भाग 1|एक्यूट किडनी इंजरी सब-फेनोटाइप्स के विकास में जेनेटिक वेरिएशन प्लाज़्मा एंजियोपोइटिन को प्रभावित करता है-2

पवन के. भत्राजू1,2*, मैक्स कोहेन1, रयान जे. नागाओ3,4, एरिक डी. मोरेल1, सुज़ाना कोसामो1, शिन-या चाई1, रॉबिन नैन्स5, विक्टोरिया दिमित्रको1, जोसेफ डेलाने5, जेसन डी. क्रिस्टी6, कैथलीन डी. लियू7, कारमेन मिकासेनिक1, सिना ए. ग़रीब1, डब्ल्यू. कोनराड लिलेस8, यिंग झेंग3,4, डेविड सी. क्रिस्टियानी9,10, जोनाथन हिमेलफ़ार्ब2 और मार्क एम. वुर्फ़ेल1,2

सार

पार्श्वभूमि:हमने पहले दो की पहचान की थीतीव्रगुर्दाचोट(AKI) उप-फेनोटाइप (AKI-SP1 और AKI-SP2) खराब नैदानिक ​​​​परिणामों के विभिन्न जोखिमों और वैसोप्रेसर थेरेपी की प्रतिक्रियाओं के साथ। एंडोथेलियल डिसफंक्शन के प्लाज्मा बायोमार्कर (ट्यूमर नेक्रोसिस फैक्टर रिसेप्टर -1, एंजियोपोइटिन -1, और 2) ने AKI उप-फेनोटाइप को विभेदित किया।

हालाँकि, यह अज्ञात है कि क्या ये बायोमार्कर AKI उप-फेनोटाइप के विकास में केवल मार्कर या कारण मध्यस्थ हैं।

तरीके:हमने के भीतर एकल-न्यूक्लियोटाइड बहुरूपताओं के बीच संघों के लिए परीक्षण कियाएंजियोपोइटिन-1, एंजियोपोइटिन-2,तथाट्यूमर नेक्रोसिस फैक्टर रिसेप्टर 1Aयूरोपीय वंश के 421 गंभीर रूप से बीमार विषयों में जीन और AKI-SP2। शीर्ष-प्रदर्शन एकल-न्यूक्लियोटाइड बहुरूपता (FDR <0.05) को="" सिस-बायोमार्कर="" अभिव्यक्ति="" के="" लिए="" परीक्षण="" किया="" गया="" था="" और="" क्या="" aki-sp2="" के="" लिए="" आनुवंशिक="" जोखिम="" को="" परिसंचारी="" बायोमार्कर="" के="" माध्यम="" से="" मध्यस्थ="" किया="" गया="" है।="" हमने="" मानव="" किडनी="" माइक्रोवैस्कुलर="" एंडोथेलियल="" कोशिकाओं="" का="" उपयोग="" करके="" इन="" विट्रो="" अध्ययन="" भी="" पूरा="" किया।="" अंत="" में,="" हमने="" 20="" अलग-अलग="" समय="" पर="" मूत्र="" संग्रह="" का="" उपयोग="" करके="" प्लाज्मा="" बायोमार्कर="" के="" गुर्दे="" की="" निकासी="" की="" गणना="">

परिणाम:एक आनुवंशिक प्रकार, rs2920656C > T, निकटANGPT2AKI-SP2 (विषम अनुपात, 0.45; 95 प्रतिशत CI, 0.31–0.66; समायोजित FDR=0.003) के कम जोखिम से जुड़ा था ) और प्लाज्मा एंजियोपोइटिन में कमी -2 (p = 0.002)। कारण अनुमान विश्लेषण से पता चला है कि प्रत्येक छोटे एलील (टी) के लिए AKI-SP2 विकसित होने का जोखिम 16 प्रतिशत कम हो जाता है। प्लाज्मा एंजियोपोइटिन -2 ने AKI-SP2 के लिए rs2920656 संबंधित जोखिम के 41.5 प्रतिशत की मध्यस्थता की। rs2920656 के टी एलील को ले जाने वाली मानव किडनी माइक्रोवास्कुलर एंडोथेलियल कोशिकाएं एंजियोपोइटिन के संख्यात्मक रूप से निम्न स्तर का उत्पादन करती हैं -2 हालांकि यह सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण नहीं था (p = 0.07)। अंत में, विश्लेषणों ने प्रदर्शित किया कि गंभीर रूप से बीमार विषयों में एंजियोपोइटिन -2 वास्तव में न्यूनतम रूप से साफ हो गया है।

निष्कर्ष:आनुवंशिक मध्यस्थता विश्लेषण सहायक साक्ष्य प्रदान करता है कि एंजियोपोइटिन-2 AKI-SP2 के जोखिम में एक कारण भूमिका निभाता है।

कीवर्ड: तीक्ष्ण गुर्दे की चोट, जेनेटिक्स, एंडोथेलियम

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पार्श्वभूमि

तीव्रगुर्दाचोट(AKI) गहन देखभाल इकाई (ICU) में भर्ती 40-60 प्रतिशत रोगियों को प्रभावित करता है और खराब अल्पकालिक और दीर्घकालिक परिणामों में योगदान देता है। आज तक के आनुवंशिक अध्ययनों ने आनुवंशिक वेरिएंट और AKI की तुलना मामलों (AKI) से नियंत्रण (कोई AKI) के जोखिम के बीच संघों पर ध्यान केंद्रित किया है। हालाँकि, यह ढांचा सीमित हो सकता है क्योंकि के मामलेतीव्रगुर्दाचोटविभिन्न अवक्षेपण और जैव-वैज्ञानिक प्रोफाइल के साथ अत्यधिक विषम हैं। नमूना आकार को अधिकतम करने के लिए ऐसे AKI रोगियों को मिलाने से आनुवंशिक सांख्यिकीय संकेतों का कमजोर पड़ना हो सकता है जो केवल AKI आबादी के एक पैथोफिज़ियोलॉजिकल रूप से अलग उपसमुच्चय में मौजूद हो सकते हैं। एक और सीमा यह है कि गंभीर रूप से बीमार आबादी में एकेआई अक्सर गंभीर अपमान की जटिलता होती है, जैसे सेप्सिस, सर्जरी, शॉक, निमोनिया और आघात। के विकास के बिना नियंत्रणों का उपयोगतीव्रगुर्दाचोटसमस्याग्रस्त हो सकता है। एक उच्च-जोखिम वाले आनुवंशिक संस्करण को ले जाने वाले नियंत्रण AKI विकसित नहीं कर सकते हैं यदि वे मामलों के समान तीव्र अपमान का अनुभव नहीं करते हैं, और इस प्रकार गैर-मामलों के रूप में वर्गीकृत किया जाएगा, जो किसी भी संभावित संघ संकेत को दर्शाता है। आनुवंशिक संघ के अध्ययन में जैविक रूप से अलग AKI उप-फेनोटाइप का उपयोग विशेष रूप से AKI आबादी पर ध्यान केंद्रित करके और दो जैविक रूप से अलग उप-फेनोटाइप की तुलना करके AKI फेनोटाइपिंग में पूर्व सीमाओं पर काबू पाता है।

हमने हाल ही में दो स्वतंत्र गंभीर रूप से बीमार AKI आबादी में 29 नैदानिक ​​और बायोमार्कर चर के एक पैनल में गुप्त वर्ग विश्लेषण पद्धति को लागू करके दो AKI उप-फेनोटाइप्स (AKI-SP1 और AKI-SP2) की पहचान की है। विशेष रूप से, AKI-SP2 की तुलना में AKI-SP2 खराब अस्पताल परिणामों (जैसे मृत्यु दर, नई डायलिसिस, और 7-दिन गुर्दे की गैर-वसूली) से जुड़ा था। हमने अगली बार इन एकेआई उप-फेनोटाइप को पहले से पूर्ण किए गए बहु-केंद्र यादृच्छिक नियंत्रण परीक्षण, वैसोप्रेसिन बनाम नोरेपीनेफ्राइन इन्फ्यूजन इन पेशेंट्स विद सेप्टिक शॉक (VASST) में पहचाना। VASST परीक्षण ने अध्ययन किया कि क्या वैसोप्रेसर थेरेपी के विकल्प से सेप्टिक शॉक वाले विषयों में मृत्यु दर में सुधार हुआ है। जबकि क्लिनिकल परीक्षण में एकेआई आबादी में वैसोप्रेसर थेरेपी से मृत्यु दर में कोई अंतर नहीं था, एकेआई-एसपी1 में वैसोप्रेसिन के साथ मृत्यु दर में एकेआई-एसपी2 की तुलना में मृत्यु दर में कोई अंतर नहीं था। हमारे ज्ञान के लिए, गंभीर रूप से बीमार में उपचार उत्तरदायी एकेआई उप-समूहों की पहचान करने का यह पहला उदाहरण है।

विशेष रूप से, कोई भी एकल चर AKI-SP2 (तालिका 1) की पहचान करने के लिए अन्य चरों की तुलना में सांख्यिकीय रूप से बेहतर नहीं था। इसके विपरीत, प्लाज्मा एंजियोपोइटिन -2 (एएनजी -2), एंजियोपोइटिन -1 (एएनजी -1), और घुलनशील ट्यूमर नेक्रोसिस फैक्टर रिसेप्टर {{8 }} (sTNFR-1), में अंतर करने के लिए इष्टतम भविष्य कहनेवाला प्रदर्शन थातीव्रगुर्दाचोटउप-फेनोटाइप (सी-सांख्यिकी 0.93)। निचला ANG-2, निचला sTNFR-1, और उच्च ANG-1 AKI-SP2 के कम जोखिम से जुड़े थे। AKI के पशु मॉडल में अध्ययन से पता चला है कि ये प्लाज्मा बायोमार्कर में शामिल हैं

पैथोफिज़ियोलॉजी और एकेआई की गंभीरता। हालांकि, यह अज्ञात है कि क्या ये प्लाज्मा बायोमार्कर नैदानिक ​​के विकास में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैंतीव्रगुर्दाचोटउप-फेनोटाइप। कारण मार्करों की पहचान दवा के विकास के लिए लक्ष्य को सूचित कर सकती है ताकि विकास को रोका जा सके या उसका इलाज किया जा सकेतीव्रगुर्दाचोटगंभीर रूप से बीमार और रोगी जोखिम-स्तरीकरण में सहायता कर सकता है।

आनुवंशिक मध्यस्थता विश्लेषण कई कारण निष्कर्ष दृष्टिकोणों में से एक है जो संभावित तंत्र की पहचान कर सकता है जिसके द्वारा एक स्वतंत्र चर (उदाहरण के लिए, आनुवंशिक संस्करण) एक व्याख्यात्मक मध्यस्थ (जैसे, एंडोथेलियल डिसफंक्शन के बायोमार्कर) के माध्यम से परिणाम (जैसे, AKI उप-फेनोटाइप) को प्रभावित करता है। . रोग के कारण तंत्र को समझने के लिए इस दृष्टिकोण को नैदानिक ​​डेटा में व्यापक रूप से लागू किया गया है। हमने अनुमान लगाया कि सीआईएस -क्वांटिटेटिव ट्रेट लोकी (क्यूटीएल) मेंANGPT1, ANGPT2, और TNFRSF1Aजीन अपने संबंधित जैव-मार्करों (ANG-1, ANG-2, या sTNFR-1) के परिसंचारी स्तरों को विनियमित करके AKI उप-फेनोटाइप के विकास को प्रभावित करते हैं।

तरीकों

अध्ययन आबादी

हमने पहले संभावित रूप से एकत्र किए गए आईसीयू कोहोर्ट का उपयोग करके एकेआई उप-फेनोटाइप की पहचान की सूचना दी थी: एकल न्यूक्लियोटाइड पॉलीमॉर्फिज्म (एसएनपी) की पहचान जो परिवर्तित तीव्र फेफड़े की चोट के जोखिम (आईएसपीएएआर) की भविष्यवाणी करती है। आईएसपीएएआर जनसंख्या एक्यूट रेस्पिरेटरी डिस्ट्रेस सिंड्रोम (एआरडीएस) के जोखिम का जीनोम-वाइड केस-कंट्रोल अध्ययन है जिसमें एआरडीएस के साथ और बिना रोगियों को शामिल किया गया है। आईएसपीएएआर आबादी में पहले से पूर्ण यादृच्छिक नियंत्रण परीक्षणों और संभावित रूप से नामांकित आईसीयू समूह से विषयों को शामिल किया गया था। आईएसपीएएआर में नामांकित प्रत्येक आबादी के लिए अध्ययन डिजाइन का विवरण पहले वर्णित किया गया है; तीव्र फेफड़े की चोट (ALTA) के उपचार के लिए एल्ब्युटेरोल, द्रव और कैथेटर उपचार परीक्षण (FACTT), एंटरल ओमेगा -3 फैटी एसिड, गामा-लिनोलेनिक एसिड, और तीव्र फेफड़ों की चोट (ओमेगा) में एंटीऑक्सिडेंट पूरकता।

और मैसाचुसेट्स जनरल अस्पताल में एक्यूट रेस्पिरेटरी डिस्ट्रेस (MEA) की आणविक महामारी विज्ञान। आईएसपीएआर के भीतर, आईसीयू में प्रवेश के 48 घंटे बाद अध्ययन नामांकन हुआ। अध्ययन में नामांकन डीएनए और प्लाज्मा को जीनोटाइपिंग और बायोमार्कर विश्लेषण के लिए एकत्र किया गया था, इसके बादतीव्रगुर्दाचोटपता लगाना। AKI को सीरम क्रिएटिनिन (SCr) में 0.3 mg/dl या "बेसलाइन" SCr से 50 प्रतिशत से अधिक या उसके बराबर वृद्धि के रूप में परिभाषित किया गया था। बेसलाइन एससीआर को अध्ययन नामांकन से पहले न्यूनतम मूल्य के रूप में परिभाषित किया गया था। AKI को संशोधित मूत्र उत्पादन मानदंड (प्रत्येक 6 घंटे के बजाय दैनिक उत्पादन) का उपयोग करके भी परिभाषित किया गया था।

प्लाज्मा बायोमार्कर के गुर्दे की निकासी का निर्धारण करने के लिए, हमने हार्बरव्यू मेडिकल और सर्जिकल गहन देखभाल इकाइयों, क्रिटिकल इलनेस में एक संभावित कॉहोर्ट को नामांकित किया।तीव्रगुर्दाचोटकोहोर्ट (सीआईए)। विषय नामांकन के लिए पात्र थे यदि वे 4 में से 2 प्रणालीगत भड़काऊ प्रतिक्रिया सिंड्रोम मानदंडों को पूरा करते थे, तो नैदानिक ​​​​रूप से संदिग्ध संक्रमण था और जगह में एक मूत्र कैथेटर था। एक समयबद्ध मूत्र संग्रह पूरा किया गया जो कम से कम 2-4 घंटे तक चला और EDTA प्लाज्मा के नमूने समय पर मूत्र संग्रह की शुरुआत और अंत में एकत्र किए गए। क्लीयरेंस की गणना फॉर्मूला क्लीयरेंस का उपयोग करके की गई थी(X) = U(X) * V/ P(X), कहाँ पेU(X) विलेय की मूत्र सांद्रता का प्रतिनिधित्व करता हैX, V 2-4-एच संग्रह अवधि में मूत्र की मात्रा को इंगित करता है, औरP (X) विलेय की औसत प्लाज्मा सांद्रता का प्रतिनिधित्व करता हैX प्रारंभिक और अंतिम रक्त संग्रह से।

जीनोटाइपिंग रणनीति

इल्लुमिना 66 0 प्लेटफॉर्म (इलुमिना, सैन डिएगो, सीए) का उपयोग करके यूरोपीय वंश के 421 रोगियों में जीनोटाइपिंग किया गया था। नमूना कॉल दर फ़िल्टर> 0.97, मामूली एलील आवृत्ति (MAF)> 0.01 और SNP कॉल दर> 0.95 का उपयोग करके जीनोटाइप किए गए डेटा को गुणवत्ता नियंत्रित किया गया था। गुणवत्ता नियंत्रण के बाद, 238 एसएनपी ±50 किलोबासANGPT1, ANGPT2,तथाटीएनएफआरएसएफ1एपाया गया। लिंकेज डिसिपिलिब्रियम (LD) के बाद एक r . की छंटाई²{0}}.8 में से, 48 एसएनपी को हटा दिया गया, जिससे कुल 190 एसएनपी एसोसिएशन परीक्षणों में उपयोग किए गए। IMPUTE2 v2.3.0 का उपयोग करके 1000 जीनोम प्रोजेक्ट संदर्भ पैनल का उपयोग करके प्रतिरूपण किया गया था।

प्लाज्मा प्रोटीन मूल्यांकन

प्लाज्मा और मूत्र बायोमार्कर को इलेक्ट्रोकेमिलामिनसेंट इम्यूनोसे (मेसो स्केल डिस्कवरी (एमएसडी), रॉकविले, एमडी) का उपयोग करके मापा गया था, जैसा कि पहले वर्णित है। ईडीटीए-उपचारित बाँझ ट्यूबों में रक्त एकत्र किया गया था, मूत्र को बाँझ कंटेनरों में एकत्र किया गया था और दोनों को तुरंत सेंट्रीफ्यूज किया गया था। प्लाज्मा और मूत्र को तब अलग-अलग करके -80 डिग्री पर जमे हुए थे। नमूने अलग-अलग अवधि के लिए संग्रहीत किए गए थे लेकिन उन्हें एक ही बैच में पिघलाया गया था और इस अध्ययन के लिए बायोमार्कर माप चलाने के लिए केवल एक बार। हार्बर-व्यू पल्मोनरी रिसर्च लेबोरेटरीज में सभी बायोमार्कर माप डुप्लिकेट में किए गए थे।

सिलिको विश्लेषण में

क्यूटीएल प्रभावों की अभिव्यक्ति के लिए एसएनपी का परीक्षण करने के लिए, हमने जीनोटाइप-टिशू एक्सप्रेशन (जीटीईएक्स) पोर्टल की पूछताछ की।

कोश पालन

गर्भाधान के बाद 1 0 0 और 135 दिनों के बीच स्वैच्छिक गर्भावस्था में रुकावट के बाद मानव किडनी माइक्रोवास्कुलर एंडोथेलियल कोशिकाओं (HKME Cs) को भ्रूण के गुर्दे से शुद्ध किया गया था। रोगियों से भ्रूण के ऊतकों के उपयोग के लिए सूचित सहमति प्राप्त की गई थी। फिर हमने बेतरतीब ढंग से 9 अलग-अलग दाताओं एचकेएमईसी को चुना, 0.2 प्रतिशत जिलेटिन के साथ लेपित टी 25 फ्लास्क में आधा मिलियन कोशिकाओं को पिघलाया और चढ़ाया और ईबीएम -2 बेसल माध्यम में बनाए रखा जिसमें 1 प्रतिशत एंटीबायोटिक-एंटीमायोटिक (लाइफ टेक्नोलॉजीज), 10 प्रतिशत एफबीएस, 100 ug/mL ECGS, 50 ug/mL हेपरिन, और 20 ng/mL VEGF (R&D), 48 घंटे के लिए संगम तक। 48 घंटे में, हमने HKMECs से जीनोमिक डीएनए को शुद्ध किया और सेल सतह पर तैरनेवाला एकत्र किया गया। हमने 8 दाताओं से कोशिकाओं को सफलतापूर्वक जीनोटाइप किया।

सांख्यिकीय विश्लेषण

रोगी जनसांख्यिकीय चरों को या तो माध्य प्लस /−मानक विचलन या माध्यिका और चतुर्थक के रूप में सूचित किया जाता है। सबसे पहले, हमने एक एडिटिव जेनेटिक मॉडल (गोल्डन हेलिक्स, एमटी) का उपयोग करके AKI-SP1 की तुलना में 19 0 SNPs और AKI-SP2 के विकास के बीच संबंध के परीक्षण के लिए लॉजिस्टिक रिग्रेशन का उपयोग किया। हमारे मॉडल का उपयोग निम्नलिखित सहसंयोजकों के लिए किया गया था: आयु, लिंग, पूति, और पहले पांच प्रमुख घटक। आइजेनस्ट्रैट विधि v4.2 का उपयोग प्रमुख घटकों की गणना के लिए किया गया था और शीर्ष पांच को कोवरिएट्स के रूप में शामिल किया गया था। ऑड्स रेशियो (ORs) को 95 प्रतिशत कॉन्फिडेंस इंटरवल के साथ सूचित किया जाता है। जेनेटिक वेरिएंट और एकेआई सब-फेनोटाइप के बीच विश्लेषण के लिए, हमने बेंजामिनी-होचबर्ग झूठी खोज दर (एफडीआर) थ्रेशोल्ड <0.10 का="" उपयोग="" करके="" कई="" तुलनाओं="" के="" लिए="" सही="" किया,="" जो="" अनुमान="" लगाता="" है="" कि="" एफडीआर="" मूल्य="" के="" साथ="" या="" उससे="" नीचे="" के="" 10="" प्रतिशत="" से="" कम="" एसोसिएशन="" यह="" स्तर="" झूठे="" सकारात्मक="" हैं="" [31]।="" एक="" संवेदनशीलता="" विश्लेषण="" में,="" aki-sp2="" से="" जुड़े="" अतिरिक्त="" snps="" की="" पहचान="" करने="" के="" लिए="" एक="" प्रतिरूपित="" जीनोटाइप="" का="" उपयोग="" किया="" गया="">

दूसरा, हमने शीर्ष प्रदर्शन करने वाले एसएनपी और लॉग के बीच संबंध निर्धारित करने के लिए उम्र, लिंग और सेप्सिस के समायोजन के लिए रैखिक प्रतिगमन का उपयोग किया।₂परिवर्तित बायोमार्कर सांद्रता। तीसरा, हमने आनुवंशिक वेरिएंट और AKI-SP2 और प्लाज्मा बायोमार्कर सांद्रता द्वारा एसोसिएशन की संभावित मध्यस्थता के बीच संबंध का परीक्षण करने के लिए एक कारण अनुमान विश्लेषण पूरा किया। मध्यस्थता विश्लेषण STATA [32, 33] के लिए मध्यस्थता पैकेज में लागू संरचनात्मक समीकरण मॉडलिंग के गैर-रेखीय कार्यान्वयन का उपयोग करके किया गया था। ऑनलाइन पूरक में कारण अनुमान विश्लेषण का अतिरिक्त विवरण प्रदान किया गया है। चौथा, हमने लॉजिस्टिक रिग्रेशन के माध्यम से अधिकतम सीरम क्रिएटिनिन द्वारा मापे गए आनुवंशिक वेरिएंट और एकेआई गंभीरता के बीच संबंध निर्धारित किए। सामग्री और विधियों का अतिरिक्त विवरण ऑनलाइन पूरक में प्रदान किया गया है। विश्लेषण में, हमने 190 एसएनपी का मूल्यांकन किया और एक रूढ़िवादी का इस्तेमाल कियापी-वैल्यूका 0.05/190 =2.6 × 10^{− 4}. यह देखते हुए कि लगभग 40 आईसीयू रोगियों में एकेआई विकसित होता है, और एक अपेक्षित नियंत्रण (एकेआई-एसपी1) से केस (एकेआई-एसपी2) अनुपात 1.5, एक अपेक्षित नमूना आकार 421, और कम से कम एमएएफ का विकास होता है। {16}}.30, हमारे पास 1.5 या उससे अधिक के सापेक्ष जोखिम का पता लगाने के लिए 81 प्रतिशत शक्ति होगी [34]। STATA (संस्करण 15) और गोल्डनहेलिक्स (संस्करण 4.0) का उपयोग करके विश्लेषण पूरा किया गया। सभी अध्ययनों को वाशिंगटन विश्वविद्यालय में मानव विषय विभाग द्वारा अनुमोदित किया गया था। नामांकित सभी विषयों से लिखित सूचित सहमति प्राप्त की गई थी।

परिणाम

आबादी के लक्षण हमारे पिछले काम में सत्यापन समूह के 425 रोगियों में से 421 के पास जीनोटाइपिंग डेटा उपलब्ध था। जनसांख्यिकी और आधारभूत नैदानिक ​​विशेषताओं का वर्णन तालिका 1 में किया गया है। सभी विषय यूरोपीय वंश के थे। कुल 267 (63 प्रतिशत) को AKI-SP1 और 154 (37 प्रतिशत) को AKI-SP2 के रूप में वर्गीकृत किया गया था। AKI-SP2 विकसित करने वाले विषयों में प्रस्तुति पर बीमारी की गंभीरता अधिक थी (मतलब तीव्र शरीर विज्ञान और पुरानी स्वास्थ्य मूल्यांकन (APACHE) III स्कोर, 111 ± 26 बनाम 74 ± 24), सेप्सिस होने की अधिक संभावना थी (84 प्रतिशत बनाम 66 प्रतिशत), और AKI-SP1 की तुलना में वैसोप्रेसर्स (79 प्रतिशत बनाम 42 प्रतिशत) के साथ इलाज की संभावना अधिक थी।

ANGPT2 के पास आनुवंशिक भिन्नता, rs2920656, AKI-SP2 . के साथ संबद्ध है

190 SNPs ±50 जीन के किलोबेस, 72 ANGPT1 के पास थे, 100 ANGPT2 के पास थे, और 18 TNFRSF1A जीन के पास थे। हमने एक एसएनपी बैठक एफडीआर <0.05 की="" पहचान="" की="" जो="" एकेआई-एसपी1="" (तालिका="" 2="" और="" चित्र="" 1)="" की="" तुलना="" में="" एकेआई-एसपी2="" से="" जुड़ी="" थी।="" angpt1="" या="" tnfrsf1a="" (तालिका="" s2="" और="" s3)="" में="" या="" उसके="" पास="" snps="" के="" साथ="" कोई="" महत्वपूर्ण="" संबंध="" नहीं="" देखा="" गया।="" aki-sp2="" के="" लिए="" जोखिम="" के="" साथ="" सबसे="" मजबूत="" जुड़ाव="" प्रदर्शित="" करने="" वाला="" snp="" rs2920656="" (या,="" 0.45;="" 95="" प्रतिशत="" ci,="" 0.31–0.66;="" p=""><1.4 ×="" 10−="" 5;="" fdr="0.003)" था।="" यह="" पुरानी="" एसएनपी="" एएनजीपी="" टी2="" की="" 3′="" स्थिति="" के="" लिए="" 30="" केबी="" डाउनस्ट्रीम="" है="" और="" इसमें="" लगभग="" 3="" प्रतिशत="" विचरण="" की="" व्याख्या="" की="" गई="">

AKI-SP2 (R2) का विकास। क्योंकि केवल कुछ ही विषय समरूप rs292 थे 0 656 (n=26), हमने एक प्रमुख आनुवंशिक मॉडल में rs292 0 656 और AKI-SP2 के बीच संघों का भी परीक्षण किया, जिसने लगातार दिया परिणाम (या, 0.42; 95 प्रतिशत सीआई, 0.28–0.64; पी <1.4 ×="" 10−="" 6)।="" हमने="" प्रतिरूपित="" जीनोटाइप="" का="" उपयोग="" करते="" हुए="" angpt2="" ठिकाने="" के="" भीतर="" अतिरिक्त,="" संभावित="" रूप="" से="" मजबूत,="" संघों="" के="" लिए="" भी="" परीक्षण="" किया,="" लेकिन="" rs2920656="" (तालिका="" s4)="" के="" साथ="" देखे="" गए="" किसी="" भी="" संघ="" को="" मजबूत="" नहीं="" पाया।="" संवेदनशीलता="" विश्लेषण="" में,="" हमने="" परीक्षण="" किया="" कि="" क्या="" गंभीर="" रूप="" से="" बीमार="" रोगियों="" को="" शामिल="" किए="" बिना="" शामिल="" किया="" गया="">तीव्रगुर्दाचोटआनुवंशिक संघ को प्रभावित करेगा। हमने बिना AKI और AKI-SP1 वाले रोगियों को एक साथ समूहीकृत किया और निर्धारित किया कि क्या rs292 0 656 अभी भी AKI-SP2 के कम जोखिम के साथ दृढ़ता से जुड़ा था। इस विश्लेषण में, 839 रोगियों में या तो AKI या AKI-SP1 नहीं था और 154 में AKI-SP2 था। AKI-SP2 को फिर से विकसित करने का जोखिम rs292 0656 (या 0.31; 95 प्रतिशत CI, 0.19–0.52; पी <0.001) (तालिका="" s5)।="" एक="" अन्य="" संवेदनशीलता="" विश्लेषण="" में,="" हमने="" परीक्षण="" किया="" कि="" क्या="" rs2920656="" ispaar="" में="" शामिल="" किए="" गए="" चार="" अलग-अलग="" अध्ययनों="" में="" से="" प्रत्येक="" के="" भीतर="" aki-sp2="" के="" कम="" जोखिम="" से="" जुड़ा="" था।="" तीन="" यादृच्छिक="" नियंत्रण="" परीक्षणों="" (alta,="" factt,="" और="" omega)="" और="" icu="" संभावित="" कोहोर्ट="" (mea)="" में="" से="" प्रत्येक="" के="" भीतर,="" बिंदु="" अनुमान="" rs2920656="" के="" मामूली="" एलील="" के="" अनुरूप="" था="" जो="" aki-sp2="" (तालिका="" s6)="" के="" विकास="" के="" लिए="" कम="" जोखिम="" का="" प्रदर्शन="" करता="" है।="" )="" इस="" प्रकार,="" प्लाज्मा="" बायोमार्कर="" सांद्रता="" के="" साथ="" जुड़ाव="" का="" निर्धारण="" करने="" के="" लिए="" rs2920656="" का="" और="" अधिक="" विश्लेषण="" किया="">

rs2920656 का T एलील घटे हुए प्लाज्मा ANG के साथ जुड़ा हुआ है-2

हमने अगली बार rs2920656 और प्लाज्मा ANG-2 सांद्रता के बीच संबंध का विश्लेषण किया। उम्र, लिंग और सेप्सिस के लिए समायोजन rs292 के टी एलील की प्रत्येक प्रति 0656 घटे हुए लॉग 2 प्लाज्मा एएनजी -2 सांद्रता (=− 0.09; 95 प्रतिशत सीआई {{9} के साथ जुड़ा था। }.15, - 0.04; पी=0.002)। सी एलील के लिए होमोजीगस विषयों ने प्लाज्मा एएनजी -2 (40,683 पीजी / एमएल; इंटरक्वेर्टाइल रेंज (आईक्यूआर) 19, 374-73, 205) की उच्चतम सांद्रता दिखाई, जबकि टी एलील के लिए समरूप विषयों ने सबसे कम दिखाया। प्लाज्मा एएनजी -2 सांद्रता (28,308 पीजी / एमएल (आईक्यूआर 14, 340-42, 944)। इसके अलावा, एएनजीपी टी 2 जीन क्षेत्र के पास परीक्षण किए गए 100 एसएनपी में से, rs29206565 प्लाज्मा एएनजी के साथ सबसे मजबूती से जुड़ा था। -2 सांद्रता (चित्र 2)।

मध्यस्थता विश्लेषण से पता चलता है कि AKI-SP2 के विकास में ANG-2 कारण है

हमने सबूत के लिए परीक्षण किया कि rs292 0 656 और AKI-SP2 के लिए जोखिम के बीच संबंध प्लाज्मा ANG -2 सांद्रता (छवि 3) के माध्यम से मध्यस्थ है। AKI-SP2 पर rs2920656 का कुल प्रभाव कुल=- 0.16 प्रति एलील (95 प्रतिशत CI -0.24, - 0 था। .10, p=1.0 × 10− 4), जो बताता है कि आनुवंशिक रूपांतर के प्रत्येक मामूली एलील (T एलील) के लिए AKI-SP2 विकसित होने का जोखिम 16 प्रतिशत कम हो जाता है। कारण मध्यस्थता विश्लेषण ने AKI-SP2 पर rs2920656 के लिए एक महत्वपूर्ण अप्रत्यक्ष प्रभाव का पता लगाया जो प्लाज्मा ANG -2 सांद्रता (अप्रत्यक्ष, - 0.07 प्रति एलील; 95 प्रतिशत CI -0.11, - 0.03; p { {34}}.001), जिसका अर्थ है कि आरएस2920656 और एकेआई-एसपी2 के बीच प्रभाव का अनुपात जो एएनजी द्वारा मध्यस्थता है -2 सांद्रता 41.5 प्रतिशत है।

rs2920656 का टी एलील 7 दिनों में एकेआई गंभीरता में कमी के साथ जुड़ा हुआ है

इसके बाद, हमने अध्ययन नामांकन के बाद 7 दिनों के भीतर अधिकतम सीरम क्रिएटिनिन और सीरम क्रिएटिनिन में वृद्धि जैसे AKI गंभीरता के लिए पारंपरिक मानदंडों के साथ rs292 0 656 के सहयोग का परीक्षण किया। एक प्रमुख आनुवंशिक मॉडल में, rs2920656 का टी एलील - 0.44 मिलीग्राम/डीएल (95 प्रतिशत सीआई, - 0.77 के सीरम क्रिएटिनिन में कमी के साथ जुड़ा था। , - 0.10), p=0.01) उम्र, लिंग, बॉडी मास इंडेक्स और सेप्सिस स्थिति के समायोजन के बाद। rs2920656 का मामूली एलील भी बेसलाइन और दिन 7 (=- 0.25, 95 प्रतिशत सीआई, - 0.46, - 0.03; पी=0.03) के बीच सीरम क्रिएटिनिन में वृद्धि में कमी के साथ जुड़ा था।

rs2920656 का टी एलील सेल कल्चर में निम्न ANG-2 के साथ जुड़ा हुआ है

हमने rs2920656 के कार्यात्मक महत्व को निर्धारित करने के लिए इन विट्रो प्रयोगों और सिलिको विश्लेषणों में आयोजित किया। 8 विभिन्न मानव भ्रूणों में सेगुर्दाऊतकनमूने, 2 सीसी थे, 5 सीटी थे, और 1 टीटी rs2920656 के लिए था। एक प्रमुख आनुवंशिक मॉडल में, एएनजी -2 सांद्रता संख्यात्मक रूप से सी एलील के लिए समयुग्मक दाताओं से एंडोथेलियल कोशिकाओं में सबसे बड़ी थी और टी एलील के वाहक में कम, पी=0.07 (छवि 4)। GTEx प्रोजेक्ट डेटाबेस में, rs2920656 ANGPT2 जीन एक्सप्रेशन से संबद्ध नहीं था। हालाँकि, दो अन्य SNPs (rs41311412 और rs2515591) जो मध्यम LD (r 2=0.23 और D'=0। 86) में हैं, rs2920656 के साथ कम ANGPT2 जीन एक्सप्रेशन (p) से जुड़े थे।=4.1 × 10− 5 ) टिबिअल धमनी में, एक ऊतक जो एंडोथेलियल कोशिकाओं के लिए अत्यधिक समृद्ध होता है (तालिका S7)।

प्लाज्मा एएनजी-2 गुर्दे द्वारा न्यूनतम रूप से साफ किया जाता है यह निर्धारित करने के लिए कि क्या अंतर हैगुर्दासमारोहप्लाज्मा ANG{0}} सांद्रता को प्रभावित कर सकता है, हमने AKI के साथ और बिना गंभीर रूप से बीमार विषयों में ANG-2 गुर्दे की निकासी को मापा। बुक किए गए प्लाज्मा नमूनों के साथ 2 0 अलग-अलग समय पर मूत्र नमूना संग्रह में, औसत सीरम क्रिएटिनिन 0. 86 मिलीग्राम/डीएल था जिसमें 0.69 से 1.45 मिलीग्राम/डीएल की इंटरक्वेर्टाइल रेंज (आईक्यूआर) थी। औसत प्लाज्मा एएनजी -2 एकाग्रता 10,261 पीजी/एमएल (आईक्यूआर 6210-19,115 पीजी/एमएल) थी। इसके विपरीत, मूत्र संबंधी ANG -2 सांद्रता 50- 206 pg/ mL (IQR 11-839 pg/mL) के माध्यिका से कम थी। एएनजी की गणना की गई गुर्दे की निकासी -2 सभी समय के मूत्र संग्रह के लिए <1 एमएल="" मिनट="" थी,="" यह="" सुझाव="" देते="" हुए="" कि="" प्लाज्मा="" एएनजी="" -2="" सांद्रता="" केवल="" एकेआई="" (तालिका="" 3)="" को="" खराब="" करने="" के="" कार्य="" के="" रूप="" में="" नहीं="" बढ़ाई="" जाती="">