विलेयता, विघटन और B16F10 सेलुलर मेलानोजेनेसिस निषेध गतिविधि में सुधार करने के लिए एक फेरुलिक एसिड-फॉस्फोलिपिड कॉम्प्लेक्स की तैयारी

Mar 29, 2023

अमूर्त

पृष्ठभूमि:हमने फेरुलिक एसिड-फॉस्फोलिपिड कॉम्प्लेक्स (एफए-पीसी) तैयार करके फेरुलिक एसिड (एफए) की घुलनशीलता, विघटन गुणों और त्वचा को सफेद करने की क्षमता को बढ़ाने का लक्ष्य रखा है। एफए-पीसी के गुण और मेलानोजेनेसिस निषेध गतिविधियों को तब स्पष्ट किया गया था।
तरीके:हमने डिफरेंशियल स्कैनिंग कैलोरीमेट्री, फूरियर ट्रांसफॉर्म इंफ्रारेड स्पेक्ट्रोस्कोपी, स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी, घुलनशीलता और तेल-जल विभाजन गुणांक के माध्यम से परिसर की विशेषता बताई। एक स्ट्रैट-एम® झिल्ली, एक सिंथेटिक झिल्ली जिसमें प्रसार विशेषताएं होती हैं जो मानव त्वचा के साथ अच्छी तरह से संबंधित होती हैं, का उपयोग एफए-पीसी के प्रसार अध्ययन के लिए किया गया था।
परिणाम:हमने पाया कि फॉस्फोलिपिड्स के साथ जटिल होने पर एफए की लिपोफिलिसिटी में सुधार हुआ, जिससे एफए-पीसी को नियंत्रित पैटर्न में एफए जारी करने की अनुमति मिली। इसी समय, फॉस्फोलिपिड्स के साथ कॉम्प्लेक्सिंग ने भी स्पष्ट रूप से B16F10 सेलुलर मेलानोजेनेसिस के निषेध को बढ़ाया।
निष्कर्ष:एफए-पीसी औषधीय और कॉस्मेटिक उपयोग के लिए एक आशाजनक सामग्री है।
कीवर्ड:फेरुलिक एसिड, फॉस्फोलिपिड, घुलनशीलता, ट्रांसडर्मल पारगमन, मेलेनिन अवरोध

पृष्ठभूमि

फेरुलिक अम्ल(एफए; 4-हाइड्रॉक्सी-3-मेथॉक्सी सिनामिक एसिड) गेहूं, चावल, जौ, जई, खट्टे फल, और टमाटर [1] सहित कई खाद्य पदार्थों में मौजूद है। एफए को यूवी-प्रेरित ऑक्सीडेटिव तनाव [2] के खिलाफ महत्वपूर्ण त्वचा सुरक्षा प्रदान करने के लिए दिखाया गया है। यह वैस्कुलर एंडोथेलियल ग्रोथ फैक्टर (वीईजीएफ), इंड्यूसिबल नाइट्रिक ऑक्साइड सिंथेज़ (आईएनओएस), ट्यूमर नेक्रोसिस फैक्टर (टीएनएफ) - और इंटरल्यूकिन (आईएल) {{7} की अभिव्यक्ति को संशोधित करके चूहों की त्वचा के ट्यूमर में पुरानी यूवीबी-प्रेरित ऑक्सीडेटिव क्षति को वापस लाता है। } [3]। यह यूवीबी-प्रेरित चूहों की त्वचा के ट्यूमर [4] में उत्परिवर्तित p53, Bcl -2, और बैक्स की अभिव्यक्ति को भी नियंत्रित करता है। कई अध्ययनों ने स्थापित किया है कि एफए साइटोटोक्सिक और सूजन से जुड़े एंजाइम [5] और मैट्रिक्स मेटेलोप्रोटीनिस (एमएमपी) की अभिव्यक्ति को रोकता है, और कोलेजन फाइबर के क्षरण को कम करता है [6]।

प्रासंगिक अध्ययनों के अनुसार,धनियाएक आम जड़ी बूटी है जिसे "चमत्कारिक जड़ी बूटी जो जीवन को लम्बा खींचती है" के रूप में जाना जाता है। इसका मुख्य अवयव हैसिस्टेनोसाइड, जिसके विभिन्न प्रभाव हैं जैसे कि एंटीऑक्सिडेंट, विरोधी भड़काऊ और प्रतिरक्षा समारोह को बढ़ावा देना। बीच का तंत्रधनियाऔरत्वचा को सफ़ेदी प्रदान करने वालासिस्टैंच ग्लाइकोसाइड्स के एंटीऑक्सीडेंट प्रभाव में निहित है। मानव त्वचा में मेलेनिन टाइरोसिनेस द्वारा उत्प्रेरित टाइरोसिन के ऑक्सीकरण द्वारा निर्मित होता है। ऑक्सीकरण प्रतिक्रिया में ऑक्सीजन की भागीदारी की आवश्यकता होती है, इसलिए शरीर में ऑक्सीजन मुक्त कण मेलेनिन उत्पादन को प्रभावित करने वाला एक महत्वपूर्ण कारक बन जाता है।सिस्टंचइसमें सिस्टेनोसाइड होता है, जो एक एंटीऑक्सीडेंट है और शरीर में मुक्त कणों के उत्पादन को कम कर सकता है, इस प्रकार मेलेनिन उत्पादन को रोकता है।

इसके अलावा, Cistanche में कोलेजन उत्पादन को बढ़ावा देने का कार्य भी होता है, जो त्वचा की लोच और चमक को बढ़ा सकता है और क्षतिग्रस्त त्वचा कोशिकाओं की मरम्मत में मदद कर सकता है। Cistanche Phenylethanol Glycosides का tyrosinase गतिविधि पर एक महत्वपूर्ण डाउन-रेगुलेटिंग प्रभाव है, और tyrosinase पर प्रभाव प्रतिस्पर्धी और प्रतिवर्ती निषेध के रूप में दिखाया गया है, जो Cistanche में व्हाइटनिंग अवयवों के विकास और उपयोग के लिए एक वैज्ञानिक आधार प्रदान कर सकता है। इसलिए त्वचा को गोरा करने में धनिया की अहम भूमिका होती है। यह मलिनकिरण और नीरसता को कम करने के लिए मेलेनिन उत्पादन को रोक सकता है; और त्वचा की लोच और चमक में सुधार के लिए कोलेजन उत्पादन को बढ़ावा देता है। Cistanche के इन प्रभावों की व्यापक मान्यता के कारण, कई त्वचा को गोरा करने वाले उत्पादों ने उपभोक्ता मांग को पूरा करने के लिए Cistanche जैसे हर्बल अवयवों को डालना शुरू कर दिया है, इस प्रकार Cistanche के व्यावसायिक मूल्य में वृद्धि हुई है।त्वचा को गोरा करने वाले उत्पाद. संक्षेप में, में सिस्टंच की भूमिकात्वचा को सफ़ेदी प्रदान करने वालाअत्यंत महत्वपूर्ण है। इसके एंटीऑक्सीडेंट प्रभाव और कोलेजन-उत्पादक प्रभाव मलिनकिरण और नीरसता को कम कर सकते हैं, त्वचा की लोच और चमक में सुधार कर सकते हैं, और इस प्रकार एक सफ़ेद प्रभाव प्राप्त कर सकते हैं। इसके अलावा, त्वचा को गोरा करने वाले उत्पादों में सिस्टंच का व्यापक उपयोग दर्शाता है कि व्यावसायिक मूल्य में इसकी भूमिका को कम करके नहीं आंका जा सकता है।

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फास्फोलिपिड परिसरों का व्यापक रूप से दवा उद्योग में उपयोग किया जाता है। उनके पास अच्छी पारगम्यता और सुरक्षा है और सौंदर्य प्रसाधनों में आवेदन के लिए बढ़ते ध्यान प्राप्त कर रहे हैं। क्योंकि फॉस्फोलिपिड अच्छे घुलनशील गुणों वाले बायोफंक्शनल सर्फेक्टेंट हैं, उन्हें कम घुलनशील दवाओं के लिए वाहक प्रणाली के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है [7], ट्रांसडर्मल पारगमन में सुधार और सामयिक दवाओं की संचयी प्रवेश दर [8]। दवाओं के ट्रांसडर्मल पारगमन में त्वचा में विघटन, वितरण और प्रसार शामिल है। भौतिक और रासायनिक गुण, विशेष रूप से दी जाने वाली दवा के तेल-जल विभाजन गुणांक, इस प्रक्रिया को प्रभावित करते हैं [9]।

दुर्भाग्य से, एफए एक खराब घुलनशील यौगिक है। हमने सॉल्वेंट वाष्पीकरण विधि के माध्यम से एक उपन्यास फेरुलिक एसिड-फॉस्फोलिपिड कॉम्प्लेक्स (एफए-पीसी) बनाकर इसकी घुलनशीलता, त्वचा के प्रवेश गुणों और मेलानोजेनेसिस को बाधित करने की क्षमता में सुधार करने का प्रयास किया। तैयार एफए-पीसी का मूल्यांकन विभिन्न भौतिक-रासायनिक मापदंडों के लिए किया गया था। विभेदक स्कैनिंग कैलोरीमेट्री (डीएससी; थर्मल व्यवहार को मापने के लिए प्रयोग किया जाता है), फूरियर इन्फ्रारेड स्पेक्ट्रोस्कोपी (एफटीआईआर), और स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (एसईएम) को बदलता है, का उपयोग किया जाता था। विलेयताओं को मापा गया और तेल-जल विभाजन गुणांकों की गणना की गई। इसके अलावा, त्वचा की पारगम्यता का मूल्यांकन करने के लिए एक स्ट्रैट-एम® झिल्ली का उपयोग किया गया था, और बी16एफ10 सेलुलर मेलानोजेनेसिस को बाधित करने के लिए एफए-पीसी की क्षमता की जांच की गई थी।

तरीकों

सामग्री

Powdered FA and arbutin (purity >99%) were purchased from Beijing HWRK Chem Co., Ltd. Soy lecithin (phosphatidylcholine, PC; purity >98 प्रतिशत) शंघाई ताइवेई कं, लिमिटेड से खरीदा गया था। मर्क मिलिपोर (डार्मस्टाड, जर्मनी) से एक स्ट्रैट-एम® झिल्ली खरीदी गई थी। अन्य रासायनिक अभिकर्मक विश्लेषणात्मक ग्रेड के थे। फेरुलिक एसिड और फॉस्फोलिपिड्स की समतुल्य मात्रा को मोर्टार में डालकर और मिश्रित सामग्री को पर्याप्त रूप से पीसकर एक भौतिक मिश्रण (पीएम) तैयार किया गया था।

कोश पालन

चाइनीज एकेडमी ऑफ साइंसेज के शंघाई इंस्टीट्यूट फॉर बायोलॉजिकल साइंसेज के सेल बैंक से माउस मेलेनोमा B16F10 कोशिकाओं को खरीदा गया था। Dulbecco के संशोधित ईगल माध्यम (DMEM) में कोशिकाओं को संवर्धित किया गया था जिसे 10 प्रतिशत भ्रूण गोजातीय सीरम (बायो-व्हिटेकर, वॉकर्सविले, एमडी, यूएसए) और 1 प्रतिशत पेनिसिलिन-स्ट्रेप्टोमाइसिन (गिब्को बीआरएल, एनवाई, यूएसए) के साथ पूरक किया गया था। संस्कृतियों को 5 प्रतिशत CO2 युक्त आर्द्र वातावरण में 37 डिग्री पर ऊष्मायन किया गया था।

विलायक वाष्पीकरण का उपयोग करके एफए-पीसी की तैयारी

फेरुलिक एसिड और फॉस्फोलिपिड्स के इष्टतम अनुपात के लिए स्क्रीनिंग

2:1, 1:1, 1:2, 1:3, और 1:4 के मोलर अनुपात में FA और फॉस्फोलिपिड्स को 100 mL राउंड-बॉटम फ्लास्क में जोड़ा गया और निर्जल इथेनॉल (FA, 2.0 मिलीग्राम / एमएल)। मिश्रण को 1 घंटे के लिए 40 डिग्री पर लगातार हिलाया गया और फिर रोटरी वाष्पीकरण द्वारा निर्जल इथेनॉल को हटा दिया गया। सूखे एफए-पीसी परिसरों को 24 घंटे के लिए एक जलशुष्कक में रखा गया था।

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फास्फोलिपिड के लिए एफए का इष्टतम अनुपात निर्धारित करने के लिए, हमने यूवी स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री (यूवी -3150; शिमदज़ु, जापान) द्वारा एफए की जटिल दर को मापा। संक्षेप में, इथेनॉल में तैयार एफए-पीसी नमूनों का अवशोषण 323 एनएम पर निर्धारित किया गया था। इथेनॉल में भंग फॉस्फोलिपिड्स की एक समान मात्रा को नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया गया था, और एफए का उपयोग करके एक मानक वक्र का निर्माण किया गया था। सूखे वजन के प्रति ग्राम एफए समकक्ष के मिलीग्राम के रूप में जटिल दर व्यक्त की गई थी।

एफए-पीसी तैयारी के लिए इष्टतम प्रतिक्रिया तापमान के लिए स्क्रीनिंग

1:1 के मोलर अनुपात में FA और फॉस्फोलिपिड्स को 100 mL राउंड-बॉटम फ्लास्क में जोड़ा गया और निर्जल इथेनॉल (FA, 2.0 mg/mL) में भंग कर दिया गया। मिश्रणों को हिलाया गयालगातार 20, 40, 60, या 80 डिग्री पर 1 घंटे के लिए और फिर 40 डिग्री पर रोटरी वाष्पीकरण द्वारा सुखाया जाता है। फिर, उन्हें एफए सामग्री के निर्धारण की तैयारी के लिए डेसिकेटर्स में रखा गया।

एफए-पीसी तैयारी के लिए इष्टतम प्रतिक्रिया समय के लिए स्क्रीनिंग

1:1 के मोलर अनुपात में FA और फॉस्फोलिपिड्स को 100 mL राउंड-बॉटम फ्लास्क में जोड़ा गया और निर्जल इथेनॉल (FA, 2.0 mg/mL) में घोल दिया गया। मिश्रण को 15, 30 मिनट, 1, 2, 3, या 4 घंटे के लिए 40 डिग्री पर लगातार हिलाया गया और फिर 40 डिग्री पर रोटरी वाष्पीकरण द्वारा सुखाया गया। बाद में, उन्हें एफए सामग्री के निर्धारण की तैयारी के लिए डेसिकेटर्स में रखा गया।

इष्टतम एफए एकाग्रता के लिए स्क्रीनिंग

1:1 के दाढ़ अनुपात में FA और फॉस्फोलिपिड्स को 100 एमएल राउंड-बॉटम फ्लास्क में जोड़ा गया। एफए प्राप्त करने के लिए प्रत्येक फ्लास्क में निर्जल इथेनॉल के विभिन्न संस्करणों को जोड़ा गया था1.0, 2.0, 4.0, 6.0, और 10 mg/mL की सांद्रता। मिश्रण को 1 घंटे के लिए 40 डिग्री के नीचे लगातार हिलाया गया और फिर 40 डिग्री पर रोटरी वाष्पीकरण द्वारा सुखाया गया। बाद में,उन्हें एफए सामग्री के निर्धारण की तैयारी के लिए डेसिकेटर्स में रखा गया था।

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एफए-पीसी की विशेषता

विभेदक स्कैनिंग कैलोरीमेट्री (डीएससी)

DSC को एक अंतर स्कैनिंग कैलोरीमीटर (Q2000; TA Instruments, USA) के साथ किया गया था। एफए, फॉस्फोलिपिड्स (पीसी), एफए और फॉस्फोलिपिड्स (पीएम) का भौतिक मिश्रण,और एफए-पीसी, अलग से एल्यूमीनियम पैन पर लोड किए गए थे और थर्मल विश्लेषण के लिए नाइट्रोजन वातावरण के तहत 10 डिग्री / मिनट की दर से 25 से 300 डिग्री तक गरम किया गया था।
फूरियर ट्रांसफॉर्म इन्फ्रारेड स्पेक्ट्रोस्कोपी (FTIR)
एफए, फॉस्फोलिपिड्स, पीएम और एफए-पीसी के अवरक्त स्पेक्ट्रा को एक एफटीआईआर स्पेक्ट्रोमीटर (8200, शिमदज़ु, जापान) का उपयोग करके एक तरल झिल्ली विधि के माध्यम से प्राप्त किया गया था। स्पेक्ट्रा को 400-4000 सेमी−1 की रेंज में दर्ज किया गया था।
स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (SEM)
एफए, पीसी, पीएम और एफए-पीसी के आकारिकी की एक स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप (फिनोम-प्रोएक्स; फेनोम-वर्ल्ड, नीदरलैंड्स) के तहत एक त्वरण पर जांच की गई।10 केवी का वोल्टेज। नमूने सोने-पैलेडियम के साथ स्पटर-लेपित थे और विभिन्न आवर्धन पर देखे गए थे।

घुलनशीलता और तेल-पानी विभाजन गुणांक

घुलनशीलता

पाउडर एफए और एफए-पीसी की विलेयताओं को 1 0। 0 एमएल [10] पानी या एन-ऑक्टेनॉल में अतिरिक्त नमूनों को जोड़कर निर्धारित किया गया था और फिर 3 घंटे के लिए स्विंग बेड पर मिलाते हुए 37 डिग्री पर। अघुलनशील एफए को हटाने के लिए मिश्रण को 10 मिनट के लिए 15, 000 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज किया गया। फिर, सतह पर तैरनेवाला 0.45 माइक्रोन झिल्ली के माध्यम से फ़िल्टर किया गया। बाद में, फिल्ट्रेट्स को मेथनॉल के साथ दस गुना पतला किया गया था, और यूवी स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (यूवी -3150; शिमदज़ु; जापान) का उपयोग करके एफए सामग्री निर्धारित की गई थी।

तेल-जल विभाजन गुणांक

जल-संतृप्त n-octanol में FA और FA-PC के नमूने (10 mL) तैयार किए गए और हिलाए गए। n-octanol-संतृप्त पानी (10 एमएल) प्रत्येक नमूने में जोड़ा गया था, और गलत तरल 24 घंटे के लिए उत्तेजित किया गया था। बाद में, नमूनों को लेयरिंग के लिए खड़े होने की अनुमति दी गई। प्रत्येक चरण में एफए एकाग्रता यूवी स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री (यूवी -3150; शिमदज़ु; जापान) द्वारा निर्धारित किया गया था। तीन प्रतियों में विश्लेषण किए गए।

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इन विट्रो प्रसार में

फ्रांज़ प्रसार कोशिकाओं (टीके -20ए; शंघाई ज़ी काई वित्तीय सूचना सेवा कं, लिमिटेड; चीन) का उपयोग करके इन विट्रो प्रसार अध्ययन किए गए थे। इसके अलावा, हमने स्ट्रैट-एम® झिल्लियों का उपयोग किया, जो प्रसार विशेषताओं के साथ सिंथेटिक झिल्ली हैं जो जानवरों की त्वचा के मॉडल [11] की तुलना में मानव त्वचा से अधिक निकटता से संबंधित हैं। झिल्लियों को ऊर्ध्वाधर प्रसार कोशिकाओं के दाता और रिसीवर कक्षों के बीच जकड़ा गया था, और एफए या एफए-पीसी को घोलने और सिंक की स्थिति सुनिश्चित करने के लिए रिसीवर कक्षों को फॉस्फेट-बफर खारा (पीबीएस; पीएच 7.4) से भर दिया गया था।

रिसीवर कक्षों को थर्मास्टाटिक जल स्नान का उपयोग करके 37 डिग्री पर रखा गया था, और रिसीवर कक्षों के अंदर के समाधानों को प्रयोग के दौरान चुंबकीय रूप से 50{{10}} आरपीएम पर हिलाया गया था। लगभग 3.0 मिलीग्राम एफए या एफए-पीसी को दाता कक्षों में रखा गया था। 1, 2, 4, 8, 16 और 24 घंटे में, रिसीवर कक्षों के अंदर के समाधान (0.6 एमएल) को हटा दिया गया और 0.45 माइक्रोन झिल्ली फिल्टर के माध्यम से फ़िल्टर किया गया। प्रत्येक नमूने में एफए की एकाग्रता एक मान्य उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (एचपीएलसी) विधि का उपयोग करके निर्धारित की गई थी।

क्रोमैटोग्राफिक पृथक्करण एक एजिलेंट 1260एलसी सीरीज़ सिस्टम (एगिलेंट टेक्नोलॉजीज, पालो ऑल्टो, सीए, यूएसए) का उपयोग करके किया गया था, जो एक ऑनलाइन वैक्यूम डीगैसर, क्वाटरनेरी पंप, ऑटोसैंपलर, थर्मोस्टेटेड कॉलम कम्पार्टमेंट और डायोड एरे डिटेक्शन (डीएडी) से लैस है। ). लिक्विड क्रोमैटोग्राफी (LC; B.02.01) के लिए Agilent Technologies ChemStation सॉफ़्टवेयर का उपयोग किया गया था, और HPLC पृथक्करण को एक्लिप्स प्लस-C18 कॉलम (4.6 × 250 मिमी, 5 माइक्रोन) का उपयोग करके प्रदर्शित किया गया था। पता लगाने की तरंग दैर्ध्य 0.05 प्रतिशत एसिटिक एसिड (ए) और मेथनॉल (बी) (40:60, वी / वी) थी। प्रवाह दर 1.0 एमएल/मिनट थी। स्तंभ का तापमान 30 डिग्री पर सेट किया गया था। प्रत्येक समय अंतराल पर जारी एफए की राशि का पता लगाने के लिए संचयी सुधार किए गए थे। सभी माप तीन प्रतियों में किए गए थे, और झिल्ली के माध्यम से व्याप्त संचयी एफए का प्रतिशत (प्रतिशत क्यू) समय के कार्य के रूप में प्लॉट किया गया था।

मेलानोजेनेसिस का निषेध

B16F10 सेल व्यवहार्यता परख

सेल व्यवहार्यता और सेल प्रसार का मूल्यांकन एक {{0}}(4, 5-डाइमिथाइलथियाजोल-2-वाईएल)-2,5-डिफेनिलटेट्राजोलियम ब्रोमाइड (एमटीटी) का उपयोग करके किया गया था। परख [2]। B16F10 कोशिकाओं को 0.25, 0.5, 1.0, 2.0, और 4.0 mg/mL FA और FA–PC की सांद्रता के साथ उपचारित किया गया। 48 घंटे के लिए ऊष्मायन के बाद, एमटीटी समाधान (अंतिम एकाग्रता: 5 मिलीग्राम / एमएल) जोड़ा गया था, और कोशिकाओं को 3 घंटे के लिए 37 डिग्री पर ऊष्मायन किया गया था। अंत में, व्यवहार्य कोशिकाओं का प्रतिशत प्राप्त करने के लिए प्रत्येक नमूने का अवशोषण 570 एनएम पर एक माइक्रोप्लेट रीडर पर मापा गया।

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मेलेनिन सामग्री का मापन

मेलेनिन सामग्री को कुछ संशोधनों के साथ पहले वर्णित [6] के रूप में मापा गया था। B16F10 मेलेनोमा कोशिकाओं को छह-अच्छी तरह से संस्कृति प्लेटों में (2 × 10 कोशिकाओं / मध्यम के 3 एमएल में अच्छी तरह से) बीज दिया गया था और कोशिकाओं को पालन करने की अनुमति देने के लिए रातोंरात ऊष्मायन किया गया था। उपचार के अंत में, कोशिकाओं को पीबीएस से धोया गया और 80 डिग्री पर 30 मिनट के लिए 10 प्रतिशत डाइमिथाइल सल्फ़ोक्साइड (DMSO) युक्त 1 M NaOH के साथ लाइज़ किया गया। अवशोषक (ऑप्टिकल घनत्व; आयुध डिपो) को माइक्रोप्लेट रीडर का उपयोग करके 475 एनएम पर मापा गया था। मेलेनिन सामग्री की गणना निम्न सूत्र का उपयोग करके की गई थी:

मेलेनिन सामग्री (प्रतिशत ) =OD475नमूना/OD475ब्लैंक नियंत्रण× 100

डेटा विश्लेषण

डननेट के टी-टेस्ट का उपयोग करके प्रत्येक उपचारित समूह और नियंत्रण समूह के औसत माप के बीच अंतर का सांख्यिकीय महत्व निर्धारित किया गया था। पी मान<0.05 were considered statistically significant.

परिणाम और चर्चा

एफए-पीसी की इष्टतम तैयारी

हमने निर्धारित किया कि एफए-पीसी जटिल दर के अनुसार 1: 1 के फास्फोलिपिड दाढ़ अनुपात के लिए एफए का उपयोग करके सबसे अच्छा तैयार किया गया था। इसके अलावा, इष्टतम विधि को 15 मिनट के लिए 40 डिग्री के तहत निर्जल इथेनॉल में FA 6.0 mg/mL और फॉस्फोलिपिड्स की निरंतर सरगर्मी की आवश्यकता होती है। 40 डिग्री पर एक रोटरी बाष्पीकरण सेट का उपयोग करके एफए-पीसी के गठन के बाद निर्जल इथेनॉल को हटा दिया गया था, जिसके बाद सूखे अवशेषों को 24 घंटे के लिए एक जलशुष्कक में रखा गया था। परिणामी एफए-पीसी को एक कांच की बोतल में स्थानांतरित किया गया, नाइट्रोजन के साथ प्रवाहित किया गया और कमरे के तापमान पर संग्रहीत किया गया।

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एफए-पीसी की विलेयता और तेल-जल विभाजन गुणांक

तालिका 1 एफए, पीएम और एफए-पीसी की पानी और एन-ऑक्टेनॉल में घुलनशीलता को दर्शाता है। FA-PC ने पानी और n-octanol (क्रमशः 1.68 और 7.77 mg/mL) में अच्छी घुलनशीलता प्रदर्शित की, और n-octanol में FA-PC की घुलनशीलता FA (1.34 mg/mL) की तुलना में काफी अधिक पाई गई। .

लिपोफिलिसिटी को आमतौर पर दो अमिश्रणीय चरणों के बीच विभाजन गुणांक (P) के रूप में मापा जाता है। यह आमतौर पर लॉग पी के रूप में व्यक्त किया जाता है। एन-ऑक्टेनॉल / जल प्रणाली में एफए और एफए-पीसी के स्पष्ट विभाजन गुणांक निर्धारित किए गए थे। परिणामों ने संकेत दिया कि लॉग पी एफए-पीसी (1.21) के लिए एफए (0.99) की तुलना में अधिक था जब पीएच 5.0 पर मापा गया था। एफए की तुलना में थोड़ा बढ़ा हुआ लॉग पी एफए-पीसी की काफी बेहतर एन-ऑक्टानॉल घुलनशीलता से संबंधित था। एन-ऑक्टेनॉल में एफए-पीसी की बढ़ी हुई घुलनशीलता को एफए-पीसी की अनाकार विशेषताओं द्वारा समझाया जा सकता है। जैसा कि लिपोफिलिसिटी और पारगम्यता अच्छी तरह से सहसंबद्ध हैं, इन परिणामों से पता चलता है कि एफए की ट्रांसडर्मल पारगम्यता को फॉस्फोलिपिड कॉम्प्लेक्स के रूप में लागू करके सुधार किया जा सकता है।

डीएससी 

डीएससी ड्रग-एक्सीपिएंट कम्पैटिबिलिटी की जांच के लिए एक विश्वसनीय तरीका है और ड्रग्स और एक्सीपिएंट्स [10] के बीच संभावित इंटरैक्शन के बारे में अधिकतम जानकारी प्रदान करता है। एंडोथर्मिक चोटियों के उन्मूलन, नई चोटियों की उपस्थिति, चोटी के आकार में परिवर्तन और शुरुआत, चरम तापमान/गलनांक, और सापेक्ष क्षेत्र या तापीय धारिता से बातचीत की उपस्थिति का निष्कर्ष निकाला जा सकता है। चित्रा 1 एफए (छवि 1 ए), पीसी (छवि 1 बी), पीएम (छवि 1 सी), और एफए-पीसी (छवि 1 डी) के डीएससी थर्मोग्राम दिखाता है। शुद्ध एफए के लिए थर्मल वक्र में लगभग 172.7 डिग्री पर एक विशिष्ट तेज एंडोथर्मिक पिघलने होता है, जो इसके निर्जल और क्रिस्टलीय अवस्था का संकेत देता है, जबकि फॉस्फोलिपिड्स 231.7-248.6 डिग्री पर एक मामूली एंडोथर्मल शिखर प्रदर्शित करता है। पीएम के लिए डीएससी वक्र, जिसमें एफए और फॉस्फोलिपिड्स के लिए सुपरिंपोज्ड थर्मल प्रोफाइल शामिल हैं, कोई महत्वपूर्ण नहीं दिखाता हैउच्च तापमान (175.9 डिग्री) पर एक छोटे से बदलाव को छोड़कर परिवर्तन, घटकों के बीच कोई बातचीत नहीं दर्शाता है। FA–PC का 158.2 डिग्री पर एक प्रमुख शिखर है, जोएफए चोटी से भिन्न होता है, जो एफए और पीसी के बीच बातचीत का संकेत देता है। हमारे परिणाम बताते हैं कि अलग-अलग डिग्री की बातचीत और / या अमोर्फाइजेशन अलग-अलगमिश्रण या कॉम्प्लेक्स उनकी तैयारी विधि के आधार पर प्राप्त किए जा सकते हैं और यह घुलनशीलता में अंतर से जुड़ा है।

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गोरा

एफटीआईआर स्पेक्ट्रोस्कोपी एफए-पीसी स्पेक्ट्रम की शुद्ध एफए के साथ तुलना करके एफए-पीसी के गठन की पुष्टि कर सकता है। चित्रा 2 एफए, पीसी, पीएम और एफए-पीसी का एफटीआईआर स्पेक्ट्रा दिखाता है। एफए स्पेक्ट्रम (चित्र। 2ए) 3436 सेमी -1 पर एक विशिष्ट हाइड्रॉक्सिल स्ट्रेचिंग बैंड दिखाता है। यह सभी स्पेक्ट्रम एफए-पीसी, पीएम और फॉस्फोलिपिड (चित्र। 2 बी-डी) में एक विस्तृत एकल बन जाता है। FA स्पेक्ट्रम (चित्र 2a) 1620 cm−1 (C=C स्ट्रेचिंग) और 1450 cm−1 (C=C एरोमैटिक रिंग स्ट्रेचिंग) पर विशिष्ट चोटियों को प्रदर्शित करता है। एफए-पीसी स्पेक्ट्रम (छवि 2 बी) में, ये दो चोटियां दिखाई नहीं देती हैं, शायद फॉस्फोलिपिड अणु द्वारा कमजोर या हटाने या परिरक्षण के कारण।

FA स्पेक्ट्रम (चित्र 2a) 1691 cm−1 (C=O स्ट्रेचिंग), और 1664 cm−1 (C=C स्ट्रेचिंग) पर विशेषता असंतृप्त कार्बोक्सिल चोटियों को प्रदर्शित करता है। एफए-पीसी स्पेक्ट्रम (छवि 2 बी) में, ये दो चोटियां दिखाई नहीं देती हैं, शायद एफए में नकारात्मक कार्बोक्सिल चार्ज और फॉस्फोलिपिड्स में सकारात्मक नाइट्रोजन चार्ज के बीच आकर्षक बलों के कारण। फॉस्फोलिपिड स्पेक्ट्रम (अंजीर। 2d) 1733 सेमी−1 (सी=ओ स्ट्रेचिंग), 1238 सेमी−1 (पी=ओ स्ट्रेचिंग), और 1087 सेमी−1 (पी-ओ) पर चरम पर पहुंच गया है। -सी स्ट्रेचिंग)।1733 और 1087 सेमी−1 की चोटियों को पीएम और एफए-पीसी स्पेक्ट्रा में बनाए रखा जाता है, जो जटिल के गठन में गैर-भागीदारी का संकेत देता है। 1283 सेमी-1 पर फॉस्फोलिपिड चोटी एफए-पीसी स्पेक्ट्रम में देखने योग्य नहीं है, क्योंकि एफए से विशेषता हाइड्रॉक्सिल वैन डेर वाल्स बलों के माध्यम से 1283 सेमी-1 पर पी=ओ के साथ जुड़ा हुआ है। परिणामों से संकेत मिलता है कि एफए को नकारात्मक फास्फोरस ऑक्सीजन बांड और फॉस्फोलिपिड्स में सकारात्मक नाइट्रोजन चार्ज से बनी रिंग संरचना में एम्बेड किया गया था, जो जटिल एफए-पीसी बन गया।

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एसईएम (चित्र 3) का उपयोग करके एफए, पीसी, पीएम और एफए-पीसी की सतह आकारिकी की जांच की गई। अंजीर। 3 सी में, एफए क्रिस्टलीय, लगभग आयताकार दिखाई देता है, जबकि एफए-पीसी कण (छवि 3 ए) एक चिकनी सतह के साथ आकार में अनियमित दिखाई देते हैं। एफए और पीसी (छवि 3 बी) की तुलना में एफए-पीसी में काफी अलग आकार और सतह स्थलाकृति है। यह संभवतः पीसी में एफए की पूर्ण गलतता के कारण है। पीएम स्कैन (अंजीर। 3 डी) में, एफए और फॉस्फोलिपिड्स दोनों आसानी से अलग-अलग हैं।

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इन विट्रो प्रसार अध्ययन

हाल ही में, सिंथेटिक स्ट्रैट-एम® झिल्ली को इन विट्रो प्रसार अध्ययन [11] में मानव त्वचा के विकल्प के रूप में पेश किया गया था। स्ट्रैट-एम® झिल्ली पॉलीएथर्सल्फ़ोन की दो परतों से बना है जो प्रसार के लिए प्रतिरोधी हैं। पॉलीएथर्सल्फ़ोन परतें पॉलीओलेफ़िन की एक परत के ऊपर होती हैं, जो अधिक खुली और फैलाने वाली होती है। यह सिंथेटिक झिल्ली कम बैच-टू-बैच परिवर्तनशीलता की विशेषता है, इस प्रकार अधिक सुसंगत डेटा प्रदान करता है। इसके अलावा, यह दिखाया गया है कि स्ट्रैट-एम® झिल्लियों के लिए प्रसार डेटा मानव त्वचा [11] के साथ अच्छी तरह से संबंध रखता है।

एफए के इन विट्रो प्रसार गुणों पर पीसी के प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए, एफए और एफए-पीसी के प्रतिशत क्यू को समय के खिलाफ प्लॉट किया गया था। वर्तमान पेपर के परिणामों ने एक प्रवृत्ति दिखाई कि फॉस्फोलिपिड्स ने स्ट्रैट-एम® झिल्ली में एफए पारगमन को काफी बढ़ा दिया। इसके अलावा, एफए-पीसी एफए (चित्र 4) की तुलना में स्ट्रैट-एम® झिल्ली पर अधिक समय तक रहता है। इसलिए, एफए में फॉस्फोलिपिड्स को शामिल करने से शायद स्ट्रेटम कॉर्नियम में इसका निवास समय बढ़ जाता है और यह त्वचा के पारगमन के लिए अधिक उपयुक्त हो जाता है। पारगमन समय के संबंध में, हालांकि स्ट्रैट-एम® झिल्ली को मानव त्वचा [11] के साथ एक अच्छा संबंध होने की सूचना दी गई है, इसमें मानव त्वचा की तुलना में बनावट अंतर भी है। पारगमन समय के प्रभाव कारकों में विलायक, यौगिकों की एकाग्रता, पीएच मान, एट अल शामिल हो सकते हैं। भविष्य के विश्लेषण में और प्रयोग किए जाने चाहिए।

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मेलानोजेनेसिस का निषेध

मेलेनिन संश्लेषण पर एफए-पीसी का प्रभाव

साहित्य के अनुसार, एफए सेलुलर प्रोटीन सी-किट और ईआरके1/2 [12] के डाउनरेगुलेशन के माध्यम से बी16एफ1 0 मेलेनोमा कोशिकाओं में सेलुलर टाइरोसिनेस गतिविधि और मेलेनोजेनेसिस को रोक सकता है। वर्तमान अध्ययन में, FA-PC ने B16F1 {{1 0}} कोशिकाओं में मेलेनिन सामग्री को 0.25, 0.5, और 1.0 mg/mL (तालिका 2) की परीक्षण सांद्रता पर FA की तुलना में अधिक स्पष्ट रूप से घटाया। इस प्रकार, हमने निर्धारित किया कि B16F10 कोशिकाओं में मेलेनिन संश्लेषण को बाधित करने में FA-PC FA की तुलना में अधिक प्रभावी है।

निष्कर्ष

हम निष्कर्ष निकालते हैं कि फॉस्फोलिपिड्स के साथ एफए को जटिल बनाने से एफए की पानी की घुलनशीलता, लिपिड घुलनशीलता, जैवउपलब्धता और बी 16 एफ 10 सेलुलर मेलानोजेनेसिस अवरोध गतिविधि में सुधार होता है। हमारे परिणामों के प्रभावों में दवा या सौंदर्य प्रसाधनों में सामग्री के रूप में FA-PC का संभावित उपयोग शामिल है।

लेखकों का योगदान

एलएल और एलवाई ने अवधारणा और डिजाइन, या डेटा के अधिग्रहण, या डेटा के विश्लेषण और व्याख्या में पर्याप्त योगदान दिया है; XY और WX महत्वपूर्ण बौद्धिक सामग्री के लिए पांडुलिपि का मसौदा तैयार करने या इसे गंभीर रूप से संशोधित करने में शामिल रहे हैं; और ZJ और DY ने प्रकाशित किए जाने वाले संस्करण को अंतिम स्वीकृति दे दी है। सभी लेखकों ने तैयार हस्तलेख को पढ़ लिया है और इसे अनुमोदित कर दिया है।

स्वीकृतियाँ

इस कार्य को चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (31501402) द्वारा समर्थित किया गया था।

प्रतिस्पर्धी रुचियां

लेखक घोषणा करते हैं कि उनकी कोई प्रतियोगी रुचि नहीं है।

प्राप्त: 27 दिसंबर 2016 स्वीकृत: 14 मार्च 2017

ऑनलाइन प्रकाशित: 22 मार्च 2017

संदर्भ

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