Aspergillus Oryzae और Aspergillus Cristatus के साथ किण्वित चावल कोजी की मेटाबोलाइट प्रोफाइलिंग और एंटी-एजिंग गतिविधि: एक तुलनात्मक अध्ययन Ⅱ

3. चर्चा

चावल के विभिन्न भागों, जैसे भूसी, चोकर, भ्रूण और एंडोस्पर्म, सतह से आंतरिक तक, अलग-अलग रासायनिक संरचनाएँ हैं (26)। विशेष रूप से, चावल की भूसी में विभिन्न होते हैंफेनोलिक एसिडऔरflavonoids, जो प्रदर्शित करने के लिए जाने जाते हैंप्रतिउपचारक गतिविधि।इसके अलावा, चावल की कोशिका भित्ति एक अरबिनॉक्सिलन संरचना से बनी होती है जिसमें ज़ाइलोज़, अरबीनोज़, फेरुलिक एसिड और फेरुलिक एसिड (27) शामिल होते हैं। चावल की कोशिका की दीवार में घुसना आम तौर पर कठिन होता है, और चावल की कोजी आसानी से प्रवेश करने का लाभ प्रदान करती है। इनोकुलम रोगाणुओं से प्रोटीज और ग्लूकोसिडेस जैसे विभिन्न एंजाइमों द्वारा चावल की कोशिका भित्ति (24. इसलिए चावल कोई दिखाता हैटायरोसिनेज निरोधात्मक गतिविधि का उच्च स्तरऔरएंटीऑक्सीडेंट गतिविधियोंइसके कच्चे माल की तुलना में क्योंकि इसमें मूल्यवान समृद्ध यौगिक होते हैं (28.

सिस्टैंच एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि के बारे में अधिक जानकारी प्राप्त करने के लिए यहां क्लिक करें

हमने दो अलग-अलग फिलामेंटस कवक के साथ किण्वित चावल कोजी के लिए मेटाबोलॉमिक्स दृष्टिकोण का पालन किया, जिसने एंजाइम गतिविधि, मेटाबोलाइट्स के उत्पादन और बायोएक्टिविटीज में महत्वपूर्ण अंतर को स्पष्ट किया। विभिन्न एंजाइमों जैसे a-amylase, &glucosidase, और -glucosidase की गतिविधियां टीकाकृत A. cristatus और A. oryzae द्वारा उत्पादित किण्वन समय के साथ बढ़ जाती हैं (चित्र 3)। क्योंकि ये एंजाइम अरेबिनॉक्सिलन संरचना को तोड़ते हैं, विविध फेनोलिक एसिड दोनों नमूनों में चावल की कोशिका भित्ति से अलग किए गए थे, जैसा कि चित्र 2 में दिखाया गया है। ये फेनोलिक एसिड संभावित एंटीऑक्सिडेंट हैं जो ऑक्सीडेटिव तनाव 291 को कम करते हैं। इस प्रकार, एंटीऑक्सिडेंट गतिविधियों और टीपीसी परख के साथ वृद्धि हुई किण्वन समय में वृद्धि के रूप में फेनोलिक एसिड सामग्री को बढ़ाया गया था (आंकड़े 2 और 4) विशेष रूप से, आरएसी में आरएओ की तुलना में फ्लेवोनोइड्स की उच्च सामग्री होती है क्योंकि इसमें उच्च स्तर का -ग्लूकोसिडेस होता है, जो दौरान चावल की कोशिका की दीवार से -ग्लाइकोसिडिक लिंकेज को हाइड्रोलाइज करता है। चावल की कोजी में ए. क्रिस्टेटस की वृद्धि। राइस सेल वॉल-ग्लूकोसिडेज़ से अलग होने के अलावा फ्लेवोनोइड ग्लूकोसाइड फॉर्म को एग्लीकॉन फॉर्म में हाइड्रोलाइज़ करता है जिसमें उच्च एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि होती है]। बढ़ा हुआ फ्लेवोनॉइड ग्लूकोसाइड फॉर्म और एग्लीकॉन फॉर्म ABTS, DPPH FRAP, और TFC जैसी एंटीऑक्सीडेंट गतिविधियों को बढ़ाता है, जो RAC की एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि को प्रभावित कर सकता है, जैसा कि सहसंबंध नेटवर्क मैप (चित्र 4) में दिखाया गया है। यह घटना पिछले अध्ययन में भी देखी गई थी, जिसमें ग्लूकोसाइड आइसोफ्लेवोन्स के एग्लीकोन्स में बायोट्रांसफॉर्मेशन और एंटीऑक्सिडेंट गतिविधि में बढ़ते पैटर्न को सोयाबीन के साथ किण्वित समय के अनुसार दिखाया गया था। क्रिस्टेटस [311.

RAO में a-glucosidase गतिविधि का उच्च स्तर होता है जो a-ग्लाइकोसिडिक लिंकेज को साफ करता है और ग्लूकोज की उच्च सामग्री को स्वतः उत्पन्न करता है। इस तथ्य के अलावा कि ग्लूकोज कवक के लिए मुख्य कार्बन स्रोत है, आरएसी में, ग्लूकोज स्तर किण्वन के बाद कम हो गया क्योंकि इसका उपयोग द्वितीयक मेटाबोलाइट्स जैसे ऑरोग्लौसीन डेरिवेटिव के संश्लेषण के लिए किया गया था, जो ए। क्रिस्टेटस द्वारा उत्पादित विशिष्ट वर्णक यौगिक हैं, न कि ए। ओरज़्ने। पिछले अध्ययनों ने बताया है कि ऑरोग्लौसीन डेरिवेटिव्स में डीपीपीएच में गतिविधि होती है और इसे संभावित एंटीऑक्सीडेंट यौगिकों [32] के रूप में माना जाता है। इसके अलावा, ढह गई चावल की कोशिका भित्ति एंजाइमों को चावल के अंतरतम भागों में प्रवेश करने की अनुमति दे सकती है [24]। इसलिए, चावल की बाहरी दीवार से बिना किसी रुकावट के अधिक से अधिक मेटाबोलाइट्स को स्वतंत्र रूप से निकाला जा सकता है।

आरएओ और आरएसी (चित्र 4) दोनों की बायोएक्टिविटीज और मेटाबोलाइट्स के बीच सहसंबंध नेटवर्क मानचित्र में, सामान्य प्रवृत्तियाँ थीं कि फ्लेवोनोइड्स, कार्बनिक अम्ल, चीनी डेरिवेटिव और फैटी एसिड को बायोएक्टिविटीज के संभावित योगदानकर्ताओं के रूप में सुझाया गया था। फ्लेवोनोइड्स और फेनोलिक एसिड प्रसिद्ध एंटीऑक्सिडेंट हैं और विभिन्न कार्यों के संबंध में इसके कई फायदे हैं। ऑक्सीडेटिव तनाव को कम करने की उनकी क्षमता के कारण, उनका उपयोग भोजन की गुणवत्ता बढ़ाने और त्वचा की उम्र बढ़ने में सुधार करने के लिए किया जाता है [33]। इसके अतिरिक्त, एक पिछले अध्ययन ने बताया है कि फैटी एसिड और एंटीऑक्सिडेंट त्वचा की उम्र बढ़ने की रोकथाम और प्रबंधन के लिए एक सहक्रियात्मक प्रभाव पैदा कर सकते हैं [34]।

दूसरी ओर, आरएसी [35] में मेटाबोलाइट्स के लिए ऑरोग्लौसीन और लाइसोफॉस्फोलिपिड डेरिवेटिव अतिरिक्त योगदानकर्ता के रूप में काम करते हैं। जैसा कि ऊपर बताया गया है, ऑरोग्लौसीन डेरिवेटिव में एंटीऑक्सीडेंट गतिविधियां होती हैं, और इसलिए, हम मानते हैं कि उनमें त्वचा के तनाव को दूर करने के लिए फ्री रेडिकल चेन रिएक्शन को समाप्त करने की क्षमता है। याहगी एट अल। दिखाया गया है कि लाइसोफॉस्फोलिपिड्स त्वचा में त्वचा की बाधा और जलयोजन कार्यों से जुड़े कारकों की अभिव्यक्ति को बढ़ाकर त्वचा के मॉइस्चराइजेशन को बनाए रख सकते हैं [36]। मॉइस्चराइजेशन स्वस्थ त्वचा के लिए एक महत्वपूर्ण कारक है क्योंकि सूखापन त्वचा की दुर्बलता को प्रेरित करता है जो खुरदरापन, पपड़ीदार त्वचा और महीन झुर्रियों की विशेषता है [37,38]। हम अनुमान लगाते हैं कि RAO की तुलना में RAC में अंतिम किण्वन चरण में auroglaucin और lysophospholipids का त्वचा पर बेहतर एंटी-एजिंग प्रभाव होता है। झाओ एट अल। दिखाया गया है कि फ़ुज़ुआन ईंट चाय, जिसमें प्रमुख कवक ए। क्रिस्टेटस होता है, आरओएस की शमन और एनआरएफ 2 सिग्नलिंग कैस्केड [21] को ट्रिगर करके फोटोएजिंग को रोक सकता है। इसलिए, हम मानते हैं कि प्रचुर मात्रा में नमी के लिए बेहतर त्वचा की स्थिति स्थापित करने जैसे अप्रत्यक्ष मार्गों के माध्यम से कार्य करके RAC, RAO की तुलना में उच्च एंटी-एजिंग क्षमता प्रदान करता है।मुक्त कण तनाव से राहत.

कुल मिलाकर, हम मानते हैं कि उन्नत फैटी एसिड, फेनोलिक एसिड, फ्लेवोनोइड्स, लाइसोफॉस्फोलिपिड्स, और हाइड्रोक्विनोन एंटीऑक्सिडेंट गतिविधियों को बढ़ा सकते हैं और इलास्टिन और कोलेजन की आरएनए अभिव्यक्ति में सुधार कर सकते हैं, साथ ही एमएमपी -1 की आरएनए अभिव्यक्ति को दबा सकते हैं। किण्वन। इन यौगिकों ने इनोकुलम फंगस के अनुसार मेटाबोलाइट्स में परिवर्तन के विभिन्न पैटर्न प्रदर्शित किए और विभिन्न जैव गतिविधियों को प्रभावित किया। इस अध्ययन ने मेटाबोलॉमिक्स दृष्टिकोण का उपयोग करके एक ही एस्परगिलस जीनस की विभिन्न प्रजातियों के बीच समग्र चयापचय में अंतर को स्पष्ट किया। इसके अलावा, विभिन्न एंजाइम गतिविधियों ने विभिन्न चयापचयों के उत्पादन को प्रभावित किया और आरएओ और आरएसी में विभिन्न जैव गतिविधियों को प्रेरित किया

4. सामग्री और तरीके

4.1। रसायन और अभिकर्मक

4.2। नमूना तैयार करना और निकालना

कोजी मोल्ड्स A. oryzae KCCM 11372 (कोरियाई संस्कृति केंद्र सूक्ष्मजीव, KCCM; कोरिया गणराज्य) और A. cristatus (Cosmax BTI R&I केंद्र से Aspergillus cristatus Cosmax-GF; Seongnam, कोरिया) का उपयोग चावल के किण्वन और अलग से टीका लगाने के लिए किया गया था . प्रत्येक सूक्ष्मजीव को माल्ट एक्सट्रैक्ट एगर (माल्ट एक्सट्रैक्ट, 2 0 जी; ग्लूकोज, 20 ग्राम; पेप्टोन, 1 ग्राम; अगर, 20 ग्राम / एल) पर 28 डिग्री सेल्सियस पर बनाए रखा गया था। कोजी उत्पादन के लिए किण्वन चरणों की बायोप्रोसेस को ली एट अल से अनुकूलित किया गया था। [11]। A. oryzae और A. cristatus के साथ किण्वित चावल कोजी के नमूनों को हर 2 दिन (0 दिन से 8 दिन तक) काटा गया और आगे के विश्लेषण तक गहरी ठंड की स्थिति (−80 ◦C) में संग्रहीत किया गया। सभी नमूने दो जैविक प्रतिकृति के साथ तैयार किए गए थे।

चावल कोजी नमूना निकालने की विधि ली एट अल से अनुकूलित की गई थी। मामूली संशोधनों के साथ [11]। संक्षेप में, चूर्णित फ्रीज-सूखे चावल कोजी के नमूने (5 ग्राम) को कमरे के तापमान पर 8 0 प्रतिशत जलीय इथेनॉल (40 एमएल) जोड़कर और कक्षीय शेकर (24 घंटे के लिए 200 आरपीएम) पर हिलाकर निकाला गया। 10 पर नमूनों के सेंट्रीफ्यूगेशन के बाद, 000 आरपीएम 5 मिनट के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर, सतह पर तैरने वालों को 0.22 माइक्रोन मिल्लेक्स जीपी फिल्टर (मर्क मिलिपोर, बिलरिका, एमए, यूएसए) के साथ फ़िल्टर किया गया था। फ़िल्टर किए गए नमूने के अर्क को गति वैक्यूम सांद्रता (हैनिल, सियोल, कोरिया) का उपयोग करके सुखाया गया और निष्कर्षण उपज का मूल्यांकन करने के लिए सूखे वजन को मापा गया।

4.3। जीसी-टीओएफ-एमएस विश्लेषण

निकाले गए चावल कोजी के नमूनों का व्युत्पन्नकरण चरण ली एट अल द्वारा वर्णित किया गया था। [11]। जीसी-टीओएफ-एमएस विश्लेषण पेगासस एचटी टीओएफ-एमएस (लेको कॉर्पोरेशन, सेंट जोसेफ, एमआई, यूएसए) के साथ एजिलेंट 789 0 जीसी सिस्टम (सांता क्लारा, सीए, यूएसए) पर आयोजित किया गया था। वाहक गैस (हीलियम) का उपयोग RTx -5MS (30 मीटर लंबाई × 0.25 मिमी आंतरिक व्यास, J&W वैज्ञानिक, Folsom, CA, USA) के साथ 1.5 एमएल/मिनट की निरंतर प्रवाह दर पर किया गया था। इंजेक्टर और आयन स्रोत का तापमान क्रमशः 250 और 230 ◦C पर बनाए रखा गया था। ओवन का तापमान 2 मिनट के लिए 75 ◦C पर बनाए रखा गया और फिर 15 ◦C/मिनट पर 300 ◦C तक बढ़ा दिया गया, जो 3 मिनट तक बना रहा। फिर, नमूने के 1 µL को m/z 50-800 के मास स्कैन रेंज के साथ इंजेक्ट किया गया। सभी नमूना विश्लेषण तीन विश्लेषणात्मक प्रतिकृति के साथ किए गए थे।

4.4। यूएचपीएलसी-एलटीक्यू-ऑर्बिट्रैप-एमएस विश्लेषण

क्वोन एट अल द्वारा वर्णित प्रोटोकॉल का उपयोग करके निकाले गए चावल कोजी के नमूनों का अल्ट्राहाई प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी लीनियर ट्रैप क्वाड्रुपोल ऑर्बिट्रप टेंडेम मास स्पेक्ट्रोमेट्री (यूएचपीएलसी-एलटीक्यू-ऑर्बिट्रैप-एमएस/एमएस) का उपयोग करके द्वितीयक मेटाबोलाइट्स के लिए विश्लेषण किया गया था। [39]। प्रत्येक नमूने को Phenomenex KINETEX® C18 कॉलम (100 मिमी 2.1 मिमी, 1.7 मीटर कण आकार; टोरेंस, सीए, यूएसए) का उपयोग करके अलग किया गया था। धनात्मक और ऋणात्मक दोनों आयन मोड में द्रव्यमान स्पेक्ट्रा और फोटोडायोड व्यूह श्रेणी को क्रमशः m/z 100−1000 और 200−600 एनएम के लिए ट्यून किया गया था।

4.5। डाटा प्रोसेसिंग और सांख्यिकीय विश्लेषण

कच्चे GC-TOF-MS और UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS/MS डेटा को क्रमशः Leco ChromaTOF और Thermo Xcalibur सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके netCDF (*.cdf) प्रारूप में रूपांतरित किया गया। संबंधित नेट सीडीएफ (*.cdf) फाइलें MetAlign (13 जुलाई 2021 को एक्सेस) के अधीन थीं, ली एट अल द्वारा वर्णित प्रोटोकॉल का उपयोग करके सॉफ़्टवेयर-मध्यस्थता डेटा प्रसंस्करण। [11,24]। द्रव्यमान स्पेक्ट्रोमेट्रिक डेटा, जो चर के रूप में उपयुक्त शिखर द्रव्यमान (m/z), प्रतिधारण समय (न्यूनतम), और शिखर क्षेत्र की जानकारी का प्रतिनिधित्व करता है, का मूल्यांकन SIMCA-P प्लस 12. 0 सॉफ़्टवेयर (Umetrics, Umea, स्वीडन) बहुभिन्नरूपी सांख्यिकीय विश्लेषण के लिए। प्रिंसिपल कंपोनेंट एनालिसिस (PCA), पार्शियल लीस्ट स्क्वेयर डिस्क्रिमिनेंट एनालिसिस (PLS-DA), और ऑर्थोगोनल पार्शियल लीस्ट स्क्वेयर डिस्क्रिमिनेंट एनालिसिस (OPLS-DA) से पहले, डेटा सेट को लॉग-ट्रांसफ़ॉर्म किया गया था, और चावल कोजी की तुलना करने के लिए यूनिट वेरियंस को बढ़ाया गया था विभिन्न कवक के साथ किण्वित। PASW सांख्यिकी 18 (SPSS, Inc., शिकागो, IL, USA) का उपयोग विचरण के एकतरफा विश्लेषण और सहसंबंध गुणांक मानों की गणना के लिए महत्वपूर्ण अंतर (<0.05 का p-मान) के परीक्षण के लिए किया गया था। सहसंबंध मानचित्र के लिए मेटाबोलाइट्स के बीच सहसंबंध नेटवर्क मानचित्र जिसका पियर्सन का सहसंबंध गुणांक मान 0.5 से अधिक है और बायोएक्टिविटीज साइटोस्केप सॉफ्टवेयर (https://www.cytoscape.org/ (13 जुलाई 2021 को एक्सेस किया गया)) के साथ बनाया गया था। अस्थायी मेटाबोलाइट्स की पहचान आणविक भार और आणविक संरचना, प्रतिधारण समय, बड़े पैमाने पर टुकड़े से मिलान करके की गई थी

पैटर्न, और साहित्य और हमारे इन-हाउस लाइब्रेरी से पराबैंगनी (यूवी) डेटा का अवशोषण

4.6। एंजाइमी गतिविधियों का निर्धारण

-amylase, -glucosidase, और -glucosidase के लिए एंजाइमैटिक गतिविधि परख पिछले अध्ययनों [25,40,41] के अनुसार की गई थी। प्रत्येक चावल कोजी नमूने की 10 ग्राम मात्रा को 90 एमएल पानी में 120 बजे कक्षीय शेकर पर हिलाकर और 1 घंटे के लिए 25 डिग्री सेल्सियस पर निकाला गया था। नमूनों को छानने के बाद, सतह पर तैरनेवाला एंजाइम गतिविधियों का मूल्यांकन करने के लिए इस्तेमाल किया गया था।

4.7। एंटीऑक्सिडेंट गतिविधियों और कुल फेनोलिक और फ्लेवोनोइड सामग्री का निर्धारण

चावल कोजी के नमूनों की एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि का निर्धारण करने के लिए, ABTS, DPPH, फेरिक रिड्यूसिंग एंटीऑक्सीडेंट पावर (FRAP), कुल फेनोलिक सामग्री (TPC), और कुल फ्लेवोनोइड सामग्री (TFC) परख तीन प्रतियों में आयोजित की गई

ली एट अल द्वारा वर्णित विधि का उपयोग करके ABTS और FRAP परख का प्रदर्शन किया गया। [24]। संक्षेप में, 0.7 ± 0.02 at 750 nm (180 µL) का अंतिम अवशोषण प्राप्त करने के लिए ABTS स्टॉक सॉल्यूशन को आसुत जल से पतला किया गया था एक 96-वेल प्लेट में प्रत्येक नमूना अर्क (20 µL) में जोड़ा गया। कमरे के तापमान पर अंधेरे में 6 मिनट के लिए प्रतिक्रिया होने दी गई। स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके अवशोषण को 750 एनएम पर मापा गया था। FRAP परख के लिए, 40 मिमी एचसीएल में 300 मिमी एसीटेट बफर (पीएच 3.6), 20 मिमी आयरन (III) क्लोराइड, और 10 मिमी 2,4, 6- ट्रिपिराइडिल-एस-ट्रायाज़िन (टीपीटीजेड) समाधान का मिश्रण (10:1:1, वी/वी/वी) तैयार किए गए थे। नमूना (10 µL) को 300 µL FRAP अभिकर्मक के साथ मिलाया गया और 6 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर लगाया गया। अवशोषण 570 एनएम पर मापा गया था। डीपीपीएच परख वोन एट अल से अनुकूलित विधि के बाद किया गया था। [42], जहां डीपीपीएच स्टॉक समाधान के 180 µ एल (इथेनॉल में 0.2 मिमी) को चावल कोजी के 20 µ एल के साथ 96- अच्छी तरह से प्लेटों में दो अलग-अलग फंगल अर्क के साथ मिलाया गया था और कमरे के तापमान पर 20 मिनट के लिए प्रतिक्रिया करने की अनुमति दी गई थी। अंधेरे में। DPPH द्वारा मुक्त मूलक अवशोषण को 515 एनएम पर मापा गया था। ABTS, FRAP, और DPPH के परिणाम कोजी के प्रति मिलीग्राम Trolox समकक्ष एंटीऑक्सीडेंट क्षमता (TEAC) सांद्रता (mM) के रूप में दर्शाए जाते हैं। मानक एकाग्रता घटता 0.0078 मिमी से 1 मिमी TEAC तक होता है।

TFC और TPC परख के लिए, ली एट अल द्वारा उपयोग की जाने वाली विधि। [25] का पालन किया गया। TFC परख के लिए, प्रत्येक चावल कोजी नमूने के 20 µL को 1 N NaOH के 20 µL और 180 µL के 90 प्रतिशत डायथिलीन ग्लाइकॉल के साथ मिलाया गया था एक 96-वेल प्लेट। कमरे के तापमान पर 60 मिनट के लिए मिश्रण के ऊष्मायन के बाद, अवशोषण को 405 एनएम मापा गया। टीएफसी को कोजी के प्रति मिलीग्राम नारिंगिन समकक्ष (एनई) एकाग्रता (एमएम) के रूप में प्रस्तुत किया जाता है। मानक एकाग्रता वक्र 0.0027 और 0.3445 मिमी NE के बीच रैखिक था। टीपीसी परख के विश्लेषण के लिए, प्रत्येक नमूने के 20 μL को 6 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर 96- अच्छी तरह से प्लेटों में 0.2 एन फोलिन-सियोकल्टेउ अभिकर्मक के 100 μL के साथ ऊष्मायन किया गया था। फिर, 7.5 प्रतिशत सोडियम कार्बोनेट (Na2CO3) घोल के 80 µL को मिश्रण में मिलाया गया और कमरे के तापमान पर 60 मिनट तक प्रतिक्रिया करने की अनुमति दी गई। अंत में, अवशोषण का मूल्यांकन 750 एनएम पर किया गया था। परिणाम 0.0230-2.9391 एमएम जीई की एक मानक एकाग्रता सीमा में कोजी के प्रति मिलीग्राम गैलिक एसिड समतुल्य (जीई) सांद्रता (एमएम) के रूप में इंगित किए जाते हैं।

4.8। कोशिका संवर्धन

4.9। वास्तविक समय पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन

सेल छर्रों से कुल आरएनए को अलग और परिमाणित करने के लिए, ट्राईज़ोल अभिकर्मक का उपयोग किया गया था, और एक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके विश्लेषण किया गया था। सीडीएनए का संश्लेषण 20 μL की कुल प्रतिक्रिया मात्रा में किया गया था; प्रतिक्रिया मिश्रण में निम्नलिखित प्रतिक्रिया स्थितियों के तहत कुल आरएनए, ओलिगो (डीटी) के 2 माइक्रोग्राम और रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन प्रीमिक्स शामिल थे: 45 मिनट के लिए 45 डिग्री सेल्सियस, इसके बाद 5 मिनट के लिए 95 डिग्री सेल्सियस। RT-PCR का उपयोग जीन अभिव्यक्ति की मात्रा का ठहराव के लिए किया गया था, और बाद में StepOne PlusTM सिस्टम सॉफ़्टवेयर (एप्लाइड बायोसिस्टम्स, फोस्टर सिटी, CA, यूएसए) का उपयोग करके परिणामों का विश्लेषण किया गया। निर्माता के प्रोटोकॉल का पालन करते हुए ABI 7300 इंस्ट्रूमेंट में प्रीमिक्स्ड ROX (एप्लाइड बायोसिस्टम्स, फोस्टर सिटी, CA, यूएसए) और प्राइमरों (Bioneer, Daejeon, कोरिया) के साथ SYBR ग्रीन PCR मास्टर मिक्स का उपयोग करके RT-PCR प्रवर्धन आयोजित किए गए। प्रतिक्रिया की स्थिति इस प्रकार थी: 10 मिनट के लिए 95 ◦C पर दीक्षा, उसके बाद 15 s के लिए 95 ◦C की साइकिल चालन की स्थिति, 30 s के लिए 60 ◦C, और 40 चक्रों के लिए 30 ◦C के लिए 72 ◦C। -एक्टिन का उपयोग आंतरिक नियंत्रण के रूप में किया गया था।

अंत में, चावल कोजी ने अलग-अलग एस्परगिलस प्रजातियों के अनुसार अलग-अलग मेटाबोलाइट्स और बायोएक्टिविटीज का उत्पादन दिखाया। के उच्च स्तरflavonoidsऔर आरएसी में ऑरोग्लौसीन डेरिवेटिव का परिणाम अधिक रहाप्रतिउपचारक गतिविधिराव की तुलना में। इसके अलावा, फैटी एसिड के synergistic प्रभाव औरएंटीऑक्सीडेंट यौगिकदोनों कोजी में पाए गए आरएनए एक्सप्रेशन से जुड़े थेत्वचा विरोधी उम्र बढ़ने का कारक. RAC में पाए जाने वाले Auroglaucin डेरिवेटिव और लाइसोफॉस्फोलिपिड्स भी ऐसे उम्मीदवार थे जिनसे जुड़े हो सकते हैंत्वचा विरोधी उम्र बढ़ने वाले कारकों की आरएनए अभिव्यक्ति. इसलिए, भले ही चावल कोजी को एक ही जीनस (एस्परगिलस) के सदस्यों का उपयोग करके किण्वित किया जाता है, विभिन्न प्रजातियों के लिए एंजाइम गतिविधियों और मेटाबोलाइट्स में महत्वपूर्ण अंतर होते हैं, और वे प्रभावित करते हैंबायोएक्टिविटीजजैसे किएंटीऑक्सिडेंटऔरविरोधी उम्र बढ़ने गतिविधियों. इसलिए, यह अध्ययन व्यापक अंतर्दृष्टि प्रदान करता है, साथ ही साथ इनोक्यूलेशन रोगाणुओं के तर्कसंगत विकल्प के लिए तर्क भी प्रदान करता है

मेटाबोलॉमिक्स, कोजी के व्यावसायिक उत्पादन की गुणवत्ता में सुधार करने के लिए।

पूरक सामग्री:निम्नलिखित चित्र S1 पर ऑनलाइन उपलब्ध हैं: चावल के लिए PLS-DA स्कोर प्लॉट (A,B) और OPLS-DA स्कोर प्लॉट (C)कोजीके साथ किण्वितएस्परगिलस क्रिस्टेटसयाए ओरेजाUHPLC-LTQ-Orbitrap MS/MS (A,C) और GC-TOF-MS (B) से प्राप्त किए गए थे, तालिका S1: चावल से उल्लेखनीय रूप से भिन्न चयापचयों की सूचीकोजीअलग के साथ # अन्य के साथएस्परगिलस एसपीपी. किण्वन के दौरान UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS/MS, तालिका S2 द्वारा पहचाना गया: चावल से महत्वपूर्ण रूप से भिन्न चयापचयों की सूचीकोजीअलग के साथ # अन्य के साथएस्परगिलस एसपीपी. किण्वन के दौरान GC-TOF-MS द्वारा पहचाना गया, चित्र S2: बायोएक्टिविटीज (त्वचा कोशिका प्रभाव और एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि) और चावल का सहसंबंध मानचित्रकोजीके साथ किण्वितएस्परगिलस क्रिस्टेटसयाए ओरेजापियर्सन के सहसंबंध गुणांक के अनुसार मेटाबोलाइट्स। प्रत्येक वर्ग पियर्सन के सहसंबंध गुणांक मान (r) को इंगित करता है।

लेखक योगदान:अवधारणा, सीएल और एसएल; कार्यप्रणाली, एचएल, एसएल, एसके (सेयोन क्यूंग) और जेआर; सत्यापन, एचएल, एसएल और एसके (सेयोन क्यूंग); औपचारिक विश्लेषण, एचएल और एसके (सेयोन क्यूंग); जांच, एचएल और एसएल; संसाधन, जेआर, एसके (सेउंगयुन कांग) और एमपी; लेखन - मूल मसौदा तैयार करना, एचएल; लेखन-समीक्षा और संपादन, एचएल और एसएल; विज़ुअलाइज़ेशन, एचएल; पर्यवेक्षण, एसएल और सीएल; परियोजना प्रशासन, SK (Seunghyun Kang), MP, और CL; धन प्राप्ति, सीएल सभी लेखकों ने प्रकाशित सामग्री को पढ़ लिया है और उससे सहमत हैंपांडुलिपि का संस्करण।

अनुदान:कृषि, खाद्य और ग्रामीण मंत्रालय द्वारा वित्त पोषित कृषि माइक्रोबायोम आर एंड डी प्रोग्राम (कृषि और खाद्य में माइक्रोबायोम के लिए रणनीतिक पहल) के माध्यम से इस काम को कोरिया इंस्टीट्यूट ऑफ प्लानिंग एंड इवैल्यूएशन फॉर टेक्नोलॉजी इन फूड, एग्रीकल्चर एंड फॉरेस्ट्री (आईपीईटी) द्वारा समर्थित किया गया था। मामले(MAFRA) (अनुदान संख्या 918011-04-3-HD020)। इसके अतिरिक्त, इस काम को कृषि, खाद्य और ग्रामीण मामलों के मंत्रालय (MAFRA) द्वारा वित्त पोषित उच्च मूल्य वर्धित खाद्य प्रौद्योगिकी विकास कार्यक्रम के माध्यम से कोरिया इंस्टीट्यूट ऑफ प्लानिंग एंड इवैल्यूएशन फॉर टेक्नोलॉजी इन फूड, एग्रीकल्चर, फॉरेस्ट्री (IPET) द्वारा समर्थित किया गया था। (अनुदान संख्या 318027-04-3-HD030)

डेटा उपलब्धता विवरण:इस अध्ययन में प्रस्तुत डेटा से अनुरोध पर उपलब्ध हैंअनुरूपी लेखक

स्वीकृतियां:इस शोध को कोंकुक यूनिवर्सिटी रिसर्चर फंड द्वारा समर्थित किया गया था2020.

संदर्भ

1. सैनलियर, एन.; गोकसेन, बी.बी.; सेजगिन, एसी किण्वित खाद्य पदार्थों के स्वास्थ्य लाभ। क्रिट। रेव। खाद्य विज्ञान। न्यूट्र। 2019, 59, 506–527। [क्रॉसरेफ]

2. यू, के.-डब्ल्यू।; ली, एस.-ई.; चोई, एच.-एस.; सुह, एचजे; रा, केएस; चोई, जेडब्ल्यू; ह्वांग, जे.-एच। एक कोरियाई पारंपरिक मेजू से पृथक Aspergillus oryzae CJCM-4 का उपयोग करके चावल कोजी की तैयारी के लिए अनुकूलन। खाद्य विज्ञान। जैव प्रौद्योगिकी। 2012, 21, 129–135। [क्रॉसरेफ]

3. यांग, वाई.; ज़िया, वाई।; लिन, एक्स।; वांग, जी.; झांग, एच।; जिओंग, जेड।; यू, एच।; यू, जे।; ऐ, एल। बेहतर इथेनॉल सहिष्णुता और किण्वन गतिविधि के साथ किण्वन खमीर बनाकर चीनी चावल शराब में स्वाद प्रोफाइल में सुधार। खाद्य रेस। इंट। 2018, 108, 83–92। [CrossRef] [PubMed के]

4. इचिकावा, ई.; हिरता, एस.; हाटा, वाई.; याजावा, एच.; तमूरा, एच.; कानोके, एम.; इवाशिता, के.; हिरता, डी। कोजी स्टार्टर का जापानी मादक पेय में मेटाबोलाइट्स पर प्रभाव चावल कोषितनेरी से बना है। Biosci। जैव प्रौद्योगिकी। जैव रसायन। 2020, 84, 1714–1723। [क्रॉसरेफ]

5. फेटपोर्नपाइसन, पी.; तिप्पायावत, पी.; जय, एम.; सुतथनट, के. एक स्थानीय थाई कल्टीवर ग्लूटिनस ब्लैक राइस ब्रान: इम्युनोमॉड्यूलेशन, सेल व्यवहार्यता और कोलेजन संश्लेषण, और मैट्रिक्स मेटालोप्रोटीनेज -2 और -9 निषेध में कार्यात्मक यौगिकों का एक स्रोत। जे समारोह। फूड्स 2014, 7, 650-661। [क्रॉसरेफ]

6. किम, एजे; चोई, जेएन; किम, जे.; किम, एचवाई; पार्क, एसबी; यो, एसएच; चोई, जेएच; लियू, केएच; ली, सीएच मेटाबोलाइट प्रोफाइलिंग और एस्परगिलस उपभेदों द्वारा किण्वित चावल कोजी की बायोएक्टिविटी। जे माइक्रोबॉयल। जैव प्रौद्योगिकी। 2012, 22, 100-106। [CrossRef] [PubMed के]

7. एम्स, बीएन; शिगेनागा, एमके; हेगन, टीएम ऑक्सीडेंट, एंटीऑक्सिडेंट, और उम्र बढ़ने के अपक्षयी रोग। प्रक्रिया। नटल। अकाद। विज्ञान। यूएसए 1993, 90, 7915–7922। [CrossRef] [PubMed के]

8. वाल्को, एम.; लाइबफ्रिट्ज़, डी.; मोंकोल, जे.; क्रोनिन, एमटी; मजूर, एम.; Telser, J. मुक्त कण, और सामान्य शारीरिक कार्यों और मानव रोग में एंटीऑक्सिडेंट। इंट। जे बायोकेम। सेल बायोल। 2007, 39, 44-84। [क्रॉसरेफ]

9. उत्तरा, बी.; सिंह, ए वी; जांबोनी, पी.; महाजन, आरटी ऑक्सीडेटिव तनाव और न्यूरोडीजेनेरेटिव रोग: अपस्ट्रीम और डाउनस्ट्रीम एंटीऑक्सिडेंट चिकित्सीय विकल्पों की समीक्षा। कुर। न्यूरोफार्माकोल। 2009, 7, 65–74। [क्रॉसरेफ]

10. येन, जी.-सी.; चांग, ​​वाई.-सी.; सु, एस.-डब्ल्यू। एस्परगिलस कैंडिडस के साथ किण्वित चावल कोजी की एंटीऑक्सिडेंट गतिविधि और सक्रिय यौगिक। खाद्य रसायन। 2003, 83, 49-54। [क्रॉसरेफ]

11. ली, डे; ली, एस.; सिंह, डी.; जंग, ईएस; शिन, एचडब्ल्यू; चंद्रमा, बीएस; ली, सीएच ब्राउन-, व्हाइट- और विशाल भ्रूण-चावल के साथ कोजी किण्वन के लिए सीएच टाइम-सॉल्व्ड तुलनात्मक मेटाबॉलिज्म। खाद्य रसायन। 2017, 231, 258–266। [CrossRef] [PubMed के]

12. जरार, एम.; बहल, एस.; शाहीन, एन.; फातिमा, ए.; नासाब, आर. रेटिनॉल के एंटी-एजिंग प्रभाव और आर्टिफिशियल फोटो-एज ह्यूमन डर्मल फाइब्रोब्लास्ट सेल लाइन्स के इलास्टिन फाइबर पर अल्फा हाइड्रॉक्सी एसिड। इंट। जे मेड हेल्थ बायोमेड। फार्म। अभियांत्रिकी। 2015, 7, 328।

13. बोल्ला, एसआर; अल-सुबाई, एएम; अल-जिंदान, आरवाई; बालकृष्ण, जेपी; रवि, ​​पीके; वीरराघवन, वी.पी.; पिल्लै, ए.ए.; गोलापल्ली, एसएसआर; जोसेफ, जेपी; सुरापानेनी, एरिस्टोलोचिया सैकाटा के मेथनॉलिक पत्ती निकालने की विट्रो घाव भरने की क्षमता में केएम संभवतः कोलेजन -1 अभिव्यक्ति पर इसके उत्तेजक प्रभाव से मध्यस्थ है। हेलियॉन 2019, 5, ई01648। [CrossRef] [PubMed के]

14. मीन्के, एमसी; नोबरी, सीके; शेंजर, एस.; वोलेर्ट, एच.; लैडमैन, जे.; डार्विन, एमई त्वचा के कोलेजन I/इलास्टिन इंडेक्स पर मौखिक रूप से लिए गए कैरोटीनॉइड-रिच कर्ली केल के सत्त का प्रभाव। पोषक तत्व 2017, 9, 775 [CrossRef] [PubMed के]

15. मजीद, एम.; भट, बी.; आनंद, एस.; शिवकुमार, ए.; पालीवाल, पी.; गीता, यूवी-प्रेरित आरओएस का केजी निषेध और सामान्य मानव त्वचीय फाइब्रोब्लास्ट्स में फाइलेन्थस एम्ब्लिका एक्सट्रैक्ट द्वारा कोलेजन क्षति। जे कॉस्मेट। विज्ञान। 2011, 62, 49-56। [पबमेड]

16. मसुदा, एम.; मुराता, के.; नारुतो, एस.; उवाया, ए.; इसामी, एफ.; मत्सुदा, एच. मैट्रिक्स मेटेलोप्रोटीनेज़ -1 मोरिंडा सिट्रिफ़ोलिया बीज निकालने की निरोधात्मक गतिविधियाँ और यूवीए-विकिरणित मानव त्वचीय फ़ाइब्रोब्लास्ट में इसके घटक। बायोल। फार्म। साँड़। 2012, 35, 210-215। [CrossRef] [PubMed के]

17. एसईओ, वाई.-के.; जंग, एस-एच।; सॉन्ग, के.वाई.; पार्क, जे.-के.; पार्क, सी.-एस. यूवी-प्रेरित सामान्य त्वचा फाइब्रोब्लास्ट पर किण्वित चावल की भूसी के अर्क का फोटो-विरोधी प्रभाव। ईयूआर। खाद्य रेस। प्रौद्योगिकी। 2010, 231, 163-169। [क्रॉसरेफ]

18. गूफो, पी.; ट्रिनेडेड, एच। चावल एंटीऑक्सिडेंट: फेनोलिक एसिड, फ्लेवोनोइड्स, एंथोसायनिन, प्रोएंथोसायनिडिन्स, टोकोफेरोल, टोकोट्रिएनोल्स, -ओरिज़ानॉल और फाइटिक एसिड। खाद्य विज्ञान। न्यूट्र। 2014, 2, 75–104। [क्रॉसरेफ]

19. बेचमैन, ए.; फिलिप्स, आरडी; चेन, जे। किण्वन और भंडारण के दौरान चावल और जौ कोजी की चयनित भौतिक संपत्ति और एंजाइम गतिविधि में परिवर्तन। जे भोजन। विज्ञान। 2012, 77, एम318-एम322। [क्रॉसरेफ]

20. कांग, डी.; जोड़।; डुआन, वाई.; हुआंग, वाई। यूरोटियम क्रिस्टैटम, फुझुआन ईंट चाय से एक संभावित प्रोबायोटिक कवक, आंत माइक्रोबायोटा को संशोधित करके चूहों में मोटापा कम किया। खाद्य समारोह। 2019, 10, 5032–5045। [क्रॉसरेफ]

21. झाओ, पी.; आलम, एमबी; ली, MAPKs/Nrf2- के माध्यम से Fuzhuan-Brick चाय जलीय अर्क द्वारा UVB-प्रेरित फोटोएजिंग का SH संरक्षण 2- MMP का मध्यस्थता डाउन-रेगुलेशन-1। पोषक तत्व 2018, 11, 60 [CrossRef] [PubMed के]

22. हूर, एसजे; ली, एसवाई; किम, वाईसी; चोई, आई.; किम, जीबी संयंत्र आधारित खाद्य पदार्थों में एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि पर किण्वन का प्रभाव। खाद्य रसायन। 2014, 160, 346–356। [CrossRef] [PubMed के]

23. झोउ, एस.-डी.; जू, एक्स।; लिन, वाई.-एफ.; ज़िया, एच.-वाई।; हुआंग, एल.; डोंग, एम.-एस। एचपीएलसी-पीडीए-ट्रिपल-टीओएफ-एमएस/एमएस-एबीटीएस प्रणाली का उपयोग करके यूरोटियम क्रिस्टैटम के साथ किण्वित एंजेलिका डाहुरिका में मुक्त कट्टरपंथी मैला ढोने वाले यौगिकों की ऑनलाइन स्क्रीनिंग और पहचान। खाद्य रसायन। 2019, 272, 670–678। [CrossRef] [PubMed के]

24. ली, एस.; ली, डे; सिंह, डी.; ली, सीएच मेटाबोलॉमिक्स ने चावल कोजी किण्वन की ओर इष्टतम अनाज प्रीप्रोसेसिंग (मिलिंग) प्रकट किया। जे कृषि। खाद्य रसायन। 2018, 66, 2694–2703। [क्रॉसरेफ]

जायदा के लिये पूछो:

ईमेल:wallence.suen@wecistanche.com व्हाट्सएप: प्लस 86 15292862950