करता है

Statistical analyses were performed using IBM SPSS® Statistics Version 27 (IBM, Chicago, IL, USA) to compare results within farms. A descriptive analysis was performed for M. hyopneumoniae-specific antibody levels and the frequency of different T cell subsets. Kolmogorov-Smirnov and Shapiro-Wilk tests were used as tests for the normality of the residuals. For normally distributed data, repeated measures analyses of variance were used and post-hoc pairwise comparisons were made with a Bonferroni correction to assess possible differences between successive sampling moments. For not mally distributed data, a non-parametric Friedman test was used together with a Wilcoxon signed rank test with Bonferroni correction to compare the different sampling moments. Descriptive results were given to discuss whether the presence (S/P>{0}}.40) या एमडीए की अनुपस्थिति (एस/पी 0.40 से कम या उसके बराबर) ने पिगलेट टीकाकरण के बाद हास्य और कोशिका-मध्यस्थ प्रतिरक्षा को प्रभावित किया।

परिणाम

प्रत्येक फार्म पर, पांच सूअरों को मृत्यु या कान का टैग खोने के कारण परीक्षण के दौरान बाहर रखा गया था। इन सूअरों का डेटा अंतिम सही ढंग से प्रलेखित नमूना क्षण तक विश्लेषण में शामिल किया गया था।

खेतों पर एम. हाइपोन्यूमोनिया के साथ प्राकृतिक संक्रमण की उपस्थिति

फार्म ए पर, सभी टीबीएस नमूने (सूअरों, सूअरों और मोटे सूअरों से) एम. हाइपोन्यूमोनिया डीएनए की उपस्थिति के लिए नकारात्मक परीक्षण किए गए। फार्म बी में, सूअरों, सूअरों और मोटा करने वाले सूअरों के सभी टीबीएस नमूनों में पांच महीने की उम्र तक एम. हाइपोन्यूमोनिया डीएनए की उपस्थिति के लिए नकारात्मक परीक्षण किया गया। छह महीने की उम्र में, चार मोटे सूअरों में 300, 7, 22 और 14 एम. हाइपोन्यूमोनिया जीव/μL डीएनए के साथ एम. हाइपोन्यूमोनिया के लिए सकारात्मक परीक्षण किया गया।

सूअरों में एम. हाइपोन्यूमोनिया-विशिष्ट एंटीबॉडी का बने रहना

दोनों फार्मों में, पांच में से चार सूअरों में फैरोइंग के समय सीरम और कोलोस्ट्रम में एम. हाइपोन्यूमोनिया-विशिष्ट एंटीबॉडी थे (आंकड़े 1 ए और सी)। उन सूअरों से कोलोस्ट्रम चूसने वाले दो दिन के सूअरों में एम. हाइपोन्यूमोनिया-विशिष्ट मातृ एंटीबॉडी (एमडीए मौजूद) थे, जबकि सेरोनिगेटिव सूअरों के सूअरों में भी सेरोनिगेटिव (एमडीए अनुपस्थित) थे (आंकड़े 1 बी और डी)। 16 दिन की उम्र में टीकाकरण के बावजूद, दोनों फार्मों में, सूअरों के सीरम में एम. हाइपोन्यूमोनिया-विशिष्ट एंटीबॉडी का स्तर दो दिन की उम्र से एक महीने, एक महीने से दो महीने और दो महीने की उम्र से काफी कम हो गया। तीन महीने की उम्र (चित्रा 1ई)। बाद के नमूना क्षणों के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं देखा गया। दो महीने की उम्र के बाद से, चार महीने की उम्र में फार्म ए में दो को छोड़कर सभी सूअर एम. हाइपोन्यूमोनिया सेरोनिगेटिव थे। एमडीए वाले पिगलेट्स में एम. हाइपोन्यूमोनिया-विशिष्ट एंटीबॉडी का स्तर समय के साथ कम हो गया और दो महीने की उम्र में एमडीए के बिना पिगलेट्स के समान स्तर पर पहुंच गया (चित्रा 1एफ)।

सूअरों में टी सेल सबसेट आवृत्तियों की कैनेटीक्स

सुअर के जीवन के दौरान, प्रतिरक्षा प्रणाली की परिपक्वता और सूक्ष्मजीवों के संपर्क के कारण रक्त में विभिन्न टी सेल उपसमूहों की आवृत्ति बदल जाती है [28]। विभिन्न टी सेल सबसेट के कैनेटीक्स की जांच करने के लिए, गैर-उत्तेजित माध्यम नियंत्रण से रक्त पीबीएमसी का प्रवाह साइटोमेट्री द्वारा मूल्यांकन किया गया था। एक महीने की उम्र में, फार्म ए और बी के सूअरों में सीडी4− सीडी8+ टी कोशिकाओं की आवृत्ति (औसत %) क्रमशः 13.6±2.8% और 10.5±3.4% थी। यह आवृत्ति दोनों फार्मों पर दो महीने की उम्र में काफी बढ़ गई और फार्म ए पर तीन महीने की उम्र में फिर से काफी गिरावट आई। तीन महीने की उम्र के बाद से फार्म ए पर यह स्थिर रही, जबकि फार्म बी पर छह साल की उम्र में फिर से महत्वपूर्ण वृद्धि देखी गई। आयु के महीने (चित्र 2ए)। दोनों फार्मों पर, CD{13}}CD8− T कोशिकाओं की आवृत्ति एक महीने की उम्र में 37.5±6.0% (फार्म A) और 42.3±5.9% (फार्म B) के साथ सबसे अधिक थी। दो महीने की उम्र में यह आवृत्ति काफी कम हो गई। फार्म ए पर, आवृत्ति दो महीने से स्थिर हो गई, जबकि फार्म बी पर कमी धीरे-धीरे हुई (चित्र 2बी)। एक महीने की उम्र में, सीडी4/सीडी8 अनुपात 2.8 (फार्म ए) और 4.0 (फार्म बी) था। दो महीने की उम्र में अनुपात कम हो गया और दोनों फार्मों पर तीन महीने की उम्र से 1.{52}} से नीचे रहा। एक महीने के सूअरों में CD4−CD8− T कोशिकाओं की आवृत्ति क्रमशः फार्म A और B पर 31.1±7.2% और 25.6±5.4% थी। दोनों फार्मों में, दो महीने की उम्र में आवृत्ति समान रही लेकिन बाद में पांच महीने की उम्र में उच्चतम स्तर तक पहुंचने के लिए काफी वृद्धि हुई (चित्रा 2सी)। एक महीने की उम्र में सीडी4+सीडी8+ टी कोशिकाओं की आवृत्ति सबसे कम थी, फार्म ए और बी पर क्रमशः 3.3±1.1% और 4.0±1.0% थी। दो महीने की उम्र में यह आवृत्ति काफी बढ़ गई। फार्म ए पर, यह बाद में स्थिर रहा, जबकि फार्म बी पर यह चार महीने की उम्र तक धीरे-धीरे बढ़ता गया और पांच महीने की उम्र में फिर से काफी कम हो गया (चित्र 2डी)।

चित्र 1: सूअरों और सूअरों में माइकोप्लाज्मा हाइपोन्यूमोनिया-विशिष्ट एंटीबॉडी की उपस्थिति। एसी

चित्र 2 सूअरों के रक्त में सीडी 3+ टी सेल उपसमुच्चय की मासिक आवृत्ति (%)। ए

चित्र 3 सूअरों में प्रसारशील सीडी 3+ टी कोशिकाओं के प्रसार की निरंतरता। ए, बी

टी कोशिकाओं का प्रसार

टी कोशिकाओं के प्रसार के प्रतिशत की जांच करने के लिए एम. हाइपोपेनिया मोनिया-उत्तेजित पीबीएमसी का विश्लेषण किया गया। जैसा कि चित्र 3ए और बी में दिखाया गया है, एम. हाइपोन्यूमोनिया बैक्टीरिन के साथ इन विट्रो उत्तेजना के बाद दोनों फार्मों में प्रत्येक नमूना क्षण में सूअरों के रक्त में प्रसारशील सीडी 3+ टी कोशिकाएं मौजूद थीं, हालांकि कुछ जानवरों का प्रतिशत अधिक था फार्म ए. फार्म ए पर, पांच महीने की उम्र के प्रतिशत की तुलना में छह महीने की उम्र में प्रसार करने वाली टी कोशिकाओं का प्रतिशत काफी कम हो गया, जबकि फार्म बी पर, प्रसार करने वाली टी कोशिकाओं के प्रतिशत में कोई उल्लेखनीय कमी या वृद्धि नहीं हो सकी। परीक्षण में रहना। Te CD4−CD8− T कोशिकाएँ प्रमुख थीं CD{6}} T कोशिका उपसमुच्चय दोनों फार्मों पर M. hyopneumoniae उत्तेजना के जवाब में बढ़ रहा था, इसके बाद CD{7}}CD8− T कोशिका उपसमुच्चय (आंकड़े 3 C और डी)।

चित्र 4 दोनों फार्मों के सूअरों के रक्त में माइकोप्लाज्मा हाइपोन्यूमोनिया-विशिष्ट साइटोकिन-उत्पादक सीडी4+सीडी8+ टी कोशिकाएं प्रसारित हो रही हैं। ए

टी सेल साइटोकिन उत्पादन

सूअरों में एम. हाइपोन्यूमोनिया-विशिष्ट टी कोशिकाओं की उपस्थिति और दृढ़ता के बारे में बेहतर जानकारी प्राप्त करने के लिए, टीएनएफ-, आईएफएन-, और आईएल-17एम. हाइपोन्यूमोनिया बैक्टीरिन के साथ इन विट्रो में उत्तेजित रक्त पीबीएमसी द्वारा उत्पादन का मूल्यांकन किया गया। फ़्लो साइटॉमेट्री। जैसा कि चित्र 4 में दिखाया गया है, दोनों फ़ार्मों पर, उत्तेजित सीडी4+सीडी8+ टी कोशिकाओं ने साइटोकिन्स का उत्पादन किया, जो कम उम्र के सूअरों में अधिक स्पष्ट था। फार्म ए में एक से दो महीने की उम्र के सूअरों में और फार्म बी में दो से तीन महीने की उम्र के सूअरों में टीएनएफ{7}} सीडी4+सीडी8+ टी कोशिकाओं का प्रतिशत काफी कम हो गया। आईएफएन- + सीडी4+सीडी8+ टी कोशिकाओं में उल्लेखनीय गिरावट दोनों फार्मों के सूअरों में एक से दो महीने की उम्र में और फार्म बी में दो से तीन महीने की उम्र में देखी गई। फार्म ए में एक से दो महीने की उम्र के सूअरों में और फार्म बी में दो से तीन महीने की उम्र के सूअरों में टीएनएफ- और आईएफएन- दोनों का उत्पादन करने वाली टी कोशिकाओं का सीडी का प्रतिशत काफी कम हो गया। उम्र के हिसाब से, IL-17A+ CD4+CD8+ T कोशिकाओं का प्रतिशत दो महीने की उम्र के प्रतिशत की तुलना में अधिक था, लेकिन यह अंतर सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण नहीं था। फार्म बी के जिन चार जानवरों का छह महीने की उम्र में एम. हाइपोन्यूमोनिया पॉजिटिव पाया गया, उनमें एम. हाइपोन्यूमोनिया नेगेटिव जानवरों की तुलना में सीडी{21}}सीडी8+ टी कोशिकाओं द्वारा समान साइटोकिन उत्पादन हुआ। सीडी4+सीडी8+ टी सेल उपसमुच्चय के अलावा, हमने फार्म बी पर अन्य टी सेल उपसमुच्चय द्वारा साइटोकिन उत्पादन में अंतर भी देखा। चित्र 5 स्पष्ट प्रतिक्रियाओं का डेटा और साइटोकिन उत्पादन में महत्वपूर्ण अंतर दिखाता है। अन्य टी सेल उपसमुच्चय जो केवल फ़ार्म बी में पाए गए। अन्य मापदंडों के लिए और फ़ार्म ए पर, CD4−CD8+, CD4+CD8− या CD4− के साइटोकिन उत्पादन में कोई अंतर नहीं देखा गया। CD8− T कोशिकाएँ। टीएनएफ- + सीडी4+सीडी8− टी कोशिकाओं का प्रतिशत काफी बढ़ गया, जबकि आईएफएन- + सीडी4−सीडी8+ टी कोशिकाओं का प्रतिशत एक से दो महीने में काफी कम हो गया। आयु। ध्यान देने योग्य बात यह है कि छह महीने की उम्र में 7 एम. हाइपोन्यूमोनिया जीवों/ μL डीएनए के साथ जो सुअर एम. हाइपोन्यूमोनिया पॉजिटिव था, उसमें टीएनएफ- + सीडी4+सीडी8− और आईएल-17 का प्रतिशत उच्च था। इसके रक्त में A+ CD4−CD8+ T कोशिकाएँ हैं। छह महीने की उम्र के अन्य एम. हाइपोन्यूमोनिया-पॉजिटिव सूअरों में साइटोकिन-उत्पादक टी कोशिकाओं का प्रतिशत एम. हाइपोन्यूमोनिया-नेगेटिव सूअरों के समान था।

चित्र 5 फार्म बी पर सूअरों के रक्त में माइकोप्लाज्मा हाइपोन्यूमोनिया-विशिष्ट साइटोकिन-उत्पादक टी सेल उपसमुच्चय प्रसारित करना।

प्रत्येक फार्म पर, एम. हाइपोन्यूमोनिया-विशिष्ट एमडीए 20 दो-दिवसीय पिगलेट के सीरम में मौजूद था और पांच पिगलेट के सीरम में अनुपस्थित था, जो एम. हाइपोन्यूमोनिया-विशिष्ट सीरम एंटीबॉडी के बिना सूअर से आया था। यह जांचने के लिए कि क्या एमडीए का एम. हाइपोन्यूमोनिया-विशिष्ट वैक्सीन-प्रेरित सेल-मध्यस्थता प्रतिरक्षा पर प्रभाव था, एमडीए के साथ और बिना पिगलेट के बीच अंतर किया गया था, और टी सेल सबसेट के लिए दोनों समूहों के बीच अंतर की जांच की गई थी, जिसके लिए महत्वपूर्ण साइटोकिन उत्पादन में अंतर देखा गया (आंकड़े 6ए-ई)। फार्म बी में, एमडीए के साथ एक महीने के सूअरों में टीएनएफ - + सीडी 4+ सीडी 8+ टी कोशिकाओं का प्रतिशत एक महीने के सूअरों की तुलना में अधिक होता है। एमडीए के बिना सूअर. अन्य साइटोकिन-उत्पादक सीडी4+सीडी8+ टी कोशिकाओं के लिए, प्रत्येक फार्म पर एक महीने की उम्र में सूअरों के दो समूहों के बीच औसत प्रतिशत समान था। समय के साथ, सूअरों के रक्त में साइटोकाइन-उत्पादक सीडी4+सीडी8+ टी कोशिकाओं के औसत प्रतिशत में कमी की प्रवृत्ति देखी गई, जिसमें छह महीने की उम्र में केवल छोटे या बिना किसी अंतर वाले सूअरों के बीच कोई अंतर नहीं था। एमडीए (आंकड़े 6ए-सी)। फ़ार्म बी पर सूअरों के रक्त में सीडी{25}} टी कोशिकाओं का उत्पादन करने वाले आईएफएन - - के लिए भी यही देखा गया (चित्र 6डी)। एक और दो महीने की उम्र में, फ़ार्म बी पर टीएनएफ{27}} सीडी4+सीडी8− टी कोशिकाओं का औसत प्रतिशत एमडीए के साथ या उसके बिना सूअरों के लिए समान था, जबकि छह महीने की उम्र में, एक उच्च प्रतिशत टीएनएफ- -सीडी का उत्पादन कर रही है4+सीडी8− टी कोशिकाएं एमडीए के बिना सूअरों के रक्त में देखी गईं (चित्र 6ई)।

सिस्टैंच अनुपूरक लाभ-रोगप्रतिरोधक क्षमता बढ़ाएँ

बहस

यह पहला अध्ययन है जो सूअरों में जन्म से लेकर खेत की परिस्थितियों में वध तक दीर्घकालिक एम. हाइपोन्यूमोनिया-विशिष्ट वैक्सीन-प्रेरित प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं में अंतर्दृष्टि प्रदान करता है। आईडीईएक्सएक्स एलिसा के साथ मूल्यांकन किए गए सीरम में एक विनोदी प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया, टीकाकरण के बाद अनुपस्थित थी लेकिन कोशिका-मध्यस्थ प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाएं मौजूद थीं। इन विट्रो एम. हाइपोन्यूमोनिया उत्तेजना के बाद मेद अवधि के अंत तक टी कोशिकाओं का प्रसार देखा गया। इसके अलावा, एक महीने की उम्र में, एम. हाइपोन्यूमोनिया टीकाकरण के बाद, एम. हाइपोन्यूमोनिया-विशिष्ट साइटोकिन-उत्पादक सीडी4+सीडी8+ टी कोशिकाएं, जिनमें मेमोरी टी कोशिकाएं शामिल हैं, मौजूद थीं लेकिन बढ़ती उम्र के साथ कम हो गईं . मातृ एंटीबॉडी सुअर के जीवन के दौरान ह्यूमरल और कोशिका-मध्यस्थता वाले वैक्सीन-प्रेरित प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं को प्रभावित नहीं करती थीं, टीएनएफ - + सीडी {{11} सीडी 8+ टी कोशिकाओं की उपस्थिति को छोड़कर . फार्म स्तर पर एम. हाइपोन्यूमोनिया टीकाकृत पिगलेट्स में प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की दृढ़ता और अंतर का मूल्यांकन करने के लिए, हमने दो वाणिज्यिक फार्मों को शामिल किया। यद्यपि एम. हाइपोन्यूमोनिया का प्रचलन दोनों फार्मों पर माना गया था, परीक्षण के अंत में फार्म बी पर चार सूअरों को छोड़कर, अध्ययन किए गए सूअर पूरे परीक्षण में एम. हाइपोन्यूमोनिया नकारात्मक रहे, जिससे हमें वैक्सीन-प्रेरित की दृढ़ता की जांच करने की अनुमति मिली। प्राकृतिक संक्रमण के प्रभाव के बिना प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया। फार्म बी में छह महीने की उम्र के चार एम. हाइपोन्यूमोनिया पीसीआर-पॉजिटिव सूअरों में पीसीआर-नकारात्मक सूअरों की तुलना में एम. हाइपोन्यूमोनिया-विशिष्ट एंटीबॉडी का स्तर अधिक नहीं था। एक सुअर को छोड़कर, इन विट्रो एम. हाइपोन्यूमोनिया उत्तेजना के बाद उनके रक्त में साइटोकिन-उत्पादक टी कोशिकाओं का प्रतिशत अधिक नहीं था। इसे इस तथ्य से समझाया जा सकता है कि एम. हाइपोन्यूमोनिया संक्रमण संभवतः नमूना लेने के क्षण से कुछ समय पहले हुआ था, जिसने प्रतिरक्षा प्रणाली को संक्रमण पर प्रतिक्रिया करने के लिए पर्याप्त समय नहीं दिया था [29-31]। चार एम. हाइपोन्यूमोनिया-पॉजिटिव सूअरों में से तीन में, टीबीएस नमूने में रोगज़नक़ भार भी कम था।

चित्र 6 मातृ-व्युत्पन्न एंटीबॉडी स्तरों द्वारा माइकोप्लाज्मा हाइपोन्यूमोनिया-विशिष्ट साइटोकिन-उत्पादक टी सेल सबसेट का औसत प्रतिशत। एसी

दो दिन के सूअरों में सीरम एंटीबॉडी का स्तर, प्रजनन के समय सूअरों के सीरम और कोलोस्ट्रम में एम. हाइपोन्यूमोनिया-विशिष्ट एंटीबॉडी के स्तर से मेल खाता है, जो कोलोस्ट्रम के माध्यम से एम. हाइपोन्यूमोनिया विशिष्ट मातृ प्रतिरक्षा के हस्तांतरण की पुष्टि करता है [22, 23]। 16 दिन की उम्र में एम. हाइपोन्यूमोनिया टीकाकरण के बाद सेरोकनवर्जन नहीं देखा गया। इसके विपरीत, एम. हाइपोन्यूमोनिया-विशिष्ट एंटीबॉडी का स्तर समय के साथ कम हो गया और सभी जानवर दो महीने की उम्र में सेरोनिगेटिव हो गए। इस अध्ययन में उपयोग किए गए वाणिज्यिक एम. हाइपोन्यूमोनिया वैक्सीन को एक ही प्रशासन के बाद सीमित सेरोकनवर्जन का कारण माना जाता है, जो पिछले अध्ययनों में भी देखा गया था [14, 32, 33]। एक प्रायोगिक अध्ययन में, दूध छुड़ाने के समय सूअरों के टीकाकरण के दौरान, 40% जानवरों में टीकाकरण के 3 सप्ताह बाद सीरो-रूपांतरण हुआ था, जबकि एक क्षेत्रीय परीक्षण में, टीकाकरण के 7 सप्ताह बाद 40 में से केवल 3 सूअरों में सीरो-रूपांतरण हुआ था [14, 32]। हालाँकि, टीकाकरण के बाद एम. हाइपोन्यूमोनिया-विशिष्ट सीरम एंटीबॉडी की उपस्थिति (या अनुपस्थिति) संक्रमण के खिलाफ सुरक्षा (या इसकी कमी) के अनुरूप नहीं है [14, 25, 34]। मेजबान को एम. हाइपोन्यूमोनिया, CD{22}}CD8− T सहायक कोशिकाएं, मुख्य रूप से T1 और T17 कोशिकाएं जैसे ऐच्छिक अंतःकोशिकीय और बाह्यकोशिकीय जीवाणु रोगजनकों से बचाने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाती हैं। T1 कोशिकाएँ IFN- का उत्पादन करती हैं, जो रोगज़नक़ को मारने के लिए मैक्रोफेज को सक्रिय करती हैं, जबकि T17 कोशिकाएँ म्यूकोसल बाधा को मजबूत करने के लिए IL -17A का उत्पादन करती हैं [35-38]। हाल ही में, यह दिखाया गया है कि एम. हाइपोन्यूमोनिया कोशिकाओं का कम प्रतिशत इंट्रासेल्युलर रूप से भी पाया जा सकता है, और इंट्रासेल्युलर रोगजनकों के खिलाफ मेजबान की रक्षा में सीडी4−सीडी8+ साइटोटॉक्सिक टी कोशिकाओं की महत्वपूर्ण भूमिका को देखते हुए, ये साइटोटॉक्सिक टी कोशिकाएं हैं। एम. हाइपोन्यूमोनिया संक्रमण को नियंत्रित करने के लिए भी महत्वपूर्ण हो सकता है [31, 35, 39]। विभिन्न टी सेल सबसेट आवृत्तियों के कैनेटीक्स और इन विट्रो एम. हाइपोन्यूमोनिया उत्तेजना के बाद इन टी कोशिकाओं के प्रसार की क्षमता की जांच करने के लिए, पीबीएमसी को दोनों फार्मों पर पिगलेट से अलग किया गया था। टी सेल सबसेट आवृत्ति का पैटर्न इन दोनों फार्मों पर समान था। अन्य अध्ययनों के अनुसार, कम उम्र में CD{37}}CD8− T कोशिकाओं का प्रतिशत CD4−CD8+ T कोशिकाओं के प्रतिशत से अधिक है। बढ़ती उम्र के साथ, CD{41}}CD8− T कोशिकाओं का प्रतिशत घट जाता है, जबकि CD4−CD8+ T कोशिकाओं का प्रतिशत बढ़ जाता है जिसके परिणामस्वरूप समय के साथ CD4/CD8 अनुपात कम हो जाता है [40-42]। पिगलेट लगभग बिना किसी सीडी4+सीडी8+ टी कोशिकाओं के साथ पैदा होते हैं। जब सूअर सूक्ष्मजीवों के संपर्क में आते हैं तो ये कोशिकाएं उम्र के साथ बढ़ती हैं, क्योंकि इनमें से कुछ कोशिकाओं में रोगज़नक़-विशिष्ट स्मृति कार्य होता है [5, 22, 42-44]। हालाँकि, फार्म ए पर, सीडी4+सीडी8+ टी कोशिकाओं की आवृत्ति दो महीने की उम्र से समान स्तर पर बनी रही। फार्म बी में, उम्मीद के मुताबिक, चार महीने की उम्र तक धीरे-धीरे वृद्धि हुई, हालांकि सीडी 4+ सीडी 8+ टी कोशिकाओं का प्रतिशत बाद में फिर से कम हो गया। अन्य अध्ययनों के साथ टी सेल उपसमुच्चय की तुलना करना मुश्किल बना हुआ है क्योंकि इस अध्ययन में पीबीएमसी को सीधे रक्त के नमूने के बाद नहीं मापा गया था, बल्कि टी सेल उपआबादी के प्रतिशत को मापने से पहले 20 घंटे के लिए इनक्यूबेट किया गया था। माइकोप्लाज्मा हाइपोन्यूमोनिया-विशिष्ट सीडी का प्रसार 3+ टी कोशिकाएं मेद अवधि के अंत तक बनी रहीं, जिससे 16 दिन की उम्र में टीका लगाए गए सूअरों के रक्त में एम. हायो न्यूमोनिया-विशिष्ट टी कोशिकाओं की उपस्थिति की पुष्टि होती है। एम. हाइपोन्यूमोनिया विशिष्ट प्रोलिफ़ेरेटिंग टी कोशिकाओं की उपस्थिति को एनज़ूटिक निमोनिया के खिलाफ सुरक्षा के साथ सहसंबद्ध किया जा सकता है क्योंकि पिछले शोध से पता चला है कि माइटोजेन कॉनए के साथ इन विट्रो उत्तेजना के बाद पीबीएमसी की प्रसार करने की क्षमता, सूअरों में रोगों के खिलाफ प्रतिरोध के साथ सहसंबद्ध है [45 ]. Te CD4−CD8− T कोशिकाएँ दोनों फार्मों पर फैलने वाली मुख्य T कोशिका उपसमुच्चय थीं, इसके बाद CD{70}}CD8− T कोशिकाएँ थीं, जिनके प्रतिशत में समय के साथ उतार-चढ़ाव होता रहा। सूअरों में, अधिकांश CD4−CD8− T कोशिकाएं एंटीजन-विशिष्ट T कोशिकाओं के विपरीत अपरिवर्तनीय δ T सेल रिसेप्टर्स धारण करती हैं [31, 42]। पीआरआरएसवी जैसे अन्य रोगजनकों के साथ सूअरों के संक्रमण पर, δ टी कोशिकाएं भी पीआरआरएसवी विरेमिया के बाद मुख्य प्रसारक प्रतिक्रियाकर्ता थीं [46]। वे टी कोशिकाएं शास्त्रीय स्वाइन बुखार के खिलाफ सूअरों को टीका लगाने के बाद निष्क्रिय एंटीबॉडी के उत्पादन में भी भूमिका निभाती हैं [47]। इसके अलावा, एक्टिनोबैसिलस प्लुरोपन्यूमोनिया से संक्रमित सूअरों के ब्रोन्कोएल्वियोलर लैवेज द्रव में, CD8− δ T कोशिकाओं में वृद्धि देखी गई [48]। एम. हाइपोन्यूमोनिया संक्रमण के नियंत्रण और सुरक्षा में δ टी कोशिकाओं की भूमिका की जांच के लिए आगे का शोध आवश्यक है। रिकॉल एसेज़ में, टीएनएफ-, आईएफएन-, और आईएल -17ए के उत्पादन के लिए विभिन्न टी सेल सबसेट का मूल्यांकन किया गया था। दो महीने की उम्र में, टीएनएफ {{85 }}, आईएफएन {{86 }} और टीएनएफ- / आईएफएन - - सीडी बनाने वाली टी कोशिकाओं का प्रतिशत काफी कम हो गया था। एक महीने की उम्र में प्रतिशत की तुलना में। बाद में, प्रतिशत परिवर्तनशील थे, वे या तो और कम हो गए या समय के साथ स्थिर रहे। यही पैटर्न आईएल-17ए-उत्पादक सीडी4+सीडी8+ टी कोशिकाओं के लिए भी देखा गया, हालांकि सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण नहीं है। पीआरआरएसवी, आईएफएन के खिलाफ टीकाकरण किए गए गिल्ट्स में पीबीएमसी द्वारा उत्पादन भी प्राइमो टीकाकरण के 42 दिनों बाद तक देखा गया था, लेकिन टीकाकरण के 147 दिनों बाद तक कम हो गया [49]। एम. ह्यो निमोनिया टीकाकरण के बाद आईएफएन-स्रावित लिम्फोसाइटों की बढ़ी हुई संख्या पहले प्रदर्शित की गई है [9, 10]।

रेगिस्तान में रहने वाला सिस्टान्चेट्यूबुलोसा

हाल ही में, सबूत जमा हो रहे हैं कि पॉलीफंक्शनल टी कोशिकाएं, जो एक से अधिक साइटोकिन का उत्पादन करती हैं, रोगजनकों की सुरक्षा और निकासी में महत्वपूर्ण भूमिका निभाती हैं। उदाहरण के लिए, क्लैमाइडिया प्रजाति से संक्रमित सूअरों में, पॉलीफ़ंक्शनल CD{0}}CD8− T कोशिकाएं सुरक्षा से संबंधित होती हैं [50]। एम. हायो न्यूमोनिया के खिलाफ पिगलेट्स के टीकाकरण से पॉलीफंक्शनल सीडी4+सीडी8− और सीडी4−सीडी8+ टी कोशिकाओं का प्रतिशत भी बढ़ गया [12]। एक अन्य अध्ययन में, पीसीवी2 के खिलाफ सूअरों के टीकाकरण के परिणामस्वरूप टीकाकरण के 24 दिनों के बाद टीएनएफ {9}} / आईएफएन - + सीडी {11} सीडी 8+ टी कोशिकाओं का स्तर उच्च हो गया, जो फिर से कम हो गया। टीकाकरण के 56 दिन बाद अध्ययन के अंत की ओर [51]। हमारे अध्ययन में, हमने यह भी देखा कि समय के साथ साइटोकिन-उत्पादक सीडी4+सीडी8+ टी कोशिकाओं की उपस्थिति कम हो गई। यह अध्ययन रक्त लिम्फोसाइटों को प्रसारित करने पर केंद्रित है, लेकिन टीकाकरण फेफड़ों और ब्रोन्कियल लिम्फ नोड्स में स्थानीय एम. हाइपोन्यूमोनिया-विशिष्ट कोशिका-मध्यस्थ प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं को भी प्रेरित करता है [8]। इसलिए, एम. ह्यो निमोनिया-विशिष्ट वैक्सीन-प्रेरित प्रतिरक्षा पर भविष्य के शोध को स्थानीय कोशिका-मध्यस्थ प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं पर भी ध्यान केंद्रित करना चाहिए। इसके अलावा, इस अध्ययन में सूअरों के टीकाकरण के लिए केवल एक वाणिज्यिक एम. हाइपोन्यूमोनिया वैक्सीन का उपयोग किया गया था। टीकों के बीच प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाएं भिन्न हो सकती हैं क्योंकि वे टीके के निर्माण (सहायक और एंटीजन) और प्रशासन मार्ग [16, 52, 53] से प्रभावित होती हैं। उदाहरण के लिए, कार्बोपोल, प्रयुक्त वाणिज्यिक एम. हाइपोन्यूमोनिया वैक्सीन में सहायक, प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को टी1 प्रतिक्रिया की ओर निर्देशित करने के लिए जाना जाता है [54]। प्रत्येक फार्म पर, पांच सूअर के बच्चे एम. हाइपोन्यूमोनिया सेरोनिगेटिव थे, और 20 सूअर के बच्चों के सीरम में एम. हाइपोन्यू मोबाइल-विशिष्ट एमडीए मौजूद था। उनकी एमडीए स्थिति के बावजूद, सभी सूअर दो महीने की उम्र में एम. हाइपोन्यूमोनिया सेरोनिगेटिव थे, और बाद के समय बिंदुओं पर सेरोकनवर्जन नहीं देखा गया था। हमारे निष्कर्ष पिछले अध्ययन से मेल खाते हैं जिसमें एमडीए के साथ और बिना एमडीए के सात दिन के पिगलेट को एम. हाइपोन्यूमोनिया [25] के खिलाफ टीका लगाया गया था। दोनों समूहों में, टीकाकरण के बाद सेरोकनवर्जन नहीं देखा गया और टीकाकरण के 42 दिनों के बाद सभी सूअर सेरोनेगेटिव थे। दूसरी ओर, दूसरों ने पाया कि एमडीए की उपस्थिति में एम. हाइपोन्यूमोनिया टीकाकरण के परिणामस्वरूप गैर-टीकाकृत पिगलेट की तुलना में एंटीबॉडी का स्तर अधिक था, लेकिन एमडीए का अनुमापांक जितना अधिक होगा, प्रतिक्रिया उतनी ही कम होगी [24, 26]। यद्यपि एम. हाइपोन्यूमोनिया टीकाकरण के बाद हमेशा एक एंटीबॉडी प्रतिक्रिया नहीं देखी जाती है, एम. हाइपोन्यूमोनिया-विशिष्ट कोशिका-मध्यस्थ प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाएं प्रेरित होती हैं [26]। एमडीए के स्तर की परवाह किए बिना एम. हाइपोन्यूमोनिया-टीकाकृत सूअरों से पृथक पीबीएमसी के प्रसार में कोई अंतर नहीं देखा गया [26]। हमारे अध्ययन में, प्रत्येक फार्म के भीतर, एक महीने की उम्र में एमडीए के साथ और बिना एम. हाइपोन्यूमोनिया टीका लगाए गए सूअरों के बीच साइटोकिन-उत्पादक टी कोशिकाओं में कोई अंतर नहीं देखा गया। केवल फार्म बी में, एमडीए वाले सूअर के बच्चों में एमडीए के बिना सूअर के बच्चों की तुलना में एक महीने की उम्र में टीएनएफ {47}} सीडी {48} सीडी {49}} टी कोशिकाओं का प्रतिशत अधिक पाया गया। इन निष्कर्षों की प्रासंगिकता की एक अध्ययन में आगे जांच की जानी चाहिए जिसमें एम. हाइपोन्यूमोनिया-विशिष्ट एमडीए के साथ और उसके बिना बड़ी और समान मात्रा में पिगलेट शामिल हों। दस का भी सांख्यिकीय विश्लेषण किया जाना चाहिए क्योंकि एमडीए के बिना और समूह में जानवरों की कम और असमान संख्या के कारण इस अध्ययन में ऐसा नहीं किया गया था। निष्कर्ष में, वर्तमान अध्ययन से पता चला है कि, हालांकि पिगलेट्स के एम. हाइपोन्यूमोनिया टीकाकरण के बाद सेरोकनवर्जन की कमी थी, एम. हाइपोन्यूमोनिया-विशिष्ट कोशिका-मध्यस्थ प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं का पता लगाया गया था। पॉलीफ़ंक्शनल साइटोकिन-उत्पादक सीडी4+सीडी8+ टी कोशिकाएं तीन महीने की उम्र तक मौजूद थीं और मेद अवधि के अंत तक टी कोशिकाओं का प्रसार देखा गया था जो रोगज़नक़-विशिष्ट कोशिका-मध्यस्थ प्रतिरक्षा की उपस्थिति का संकेत देता है। एम. हाइपोन्यूमोनिया में सूअरों का टीकाकरण किया गया। परिणाम क्षेत्र की स्थितियों के तहत वैक्सीन-प्रेरित प्रतिरक्षा पर प्राकृतिक एम. हाइपोन्यूमोनिया संक्रमण के प्रभाव का आकलन करने वाले आगे के शोध का आधार बनते हैं।

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