इंट्रासेरेब्रोवेंट्रिकुलर-क्विनोलिनिक एसिड रैट मॉडल में डायोसमिन-प्रेरित न्यूरोप्रोटेक्शन और मेमोरी सुधार में यंत्रवत अंतर्दृष्टि: माइटोकॉन्ड्रियल कार्यों और एंटीऑक्सिडेंट का पुनरुत्थान भाग 3

2. सामग्री एवं विधियाँ

2.1. प्रायोगिक पशु. .क्या अनुसंधान को प्रोटोकॉल संख्या के तहत आईएईसी द्वारा अनुमति दी गई थी। एएससीबी/आईएईसी/14/20/145। एल्बिनोविस्टार चूहों (या तो लिंग, 200 ग्राम से 250 ग्राम, उम्र 8 से 9 महीने की उम्र) को तापमान की कृत्रिम सेटिंग्स (23 ± 2 डिग्री), 12:12 घंटे अंधेरे / प्रकाश अनुक्रम के तहत विशिष्ट आकार के पॉलीप्रोपाइलीन क्यूबॉइडल बाड़ों में रखा गया था, और संस्थागत पशु घर के भीतर आर्द्रता (40 ± 10%)। .ई कृन्तकों को मानक पौष्टिक खाद्य पदार्थ (आशीर्वाद मैन्युफैक्चरर्स, पंजाब) और इच्छानुसार शुद्ध पानी खिलाया गया।

पुरुषों और महिलाओं और स्मृति के बीच संबंध ने हमेशा बहुत ध्यान आकर्षित किया है। यह सर्वविदित है कि पुरुष हार्मोन शारीरिक विकास, स्वास्थ्य बनाए रखने और यौन विकास और यौन क्रिया को बढ़ावा देने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। इसके अलावा, हाल के अध्ययनों से पता चला है कि पुरुष हार्मोन का स्मृति से गहरा संबंध है।

अध्ययनों से पता चला है कि कुछ स्मृति कार्यों में पुरुष महिलाओं की तुलना में बेहतर प्रदर्शन करते हैं। उदाहरण के लिए, पुरुष आमतौर पर स्थानिक स्मृति में महिलाओं की तुलना में बेहतर प्रदर्शन करते हैं, और इसका कारण हिप्पोकैम्पस पर पुरुष हार्मोन का प्रभाव है। हिप्पोकैम्पस मस्तिष्क का वह क्षेत्र है जो स्थानिक स्मृति को संसाधित करता है। पुरुष हार्मोन हिप्पोकैम्पस के कार्य को बढ़ावा दे सकते हैं, जिससे पुरुषों की स्थानिक स्मृति क्षमता में सुधार होता है।

हालाँकि, महिला हार्मोन का भी याददाश्त पर सकारात्मक प्रभाव पड़ता है। अध्ययनों में पाया गया है कि महिला हार्मोन मस्तिष्क में स्मृति-संबंधी जीन की अभिव्यक्ति को बढ़ावा दे सकते हैं और हिप्पोकैम्पस में न्यूरॉन्स की संख्या और कार्य को बढ़ा सकते हैं, जिससे महिलाओं की याददाश्त में सुधार होता है। इसके अलावा, महिला हार्मोन तनाव से राहत दे सकते हैं, न्यूरोनल कोशिका मृत्यु को रोक सकते हैं, मस्तिष्क न्यूरॉन्स की रक्षा कर सकते हैं और महिलाओं की याददाश्त में और सुधार कर सकते हैं।

इससे पता चलता है कि पुरुष हार्मोन और महिला हार्मोन दोनों का याददाश्त में सुधार पर सकारात्मक प्रभाव पड़ता है। पुरुषों और महिलाओं की याददाश्त अलग-अलग होती है, प्रत्येक के अपने फायदे और नुकसान होते हैं, लेकिन इसका मतलब यह नहीं है कि पुरुषों की याददाश्त महिलाओं की तुलना में बेहतर होती है या महिलाओं की याददाश्त पुरुषों की तुलना में बेहतर होती है। इसलिए, हमें स्मृति के माप के रूप में लिंग का उपयोग नहीं करना चाहिए। हर किसी को अपने लाभ के लिए पूरा प्रयास करना चाहिए और अपनी याददाश्त में लगातार सुधार करना चाहिए।

अंत में, चाहे पुरुष हों या महिला, हमें अपने शारीरिक स्वास्थ्य और मानसिक स्थिति पर ध्यान देना चाहिए और अपनी याददाश्त में सुधार करने का सही तरीका चुनना चाहिए। उदाहरण के लिए, लगातार नई चीजें सीखना, नियमित जीवन जीने की आदतें विकसित करना और भावनात्मक स्थिरता बनाए रखना याददाश्त में सुधार पर सकारात्मक प्रभाव डाल सकता है। आइए हम याददाश्त में सुधार लाने और अपने लिए बेहतर भविष्य बनाने के तरीकों की लगातार खोज और अभ्यास करने के लिए मिलकर काम करें। यह देखा जा सकता है कि हमें अपनी याददाश्त में सुधार करने की जरूरत है। सिस्टैंच याददाश्त में काफी सुधार कर सकता है क्योंकि सिस्टैंच एक पारंपरिक चीनी दवा है जिसके कई अनोखे प्रभाव हैं, जिनमें से एक है मेमोरी में सुधार करना। सिस्टैंच की प्रभावकारिता इसमें मौजूद विभिन्न सक्रिय तत्वों से आती है, जिनमें टैनिक एसिड, पॉलीसेकेराइड, फ्लेवोनोइड ग्लाइकोसाइड आदि शामिल हैं। ये तत्व कई तरह से मस्तिष्क स्वास्थ्य को बढ़ावा दे सकते हैं।

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सभी पशु प्रक्रियाएं विशेष रूप से सीपीसीएसईए, भारत सरकार, नई दिल्ली के दिशानिर्देशों के अनुसार की जाती हैं। .ई पशु संरक्षकों और संचालकों को पशु समूहों को दी जाने वाली विभिन्न चिकित्सीय व्यवस्थाओं के बारे में जानकारी नहीं दी गई। कम से कम एक पखवाड़े की परिचित अवधि के बाद, खोजी पशु परीक्षण निष्पादित किए गए।

जानवरों का उपयोग करते हुए सभी जांच दिन में 0900- और 1600- घंटों के बीच की गईं।2.2. औषधि एवं रसायन. डायोसमिन (DSM: 520-27-4), क्विनोलिनिक एसिड (QA: 89-00-9), और मानक विश्लेषक मर्क (भारत) से प्राप्त किए गए थे।

सोडियम डाइहाइड्रोजन फॉस्फेट (NaH2PO4), सोडियम हाइड्रॉक्साइड (NaOH), पोटेशियमफॉस्फेट डिबासिक (K2HPO4), नाइट्रोब्लूटेट्राजोलियम (NBT), फेनाज़िन मेथोसल्फेट (5-मिथाइलफेनाज़िनियम मिथाइलसल्फेट), एथिलीनडायमिनेटेट्राएसिटिक एसिड (EDTA), बोविनेसेरम एल्ब्यूमिन (BSA), {{ 5}}[4-(2-हाइड्रॉक्सीएथाइल)पिपेरज़िन-1-yl]एथेनसल्फोनिक एसिड (HEPES), 1,2-bis[2-[bis(कार्बोक्सिमिथाइल) अमीनो] एथॉक्सी] इथेन (ईजीटीए), राइबोफ्लेविन, सोडियम साइनाइड (NaCN), नैट्रियमाजिड (NaN3), टेट्रासोडियम पायरोफॉस्फेट, हाइड्रोजन पेरोक्साइड (H2O2), NADH डिसोडियम (DPNH), NADPH टेट्रासोडियम (कोएंजाइम II कम टेट्रासोडियम नमक), फॉस्फोरिक एसिड, फोलिन और सियोकाल्टेउ फिनोल (एफसीआर), और सल्फोसैलिसिलिक एसिड (5-एसएसए) अभिकर्मक (हाईमीडिया प्रयोगशालाएं, महाराष्ट्र, भारत); डाइग्लीसिन, ग्लेशियल एसिटिक एसिड (CH3COOH), एल्मन अभिकर्मक (3- कार्बोक्सी -4- नाइट्रोफेनिलडिसल्फाइड, DTNB), एज़ाबेंजीन (C5H5N), और सोडियम लॉरिलसल्फेट (SLS) (लोबाकेमी, मुंबई, भारत); 4,6-डाइहाइड्रोक्सी-2-मर्कैप्टोपाइरीमिडीन (2-टीबीए), डिसोडियम कार्बोनेट(Na2CO3), और (2-मर्कैप्टोइथाइल) ट्राइमिथाइलमोनियम आयोडाइड एसीटेट (टीसीआई रसायन, भारत); जिंक सल्फेट (ZnSO4), रोशेल नमक (पोटेशियम सोडियम L(+)-टार्ट्रेट), 2-(1-Naphthylamino) इथाइलमाइन डाइहाइड्रोक्लोराइड, नाइट्रस एसिडसोडियम (NaNO2), और पी-एमिनोबेंजेनसल्फोनामाइड (सिस्को रिसर्च लेबोरेटरीज, भारत) ); ब्यूटाइल अल्कोहल (फिशर साइंटिफिक, भारत) का उपयोग किया गया।2.3. क्विनोलिनिक एसिड का इंट्रासेरेब्रोवेंट्रिकुलर इंजेक्शन।

जानवरों को इंजेक्शन के लिए बाँझ पानी का उपयोग करके इंट्रापेरिटोनियली (आईपी) केटामाइन (90 मिलीग्राम/किग्रा) और जाइलाज़िन (10 मिलीग्राम/किग्रा) कॉकटेल देकर एनेस्थीसिया दिया गया। .शव को गर्म हीटिंग कुशन पर प्रवण स्थिति में लिटाया गया था, और सिर को एक स्टीरियोटैक्सिक सर्जरी उपकरण के माउंट में स्थित किया गया था। .ई खोपड़ी को मध्य धनु बिंदु पर काटा गया था, और त्वचा को अलग करके खोपड़ी को उजागर किया गया था।

दो पार्श्व वेंट्रिकल में से किसी एक को मनमाने ढंग से चुना गया था, और खोपड़ी में, पार्श्विका हड्डी ऊब गई थी (स्टीरियोटैक्सिक निर्देशांक {{0%)। शीर्षस्थान से 8 मिमी ऐन्टेरोपोस्टीरियर, मध्य धनु सिवनी से ±1.5 मिमी मध्यपार्श्व, और पार्श्विका हड्डी की सतह से ±3.6 मिमी डोर्सोवेंट्रल ) एक गड़गड़ाहट छेद बनाने के लिए [21]।

पहले दिन, क्विनोलिनिकाएसिड (क्यूए) घोल को पीबीएस (Na+-K+ [PO4]2- बफर्ड सेलाइन, pH 7.4) में ताज़ा (240 एनएमओएल) बनाया गया और प्रवाह दर पर हैमिल्टन माइक्रोसिरिंज का उपयोग करके धीरे-धीरे इंजेक्ट किया गया। इंजेक्शन की मात्रा 5 μl आईसीवी-वाहन [22] के साथ 5 से 6 मिनट की अवधि में चूहों के बाएं या दाएं सेरेब्रल वेंट्रिकल में 1 μl/मिनट।

संपूर्ण दवा के टीकाकरण के बाद, मस्तिष्कमेरु द्रव में दवा के प्रसार को सक्षम करने और इसके पुनरुत्थान को विफल करने के लिए माइक्रोनीडल को 4 से 5 मिनट तक नहीं हटाया गया। पीबीएस-वाहन की समतुल्य मात्रा (10 μl) को शमराट्स में आईसीवी प्रशासित किया गया था जो कि समान रूप से संचालित थे, हालांकि, क्यूए इंजेक्ट नहीं किया गया था।

दवा के इंजेक्शन के बाद, ल्यूटिंग एजेंट (जिंक फॉस्फेट, PYRAX®) का उपयोग करके छिद्रों को बहाल किया गया, और त्वचा की सिलाई का काम पूरा किया गया। संदूषण (जीवाणु वृद्धि) को रोकने के लिए, नियोस्पोरिन® को पुनः लागू किया गया था।

टोवेडे पोस्टऑपरेटिव सेप्सिस, ओरिज़ोलिन (ज़ाइडस कैडिला), 3 0 मिलीग्राम/किग्रा (आईपी) की खुराक दी गई। शल्य चिकित्सा के बाद हाइपोथर्मिया से बचने के लिए प्रत्येक चूहे को गर्म वातावरण (37 ± 0.5 डिग्री) प्रदान किया गया। प्रत्येक चूहे को सात दिनों तक सर्जरी के बाद अर्ध-ठोस भोजन (पिंजरे के अंदर) और मुफ्त पानी की अनुमति दी गई और एक अलग पिंजरे (30 × 23 × 14 सेमी 3) में रखा गया।

2.4. प्रायोगिक प्रोटोकॉल. डीएसएम को इंट्रापेरिटोनियल (आईपी) मार्ग के माध्यम से सामान्य खारा (खुराक-मात्रा 5 मिलीलीटर/किग्रा) में 0.5% डाइमिथाइलसल्फॉक्सीडेव्हिकल का उपयोग करके चूहों में 5 {{4} और 100 मिलीग्राम/किग्रा प्रति शरीर वजन (बीडब्ल्यू) की खुराक पर इंजेक्ट किया गया था। [17]।

जानवरों को एकल-ब्लाइंडमोड (n - 5) में 5 समूहों में यादृच्छिक रूप से आवंटित किया गया था: (i) शम (S), (ii) QA, (iii) QA + DSM50, (iv) QA + DSM100, और (v) QA + डीएनपी। चूहों को पहले दिन क्यूए (क्यूए-आईसीवी) के इंट्रासेरेब्रोवेंट्रिकुलर प्रशासन या दिखावटी सर्जरी के अधीन किया गया।

डीएसएम को पहले दिन से क्यूए-आईसीवी के बाद लगातार 21 दिनों तक प्रतिदिन 120 मिनट तक प्रशासित किया गया। डोनेपेज़िल (डीएनपी) को इस अध्ययन में एक मानक दवा के रूप में नियोजित किया गया था और क्यूएआईसीवी-इंजेक्शन चूहों में लगातार 21 दिनों तक इंजेक्ट किया गया (खुराक 3 मिलीग्राम/किग्रा, आईपी)।

थेशम और क्यूए नियंत्रण समूहों में जानवरों को दिन 1 से 21 तक वाहन (बाँझ {{0%). सामान्य खारा में 5% डाइमिथाइलसल्फोक्साइड खुराक-मात्रा 5 मिलीलीटर/किग्रा में) दिया गया था। पूरा अध्ययन चित्रित योजना के अनुसार किया गया था चित्र 1.2.5. लोकोमोटर गतिविधि.

सभी चूहे समूहों में, औसत लोकोमोटर गतिविधि को 5 मिनट के लिए एक्टोफोटोमीटर डिवाइस का उपयोग करके प्रलेखित किया गया था। अनुकूलन के 3 मिनट के लिए एक अलग जानवर को एक्टोफोटोमीटर में रखा गया था। .ई चूहों को फिर 5 मिनट दिए गए, और परिणाम प्रति 5 मिनट की गिनती के रूप में बताए गए [11].2.6। रोटारोड परीक्षण.

In rodents, the rotarod test typically evaluates the equilibrium and muscle synchronization facets of sensorimotor functions. .e rats were presented to acquisition trials until their ability to run reached >प्रति मिनट नौ घूर्णन (आरपीएम) पर घूमने वाली छड़ पर 60 सेकंड।

अधिग्रहण परीक्षणों के बाद, एक अलग चूहे को बेलनाकार शाफ्ट पर तैनात किया गया था, और क्रांति वेग को 6 आरपीएम (प्रारंभिक गति) से 30 आरपीएम (समापन गति) तक 10 सेकंड के निरंतर अंतराल पर बढ़ाया गया था, जो 50 सेकंड से अधिक समय तक फैला हुआ था। .ई घूमने वाले बेलनाकार शाफ्ट से औसत गिरावट विलंबता (सेकंड में) परिणामों में बताई गई थी।2.7।

पदचिह्न विश्लेषण. चूहों में पदचिह्न विश्लेषण करने के पीछे का सिद्धांत चाल असामान्यताओं का आकलन करना है।

पैरों के निशान के लिए, चूहे के पैरों को चार अलग-अलग रंग के गैर विषैले खाद्य रंगों में डुबोया गया और उन्हें झुके हुए रास्ते (70 सेमी × 10 सेमी × 8 सेमी) पर चलने की अनुमति दी गई। रनवे बेस सफेद रंग की सेलूलोज़ शीट से घिरा हुआ था। .ई चूहों को स्पष्ट पदचिह्न प्राप्त करने के लिए रनवे के अंत में एक मंद चढ़ाई वाले हिस्से में प्रेरित किया गया। परीक्षण के बाद गुनगुने पानी का उपयोग करके प्रत्येक जानवर से डाई को धीरे से हटा दिया गया। .ई पैरों के निशान स्कैन किए गए, और एक मानक रूलर का उपयोग करके "कदम की लंबाई" मापी गई। समान चूहे के पंजे के अनुक्रमिक स्थानों के बीच की दूरी की गणना करके स्ट्राइड की लंबाई निर्धारित की गई थी [11]।

2.8. नवीन वस्तु पहचान कार्य (एनओआरटी)। कुमार और बंसल द्वारा दिए गए मानक प्रोटोकॉल का पालन किया गया [23]।

ओआरटी एक गैर-लाभकारी और गैर-शत्रुतापूर्ण एक्सटेरोसेप्टिव आर्कटाइप है जिसका उपयोग कृंतकों के आवेगपूर्ण जांच आचरण के माध्यम से उपयोग की जाने वाली कार्यशील स्मृति का आकलन करने के लिए किया जाता है। .ई जांच एक छत-खुले प्लाईवुड के घनाकार बर्तन (80 सेमी × 42 सेमी × 62 सेमी) में की जाती है, जिसे एक शांत क्षेत्र में रखा जाता है, और बर्तन में लगातार चमक बनाए रखने के लिए 60W एलईडी द्वारा रोशन किया जाता है।

सिलेंडर (सफ़ेद)-, पिरामिड (लाल)-, और घन (काला)-आकार (12 सेमी लंबा) लकड़ी के सामान (समान त्रिक में) ठोस थे और कृंतकों द्वारा उन्हें स्थिर करने के लिए पर्याप्त वजन के थे। एनओआरटी को 16वें दिन 3 चरणों (एस) में किया गया: अनुकूलन (एस1), अधिग्रहण (एस2), और उपन्यास वस्तु पहचान परीक्षा (प्रतिधारण) चरण (एस3)।

S1 के दौरान, चूहों द्वारा जहाज के खाली फर्श बेस (5 मिनट) की खोज के लिए लगातार तीन दिन पहले परीक्षण जारी किए गए थे। S1 के पूरा होने पर, व्यक्तिगत जानवर को सीखने के चरण (S2) में ठोस वस्तुओं के किसी एक सेट की आदत हो गई थी।

जुड़वां जैसी चीज़ों को जहाज के 2 मनमाने ढंग से चुने गए विपरीत कोणों (साइड प्राचीर से 9 सेमी से 11 सेमी का अंतर) में रखा गया था। अलग से, एक कृंतक को दो ठोस वस्तुओं के विपरीत जहाज के केंद्र में तैनात किया गया था और 5 मिनट के लिए दो समान वस्तुओं की खोज करने की अनुमति दी गई थी। 2-3 सेमी से कम या उसके बराबर दूरी पर वस्तु के पास थूथन का मार्गदर्शन करना या थूथन के साथ वस्तु के साथ शारीरिक संपर्क को जांच आचरण के रूप में माना जाता था।

S2 के बाद, कृंतक को 60 मिनट के इंटरट्रायल अवकाश (ITR) द्वारा नियंत्रित एक घरेलू पिंजरे में रखा गया था।

S2 में पेश की गई किसी भी एकल ठोस वस्तु को एक अलग ठोस वस्तु से बदल दिया गया था, और कृंतकों को फिर से जुड़वां वस्तुओं में प्रस्तुत किया गया था, अर्थात, परिचित वस्तु की एक प्रति और अलग वस्तु.. वस्तुओं के संपूर्ण समामेलन और स्थिति को ऑफसेट किया गया था कुछ सेटिंग्स या वस्तुओं के प्रति रुचि से उत्पन्न होने वाले संभावित पूर्वाग्रह को कम करना। गंध के संकेतों को रोकने के लिए प्रत्येक जांच के बाद बर्तन और ठोस वस्तुओं को सावधानीपूर्वक पोंछा गया (एथिल अल्कोहल 15% और सूखा कपड़ा)। S2 और S3 में प्रत्येक आइटम की खोज में खर्च की गई अवधि को स्टॉपवॉच का उपयोग करके प्रलेखित किया गया था। .e अवधि S2 (I1 � Ii1 + Ii2) में दो मेल खाने वाली वस्तुओं की जांच करने में खर्च की गई और यह अवधि S3 (I2 � Ii 3 + Ib) में दो भिन्न वस्तुओं, यानी, परिचित और अलग, की जांच करने में खर्च की गई। दर्ज किया गया था. .ई अलग-अलग आइटम की जांच में खर्च की गई अवधि में भिन्नता और परिचित आइटम (आईबी-आईआई 3 - डीआई) की जांच की अवधि स्मरणीय स्मृति की अवधारण का खुलासा करती है।

परिचित और नए आइटम (संशोधित डीआई) दोनों की जांच की डीआई (भेदभाव सूचकांक)/एस3 अवधि, पूरी जांच में भिन्नताओं द्वारा पक्षपात में सुधार करती है और परिचित लोगों के विपरीत विभिन्न वस्तुओं के लिए प्रवृत्ति को दर्शाती है {डीआई - (आईबी-आईआई3) )/(Ii3 + Ib)}. S3 में परिचित/नवीन वस्तुओं को अलग करने के लिए कृंतकों के कौशल की मात्रा निर्धारित करके स्मरणीय स्मृति का मूल्यांकन किया गया था और इसे DI (S3 में समग्र जांच अवधि के लिए संशोधित) के रूप में बताया गया था [24]।

2.9. मॉरिसवाटर भूलभुलैया (MWM)। .ई मानक प्रोटोकॉल का पालन किया गया, जैसा कि कुमार और बंसल द्वारा दिया गया था [25]। एमडब्ल्यूएम तैराकी परीक्षणों द्वारा स्थानिक स्मृति का मूल्यांकन करता है, जिसमें कृंतक एक छिपे हुए पोडियम तक भागने का मार्ग ढूंढता है।

एक काले रंग के गोलाकार टैंक (2 मीटर व्यास, 0.6 मीटर ऊंचाई) में पानी (25 ± 1 डिग्री) पानी (25 ± 1 डिग्री) से लेकर 3 मीटर की गहराई तक भरा हुआ था। जलीय जलाशय को दो नायलॉन फाइबर का उपयोग करके दक्षिणावर्त 4 समान क्षेत्रों (आर 1, आर 2, आर 3 और आर 4) में विभाजित किया गया था, जो टैंक के ऊपरी परिधि पर लंबवत रूप से सुरक्षित थे।

जलाशय क्षेत्र R4 में एक मंच (10.5 सेमी × 10.5 सेमी) पानी के नीचे (पानी के नीचे 1 सेमी) स्थित था। अधिग्रहण अवधि के दौरान मंच का स्थान बरकरार रहा।

प्रत्येक चूहे को प्रतिदिन चार सिलसिलेवार अधिग्रहण राउंड (5 मिनट आईटीआर) दिए गए। .ई कृंतक को टैंक की दीवार के सामने वाले जलीय भंडार में धीरे से छोड़ा गया, प्रत्येक एकल परीक्षण के साथ साइट R1-R4, R{3}R1, R{5}}R2, और R{{ से बदलती रही। क्रमशः 1 से 4 दिनों में 7}}आर3, और इसे पानी के नीचे पोडियम का पता लगाने के लिए 120 सेकंड की अनुमति दी गई थी। .ई कृंतक 20 सेकंड तक पोडियम पर आराम करते रहे।

120 सेकंड के भीतर प्लेटफ़ॉर्म का पता लगाने में विफलता ने प्लेटफ़ॉर्म पर चूहों की मैन्युअल प्लेसमेंट का संकेत दिया, और फिर उन्हें प्लेटफ़ॉर्म पर 20 सेकंड की अनुमति दी गई। एस्केप लेटेंसी टाइम (ईएलटी) जलीय जलाशय में छिपी हुई मंच की खोज की अवधि है।

स्थानिक शिक्षा को पहले दिन बनाम चौथे दिन ईएलटी द्वारा चिह्नित किया गया था। जांच परीक्षण (5वें दिन) में, कृंतकों ने 120 सेकंड के लिए जलाशय की जांच की लेकिन पोडियम से वंचित रह गए। संपूर्ण जलाशय (4 क्षेत्रों) में व्यय की गई औसत अवधि दर्ज की गई। .e छुपा पोडियम की जांच के लिए R4 (TSTQ: लक्ष्य चतुर्थांश में बिताया गया समय) में व्यतीत की गई औसत अवधि को संदर्भ स्मृति के सूचकांक के रूप में समझा गया था। .प्रयोगशाला में वस्तुओं के सापेक्ष टैंक की तुलनात्मक सेटिंग जो दृश्य संकेतों के रूप में कार्य करती है और जांचकर्ता की स्थिति अबाधित रहती है [26]।

2.10. जैव रासायनिक मापदंडों का अनुमान. व्यवहार संबंधी परीक्षाओं को पूरा करने के बाद, चूहों के पूरे मस्तिष्क को इकट्ठा किया गया और चूर्णित बर्फ के टुकड़ों पर रखा गया, इसके बाद अवशेषों और रक्त को हटाने के लिए फ्रीजिंग स्टरलाइज्ड सेलाइन (आइसोटोनिक 308 mOsmol/l NaCl) से स्नान कराया गया।

संपूर्ण मस्तिष्क का समरूपीकरण 215 एमएम डी-मैनिटॉल, 20 एमएम 2-[4-(2-हाइड्रॉक्सीएथाइल) के साथ एक फ्रीजिंग सेपरेशन बफर (पीएच 7.4) में तुरंत पूरा किया गया। )पिपेरेज़िन-1-yl]एथेनसल्फोनिक एसिड, 1 एमएम 1,2-बीआईएस[2-[बीआईएस(कार्बोक्सिमिथाइल)एमिनो]एथोक्सी]एथेन, 75 एमएम सैकरोज़, और 0.1% बीएसए। .ई होमोजेनेट को 5 मिनट के लिए 13000 × g बल का उपयोग करके 4 डिग्री पर सेंट्रीफ्यूज किया गया था। .ई गोली को अस्वीकार कर दिया गया था, और सतह पर तैरनेवाला को दो भागों में अलग कर दिया गया था और 5 मिनट के लिए 13000 × जी बल पर हाल ही में रिफ्यूज (4 डिग्री) किया गया था। .ई कच्चे माइटोकॉन्ड्रियल गोली को अलग किया गया और फिर से 1, 2- बीआईएस [{{24 }} [बीआईएस (कार्बोक्सिमिथाइल) एमिनो] एथॉक्सी] ईथेन के साथ 12,500 × जी पर 11 मिनट (4 डिग्री) के साथ एक पृथक्करण बफर में सेंट्रीफ्यूज किया गया। इस प्रकार प्राप्त असंदूषित माइटोकॉन्ड्रिया से प्राप्त अर्धठोस जमाव को पृथक्करण बफर (पीएच 7.4) में पुनः निलंबित कर दिया गया, जिसमें 75 एमएम सैकरोज़,20 एमएम 2-[4-(2-हाइड्रॉक्सीएथाइल)पिपेरज़िन-1- शामिल था। yl]एथेनसल्फोनिकएसिड, और 215 एमएम डी-मैनिटोल [27]।

बाद में, मानक तरीकों का उपयोग करके जैव रासायनिक मार्करों को निर्धारित करने के लिए पूरे मस्तिष्क होमोजेनेट के माइटोकॉन्ड्रियल अंश का उपयोग किया गया था।2.11। माइटोकॉन्ड्रियल कॉम्प्लेक्स का अनुमान।

2.11.1. एनएडीएच: यूबिकिनोन ऑक्सीडोरडक्टेज़ गतिविधि। किंग और हॉवर्ड की तकनीक का पालन करके जटिल I (एनएडीएच डिहाइड्रोजनेज) गतिविधि की मात्रा निर्धारित की गई (एनएमओएल एनएडीएच ऑक्सीकृत/मिनट/मिलीग्राम प्रोटीन)। एनएडीएच से एनएडी+ की ऑक्सीडेटिव पीढ़ी साइटोक्रोम सी कमी के साथ होती है। .ई परख मिश्रण में साइटोक्रोम सी (1 {{10%).5 एमएम), 6 एमएम -निकोटिनमाइड एडेनिनेडिन्युक्लिओटाइड (डीपीएनएच) शामिल है, जिसे 2 एमएम डाइग्लिसिन बफर और डाइग्लिसिन बफर (0.2 एम, पीएच 8.5) का उपयोग करके भंग किया गया है।

प्रतिक्रिया को ट्रिगर करने के लिए एक घुलनशील माइटोकॉन्ड्रियल अंश को परख मिश्रण में शामिल किया गया था। λmax - 550 एनएम पर ऑप्टिकल घनत्व (ओडी) में भिन्नता का 120 सेकंड के लिए पालन किया गया।

2.11.2. सक्सिनेट: यूबिकिनोन ऑक्सीडोरडक्टेस गतिविधि, किंग की तकनीक का पालन करके सक्सिनेट डिहाइड्रोजनेज (कॉम्प्लेक्स II) गतिविधि की दर निर्धारित की गई (एनएमओएल सक्सिनेट ऑक्सीडाइज़्ड/मिनट/मिलीग्राम प्रोटीन)।

स्यूसिनिक एसिडऑक्सीकरण एक मॉक इलेक्ट्रॉन रिसीवर, पोटेशियमसायनोफेरेट (K3Fe(CN)6) द्वारा ट्रिगर होता है। .ई परख मिश्रण में स्यूसिनिक एसिड (0.63 एम), 1% बीएसए, के3एफई(सीएन)6 ({{7%).036 एम), और ना{9}}के+ शामिल है। [PO4]2- बफर (0.23 एम, पीएच 7.6)। प्रतिक्रिया को ट्रिगर करने के लिए एक घुलनशील माइटोकॉन्ड्रियल अंश को परख मिश्रण में शामिल किया गया था। अधिकतम 420 एनएम पर ओडी में परिवर्तन 120 सेकंड के लिए किया गया।2.12। ऑक्सीडेटिव तनाव बायोमार्कर2.12.1 का निर्धारण। आयोबार्बिट्यूरिक एसिड रिएक्टिव पदार्थ (टीबीएआरएस)।

टीबीएआरएस (एनएमओएल प्रति मिलीग्राम प्रोटीन) [30] का मूल्यांकन करने के लिए, विश्लेषण संयोजन (अंतिम मात्रा ∼4 मिली) में शामिल है 0.10 मिली समरूप मस्तिष्क, 1.51 मिली 4,{{ 7}}डायहाइड्रोक्सी-2-मर्कैप्टोपाइरीमिडीन (0.8%), 200 μl एसएलएस (8.18%), 1.49 मिली ग्लेशियलएसिटिक एसिड (21%, पीएच 3.51), और 0.71 मिली विआयनीकृत पानी को 96 डिग्री पर जल-स्नान हीटिंग के अधीन किया गया था। 60 मिनट.

ब्यूटाइल अल्कोहल/एज़ाबेंजीन (5.1 मिली) का 15:1 अनुपात एक विश्लेषण मिश्रण में पूरक किया गया था जिसे 4, {5}} × जी पावर (10 मिनट) पर सेंट्रीफ्यूज किया गया था, और सतह पर तैरनेवाला एकांत में था।

विथा ट्विन-बीम UV1700 स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (शिमदज़ु, जापान), क्रोमोफोर मैलोन्डियलडिहाइड -4, {{3}डाइहाइड्रॉक्सी -2-मर्कैप्टोपाइरीमिडीन ओडी का मूल्यांकन तरंग दैर्ध्य (λmax - 532 एनएम), और ε - 1.56 × पर किया गया था 105/एम/सेमी (दाढ़ विलोपन गुणांक) को 4,{10}}डायहाइड्रोक्सी-2-मर्कैप्टोपाइरीमिडीन एडक्ट्स की गणना करने के लिए लागू किया गया था।

2.12.2. ग्लूटाथियोन (एलसी-ग्लूटामाइल-एल-सिस्टीनिल-ग्लाइसीन) के स्तर में कमी। एल-ग्लूटाथियोन (जीएसएच) सामग्री का मूल्यांकन करने के लिए एलमैन की [31] प्रक्रिया लागू की गई थी। .ई परीक्षण मिश्रण जिसमें होमोजेनेट (1.1 मिली) और 1 मिली 4% 2-हाइड्रॉक्सी-5-सल्फोबेंजोइक एसिड (5-एसएसए) शामिल था, को 2,500 × जी पावर पर 11 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूगेटेड (4 डिग्री) किया गया था। .

बाद में, 2.8 मिली Na+-K+[PO4]2- बफर (51.2 mM, pH 7.77) और {{10}.21 मिली 3-कार्बोक्सी{{13 नाइट्रोफेनिल डाइसल्फ़ाइड ({{19%).12 एमएम, पीएच 7.89) को ऊपर अलग किए गए सतह पर तैरनेवाला (0.12 मिली) के साथ मिश्रित किया गया था।

ट्रिपेप्टाइड (µmolGSH प्रति मिलीग्राम प्रोटीन) को ट्विन-बीमUV1700 स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (λmax - 412 एनएम) के साथ निर्धारित किया गया था। लागू करनाε - 1.36 ×104/एम/सेमी.2.12.3।

ग्लूटाथियोन पेरोक्सीडेज गतिविधि। मोहनदास एट अल की तकनीक को लागू करके ग्लूटाथियोन पेरोक्सीडेज (जीपीएक्स) (ईसी 1.11.1.9) की गतिविधि का मूल्यांकन किया गया था। [32]. .eanalyze मिश्रण में 1 {{23} 0 μl का 1 0% होमोजेनेट, 100 μl सोडियम एजाइड (1.11 मिमी), 100 μl EDTA (1.13 मिमी), 40 μl ग्लूटाथियोन-डाइसल्फाइड रिडक्टेस शामिल है। (जीएसआर, 1 आईयू/एमएल) (ईसी1.8.1.7), 10 μl एच2ओ2 (0.28 एमएम), 40 μएल एलसी-ग्लूटामाइल-एल-सिस्टीनिल-ग्लाइसीन (1.2 एमएम), 100 μएल कोएंजाइम II कम टेट्रासोडियम नमक (0.22 एमएम) ), और 2000 μl की पूरी मात्रा में 0.12 M 1.49 ml Na+-K+ [PO4]2-बफर (pH 7.4)। .e λmax - 340 एनएम पर कोएंजाइम II-कम टेट्रासोडियम की हानि 25 डिग्री के तापमान पर दर्ज की गई थी। जीपीएक्स दर की गणना 6.22 ×103/एम/सेमी के ε का उपयोग करके एनएमओएल एनएडीपीएच ऑक्सीकृत/मिनट/मिलीग्राम प्रोटीन के रूप में की गई थी।

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