अमूर्त

सिस्टैंच ट्यूबुलोसायह एक बहुमूल्य टॉनिक जड़ी बूटी है जिसका व्यापक रूप से पारंपरिक चीनी चिकित्सा में उपयोग किया जाता है। इचिनाकोसाइड और एक्टियोसाइड द्वारा दर्शाए गए फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड इसके मूल बायोएक्टिव पदार्थ हैं। इस शोध का उद्देश्य आधुनिक प्रसंस्करण मापदंडों को अनुकूलित करना हैसिस्टैंच ट्यूबुलोसाइचिनाकोसाइड और एक्टियोसाइड की पैदावार में सुधार करने के लिए काढ़े के टुकड़े, और सेलुलर स्तर पर इसके एंटी-ऑक्सीडेटिव-तनाव और एंटी-इंफ्लेमेटरी तंत्र का पता लगाएं।

एकल-कारक प्रयोग किए गए, इसके बाद प्रभावशाली कारकों के रूप में स्लाइस की मोटाई, भाप लेने का समय और सुखाने के तापमान के साथ बॉक्स-बेनकेन प्रतिक्रिया-सतह अनुकूलन किया गया। दो मार्कर यौगिकों की सामग्री का पता लगाने के लिए उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (एचपीएलसी) को अपनाया गया था। औषधीय गतिविधियों का आकलन करने के लिए LPS-प्रेरित RAW264.7 मैक्रोफेज चोट मॉडल का निर्माण किया गया था। प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियां (आरओएस), नाइट्रिक ऑक्साइड (एनओ), मैलोनडायल्डिहाइड (एमडीए), एसओडी, सीएटी, एलडीएच और ग्लूटाथियोन (जीएसएच) सामग्री सहित एंटीऑक्सीडेंट एंजाइमों की गतिविधियां निर्धारित की गईं। एलिसा का उपयोग प्रो-इंफ्लेमेटरी साइटोकिन्स टीएनएफ‑, आईएल-1 और आईएल-6 के स्राव स्तर का परीक्षण करने के लिए किया गया था। p38/AKT/JNK/NF-κB सिग्नलिंग मार्ग में प्रमुख प्रोटीनों की फॉस्फोराइलेशन स्थिति का विश्लेषण करने के लिए वेस्टर्न ब्लॉट परख की गई।

इष्टतम प्रसंस्करण स्थितियाँ 0.6 सेमी की स्लाइस मोटाई, 6 मिनट की भाप लेने का समय और 57 डिग्री का सुखाने का तापमान थीं। इस स्थिति के तहत, एक्टियोसाइड की सामग्री 7.25% और इचिनाकोसाइड की सामग्री 31.62% तक पहुंच गई। अनुकूलित काढ़े के टुकड़ों से अर्क एलपीएस-उत्तेजित RAW264.7 कोशिकाओं में इंट्रासेल्युलर आरओएस, एनओ और एमडीए के अति-उत्पादन को काफी कम कर सकता है। इसने एसओडी, सीएटी, एलडीएच की गतिविधियों को बढ़ाया और इंट्रासेल्युलर जीएसएच स्तर को बढ़ाया, इस बीच टीएनएफ‑, आईएल‑1 और आईएल‑6 की रिहाई को स्पष्ट रूप से रोक दिया। वेस्टर्न-ब्लॉट परिणामों ने संकेत दिया कि p-p38/p38, p-AKT/AKT, p-JNK/JNK और p-NF-κB/NF-κB का अर्क डाउन-रेगुलेटेड फॉस्फोराइलेशन अनुपात है।

अनुकूलित स्टीमिंग-सुखाने वाली प्रसंस्करण तकनीक मुख्य फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स की पुनर्प्राप्ति दर को प्रभावी ढंग से बढ़ा सकती हैसिस्टैंच ट्यूबुलोसा. काढ़े के टुकड़े p38/AKT/JNK/NF‑κB सिग्नलिंग मार्ग को बाधित करके एलपीएस-ट्रिगर सेल क्षति के खिलाफ एंटी-ऑक्सीडेटिव और एंटी-इंफ्लेमेटरी प्रभाव डालते हैं। यह अध्ययन मानकीकृत औद्योगिक प्रसंस्करण के लिए व्यावहारिक तकनीकी पैरामीटर प्रदान करता हैसिस्टैंच ट्यूबुलोसा, और इस हर्बल संसाधन से प्राप्त कार्यात्मक भोजन और न्यूट्रास्युटिकल उत्पादों के विकास के लिए प्रयोगात्मक साक्ष्य प्रदान करता है।

कीवर्ड: सिस्टैंच ट्यूबुलोसा; काढ़ा-टुकड़ा प्रसंस्करण प्रौद्योगिकी; एक्टियोसाइड; इचिनाकोसाइड; एंटी-ऑक्सीडेटिव तनाव; RAW264.7 मैक्रोफेज; p38/AKT/JNK/NF‑κB पाथवे

1 परिचय

सिस्टैंच ट्यूबुलोसा(शेंक) वाइट ओरोबैंचेसी परिवार से संबंधित है, और इसका औषधीय हिस्सा स्केल पत्तियों वाला सूखा मांसल तना है। चीन में, यह पौधा मुख्य रूप से उत्तर-पश्चिम के शुष्क क्षेत्रों में लगाया जाता है, जिसमें दक्षिणी झिंजियांग में सबसे बड़ा रोपण क्षेत्र है। एक प्रसिद्ध टॉनिक हर्बल दवा के रूप में, यह किडनी-यांग को टोन करने, सार और रक्त को फिर से भरने और कब्ज से राहत देने के लिए आंतों को नम करने का काम करता है। चिकित्सकीय रूप से, इसका उपयोग किडनी-यांग की कमी, सार-रक्त की अपर्याप्तता, बांझपन, कमर और घुटनों की पीड़ा और कमजोरी के साथ-साथ आंतों की सूखापन कब्ज के इलाज के लिए किया जाता है।

फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड, मुख्य रूप से इचिनाकोसाइड और एक्टियोसाइड, इसके प्राथमिक सक्रिय घटक हैंसिस्टैंच ट्यूबुलोसा. चीनी फार्माकोपिया आवश्यकताओं के अनुसार, योग्य कच्चे औषधीय सामग्रियों में इचिनाकोसाइड और एक्टियोसाइड की कुल सामग्री 1.50% से कम नहीं होनी चाहिए, जो महत्वपूर्ण गुणवत्ता मूल्यांकन संकेतक के रूप में कार्य करती है। पारंपरिक प्रसंस्करण दृष्टिकोण के लिएसिस्टैंच ट्यूबुलोसाअधिकतर भिगोने-नम करने, टुकड़े करने-सुखाने या वाइन-स्टीमिंग तरीकों को अपनाते हैं। बहुत सारे अध्ययन सक्रिय-घटक उपज में सुधार पर ध्यान केंद्रित करते हैं, जबकि जैविक-गतिविधि सत्यापन के साथ प्रसंस्करण-प्रौद्योगिकी अनुकूलन के संयोजन वाले शोध अपर्याप्त हैं।

ऑक्सीडेटिव तनाव कई चयापचय और सूजन संबंधी बीमारियों के लिए सामान्य रोगविज्ञान आधार के रूप में कार्य करता है। मौजूदा शोधों से साबित हुआ है कि कुल ग्लाइकोसाइड्स निकाले जाते हैंसिस्टैंच ट्यूबुलोसासूजन संबंधी प्रतिक्रिया को दबा सकता है और सेप्सिस वाले जानवरों में लीवर की चोट को कम करने के लिए Nrf2/HO-1 मार्ग को सक्रिय कर सकता है। इस जड़ी बूटी से लिगनेन ग्लाइकोसाइड अंश PI3K/AKT सिग्नलिंग को विनियमित करके मैक्रोफेज सूजन को कम कर सकते हैं। फिर भी, आधुनिक संसाधित काढ़े के टुकड़ों की औषधीय संपत्ति और इसके अंतर्निहित आणविक तंत्र को अभी भी और अन्वेषण की आवश्यकता है।

इस अध्ययन में, प्रसंस्करण वर्कफ़्लो को अनुकूलित करने के लिए स्लाइस की मोटाई, भाप लेने का समय और सुखाने के तापमान को चर के रूप में लेते हुए, एकल-कारक परीक्षणों के आधार पर बॉक्स-बेनकेन प्रतिक्रिया-सतह डिज़ाइन लागू किया गया था। इष्टतम तकनीकी पैरामीटर प्राप्त करने के बाद, एंटी-ऑक्सीडेटिव-तनाव और विरोधी-भड़काऊ क्षमता का मूल्यांकन करने और प्रासंगिक सिग्नलिंग तंत्र को विच्छेदित करने के लिए एलपीएस-प्रेरित RAW264.7 ऑक्सीडेटिव-क्षति सेल मॉडल स्थापित किया गया था। इस कार्य का उद्देश्य पायलट-स्केल उत्पादन के लिए स्थिर और संचालन योग्य प्रसंस्करण पैरामीटर प्रदान करना है, और इसके व्यापक उपयोग के लिए प्रयोगात्मक नींव रखना है।सिस्टैंच ट्यूबुलोसासंसाधन।

2। सामग्री और विधि

2.1 संयंत्र सामग्री, अभिकर्मक और उपकरण

ताजा मांसल तनेसिस्टैंच ट्यूबुलोसाशरद ऋतु में होटन, झिंजियांग से काटे गए थे। RAW264.7 माउस मोनोसाइट-मैक्रोफेज ल्यूकेमिया कोशिकाएं प्रोसेल लाइफ साइंस एंड टेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड (वुहान, चीन) से खरीदी गई थीं।

एचपीएलसी-ग्रेड एसीटोनिट्राइल और मेथनॉल मर्क कंपनी से प्राप्त किए गए थे। इचिनाकोसाइड (98% से अधिक या इसके बराबर) और एक्टियोसाइड (98% से अधिक या इसके बराबर) संदर्भ मानक बीजिंग नॉर्थ वेये मेट्रोलॉजी इंस्टीट्यूट द्वारा प्रदान किए गए थे। डाइमिथाइल सल्फ़ोक्साइड (डीएमएसओ) सिग्मा-एल्ड्रिच से खरीदा गया था। डीएमईएम उच्च-ग्लूकोज माध्यम, भ्रूण गोजातीय सीरम (एफबीएस), पेनिसिलिन-स्ट्रेप्टोमाइसिन डबल-एंटीबॉडी समाधान, बीसीए प्रोटीन मात्रा निर्धारण किट, एनओ, एमडीए, एसओडी, सीएटी, जीएसएच और एलडीएच के लिए परख किट, लिपोपॉलीसेकेराइड (एलपीएस), एमटीटी अभिकर्मक और सूजन साइटोकिन्स के लिए एलिसा किट सभी वाणिज्यिक उत्पाद थे।

प्रायोगिक उपकरणों में शिमदज़ु उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफ, रोटरी बाष्पीकरणकर्ता, चीनी-हर्ब पुलवेराइज़र, थर्मोस्टेटिक ब्लास्ट सुखाने ओवन, स्टीम कुकर, पूर्ण-तरंग दैर्ध्य माइक्रोप्लेट रीडर, इलेक्ट्रॉनिक विश्लेषणात्मक संतुलन, प्रशीतित सेंट्रीफ्यूज, जैव सुरक्षा कैबिनेट और उलटा ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप शामिल थे।

2.2 एकल-कारक प्रसंस्करण प्रयोग

ताजासिस्टैंच ट्यूबुलोसामांसल तनों को 0.2 सेमी, 0.4 सेमी, 0.6 सेमी, 0.8 सेमी, 1.0 सेमी और 1.2 सेमी की मोटाई वाले स्लाइस में काटा गया। स्लाइस को क्रमशः 3 मिनट, 6 मिनट, 9 मिनट, 12 मिनट, 15 मिनट, 18 मिनट और 21 मिनट तक भाप में पकाया गया, और कमरे के तापमान (25 डिग्री), 40 डिग्री, 50 डिग्री, 60 डिग्री, 70 डिग्री और 80 डिग्री सहित विभिन्न तापमान प्रवणताओं के तहत सुखाया गया। सूखे काढ़े के टुकड़े के नमूनों को कुचल दिया गया और बाद में पता लगाने के लिए 40-मेष छलनी के माध्यम से छलनी किया गया। व्यापक मूल्यांकन के लिए समग्र स्कोरिंग फार्मूला अपनाया गया: समग्र स्कोर=इचिनाकोसाइड सामग्री × 50% + एक्टियोसाइड सामग्री × 50%।

2.3 एक्टियोसाइड और इचिनाकोसाइड का एचपीएलसी निर्धारण

नमूना समाधान तैयार करना: 1.0 ग्राम पाउडर नमूने का सटीक वजन करें, 100 एमएल 50% मेथनॉल समाधान जोड़ें। 30 मिनट भिगोने के बाद, 40 मिनट के लिए अल्ट्रासोनिक निष्कर्षण किया गया। ठंडा करने के बाद 50% मेथनॉल के साथ वजन घटाने की पूर्ति की गई। एचपीएलसी इंजेक्शन से पहले सतह पर तैरनेवाला को 0.22 माइक्रोन माइक्रोपोरस झिल्ली द्वारा फ़िल्टर किया गया था।

एक्टियोसाइड और इचिनाकोसाइड का मिश्रित संदर्भ-मानक समाधान 50% मेथनॉल के साथ तैयार किया गया था और मानक-वक्र प्लॉटिंग के लिए क्रमिक सांद्रता में पतला किया गया था। क्रोमैटोग्राफ़िक स्थितियाँ: COSMOSIL C₁₈ क्रोमैटोग्राफ़िक कॉलम; मोबाइल-चरण प्रणाली में 0.1% फॉस्फोरिक एसिड जलीय घोल (ए) और एसीटोनिट्राइल (बी) शामिल था; डिटेक्शन वेवलेंथ 330 एनएम के रूप में सेट किया गया था; स्तंभ तापमान 35 डिग्री ; प्रवाह दर 1 एमएल/मिनट। लक्ष्य यौगिकों की मात्रात्मक गणना के लिए बाह्य-मानक विधि का उपयोग किया गया था।

2.4 बॉक्स‑बेनकेन रिस्पांस‑सतह प्रायोगिक डिजाइन

एकल-कारक प्रयोगात्मक परिणामों के अनुसार, स्लाइस की मोटाई (X₁), भाप लेने का समय (X₂) और सुखाने का तापमान (X₃) को स्वतंत्र चर के रूप में चुना गया था। एक्टियोसाइड सामग्री (Y₁, %) और इचिनाकोसाइड सामग्री (Y₂, %) प्रतिक्रिया मूल्यों के रूप में कार्य करती है। डिज़ाइन-एक्सपर्ट 13.0 सॉफ़्टवेयर का उपयोग परीक्षणों के कुल 17 समूहों के साथ तीन-कारक तीन-स्तरीय बॉक्स-बेनकेन प्रयोगात्मक योजना स्थापित करने के लिए किया गया था। मॉडल फिटिंग, विचरण विश्लेषण और पैरामीटर भविष्यवाणी सॉफ्टवेयर द्वारा पूरी की गई। वास्तविक उत्पादन संचालन के अनुरूप सैद्धांतिक इष्टतम मापदंडों को समायोजित करने के बाद तीन प्रतियों में व्यावहारिक सत्यापन प्रयोग किए गए।

2.5 सेल कल्चर और नमूना तैयार करना

अनुकूलित प्रसंस्करण स्थिति के तहत प्राप्त काढ़ा-टुकड़ा नमूना अर्क पाउडर में तैयार किया गया था। पाउडर को डीएमएसओ में घोल दिया गया और सेल प्रयोगों के लिए 10% एफबीएस और 1% पेनिसिलिन-स्ट्रेप्टोमाइसिन युक्त पूर्ण डीएमईएम माध्यम से पतला किया गया। RAW264.7 कोशिकाओं को 5% CO₂ के साथ 37 डिग्री पर आर्द्रीकृत इनक्यूबेटर में संवर्धित किया गया।

सेल व्यवहार्यता के लिए 2.6 एमटीटी परख

सेल सस्पेंशन को 8 × 10⁴ सेल/एमएल के सेल घनत्व पर 96-वेल प्लेटों में टीका लगाया गया था। समूहों को विलायक नियंत्रण समूह (0.1% डीएमएसओ), एलपीएस मॉडल समूह (1 यूजी/एमएल एलपीएस), और कई एकाग्रता समूहों के रूप में निर्धारित किया गया था।सिस्टैंच ट्यूबुलोसाअर्क (3.125, 6.25, 12.5, 25, 50, 100, 200, 400 यूजी/एमएल)। नमूनों के 2 घंटे पूर्व-ऊष्मायन के बाद, विलायक-नियंत्रण कुओं को छोड़कर 1 ug/mL की अंतिम सांद्रता वाला LPS जोड़ा गया और अगले 24 घंटों के लिए ऊष्मायन किया गया। 4 घंटे की प्रतिक्रिया के लिए एमटीटी समाधान (5 मिलीग्राम/एमएल) जोड़ा गया था। सतह पर तैरनेवाला हटाने के बाद, फॉर्मेज़ान क्रिस्टल को भंग करने के लिए डीएमएसओ जोड़ा गया था। सेल व्यवहार्यता की गणना करने के लिए माइक्रोप्लेट रीडर द्वारा 490 एनएम पर अवशोषण मूल्य का पता लगाया गया था। अनुवर्ती कार्यात्मक परीक्षणों के लिए सुरक्षित एकाग्रता सीमा का चयन किया गया था।

2.7 इंट्रासेल्युलर आरओएस मापन

RAW264.7 कोशिकाओं को प्रति कुएं 4 × 10⁵ कोशिकाओं के घनत्व पर 6-वेल प्लेटों में डाला गया था। दीवार से चिपकने के बाद, कोशिकाओं को ग्रेडिएंट-एकाग्रता के साथ पूर्व-उपचार किया गयासिस्टैंच ट्यूबुलोसा2 घंटे के लिए (12.5, 25, 50, 100 यूजी/एमएल) निकालें, फिर 24 घंटे के लिए 1 यूजी/एमएल एलपीएस द्वारा उत्तेजित करें। फ्लोरोसेंट जांच अभिकर्मक किट से इंट्रासेल्युलर आरओएस स्तर का पता लगाया गया। प्रतिदीप्ति तीव्रता उत्तेजना तरंग दैर्ध्य 488 एनएम और उत्सर्जन तरंग दैर्ध्य 525 एनएम के तहत दर्ज की गई थी।

2.8 एनओ, एमडीए, एसओडी, कैट, एलडीएच और जीएसएच का पता लगाना

ग्रिज़ विधि के माध्यम से कोई सामग्री का पता लगाने के लिए सेल-कल्चर सतह पर तैरनेवाला एकत्र किया गया था। कोशिकाओं को पूर्व-ठंडा पीबीएस से धोया गया और बर्फ पर रखा गया। इंट्रासेल्युलर सतह पर तैरनेवाला प्राप्त करने के लिए सेल लाइसेट को 5 मिनट के लिए 4 डिग्री के तहत 10 000 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज किया गया था। एमडीए सामग्री, एसओडी, सीएटी, एलडीएच और जीएसएच स्तर की एंजाइम गतिविधियों को किट विनिर्देशों के अनुसार सख्ती से मापा गया था। कुल-प्रोटीन सामान्यीकरण के लिए बीसीए विधि लागू की गई थी।

2.9 एलिसा प्रो-इंफ्लेमेटरी साइटोकिन्स का पता लगाना

RAW264.7 कोशिकाओं का 16 घंटे तक नमूना और LPS के साथ उपचार किया गया। कल्चर सतह पर तैरनेवाला एकत्र किया गया और 10 मिनट के लिए 10 000 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज किया गया। टीएनएफ‑, आईएल‑1 और आईएल‑6 की स्राव सांद्रता एलिसा किट द्वारा निर्धारित की गई थी।

2.10 वेस्टर्न ब्लॉट विश्लेषण

नमूनों और एलपीएस के 45 मिनट के हस्तक्षेप के बाद, आरआईपीए लिसीस बफर का उपयोग करके कुल सेलुलर प्रोटीन निकाला गया। बीसीए किट द्वारा प्रोटीन सांद्रता की मात्रा निर्धारित की गई। प्रोटीन के नमूने की समान मात्रा (प्रत्येक लेन के लिए 50 ग्राम) को विकृत किया गया, एसडीएस-पेज वैद्युतकणसंचलन द्वारा अलग किया गया और पीवीडीएफ झिल्ली पर स्थानांतरित किया गया। मेम्ब्रेन को 1 घंटे के लिए 5% स्किम-मिल्क टीबीएसटी समाधान के साथ अवरुद्ध किया गया था, फिर 4 डिग्री पर रात भर प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ ऊष्मायन किया गया था। टीबीएसटी से बार-बार धोने के बाद, माध्यमिक एंटीबॉडी को 1 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर ऊष्मायन किया गया था। लक्ष्य प्रोटीन बैंड की कल्पना ईसीएल केमिलुमिनसेंस अभिकर्मक द्वारा की गई थी। फॉस्फोराइलेशन-प्रोटीन/कुल-प्रोटीन अनुपात की गणना के लिए बैंड ग्रे-स्केल विश्लेषण आयोजित किया गया था।

2.11 सांख्यिकीय विश्लेषण

ग्राफ़ प्लॉटिंग और सांख्यिकीय विश्लेषण के लिए ग्राफपैड प्रिज्म 8.0.2 सॉफ़्टवेयर का उपयोग किया गया था। डेटा तुलना के लिए वन-वे एनोवा और टी-टेस्ट को अपनाया गया।P < 0.05 represented statistically significant difference; P < 0.01 and P < 0.001 stood for higher significance. All experimental data were expressed as mean ± standard deviation (\(\bar{x}\pm s\)).

3. परिणाम

3.1 एकल-कारक प्रायोगिक परिणाम

स्लाइस की मोटाई लक्ष्य-ग्लाइकोसाइड सामग्री पर प्रमुख प्रभाव डालती है। 0.2 सेमी मोटाई के स्लाइस को अधिक भाप में पकाना आसान था, जिससे सक्रिय अवयवों का थर्मल अपघटन होता था। अधिक मोटे टुकड़ों ने आंतरिक सक्रिय पदार्थों की रिहाई में बाधा डाली। जब भाप लेने का समय 10 मिनट और सुखाने का तापमान 60 डिग्री तय किया गया था, तो एकल-कारक स्क्रीनिंग में 0.4 सेमी इष्टतम स्लाइस-मोटाई पैरामीटर था।

अपर्याप्त भाप लेने का समय पौधे-कोशिका संरचना को पूरी तरह से नष्ट नहीं कर सका और कम ग्लाइकोसाइड उपज का कारण बना। जब भाप लेने का समय 6 मिनट से अधिक हो गया, तो ऊतक का विघटन हुआ और इचिनाकोसाइड के साथ-साथ एक्टियोसाइड का भी क्षरण हुआ। 0.4 सेमी की निश्चित स्लाइस मोटाई और 60 डिग्री के सुखाने के तापमान के तहत, 6 मिनट सबसे अच्छी भाप-समय की स्थिति थी।

एक निश्चित सीमा के भीतर, सूखने वाले तापमान में वृद्धि के साथ-साथ फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड की सामग्री में वृद्धि हुई, फिर भी तापमान 60 डिग्री से अधिक होने पर गिरावट हुई। 0.4 सेमी की स्लाइस मोटाई और 6 मिनट के स्टीमिंग समय के साथ, 60 डिग्री ने एकल-कारक स्क्रीनिंग में सबसे अच्छा व्यापक प्रदर्शन दिखाया।

3.2 प्रतिक्रिया-सतह अनुकूलन और सत्यापन परीक्षण

विचरण विश्लेषण से पता चला कि एक्टियोसाइड और इचिनाकोसाइड सामग्री के लिए प्रतिगमन मॉडल महत्वपूर्ण थे (P < 0.05, P < 0.01). The lack‑of‑fit term was non‑significant (P >0.05), अच्छे मॉडल फिटिंग डिग्री का संकेत देता है। निर्धारण गुणांक R² 1 के करीब था, जो अनुमानित मूल्य और वास्तविक प्रयोगात्मक डेटा के बीच उच्च सहसंबंध साबित हुआ।

एक्टियोसाइड सामग्री के लिए कारकों का प्रभावशाली क्रम स्लाइस की मोटाई > सुखाने का तापमान > भाप लेने का समय था। इचिनाकोसाइड सामग्री के लिए, क्रम था भाप लेने का समय > सुखाने का तापमान > स्लाइस की मोटाई।

सॉफ़्टवेयर द्वारा गणना किए गए सैद्धांतिक इष्टतम पैरामीटर स्लाइस की मोटाई 0.600 सेमी, भाप लेने का समय 5.685 मिनट और सुखाने का तापमान 57.009 डिग्री थे। व्यावहारिक उत्पादन स्थिति को ध्यान में रखते हुए, मापदंडों को स्लाइस की मोटाई 0.6 सेमी, भाप देने का समय 6 मिनट और सुखाने का तापमान 57 डिग्री पर समायोजित किया गया था। समानांतर सत्यापन प्रयोगों के तीन समूहों ने 7.25% की एक्टियोसाइड सामग्री और 31.62% की इचिनाकोसाइड सामग्री प्राप्त की। व्यावहारिक मूल्य और सैद्धांतिक अनुमानित मूल्य के बीच विचलन क्रमशः 3.89% और 4.92% था, जिसने इस प्रतिक्रिया-सतह मॉडल की विश्वसनीयता को प्रदर्शित किया।

3.3 सेल व्यवहार्यता स्क्रीनिंग परिणाम

0-100 ug/mL सांद्रता सीमा के भीतर,सिस्टैंच ट्यूबुलोसाडेकोक्शन-पीस अर्क में RAW264.7 कोशिकाओं पर कोई स्पष्ट साइटोटॉक्सिसिटी नहीं थी और मामूली प्रसार-प्रचार प्रभाव प्रदर्शित किया गया था। जब सांद्रता 200 ug/mL और उससे अधिक तक पहुंच गई, तो सेल व्यवहार्यता में काफी कमी आई। इसलिए, 12.5 ug/mL, 25 ug/mL, 50 ug/mL और 100 ug/mL को बाद के सेल प्रयोगों के लिए कार्यशील सांद्रता के रूप में चुना गया था।

3.4 इंट्रासेल्युलर आरओएस स्तर पर प्रभाव

विलायक-नियंत्रण समूह की तुलना में, एलपीएस मॉडल समूह ने उल्लेखनीय रूप से उन्नत इंट्रासेल्युलर आरओएस प्रतिदीप्ति तीव्रता प्रदर्शित की (P < 0.001), proving the successful establishment of oxidative‑stress injury model. Pretreatment of सिस्टैंच ट्यूबुलोसाअर्क ने खुराक पर निर्भर तरीके से अत्यधिक आरओएस संचय को कम किया (P < 0.001 versus model group).

3.5 एनओ, एमडीए और एंटीऑक्सीडेंट-संबंधित संकेतकों पर विनियमन

एलपीएस उत्तेजना ने RAW264.7 कोशिकाओं में NO और MDA सामग्री में तेज वृद्धि को प्रेरित किया। एलपीएस मॉडल समूह की तुलना में, अर्क हस्तक्षेप ने खुराक-निर्भर प्रवृत्ति के साथ एनओ स्तर को काफी कम कर दिया है {{2%) यूजी/एमएल अर्क ने एमडीए सामग्री पर स्पष्ट प्रभाव नहीं डाला, जबकि 25‑100 यूजी/एमएल अर्क ने एमडीए एकाग्रता में उल्लेखनीय रूप से कमी की है (P < 0.001).

एलपीएस उपचार के बाद, एसओडी, सीएटी, एलडीएच और इंट्रासेल्युलर जीएसएच सामग्री की गतिविधियों में उल्लेखनीय रूप से कमी आई है। यूजी/एमएल अर्क सीएटी और एलडीएच गतिविधियों में सुधार किए बिना एसओडी गतिविधि को बढ़ा सकता है। 25‑100 ug/mL की सांद्रता पर अर्क, एकाग्रता-निर्भर तरीके से एसओडी, सीएटी, एलडीएच एंजाइम गतिविधियों और जीएसएच सामग्री को काफी बढ़ा देता है।

3.6 प्रो-इंफ्लेमेटरी साइटोकिन स्राव पर निरोधात्मक प्रभाव

एलपीएस उत्तेजना ने RAW264.7 मैक्रोफेज में TNF‑, IL‑1 और IL‑6 की बड़े पैमाने पर रिहाई शुरू कर दी।सिस्टैंच ट्यूबुलोसाडेकोक्शन-टुकड़ा अर्क प्री-ट्रीटमेंट ने उपर्युक्त तीन प्रो-इंफ्लेमेटरी साइटोकिन्स के स्राव को उल्लेखनीय रूप से दबा दिया (P < 0.001), presenting prominent dose‑dependent anti‑inflammatory property.

3.7 p38/AKT/JNK/NF‑κB सिग्नलिंग पाथवे पर मॉड्यूलेशन

विलायक-नियंत्रण समूह की तुलना में, एलपीएस हस्तक्षेप ने पी-पी38/पी38, पी-एकेटी/एकेटी, पी-जेएनके/जेएनके और पी-एनएफ-κबी/एनएफ-κबी के फॉस्फोराइलेशन अनुपात में वृद्धि की। मध्यम और उच्च खुराक निकालने वाले समूहों ने पी-पी38/पी38 और पी-जेएनके/जेएनके अनुपात को काफी कम कर दिया। सभी सांद्रता समूहों ने p-AKT/AKT और p-NF-κB/NF-κB स्तर को नीचे नियंत्रित किया (P < 0.05 or P < 0.001). Results illustrated that optimized सिस्टैंच ट्यूबुलोसाडेकोक्शन-पीस अर्क ने प्रोटीन फॉस्फोराइलेशन को रोककर p38/AKT/JNK/NF-κB सिग्नलिंग मार्ग की सक्रियता को रोक दिया।

4. चर्चा

के लिए वर्तमान प्रसंस्करण आवश्यकताएँसिस्टैंच ट्यूबुलोसाचीनी फार्माकोपिया में दर्ज केवल सटीक मात्रात्मक मापदंडों के बिना गुणात्मक संचालन चरणों का वर्णन करता है। पिछले शोधों से संकेत मिलता है कि विभिन्न प्रसंस्करण विधियों से कच्चे और संसाधित के बीच रासायनिक संरचना और औषधीय गतिविधि में काफी अंतर होगासिस्टैंच ट्यूबुलोसानमूने. प्रसंस्कृत उत्पाद कच्चे माल की तुलना में बेहतर एंटीऑक्सीडेंट और प्रतिरक्षा-नियामक प्रदर्शन दिखाते हैं।

इस शोध में, प्रतिक्रिया-सतह पद्धति के माध्यम से अनुकूलित आधुनिक स्टीमिंग-सुखाने प्रसंस्करण ने कई पारंपरिक प्रसंस्करण तकनीकों की तुलना में इचिनाकोसाइड और एक्टियोसाइड की बहुत अधिक उपज प्राप्त की। यह सुझाव देता है कि स्लाइस की मोटाई, भाप लेने की अवधि और सुखाने के तापमान पर सटीक नियंत्रण प्रभावी ढंग से फेनिलएथेनॉइड-ग्लाइकोसाइड सामग्री को बनाए रख सकता है और सुधार सकता है।सिस्टैंच ट्यूबुलोसा.

ऑक्सीडेटिव तनाव और सूजन बारीकी से जुड़ी हुई रोग प्रक्रियाएं हैं। अत्यधिक आरओएस लिपिड पेरोक्सीडेशन और एमडीए संचय को जन्म देता है; इस बीच यह डाउनस्ट्रीम इंफ्लेमेटरी कैस्केड को सक्रिय करता है और एनओ और मल्टीपल प्रो-इंफ्लेमेटरी साइटोकिन्स के उत्पादन को बढ़ावा देता है। सूजन मध्यस्थ आरओएस उत्पादन को और तेज करते हैं और एक दुष्चक्र बनाते हैं। हमारे सेलुलर प्रयोगात्मक परिणामों ने प्रदर्शित किया कि यह अनुकूलित हैसिस्टैंच ट्यूबुलोसाडेकोक्शन-टुकड़ा अर्क अनावश्यक आरओएस को खत्म कर सकता है, ऑक्सीडेटिव-क्षति मार्कर एनओ और एमडीए को कम कर सकता है, एसओडी, सीएटी, एलडीएच द्वारा दर्शाए गए एंटीऑक्सीडेंट एंजाइम सिस्टम की गतिविधि को बहाल कर सकता है और इंट्रासेल्यूलर जीएसएच को भर सकता है, साथ ही स्पष्ट खुराक-प्रभाव संबंध के साथ प्रो-इंफ्लेमेटरी साइटोकिन्स की रिहाई को रोक सकता है।

p38, MAPK परिवार से संबंधित JNK और AKT‑NF‑κB अक्ष कोर सिग्नल-ट्रांसडक्शन हब हैं जो मैक्रोफेज ऑक्सीडेटिव-भड़काऊ प्रतिक्रिया की मध्यस्थता करते हैं। एलपीएस उत्तेजना पी38, जेएनके और एकेटी के फॉस्फोराइलेशन को बढ़ावा देती है, एनएफ-κबी को और सक्रिय करती है और कई प्रो-इंफ्लेमेटरी जीन के प्रतिलेखन को प्रेरित करती है। वेस्टर्न-ब्लॉट डेटा से यह पता चलासिस्टैंच ट्यूबुलोसाडेकोक्शन-टुकड़ा अर्क ने p38, JNK, AKT और NF-κB के फॉस्फोराइलेशन सक्रियण को अवरुद्ध कर दिया। यह अनुमान लगाया गया है कि अनुकूलित प्रसंस्करण से उच्च सामग्री इचिनाकोसाइड और एक्टियोसाइड संयुक्त रूप से p38/AKT/JNK/NF‑κB सिग्नलिंग कैस्केड को दबाने में योगदान करते हैं, ताकि RAW264.7 मैक्रोफेज में LPS के कारण होने वाले ऑक्सीडेटिव-तनाव और सूजन की चोट से राहत मिल सके।

इस अध्ययन में अभी भी सीमाएँ मौजूद हैं। सभी औषधीय मूल्यांकन इन-विट्रो सेल मॉडल पर पूरे किए गए। संसाधित की इन-विवो प्रभावकारिता और चयापचय विशेषताओं को सत्यापित करने के लिए आगे पशु-स्तरीय प्रयोगों की आवश्यकता हैसिस्टैंच ट्यूबुलोसाकाढ़े के टुकड़े.

निष्कर्ष में, इस अध्ययन ने मात्रात्मक और स्केलेबल आधुनिक प्रसंस्करण प्रौद्योगिकी की स्थापना कीसिस्टैंच ट्यूबुलोसाकाढ़े के टुकड़े. स्लाइस की मोटाई 0.6 सेमी, भाप लेने का समय 6 मिनट और सुखाने का तापमान 57 डिग्री के प्रसंस्करण मापदंडों के तहत, मुख्य फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड की सामग्री में काफी सुधार होता है। प्रसंस्कृत काढ़े के टुकड़े p38/AKT/JNK/NF‑κB सिग्नलिंग मार्ग को बाधित करके LPS-उत्तेजित RAW264.7 मैक्रोफेज में ऑक्सीडेटिव-तनाव और सूजन संबंधी क्षति को कम कर सकते हैं। यह शोध औद्योगिक उत्पादन के लिए व्यावहारिक तकनीकी संदर्भ प्रदान करता है, और झिंजियांग मूल के कार्यात्मक-खाद्य और आहार-पूरक उत्पादों को विकसित करने के लिए प्रयोगात्मक आधार प्रदान करता है।सिस्टैंच ट्यूबुलोसा.

स्वीकृतियाँ

इस कार्य को झिंजियांग कृषि विज्ञान अकादमी (xjnkq‑2022022) और झिंजियांग "तियान्ची डॉक्टर प्रोग्राम" (2021) के युवा विज्ञान और प्रौद्योगिकी बैकबोन इनोवेशन कैपेसिटी कल्टीवेशन प्रोजेक्ट द्वारा समर्थित किया गया था।

संदर्भ

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