जंगली मछली पकड़ने वाली बिल्लियों में परवोवायरस का प्राकृतिक संक्रमण (प्रियोनेलुरस विवरिनस) गुर्दे में मौजूदा वायरल स्थानीयकरण का खुलासा करता है

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सार

कार्निवोर प्रोटोपार्वोवायरस-1 (सीपीपीवी-1), एक वायरल प्रजाति जिसमें फेलिन पैनेलुकोपेनिया वायरस (एफपीवी) और कैनाइन परवोवायरस (सीपीवी) प्रकार होते हैं, व्यापक रूप से घरेलू और जंगली मांसाहारियों में फैले हुए हैं जो प्रणालीगत घातक बीमारियों का कारण बनते हैं। जंगली मछली पकड़ने वाली बिल्लियाँ (प्रियनैलुरस विवरिनस), जो विश्व स्तर पर कमजोर प्रजाति है, मृत पाई गई हैं। शवों की पोस्टमॉर्टम जांच में आंत, प्लीहा और में घावों का पता चलागुर्दे. सीपीपीवी-1 पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) और इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री (आईएचसी) का उपयोग करके इन ऊतकों में एंटीजन की पहचान, वायरस द्वारा संक्रमण का समर्थन करती है। पीसीआर- और आईएचसी-पॉजिटिविटी इन गुर्दे के ऊतकपॉप-ऑफ तकनीक के साथ स्वस्थानी संकरण (आईएसएच) और ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (टीईएम) में वायरस के असामान्य स्थानीयकरण का पता चला, जिसमें वायरल स्थानीयकरण के पहले विवरण की पुष्टि की गई।गुर्दे. मछली पकड़ने वाली बिल्लियों से प्राप्त CPPV-1 के जीनोम लक्षण वर्णन और व्युत्पन्न अमीनो एसिड विश्लेषण ने FPV को एक प्रेरक एजेंट के रूप में प्रकट किया। पता चला FPV अनुक्रमों ने कैप्सिड प्रोटीन में I566M और M569R पर अमीनो एसिड उत्परिवर्तन दिखाया। संपूर्ण कोडिंग जीनोम अनुक्रमों के फ़ाइलोजेनेटिक और विकासवादी विश्लेषण से पता चला है कि मछली पकड़ने वाली बिल्ली सीपीपीवी -1 जीनोम आनुवंशिक रूप से थाईलैंड में घरेलू बिल्लियों से पृथक एफपीवी जीनोम से जुड़े होते हैं। 1970 के दशक से, इन जीनोमों को चीनी एफपीवी उपभेदों के साथ आनुवंशिक विकास को साझा करने के लिए भी दिखाया गया है। यह अध्ययन मछली पकड़ने वाली बिल्लियों में सीपीपीवी-1 संक्रमण का पहला सबूत है और यह पहला है जिसने मछली पकड़ने वाली बिल्लियों में अपना स्थानीयकरण दिखाया है।गुर्दे. ये निष्कर्ष इस पैरोवायरस की बहु-मेजबान श्रेणी का समर्थन करते हैं और सुझाव देते हैं कि घातक सीपीपीवी-1 संक्रमण के परिणामस्वरूप अन्य कमजोर जंगली मांसाहारी हो सकते हैं।

कीवर्ड: गुर्दा ऊतक; गुर्दा रोग, गुर्दा, गुर्दे, गुर्दे ट्यूबलर

परिचय

जीनस प्रियनैलुरस, परिवार फेलिडे, को चित्तीदार, छोटे आकार की, जंगली बिल्लियों के एक समूह के रूप में वर्गीकृत किया गया है जो एशिया के मूल निवासी हैं [1]। प्रियोनैलुरस जीनस में चार औपचारिक रूप से मान्यता प्राप्त जंगली बिल्ली प्रजातियां शामिल हैं जिनमें तेंदुआ बिल्ली (पी। बेंगलेंसिस), फ्लैट-सिर वाली बिल्ली (पी। प्लैनिसेप्स), जंग लगी चित्तीदार बिल्ली (पी। रूबिगिनोसस) और मछली पकड़ने वाली बिल्ली (पी। विवरिनस) शामिल हैं। [2]। मछली पकड़ने वाली बिल्ली मुख्य रूप से दलदलों और मैंग्रोव के आसपास रहती है। यह विशेष रूप से दक्षिण और दक्षिण पूर्व एशिया में रहता है और थाईलैंड [3, 4] में अधिक प्रचलित है। वर्तमान में, मछली पकड़ने वाली बिल्ली की आबादी को खतरा है क्योंकि वे पिछले एक दशक में आर्द्रभूमि के रूप में नष्ट हो गई हैं। नतीजतन, इस प्रजाति को वर्तमान में कमजोर माना जाता है और प्रकृति के संरक्षण के लिए अंतर्राष्ट्रीय संघ (आईयूएनसी) [3] की लाल सूची में है। अपने आवास के नुकसान के कारण, मछली पकड़ने वाली बिल्ली उपनिवेश प्रवास कर रहे हैं और कभी-कभी उन क्षेत्रों में रह रहे हैं जहां पालतू जानवर और इंसान रहते हैं [5]। साझा पर्यावरण की इस घटना से अतिसंवेदनशील जंगली और घरेलू जानवरों के बीच रोगजनक फैलाव बढ़ सकता है और इसके विपरीत। पिछले कुछ दशकों [6-9] में जंगली या घरेलू जानवरों में घातक प्रकोपों ​​​​की रिपोर्टें जो रोगजनक स्पिलओवर के परिणामस्वरूप हो सकती हैं, का दस्तावेजीकरण किया गया है। इस प्रकार, उन जानवरों से रोगजनकों के संचरण की गतिशीलता की जांच की जानी चाहिए और आगे की जांच की आवश्यकता है।

सिस्टैंच से किडनी/गुर्दे की कार्यक्षमता में सुधार होगा

कार्निवोर प्रोटोपार्वोवायरस-1 (सीपीपीवी-1), एक वायरल प्रजाति जिसमें मिंक एंटरटाइटिस वायरस (एमईवी), रैकून पैरोवायरस (आरपीवी), फेलिन पैनेलुकोपेनिया वायरस (एफपीवी) और कैनाइन परवोवायरस (सीपीवी) के वेरिएंट शामिल हैं। जंगली और घरेलू दोनों कैनिडे और फेलिडे परिवारों [10, 11] में घातक बीमारियों से जुड़े एक महत्वपूर्ण रोगज़नक़ के रूप में मान्यता प्राप्त है। FPV, फेलिडे प्रजाति का एक सामान्य रोगज़नक़, CPV का एक सामान्य पूर्वज होने के लिए परिकल्पित किया गया है [12–14]। सीपीवी अक्सर कैनिडे परिवार में जानवरों को संक्रमित करता है और फेलिडे परिवार के समकक्ष [9, 15, 16] में संक्रमण के बढ़ते प्रमाण हैं। पहले, एफपीवी और सीपीवी को एक मेजबान-प्रतिबंधित वायरस होने की परिकल्पना की गई है। हालांकि, कई निष्कर्षों ने बाद में संकेत दिया कि परिवार के कुछ जानवर कैनिडे एफपीवी के लिए एक जलाशय के रूप में भूमिका निभा सकते हैं या इसके विपरीत [11, 17, 18]। इसके अलावा, कई रिपोर्टों ने संकेत दिया है कि FPV और CPV वेरिएंट (CPV-2a, -2b, और -2c) अतिसंवेदनशील मेजबान साझा करते हैं। ये मेजबान न केवल घरेलू जानवर हैं, बल्कि विभिन्न प्रकार के मांसाहारी प्रजातियां भी हैं [15, 19, 20], जो सीपीपीवी की एक बहु-मेजबान श्रेणी का सुझाव देते हैं -1 [11]।

1996 से 1997 तक, सीपीवी वेरिएंट को पहली बार तेंदुए की बिल्लियों में पाया गया था और शुरू में इसे लेपर्ड कैट पैरोवायरस (एलसीपीवी) के रूप में नामित किया गया था, जो सीपीपीवी के पहले विवरण का सुझाव देता है -1 जीनस प्रिओनैलुरस [21, 22]। इनमें से कुछ LCPV उपभेदों को पहले वर्णित CPV -2a और -2b से आनुवंशिक रूप से भिन्न होने का पता चला था, जो कि कैप्सिड (VP) प्रोटीन में G300A अमीनो एसिड के उत्परिवर्तन के कारण था। इसके परिणामस्वरूप इसके प्रतिजनी गुणों में परिवर्तन हुआ जो अब सीपीवी-2सी को अन्य सीपीवी वेरिएंट [22] से अलग करने के लिए एक अद्वितीय उत्परिवर्तन बिंदु के रूप में उपयोग किया जाता है। तेंदुए की बिल्लियों में नए सीपीवी संस्करण (वर्तमान में सीपीवी-2सी के रूप में जाना जाता है) की खोज ने पशु प्रजातियों के बीच सीपीपीवी के सह-विकास के विचार का समर्थन किया। बाद में, तेंदुए की बिल्लियों [9] में एफपीवी और सीपीवी वेरिएंट के संक्रमण की सूचना मिली। इसने सुझाव दिया कि तेंदुआ बिल्ली (जीनस प्रियनैलुरस) जैसी ही जीनस की अन्य प्रजातियां सीपीपीवी-1 संक्रमण के लिए अतिसंवेदनशील हो सकती हैं। अब तक, जीनस प्रियनैलुरस में अन्य प्रजातियों में सीपीपीवी-1 संक्रमण की संवेदनशीलता अभी भी काफी हद तक अज्ञात है। सीपीपीवी -1 प्रकार कैसे विकसित हो रहे हैं और नए उभरते हुए प्रकार कैसे व्यवहार करते हैं, यह समझने में मदद मिल सकती है कि नए संस्करण के संभावित प्रकोप को कैसे रोका जाए। भले ही नया वायरस व्यापक मेजबान रेंज प्राप्त करता है, घातक प्रकोप या संक्रमण से जुड़े असामान्य घाव एक नए, अतिसंवेदनशील मेजबान में देखे जा सकते हैं। यह अध्ययन जंगली मछली पकड़ने वाली बिल्लियों (प्रियोनेलुरस विवरिनस) में एक घातक सीपीपीवी -1 संक्रमण का वर्णन करता है। प्राप्त CPPV-1 का आनुवंशिक लक्षण वर्णन FPV को एक प्रेरक एजेंट के रूप में प्रकट करता है। यह खोज इस प्रजाति में एफपीवी संक्रमण का पहला सबूत प्रदान करती है, और यह इस वायरस के अद्वितीय सेलुलर उष्णकटिबंधीय का खुलासा करती है। कई कमजोर प्रजातियों में वैश्विक संक्रमण के लिए इसके खाते के लिए इस प्रजाति में एफपीवी संक्रमण और इसके प्रकारों को और स्पष्ट करना आवश्यक है।

सामग्री और तरीके

पशु और नियमित पोस्टमॉर्टम परीक्षाजून 2019 में, दो जंगली मछली पकड़ने वाली बिल्लियाँ (पी। विवरिनस), नामित केस नं। 1 और 2 थाईलैंड के नाखोन रत्चासिमा प्रांत के उपनगरीय इलाके में मृत पाए गए। बाद में अगस्त 2019 में, एक और मछली पकड़ने वाली बिल्ली, नामित मामला नं। 3, को उस क्षेत्र से बचाया जा रहा था जहाँ पहली दो मछली पकड़ने वाली बिल्लियाँ मिली थीं। निर्जलीकरण की गंभीरता को देखते हुए मामला नं. 3 की पशु अस्पताल में रेफर के दौरान मौत हो गई। मछली पकड़ने वाली इन तीन बिल्लियों को एक नियमित प्रक्रिया के रूप में पोस्टमॉर्टम जांच के लिए प्रस्तुत किया गया था। दुर्भाग्य से, एक ही क्षेत्र में मुक्त घूमने वाले पालतू जानवरों या जंगली प्रजातियों के नमूने उपलब्ध नहीं थे; इस प्रकार, उन्हें इस अध्ययन में शामिल नहीं किया गया था। मछली पकड़ने वाली सभी बिल्लियों का नियमित पोस्टमॉर्टम किया गया। फेफड़े, यकृत, हृदय, प्लीहा, और सहित चुनिंदा महत्वपूर्ण अंगगुर्दासभी मछली पकड़ने वाली बिल्लियों से नमूना लिया गया था, जबकि आंत और मेसेंटेरिक लिम्फ नोड को अतिरिक्त रूप से मछली पकड़ने वाली बिल्ली संख्या 3 से एकत्र किया गया था। सभी चयनित ऊतकों को हिस्टोलॉजिकल परीक्षा के लिए प्रस्तुत किया गया था और व्यक्तिगत रूप से आगे आणविक assays के लिए नमूना लिया गया था। ऊतक विज्ञान के लिए, ऊतकों को कम से कम 24 घंटे के लिए 10 प्रतिशत (v/v) तटस्थ बफर फॉर्मेलिन में डुबोया गया और नियमित रूप से संसाधित किया गया। फिर उन्हें हेमटॉक्सिलिन और ईओसिन के साथ दाग दिया गया

(एच एंड ई) एक एसीवीपी बोर्ड द्वारा प्रमाणित पशु रोग विशेषज्ञ (टीके) द्वारा जांच से पहले मानक प्रक्रियाओं का उपयोग करना। तीन मछली पकड़ने वाली बिल्लियों से प्राप्त ताजा ऊतक के नमूने आणविक अध्ययन के लिए -80˚C पर संग्रहीत किए गए थे। चुलालोंगकोर्न यूनिवर्सिटी एनिमल केयर एंड यूज कमेटी (नंबर 1931036) के अनुमोदन के बाद सभी प्रक्रियाओं को दिशानिर्देशों और विनियमों के अनुसार किया गया था।

सामान्य वायरोलॉजिकल आणविक परखहृदय, फेफड़े, यकृत, प्लीहा, और सहित ताजा ऊतक के नमूनेगुर्दामछली पकड़ने वाली सभी बिल्लियों और मछली पकड़ने वाली बिल्ली के अतिरिक्त आंतों और मेसेंटेरिक लिम्फ नोड ऊतकों की संख्या। 3, वायरल न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण के अधीन थे, उन्हें व्यक्तिगत रूप से 1 प्रतिशत (v/v) फॉस्फेट-बफर खारा (पीबीएस) के साथ समरूप बनाकर। इसके बाद, निर्माता के सुझाव के बाद एक वाणिज्यिक वायरल न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण II किट (जीनएड, ताइपे, ताइवान) का उपयोग करके कुल वायरल न्यूक्लिक एसिड निकाला गया। निकाले गए न्यूक्लिक एसिड को स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री विधि (नैनोड्रॉप, थर्मो साइंटिफिक ™, वॉलथम, एमए, यूएसए) का उपयोग करके उनके A260 / A280 अवशोषण अनुपात द्वारा योग्य और निर्धारित किया गया था। सभी निकाले गए न्यूक्लिक एसिड को पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) विश्लेषण का उपयोग करके वायरल आणविक जांच के अधीन किया गया था, जिसमें कई पैन-वायरोलॉजिक-फ़ैमिली पीसीआर परीक्षण पैनल शामिल थे, जिसमें हर्पीसवायरस [23], पैरामाइक्सोवायरस [24], न्यूमोवायरस [25], कैलीवायरस का पता लगाना शामिल था। [26], इन्फ्लूएंजा वायरस [27], बोकावायरस [26, 28], पैरोवायरस [29] और कोरोना वायरस [30, 31]। पीसीआर प्रोटोकॉल, रिएजेंट, साइकिल चालन की स्थिति और प्रतिक्रियाओं में उपयोग किए जाने वाले सकारात्मक/नकारात्मक नियंत्रण S1 फ़ाइल में वर्णित हैं। ग्लिसराल्डिहाइड के पीसीआर डिटेक्शन विशिष्ट - 3- फॉस्फेट डिहाइड्रोजनेज (GAPDH) जीन ऑफ फेलिन का उपयोग आंतरिक नियंत्रण के रूप में किया गया था जैसा कि पहले बताया गया था [32]। इसके बाद, सकारात्मक पीसीआर एम्पलीकॉन्स की कल्पना QIAxcel केशिका वैद्युतकणसंचलन प्लेटफॉर्म (क्यूजेन, हिल्डेन, जर्मनी) का उपयोग करके की गई थी जैसा कि पहले वर्णित [33] था। प्रत्येक पीसीआर परख के सकारात्मक आयामों को शुद्ध किया गया और द्विदिश सेंगर अनुक्रमण (मैक्रोजन इंक, सियोल, दक्षिण कोरिया) के अधीन किया गया। ऊतकों के मध्यम ऑटोलिसिस के कारण, इन मछली पकड़ने वाली बिल्लियों पर बैक्टीरियोलॉजिकल जांच करना संभव नहीं था।

सीटू सीपीपीवी में -1 इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री (आईएचसी), स्वस्थानी संकरण (आईएसएच) और ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (टीईएम) का उपयोग करके पता लगाना

प्रारंभिक वायरोलॉजिकल मॉलिक्यूलर स्क्रीनिंग से पैन-पार्वोवायरस पीसीआर के सकारात्मक आयाम सामने आए और अनुक्रमण परिणामों ने सीपीपीवी के संभावित डीएनए अनुक्रमों को भी दिखाया -1। इन निष्कर्षों ने हमें सीपीपीवी की उपस्थिति की पुष्टि करने के लिए प्रेरित किया -1 और मछली पकड़ने वाली बिल्लियों के ऊतकों में सीपीपीवी के वितरण को स्थानीयकृत करने के लिए -1। फॉर्मेलिन-फिक्स्ड पैराफिन-एम्बेडेड (एफएफपीई) ऊतक जिसमें फेफड़े, यकृत, हृदय, प्लीहा,गुर्दाऔर आंत को सीपीपीवी के अधीन किया गया था -1 आईएचसी का पता लगाने के लिए हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज (एचआरपी) डिटेक्शन सिस्टम (एनविज़न पॉलीमर, डको, ग्लोस्ट्रुप, डेनमार्क) के साथ एक माउस मोनोक्लोनल एंटी-कैनाइन पैरोवायरस एंटीबॉडी (ab59832, Abcam, कैम्ब्रिज, यूके) का उपयोग किया गया था। . संक्षेप में, FFPE वर्गों को 4- माइक्रोन मोटाई में काट दिया गया और आगे हटा दिया गया और पुनर्जलीकरण किया गया। स्लाइड्स का तब ढोंग किया गया था, अंतर्जात पेरोक्सीडेज को अवरुद्ध और संसाधित किया गया था जैसा कि पहले वर्णित [11] था। एक एफपीवी संक्रमित बिल्ली और एक सीपीवी-संक्रमित कुत्ते के आंतों के ऊतकों के वर्गों को सकारात्मक नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया गया था, जबकि समान वर्गों को शुद्ध बकरी-माउस और खरगोश आईजीजी (आईएचसी सार्वभौमिक नकारात्मक नियंत्रण अभिकर्मक, कोड एडीआई -950-231-0025, एंज़ो लाइफ के साथ जोड़ा गया था। विज्ञान, फार्मिंगडेल, एनवाई, यूएसए) का उपयोग नकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया गया था। विषय मेंगुर्देउन क्षेत्रों में मौजूद ट्यूबलर नेक्रोसिस जहां सीपीपीवी-1 आईएचसी सकारात्मक संकेत देखे गए थे,गुर्दासभी मछली पकड़ने वाली बिल्लियों के वर्गों को आवधिक एसिडशिफ (पीएएस) विशेष धुंधलापन के अधीन किया गया था, ताकि सेलुलर वास्तुकला का प्रदर्शन किया जा सके।गुर्दाऊतक।

किडनी/गुर्दे की बीमारी में सुधार करेगा सिस्टांचे

इसके अलावा, एफएफपीईगुर्दाफिशिंग कैट नं. सकारात्मक सीपीपीवी के परिणाम का समर्थन करने के लिए 1 और 3 को आईएसएच और टीईएम विश्लेषण के अधीन किया गया था -1 आईएचसी धुंधला हो जाना और अल्ट्रा संरचनात्मक रूप से वायरल कणों को प्रदर्शित करनागुर्दे के ऊतक, क्रमश। आईएसएच के लिए, सीपीपीवी के कैप्सिड जीन के सीपीपीवी -1 डीएनए जांच -1 को कवर करने वाले डीएनए जांच का निर्माण पीसीआर डीआईजी प्रोब सिंथेसिस किट (रोश डायग्नोस्टिक्स, बेसल, स्विटजरलैंड) का उपयोग करके किया गया था। निर्माता के सुझाव। थर्मल साइकलिंग प्रतिक्रिया और स्थिति को पहले वर्णित [34] के रूप में प्रदर्शन किया गया था, अपवाद के साथ डिगॉक्सिजेनिन (डीआईजी) - लेबल वाले ओलिगोन्यूक्लियोटाइड्स का उपयोग करके। निर्मित संकरण जांच की कल्पना और पुष्टि 1.5 प्रतिशत (w/v) agarose gel वैद्युतकणसंचलन पर आकार संकल्प द्वारा की गई थी। क्रोमोजेनिक डीएनए के साथ ISH को पहले वर्णित [26] के रूप में मामूली संशोधनों के साथ किया गया था। संक्षेप में, पीबीएस में deparaffinization, पुनर्जलीकरण, और बाद में rinsing के बाद, 4- μm-मोटी FFPE स्लाइड्स को प्रोटियोलिटिक पाचन, पोस्ट-फिक्सेशन और पूर्व-संकरण के अधीन किया गया था। स्लाइड्स को 25 एनजी / μL ISH जांच के साथ 42 डिग्री सेल्सियस पर रातोंरात संकरणित किया गया। लिक्विड परमानेंट रेड (LPR) (डको, ग्लोस्ट्रुप, डेनमार्क) के संयोजन में 100 μL एंटी-डीआईजी-एपी फैब टुकड़े (रोच, बेसल, स्विट्जरलैंड) (1:200 1X ब्लॉकिंग सॉल्यूशन) के साथ युग्मन द्वारा संकरण संकेतों की कल्पना की गई थी। . स्लाइड्स को तब हेमटॉक्सिलिन से उलट दिया गया था। सेलुलर आकारिकी के सहसंबंध में लाल अवक्षेप को ISH के लिए सकारात्मक माना जाता था। नकारात्मक नियंत्रण के लिए, CPPV -1 जांच के बजाय तिलापिया झील वायरस (TiLV) जांच [35] को नियोजित किया गया था। TEM नमूने पॉप-ऑफ तकनीकों के अनुसार संशोधनों [36-38] के साथ तैयार किए गए थे और पहले वर्णित [39, 40] के रूप में भारी धातुओं के साथ दाग दिए गए थे। 80 kV . पर संचालित TEM (HT7800; हिताची, टोक्यो, जापान) का उपयोग करके संरचना की जांच की गई

मछली पकड़ने वाली बिल्ली CPPV का पूर्ण-लंबाई वाला आनुवंशिक लक्षण वर्णन-1चूंकि वायरोलॉजिकल पीसीआर और आईएचसी स्क्रीनिंग के परिणाम सहमत थे और पैन-पार्वोवायरल पीसीआर से प्राप्त आंशिक वीपी -2 जीनोम अनुक्रमों के परिणामों ने केस नंबरों के बीच आनुवंशिक समानता का सुझाव दिया। 1 और 2, लेकिन केस नंबर 3 के लिए नहीं, हमने आगे इन फिशिंग कैट्स (केस नंबर 1 और 3) से पूर्ण-लंबाई वाले CPPV-1 अनुक्रम की विशेषता बताई और CPPV-1 मूल को एक का उपयोग करके वर्गीकृत किया। पिछले प्रकाशन [26] से प्राप्त एफपीवी और सीपीवी के लिए विशिष्ट अपक्षयी प्राइमर जोड़े का सेट। संक्षेप में, प्लीहा से प्राप्त निकाले गए न्यूक्लिक एसिड औरगुर्देदो मछली पकड़ने वाली बिल्लियों और मछली पकड़ने वाली बिल्ली के अतिरिक्त आंतों के ऊतक नं। 3, व्यक्तिगत रूप से एक GoTaq1 हॉट स्टार्ट ग्रीन मास्टर मिक्स (Promega, मैडिसन, WI, यूएसए) और विशिष्ट प्राइमरों (S1 फ़ाइल) का उपयोग करके प्रवर्धित किया गया था। पीसीआर स्थितियों का वर्णन पहले किया जा चुका है [26]। लक्ष्य एम्पलीकॉन्स को 2 प्रतिशत (w / v) agarose gel वैद्युतकणसंचलन का उपयोग करके कल्पना की गई थी और वाणिज्यिक सेंगर अनुक्रमण से पहले एक मोनार्क डीएनए जेल निष्कर्षण किट (न्यू इंग्लैंड बायोलैब, फ्रैंकफर्ट, जर्मनी) का उपयोग करके शुद्ध किया गया था। मछली पकड़ने वाली दो बिल्लियों से प्राप्त CPPV-1 आइसोलेट्स के संपूर्ण जीनोम क्रम जेनबैंक (परिग्रहण संख्या MW145540-MW145541) में जमा किए गए थे।

फिशिंग कैट सीपीपीवी के फाइलोजेनेटिक, पुनर्संयोजन और विकासवादी विश्लेषण -1 फिशिंग कैट सीपीपीवी के पूर्ण-लंबाई वाले जीनोम अनुक्रम-1 उपभेदों को प्रकाशित पूर्ण सीपीपीवी के साथ संरेखित किया गया था-1 विभिन्न मेजबान प्रजातियों से प्राप्त अनुक्रम , MAFFT V. 7 (http://mafft.cbrc.jp/alignment/server/) और MEGA7 सॉफ़्टवेयर (http://www.megasoftware.net) का उपयोग करके जेनबैंक में उपलब्ध है। अनुक्रम संरेखण को तब फ़ाइलोजेनेटिक ट्री निर्माण के अधीन किया गया था। गामा वितरण (एचकेवाई प्लस जी) मॉडल के साथ हसेगावा-किशिनो-यानो के साथ अधिकतम संभावना (एमएल) विधि का उपयोग करके फ़ाइलोजेनेटिक ट्री बनाया गया था, जिसे बायेसियन सूचना मानदंड के अनुसार MEGA7 में फाइंड-बेस्ट-फिट मॉडल एल्गोरिथ्म का उपयोग करके चुना गया था। . पेड़ को 1,000 प्रतिकृति के साथ बूटस्ट्रैप किया गया था। CPPV -1 जीनोम के बीच अनुक्रम जोड़ीवार समानता की गणना अधिकतम समग्र संभावना मॉडल का उपयोग करके की गई थी और MEGA7 में उनकी विकासवादी दूरी का विश्लेषण किया गया था। आउटपुट जोड़ीदार न्यूक्लियोटाइड पहचान Microsoft Excel प्रारूप (S2 फ़ाइल) में उत्पन्न और कल्पना की गई थी। सीपीपीवी के आउटपुट संरेखण अनुक्रम -1 को तब दो सांख्यिकीय स्वतंत्र सॉफ्टवेयर पैकेजों का उपयोग करके आनुवंशिक पुनर्संयोजन विश्लेषण के लिए एक टेम्पलेट के रूप में उपयोग किया गया था। संक्षेप में, संरेखण ने एकीकृत पुनर्संयोजन डिटेक्शन प्रोग्राम 4 (RDP4) पैकेज V. बीटा 4.94 सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके संभावित पुनर्संयोजन उपभेदों की पहचान की और इसे सिमप्लॉट सॉफ़्टवेयर पैक आयु V. 3.5.1 में एक समानता प्लॉट और बूटस्कैनिंग विश्लेषण के साथ क्रॉसचेक किया गया। कार्यक्रमों की रूपरेखा और परिणामों की व्याख्या पहले वर्णित [26, 41] के रूप में आयोजित की गई थी।

FF मछली पकड़ने वाली बिल्ली CPPV के विकासवादी विश्लेषण के लिए {{0}}, 224 पूर्ण जीनोम अनुक्रमों का एक डेटासेट, जिसमें 26 FPV-, 6 MEV- और 192 CPV अनुक्रम शामिल हैं, जो 1979 और 2019 के बीच 18 देशों से उत्पन्न हुए थे, को पुनः प्राप्त किया गया था। जेनबैंक डेटाबेस से। BEAST V. 2.4.8 [42] में लागू बायेसियन मार्कोव चेन मोंटे कार्लो (BMCMC) मॉडल का उपयोग करके मछली पकड़ने वाली बिल्लियों से प्राप्त 2 संभावित CPPV-1 अनुक्रमों के साथ विकासवादी विश्लेषण किया गया था। jModelTest [43] कई संरेखण अनुक्रमों के लिए सर्वश्रेष्ठ फिटिंग न्यूक्लियोटाइड प्रतिस्थापन मॉडल की पहचान करने के लिए किया गया था। पुजारियों के रूप में निरंतर जनसंख्या आकार में लॉगनॉर्मल रिलैक्स्ड और सख्त घड़ी मॉडल के तहत सबसे फिट प्रतिस्थापन मॉडल वंशावली के बीच विभिन्न विकास दर के हिसाब से लागू किए गए थे। कोलेसेन्ट बायेसियन स्काईलाइन ट्री पूर्व और अनुभवजन्य आधार आवृत्तियों को सर्वश्रेष्ठ-फिट घड़ी मॉडल के तहत प्राप्त किया गया था और 100 मिलियन श्रृंखलाओं के लिए चलाया गया था, प्रत्येक 10, 000 वीं पीढ़ी का नमूना, पहले 10 प्रतिशत को बर्न-इन के रूप में त्याग दिया गया था। TRACER प्रोग्राम V. 1.7.0 [44] का उपयोग करके प्रभावी नमूना आकार की गणना करके मापदंडों के अभिसरण की पुष्टि की गई। ट्रीएनोटेटर वी. 1.8.3 [42] का उपयोग करके अधिकतम क्लैड विश्वसनीयता वाले पेड़ों को एनोटेट किया गया था। अनुमानित विचलन, परिवर्तनशील समयरेखा, पश्च संभाव्यता और 95 प्रतिशत उच्चतम पश्च घनत्व (एचपीडी) के साथ फ़ाइलोजेनेटिक पेड़ को FigTree V. 1.4.3 [45] का उपयोग करके उत्पन्न और प्रदर्शित किया गया था।

सीपीपीवी का पूर्वव्यापी अध्ययन-1 वन्यजीव मांसाहारी में प्रतिजनसुदूर और हाल के दिनों में जंगली मांसाहारियों में अज्ञात कारणों से रुग्णता और मृत्यु दर से जुड़े CPPV-1 की भूमिका का पता लगाने के लिए, CPPV के जीनोमिक निष्कर्षण और पहचान लक्ष्यीकरण के लिए 305 चुनिंदा नए नमूने शामिल किए गए थे{{2} } कैप्सिड जीन जैसा कि ऊपर वर्णित है। ये नमूने 2013 से या तो फेकल स्वैब या आंतों की सामग्री के रूप में प्राप्त किए गए हैं। वे 27 विभिन्न मांसाहारी प्रजातियों (एस 1 टेबल) से 136 चिड़ियाघर के जानवरों से प्राप्त किए गए थे। परिणाम पोस्टमॉर्टम निष्कर्ष और मछली पकड़ने वाली बिल्ली सीपीपीवी के ऊतक स्थानीयकरण -1 सभी नेक्रोप्सीड मछली पकड़ने वाली बिल्लियों को निर्जलीकरण की अलग-अलग डिग्री के साथ मध्यम रूप से क्षीण किया गया था, जबकि 3 में से 2 मछली पकड़ने वाली बिल्लियों (केस नंबर 1 और 2) ने मध्यम ऑटोलिसिस दिखाया। मुख्य रूप से, प्लीहा औरगुर्देमछली पकड़ने वाली सभी बिल्लियों में भीड़भाड़ थी। फिशिंग कैट नंबर 3 में कैटरल एंटरटाइटिस के मैक्रोस्कोपिक घाव थे, जिसमें उनके लुमेन में पानी के भूरे-पीले रंग की सामग्री थी और मेसेंटेरिक लिम्फ नोड की भीड़ थी। हिस्टोलॉजिकल रूप से, मछली पकड़ने वाली बिल्ली का फेफड़ा नं। 3 ने एल्वियोली में मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं के घुसपैठ के साथ गंभीर भीड़ का खुलासा किया। जिगर ने हल्के पेरिपोर्टल हेपेटाइटिस को दिखाया, जो कि यकृत पोर्टल ट्रायड्स में मोनोन्यूक्लियर सेल घुसपैठ की विशेषता है। सभी मछली पकड़ने वाली बिल्लियों में कुछ संख्या में प्लीहा लिम्फोइड फॉलिकल्स के साथ प्लीहा की भीड़ की समान डिग्री देखी गई। लिम्फोइड फॉलिकल्स समाप्त हो गए थे और शेष लिम्फोइड फॉलिकल्स प्रमुख प्लीहा ट्रैबेकुले (चित्र 1 ए) की बढ़ी हुई संख्या के साथ ढह गए प्लीहा वास्तुकला के बीच थे। लिम्फोसाइटों के बिखरे हुए कैरियोरेक्टिक मलबे थे

अंजीर 1. CPPV-1 मछली पकड़ने वाली बिल्लियों में संक्रमण। मछली पकड़ने वाली बिल्लियों से प्रदर्शित एच एंड ई (ए, सी) और सीपीपीवी -1 आईएचसी (बी, डी) चित्र। (ए) मछली पकड़ने वाली बिल्ली नं। 1. लिम्फोइड फॉलिकल्स की विरल संख्या के साथ डिफ्यूज़ कंजस्टेड प्लीहा। शेष लिम्फोइड फॉलिकल्स में से एक के केंद्र में लिम्फोसाइट्स (लिम्फोसाइटोलिसिस) (इनसेट) के बिखरे हुए कैरियोरेक्टिक मलबे के साथ इओसिनोफिलिक फाइब्रिलर सामग्री (फाइब्रिन) होती है। इन लिम्फोसाइटों की कुछ संख्या में 5-7 माइक्रोन बेसोफिलिक इंट्रान्यूक्लियर समावेशन निकाय होते हैं जो परमाणु क्रोमैटिन (तीर) को हाशिए पर रखते हैं। (बी) मछली पकड़ने वाली बिल्ली नं। 3. कभी-कभी फैले हुए क्रिप्ट के साथ विली का छोटा होना जिसमें ईोसिनोफिलिक प्रोटीनयुक्त पदार्थ होते हैं और स्पष्ट रूप से क्षीण या नेक्रोटिक क्रिप्ट एपिथेलियल कोशिकाओं (इनसेट) द्वारा रेखांकित होते हैं। कई क्रिप्ट एपिथेलियल कोशिकाएं पाइक्नोटिक और कैरियोरेक्टिक थीं और दुर्लभ कोशिकाओं में समान बेसोफिलिक इंट्रान्यूक्लियर इंक्लूजन बॉडी (तीर) होते थे। (सी) मछली पकड़ने वाली बिल्ली नं। 1. सीपीपीवी-1 प्रतिरक्षी सक्रियता अक्सर मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं के साइटोप्लाज्म में प्लीहा लिम्फोइड कूप के क्षेत्र में देखी गई थी। (डी) मछली पकड़ने वाली बिल्ली नं। 3. CPPV-1 IHC संकेतों का व्यापक रूप से पता लगाया गया था और प्रतिरक्षात्मकता संकेतों को क्रिप्टल एपिथेलियल कोशिकाओं (इनसेट) के साइटोप्लाज्म में स्पष्ट रूप से स्थानीयकृत किया गया था। बार्स (ए) के लिए 25 माइक्रोन और (बी-डी) के लिए 120 माइक्रोन का संकेत देते हैं।

इस तरह के कूप के केंद्र में ईोसिनोफिलिक फाइब्रिलर सामग्री का संचय। इन लिम्फोसाइटों की कुछ संख्या में 5-7 माइक्रोन बेसोफिलिक इंट्रान्यूक्लियर समावेशन निकाय होते हैं जो परमाणु क्रोमैटिन को हाशिए पर रखते हैं। म्यूकोसल आर्किटेक्चर के पतन के साथ आंतों के विली का छोटा होना मछली पकड़ने वाली बिल्ली संख्या के आंतों के खंड में मौजूद था। 3 (चित्र 1बी)। कुछ तहखानों को फैलाया गया था, और उनमें ईोसिनोफिलिक प्रोटीनयुक्त सामग्री थी और वे स्पष्ट रूप से क्षीण या परिगलित क्रिप्ट उपकला कोशिकाओं द्वारा पंक्तिबद्ध थे। कई क्रिप्टल एपिथेलियल कोशिकाएं पाइक्नोटिक और कैरियोरेक्टिक थीं और दुर्लभ कोशिकाओं में समान बेसोफिलिक इंट्रान्यूक्लियर समावेशन निकाय होते थे। सीपीपीवी -1 आईएचसी का उपयोग ऊतकों में वायरस की उपस्थिति को प्रदर्शित करने और नियमित पोस्टमॉर्टम परीक्षा में देखे गए घावों में सीपीपीवी -1 की रोग संबंधी भूमिका का वर्णन करने के लिए किया गया था। तिल्ली में रहने वाली मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं ने सभी मछली पकड़ने वाली बिल्लियों (चित्र 1C) में CPPV -1 की सकारात्मक तीव्र प्रतिरक्षण क्षमता का खुलासा किया। क्रिप्टल एपिथेलियल कोशिकाओं के अधिकांश साइटोप्लाज्म में प्रतिरक्षण क्षमता भी देखी गई थी और मछली पकड़ने वाली बिल्ली संख्या के आंतों के घावों के साथ संगत थी। 3 (चित्र 1डी)। विशेष रूप से, विभिन्न डिग्रीवृक्क नलिकाकारवेक्यूलेशन और मल्टीफोकलगुर्देमछली पकड़ने वाली सभी बिल्लियों में रक्तस्राव स्पष्ट था (चित्र 2क)। कुछगुर्देट्यूबलर एपिथेलियल कोशिकाएं न्यूक्लियर पाइकोनोसिस के साथ हाइपेरोसिनोफिलिक थीं, जबकि दुर्लभ रिक्त ट्यूबलर एपिथेलियल कोशिकाओं ने नाभिकीय क्रोमेटिन (छवि 2 बी) के साथ vesiculated नाभिक का खुलासा किया। विषय मेंगुर्दाघावों, हमने आगे की सेलुलर वास्तुकला को प्रदर्शित करने के लिए पीएएस धुंधला प्रदर्शन कियागुर्दा ऊतकऔर इस घाव के संभावित कारण के रूप में प्रणालीगत हाइपोक्सिया को बाहर करने के लिए। पीएएस धुंधला ने प्रदर्शित कियावृक्क नलिकाकारतहखाने की झिल्ली बरकरार थी (चित्र 2 बी, इनसेट)। के अंदरगुर्दाअनुभागों में, CPPV-1 इम्यूनोलेबलिंग मजबूत थी और अक्सर के कोशिका द्रव्य में देखी जाती थीवृक्क नलिकाकारउपकला कोशिकाएं (चित्र 2C) और यूरोटेलियल कोशिकाएंगुर्दे क्षोणीसभी मामलों में। नकारात्मक नियंत्रण (S1 अंजीर) में इम्युनोजेनिक प्रतिक्रिया का कोई सबूत नहीं देखा गया। असामान्य CPPV-1 में स्थानीयकरणगुर्दे के ऊतकआईएचसी द्वारा प्रकट किया गया सुझाव है कि हमें सीपीपीवी की उपस्थिति और स्थानीयकरण की पुष्टि करने के लिए अतिरिक्त जांच करनी चाहिए-1गुर्दापॉप-ऑफ तकनीक के साथ ISH और TEM का उपयोग करना। CPPV-1 ISH-immunoreactivity सभी मछली पकड़ने वाली बिल्लियों में सकारात्मक थी और इसके केंद्रक में व्यापक रूप से स्थानीयकृत थी।गुर्देट्यूबलर उपकला कोशिकाएं, जहां ट्यूबलर घाव देखे गए थे (चित्र 2डी)। नकारात्मक नियंत्रणों में कोई प्रतिक्रिया नहीं देखी गई (S1 अंजीर।) ISH के सकारात्मक प्रतिरक्षाविज्ञानी संकेतों के परिणामों के अनुसार जो कि नाभिक में स्थानीयकृत हैंगुर्देउपकला कोशिकाओं, कई छोटे इलेक्ट्रॉन-घने वायरल कण, लगभग 19-22 एनएम व्यास में देखे गए थे। ये इनके नाभिक में समूहबद्ध थेवृक्क नलिकाकारऔर यूरोटेलियल कोशिकाएं (चित्र 3)।

मछली पकड़ने वाली बिल्ली सीपीपीवी का पता लगाना-1 और जीनोमिक विश्लेषणमुख्य रूप से, हर्पीसवायरस, पैरामाइक्सोवायरस, न्यूमोवायरस, कैलिसीवायरस, इन्फ्लूएंजा वायरस, बोकावायरस, कोरोनावायरस और परवोवायरस सहित विभिन्न वायरस के लिए विशिष्ट पैन-फ़ैमिली पीसीआर पैनल का परीक्षण वायरल न्यूक्लिक एसिड के नमूनों पर किया गया था। यह केवल आंत, लिम्फ नोड और में पैन-पार्वोवायरस पीसीआर के साथ सकारात्मक परिणाम प्रकट करता हैगुर्दामछली पकड़ने वाली तीन बिल्लियों के नमूने। इसके विपरीत, अन्य वायरस का पता लगाने के लिए अन्य पैन-पीसीआर सभी परीक्षण किए गए ऊतक नमूनों में नकारात्मक थे, सभी मछली पकड़ने वाली बिल्लियों में पैन-पार्वोवायरस पीसीआर सकारात्मकता के पहले प्राप्त परिणामों से, हमने आगे कई प्राइमर जोड़े का उपयोग करके दो मछली पकड़ने वाली बिल्लियों में कोडिंग जीनोम अनुक्रमों की विशेषता बताई। आंत से प्राप्त निकाले गए न्यूक्लिक एसिड के नमूने (केस नंबर 1) औरगुर्दा(मामला संख्या 3)। दो मछली पकड़ने वाली बिल्लियों सीपीपीवी -1 के पूर्ण कोडिंग जीनोम के 4,462 और 4,430 बेस पेयर का पता लगाया गया और उन्हें स्ट्रेन 19ZP004-TH/2019 (केस नंबर 1, परिग्रहण संख्या MW145540) और 19ZP नामित किया गया। {12}}TH/2019 (मामला संख्या 3, परिग्रहण संख्या MW145541), क्रमशः। आनुवंशिक विश्लेषण के बाद, संपूर्ण कोडिंग जीनोम ने सीपीपीवी के बीच आनुवंशिक रूप से समान परिणाम प्रकट किए -1 मछली पकड़ने वाली बिल्लियों से प्राप्त उपभेदों ने दिखाया कि ये मछली पकड़ने वाली बिल्ली सीपीपीवी -1 एफपीवी थे। सीपीपीवी -1 वेरिएंट और फिशिंग कैट एफपीवी के बीच अमीनो एसिड की तुलना तालिका 1 में वर्णित है। ध्यान दें, फिशिंग कैट एफपीवी ने संरचनात्मक (वीपी 1 और 2) प्रोटीन में I566M और M569R के अद्वितीय अमीनो एसिड उत्परिवर्तन का खुलासा किया। , जो पिछले CPPV-1 प्रकारों में नहीं पाए गए थे।

अंजीर 2. सीपीपीवी-1 मछली पकड़ने वाली बिल्लियों में संक्रमण। प्रदर्शनकारी एच एंड ई (ए), पीएएस धुंधला (बी), सीपीपीवी -1 आईएचसी (सी) और स्वस्थानी संकरण (आईएसएच) (डी) के फोटोमिकोग्राफगुर्दामछली पकड़ने वाली बिल्लियों से। (ए, बी) मछली पकड़ने वाली बिल्ली संख्या 3। (ए) मल्टीफोकलगुर्देरक्तस्राव के साथवृक्क नलिकाकारवेक्यूलेशन कुछ ट्यूबलर उपकला कोशिकाएं पाइकोनोटिक नाभिक (इनसेट, तीर) के साथ हाइपेरोसिनोफिलिक थीं। (बी)रेनल ट्यूबलरउपकला कोशिकाओं ने साइटोप्लाज्मिक रिक्तिका का प्रदर्शन किया और दुर्लभ उपकला कोशिकाओं के नाभिक नाभिकीय क्रोमेटिन के साथ vesiculate हैं। पीएएस धुंधला बरकरार तहखाने झिल्ली (इनसेट) पर प्रकाश डाला। (सी) मछली पकड़ने वाली बिल्ली नं। 2. सीपीपीवी-1 आईएचसी-प्रतिरक्षा सक्रियता (गहरा-भूरा रंग) में व्यापक रूप से देखा गया थागुर्दे की नलीऔर अक्सर के कोशिका द्रव्य में पाया जाता हैवृक्क नलिकाकारउपकला (इनसेट)। (डी) मछली पकड़ने वाली बिल्ली संख्या 1। CPPV-1 ISH-immunoreactively (लाल गुलाबी रंग) प्रचुर मात्रा में देखा गयागुर्दे की नली(तारांकन), और यह के नाभिक में स्थानीयकृत हैवृक्क नलिकाकारउपकला (इनसेट, तीर)। बार्स (ए, सी) के लिए 50 माइक्रोन और (बी, डी) के लिए 120 माइक्रोन का संकेत देते हैं।

Phylogenetic और विकासवादी विश्लेषणखोजी गई मछली पकड़ने वाली बिल्ली सीपीपीवी-1 और अन्य पहले प्रकाशित सीपीपीवी-1 जीनोम के बीच आनुवंशिक संबंध की तुलना करने के लिए, संपूर्ण कोडिंग जीनोम अनुक्रम पर आधारित फ़ाइलोजेनेटिक विश्लेषण आयोजित किया गया था। ML फ़ाइलोजेनेटिक ट्री ने दिखाया कि अधिकांश FPV, MEV और CPV ने समूहों के बीच एक बहुत ही अलग क्लैड का गठन किया (चित्र 4)। अध्ययन की गई मछली पकड़ने वाली बिल्लियों (लाल त्रिकोण द्वारा इंगित) से दो सीपीपीवी -1 जीनोम को विभिन्न मेजबानों से प्राप्त पहले से प्रकाशित एफपीवी अनुक्रमों के समान वंश के साथ एक साथ जोड़ा गया था, जो पुष्टि करता है कि प्राप्त

चित्र 3. सीपीपीवी-1 के नाभिक में वायरल कणवृक्क नलिकाकारउपकला कोशिकाएं। पॉप-ऑफ तकनीक का उपयोग करके ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (टीईएम)। इलेक्ट्रॉन-घने कणों (तीर) के क्लस्टरिंग का अल्ट्रास्ट्रक्चरल प्रदर्शन। आईकोसाहेड्रल कण का आकार 19–22 एनएम व्यास था जो के केंद्रक में स्थित थावृक्क नलिकाकारउपकला कोशिकाएं (इनसेट)। स्केल बार जैसा कि चित्र में दिखाया गया है।

मछली पकड़ने वाली बिल्ली CPPV-1s FPV थीं। पता चला जीनोम एक साथ क्लस्टर किए गए थे और थाईलैंड में घरेलू बिल्लियों में पाए गए एफपीवी जीनोम से सबसे अधिक निकटता से संबंधित थे (परिग्रहण संख्या एमएन127780)। मछली पकड़ने वाली बिल्ली सीपीपीवी -1 की विकास प्रक्रिया को और स्पष्ट करने के लिए, 224 सीपीपीवी -1 के डेटासेट पर कई पुनर्संयोजन का पता लगाने और विकासवादी विश्लेषण किए गए थे। पुनर्संयोजन विश्लेषण से पता चला कि मछली पकड़ने वाली बिल्ली CPPV-1 अनुक्रमों में कोई पुनर्संयोजन घटना नहीं पाई गई। इन आंकड़ों के विकासवादी पेड़ ने दो मुख्य अलग-अलग अलग-अलग समूहों को दिखाया (चित्र 5)। एक क्लैड में एफपीवी और एमईवी शामिल थे और दूसरे क्लैड में सभी सीपीवी सीक्वेंस शामिल थे। समग्र विकास दर का अनुमान 1.08 × 10−4 प्रतिस्थापन/साइट/वर्ष (95 प्रतिशत एचपीडी: 1.95-2.87 × 10−4) था। विकासवादी पेड़ ने दिखाया कि मछली पकड़ने वाली बिल्ली एफपीवी अनुक्रमों को एफपीवी के उसी वंश में क्लस्टर किया गया था जो थाईलैंड से अलग था। उन्होंने चीन में घरेलू बिल्लियों में पाए गए एफपीवी जीनोम के साथ अनुवांशिक विकास साझा किया है और 1 9 70 के आसपास से वही मूल हो सकता है।

बहस

CPPV-1 प्रकारों का प्रसार जिसमें CPV और FPV शामिल हैं, की पहचान घरेलू और जंगली मांसाहारी दोनों में की गई है। जबकि घरेलू कुत्तों और बिल्लियों में CPPV-1 का घातक संक्रमण आम है, यह संक्रमण छिटपुट रूप से जंगली मांसाहारी [46] में देखा जाता है। कई अध्ययनों ने संकेत दिया है कि कई जंगली मांसाहारी सीपीपीवी -1 संक्रमण के लिए अतिसंवेदनशील होते हैं, जिनमें जंगली फेलिड, मिंक, ऊदबिलाव, झालर, रैकून, लोमड़ी, भेड़िया, कोयोट, सिवेट और मार्टेंस [11, 19] शामिल हैं। विशेष रूप से जीनस प्रियनैलुरस के लिए, केवल तेंदुए की बिल्लियों को सीपीपीवी -1 वेरिएंट [9] से संक्रमित होने की सूचना मिली है। इस अध्ययन में, हम जंगली मछली पकड़ने वाली बिल्लियों (प्रियोनेलुरस विवरिनस) में सीपीपीवी -1 के सदस्य एफपीवी के प्राकृतिक संक्रमण का वर्णन करते हैं। यह पहली रिपोर्ट है जिसमें विशिष्ट वायरल वितरण और ट्रॉपिज़्म का वर्णन किया गया हैगुर्दे के ऊतकपीसीआर, आईएचसी, आईएसएच और अल्ट्रा-स्ट्रक्चर के टीईएम विश्लेषण का उपयोग करके एंटीजेनिक डिटेक्शन के माध्यम से पुष्टि की गई।

घरेलू और जंगली मांसाहारियों के बीच CPPV-1 प्रकारों के क्रॉस-प्रजाति संचरण को देखा गया है, और कुछ घातक CPPV-1 प्रकोपों ​​को आवासों के बीच रोगजनक स्पिलओवर से जुड़े होने का अनुमान लगाया गया है [9, 11]। वन्यजीवों के आवास के वर्तमान नुकसान के कारण, जंगली कॉलोनियां प्रवास कर रही हैं और घरेलू पशुओं के साथ आवास साझा कर रही हैं, जिसके कारण अतिसंवेदनशील जानवरों के बीच रोगज़नक़ फैलाव बढ़ गया है। इस अध्ययन में, हमने पाया कि मछली पकड़ने वाली बिल्ली सीपीपीवी -1 जीनोम में पाए गए एफपीवी उपभेदों के साथ एक विकासवादी पैटर्न साझा किया है।

अंजीर 4. Phylogenetic टोपोलॉजी मछली पकड़ने वाली बिल्ली CPPV -1 और अन्य CPPV -1 वेरिएंट के बीच पूर्ण-लंबाई वाले कोडिंग अनुक्रमों के आनुवंशिक संबंध को प्रकट करती है। फ़ाइलोजेनेटिक पेड़ ने दिखाया कि मछली पकड़ने वाली बिल्ली सीपीपीवी -1 अनुक्रम (लाल त्रिकोण द्वारा इंगित) को एफपीवी जीनोम के साथ एक साथ जोड़ा गया था, जो कि थाई बिल्ली (एमएन127780) में पाए गए एफपीवी जीनोम से संबंधित है। इस विश्लेषण में प्रयुक्त पहले वर्णित CPPV-1 अनुक्रमों के जेनबैंक परिग्रहण संख्याओं का संकेत दिया गया था।

थाईलैंड में घरेलू बिल्लियाँ। ये परिणाम 1970 के दशक से चीन में घरेलू बिल्लियों से अलग किए गए आम पूर्वजों से एफपीवी उपभेदों के समान विकासवादी पैटर्न दिखाते हैं। यह परिणाम घरेलू बिल्लियों और मछली पकड़ने वाली बिल्लियों के बीच क्रॉस-प्रजाति संचरण के संभावित सबूत या सीपीपीवी -1 वेरिएंट के सह-विकास का संकेत दे सकता है। हालांकि, एक ही आवास में मुक्त घूमने वाले जानवरों से प्राप्त नमूनों की सीमा और जांच की गई मछली पकड़ने वाली बिल्लियों की कम संख्या के कारण, इस अध्ययन में सीपीपीवी के प्राथमिक जलाशय -1 की पहचान नहीं की जा सकी और आगे की जांच की आवश्यकता है। . हालांकि कई अध्ययनों ने संकेत दिया है कि कैप्सिड जीन में विभिन्न अमीनो एसिड अवशेष नए मेजबानों को संक्रमित करने की क्षमता और सीपीपीवी की प्रतिजनता -1 [18, 47] दोनों से जुड़े हैं, एकल अमीनो एसिड उत्परिवर्तन 300 की स्थिति में है। कैप्सिड प्रोटीन (VP2) को कई मेजबान श्रेणियों [48] के लिए एक प्रमुख निर्धारक के रूप में सूचित किया गया है। इस अध्ययन में, मछली पकड़ने वाली बिल्लियों से प्राप्त सीपीपीवी -1 वैरिएंट ने उसी अमीनो एसिड पैटर्न का खुलासा किया जैसा कि एफपीवी अनुक्रमों में पाया जाता है, जिसमें एलानिन (ए) की उपस्थिति कैप्सिड स्थिति 300 पर एक प्रमुख अमीनो एसिड निर्धारक के रूप में होती है। जबकि सीपीपीवी के फिशिंग कैट कैप्सिड प्रोटीन -1 ने शतावरी (एन) और ऐलेनिन (ए) अमीनो एसिड को क्रमशः 564 और 568 की स्थिति में पाया (जिन्हें फेलिन होस्ट में एफपीवी प्रतिकृति के लिए महत्वपूर्ण माना जाता है), उनके पास था I566M और M569R पदों पर 2 अद्वितीय अमीनो एसिड म्यूटेशन। ये उत्परिवर्तन इस वायरस को पहले वर्णित CPPV-1 प्रकारों से अलग कर सकते हैं। पैतृक पुनर्निर्माण के पिछले विश्लेषण में पाया गया कि एफपीवी वीपी 2 जीन [49] में कुछ बदलावों के साथ अलग-अलग मांसाहारियों को संक्रमित कर सकता है। इस प्रकार, एफपीवी-जैसे पैरोवायरस को मछली पकड़ने वाली बिल्लियों में पाए जाने वाले संभावित उपन्यास वायरस के रूप में नामित किया गया था और यह इस प्रजाति में इस वायरस की पहली पहचान का समर्थन कर सकता है। हालांकि, अन्य अनुक्रमों की एक छोटी संख्या की तुलना में जांच की गई मछली पकड़ने वाली बिल्लियों की एक छोटी संख्या निश्चित व्याख्या नहीं दे सकती है। अधिक निश्चित निष्कर्ष निकालने के लिए इस पर और अध्ययन की आवश्यकता है।

मछली पकड़ने वाली बिल्ली सीपीपीवी-1 आंतों के उपकला कोशिकाओं और लिम्फोइड कोशिकाओं सहित विभिन्न ऊतकों में स्थानीयकरण देखे गए, जहां सीपीपीवी का सबसे आम ऊतक स्थानीयकरण -1 संक्रमण अन्य प्रजातियों में पाया जाता है [20, 26, 50, 51 ]. दिलचस्प बात यह है कि पीसीआर का उपयोग करते हुए वायरल जीनोमिक डिटेक्शन की प्रारंभिक जांच और आईएचसी का उपयोग करके वायरल स्थानीयकरण से पता चला हैगुर्दे के ऊतक, हमने सेलुलर वास्तुकला को प्रदर्शित करने के लिए पीएएस धुंधला प्रदर्शन कियावृक्क ऊतकऔर प्रणालीगत हाइपोक्सिया को ट्यूबलर नेक्रोसिस के संभावित कारण के रूप में बाहर करने के लिए। पीएएस धुंधला होने से पता चला कि सबसे ट्यूबलर बेसमेंट झिल्ली बरकरार थी, यह सुझाव देते हुए कि यह घाव प्रणालीगत हाइपोक्सिया [52] से उत्पन्न नहीं हो सकता है। हालांकि, अन्य कारण जैसे टॉक्सिन-प्रेरित ट्यूबलर नेक्रोसिस इस घाव का कारण बन सकते हैं। इस प्रकार, एफपीवी-जैसे परवोवायरस संक्रमण की भूमिका से जुड़ा हुआ हैगुर्दाघावों को अभी और जांच की जरूरत है। इसके अलावा, हमने वायरस के मौजूदा स्थानीयकरण को और स्पष्ट करने का प्रयास कियागुर्दा ऊतकउन क्षेत्रों में पॉप-ऑफ तकनीक [37] के साथ ISH और TEM का उपयोग करना जहां CPPV-1 IHC-immunoreactivity का पता चला था। के नाभिक में इलेक्ट्रॉन-घने कण देखे गए थेवृक्क नलिकाकारएपिथेलियल कोशिकाएं और यूरोटेलियल कोशिकाएं, सीपीपीवी की सकारात्मक इन सीटू प्रतिरक्षण क्षमता का समर्थन करती हैं-1गुर्दा ऊतक. एफपीवी-संक्रमित बिल्लियाँ मुख्य रूप से मल में वायरस बहाती हैं, लेकिन मूत्र में सक्रिय वायरस की उपस्थिति का वर्णन किया गया है [53, 54]। हाल के अध्ययनों ने संकेत दिया है कि parvovirus संक्रमण की भूमिका हैवृक्कीय विफलता[55]। हालांकि, एफपीवी और सीपीवी समकक्ष का स्थानीयकरणगुर्दा ऊतकपहले जांच नहीं की गई है। इसके अलावा, एक माउसगुर्दापार्वोवायरस (एमकेपीवी) एक नेफ्रोट्रोपिक वायरस साबित हुआ है, जिसमें संक्रमित और स्थानीयकृत करने के लिए एक समानता दिखा रहा है।वृक्क नलिकाकारउपकला कोशिकाएं, जिसके परिणामस्वरूपगुर्दा रोग [56, 57].

हमारे ज्ञान के आधार पर, CPPV-1 में स्थानीयकरणगुर्देपहले वर्णित नहीं किया गया है। यह इस प्रजाति में एक अद्वितीय वायरल स्थानीयकरण के उपन्यास विवरण का सुझाव देता है या भले ही यह एफपीवी-संक्रमित बिल्लियों में पाया जा सकता है। यह खोज पिछले अध्ययनों का समर्थन कर सकती है जिसमें मूत्र में एफपीवी पाया गया था। अद्वितीय रोग संबंधी निष्कर्ष व्यक्तिपरक हो सकते हैं और व्यक्तियों में संक्रमण के रूप में देखे जा सकते हैं। इस प्रकार, मछली पकड़ने वाली बिल्ली सीपीपीवी की बड़े पैमाने पर जांच -1 एक निश्चित व्याख्या की सुविधा प्रदान करेगी। इसके अलावा, नमूने जो ज्यादातर मृत जानवरों से प्रस्तुत किए गए थे और पहले से ही पोस्टमॉर्टम ऑटोलिसिस से गुजर चुके थे, इन जानवरों से आगे के अंग संग्रह के लिए उपयुक्त नहीं हैं। इस प्रकार हम अन्य अंगों में वायरल स्थानीयकरण का निर्धारण करने में सक्षम नहीं थे। मछली पकड़ने वाली बिल्ली सीपीपीवी -1 के असामान्य वायरल स्थानीयकरण का स्पष्टीकरण एक उपयोगी जांच होगी।

किडनी/गुर्दे की बीमारी में सुधार करेगा सिस्टांचे

CPPV-1 की पहचान विभिन्न जंगली मांसाहारियों में की गई है और यह घातक प्रकोपों ​​से जुड़ा हुआ है। इस अध्ययन में चिड़ियाघर-जंगली नमूनों में पूर्वव्यापी सीपीपीवी -1 का पता लगाने के नकारात्मक सबूत या तो अतिसंवेदनशील जानवरों के बीच निकट संपर्क या दूसरी ओर, लंबे समय तक नमूना भंडारण के परिणामस्वरूप हो सकते हैं जो जीनोमिक सामग्री की स्थिरता को प्रभावित करते हैं। इस अध्ययन में मछली पकड़ने वाली बिल्लियों के नश्वर संक्रमण से जुड़े सीपीपीवी -1 की उपन्यास पहचान इस कमजोर जानवर में एक उपन्यास, संभावित विषाणुजनित बीमारी के बारे में चिंता पैदा करती है। इसलिए, अन्य अतिसंवेदनशील पशु प्रजातियों के नुकसान को रोकने के लिए मछली पकड़ने वाली बिल्लियों में सीपीपीवी -1 के संचरण का और अध्ययन आवश्यक है। तदनुसार, सीपीपीवी -1 संक्रमणों को प्रबंधित करने के लिए रोकथाम रणनीतियों पर जोर दिया जाना चाहिए, न केवल इस प्रजाति में बल्कि मुक्त घूमने वाले घरेलू जानवरों में भी जो इस वायरस के संभावित मेजबान के रूप में काम कर सकते हैं।