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echinacoside एस्ट्रोजन को कैसे उत्तेजित करता है और शुक्राणुओं की संख्या में वृद्धि करता है?

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चर्चा

Ethnopharmacological रिकॉर्ड और हमारे पिछले अध्ययन 13 ने पुष्टि की किCआइन् शे ट्यूबुलोसा अर्क प्रभावी ढंग से सेक्स हार्मोन के स्तर में वृद्धि हुई है और शुक्राणु की गुणवत्ता में सुधार हुआ है। में मुख्य यौगिकों में से एक के रूप में ईसीएचCistancheट्यूबुलोसा19,20, शुक्राणुओं की संख्या को बढ़ा सकता है और एलएच और टी के स्राव को बढ़ा सकता है (चित्र 1)। इस अध्ययन में, हमने दिखाया कि ईसीएच को अंडकोष के बजाय हाइपोथैलेमस में वितरित किया गया था, जो वृषण पर ईसीएच के अप्रत्यक्ष प्रभाव का सुझाव देता है। दरअसल, ईसीएच ने सीधे हाइपोथैलेमिक एआर गतिविधि, नाभिक में एआर ट्रांसलोकेशन, और एचपीजी-अक्ष से संबंधित जीन अभिव्यक्ति को रोक दिया और बीपीए-प्रेरित प्रजनन क्षति के खिलाफ सुरक्षा भी प्रदान की।

मानव गोनाडोट्रोफिन उत्पादन के अध्ययन में, सेक्स हार्मोन के स्तर को एचपीजी-अक्ष और एक नकारात्मक प्रतिक्रिया लूप 21 द्वारा कसकर विनियमित किया जाता है। अर्थात्, पिट्यूटरी और हाइपोथैलेमस के लिए नकारात्मक एंड्रोजेनिक प्रतिक्रिया की कमी के जवाब में रक्त एलएच के स्तर में लगातार और निरंतर वृद्धि के जवाब में टी स्राव में स्पष्ट रूप से वृद्धि हुई है। इस अध्ययन में, ईसीएच ने एन्सेफेलॉन + पिट्यूटरी में एलएच के स्राव और अंडकोष में टेस्टोस्टेरोन के उत्पादन में वृद्धि की और एन्सेफेलन + पिट्यूटरी में एलएचआर और जीएनआरएचआर के एमआरएनए स्तरों में (चित्र 1 और चित्र 4), यह सुझाव देते हुए कि ईसीएच एचपीजी अक्ष नकारात्मक प्रतिक्रिया को प्रभावित कर सकता है। आश्चर्य की बात नहीं है, एआर स्वयं टी और एलएच स्तर22,23 के प्रतिक्रिया विनियमन में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। पुरुष एचपीजी अक्ष प्रतिमान टेस्टोस्टेरोन पर केंद्रित है जो हाइपोथैलेमस और पिट्यूटरी ग्रंथि दोनों के स्तर पर नकारात्मक प्रतिक्रिया दमन प्रदान करता है24,25। पिछले अध्ययनों ने फॉक्सजी 1-क्रे का उपयोग पिट्यूटरी में रुचि के जीन को कम करने के लिए किया था, लेकिन दो क्षेत्रों के सापेक्ष महत्व को निर्धारित करने के लिए हाइपोथैलेमस नहीं। परिणामों से पता चला है कि पुरुष माउस के पिट्यूटरी में एआर सिग्नलिंग एलएच स्राव 26 के टेस्टोस्टेरोन-निर्भर विनियमन के संबंध में डिस्पेंसेबल है। इस कारण से, हमने आगे के अध्ययन के लिए हाइपोथैलेमिक एआर पर ध्यान केंद्रित करने का फैसला किया।

Echinacosideमेंसिस्तानचेजिगर की रक्षा कर सकते हैं

एक स्टेरॉयड परमाणु हार्मोन रिसेप्टर के रूप में, एआर की गतिविधि को स्टेरॉयड लिगैंड टी द्वारा विनियमित किया जाता है, जिसका बंधन परमाणु स्थानांतरण और एआर 27 के ट्रांसक्रिप्शनल नियामक कार्य को शुरू करता है। इस अध्ययन में, हमने दिखाया कि ईसीएच उपचार ने हाइपोथैलेमस में नाभिक में साइटोप्लाज्म से एआर ट्रांसलोकेशन को रोक दिया, (चित्र 12)।3). इसके अलावा, पीके अध्ययन से पता चला है कि ईसीएच वृषण के बजाय हाइपोथैलेमस में स्पष्ट रूप से प्रवेश कर सकता है, यह सुझाव देते हुए कि अधिक ईसीएच रक्त-मस्तिष्क बाधा को पार करता है, संभवतः एंडोसाइटोसिस के माध्यम से, रक्त टेस्टिस बैरियर के बजाय। इसके अलावा, हमने अप्रत्यक्ष एलिसा द्वारा ईसीएच और एआर की संयोजन क्षमता का प्रदर्शन किया, जो सुझाव देता है कि ईसीएच सीधे एआर से जुड़ सकता है। यह आगे अणु डॉकिंग परख के परिणामों द्वारा समर्थित था जो इंगित करता है कि ईसीएच के लिए कल्पित बाध्यकारी साइटें एआर पॉकेट में मेट -894 और वैल -713 में मौजूद हैं (चित्र 5 डी)। यह दूसरों के निष्कर्षों का समर्थन करता है कि एआर एक नकारात्मक फ़ीड लूप के विनियमन में भाग लेता है और मस्तिष्क में एआर-टी इंटरैक्शन में कमी के परिणामस्वरूप एलएच स्राव में वृद्धि होती है23,28,29।

Steroidogenesis steroidogenic प्रोटीन (StAR) 30 और Steroidogenic एंजाइमों जैसे CYP11A1, CYP17A1, 3π-hydroxysteroid डिहाइड्रोजनेज (HSD3π), और 17π-hydroxysteroid dehydrogenase (HSD17π) की भागीदारी के साथ spermatogenesis के विकास के लिए एक कसकर नियंत्रित, आवश्यक प्रक्रिया है जो कोलेस्ट्रॉल को टेस्टोस्टेरोन 31 में परिवर्तित करती है। हमने दिखाया कि इन एंजाइमों को एन्कोडिंग करने वाले जीनों के एमआरएनए स्तर में ईसीएच उपचार के साथ काफी वृद्धि हुई है जबकि एसटीएआर एमआरएनए की अभिव्यक्ति में कोई बदलाव नहीं हुआ है। इससे पता चलता है कि ईसीएच का माइटोकॉन्ड्रिया की आंतरिक झिल्ली में कोलेस्ट्रॉल के हस्तांतरण पर कोई प्रभाव नहीं पड़ा, जबकि यह टेस्टोस्टेरोन में कोलेस्ट्रॉल रूपांतरण को बढ़ावा देने में भूमिका निभा सकता है। फिर निष्कर्ष निकाला जा सकता है कि ईसीएच उपचार टेस्टोस्टेरोन संश्लेषण और स्राव को बढ़ाकर शुक्राणुओं की संख्या को काफी बढ़ाता है।

शुक्राणु की चोट पर ईसीएच के सुरक्षात्मक प्रभाव की जांच करने के लिए, बिस्फेनॉल ए (बीपीए), एक विशिष्ट बहिर्जात अंतःस्रावी अवरोधक, का उपयोग चूहों में पुरुष प्रजनन क्षति के मॉडल के रूप में किया गया था32। ईसीएच उपचार ने प्रभावी रूप से शुक्राणुओं की गिनती, शुक्राणु गतिशीलता, टी और एलएच के स्तर को बीपीए (चित्र 6 ए, बी) द्वारा कम कर दिया, यह सुझाव देते हुए कि ईसीएच शुक्राणु की चोट को कम कर सकता है।

हार्मोन रिप्लेसमेंट थेरेपी के लिए कृत्रिम रूप से संश्लेषित रसायनों की तुलना में, ईसीएच एक प्राकृतिक गैर-हार्मोनल यौगिक है जो एचपीजी अक्ष पर नकारात्मक प्रतिक्रिया को प्रभावित करता है जिससे एलएच, टी और शुक्राणु की गुणवत्ता का स्राव बढ़ जाता है। यह यंत्रवत मार्ग पुरुष प्रजनन प्रणाली की रक्षा कर सकता है और इस प्रकार ईसीएच को एक संभावित प्राकृतिक प्रजनन सुरक्षात्मक एजेंट के रूप में माना जा सकता है। हालांकि, हार्मोन नियम जटिल होते हैं और अक्सर प्रणालीगत प्रभाव का कारण बनते हैं। जैसा कि चित्र 7 में दर्शाया गया है, ईसीएच ने टी और एलएच स्राव में वृद्धि की और एआर सक्रियण को रोक दिया, जिससे अन्य स्वास्थ्य या बीमारी से जुड़े मार्गों जैसे ऑस्टियोपोरोसिस 33 और पुरुषों में अवसाद पर भी परिणाम हो सकते हैं, इसलिए, ईसीएच के व्यापक प्रभावों की आगे जांच की जानी चाहिए। एक साथ लिया गया, हमारे परिणाम इंगित करते हैं कि ईसीएच हाइपोथैलेमस में एआर को बांधता है और साइटोप्लाज्म से नाभिक में एआर के हस्तांतरण को रोकता है। हमारे डेटा से पता चलता है कि ईसीएच अमीनो एसिड मेट -894 और वैल -713 पर एआर पॉकेट में साइटों को बांधता है। यह एलएच स्राव को बढ़ावा देकर हार्मोन के स्तर को संतुलित करने के लिए एक प्रणालीगत प्रतिक्रिया के रूप में टी और एआर स्तरों में वृद्धि की व्याख्या कर सकता है और टी उत्पादन और शुक्राणुओं की संख्या में बाद में वृद्धि (चित्र 8)।

Echinacosideमेंसिस्तानचेऑक्सीकरण विरोधी कर सकते हैं

विधियाँ नैतिकता कथन.

यह अध्ययन विज्ञान और प्रौद्योगिकी मंत्रालय (बीजिंग, चीन) द्वारा स्थापित प्रायोगिक जानवरों के लिए दिशानिर्देशों के सख्त अनुपालन में किया गया था। सभी प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल की समीक्षा की गई और Anyang Institute of Technology की नैतिकता समिति द्वारा अनुमोदित किया गया। प्रयोगात्मक जानवरों. चार सप्ताह के इनब्रीड कुनमिंग चूहों (22 जी-25 ग्राम) को चौथे सैन्य चिकित्सा विश्वविद्यालय (शियान, चीन) के पशु केंद्र से प्राप्त किया गया था। ते जानवरों को 22 डिग्री सेल्सियस ± 2 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर नियंत्रित परिस्थितियों में रखा गया था, 70% ± 12 घंटे प्रकाश-अंधेरे-साइकिल चालन के साथ 4% आर्द्रता, और फ़ीड और पानी तक मुफ्त पहुंच। 6

प्रयोग उपचार.

प्रयोग 1. चूहों को यादृच्छिक रूप से छह समूहों में विभाजित किया गया था, प्रत्येक में सात चूहे समूह (n = 7)। ईसीएच (कैस: 82854-37-3; चेंगदू पसंदीदा जैव प्रौद्योगिकी कं, लिमिटेड, सिचुआन, चीन) को एक इंट्रागैस्ट्रिक ट्यूब, और टेस्टोस्टेरोन प्रोपियोनेट (टीपी, सीएएस: 57-85-2) का उपयोग करके प्रशासित किया गया था; KingYork, तियानजिन, चीन) निम्नलिखित प्रयोगात्मक डिजाइन के अनुसार 14 दिनों के लिए दैनिक रूप से एक बार इंट्रामस्क्युलर इंजेक्शन द्वारा दिया गया था: नियंत्रण समूह: सामान्य खारा (10mL / किग्रा), ईसीएच (एल) समूह (5mg / किग्रा), ईसीएच (एम) समूह (20 मिलीग्राम / किग्रा), ईसीएच (एच) समूह (80 मिलीग्राम / किग्रा), टीपी (15mg / kg) और enzalutamide (एआर अवरोधक, 14 दिनों के लिए हर दूसरे दिन एक बार दैनिक; 20mg / किग्रा; कैस: 915087-33-1; अलादीन, शंघाई, चीन)। उपचार के 2 सप्ताह के बाद, चूहों को हार्मोन के स्तर के विश्लेषण के लिए रक्त के नमूने एकत्र करने के लिए डायथिल ईथर के साथ बेहोश किया गया था। चूहों को तब हाइपोथैलेमस, एन्सेफेलॉन + पिट्यूटरी, वृषण और कौडा एपिडिडिमिस को अलग करने के लिए विच्छेदित किया गया था। कैडा एपिडिडिमिस के नमूनों को शुक्राणु की गुणवत्ता के लिए 5% बीएसए के साथ सामान्य खारा में रखा गया था मूल्यांकन, और हाइपोथैलेमस, एन्सेफेलॉन + पिट्यूटरी, और वृषण तरल नाइट्रोजन में जमे हुए थे और पर संग्रहीत किए गए थे आगे की जांच के लिए -80 डिग्री सेल्सियस। प्रयोग 2. चूहों को यादृच्छिक रूप से 10 समूहों में विभाजित किया गया था, प्रति समूह पांच जानवर। ईसीएच (20mg / kg) को मौखिक रूप से प्रशासित किया गया था और प्रत्येक समूह में चूहों को 0.5 h, 1h, 1.5h, समय बिंदुओं पर diethyl ईथर के साथ anesthetized किया गया था। नमूना संग्रह के लिए प्रशासन के बाद 2h, 2.5h, 3h, 4h, 6h, 9h, और 12h। प्लाज्मा एकत्र किया गया था और दिल को उजागर किया गया था। बाएं वेंट्रिकल में सामान्य खारा का छिड़काव एक जलसेक उपकरण द्वारा आयोजित किया गया था जब तक कि जिगर और फेफड़ों को ब्लैंच नहीं किया गया था। दस हाइपोथैलमी और वृषण थे ईसीएच के ऊतक सांद्रता को निर्धारित करने के लिए एकत्र किया गया। प्रयोग 3. चूहों को यादृच्छिक रूप से 4 समूहों में विभाजित किया गया था, प्रत्येक समूह में सात। ईसीएच और बीपीए (कैस: 80-05-7; अलादीन, शंघाई, चीन) को निम्नलिखित प्रयोगात्मक डिजाइन के अनुसार 6 सप्ताह के लिए दैनिक रूप से एक बार इंट्रागैस्ट्रिक ट्यूब का उपयोग करके प्रशासित किया गया था: सामान्य समूह (मकई का तेल, 10 एमएल / किग्रा, बीडब्ल्यू / डी), मॉडल समूह: बीपीए समूह (बीपीए 200 मिलीग्राम / किग्रा, बीडब्ल्यू / डी, मकई का तेल), और प्रयोगात्मक समूह: बीपीए + ईसीएच समूह (बीपीए 200 मिलीग्राम / किग्रा; ईसीएच 20mg / किग्रा)। उपचार के 42 दिनों के बाद, चूहों को डायथाइल ईथर के साथ बेहोश किया गया था और रक्त के नमूने एकत्र किए गए थे। हार्मोन स्तर के विश्लेषण के लिए। टे वृषण और कौडा एपिडिडिमिस को अलग किया गया और एकत्र किया गया। Cauda epididymis शुक्राणु गुणवत्ता मूल्यांकन के लिए इस्तेमाल किया गया था और वृषण तरल नाइट्रोजन में जमे हुए थे और आगे की जांच के लिए -80 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया गया था।

निर्धारण का वीर्य गुण। वीर्य निलंबन तैयारी. Cauda epididymides को 5% BSA के साथ सामान्य खारा के 5 मिलीलीटर में कीमा बनाया गया था और उनकी सामग्री को माध्यम में फैलाने की अनुमति देने के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर 5 मिनट के लिए इनक्यूबेट किया गया था।

शुक्राणु संख्या: योकोई (2003) द्वारा वर्णित विधि के अनुसार, पतला शुक्राणु निलंबन (1: 10; वी / वी; शुक्राणु निलंबन / 10% मेथनॉल) को हेमोसाइटोमीटर के प्रत्येक गिनती कक्ष में स्थानांतरित कर दिया गया था और 5 मिनट के लिए खड़े होने की अनुमति दी गई थी और फिर एक्स 200 आवर्धन पर एक प्रकाश माइक्रोस्कोप (निकॉन, इंस्ट्रूमेंट्स इंक, जापान) के तहत गिना गया था।

शुक्राणु व्यवहार्यता: शुक्राणु निलंबन के कुल 20 μL को 2 मिनट के लिए ईोसिन-निग्रोसिन दाग की समान मात्रा के साथ मिलाया गया था; बिना दाग वाले शुक्राणुओं को 200x आवर्धन पर एक प्रकाश माइक्रोस्कोप के तहत गिना गया था।

शुक्राणु गतिशीलता: शुक्राणु निलंबन के कुल 10 μL को ग्लास स्लाइड पर रखा गया था और 200x आवर्धन पर प्रकाश माइक्रोस्कोप के तहत या तो मोबाइल या स्थिर के रूप में दर्ज किया गया था।

निर्धारण का अंतःस्राव स्तर। टेस्टोस्टेरोन (टी) और एलएच के स्तर को सीरम, एन्सेफेलन + पिट्यूटरी, और अंडकोष होमोजेनेट्स में रेडियोइम्यूनोसे (आरआईए) किट (बीजिंग चीन-यूके इंस्टीट्यूट ऑफ बायोलॉजिकल टेक्नोलॉजी, बीजिंग, चीन) का उपयोग करके परिमाणित किया गया था। संक्षेप में, एंटी-टेस्टोस्टेरोन या एंटी-एलएच आईजीजी एंटीबॉडी (100 μL) और 125-I-संयुग्मित एंटी-माउस एंटीबॉडी को नमूनों या मानक (100 μL) में जोड़ा गया था और 4 डिग्री सेल्सियस पर रातभर एक रॉकर पर मिश्रित किया गया था। पीबीएस-ट्वीन 20 (500 μL) के साथ तीन बार धोने के बाद, मिश्रण को 15 मिनट के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर सेंट्रीफ्यूज (3500 आरपीएम / मिनट) किया गया था। अवक्षेपों के सीपीएम मूल्यों का मूल्यांकन रेडियोइम्यूनोसे उपकरण (बीजिंग चीन-पश्चिमी प्रौद्योगिकी कंपनी लिमिटेड, CN202M / KZ4GC-1200, बीजिंग, चीन) द्वारा किया गया था और टी और एलएच की सांद्रता की गणना एक मानक वक्र के सूत्र के अनुसार की गई थी। भिन्नता का टी और एलएच गुणांक नमूना समूहों में क्रमशः 2.8% और 3.2% और मानक समूहों में 2.1% और 2.8% है।

निर्धारण का जीन अभिव्यक्ति द्वारा वास्तविक मात्रात्मक पीसीआर। कुल आरएनए को जमे हुए वृषण और एन्सेफेलॉन + पिट्यूटरी ऊतकों से अलग किया गया था, जो आरएनए सरल कुल आरएनए किट (तियानजेन, बीजिंग, चीन) का उपयोग कर रहा था। मात्रात्मक वास्तविक समय पीसीआर (क्यू आरटी-पीसीआर) 2 × SYBR ग्रीन I पीसीआर मास्टर मिक्स (Vazyme, नानजिंग, चीन) का उपयोग करके cDNA के प्रवर्धन के लिए किया गया था। पीसीआर प्रक्रिया में 30 सेकंड के लिए 95 डिग्री सेल्सियस शामिल था, इसके बाद 15 सेकंड के लिए 95 डिग्री सेल्सियस के 35 चक्र, 30 सेकंड के लिए 58 डिग्री सेल्सियस और 30 सेकंड के लिए 72 डिग्री सेल्सियस थे। प्राइमर विशिष्टता और उत्पाद शुद्धता को सत्यापित करने के लिए पीसीआर उत्पादों पर पिघलने वक्र विश्लेषण किया गया था। एक एकल उत्पाद के उत्पादन की पुष्टि करने के लिए प्रत्येक प्लेट के लिए एक पृथक्करण वक्र किया गया था। प्रत्येक mRNA की सापेक्ष बहुतायत की गणना की गई थी। अध्ययन के लिए उपयोग किए जाने वाले पीसीआर प्राइमरों को तालिका 2 में दिखाया गया है।

पश्चिमी दाग। एआर अभिव्यक्ति विश्लेषण के लिए, साइटोप्लाज्मिक और परमाणु प्रोटीन के निष्कर्षण और अलगाव को निर्माता के निर्देशों के अनुसार एक साइटोप्लाज्मिक और परमाणु प्रोटीन निष्कर्षण किट (बेयोटाइम, नानजिंग, चीन) का उपयोग करके किया गया था। साइटोप्लाज्मिक और परमाणु प्रोटीन की सांद्रता का मूल्यांकन ब्रैडफोर्ड प्रोटीन परख किट (बेयोटाइम, जिआंगसू, चीन) का उपयोग करके किया गया था। प्रोटीन के नमूने (80 μg) को 12% और 5% SDS-PAGE जेल पर चलाया गया और PVDF झिल्ली पर स्थानांतरित कर दिया गया। अवरुद्ध करने के बाद, झिल्ली को एंटी-एआर आईजीजी एंटीबॉडी (1: 1,000) के साथ इनक्यूबेट किया गया था; Bioss; बीजिंग चीन), और माउस polyclonal विरोधी GAPDH एंटीबॉडी (1: 1,000; वुहान बोस्टर जैविक

प्रौद्योगिकी, वुहान, चीन) या माउस polyclonal विरोधी लैमिन बी 1 एंटीबॉडी 2 ज के लिए। झिल्ली को टीबीएसटी के साथ तीन बार धोया गया था और एचआरपी-संयुग्मित खरगोश विरोधी माउस आईजीजी एंटीबॉडी (1: 5,000) के साथ इनक्यूबेट किया गया था; Bioss; बीजिंग चीन)। संकेत ChemiDoc इमेजिंग सिस्टम (Tanon-3,500, शंघाई, चीन) का उपयोग करके कल्पना की गई थी।

उच्च प्रदर्शनद्रव क्रोमैटोग्राफी (HPLC) जाँच। रक्त हेपरिनाइज्ड ग्लास ट्यूबों में एकत्र किया गया था। प्लाज्मा को 10 मिनट के लिए 6,000 आरपीएम पर तत्काल सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा अलग किया गया था और आगे के प्रयोग के लिए -20 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया गया था। प्रत्येक समय बिंदु से हाइपोथैलेमस और वृषण नमूनों को मेथनॉल के साथ पूल और homogenized किया गया था। 10 मिनट के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर 10,000 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद, supernatant N द्वारा केंद्रित किया गया था₂और अवशेषों को मेथनॉल के 50 μL में भंग कर दिया गया था और 0.45 μm फ़िल्टर के माध्यम से फ़िल्टर किया गया था। नमूना फ़िल्टर किए गए तरल के दस μL को विश्लेषण के लिए HPLC प्रणाली में इंजेक्ट किया गया था।

मानक वक्र में ईसीएच के 50, 100, 250, 500 और 750 एनजी / एमएल (चेंगदू पुफेई डी बायोटेक कं, लिमिटेड, सिचुआन, चीन) वाले नमूने शामिल थे। प्लाज्मा गुणवत्ता नियंत्रण के नमूनों को 75ng / mL (कम), 150 ng / mL (मध्यम), और ईसीएच के 300 एनजी / एमएल (उच्च) के साथ स्पाइक किया गया था, तदनुसार विधि की सटीकता और सटीकता को मापने के लिए तैयार किया गया था।

क्रोमैटोग्राफी एक एचपीएलसी सिस्टम (D2000 एलीट श्रृंखला, हिताची, जापान) के साथ एक यूवी डिटेक्टर (एल -2400, हिताची, जापान) के साथ किया गया था। पृथक्करण एक थर्मो-सी 18 (250 मिमी × 4.6 मिमी यानी, 4.6 μm कणों) स्तंभ पर किया गया था, जिसे 25 डिग्री सेल्सियस पर रखा गया था। मोबाइल चरण 0.1% फॉस्फोरिक एसिड से तैयार एक ढाल था जिसमें 0.04% ट्राइमेथिलामाइन (घटक ए) और मेथनॉल (घटक बी) शामिल थे। रैखिक ढाल इस प्रकार था: 70-90% A 0-2 मिनट से अधिक, 60-70% A 2-6 मिनट में, 55-60% B 6-8 मिनट में, और फिर तुरंत 8 मिनट पर 90% A पर लौट आया। प्रवाह दर 0.8 mL/min थी। यूवी डिटेक्टर को 332 एनएम पर संचालित किया गया था। शिखर क्षेत्र का मूल्यांकन विश्लेषणात्मक माप के रूप में किया गया था।

फार्माकोकाइनेटिक अध्ययन में चूहों। हाइपोथैलेमस और वृषण के लिए ईसीएच की पैठ को ड्रग और सांख्यिकी सॉफ्टवेयर (ड्रग एंड स्टैटिस्टिक्स, मैथेमेटिकल फार्माकोलॉजी प्रोफेशनल कमेटी ऑफ चाइना) के साथ फार्माकोकाइनेटिक विश्लेषण के अधीन किया गया था। फार्माकोकाइनेटिक मापदंडों को सांख्यिकीय क्षण सिद्धांत के आधार पर गैर-कंपार्टमेंटल विधि का उपयोग करके निर्धारित किया गया था। प्रारंभिक फार्माकोकाइनेटिक पैरामीटर जिसमें चोटी स्थिरांक के लिए समय भी शामिल है (T_{अधिकतम}), चोटी एकाग्रता (C_{अधिकतम}), उन्मूलन दर स्थिरांक (Kई), उन्मूलन आधा जीवन (T_0.5), वक्र के तहत क्षेत्र (AUC)_0–12), स्पष्ट वितरण मात्रा (Vग), और आगे के विश्लेषण के लिए मंजूरी (सीएल) प्राप्त की गई थी। मस्तिष्क / प्लाज्मा अनुपात की गणना AUC के आधार पर की गई थी_6-2प्लाज्मा और मस्तिष्क के लिए मूल्यों.

ईसीएच-ओवलबुमिन (ईसीएच-ओवीए) संश्लेषण और पहचान। ईसीएच के कुल 9.8 मिलीग्राम और 1.0 मिलीग्राम ब्यूटेनडिओल एनहाइड्राइड को 2 एमएल पाइरिडिन में भंग कर दिया गया था, जो कमरे के तापमान पर सरगर्मी के साथ 12 घंटे के लिए मिश्रित था। मिश्रण को N द्वारा केंद्रित किया गया था₂और अवशेषों को 10.8 मिलीग्राम के साथ जोड़ा गया थाN-hydroxysuccinimide (NHS) और dicyclohexyl carbodiimide (DCC) के 19.3 मिलीग्राम और 4 मिलीलीटर में भंगN,Nकमरे के तापमान पर सरगर्मी के साथ 12 ज के लिए -dimethylformamide (DMF)। 4 डिग्री सेल्सियस पर 5 मिनट के लिए 2,000 ग्राम पर सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद, supernatant को पीबीएस के 5 एमएल में जोड़ा गया था जिसमें 14.4 मिलीग्राम ovalbumin (OVA) भंग हो गया था। नए मिश्रण को 4 डिग्री सेल्सियस पर 24 घंटे के लिए हिलाया गया था। प्रतिक्रिया समाधान तब तीन दिनों के लिए पीबीएस के खिलाफ डायलिज़ किया गया था। ईसीएच-ओवीए की उपस्थिति यूवी स्पेक्ट्रा (शिमाडज़ू सइंटिफक इंस्ट्रूमेंट्स, इंक कोलंबिया, एमडी यूएसए) द्वारा 190 से 400 एनएम तक की तरंग दैर्ध्य के साथ-साथ पृष्ठ को विकृत करके पुष्टि की गई थी।

परोक्ष एलिसा (आईईएलआईएसा)। एक माइक्रोटिटर प्लेट को ईसीएच-ओवीए (2 μg / 100 μL) के साथ लेपित किया गया था और 4 डिग्री सेल्सियस पर रात भर इनक्यूबेट किया गया था। प्लेट को पीबीएसटी के साथ तीन बार और पीबीएस के साथ दो बार धोया गया था, और 5% पीबीएसएम (पीबीएस जिसमें 5% स्किम्ड दूध होता है) को 2 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर अनबाउंड साइटों को अवरुद्ध करने के लिए जोड़ा गया था। प्लेटों को पीबीएसटी और पीबीएस के साथ धोने के बाद, कुओं को 4 समूहों में विभाजित किया गया था; प्रयोगात्मक समूह, 1 μg एआर कुल प्रोटीन / सकारात्मक समूह, खरगोश विरोधी ओवीए एंटीबॉडी (1: 1,000); नकारात्मक समूह, गोजातीय सीरम एल्ब्यूमिन के 1 μg; और पीबीएस युक्त एक रिक्त समूह। 1.5 घंटे के लिए इनक्यूबेशन के बाद, प्लेटों को धोया गया था, और खरगोश एचआरपी-संयुग्मित आईजीजी (1: 1,000) के 100 μL / अच्छी तरह से सकारात्मक समूह में जोड़ा गया था, एंटी-एआर के 100 μL / अच्छी तरह से जोड़ा गया था (1: 1,000) अन्य समूहों में। 1.5 घंटे के लिए इनक्यूबेशन के बाद, खरगोश एचआरपी-संयुग्मित आईजीजी (1: 5,000) कमजोर पड़ने को प्लेटों में जोड़ा गया था। 1 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेशन के बाद, प्लेटों को पीबीएसटी के साथ तीन बार और पीबीएस के साथ दो बार धोया गया था। TMB को तब जोड़ा गया था और कमरे के तापमान और 2 M H पर अंधेरे में 10 मिनट के लिए इनक्यूबेट किया गया था₂इसलिए₄प्रतिक्रिया को रोकने के लिए जोड़ा गया था। अवशोषण को 450 एनएम की तरंग दैर्ध्य पर पढ़ा गया था।

आणविक डॉकिंग। Autodock vina 1.1.2 का उपयोग करके मानव एण्ड्रोजन रिसेप्टर (AR) के लिए यौगिक ECH के बाध्यकारी मोड की जांच करने के लिए एक आणविक डॉकिंग अध्ययन किया गया था। एआर (पीडीबी आईडी: 2वाईएचडी) की तीन आयामी (3 डी) संरचना प्रोटीन डेटा बैंक से डाउनलोड की गई थी। ईसीएच की 3 डी संरचना ChemBioDraw अल्ट्रा 14.0 और ChemBio 3D अल्ट्रा 14.0 सॉफ्टवेयर द्वारा प्राप्त की गई थी। AutoDockTools 1.5.6 पैकेज डॉकिंग इनपुट फ़ाइलें जनरेट करने के लिए नियोजित किया गया था। एआर के खोज ग्रिड को केंद्र x: 36.141, केंद्र y: 8.513, और केंद्र z के रूप में पहचाना गया था:

आयाम आकार x के साथ 21.304: 15, आकार y: 15, और आकार z: 15. संपूर्णता का मान 20 पर सेट किया गया था। वीना डॉकिंग के लिए, डिफ़ॉल्ट पैरामीटर का उपयोग किया गया था यदि इसका उल्लेख नहीं किया गया था। वीना डॉकिंग स्कोर द्वारा न्याय के रूप में सर्वश्रेष्ठ स्कोरिंग मुद्रा को चुना गया था और PyMOL 1.7.6 सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके नेत्रहीन विश्लेषण किया गया था

डेटा विश्लेषण और सांख्यिकीय विधियाँ। सांख्यिकीय सॉफ़्टवेयर SPSS 19.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA) का उपयोग करके डेटा का विश्लेषण किया गया था। समूहों के बीच तुलना के लिए एक तरफा एनोवा को नियोजित किया गया था। समूहों के बीच महत्वपूर्ण अंतर के टुकी के तुलनात्मक परीक्षण निर्धारित किए गए थे। परिणामों को ग्राफ पैड प्रिज्म सॉफ्टवेयर v.7 (GraphPad Software, Inc, California, USA) का उपयोग करके मानक विचलन (एसडी) के ± माध्य के रूप में व्यक्त किया गया था।

नीति अनुमोदन और अनुमति तक भाग लेना। इस अध्ययन के लिए नैतिक अनुमोदन Anyang Institute of Technology की Ethics Committee से प्राप्त किया गया था।

Echinacosideमेंसिस्तानचेइलाज कर सकते हैंगुर्दा रोग

संदर्भ

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पावती

इस काम को हेनान प्रांत के विश्वविद्यालयों में विज्ञान और प्रौद्योगिकी नवाचार प्रतिभाओं के लिए कार्यक्रम (18HASTIT035) HASTIE, Anyang Institute of Technology के आधुनिक जैविक प्रौद्योगिकी अनुसंधान संस्थान के निर्माण कार्यक्रम, और S & T, शांक्सी प्रांत, चीन में अंतर्राष्ट्रीय सहयोग आधार के प्रमुख निर्माण कार्यक्रम (2015SD0018) द्वारा समर्थित किया गया था।

लेखक योगदान

झी-हुई जियांग और बो झोउ ने अनुसंधान डिजाइन किया, अनुसंधान किया, डेटा का विश्लेषण किया, और पेपर लिखा; Xin-ping ली और गॉर्डन एम किर्बी ने अनुसंधान और विश्लेषण डेटा डिजाइन किया; Xiao-Ying झांग ने अनुसंधान डिजाइन किया।

अतिरिक्त जानकारी

प्रतिस्पर्धी रुचियाँ:लेखकों ने कोई प्रतिस्पर्धी हितों की घोषणा नहीं की है।

प्रकाशक के नोट: स्प्रिंगर नेचर प्रकाशित मानचित्रों और संस्थागत संबंधों में क्षेत्राधिकार के दावों के संबंध में तटस्थ रहता है।