सिस्टैंच डेजर्टिकोला के कुल ग्लाइकोसाइड की फाइटोकेमिकल स्क्रीनिंग और एस्ट्रोजेनिक गतिविधि

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सार

दशकों से, मानव जीवन की गुणवत्ता को बढ़ाने के लिए निरंतर प्रयास किए गए हैं। पोस्टमेनोपॉज़ल सिंड्रोम महिलाओं के स्वास्थ्य की भलाई के लिए एक गंभीर चिंता का विषय है। इस स्थिति के लिए वर्तमान में हार्मोनल थेरेपी उपचार का मुख्य आधार है। हालांकि, इस थेरेपी से एस्ट्रोजन का दुरुपयोग हो सकता है, जिससे प्रतिकूल प्रतिक्रिया और दुष्प्रभाव हो सकते हैं। नतीजतन, पोस्टमेनोपॉज़ल सिंड्रोम को कम करने में हार्मोनल थेरेपी असफल रही है।सिस्टांचे डेजर्टिकोलापारंपरिक चीनी चिकित्सा में एक शास्त्रीय टॉनिक जड़ी बूटी है। यह महत्वपूर्ण एस्ट्रोजेनिक गतिविधि प्रदर्शित करता है। इस जड़ी बूटी के मुख्य सक्रिय यौगिक ग्लाइकोसाइड हैं। पिछले प्रयोग में, कुल ग्लाइकोसाइड उपज, एक्टोसाइड उपज, और एस्ट्रोजेनिक गतिविधि में योगदान देने वाले तीन महत्वपूर्ण कारकों की पहचान की गई, अर्थात्, एलुएंट एकाग्रता, पीएच, और एलुएंट वॉल्यूम। इस प्रयोग में, इस जड़ी बूटी से ग्लाइकोसाइड प्राप्त करने के लिए एक केंद्रीय समग्र डिजाइन-प्रतिक्रिया सतह पद्धति का उपयोग करके एक इष्टतम शुद्धिकरण प्रक्रिया निर्धारित की गई थी। एक एलुएंट (इथेनॉल) एकाग्रता 85 प्रतिशत और 25 बीवी की मात्रा 11 के पीएच पर इष्टतम पाया गया। इक्कीस सक्रिय यौगिकों की पहचान एक उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी / क्वाड्रुपोल टाइम-ऑफ-फ्लाइट मास स्पेक्ट्रोमेट्री परख द्वारा की गई थी। यह अध्ययन के कुल ग्लाइकोसाइड की एस्ट्रोजेनिक गतिविधियों का मूल्यांकन करने वाले गहन शोध के लिए मूल्यवान अंतर्दृष्टि प्रदान करता हैसिस्टांचे डेजर्टिकोला.

कीवर्ड: केंद्रीय समग्र डिजाइन; सिस्टैंच डेजर्टिकोला कुल ग्लाइकोसाइड; एलसी/क्यू-टीओएफ-एमएस; शुद्धिकरण प्रौद्योगिकी; गर्भाशय वृद्धि परीक्षण।

परिचय

सिस्टांचे डेजर्टिकोलाएक खाद्य, शास्त्रीय टॉनिक जड़ी बूटी है। इसका पहली बार शेन नोंग के हर्बल क्लासिक में उल्लेख किया गया था और शीर्ष ग्रेड में सूचीबद्ध किया गया था। यह एक गर्म जड़ी बूटी और मीठा है। इसमें कई औषधीय गुण हैं, जैसे कि यकृत और गुर्दे का पोषण, मांसपेशियों और हड्डियों को मजबूत करना, और एंटी-एजिंग और एंटी-ट्यूमर गतिविधियों के साथ-साथ प्रतिरक्षा विनियमन में सुधार [1-4]। इस जड़ी बूटी के अर्क से कुछ प्राकृतिक यौगिकों को अलग किया गया है और उनकी पहचान की गई है, जिनमें से प्रमुख हैं फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स, लिग्ननोइड्स, इरिडोइड्स, पॉलीसेकेराइड्स और एल्कलॉइड्स [5-8]।

औषधीय पौधों से प्राप्त दवाओं में विभिन्न सक्रिय यौगिक होते हैं, जो मुख्य रूप से उनके चिकित्सीय कार्यों के लिए जिम्मेदार होते हैं। विभिन्न पौधों के स्रोतों से प्राप्त एक ही दवा की प्रभावशीलता उसमें मौजूद सक्रिय यौगिकों के प्रकार और मात्रा में अंतर के कारण भिन्न हो सकती है। इस प्रकार, औषधीय पौधों से प्राप्त दवाओं में मौजूद सभी सक्रिय यौगिकों की पहचान करना और उनकी मात्रा निर्धारित करना महत्वपूर्ण है। यही बात सी. डेजर्टिकोला पर भी लागू होती है। प्रतिक्रिया सतह पद्धति एक साथ विभिन्न कारकों के बीच बातचीत की जांच करने के लिए एक प्रयोगात्मक विधि है [9-10]। इसका उपयोग फाइटोफार्मास्युटिकल्स के लिए निष्कर्षण मापदंडों के अनुकूलन और दवाओं में सक्रिय यौगिकों के मात्रात्मक आकलन के लिए किया जा सकता है। केंद्रीय मिश्रित डिजाइन (सीसीडी) प्रतिक्रिया सतह पद्धति में उपयोगी प्रयोगात्मक डिजाइनों में से एक है। ओर्थोगोनल और एकसमान डिजाइन की तुलना में, सीसीडी में उच्च परिशुद्धता और बेहतर पूर्वानुमेयता [11] है।

पोस्टमेनोपॉज़ल सिंड्रोम महिलाओं में जीवन की गुणवत्ता को काफी हद तक कम कर सकता है। आमतौर पर, इस स्थिति के इलाज के लिए एस्ट्रोजन का उपयोग किया जाता है। हालांकि, एस्ट्रोजन के लंबे समय तक उपयोग से दुरुपयोग हो सकता है, जिससे विभिन्न प्रतिकूल प्रतिक्रियाएं और दुष्प्रभाव हो सकते हैं। इसलिए, पोस्टमेनोपॉज़ल सिंड्रोम [12-13] के उपचार के लिए एक सक्रिय संघटक के रूप में एस्ट्रोजन युक्त एक वैकल्पिक चिकित्सा, अधिमानतः एक हर्बल दवा का चयन करना अनिवार्य है।

प्रारंभिक प्रयोग में, सी. डेजर्टिकोला से प्राप्त विभिन्न प्राकृतिक यौगिकों की संरचनाओं की पहचान मास स्पेक्ट्रोमेट्री (एमएस) [14] का उपयोग करके की गई थी। यह पुष्टि की गई कि ग्लाइकोसाइड महत्वपूर्ण एस्ट्रोजेनिक गतिविधि वाले मुख्य सक्रिय यौगिक हैं [14-15]। एक नई दवा में एक सुरक्षित और प्रभावी एस्ट्रोजेनिक सक्रिय संघटक विकसित करने के लिए, शुद्धिकरण के बाद टीजीसीडी की गहन जांच की आवश्यकता है। इस अध्ययन में, C. डेजर्टिकोला (TGCD) के कुल ग्लाइकोसाइड के शुद्धिकरण को अनुकूलित करने के लिए सबसे पहले CCD का उपयोग किया गया था। इसके बाद, उसी ग्लाइकोसाइड की एस्ट्रोजेनिक गतिविधियों का मूल्यांकन करने के लिए गर्भाशय वृद्धि परीक्षण का उपयोग किया गया था। शुद्धिकरण के बाद टीजीसीडी के यौगिकों के गुणात्मक विश्लेषण के लिए उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी / क्वाड्रुपोल टाइम-ऑफ-फ्लाइट मास स्पेक्ट्रोमेट्री (एचपीएलसी / क्यू-टीओएफ-एमएस) का उपयोग किया गया था। इस प्रक्रिया को टीजीसीडी में एस्ट्रोजेनिक गतिविधि के साथ विभिन्न सक्रिय यौगिकों की उपस्थिति को स्पष्ट रूप से प्रदर्शित करने के लिए लागू किया गया था। यह एक साथ एस्ट्रोजन की जगह पोस्टमेनोपॉज़ल सिंड्रोम में इसके नैदानिक ​​उपयोग के लिए आधार प्रदान कर सकता है।

प्रायोगिग विधि

उपकरण

एगिलेंट 1290 एचपीएलसी सिस्टम (एगिलेंट टेक्नोलॉजीज, पालो ऑल्टो, सीए, यूएसए), एगिलेंट 6530 सीरीज क्वाड्रुपोल टाइम-ऑफ-फ्लाइट एलसी/एमएस (क्यू-टीओएफ) सिस्टम (एगिलेंट टेक्नोलॉजीज, पालो ऑल्टो, सीए, यूएसए), और केमिकल एचपीएलसी{ {5}}डी वर्कस्टेशन को डेटा प्रोसेसिंग के लिए क्रोमैटोग्राफिक उपकरणों के रूप में इस्तेमाल किया गया था। पूरे अध्ययन के लिए मिल्ली-क्यू अल्ट्राप्योर पानी का इस्तेमाल किया गया। AR1140 इलेक्ट्रॉनिक विश्लेषणात्मक संतुलन (Ohaus International Ltd.); 680 माइक्रोप्लेट रीडर (बायो-रेड कॉर्पोरेशन); और नमूना तैयार करने के लिए 64R हाई-स्पीड सेंट्रीफ्यूज (बेकमैन कल्टर एलेग्रा) का उपयोग किया गया था।

दवाएं और रसायन

सी. डेजर्टिकोला को दवा बाजार से खरीदा गया था और इसकी पहचान प्रो. झांग डेलियन (हार्बिन यूनिवर्सिटी ऑफ कॉमर्स, चीन) ने की थी। स्टैंडर्ड डायथाइलस्टिलबेस्ट्रोल (99 प्रतिशत शुद्ध, लॉट नंबर 60518) डॉ। एहरनस्टोरफर (जर्मनी) से खरीदा गया था। अन्य मानक एक्टियोसाइड (111530-200505) और इचिनाकोसाइड (111670-200503) नेशनल इंस्टीट्यूट फॉर द कंट्रोल ऑफ फार्मास्युटिकल एंड बायोलॉजिकल प्रोडक्ट्स, बीजिंग, चीन से प्राप्त किए गए थे। प्रत्येक मानक की शुद्धता >98 प्रतिशत थी। एसीटोनिट्राइल (एसीएन), मेथनॉल और फॉर्मिक एसिड (एमएस ग्रेड) थर्मो साइंटिफिक पियर्स (रॉकफोर्ड, आईएल, यूएसए) से खरीदे गए थे। अल्ट्राप्योर पानी हांग्जो वहा ग्रुप कं, लिमिटेड (हांग्जो, चीन) से प्राप्त किया गया था। सभी व्यावसायिक रूप से उपलब्ध अभिकर्मक विश्लेषणात्मक ग्रेड के थे।

सी. डेजर्टिकोला शुद्धिकरण समाधान के कुल ग्लाइकोसाइड की तैयारी

12 घंटे के लिए 75 प्रतिशत इथेनॉल में विसर्जित करने के बाद, सी. डेजर्टिकोला (100 ग्राम) के कच्चे पाउडर को 80 डिग्री पर 75 प्रतिशत (वी/वी) इथेनॉल के साथ 80 डिग्री पर रिफ्लक्स के तहत 150 मिनट के लिए निकाला गया था। फिर इसे डबल-डेक फिल्टर के माध्यम से फ़िल्टर किया गया और बाद में अतिरिक्त 150 मिनट के लिए दो बार 75 प्रतिशत इथेनॉल के 800 एमएल के साथ निकाला गया। इसके बाद, छानना संयुक्त और 45 डिग्री पर एक निर्वात में केंद्रित किया गया था। विलायक को हटाकर अर्क प्राप्त किया गया था। 0.5 ग्राम/एमएल की सांद्रता प्राप्त करने के लिए अर्क में एक निश्चित मात्रा में आसुत जल मिलाया गया, जिसका उपयोग शुद्धिकरण प्रक्रिया की जांच के लिए किया गया था।

एबी -8 मैक्रोपोरस रेजिन का उपयोग करके सोखने के लिए, परीक्षण नमूना समाधान का पीएच 11 पर समायोजित किया गया था। सबसे पहले, अशुद्धियों को दूर करने के लिए 2 बीवी आसुत जल का उपयोग किया गया था। फिर, 25 बीवी 85 प्रतिशत इथेनॉल की एकाग्रता पर एलुएंट को क्षालन और एकत्र किया गया था। अंत में, एकत्रित शुद्ध एलुएंट को मिला दिया गया। 1.5 ग्राम / एमएल की एकाग्रता प्राप्त करने के लिए अर्क में एक निश्चित मात्रा में आसुत जल मिलाया गया था, जिसका उपयोग इंट्रागैस्ट्रिक प्रशासन के लिए किया गया था। सकारात्मक नियंत्रण के लिए, डायथाइलस्टिलबेस्ट्रोल पाउडर के साथ डायथाइलस्टिलबेस्ट्रोल घोल (20 ug/mL) तैयार किया गया था।

शुद्धिकरण के अनुपात ({0}}.6) के अनुसार, अर्क की एक निश्चित मात्रा (सी। डेजर्टिकोला के 1 ग्राम के बराबर) को 10 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में स्थानांतरित किया गया था, 5 मिनट के लिए एक अल्ट्रासोनिक स्नान में 50 प्रतिशत (v/v) मेथनॉल समाधान में भंग, और 10 मिलीलीटर तक पतला। 0.45 माइक्रोन फिल्टर झिल्ली के माध्यम से सतह पर तैरनेवाला के निस्पंदन के बाद औषधीय समाधान प्राप्त किया गया था। एक्टियोसाइड और इचिनाकोसाइड (प्रत्येक 1 मिलीग्राम) मिश्रित और पूरी तरह से 10 एमएल 50 प्रतिशत (वी / वी) मेथनॉल समाधान में भंग कर दिया गया था। अंत में, विश्लेषण से पहले मानक समाधान को 0.45 माइक्रोन मिलिपोर फिल्टर के माध्यम से फ़िल्टर किया गया था।

एलसी-एमएस शर्तें

क्रोमैटोग्राफी पृथक्करण एक एचपीएलसी प्रणाली (एगिलेंट 129 {{1 0}}) में किया गया था, जो एक चतुर्धातुक विलायक वितरण प्रणाली, वैक्यूम डिगैसिफायर और फोटोडायोड सरणी डिटेक्टर से सुसज्जित है। MS/MS विश्लेषण एक उपकरण Agilent-1290 HPLC/6530 Q-TOF-MS प्रणाली में किया गया था, जो सकारात्मक और नकारात्मक आयन मोड दोनों में इलेक्ट्रोस्प्रे आयनीकरण स्रोत से सुसज्जित है। एक वाटर्स सिमिट्री शील्ड RP C18 कॉलम (4.6 × 250 मिमी, 5 माइक्रोन) (वाटर्स कॉर्पोरेशन, मिलफोर्ड, एमए, यूएसए) को अलग करने के लिए इस्तेमाल किया गया था। मोबाइल चरण में 0.2 प्रतिशत फॉर्मिक एसिड जलीय घोल (v/v) (ए) और एसीएन (बी) शामिल थे, और इसे 0.5 एमएल/मिनट की प्रवाह दर पर पंप किया गया था। प्रत्येक नमूने की इंजेक्शन मात्रा 10 μL थी। ग्रेडिएंट रेफरेंस प्रोग्राम इस प्रकार था: 0−35 मिनट के लिए 5−23 प्रतिशत बी, 35−65 मिनट के लिए 23−25 प्रतिशत बी, और 65−70 मिनट के लिए 25−5 प्रतिशत बी। स्तंभ तापमान 30 डिग्री पर बनाए रखा गया था। क्रोमैटोग्राम की निगरानी की गई और 330 एनएम पर रिकॉर्ड किया गया। परमाणुकरण गैस का दबाव 30 साई पर सेट किया गया था, और केशिका वोल्टेज 3.5 केवी था। शुष्क गैस की प्रवाह दर 30 डिग्री के तापमान पर 8 एल/मिनट थी। म्यान गैस का तापमान 12 एल/मिनट की प्रवाह दर पर 400 डिग्री पर सेट किया गया था। कम-ऊर्जा स्कैन के लिए टक्कर ऊर्जा 10-20 eV और उच्च-ऊर्जा स्कैन के लिए 30-50 eV पर सेट की गई थी। मास स्पेक्ट्रा डेटा को सकारात्मक और नकारात्मक आयन स्कैनिंग मोड में 50-1000 दा की स्कैन सीमा के भीतर दर्ज किया गया था। इस अध्ययन में, एक ही एलसी-एमएस स्थिति के तहत टीजीसीडी और मानकों के बीच एक तेज और कुशल तुलना की गई।

गर्भाशय वृद्धि परीक्षण

यह राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान के प्रयोगशाला जानवरों की देखभाल और उपयोग के लिए गाइड की सिफारिशों के अनुसार सख्ती से किया गया था। सभी प्रायोगिक प्रक्रियाओं की समीक्षा की गई और हार्बिन यूनिवर्सिटी ऑफ कॉमर्स, चीन की पशु नैतिक समिति द्वारा अनुमोदित किया गया।

अपरिपक्व मादा कुनमिंग चूहों (लगभग 21 डी जन्म, वीनड) का वजन 12 ± 2 ग्राम, चांगचुन नेशनल बायोलॉजिकल इंडस्ट्री बेस लेबोरेटरी एनिमल सेंटर (चांगचुन, चीन) से खरीदा गया था। चूहों को भोजन और पानी के विज्ञापन के साथ एक तापमान-विनियमित कमरे (22 ± 2 डिग्री) में रखा गया था। अनुकूलन के पांच दिनों के बाद पशु प्रयोग शुरू किया गया था। परीक्षण समाधान के इंट्रागैस्ट्रिक प्रशासन से पहले चूहों ने पानी के विज्ञापन के साथ रात भर उपवास किया।

चूहों को बेतरतीब ढंग से 22 समूहों में विभाजित किया गया था, प्रत्येक समूह में 10 जानवर थे। उन्हें चार दिनों के लिए दिन में दो बार (सुबह और शाम) समान मात्रा की प्रायोगिक दवाएं दी गईं:

समूह 1: सी. डेजर्टिकोला शुद्धिकरण समाधान (20 एमएल/किलो), (समाधान मात्रा/माउस वजन) के इंट्रागैस्ट्रिक कुल ग्लाइकोसाइड्स,

समूह II: इंट्रागैस्ट्रिक आसुत जल (नकारात्मक नियंत्रण समूह), और

समूह III: इंट्रागैस्ट्रिक डायथाइलस्टिलबेस्ट्रोल (20 ug/mL) (सकारात्मक नियंत्रण समूह)।

पांचवें दिन सभी चूहों की बलि दी गई। गर्भाशय को तुरंत हटा दिया गया और तौला गया और गर्भाशय के गुणांक की गणना की गई।

सांख्यिकीय विश्लेषण

विभिन्न प्रायोगिक समूहों में विभिन्न मापदंडों में सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण अंतर की पहचान करने के लिए दो-पूंछ वाले युग्मित-नमूना टी-परीक्षण का उपयोग किया गया था। विश्लेषण SPSS सांख्यिकीय सॉफ़्टवेयर (Windows v21 के लिए SPSS 0, SPSS Inc., USA) का उपयोग करके किया गया था। अंतर को 95 प्रतिशत विश्वास स्तर (p <0.05) पर="" सांख्यिकीय="" रूप="" से="" महत्वपूर्ण="" माना="">

परिणाम और चर्चा

एक्टोसाइड और कुल ग्लाइकोसाइड पैदावार की रैखिकता और सहसंबंध

एक्टोसाइड उपज का रैखिक प्रतिगमन समीकरण y {0}}x - 14.75 (जहाँ x एक्टोसाइड की सांद्रता है, और y इसका संगत शिखर क्षेत्र है) r=1 के सहसंबंध गुणांक के साथ था। 0.12−{{10}}.72 मिलीग्राम/एमएल की एकाग्रता सीमा में। यह एक रैखिक अंशांकन वक्र इंगित करता है। कुल ग्लाइकोसाइड उपज का रैखिक प्रतिगमन समीकरण y=26 था। 0 74x प्लस 0.0866 (जहाँ x कुल ग्लाइकोसाइड की सांद्रता है, और y इसका संगत शिखर क्षेत्र है) r के सहसंबंध गुणांक के साथ { {12}}.9982 0.013−0.065 मिलीग्राम/एमएल की एकाग्रता सीमा में। इसने एक रैखिक अंशांकन वक्र को भी इंगित किया।

कार्यप्रणाली जांच

पद्धतिगत जांच में नमूनों की सटीकता, प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्यता, स्थिरता और पुनर्प्राप्ति की जांच की गई। सटीक प्रयोग में, एक्टोसाइड और कुल ग्लाइकोसाइड का सापेक्ष मानक विचलन (आरएसडी) क्रमशः 1.43 प्रतिशत और 0.05 प्रतिशत था। पुनरुत्पादकता प्रयोग में, एक्टोसाइड और कुल ग्लाइकोसाइड का आरएसडी क्रमशः 0.10 प्रतिशत और 1.44 प्रतिशत था। 24 घंटे के स्थिरता प्रयोग में, एक्टोसाइड और कुल ग्लाइकोसाइड का आरएसडी क्रमशः 0.14 प्रतिशत और 0.90 प्रतिशत था। रिकवरी प्रयोग में, 2.08 प्रतिशत के आरएसडी के साथ एक्टियोसाइड की रिकवरी 100.50 प्रतिशत थी, जबकि कुल ग्लाइकोसाइड की रिकवरी 1.65 प्रतिशत आरएसडी के साथ 99.12 प्रतिशत थी। सभी RSD मान 3 प्रतिशत से कम थे। इन परिणामों ने अच्छी सटीकता और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्यता का प्रदर्शन किया। इसके अलावा, नमूना 24 घंटे के लिए स्थिर था। वसूली के परिणाम भी अनुमेय सीमा (95−105 प्रतिशत) के भीतर हैं। इसलिए, इस विधि का उपयोग शुद्धिकरण के बाद एक्टोसाइड और कुल ग्लाइकोसाइड उपज के निर्धारण के लिए किया जा सकता है।

टीजीसीडी की एकल-कारक जांच

मैक्रोपोरस रेजिन का उपयोग करके टीजीसीडी की शुद्धि कई कारकों से प्रभावित हो सकती है, जैसे कि राल प्रकार, स्थिर सोखना कारक (सोखना समय, रिसाव एकाग्रता, और नमूना समाधान का पीएच), और रेफरेंस की स्थिति (प्रवाह वेग, मात्रा और एकाग्रता)। इंडेक्स के रूप में टीजीसीडी के सोखने की क्षमता और डिसोर्शन और रेफरेंस की दरों का उपयोग करते हुए, प्रायोगिक स्थिति को एकल-कारक प्रयोगों के परिणामों के आधार पर निर्धारित किया गया था। एबी -8 प्रकार के मैक्रोपोरस सोखना राल का उपयोग करके, निम्नलिखित इष्टतम स्थितियां निर्धारित की गईं: 0.5 मिलीग्राम / एमएल नमूना समाधान, 1 का पीएच 0, स्थिर सोखना समय 8 घंटे, 2 बीवी अशुद्धियों को धोने के लिए आसुत जल, एलुएंट के रूप में 20 बीवी 80 प्रतिशत इथेनॉल, और 0.5 बीवी / मिनट का प्रवाह वेग। विशिष्ट परिणाम आंकड़े 1−7 में दिखाए गए हैं।

टीजीसीडी शुद्धिकरण प्रौद्योगिकी के अनुकूलन के लिए सीसीडी

एकल-कारक जांच के परिणामों के आधार पर, शुद्धिकरण विधि को महत्वपूर्ण रूप से प्रभावित करने वाले तीन कारकों को सूचकांक के रूप में चुना गया था, अर्थात्, नमूना समाधान का पीएच (x1), eluent एकाग्रता (x2), और eluent मात्रा (x3)। सीसीडी के सिद्धांत के अनुसार, प्रत्येक कारक के पांच स्तर होते हैं। इन विभिन्न कारकों के अधिकतम और न्यूनतम स्तर प्रारंभिक प्रयोग के परिणामों के अनुसार निर्धारित किए गए थे। कारक स्तर तालिका 1 में दिखाए गए हैं और प्रयोगात्मक परिणाम तालिका 2 में दिखाए गए हैं।

टीजीसीडी के लिए शुद्धिकरण विधि को अनुकूलित करने के लिए कुल ग्लाइकोसाइड और एक्टोसाइड पैदावार निर्धारित की गई थी। सबसे पहले, कुल ग्लाइकोसाइड और एक्टोसाइड पैदावार को {0}}−1 के बीच वांछनीयता (डी) के संख्यात्मक मानदंड पर सेट किया गया था। फिर, समग्र वांछनीयता (OD) [OD=(d1, d2, d3,....,dn)1/n, जहां n सूचकांक संख्या है] की गणना की गई। SPSS21.{{10}} सॉफ्टवेयर और डिजाइन-विशेषज्ञ सॉफ्टवेयर का उपयोग कई रैखिक प्रतिगमन और स्वतंत्र चर और OD के द्विपद फिटिंग के लिए किया गया था, जिसमें p <0।05 पर="" विचार="" किया="" गया="" था।="" समीकरण="" का="" सांख्यिकीय="" रूप="" से="" महत्वपूर्ण="" मानक।="" बड़े="" r-मान="" (एकाधिक="" सहसंबंध="" गुणांक)="" वाले="" समीकरण="" को="" सर्वश्रेष्ठ="" फिट="" मॉडल="" के="" रूप="" में="" चुना="" गया="" था।="" बहुभिन्नरूपी="" रैखिक="" समीकरण="" को="" y="-" 1.02="" -="" 0.131x1="" जोड़="" 0="" के="" रूप="" में="" दर्शाया="" जाता="" है।034x2="" जमा="" 0.012x3="" (r="" {{="" 25}}.55,="" पृष्ठ="0.004)।" द्विपद="" समीकरण="" y="–" 21.92173="" –="" 0.74079x1="" प्लस="" 0.62914x2="" प्लस="" 0.041161x3="" प्लस="" 0.014972x1x2="" प्लस="" 2.06050*10-4x1x3="" प्लस="" 1.05698="" ×="" 10-3x2x3="" -="" 0.029589x{="" है।="" {56}}.78730="" ×="" 10-3x22="" -="" 2.89446="" ×="" 10-3x32="" (आर="0.91," पी="0.012)।" उपरोक्त="" समीकरणों="" से="" यह="" देखा="" जा="" सकता="" है="" कि="" बहुभिन्नरूपी="" रैखिक="" समाश्रयण="" समीकरण="" का="" सहसंबंध="" गुणांक="" कम="" है।="" स्वतंत्र="" और="" आश्रित="" चर="" के="" बीच="" संबंध="" बहुत="" कम="" है,="" और="" इसे="" रैखिक="" मॉडल="" में="" उपयोग="" करने="" के="" लिए="" प्रतिकूल="" माना="" जाता="">

लेकिन, द्विपद समीकरण का सहसंबंध गुणांक अधिक था और इसका परिणाम एक अच्छा फिट था। इसलिए, द्विपद मॉडल का चयन किया गया था। प्रायोगिक डेटा ({0}}.6 के पास OD मान) के साथ संयुक्त सतह आकृति और समोच्च मानचित्र के व्यापक विश्लेषण के आधार पर, शुद्धि विधि की इष्टतम सीमा प्राप्त की गई थी। चित्रा 8 से, यह देखा जा सकता है कि अधिकतम ओडी मान तब उत्पन्न हुआ था जब नमूना समाधान (ए) का पीएच 9−10 की सीमा में था, और एलुएंट एकाग्रता (बी) 79−85 प्रतिशत की सीमा में था। . चित्र 9 से पता चलता है कि अधिकतम OD मान तब प्राप्त किया गया था जब नमूना समाधान (A) का pH मान 9−10 की सीमा में था, और एलुएंट वॉल्यूम (C) 20−25 BV की सीमा में था। चित्र 10 से पता चलता है कि अधिकतम आयुध डिपो मान तब प्राप्त किया गया था जब एलुएंट एकाग्रता (बी) 80−85 प्रतिशत की सीमा में था, और एलुएंट वॉल्यूम (सी) 20−25 बीवी की सीमा में था। इन आंकड़ों के व्यापक विश्लेषण से, नमूना समाधान का पीएच, एलुएंट एकाग्रता, और एलुएंट वॉल्यूम क्रमशः 9−10, 80−85 प्रतिशत और 20−25 बीवी की सीमा में निर्धारित किया गया था। परिवर्तनीय व्युत्पन्न परिणामों और इष्टतम योजना के लिए बहुभिन्नरूपी द्विपद समीकरण के आधार पर, सर्वोत्तम टीजीसीडी शुद्धिकरण विधि 85 प्रतिशत की एलुएंट (इथेनॉल) एकाग्रता और 11 के पीएच पर 25 बीवी की मात्रा में पाई गई थी। संबंधित ओडी मान 0.8332 था और कुल ग्लाइकोसाइड की उपज 73.0339 प्रतिशत थी। आंकड़ों से दृश्य प्रभाव 8-10 सबसे अच्छी विधि की पहचान करता है जिसमें दो कारकों के बीच बातचीत पर विचार किया गया था, हालांकि सूत्र से निकाली गई सबसे अच्छी विधि उस विधि को पहचानती है जिसमें तीन कारकों के बीच बातचीत शामिल थी। दो परिणाम अलग-अलग थे और इष्टतम शुद्धिकरण विधि को 85 प्रतिशत की एलुएंट (इथेनॉल) एकाग्रता और 11 के पीएच पर 25 बीवी की मात्रा के साथ माना जाता था।

गर्भाशय वृद्धि माप

प्रत्येक समूह का गर्भाशय गुणांक तालिका 3 में दिखाया गया है। नकारात्मक नियंत्रण समूह की तुलना में, अन्य समूहों के परिणाम काफी भिन्न थे। यह पाया गया कि 20 अलग-अलग शुद्धिकरण विधियों से प्राप्त टीजीसीडी ने सभी एस्ट्रोजेनिक क्रियाओं को अंजाम दिया।

पुष्टिकारक प्रयोग

सीसीडी और गर्भाशय वृद्धि परीक्षण के व्यापक परिणामों से पता चला है कि इष्टतम शुद्धिकरण विधि को 85 प्रतिशत की एलुएंट (इथेनॉल) एकाग्रता और 11 के पीएच पर 25 बीवी की मात्रा के साथ माना जाता था।

सत्यापन प्रक्रिया, कुल ग्लाइकोसाइड की औसत उपज 70.9150 प्रतिशत थी। अनुमानित और वास्तविक मूल्यों के बीच औसत विचलन 2.1180 प्रतिशत था। इसलिए, यह सुझाव दिया जा सकता है कि इस मॉडल की पूर्वानुमेयता और प्रयोगात्मक विश्वसनीयता अच्छी है।

शुद्धिकरण के बाद टीजीसीडी की पहचान

अवधारण समय और एमएस डेटा के आधार पर, 21 प्राकृतिक घटकों का अनुमान लगाया गया था, जिनमें कैंपनेओसाइड 1, 2′-एसिटाइलैक्टोसाइड, सिस्टानोसाइड ए, सिस्टानोसाइड बी, सिरिंजलाइड ए 3 '- - एल-रम्नोपाइरानोसाइड, ट्यूबलोसाइड ए, ट्यूबलोसाइड बी, सैलिड्रोसाइड शामिल हैं। सिस्टानोसाइड जी, टेनिपोसाइड एसिड, डिकैफॉयलैक्टोसाइड, 8-एपिलोगैनिक एसिड, इचिनाकोसाइड, सिस्टानोसाइड एफ, सिस्टेंटुबुलोसाइड बी1, आइसोएक्टोसाइड, एक्टियोसाइड, सीआईएस-एक्टोसाइड, कांकानोसाइड ई, ऑस्मान्थुसाइड बी, और सिस्टानोसाइड सी। अवधारण समय, एमएस और एमएस। MS सूचना, सूत्र और अनुमानित यौगिक तालिका 4 में दिखाए गए हैं।

क्यू-टीओएफ-एमएस दवाओं और भोजन के जटिल आणविक घटकों की संरचनात्मक पहचान के लिए विशेष रूप से उपयुक्त है क्योंकि यह सटीक आणविक द्रव्यमान और टुकड़े आयनों की संरचनात्मक विशेषताओं के माध्यम से संभावित मौलिक रचनाएं प्रदान कर सकता है। एक व्यवस्थित संरचनात्मक लक्षण वर्णन स्थापित करने के लिए, क्यू-टीओएफ-एमएस, एमएस डेटा, डेटाबेस की मांग, और प्रकाशित संदर्भ साहित्य का भी पहचान के लिए उपयोग किया गया था। प्रत्येक लक्ष्य घटक का आणविक सूत्र मूल आयन से घटाया गया था, और यह ज्ञात यौगिकों से मेल खाता था। इस सूत्र को इसके संबंधित अंश आयनों से और अधिक निर्धारित किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, चोटी 5 ने m/z 654 (C30H38O16) पर एक प्रमुख अवक्षेपित आयन दिखाया, जो कि कैंपनेओसाइड 1 की मौलिक संरचना के समान था। caffeoyl का नुकसान m/z 493 पर एक टुकड़े आयन से बना था, और नुकसान m/z 347 पर एक टुकड़े आयन से rha की मात्रा का गठन किया गया था।

निष्कर्ष

एलसी-क्यू-टीओएफ-एमएस तकनीक का उपयोग करते हुए, टीजीसीडी के लिए एक सरल और मजबूत गुणात्मक विश्लेषण पद्धति विकसित की गई है और पूरी तरह से मान्य है। टीजीसीडी से प्राकृतिक यौगिकों की जांच और पहचान के लिए सत्यापन डेटा संतोषजनक था। टीजीसीडी से इक्कीस बायोएक्टिव यौगिकों का अनुमान इस प्रकार लगाया गया था: सैलिड्रोसाइड, सिस्टानोसाइड जी, जीनिपोसिडिक एसिड, डिकैफॉयलैक्टोसाइड, कैंपनेओसाइड 1, 8-एपिलोगैनिक एसिड, 2'-एसिटाइलैक्टोसाइड, सिस्टानोसाइड ए, सिस्टानोसाइड बी, सिरिंजलाइड ए3′{{9 }}L-rhamnopyranoside, echinacoside, cistanoside F, cistantubuloside B1, isoacteoside, Acteoside, Tubuloside A, cis-acteoside, Kankanoside E, osmanthuside B, cistanoside C, और tubuloside B. इन यौगिकों का संरचनात्मक लक्षण वर्णन के लिए एक प्रायोगिक आधार प्रदान कर सकता है। उनके एस्ट्रोजेनिक गतिविधि के कारण उनके गुणवत्ता नियंत्रण और आगे नैदानिक ​​​​अनुप्रयोग। यह पोस्टमेनोपॉज़ल सिंड्रोम के उपचार के लिए एक नया और बेहतर चिकित्सीय विकल्प प्रदान कर सकता है, जिससे एस्ट्रोजेन थेरेपी के दुष्प्रभावों और प्रतिकूल प्रतिक्रियाओं से बचा जा सकता है।

लघुरूप

टीजीसीडीसिस्टांचे डेजर्टिकोलाकुल ग्लाइकोसाइड्स LC/Q-TOF-MS लिक्विड क्रोमैटोग्राफी/क्वाड्रपोल टाइम-ऑफ-फ्लाइट मास स्पेक्ट्रोमेट्री

आरएसएम प्रतिक्रिया सतह पद्धति

सीसीडी केंद्रीय समग्र डिजाइन

MS मास स्पेक्ट्रोमेट्री HPLC/Q-TOF-MS हाई-परफॉर्मेंस लिक्विड क्रोमैटोग्राफी/क्वाड्रपोल टाइम-ऑफ-फ्लाइट मास स्पेक्ट्रोमेट्री

एसीएन एसीटोनिट्राइल

बीवी बिस्तर की मात्रा

ओडी समग्र वांछनीयता

एलसी-एमएस तरल क्रोमैटोग्राफी-मास स्पेक्ट्रोमेट्री

क्यू-टीओएफ-एमएस क्वाड्रुपोल टाइम-ऑफ-फ्लाइट मास स्पेक्ट्रोमेट्री

टीसीएम पारंपरिक चीनी दवाएं

आरएसडी सापेक्ष मानक विचलन

स्वीकृतियाँ

इस परियोजना को चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (नंबर 81073015), हेइलोंगजियांग प्रांत के प्रकृति वैज्ञानिक फाउंडेशन (जेडडी2017014), हेइलोंगजियांग प्रांत में कॉलेज की युवा नवीन प्रतिभा प्रशिक्षण योजना (यूएनपीवाईएससीटी- 2017209) द्वारा समर्थित किया गया था। लेखक घोषणा करते हैं कि इस पत्र के प्रकाशन के संबंध में हितों का कोई टकराव नहीं है।

एक ऐसी स्थिति जिसमें सरकारी अधिकारी का निर्णय उसकी व्यक्तिगत रूचि से प्रभावित हो

लेखकों द्वारा किसी हित के द्वंद्व का उल्लेख नहीं किया गया है।

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