सिस्टैंच ट्यूबुलोसा से फेनिलएथेनॉल ग्लाइकोसाइड्स हेपेटिक स्टेलेट सेल सक्रियण को दबाते हैं और टीजीएफ में सिग्नलिंग पाथवे के संचालन को अवरुद्ध करते हैं -01/smad संभावित एंटी-हेपेटिक फाइब्रोसिस एजेंटों के रूप में

संपर्क: ऑड्रे हू Whatsapp/hp: 0086 13880143964 ईमेल:audrey.hu@wecistanche.com

शू-पिंग यू, लॉन्ग मा, जून झाओ, शि-लेई झांग और ताओ लियू

सार: सिस्टैंच ट्यूबुलोसाएक पारंपरिक चीनी हर्बल दवा है जो व्यापक रूप से प्रतिरक्षा को विनियमित करने के लिए उपयोग की जाती है औरफेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स(सीपीएचजी) इस गतिविधि के लिए जिम्मेदार प्राथमिक घटकों में से हैं। पिछले अध्ययनों ने चूहों में गोजातीय सीरम एल्ब्यूमिन (बीएसए) से प्रेरित यकृत फाइब्रोसिस पर सीपीएचजी के निवारक और चिकित्सीय प्रभावों का संकेत दिया है। अध्ययन का उद्देश्य सीपीएचजी और मोनोमर्स के एंटी-यकृत फाइब्रोसिस प्रभाव का मूल्यांकन करना था।इचिनाकोसाइडतथाएक्टोसाइडहेपेटिक स्टेलेट सेल (एचएससी) सक्रियण को रोककर, ग्रोथ फैक्टर-पी1 (टीजीएफ-पी1)/स्मैड को बदलने में सिग्नलिंग मार्ग के प्रवाहकत्त्व को अवरुद्ध करके, और निर्धारित करें कि वे विट्रो हेपेटोप्रोटेक्टिव गतिविधि में हैं। CPhGs (100,50 ^g/mL)/echinacoside (500,250,125 ^g/mL)/acteoside (6, 3 ^g/mL) के साथ उपचार के बाद HSC प्रसार को स्पष्ट रूप से रोक दिया गया था, जिसमें IC50 मान 119.125,520.345 और 6.999 g/ एमएल, क्रमशः, एमटीटी परख में। सीपीएचजी की विभिन्न सांद्रता/इचिनाकोसाइड/एक्टोसाइडलैक्टेट डिहाइड्रोजनेज (एलडीएच) माप के अनुसार एचएससी पर सेलुलर विषाक्तता को प्रभावित नहीं किया। सीपीएचजी की विभिन्न सांद्रता/इचिनाकोसाइड/एक्टोसाइडsmad7 के mRNA स्तर और प्रोटीन अभिव्यक्ति को बढ़ाया और HSC में smad2, smad3 और smad2, फॉस्फो-smad2 (p-smad2), smad3, फॉस्फो-smad3 (p-smad3) की प्रोटीन अभिव्यक्ति के mRNA स्तर को कम किया। संक्षेप में, ये परिणाम प्रदर्शित करते हैं कि CPhGs/इचिनाकोसाइड/एक्टोसाइडTGF-p1/smad में सिग्नलिंग मार्ग के प्रवाहकत्त्व को अवरुद्ध कर सकता है, और HSC की सक्रियता को रोक सकता है, यह सुझाव देता है किसी. ट्यूबुलोसाइस प्रकार यकृत फाइब्रोसिस के उपचार के लिए एक संभावित हर्बल दवा हो सकती है।

कीवर्ड: सिस्टैंच ट्यूबुलोसा; से फेनिलएथेनॉल ग्लाइकोसाइड्ससिस्टांचे(सीपीएचजी);इचिनाकोसाइड; एक्टोसाइड; हेपेटिक स्टेलेट सेल (एचएससी); TGF-p1/smad

सिस्टैंच ट्यूबुलोसा

1 परिचय

प्रोलिफेरेटिव और फाइब्रोजेनिक बन जाते हैं, बाद में ईसीएम जमा करते हैं, और अंततः फाइब्रोजेनिक मायोफिब्रोब्लास्ट जैसी कोशिकाओं में अंतर करते हैं। ट्रांसफॉर्मिंग ग्रोथ फैक्टर-.1 (TGF-p 1) को मुख्य प्रोफिब्रोजेनिक मध्यस्थ माना जाता है। TGF-&1 के साथ सिग्नलिंग पाथवे-संबंधित हेपेटिक फाइब्रोसिस का एक महत्वपूर्ण तंत्र है, और इसमें मुख्य रूप से स्मैड-डिपेंडेंट और स्मैड-इंडिपेंडेंट सिग्नलिंग शामिल है, और स्मॉड-डिपेंडेंट सिग्नलिंग ट्रांसडक्शन पाथवे को TGF-p1 सिग्नलिंग का एक प्रमुख चैनल माना जाता है। . इसलिए, TGF-p1 / smad सिग्नलिंग मार्ग की नाकाबंदी कोलेजन उत्पादन को दबा सकती है और अंततः यकृत फाइब्रोसिस को कम कर सकती है, जिसने इस मार्ग को हाल के वर्षों में एंटी-यकृत फाइब्रोसिस दवा अनुसंधान में एक महत्वपूर्ण लक्ष्य बना दिया है।

दुनिया भर में हेपेटिक फाइब्रोसिस की उच्च घटनाओं के बावजूद, आम तौर पर स्वीकृत एंटी-फाइब्रोजेनिक थेरेपी उपलब्ध नहीं है [2-4]। पारंपरिक चीनी हर्बल दवाएं (टीसीएचएम) यकृत विकारों के उपचार के लिए बहुत रुचि रखती हैं क्योंकि कुछ का उपयोग यकृत फाइब्रोसिस के प्रबंधन और रोकथाम में चिकित्सीय दवाओं का उपयोग किया जा सकता है। वर्तमान में, कई अध्ययन संभावित एंटी-फाइब्रोजेनिक दवाओं पर केंद्रित हैं जिनका उपयोग हजारों वर्षों से टीसीएचएम के रूप में किया जाता रहा है [5]।

सिस्टैंच ट्यूबुलोसा डब्ल्यू (परिवार ओरोबैंचेसी)फा परजीवी पौधा, चीन में झिंजियांग के दक्षिणी क्षेत्र में व्यापक रूप से उगाया जाता है [6]। लोग इसका उपयोग गुर्दे को मजबूत करने, रक्त को पोषण देने, आंतों को आराम देने और बिना किसी दुष्प्रभाव के वृद्धावस्था में देरी करने के लिए करते हैं, और आधिकारिक तौर पर चीनी फार्माकोपिया [7] में सूचीबद्ध है। C. ट्यूबुलोसा में विभिन्न प्रकार के सक्रिय घटक होते हैं, जिनमें फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स (CPhGs), इरिडोइड्स और पॉलीसेकेराइड शामिल हैं। सी. ट्यूबुलस में कई सक्रिय घटकों में से, सीपीएचजी, जो कई बायोएक्टीविटी (एंटीऑक्सिडेंट, एंटीफैटीग, रेडियोरेसिस्टेंस, आदि) पेश करते हैं, इस संयंत्र के पाई मुख्य विशेषता घटक हैं। हाल के वर्षों में, यह बताया गया है कि CPhGis में हेंट हेपेटोप्रोटेक्टिव प्रभाव की अधिकता होती है, और यह पेड़ के रेडिकल्स को परिमार्जन कर सकता है, यकृत झिल्लियों की रक्षा कर सकता है, और इम्युनोरेगुलेटरी प्रभाव प्रदर्शित कर सकता है, एपोप्टोसिस को रोक सकता है, हेपेटाइटिस बी सतह प्रतिजन (HBs Ag) और हेपेटाइटिस B की अभिव्यक्ति को रोक सकता है। ई एंटीजन (HBeAg) और हेपेटाइटिस बी वायरस (HBV) डीएनए प्रतिकृति गतिविधि, आदि। HBV डीएनए स्तर सबसे विश्वसनीय सूचकांक है जो सीधे वायरल प्रतिकृति गतिविधि को दर्शाता है, जो पुराने HBV संक्रमणों के प्राकृतिक इतिहास को निर्धारित करने में महत्वपूर्ण कारक है। ओपी एंटीवायरल थेरेपी के प्रभाव की निगरानी करना, और तीव्र और पुरानी एचबीवी संक्रमणों के पूर्वानुमान का आकलन करना। HBV के सीरोलॉजिकल डिटेक्शन इंडेक्स में मुख्य रूप से HBsAg, HBeAg, आदि शामिल हैं। [8-11]। हालाँकि, CPhGs के यकृत-विरोधी फाइब्रोसिस प्रभावों में कुछ साहित्य रिपोर्टें हैं। पिछले अध्ययनों ने चूहों में गोजातीय सीरम एल्ब्यूमिन (बीएसए) से प्रेरित यकृत फाइब्रोसिस पर सीपीएचजी के निवारक और चिकित्सीय प्रभावों का संकेत दिया है, लेकिन सीपीएचजी और इसके प्रमुख मोनोमर्स (इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड, चित्रा 1) की एंटीफिब्रोजेनिक गतिविधि का इन विट्रो में कभी मूल्यांकन नहीं किया गया है।

कार्बनिक सिस्टैंच ट्यूबुलोसा

2. परिणाम

2.1. सीपीएचजी का मात्रात्मक निर्धारण

में सीपीएचजीसी. ट्यूबुलोसाइसमें ITwo फेनिलथाइल अल्कोहल ग्लाइकोसाइड होते हैं: इचिनाकोसाइड और एक्टियो साइड, और CPhGs में उनकी सामग्री को HPLC विश्लेषण (चित्र 1) द्वारा 42.71 प्रतिशत 0.42 प्रतिशत और 14.27 प्रतिशत 土 0.18 पाया गया। प्रतिशत, क्रमशः।

2.2. एचएससी-टी6 पर सीपीएचजी, इचिनाकोसाइड और एक्टियोसाइड की निरोधात्मक गतिविधियां

CPhGs, इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड (62.5-500 g/mL) ने एकाग्रता-निर्भर तरीके से HSC की सेल व्यवहार्यता को बाधित किया। CPhGs और एक्टोसाइड ने HSC कोशिकाओं पर एक उल्लेखनीय निरोधात्मक गतिविधि दिखाई, जिसमें सेल विकास गतिविधि (IC50) का 50 प्रतिशत निषेध क्रमशः 119.125 /mL और 6.999 /mL था। इचिनाकोसाइड ने मध्यम निरोधात्मक गतिविधि प्रदर्शित की (IC50,520.345 /mL; तालिका 1 और चित्र 2)।

2.3. CPhGs की सेल विषाक्तता, एचएससी पर एक्टीओरिडा और एक्टोरिडा के साथ इचिन

लैक्टेट डिहाइड्रोजनेज (एलडीएच), सभी कोशिकाओं में मौजूद एक स्थिर साइटोप्लाज्मिक एंजाइम, प्लाज्मा झिल्ली क्षति पर सेल संस्कृति सतह पर तैरनेवाला में तेजी से फिर से पट्टे पर है। संस्कृति सतह पर तैरनेवाला में एंजाइम गतिविधि lysed celfs [12] के अनुपात से संबंधित है। जैसा कि तालिका 2 में दिखाया गया है, जब विभिन्न के साथ इलाज किया जाता है: सी पीएचजी, इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड की सांद्रता, हालांकि एलडीएच गतिविधि ने सेल कॉयरट्रोल समूह की तुलना में थोड़ी वृद्धि दिखाई, अंतर सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण नहीं था (पी> 0.05 ), यह दर्शाता है कि अधिकांश कोशिका झिल्ली अपनी अखंडता को बनाए रखते हैं, और एचएससी पर सीपीएचजी, इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड का निषेध गैर-कोशिकीय विषाक्तता के कारण नहीं है।

2.4. टीजीएफ द्वारा प्रेरित एचएससी प्रसार पर सीपीएचजी, इचिनाकोसाइड और एक्टियोसडे का प्रभाव-^i

एचएससी के प्रसार, सक्रियण और विभेदन को विभिन्न कारकों द्वारा नियंत्रित किया जाता है। लीवर फाइब्रोसिस में शामिल विभिन्न कारकों में, टीजीएफ {{0}} को सबसे महत्वपूर्ण माना जाता है, क्योंकि यह एचएससी को सक्रिय कर सकता है, मायोफिब्रोब्लास्ट भेदभाव को बढ़ावा दे सकता है, ईसीएम संश्लेषण को बढ़ा सकता है और ईसीएम गिरावट को रोक सकता है, और केमोकाइन्स को छोड़ सकता है। लिवर फाइब्रोसिस [13] में शामिल साइटोकिन्स। इस अध्ययन में, नियंत्रण समूह को छोड़कर, स्थिर एचएससी को इन विट्रो में टीजीएफ-पी1 के साथ प्रेरित किया गया था ताकि प्रारंभिक यकृत फाइब्रोसिस के गठन का अनुकरण किया जा सके, और टीजीएफ-पी पर सीपीएचजी, इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड के प्रभाव की जांच की जा सके 1- प्रेरित एचएससी प्रसार। जैसा कि तालिका 3 में दिखाया गया है, नियंत्रण समूह की तुलना में, TGF -61 समूह ने HSC (p <0.01) के="" प्रसार="" को="" महत्वपूर्ण="" रूप="" से="" बढ़ावा="" दिया।="" tgf-p1="" समूह="" की="" तुलना="" में,="" tgf-p1="" प्लस="" cphgs="" (tc)="" (50,100="" g/ml,="" p=""><0.05), tgf{{18}="" }="" प्लस="" इचिनाकोसाइड="" (टीई)="" (125,="" 250,="" 500="" माइक्रोग्राम/एमएल,="" पी="">< 0.05),="" टीजीएफ-पी1="" प्लस="" एक्टोसाइड="" (टीए)="" (3.0,="" 6.0="" g/एमएल,="" पी=""><0.05) सभी="" उल्लेखनीय="" रूप="" से="" इसके="" प्रसार="" को="" रोकते="" हैं।="" tgf-|3="" 1="" से="" अलग-अलग="" डिग्री="" से="" प्रेरित="">

2.5. CPhGs के बाद smad2) smad3 और smad7 mRNA की अभिव्यक्तियाँ, HSCs पर ochmacoside और acteaside हस्तक्षेप

Smad3 और smad2 TTGF-p सिग्नलिंग मार्ग [14,15] के प्रमुख डाउनस्ट्रीम प्रभावकारक हैं, और smad7 smad सिग्नलिंग का अवरोधक है। सैद्धांतिक रूप से, smad7 की बढ़ी हुई अभिव्यक्ति या smad2/smad3 की घटी हुई अभिव्यक्ति TGF-p 1/smad में सिग्नलिंग मार्ग के प्रवाहकत्त्व को अवरुद्ध कर सकती है। जैसा कि चित्र 3 में दिखाया गया है, वास्तविक समय मात्रात्मक पीसीआर विश्लेषण से पता चला है कि smad2 और smad3 की mRNA अभिव्यक्ति ने निम्न स्तर का संकेत दिया, जबकि smad7 ने TGF-|31 समूह की तुलना में नियंत्रण समूह में उच्च स्तर का संकेत दिया। TC (25, 50, 75,100 |dg/mL) समूह में, smad2 का mRNA स्तर (p < 0.{{37="" }}5)="" और="" smad3="" (p=""><0.01) tgf-pf="" समूह="" के="" साथ="" तुलना="" में="" काफी="" कम="" हो="" गए="" थे,="" और="" यहां="" तक="" ​​कि="" नियंत्रण="" समूह="" के="" समान="" थे;="" मुझे="" थोड़ी="" देर="" में,="" tc="" (50,="" 75,100="" g/ml)="" समूह="" (p=""><0.05, p=""><0.05, p=""><0.01, क्रमशः)="" में="" smad7="" का="" mrna="" स्तर="" काफी="" बढ़="" गया="" था।="" हालांकि;="" smad7="" अभिव्यक्ति="" ने="" tgf-p1="" समूह="" (चित्र="" 3)="" की="" तुलना="" में="" thetc="" 25="" g/ml="" समूह="" में="" आरोही="" प्रवृत्ति="" का="" संकेत="">

मीनव हाइल, टीजीएफ-पी1 समूह के साथ तुलना में, स्मैड2 और स्मैड3 एमआरएनए की अभिव्यक्ति टीई (62.5, 125, 250, 500 g में काफी कम हो गई है। /mL) समूह (p < 0.01),="" और="" smad7="" mrna="" के="" भाव="" te="" (125,="" 250,500="" मएल)="" समूह="" (p="">< 0.01)="" (चित्र="" 4)="" में="" काफी="" बढ़="" गए="" थे।="" .="" इसी="" तरह,="" टीए="" (0.75,1.5,="" 3.0,="" 6.0="" ^g/ml)="" समूह="" ने="" भी="" यही="" प्रवृत्ति="" दिखाई="" (चित्र="">

2.6. एचएससी में टी जीएफ-^आई/स्मैड सिग्नलिंग पाथवे पर सीपीएचजी, इचिनाकोसाइड और एसी) ईओसिड का प्रभाव

TGF-p 1/smad सिग्नलिंग मार्ग smad2, smad3, फॉस्फो-smad2 (p-smad2), फॉस्फो-smad3 (p-smad3) और smad7 पर निर्भर करता है, जहां p-smad2, p-smad3 smad2 के सक्रिय रूप हैं और smad3. इस अध्ययन में omad2, smad3, p-smad2, p-smsd3 और smad7 के प्रोटीन स्तर का विश्लेषण किया गया। पश्चिमी धब्बा विश्लेषण में पाया गया कि TGF-p1 द्वारा smad2, smad3, p-smad2, p-smad3 स्तरों में वृद्धि हुई है, और CPhGs, ec hinacoside और acteoside द्वारा इन वृद्धि को रोकना; इस बीच, वेसियरन ब्लॉट विश्लेषण ने CPhGs, इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड द्वारा अप-विनियमित smad7 स्तरों का खुलासा किया। (चित्र 6-8)।

जैसा कि चित्र 6 में दिखाया गया है, c on2rol समूह (smad2, smad3, p-smad2, p-smad3 के प्रोटीन भावों की तुलना में काफी वृद्धि हुई थी, और TGF-p1 समूह में smad7 प्रोटीन अभिव्यक्ति कम हो गई थी। TC में (25) , 50, 75, 100 /एमएल) दवा समूह, स्मैड/ (चित्र 6ए), पी-स्मैड2 (चित्र 6बी), स्मैड 3 (चित्र 6सी), पी-स्मैड3 (चित्रा 6डी) अभिव्यक्ति टीजीएफ-पी1 समूह (卩 <0.01) की तुलना में काफी कम थी, और स्मैड7 (चित्रा 6ई) प्रोटीन अभिव्यक्ति टीजीएफ-एस1 समूह (पी <0.01) (चित्रा 6) की तुलना में अधिक थी।

उसी समय, एचएससी पर इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड हस्तक्षेप के बाद smad 2, smad3, p-smad2, p-smad3 और smad7 प्रोटीन के भावों को मापा गया। जैसा कि चित्र 7 और 8 में दिखाया गया है, smad2, smad3, p-smad2 और p-smad3 प्रोटीन अभिव्यक्ति स्तर काफी बाधित थे (p <0.05 या="" p="">< 0.01="" ),="" tgf-p="" 1="" समूह="" (आंकड़े="" 7="" और="" 8)="" की="" तुलना="" में="" smad7="" प्रोटीन="" अभिव्यक्ति="" स्तर="" ऊंचा="" (p=""><0.01)>

3. चर्चा

लिवर फाइब्रोसिस दुनिया भर में रुग्णता और मृत्यु दर के प्रमुख कारणों में से एक है, लेकिन इस स्थिति के लिए वर्तमान में बहुत सीमित चिकित्सीय विकल्प उपलब्ध हैं, इसलिए, लिवर फाइब्रोसिस के विकास को रोकने के लिए चिकित्सीय हस्तक्षेप के संभावित लक्ष्यों की तलाश करना हमारे लिए बहुत महत्वपूर्ण है। 16]. हाल ही में, शोधकर्ताओं ने पाया है कि विभिन्न हर्बल दवाओं में एंटी-फाइब्रोटिक प्रभाव के हेपेटोप्रोटेक्टिव होते हैं। कई टीसीएचएम जैसे फूफांग बिजिया रुआंगन गोलियां [17] और जिओ-चाई-हू काढ़ा (जापान में शोसाइको) [18,19] हजारों वर्षों से चीन, कोरिया और जापान में यकृत फाइब्रोसिस के इलाज के लिए व्यापक रूप से उपयोग किया जाता रहा है। C. ट्यूबुलोसा में CPhGs, iridoids, और polysaccharides सहित विभिन्न प्रकार के सक्रिय घटक होते हैं। सी। ट्यूबुलोसा के प्रभावोत्पादक सामग्री आधारों में से एक के रूप में, सीपीएचजी में उत्कृष्ट हेपेटोप्रोटेक्टिव गतिविधि होती है, लेकिन जीपीएचसी और इसके संबंधित यौगिकों के एंटी-फाइब्रोोटिक प्रभावों के बारे में सीमित जानकारी है। इस अध्ययन में, हमने जांच की कि कैसे CPhGs, echinacoside और Acteoside HSC एक्टिविटी को दबाते हैं और TGF-p1/snaad में संभावित एंटी-हेप ए टिक फाइब्रोसिस एजेंट के रूप में इन विट्रो में एचएससी एक्टिविटी को रोकते हैं।

किसी भी एटियलजि की जिगर की चोट अंततः एचएससी की सक्रियता की ओर ले जाएगी, जो फाइब्रोजेनिक मायोफिब्रोब्लास्ट जैसी कोशिकाओं [20] में ट्रांसडिफेनरेशन से गुजरती है। कहने का तात्पर्य यह है कि मायोफिब्रोब्लास्ट

HSCss [21] के सक्रियण और प्रसार से प्राप्त होते हैं, और इसे यकृत फाइब्रोसिस के गठन का मध्यस्थ माना जाता है। इस कारण से, हमने CPhGs, इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड के संपर्क में आने वाले HSCs की सेल व्यवहार्यता दरों की तुलना करने के लिए इन विट्रो अध्ययन किया। परिणामों से पता चला कि एचएससी पर एक्टोसाइड का निरोधात्मक प्रभाव सबसे मजबूत था, और सीपीएचजी का प्रभाव इचिनाकोसाइड की तुलना में बेहतर था। CPhGs, इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड औषधीय सेरा सभी खुराक पर निर्भर तरीके से HSC प्रसार को रोकते हैं।

एलडीएच जीवित कोशिकाओं में एक साइटोप्लाज्मिक एंजाइम है, और यह सामान्य परिस्थितियों में कोशिका झिल्ली में प्रवेश नहीं कर सकता है। जब कोशिकाएं क्षतिग्रस्त हो जाती हैं, तो झिल्ली की पारगम्यता बढ़ जाती है और एलडीएच कोशिका के बाहरी हिस्से में निकल जाता है। आमतौर पर, एलडीएच कोशिका क्षति की डिग्री [{{0}}] का पता लगा सकता है। जांच से पता चला है कि सीपीएचजी, इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड औषधीय सीरम की एलडीएच गतिविधि ने सेल नियंत्रण समूह की तुलना में केवल मामूली वृद्धि दिखाई, और अंतर सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण नहीं था (पी> 0.05), यह दर्शाता है कि अधिकांश कोशिका झिल्ली ने अपनी अखंडता बनाए रखी है। , और CPhGs, इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड द्वारा HSCs का निषेध गैर-कोशिकीय विषाक्तता के कारण नहीं है।

जब जिगर की चोट होती है, तो सक्रिय हेपेटोसाइट्स टीजीएफ-पीआई को छोड़ सकते हैं जो बदले में एचएससी-टी 6 को सक्रिय करता है, इसलिए, टीजीएफ-पी का फाइब्रोसिस [25-27] के साथ घनिष्ठ संबंध है। इस अध्ययन में, एचएससी को इन विट्रो में डब्ल्यूटीजीएफ-पीआई के साथ उत्तेजित करने के बाद एचएससी प्रसार के निषेध के लिए सीपीएचजी, इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड को एक आकर्षक चिकित्सीय रणनीति के रूप में माना जा सकता है। हम अनुमान लगाते हैं कि CPhGs, इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड का उपयोग लीवर फाइब्रोसिस के एक प्रकार के उपचार और/या रोकथाम के रूप में किया जा सकता है, और प्रारंभिक यकृत फाइब्रोसिस के गठन को रोकता है। यकृत फाइब्रोसिस का गठन बहुकारक और बहुकोशिकीय भागीदारी की एक जटिल प्रक्रिया है। इस पैथोलॉजिकल प्रक्रिया में, सेल-सेल, सेल-साइटोकिन्स और सेल-मैट्रिक्स इंटरैक्शन एक बोझिल नेटवर्क का निर्माण करते हैं। इस नेटवर्क में, यकृत फाइब्रोसिस के विकास को विभिन्न संकेतन पथों और साधनों द्वारा नियंत्रित किया जा सकता है। टीजीएफ-पीआई एचएससी का एक उत्कृष्ट उत्प्रेरक है और यकृत फाइब्रोसिस [28] के रोगजनन में एक प्रमुख मध्यस्थ है। CPhGs, echinacoside और Acteoside HSCs में TGF-pi/smad पाथवे-संबंधित mRNA और प्रोटीन के भावों को बाधित कर सकते हैं।

TGF-pi स्मॉड सिग्नलिंग मार्ग के माध्यम से अपने सेलुलर प्रभाव डालता है, और इसे लीवर फाइब्रोसिस और सूजन के विकास में एक प्रमुख मध्यस्थ माना गया है। टीजीएफ-पी को टीजीएफ-पी-टाइप II रिसेप्टर से बांधने पर, टाइप II रिसेप्टर किनेज टीजीएफ-पी टाइप I रिसेप्टर के जीएस डोमेन को फास्फोराइलेट करता है, जिससे टाइप I रिसेप्टर [29] सक्रिय हो जाता है। उनके सी टर्मिनल के SSXS रूपांकन में दो सेरीन अवशेषों पर p-smad2 और p-smad3 की क्रिया के माध्यम से, smad सिग्नलिंग मार्ग के बहाव की प्रतिक्रिया टाइप I रिसेप्टर [30] की सक्रियता से सक्रिय होती है। P-smad2 और p-smad3 smad4 के साथ ऑलिगोमेरिक कॉम्प्लेक्स बनाते हैं, फिर नाभिक में प्रवेश करते हैं और अपनी जैविक प्रतिलेखन गतिविधि को बढ़ाते हैं। इस प्रकार, स्मॉड प्रोटीन रिसेप्टर किनसे से सीधे नाभिक [3i] तक सिग्नल पहुंचाते हैं। दूसरी ओर, smad7 को TGF-pi रिसेप्टर के साथ मजबूती से जोड़ा जाता है, जिससे smad 2/3 को सक्रिय करने में असमर्थता के साथ-साथ सिग्नल ट्रांसडक्शन पथ [32] का निषेध होता है। Smad7 p-smad2 और p-smad3, सक्रिय smad परिसरों के परमाणु अनुवाद और (CAGA) (9)-MLP-Luc की सक्रियता को बाधित करने के लिए कार्य कर सकता है, जिसके परिणामस्वरूप कोलेजन I अभिव्यक्ति में कमी और TGF-p सिग्नल ट्रांसडक्शन का पूर्ण निषेध होता है। [33,34]। हमारे परिणामों से पता चला है कि CPhGs, echinacoside और acteoside smad2 और smad3 mRNA अभिव्यक्तियों को कम कर सकते हैं और smad7 mRNA अभिव्यक्ति को बढ़ा सकते हैं; smad2, p-smad2, smad3 और p-smad3 प्रोटीन अभिव्यक्तियों को रोकें, और smad7 प्रोटीन अभिव्यक्ति को विनियमित करें, यह सुझाव देते हुए कि CPhGs, echinacoside और acteoside भी HSC सक्रियण को बाधित करने में एक भूमिका निभाते हैं और इस प्रकार एक संभावित एंटी-फाइब्रोटिक को उजागर करते हुए यकृत फाइब्रोसिस को रोकते हैं। तंत्र।

तीन परीक्षण एजेंटों के हेपेटोप्रोटेक्टिव प्रभावों के अनुक्रम को एक्टोसाइड> सीपीएचजी> इचिनाकोसाइड दिखाया गया था। तंत्र में अंतर के कारणों को और स्पष्ट करने के लिए जिसके द्वारा सीपीएचजी, इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड यकृत फाइब्रोसिस से रक्षा करते हैं, उनकी रासायनिक संरचनाओं का विश्लेषण किया गया था। फेनिथाइल अल्कोहल ग्लाइकोसाइड की मात्रा हेपेटोप्रोटेक्टिव प्रभाव [35] के लिए एक आवश्यक संरचना प्रतीत होती है। एक्टियोसाइड (C29H36Oi5) एक डबल ग्लाइकोसाइड है, और इचिनाकोसाइड (C35H46O20) एक ट्राइग्लाइकोसाइड है, अर्थात, इचिनाकोसाइड में एक्टोसाइड की तुलना में इसकी संरचना में एक अतिरिक्त ग्लाइकोसाइड होता है, जिससे इसके स्थानिक आकार में वृद्धि होती है। एक्टोसाइड की एचएससी गतिविधि का हेपेटोप्रोटेक्टिव या निषेध इचिनाकोसाइड की तुलना में बेहतर है, जो कि स्टेरिक बाधा के अस्तित्व के कारण हो सकता है।

जिगर की रक्षा करें: सिस्टैंच का अर्क

4. प्रायोगिक खंड

4.1. रसायन और अभिकर्मक

TGF-pi को Peprotech (रॉकी हिल, NJ, USA) से खरीदा गया था। HSC-T6 सेल लाइन को वुहान प्रोसेल जीन बायो-टेक्नोलॉजी कं, लिमिटेड (वुहान, चीन) से खरीदा गया था। डाइमिथाइल सल्फ़ोक्साइड (DMSO) को सिग्मा इंक। (सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) से खरीदा गया था। Smad2, smad3 और smad7 प्राइमरों का निर्माण शंघाई सांगॉन बायोलॉजिकल एंड टेक्नोलॉजिकल कंपनी (शंघाई, चीन) द्वारा किया गया था। रिवर्ट एड फर्स्ट स्ट्रैंड सीडीएनए सिंथेसिस किट थर्मो साइंटिफिक (शंघाई, चीन) से खरीदा गया था। क्वांटिफास्ट SYBR ग्रीन PCR किट QIAGEN GmbH (हिल्डेन, जर्मनी) से खरीदी गई थी। p-smad2 (ser465/467) एंटीबॉडी, Smad3 (C67H9) खरगोश mAb और p-smad3 (ser423/425) खरगोश mAb सेल सिग्नलिंग टेक्नोलॉजी (बोस्टन, MA, यूएसए) से खरीदे गए थे। Smad7 एंटीबॉडी को Boster (वुहान, चीन) से खरीदा गया था। Smad2 पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी और पी-एक्टिन मोनोक्लोनल एंटीबॉडी प्रोटीनटेक (वुहान, चीन) से खरीदे गए थे। Invitrogen™ (Carlsbad, CA, USA) से खरीदे गए 2 डिग्री एंटीबॉडी सॉल्यूशन (Alk-Phos. Conjugated, Anti-rabbit) और 2 डिग्री Antibody Solution (Alk-Phos. Conjugated, Anti-mouse) का उपयोग करके प्राथमिक एंटीबॉडी का पता लगाया गया। लैक्टेट डिहाइड्रोजनेज परख किट नानजिंग जियानचेंग बायोइंजीनियरिंग इंस्टीट्यूट (नानजिंग, चीन) से थी।

4.2. संयंत्र के लिए सामग्री

सी. ट्यूबुलोसा को मई 2006 में चीन के झिंजियांग उइरघुर ऑटोनोमो यूएस क्षेत्र में तुलुफ़ान से एकत्र किया गया था। पौधों की सामग्री को जियांग हे, झिंजियांग के मटेरिया मेडिका संस्थान द्वारा सी। ट्यूबुलोसा के रूप में पहचाना गया था। चीन में झिंजियांग के मटेरिया मेडिका संस्थान में एक वाउचर नमूना जमा किया गया था।

4.3. सीपीएचजी और उसके यौगिकों का अलगाव और शुद्धिकरण

सी. ट्यूबुलोसा (6.0 किग्रा) के सूखे और कटे हुए प्रकंदों को 70 प्रतिशत इथेनॉल (4.8 एल) के साथ रिफ्लक्स के तहत लगातार तीन बार निकाला गया, और सॉल्वेंट को तब संयुक्त अर्क से हटा दिया गया था। इथेनॉल निकालने (1.146 किलो) प्राप्त करने के लिए। कच्चे फिनाइल इथेनॉल ग्लाइक ओएस आइड्स (CPhG s) अर्क प्राप्त करने के लिए इथेनॉल एक्स ट्रैक्ट को AB -8 राल द्वारा शुद्ध किया गया था। पानी में घुलने के बाद, सी. ट्यूबुलोसा (CPhGs, 21 0 g) से कुल फिनाइल इथेनॉल ग्लाइको पक्ष प्राप्त करने के लिए AB -8 ad sorption macroporous राल क्रोमैटोग्राफी द्वारा एक्सट्र एक्ट को शुद्ध किया गया था। CPhGs को ODS OP{{10}} कॉलम पर लागू किया गया और MeOH-H?(0:1 -^1:0) के मिश्रण के साथ क्रमिक रूप से संवर्धित किया गया। Elua tes को सॉल्वेंट सिस्टम CHCh-MeOH-H?.(6:4:0.5) का उपयोग करके TLC व्यवहार के अनुसार पांच उप अंशों में संयोजित किया गया था। 1 प्रतिशत FeCih के साथ छिड़काव के बाद स्पॉट की कल्पना की गई थी। विभिन्न अंशों को बार-बार सेफैडेक्स एलएच -20 कॉलम क्रोमैटोग्राफी द्वारा मेथनॉल के साथ एलुएंट के रूप में शुद्ध किया गया था, और दो फिनाइल इथेनॉल ग्लाइकोसाइड को सीपीएचजी से अलग किया गया था। MS, 1H-, और MC-NMR [35] का उपयोग करके उनकी संरचनाओं को इचिनाकोसाइड (C35H46O20) और एक्टोसाइड (C29H36O15) के रूप में पुष्टि की गई थी, जिनकी शुद्धता यूवी-एचपीएलसी द्वारा क्रमशः 99.17 प्रतिशत और 98.92 प्रतिशत निर्धारित की गई थी। इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड की संरचनाओं को चित्र 9 में दिखाया गया है।

4.5. सीपीएचजी का मात्रात्मक निर्धारण

तरल क्रोमैटोग्राफी (एचपीएलसी) (एलसी {0}} एक एचपीएलसी उपकरण, शिमदज़ु कं, क्योटो, जापान) को सीपीएचजी में एचीना कोसाइड और एक साइटोसाइड की सामग्री का विश्लेषण करने के लिए नियोजित किया गया था। एक फेनोमेनेक्स जेमिनी ओडीएस कॉलम (250 x 4.6 मिमी, 5|^ मी) का उपयोग 30 डिग्री पर किया गया था। मेथनॉल-एसीटोनिट्राइल -1 प्रतिशत एसिटिक एसिड (15:10:75, v/v/v) से युक्त एक लोकतांत्रिक मोबाइल चरण का उपयोग 40 मिनट की दौड़ के लिए, 0.6 एमएल/मिनट की प्रवाह दर पर, यूवी के साथ किया गया था। 334 एनएम पर पता लगाना।

4.6. कोश पालन

HSC कोशिकाओं को Dulbecco के संशोधित ईगल माध्यम (उच्च ग्लूकोज) (DMEM, बीजिंग, चीन) में 1 0 प्रतिशत भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS, गिब्को, कार्ल्सबैड, CA, यूएसए), 1 0 के साथ पूरक किया गया था। 0 IU/mL पेनिसिलिन और 100 ^g/mL स्ट्रेप्टोमाइसिन (HyClone, Logan, UT, USA) एक ह्यूमिडिफाइड इनक्यूबेटर में 37 डिग्री पर 5 प्रतिशत CO2 के साथ। इन कोशिकाओं को नियमित रूप से ट्रिप्सिन 0.25 प्रतिशत (1x) समाधान (HyClone, Logan, UT, USA) द्वारा उपसंस्कृत किया गया था और माध्यम को हर 2 दिनों में बदल दिया गया था। प्रारंभ में, कोशिकाओं को 48 घंटे के लिए 10 प्रतिशत FBS युक्त DMEM के साथ सुसंस्कृत किया गया था। तब माध्यम को 12 घंटे के लिए कोशिकाओं को भूखा रखने के लिए बिना FBS के DMEM से बदल दिया गया था। इन कोशिकाओं को 48 घंटे के लिए प्रचारित किया गया था और 48 घंटे के बाद, सीरम को 5 एनजी/एमएल टीजीएफ-&1 जोड़ने से पहले 12 घंटे के लिए 0.5 प्रतिशत एफबीएस के साथ भूखा रखा गया था।

4.7. IC50 मूल्यों का निर्धारण

{0}}.5 प्रतिशत FBS युक्त भुखमरी माध्यम में रात भर ऊष्मायन के बाद, एचएससी कोशिकाओं को 24 घंटे के लिए 5 x 104 कोशिकाओं/एमएल के घनत्व पर एक 96-वेल प्लेट में रखा गया था। एचएससी कोशिकाओं को 48 घंटे के लिए अलग-अलग सांद्रता (0, 3.90625, 7.8125, 15.625,31.25, 62.5, 125, 250, और 500 ^g/mL) पर CPhGs, इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड के साथ इलाज किया गया था। प्रत्येक एकाग्रता में चार कुएं थे। उपचार के अंत में, 20 卩L MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] (सिग्मा; 5 मिलीग्राम / एमएल) जोड़ा गया था और कोशिकाओं को एक और 4 घंटे के लिए ऊष्मायन किया गया था। सतह पर तैरनेवाला को हटाने के बाद प्रत्येक कुएं में DMSO (200 rL) जोड़ा गया। एक प्रकार के बरतन पर 10 मिनट के लिए प्लेट को हिलाने के बाद, एक एंजाइम-लेबलिंग उपकरण (बेंचमार्क प्लस, हरक्यूलिस, सीए, यूएसए) का उपयोग करके 490 एनएम तरंग दैर्ध्य पर अवशोषण को मापकर IC50 मान प्राप्त किए गए थे, इस परख को तीन प्रतियों में किया गया था। CPhGs, इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड के IC50 मान क्रमशः 119.125, 520.345 और 6.999 Rg/mL थे।

4.8. सेल प्रोलिफेरेटिव निषेध प्रभाव और सेल व्यवहार्यता

एचएससी कोशिकाओं को सीपीएचजी (25,50,100 आरजी/एमएल), इचिनाकोसाइड (125,250,500 आरजी/एमएल) और एक्टोसाइड (1.5,3, 6 आरजी/एमएल) के विभिन्न सांद्रता से अवगत कराया गया। CPhGs, इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड की विभिन्न सांद्रता को लगातार चार कुओं में प्लेट पर लगाया गया और 48 घंटे के लिए ऊष्मायन किया गया। सेल प्रसार निषेध प्रभाव और सेल व्यवहार्यता का स्तर (क्षतिग्रस्त कोशिकाओं से सतह पर तैरनेवाला [36] में जारी एलडीएच गतिविधि के माप के आधार पर) एक एमटीटी परख द्वारा निर्धारित किया गया था। निषेध दर की गणना निम्न सूत्र [37] का उपयोग करके की गई थी:

अवरोध दर (प्रतिशत)" [1 — (प्रायोगिक समूह का औसत अवशोषण/रिक्त नियंत्रण समूह का औसत अवशोषण)] x 100 प्रतिशत

किट के निर्देश के अनुसार,

एलडीएच (यू/एल) {{0}} (मापा ओडी - नियंत्रण ओडी)/(मानक ओडी - ब्लैंकोड) x 0.2 मिमीोल/एल x 1000

हमारे प्रारंभिक अध्ययन से पता चला है कि सीपीएचजी, इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड ने सेल व्यवहार्यता को प्रभावित नहीं किया।

4.9. टीजीएफ-^1 . द्वारा अप्रसार विरोधी गतिविधियां

TGF-p1 द्वारा सक्रिय HSC को लंबे समय से लीवर फाइब्रोसिस से जुड़ा माना जाता है, और HSC वृद्धि के लिए अवरोध को लीवर फाइब्रोसिस [36,38] के इलाज के लिए एक विधि के रूप में प्रस्तावित किया गया है। TGF-p1 द्वारा सक्रिय HSCs पर CPhGs, इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड के प्रसार-विरोधी प्रभाव एक MTT परख [39] द्वारा निर्धारित किए गए थे। वर्णित के रूप में प्रक्रियाओं और दवा सांद्रता का उपयोग करना,

प्रयोगात्मक समूहों में नियंत्रण समूह, टीजीएफ-पीआई समूह, टीजीएफ-पाई प्लस विभिन्न एकाग्रता दवा समूह शामिल थे। नियंत्रण समूह को छोड़कर सभी सेल समूहों को 24 घंटे के लिए 5.0 एनजी/एमएल टीजीएफ-पी1 (एफबीएस के बिना) युक्त डीएमईएम के साथ सुसंस्कृत किया गया था। सेल प्रसार पर निरोधात्मक गतिविधि की गणना 100 x (उपचारित यौगिक का अवशोषण - पृष्ठभूमि प्रकाश का अवशोषण) / (मॉडल का अवशोषण - पृष्ठभूमि प्रकाश का अवशोषण) के रूप में की गई थी।

4.10. रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन-पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (RT-PCR)

Smad2, smad3 और smad7 का mRNA अभिव्यक्ति स्तर वास्तविक समय पीसीआर द्वारा निर्धारित किया गया था। एचएससी कोशिकाओं में एमआरएनए अभिव्यक्ति निर्धारित करने के लिए, कोशिकाओं (5 x 104 कोशिकाओं) को छह-अच्छी तरह से प्लेटों में 3.0 एमएल डीएमईएम के साथ 10 प्रतिशत एफबीएस के साथ रखा गया था और 37 डिग्री पर रातोंरात ऊष्मायन किया गया था और 5 प्रतिशत CO2। कल्चर मीडिया को सीरम-मुक्त DMEM में बदलने के बाद, CPhGs (100,50,25 g/mL), इचिनाकोसाइड (500,250,125 /mL) और एक्टोसाइड (6, 3,1.5 ^g/mL) को कुओं में जोड़ा गया। CPhGs और मोनोमर रचनाओं के साथ 48 घंटे के लिए ऊष्मायन के बाद, TRIzol अभिकर्मक (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) का उपयोग करके कुल RNA निकाला गया और 15 s के लिए क्लोरोफॉर्म के साथ सख्ती से आंदोलन किया गया। 3 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर खड़े होने की अनुमति देने के बाद, lysate को 12, 000 xg पर 15 मिनट के लिए 4 डिग्री पर सेंट्रीफ्यूज किया गया। जलीय चरण में आरएनए को आइसोप्रोपेनॉल के साथ अवक्षेपित किया गया था, और ऊपरी जलीय चरण को एक नए माइक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूब में स्थानांतरित किया गया था। आरएनए 0.75 प्रतिशत इथेनॉल जोड़कर अवक्षेपित किया गया था, जिसके बाद माइक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूब और 12 डिग्री पर सेंट्रीफ्यूज किया गया, 000 एक्सजी 4 डिग्री पर 5 मिनट से अधिक नहीं। सतह पर तैरनेवाला हटा दिया गया था और आरएनए को कमरे के तापमान पर 5-10 मिनट के लिए सुखाया गया था। प्राइमर (सैंगोन) को बैच प्राइमर 3 का उपयोग करके डिजाइन किया गया था, और तालिका 4 में सूचीबद्ध हैं। परिणाम हाउसकीपिंग जीन पी-एक्टिन के एमआरएनए को आंतरिक नियंत्रण के रूप में सामान्यीकृत किया गया था और सापेक्ष एमआरएनए स्तरों के रूप में प्रस्तुत किया गया था। प्रतिक्रियाओं को 8 |^L iQ SYBR ग्रीन सुपरमिक्स, 1 10 pM प्राइमर जोड़ी, 8.5 आसुत जल और 2.5 rL सीडीएनए के साथ किया गया था।

प्रत्येक पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन निम्नलिखित परिस्थितियों में किया गया था: 3 मिनट के लिए 95 डिग्री, फिर 10 एस के 40 चक्र 95 डिग्री पर, 30 एस 55 डिग्री पर, और 10 एस 55 डिग्री -95 डिग्री पर विस्तार के लिए, उसके बाद एकल प्रतिदीप्ति माप। अंतिम परिणाम सापेक्ष मूल्यों (2_AACt) के साथ वर्णित किए गए थे। गणना और विश्लेषण iQ5 रियल टाइम पीसीआर डिटेक्शन सिस्टम द्वारा किया गया था।

4.11. वेस्टर्न ब्लॉट विश्लेषण

1 प्रतिशत हॉल्ट प्रोटीज इनहिबिटर और 1 प्रतिशत हॉल्ट फॉस्फेटस इनहिबिटर कॉकटेल (थर्मो फिशर साइंटिफिक, इंक।) के साथ रेडियोइम्यूनोप्रेजर्वेशन एसे (आरआईपीए) बफर (थर्मो फिशर साइंटिफिक, इंक।) का उपयोग करके पूरे सेल के अर्क तैयार किए गए थे। smad2, p-smad2, smad3, p-smad3 और smad7 का पता लगाने के लिए कुल प्रोटीन का उपयोग किया गया था। ब्रैडफोर्ड विधि द्वारा प्रोटीन सांद्रता को मापा और निर्धारित किया गया था। प्रोटीन (10-30 आरजी) को 1 0 प्रतिशत एसडीएस-पेज जेल पर अलग किया गया और पॉलीविनाइलिडीन फ्लोराइड (पीवीडीएफ) झिल्ली (मिलिपोर, बोस्टन, एमए, यूएसए) में स्थानांतरित कर दिया गया। 5 प्रतिशत गोजातीय सीरम एल्ब्यूमिन के साथ कमरे के तापमान पर झिल्ली को 1 घंटे के लिए अवरुद्ध किया गया था, और प्राथमिक एंटीबॉडी (smad2 पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी, p-smad2 एंटीबॉडी, smad3 खरगोश mAb और p-smad3 खरगोश mAb, 1: 1000 कमजोर पड़ने; खरगोश mAb smad7, 1 :200 कमजोर पड़ने, पी-एक्टिन मोनोक्लोनल एंटीबॉडी, 1:5000 कमजोर पड़ने) को रातोंरात 4 डिग्री पर इनक्यूबेट किया गया। संबंधित Alk-Phos. संयुग्मित माध्यमिक एंटीबॉडी को कमरे के तापमान पर ऊष्मायन किया गया था। अंत में, झिल्लियों को 0.1 प्रतिशत ट्वीन 20 के साथ 1 x ट्रिस-एचसीएल खारा के साथ तीन बार धोया गया, और संकेतों को स्कैन किया गया और एक जीईएल डीओसी एक्सआर इमेजिंग सिस्टम (बायो-रेड, हरक्यूलिस, सीए, यूएसए) द्वारा कल्पना की गई। डेंसिटोमेट्रिक विश्लेषण ब्याज के प्रोटीन पर किया गया था और जीईएल डीओसी इमेज स्टूडियो सॉफ्टवेयर (बायो-रेड) द्वारा पी-एक्टिन को सामान्य किया गया था। पी-एक्टिन का उपयोग आंतरिक नियंत्रण के रूप में किया गया था।

4.12. सांख्यिकीय विश्लेषण

डेटा को माध्य मानक विचलन (एसडी) के रूप में व्यक्त किया गया था। SPSS 16.0 सॉफ्टवेयर (शिनजियांग मेडिकल यूनिवर्सिटी) का उपयोग करके सांख्यिकीय विश्लेषण किए गए। IC5 0 मूल्यों का विश्लेषण करने के लिए प्रोबिट विश्लेषण का उपयोग किया गया था। अंतर के महत्व की गणना एकतरफा एनोवा परीक्षण द्वारा की गई थी, और पी <0.05 के="" साथ="" मूल्यों="" को="" सांख्यिकीय="" रूप="" से="" महत्वपूर्ण="" माना="" जाता="">

5। निष्कर्ष

अंत में, सी. ट्यूबुलोसा और इसके घटकों इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड से सीपीएचजी महत्वपूर्ण एंटी-फाइब्रोटिक प्रभाव दिखाते हैं। उनमें से, एक्टोसाइड की गतिविधि सबसे शक्तिशाली है, जबकि सीपीएचजी की गतिविधि दो यौगिकों के बीच है। टीजीएफ-पी1/स्मैड सिग्नलिंग की सक्रियता में अवरोध अंतर्निहित तंत्र हो सकता है जिसके द्वारा सीपीएचजी फाइब्रोसिस से जुड़ी पुरानी जिगर की बीमारी से रक्षा करते हैं, और इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड सी। ट्यूबुलोसा के प्रभावी एंटी-फाइब्रोटिक सामग्री आधार हैं।

पावती:इस शोध को चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (81260624) द्वारा समर्थित किया गया था। लेखक इस पत्र में लेखन में सुधार के लिए प्रोफेसर ताओ लियू को अपना हार्दिक धन्यवाद व्यक्त करना चाहते हैं।

लेखक योगदान:TL, JZ, S.-PY, LM और S.-LZ ने प्रयोगों की कल्पना की और उन्हें डिजाइन किया। S.-PY, TL और JZ ने डेटा का विश्लेषण किया। S.-PY और JZ ने पांडुलिपि लिखी। TL, LM और JZ ने पांडुलिपि की समीक्षा की। सभी लेखकों ने तैयार हस्तलेख को पढ़ लिया है और इसे अनुमोदित कर दिया है।

हितों का टकराव:ऑथर ने किसी हित संघर्ष की घोषणा नहीं की है।

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