एक क्लोन कुत्ते का उत्पादन करने के लिए एक सेल रक्षक के रूप में एक्टियोसाइड का प्रभाव

जी हाई ली1☯, जू लैन चुन1☯, केउन जंग किम1, यूं यंग किम1, डोंग-ही किम1, बो मायओंग ली1, किल वू हान1, कांग-सन पार्क1, क्यूंग-बॉन ली2, मिन क्यू किम1*

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एक्टोसाइडमेंसिस्टैंचेकई हैंप्रभाव

तालिका 5. क्लोन किए गए कुत्ते का माइक्रोसेटेलाइट विश्लेषण।

तालिका 6. क्लोन किए गए कुत्ते के एमटीडीएनए अनुक्रम।

G2/M चरण [24-28] पर दाता कोशिकाओं के उपयोग के सापेक्ष G{0}}/G1 चरण में दाता कोशिकाओं के उपयोग के साथ सुधार किया जाता है, हालांकि यह बताया गया है कि दाता कोशिकाएं कोशिका चक्र के G2/M चरण में गिरफ्तार किया गया व्यवहार्य क्लोन पिगलेट [44] का उत्पादन कर सकता है। न्यूक्लियस डोनर सेल्स का सेल साइकल स्टेज एससीएनटी का पालन करने वाली रिप्रोग्रामिंग घटनाओं में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। G0/G1 चरण में गिरफ्तार किए गए न्यूक्लियस डोनर सेल कुशलतापूर्वक SCNT [28, 29, 45] के बाद पहला डीएनए संश्लेषण शुरू करते हैं। सेल चक्र तुल्यकालन को प्रेरित करने के लिए, सेल चक्र तुल्यकालन [46, 47] को प्राप्त करने के लिए एक्टोसाइड सहित विभिन्न रासायनिक अवरोधकों का उपयोग किया गया है। सीडीके अवरोधक के रूप में, एक्टियोसाइड का उपयोग अक्सर G0/G1 चरण में सेल चक्र तुल्यकालन लाने के लिए किया जाता है। ली एट अल। ने बताया कि एक्टोसाइड ने G1 चरण से परे कोशिका चक्र की प्रगति में बाधा उत्पन्न की, इस प्रकार ल्यूकेमिया कोशिका प्रसार को रोका। इसके अलावा, सीडीके का स्तर कम हो गया था लेकिन सीडीके अवरोधकों के स्तर में काफी वृद्धि हुई थी [38]।

सिस्टांचेडेजर्टिकोलाएक्टोसाइडप्रतिरक्षा बढ़ा सकते हैं और कम कर सकते हैंapoptosis

वर्तमान अध्ययन ने एससीएनटी की दक्षता पर सेल सिंक्रोनाइज़ेशन के प्रभाव की जांच करने के लिए अन्य दो सामान्य सेल सिंक्रोनाइज़ेशन विधियों के लिए एक्टियोसाइड के प्रभावों की तुलना की। कैनाइन भ्रूण फ़ाइब्रोब्लास्ट का इलाज एक्टियोसाइड, सीरम भुखमरी और संपर्क अवरोध के विभिन्न सांद्रता के साथ किया गया था; तीन उपचार समूहों में G{{0}}/G1 चरण में कोशिकाओं के प्रतिशत की तुलना की गई। जी 0/G1 चरण में सेल चक्र तुल्यकालन के लिए सीरम भुखमरी सबसे प्रभावी तरीका पाया गया, और एक्टोसाइड और संपर्क निषेध के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं था। हालांकि, सीरम भुखमरी ने आरओएस के काफी उच्च स्तर को प्रेरित किया। पिछले अध्ययनों ने बताया कि आरओएस की वृद्धि कोशिका झिल्ली को नुकसान पहुंचाती है और एपोप्टोसिस को प्रेरित करती है जिससे भ्रूण के विकास की दक्षता कम हो जाती है। इसके अलावा, आरओएस डीएनए विखंडन को बढ़ाता है जो सेल ब्लॉक को प्रेरित करता है और मनुष्यों और सूअरों में भ्रूण के विकास में देरी करता है [48-51]। एक्टोसाइड उपचार ने संपर्क अवरोध की तुलना में G0/G1 चरण में सेल चक्र को सिंक्रनाइज़ करने में कोई अंतर नहीं दिखाया। हालांकि, अन्य दो सेल चक्र तुल्यकालन विधियों की तुलना में एक्टोसाइड ने काफी कम आरओएस गतिविधि को प्रेरित किया। इसके अलावा, एक्टोसाइड उपचार ने संपर्क अवरोध और सीरम भुखमरी की तुलना में काफी कम एपोप्टोसिस और नेक्रोसिस को प्रेरित किया। परिणाम पिछले अध्ययनों के अनुरूप भी है जिसमें संपर्क अवरोध [32, 52] की तुलना में सीरम भुखमरी के साथ सेल चक्र तुल्यकालन के बाद अधिक एपोप्टोटिक घटनाओं की घटना को दिखाया गया है। एपोप्टोसिस की दर में कमी के साथ-साथ, एक्टोसाइड उपचार समूह ने भी संपर्क अवरोध समूह की तुलना में उच्च सेल अस्तित्व दिखाया। सीरम भुखमरी के परिणामस्वरूप एक्टियोसाइड उपचार और संपर्क अवरोध दोनों की तुलना में बड़े पैमाने पर कोशिका मृत्यु हुई।

G{{0}}/G1 चरण में न्यूक्लियस डोनर सेल साइकल सिंक्रोनाइज़ेशन एक सफल SCNT भ्रूण और अंततः क्लोन किए गए जानवरों के उत्पादन में एक महत्वपूर्ण कदम है। भ्रूण के विकास के दौरान आरओएस को कोशिका मृत्यु और एपोप्टोसिस के मुख्य कारणों में से एक माना गया है। इस अध्ययन में, यह निर्धारित करने के लिए एक्टोसाइड की जांच की गई थी कि क्या यह परमाणु दाता कोशिकाओं के रूप में कैनाइन भ्रूण फाइब्रोब्लास्ट में G0/G1 चरण सेल-चक्र तुल्यकालन को प्रेरित करने के लिए एक उपयोगी वैकल्पिक तरीका होगा। परमाणु दाता कोशिकाओं के एक्टियोसाइड उपचार द्वारा सेल चक्र तुल्यकालन की प्रेरण ने आरओएस और एपोप्टोसिस को कम कर दिया, जिसने एससीएनटी भ्रूण के इन विट्रो विकास में सुधार में योगदान दिया। एक्टोसाइड-उपचारित दाता कोशिकाओं का उपयोग करके क्लोन किए गए भ्रूणों को सरोगेट मदर डॉग्स में स्थानांतरित कर दिया गया और एक स्वस्थ क्लोन कुत्ते का सफलतापूर्वक उत्पादन किया गया, जो संपर्क अवरोध समूह के भ्रूण के साथ नहीं हुआ।

निष्कर्ष में, इस अध्ययन ने प्रदर्शित किया कि एक्टोसाइड, जो एक सीडीके अवरोधक है, परमाणु दाता कोशिकाओं के रूप में उपयोग के लिए G0/G1 चरण में कैनाइन फाइब्रोब्लास्ट के सफल सेल चक्र सिंक्रनाइज़ेशन को प्रेरित करता है, और उन्हें कम करके एपोप्टोसिस से भी बचाता है। ऑक्सीडेटिव तनाव। एक्टोसाइड के साइटोप्रोटेक्टिव प्रभाव, सेल चक्र तुल्यकालन की क्षमता के साथ, SCNT भ्रूण की इन विट्रो विकासात्मक क्षमता में सुधार करने में योगदान दिया। इसलिए, क्लोन जानवरों का उत्पादन करने के लिए क्लोनिंग दक्षता बढ़ाने के लिए एक्टियोसाइड एक प्रभावी अभिकर्मक होगा।

सिस्टैंच में एक्टोसाइडइलाज कर सकते हैंगुर्दारोग में सुधारगुर्देसमारोह

स्वीकृतियाँ

लेखक यूएसडीए-एआरएस के डॉ. जॉन हैमंड को उनके वैज्ञानिक सुझावों और पांडुलिपि के लिए लेखन समर्थन के लिए धन्यवाद देना चाहते हैं।

लेखक का योगदान

प्रयोगों की कल्पना और डिजाइन: जेएचएल जेएलसी एमकेके। प्रयोग किए: जेएचएल केजेके ईवाईके डीएचके बीएमएल केडब्ल्यूएच केएसपी। डेटा का विश्लेषण: जेएलसी केबीएल। योगदान किए गए अभिकर्मक / सामग्री / विश्लेषण उपकरण: केजेके ईवाईके डीएचके बीएमएल केडब्ल्यूएच केएसपी। पेपर लिखा: जेएचएल जेएलसी। फंडिंग अधिग्रहण और पर्यवेक्षण: एमकेके।

एक्टियोसाइड इनसिस्टैंचेबढ़ा सकते हैंस्मृति

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