प्रोटीन विश्लेषण और इन विट्रो एंटीवायरल, एंटीकैंसर और एंटीऑक्सिडेंट क्षमता लेंटिनुला एडोड्स और प्लुरोटस ओस्ट्रेटस खाद्य मशरूम के जलीय अर्क की

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सार: इस अध्ययन में, हमने खाद्य मशरूम प्लुरोटस ओस्ट्रीटस (सीप मशरूम) और लेंटिनुला एडोड्स (शियाटेक मशरूम) के जलीय अर्क की जांच की। एलसी-ट्रिपल टीओएफ-एमएस का उपयोग करके प्रोटीन विश्लेषण किया गया था और प्लुरोटस ओस्ट्रेटस द्वारा 753 प्रोटीन और लेंटिनुला एडोड्स द्वारा 432 प्रोटीन की अभिव्यक्ति को दिखाया गया था। बायोएक्टिव पेप्टाइड्स: दोनों मशरूम में रब जीडीपी पृथक्करण अवरोधक, सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेज, थिओरेडॉक्सिन रिडक्टेस, सेरीन प्रोटीनएज और लेक्टिन की पहचान की गई थी। अर्क में फेनोलिक्स सहित होनहार बायोएक्टिव यौगिक भी शामिल थे,flavonoids, विटामिन और अमीनो एसिड। अर्क ने आशाजनक दिखायाएंटीवायरल गतिविधियां, एडेनोवायरस (Ad7) के खिलाफ प्लुरोटस ओस्ट्रेटस के लिए 4.5 के चयनात्मकता सूचकांक (एसआई) के साथ, और हर्पीस सिम्प्लेक्स- II (एचएसवी -2) के खिलाफ लेंटिनुला एडोड्स के लिए थोड़ी सी गतिविधि। अर्क सामान्य मानव परिधीय रक्त मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं (PBMCs) के लिए साइटोटोक्सिक नहीं थे। इसके विपरीत, उन्होंने विभिन्न कैंसर सेल लाइनों के खिलाफ मध्यम साइटोटोक्सिसिटी दिखाई। इसके अतिरिक्त, DPPH . का उपयोग करके एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि का मूल्यांकन किया गया थाकट्टरपंथी सफाई, ABTS कट्टरपंथी कटियन मैला ढोने, और ORAC assays। दो अर्क ने संभावित दिखायाएंटीऑक्सीडेंट गतिविधियां, Pleurotus ostreatus (IC50 ug/mL) के लिए देखी गई अधिकतम गतिविधि के साथ =39. DPPH के लिए 46 ± 1.27; ABTS के लिए 11.22 ± 1.81; और ओआरएसी परख के लिए 21.40 ± 2.20। यह अध्ययन सामान्य PBMCs पर उनकी एंटीवायरल, एंटीट्यूमर और एंटीऑक्सीडेंट क्षमताओं की तुलना में उनकी कम साइटोटोक्सिसिटी के आलोक में दवा में इन मशरूम के उपयोग को प्रोत्साहित करता है।

कीवर्ड: सफेद सड़ांध कवक; प्लुरोटस ओस्ट्रेटस; लेंटिनुला एडोड्स; शीटकेक; एंटीऑक्सीडेंट; ट्यूमररोधी; एंटी वाइरल

1 परिचय

दवा और न्यूट्रास्युटिकल उत्पादन में मशरूम की काफी संभावनाएं हैं। अच्छे ऑर्गेनोलेप्टिक गुणों और उच्च पोषण मूल्यों के अलावा, कई मशरूमों में असंख्य औषधीय गतिविधियों [1-3] के बारे में बताया गया है। सबसे व्यापक रूप से खेती की जाने वाली मशरूम में लेंटिनुला एडोड्स (शियाटेक मशरूम) और प्लुरोटस ओस्ट्रेटस (सीप मशरूम) हैं। Shiitake दुनिया भर में सबसे अधिक खपत वाले खाद्य मशरूम के रूप में Agaricus bisporus के बाद दूसरे स्थान पर आता है [4]। इस मशरूम में आशाजनक जीवाणुरोधी, एंटिफंगल, एंटीवायरल, हेपेटोप्रोटेक्टिव, एंटीहाइपरग्लाइसेमिक और इम्यूनोमॉड्यूलेटरी प्रभाव [5-7] हैं। यह बायोएक्टिव अणुओं में समृद्ध है, जिनमें से सबसे अधिक अध्ययन "लेंटिनन" है, जो "लेंटिनन" के अलावा बैक्टीरिया, वायरस और ट्यूमर के खिलाफ एक पॉलीसेकेराइड है, जो डिस्लिपिडेमिया और हाइपरग्लाइसेमिया को नियंत्रित करने में मदद करता है [8]। Pleurotus ostreatus, जीनस Pleurotus [9] की सबसे आम प्रजाति, जिसे सीप मशरूम के रूप में भी जाना जाता है, एक लकड़ी डीकंपोज़र है और इसमें जैविक गतिविधियों की एक विस्तृत श्रृंखला है [10]। अन्य चिकित्सीय मशरूम की तुलना में, सीप मशरूम स्वास्थ्य प्रवर्तक के रूप में अधिक लोकप्रिय हो रहे हैं [11]। सीप मशरूम में बड़ी संख्या में पोषक तत्व जैसे लेक्टिन, पॉलीसेकेराइड, विटामिन और खनिज की उपस्थिति उन्हें संभावित कैंसर रोधी बनाने में सक्षम बनाती है,एंटीऑक्सिडेंट, एंटीडायबिटिक, रोगाणुरोधी, और एंटी-हाइपरकोलेस्ट्रोलेमिक गुण [12,13]। अन्य खाद्य मशरूम की तुलना में, सीप और शीटकेक मशरूम की एक संक्षिप्त वृद्धि अवधि होती है और इसे पूरे वर्ष 14 में काटा जा सकता है। उनकी खेती और परीक्षण में आसानी, उच्च पोषण मूल्यों और आशाजनक औषधीय लाभों के परिणामस्वरूप, इन मशरूम में जबरदस्त क्षमता है खाद्य और दवा उद्योगों में [4,15]। वास्तव में, उच्च बेसिडिओमाइसीट्स बहुक्रियाशील खाद्य स्रोत हो सकते हैं।

इन दो मशरूम [16,17] में शर्करा, शारीरिक रूप से सक्रिय प्रोटीन, असंतृप्त फैटी एसिड, फेनोलिक्स (फेनोलिक एसिड और पॉलीफेनोल्स), फ्लेवोनोइड्स, टेरपेनोइड्स, ग्लाइकोप्रोटीन, पॉलीकेटाइड्स, स्टेरॉयड और अल्कलॉइड सहित कई बायोएक्टिव यौगिक पाए गए। ये यौगिक इन कवक की व्यापक औषधीय क्रियाओं को लाने के लिए पूरी तरह से या सहक्रियात्मक रूप से कार्य करते हैं। शीटकेक और ऑयस्टर मशरूम में जीवाणुरोधी, एंटीवायरल, एंटीहाइपरटेन्सिव, इम्यूनोमॉड्यूलेटरी और एंटीऑक्सीडेंट गतिविधियां [1,18,19] होने की सूचना है। सियो एट अल। [20] मशरूम बायोमोलेक्यूल्स की एंटीवायरल गतिविधि के तंत्र को सारांशित करता है, यह दर्शाता है कि वायरल संक्रमण में कमी मुख्य रूप से मेजबान कोशिकाओं में वायरस के उत्थान, इसकी प्रतिकृति, और इसके प्रोटीन और एंजाइम संश्लेषण में हस्तक्षेप करने के अलावा, उत्तेजक के अलावा है। मेजबान प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया [21]। प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों के चेहरे में एंटीऑक्सिडेंट महत्वपूर्ण अणु हैं जो कई स्वास्थ्य समस्याओं के पीछे हैं। चूंकि सिंथेटिक एंटीऑक्सिडेंट के उपयोग के खिलाफ कई लाल झंडे उठाए गए थे, इसलिए प्राकृतिक लोगों का अध्ययन अनिवार्य हो गया है [22]। इन मशरूम-रूम उत्पादों का एंटीट्यूमर प्रभाव ग्लूकेन्स, एर्गोस्टेरॉल, प्रोटियोग्लाइकेन्स, और अमीनो एसिड (आर्जिनिन और ग्लूटामाइन) [23] सहित बायोमोलेक्यूल्स से संबंधित था। इस आशय के अंतर्निहित तंत्र में टी-लिम्फोसाइटों की उत्तेजना, नव संवहनी का दमन, और कैंसर कोशिका मृत्यु को शामिल करना, कैंसर कोशिकाओं के खिलाफ प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को ट्रिगर करने के अलावा शामिल हो सकता है [24,25]।

प्रोटिओमिक्स ने खुद को जैव अनुसंधान, विशेष रूप से कृषि अनुसंधान [26] में एक मूल्यवान उपकरण के रूप में सिद्ध किया है। लिंडक्विस्ट एट अल। [27] खाद्य मशरूम अनुसंधान में प्रोटिओमिक्स को नियोजित करने के महत्व पर प्रकाश डालने वाले पहले समूह थे। उन्होंने कवक जैव सक्रिय अणुओं के अध्ययन के लिए "ओमिक्स" का उपयोग करने की आवश्यकता पर बल दिया। रोगजनक कवक की तुलना में खाद्य मशरूम अनुसंधान में प्रोटिओमिक्स का बहुत कम उपयोग किया गया है [28]। तदनुसार, इस अध्ययन का उद्देश्य दो खाद्य मशरूम, प्लुरोटस ओस्ट्रेटस और लेंटिनुला एडोड्स के प्रोटिओम का विश्लेषण करना और उनकी क्षमता की जांच करना था।एंटी वाइरल, एंटीट्यूमर, और एंटीऑक्सीडेंट गतिविधियों।

2. परिणाम

2.1.Proteom1e विश्लेषण

प्रोटीन विश्लेषण एलसी-ट्रिपल टीओएफ-एमएस विश्लेषण का उपयोग करते हुए एक झूठी खोज दर (एफडीआर) के साथ किया गया था।<5% and="" a"95%="" confidence="" of="" identification".="" for="" p.ostreatus,="" a="" total="" of="" 753="" proteins="" were="" identified,34="" of="" which="" were="" reversed="" hits.="" a="" total="" of="" 432="" proteins="" were="" detected="" in="" ledodes,="" 48="" of="" which="" were="" reversed="" hits.="" the="" recorded="" accession="" numbers="" of="" the="" proteins="" are="" included="" in="" tables="" s1="" and="" s2="" for="" p.="" ostreatus="" and="" l.edodes,="" respectively.="" in="" tables="" s1="" and="" s2,="" the="" ms-triple="" tof="" data="" were="" analyzed="" by="" proteinpilot="" with="" the="" paragon="" algorithm.="" proteins="" were="" identified="" with="" peptides="" that="" gave="" more="" than="" a="" 95%="" confidence="" of="" identification.="" bioactive="" proteins:="" rab="" gdp="" dissociation="" inhibitor,="" superoxide="" dismutase,="" thioredoxin="" reductase,="" serine="" proteinase,="" and="" lectin,="" were="" expressed="" in="" both="" p.ostreatus="" and="" l.edodes="" extracts="" [29-35].="" p.="" ostreatus="" also="" expressed="" osteolysis="" and="" pleurotolysin,="" whereas="" latch="" pin="" and="" valosin-containing="" protein="" were="" expressed="" by="" l.edodes.="" lc-triple="" tof-ms="" spectra="" of="" the="" mushroom="" extracts="" analyzed="" by="" analyst="" tf1.7.1="" (sciex="" software)="" are="" shown="" in="">

2.2. कुल बायोएक्टिव यौगिक कुल सामग्री

कुल सामग्री का आकलन करने में, इसमें कुल कार्बोहाइड्रेट, प्रोटीन, फेनोलिक्स और फ्लेवोनोइड्स का आकलन शामिल था। P. ostreatus अर्क में कार्बोहाइड्रेट की संख्या लगभग तिगुनी होती है और L.edodes निकालने में मौजूद प्रोटीन की संख्या दोगुनी होती है; फिर भी, L.edodes के अर्क में P. ostreatus Extract (तालिका 1) की तुलना में अधिक फ्लेवोनोइड पाए गए।

2.3. फेनोलिक और फ्लेवोनोइड अणु

दोनों मशरूम के अर्क में कैटेचिन होता है (26.48min के प्रतिधारण समय पर पता चला)। P.ostreatus में अतिरिक्त रूप से kaempferol और apigenin (क्रमशः 59.13 मिनट और 59.56 मिनट के अवधारण समय पर पता चला) शामिल थे, जबकि L.edodes में क्वेरसेटिन (अवधारण समय=56। 86 मिनट; तालिका 2; चित्र भी शामिल था। एस1)।

2.4.विटामिन

पानी में घुलनशील और साथ ही वसा में घुलनशील विटामिन सामग्री एचपीएलसी (तालिका 3 और आंकड़े एस 2 और एस 3) के माध्यम से निर्धारित की गई थी। दोनों मशरूम विटामिन सी में समृद्ध हैं, विटामिन बी 3, बी 6, और डी की पहचान योग्य मात्रा के साथ। दोनों मशरूम के बीच विटामिन की मात्रा में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं था। दूसरी ओर, दोनों मशरूम में विटामिन बी1, बी2, बी9, ए और ई का पता नहीं चला।

2.5. अमीनो एसिड विश्लेषण

अमीनो एसिड विश्लेषण के लिए एक Sykam अमीनो एसिड विश्लेषक का उपयोग किया गया था। P.ostreatus और L.edodes में कुल अमीनो एसिड सामग्री क्रमशः 5.14 और 4.35 थी, जैसा कि तालिका 4 में दिखाया गया है, और दो मशरूम ग्लूटामिक एसिड में समृद्ध हैं। जबकि पी. ऑस्ट्रीटस एक्सट्रेक्ट में प्रोलाइन काफ़ी सघनता (0.57 ग्राम/100 ग्राम प्रोटीन) में पाया गया था, एल.एडोड्स एक्सट्रैक्ट में इसका पता नहीं चला था। दोनों में से किसी भी मशरूम में हिस्टिडीन और एसपारटिक एसिड नहीं पाया गया।

2.6. जैविक गतिविधियां

2.6.1.एंटीवायरल गतिविधि

एंटीवायरल गतिविधि का मूल्यांकन दो वायरस के खिलाफ किया गया था: एडेनोवायरस और हर्पीज सिम्प्लेक्स- II। जैसा कि तालिका 5 में दिखाया गया है, P.ostreatus के अर्क ने एडेनोवायरस के खिलाफ एक प्रभावी एंटीवायरल गतिविधि दिखाई, जिसमें चयनात्मकता सूचकांक 4.5 जितना अधिक था। हर्पीज सिम्प्लेक्स-द्वितीय के खिलाफ पी। ओस्ट्रेटस निकालने के लिए और दोनों वायरस के खिलाफ एल.एड्स निकालने के लिए आशाजनक एंटीवायरल प्रभाव भी दर्ज किए गए थे। आंकड़े S4 और S5 खुराक-प्रतिक्रिया वक्रों का प्रतिनिधित्व करते हैं।

2.6.2. सामान्य मानव PBMCs के खिलाफ साइटोटोक्सिक गतिविधि

न्यूनतम साइटोटोक्सिसिटी IC50 ug/mL; 66.41 ± 3.7 और 82.81 ± 2.72, क्रमशः P.ostreatus और L. edodes के लिए) सामान्य मानव PBMCs के विरुद्ध दर्ज किया गया था।

कैंसर सेल लाइनों के खिलाफ

इस परीक्षण में प्रोस्टेट कैंसर (DU-145 और PC3) सहित विभिन्न कैंसर सेल लाइनों का उपयोग किया गया था; हेपैटोसेलुलर कार्सिनोमा (HepG2); कोलोरेक्टल कार्सिनोमा (कोलो-205); सीकुम कार्सिनोमा (एलएस-513); सर्वाइकल कैंसर (हेला); और स्तन एडेनोकार्सिनोमा (एमडीए-एमबी-231 और एमसीएफ-7)। डॉक्सोरूबिसिन का उपयोग सकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया गया था (हेपजी 2 में व्यवहार्यता में 53 प्रतिशत की कमी हुई; एमडीए-एमबी में 44 प्रतिशत -231; पीसी 3 में 39 प्रतिशत; डीयू में 35 प्रतिशत -145; एमसीएफ में 29 प्रतिशत -7: एलएस में 25 प्रतिशत -513; हेला में 23 प्रतिशत; और कोलो में 19 प्रतिशत -205 कोशिकाएं)। चित्र 2 के परिणाम दर्शाते हैं कि लेडोड्स और पी. ओस्ट्रिएटस के सत्त ने LS-513, HepG2, DU-145, और PC-3 की परीक्षण की गई कैंसर कोशिका रेखाओं की व्यवहार्यता को लगभग 20 से कम कर दिया है। प्रतिशत।

ल्यूकेमिया और लिम्फोमा सेल लाइन्स के खिलाफ

P.ostreatus और L.edodes के मशरूम के अर्क का ल्यूकेमिया (CCR-CEM, NB-4, THP-1) और लिम्फोमा (U937) कोशिकाओं के खिलाफ साइटोटोक्सिसिटी के लिए परीक्षण किया गया था। डॉक्सोरूबिसिन सकारात्मक मानक था, जिसके कारण सेल व्यवहार्यता में क्रमशः 29 प्रतिशत, 25.5 प्रतिशत, 20.3 प्रतिशत और U937, NB4, CCRF-CEM और THIP1 कोशिकाओं में 19.1 प्रतिशत की कमी आई। L.edodes अर्क ने THP1 कोशिकाओं की व्यवहार्यता को घटाकर 66.02 प्रतिशत कर दिया, जबकि P.ostreatus अर्क ने CCRF-CEM कोशिकाओं की व्यवहार्यता को घटाकर 70.64 प्रतिशत कर दिया (चित्र 3)।

2.6.3. प्रतिउपचारक गतिविधि

एंटीऑक्सीडेंट प्रभाव के परिणामों का अध्ययन तीन मूल्यांकन विधियों, अर्थात् डीपीपीएच द्वारा किया गया थाकट्टरपंथी सफाई, ABTS रेडिकल कटियन मैला ढोने, और ORAC assays, एंटीऑक्सीडेंट मानक, Trolox की तुलना में, तालिका 6 और चित्र S6a, b में दिखाए गए हैं। परिणाम बताते हैं कि पी. ओस्ट्रेटस के अर्क में एल.एडोड्स के अर्क की तुलना में अधिक शक्तिशाली एंटीऑक्सीडेंट क्षमता थी, जैसा कि इस्तेमाल किए गए तीन एंटीऑक्सिडेंट assays द्वारा इंगित किया गया था। चित्रा 4 ओआरएसी परख में अर्क द्वारा प्रेरित फ्लोरेसिन सिग्नल क्षय को दर्शाता है।

3. चर्चा

सफेद सड़ांध कवक ने अपने औषधीय गुणों के कारण वैज्ञानिक समुदाय की रुचि को उभारा है, जिसमें प्रतिरक्षा प्रणाली मॉड्यूलेशन, हाइपोग्लाइसेमिक और एंटीथ्रॉम्बोटिक गतिविधि, और एंटीहाइपरटेंसिव, एंटी-इंफ्लेमेटरी, एंटीमाइक्रोबियल और एंटीट्यूमर गुण, साथ ही रक्त कोलेस्ट्रॉल के स्तर को कम करने की क्षमता शामिल है। 24,36-38]. दो सफेद सड़ांध वाले कवक पी. ओस्ट्रेटस और एल.एडोड्स कई देशों में सबसे अधिक खपत वाले खाद्य मशरूम में से दो हैं [39]। इन दो मशरूमों द्वारा बड़ी संख्या में बायोएक्टिव प्रोटीन का उत्पादन किया जाता है, और प्रोटीन विश्लेषण वर्तमान में प्रोटीन प्रोफाइलिंग के लिए सबसे प्रभावी उपकरण है [40]। वर्तमान अध्ययन में, प्रोटिओम विश्लेषण ने दो परीक्षण मशरूम में रब जीडीपी पृथक्करण अवरोधक, थिओरेडॉक्सिन रिडक्टेस, सेरीन प्रोटीनएज़, सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेज और लेक्टिन सहित बायोएक्टिव प्रोटीन की अभिव्यक्ति को दिखाया। रब जीडीपी डिसोसिएशन इनहिबिटर (रब जीडीआई) रब जीटीपीसेस के कार्य को नियंत्रित करता है जो ट्यूमर कोशिकाओं में झिल्ली की तस्करी में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। तदनुसार, रब जीडीआई का उपयोग करना एक आशाजनक कैंसर-रोधी रणनीति है [29]।

सेरीन प्रोटीनएज़ योगदान देता हैएंटी वाइरलखाद्य मशरूम की गतिविधि [30,31]। इसके अलावा, याप एट अल। (2018) ने मानव स्तन एडेनोकार्सिनोमा सेल लाइन (एमसीएफ 7) के सामने सेरीन प्रोटीनेज की मजबूत चयनात्मक साइटोटोक्सिसिटी की सूचना दी और सुझाव दिया कि तंत्र में कैस्पेज़ की उत्तेजना के अलावा, बाहरी और आंतरिक कोशिका मृत्यु तंत्र दोनों का सहयोगात्मक प्रभाव शामिल है {{ 4}} और -9 और बीसीएल का निषेध-2 [41]।

का सेवनएंटीऑक्सीडेंटप्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (आरओएस)-मध्यस्थ पैथोफिजियोलॉजी [22] के खिलाफ एक शुभ रोगनिरोधी रणनीति है। हमारे परिणाम प्लुरोटस ओस्ट्रेटस और लेंटिनुला एडोड्स द्वारा एंटीऑक्सीडेंट रक्षा प्रणाली के एंजाइमों की अभिव्यक्ति दिखाते हैं। इन एंजाइमों में सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेज, कैटेलेज और ग्लूटाथियोन पेरोक्सीडेज शामिल हैं, जो आरओएस [32] के उत्पादन को असंतुलित करते हैं। सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेज सुपरऑक्साइड को हाइड्रोजन पेरोक्साइड में परिवर्तित करके शुरू होता है, जो बदले में, कैटलस और ग्लूटाथियोन पेरोक्साइड द्वारा पानी में परिवर्तित हो जाता है [33]।

दो मशरूम में लेक्टिन की अभिव्यक्ति भी पाई गई थी। कई शोधकर्ताओं ने लेक्टिन के उल्लेखनीय रूप से विविध जैविक प्रोफाइल की सूचना दी, जिसमें विरोधी भड़काऊ, एंटीडिप्रेसेंट, एंटीकॉन्सेप्टिव और वासोडिलेटरी एक्टिविटी-संबंध शामिल हैं। [34,35,42]। लेक्टिन विभिन्न प्रकार के सेलुलर कार्यों के साथ कार्बोहाइड्रेट-बाध्यकारी प्रोटीन होते हैं, जिसमें इन विट्रो और विवो में ट्यूमर सेल झिल्ली या उनके रिसेप्टर्स के लिए चयनात्मक बंधन के माध्यम से ट्यूमर के विकास का दमन होता है, जिसके परिणामस्वरूप प्रोटीन किनेसेस की सक्रियता होती है, या इंटरल्यूकिन उत्पादन के माध्यम से प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं का मॉड्यूलेशन होता है। [43]। इसके अतिरिक्त, एपोप्टोसिस, नेक्रोसिस, और / या ऑटोफैगी [42] सहित विभिन्न कोशिका मृत्यु मार्गों को ट्रिगर करने में मशरूम व्याख्यान की भी भूमिका होती है।

हमारा डेटा प्लुरोटस ओस्ट्रेटस में ऑस्टियोलाइसिस और प्लुरोटोलिसिन दोनों की अभिव्यक्ति को दर्शाता है। ये अत्यधिक चयनात्मक एंटीकैंसर गतिविधियों के साथ रोमकूप बनाने वाले प्रोटीन हैं [44,45]। ओस्ट्रेओलिसिन एक 15 केडीए साइटोलिटिक प्रोटीन है जिसमें उप-माइक्रोमोलर सांद्रता में एरिथ्रोसाइट्स और अन्य कोशिकाओं को पारगम्य करने की क्षमता होती है। यह एक कोलाइड आसमाटिक तंत्र के माध्यम से कार्य करता है और विस्तृत झिल्ली छिद्रों के निर्माण को प्रेरित करता है |46,47I। निमरी एट अल। मानव और माउस कोलन ट्यूमर कोशिकाओं [48] के खिलाफ शक्तिशाली एंटीट्यूमर गतिविधि के साथ पुनः संयोजक प्लुरोटोलिसिन का उत्पादन किया।

L.edodes में, वैलोसिन युक्त प्रोटीन और लैच पिन व्यक्त किए गए थे। वैलोसिन युक्त प्रोटीन को पहले बताया गया थाएंटीऑक्सिडेंटगुण जो अल्जाइमर रोग, पार्श्व काठिन्य, और मनोभ्रंश [49-51] जैसे न्यूरोनल सिंड्रोम में मदद कर सकते हैं। लैटक्रिपिन एक संभावित कैंसर रोधी एजेंट है [50]। रियाज़ उद दीन एट अल। (2020) ने स्तन कैंसर सेल लाइनों के खिलाफ लैच पिन के एंटीकैंसर तंत्र की जांच की। उन्होंने प्रवासन और आक्रमण पर इसके निरोधात्मक प्रभाव के अलावा, कोशिका मृत्यु के साथ-साथ स्वरभंग को प्रेरित करने की इसकी क्षमता की सूचना दी [52]।

P.ostreatus और L.edodes के अर्क में जैव सक्रिय यौगिकों की एक श्रृंखला निर्धारित की गई थी। वर्तमान अध्ययन में क्रमशः 19.37 ± 0.39 और 24.14 ± 1.01 mg/g के अर्क का P.ostreatus और L.edodes के टीपीएन का पता लगाया गया। वे मूल्य रहीमा एट अल द्वारा दर्ज किए गए मूल्यों से अधिक हैं, जिन्होंने पी। ओस्ट्रेटस की कुल फ्लेवोनोइड सामग्री को निकालने के लिए 6.67 मिलीग्राम / जी के रूप में अमोनियम और शिनोडा परीक्षणों का उपयोग किया था [53]। इसके अतिरिक्त, हमारे परिणाम मोंटिबस एट अल द्वारा पाए गए परिणामों की तुलना में अधिक हैं, जिन्होंने फोलिन-सियोकाल्टू विधि का उपयोग करके एल एडोड्स अर्क में टीपीसी को परख लिया और पाया 0।8-1.5 प्रतिशत सूखा वजन (डीडब्ल्यू) कैप्स में और 0.8-1.1 प्रतिशत dw स्टाइप्स में [54]।

कैटेचिन को P. ostreatus और L.edodes दोनों के सत्त में पाया गया। कैटेचिन एक प्लांट सेकेंडरी फेनोलिक मेटाबोलाइट है, जिसमें शक्तिशाली फ्री रेडिकल मैला ढोने के गुण हैं [55]। L.edodes के अर्क में फ्लेवोनोइड क्वेरसेटिन पाया गया। क्वेरसेटिन के एंटीऑक्सीडेंट प्रभाव को ग्लूटाथियोन के स्तर के नियमन और ग्लूटाथियोन ट्रांसफरेज़ और एल्डो-कीटो रिडक्टेस [56] सहित एंटीऑक्सिडेंट एंजाइमों के उत्पादन में वृद्धि के माध्यम से मध्यस्थ किया जाता है। इसके अलावा, क्वेरसेटिन में कोशिका चक्र को बाधित करने और एपोप्टोसिस [57,58] को बढ़ावा देने के माध्यम से एंटीट्यूमर गतिविधि होने की सूचना है। ली एट अल। ने बताया कि क्वेरसेटिन PC3, Du145, और U937 कैंसर सेल लाइनों [59] में सेल अरेस्ट का कारण बनता है। हमारे परिणामों से यह भी पता चलता है कि P.ostreatus में kaempferol और apigenin पाए गए थे। केम्पफेरोल और एपिजेनिन में एंटीऑक्सीडेंट और एंटी-प्रोलिफेरेटिव गतिविधियां [60-62] साबित हुई हैं। दोनों मशरूम के अर्क में ग्लूटामिक एसिड सबसे प्रचुर मात्रा में अमीनो एसिड पाया गया। उसी नस में, चिरिनंग एट अल ने पी। ओस्ट्रिएटस और पी। मेजर-काजू की अमीनो एसिड सामग्री का विश्लेषण किया और पाया कि ग्लूटामिक एसिड सामग्री सबसे अधिक थी, इसके बाद एसपारटिक एसिड और फिर आर्जिनिन [63] था।

P.ostreatus और L. edodes ने एडेनोवायरस और हर्पीज सिम्प्लेक्स वायरस- II के खिलाफ आशाजनक एंटीवायरल गतिविधियों को दिखाया, जिसमें SI एडेनोवायरस के खिलाफ P. ostreatus अर्क के लिए 4.5 तक पहुंच गया। एसआई का उपयोग अर्क की प्रभावकारिता और सुरक्षा का मूल्यांकन करने के लिए किया गया था क्योंकि यह साइटोटोक्सिक और एंटीवायरल गतिविधियों के बीच की खिड़की का अनुमान लगाता है। एसआई जितना अधिक होगा, यौगिक उतना ही सुरक्षित और अधिक कुशल होगा [64,65]। संबंधित डेटा हाल ही में अर्बनसिकोवा एट अल द्वारा दिखाया गया था, जहां फुफ्फुस (अघुलनशील -1, 3/1, 6- पी। ओस्ट्रेटस से पृथक डी-ग्लूकन)-आधारित पूरक ने हर्पीस सिम्प्लेक्स वायरस की अवधि को काफी कम कर दिया था। -I लक्षण, श्वसन लक्षणों की कम गंभीरता के साथ, प्लेसीबो समूह की तुलना में दाद सिंप्लेक्स वायरस-I-पॉजिटिव रोगियों में, महत्वपूर्ण साइड इफेक्ट के बिना, तीव्र हर्पीज सिम्प्लेक्स वायरस- I [66] के उपचार में संभावित भविष्य के उपयोग के लिए फुफ्फुस का प्रस्ताव।

मशरूम का एंटीवायरल प्रभाव ज्यादातर वायरल तेज, प्रतिकृति, एंजाइम गतिविधि, और कार्यशील पेप्टाइड्स के साथ-साथ मेजबान प्रतिरक्षा प्रणाली [67] के साथ हस्तक्षेप करने के कारण होता है। सेओ और चोई (2021) ने प्रस्तावित किया कि पी.ओस्ट्रेटस और एल.एडोड्स के पॉलीसेकेराइड अंश में -ग्लूकेन पूर्व और बाद के उपचार प्रभावों के माध्यम से इसके एंटीहेरपेटिक प्रभाव के लिए जिम्मेदार हो सकता है [20]। P. ostreatus और L.edodes के जलीय अर्क का एचआईवी-विरोधी प्रभाव क्रमशः ubiquitin जैसे प्रोटीन और लेप्टिन द्वारा रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस एंजाइम के निषेध के कारण हो सकता है, [68,69]।

हमारे मशरूम के जलीय अर्क को परीक्षण किए गए कैंसर सेल लाइनों की व्यवहार्यता को लगभग 20 प्रतिशत तक बाधित करने के लिए दिखाया गया था। हमने ल्यूकेमिया और लिम्फोमा सेल लाइनों के खिलाफ भी इसी तरह के प्रभाव देखे, THP1ल्यूकेमिया कोशिकाओं के खिलाफ L.edodes अर्क के साथ व्यवहार्यता में 66 प्रतिशत की कमी के साथ, और CCRF-CEM ल्यूकेमिया कोशिकाओं के खिलाफ P.ostreatus अर्क के साथ 70.6 प्रतिशत तक। एल.एडोड्स के जलीय मायसेलियल और फलों के शरीर के अर्क को पहले एमसीएफ -7 स्तन कैंसर कोशिकाओं [70] पर एंटी-प्रोलिफेरेटिव और एपोप्टोटिक क्रियाओं को लागू करने की सूचना मिली थी। इन क्रियाओं के लिए ज्यादातर एल.एडोड्स का एथिल एसीटेट अंश और -ग्लूकेन जिम्मेदार था [71,72]। इसी सन्दर्भ में, पी. ओस्ट्रिएटस अर्क एमसीएफ-7 और एमडीए-एमबी-231 स्तन एडेनोकार्सिनोमा कोशिकाओं [73], और 6-लिंक्ड ग्लूकेन्स की ओर प्रोलिफ़ेरेटिव गतिविधि दिखाने में सक्षम था। अर्क ने स्तन और फेफड़ों के कैंसर कोशिकाओं [74] के खिलाफ प्राकृतिक हत्यारे साइटोटोक्सिसिटी को प्रबल किया। हाल ही में, जैकोपोविक एट अल। पाया गया कि औषधीय मशरूम की तैयारी में एल.एडोड्स और पी. ओस्ट्रिएटस सहित 6 और 10 मशरूम शामिल हैं, जो कोलोरेक्टल (एचसीटी -116, एसडब्ल्यू620) ट्यूमर सेल लाइनों [75] पर महत्वपूर्ण एंटी-प्रोलिफ़ेरेटिव और प्रो-एपोप्टोटिक प्रभाव प्रदर्शित करते हैं। इसके विपरीत, लेखकों ने देखा कि मानव फ़ाइब्रोब्लास्ट सेल लाइन (WI -38) पर प्रभाव प्रोलिफ़ेरेटिव था, जो ट्यूमर सेल लाइनों के प्रति इन मशरूम की तैयारी की विशिष्टता को दर्शाता है। इसी तरह, हमने सामान्य मानव PBMCs के खिलाफ हमारे मशरूम द्वारा उत्सर्जित न्यूनतम साइटोटोक्सिसिटी का पता लगाया। यह खोज हमारे मशरूम के सुरक्षित उपयोग का भी सुझाव देती है।

मशरूम की साइटोटोक्सिसिटी को अणुओं की एक विस्तृत श्रृंखला के लिए जिम्मेदार ठहराया गया है जिसमें एक्स- और -ग्लूकेन्स, प्रोटीन, ग्लाइकोप्रोटीन, फैटी एसिड, न्यूक्लियोसाइड प्रतिपक्षी, टेरपेनोइड्स और फेनोलिक यौगिक शामिल हैं [76]। अब्दुल्ला एट अल। (2012) ने प्रस्तावित किया कि मशरूम के अर्क ने एरोमाटेज गतिविधि [77] को रोककर स्तन कैंसर कोशिका प्रसार को दबा दिया। इमाम एट अल। (2021) ने लेडोड्स से एक इंडोल-3-लैक्टिक एसिड को अलग कर दिया, जिसने फेफड़े के एडेनोकार्सिनोमा कोशिकाओं के विभाजन को रोक दिया [78]। युकावा एट अल। (2012) ने सुझाव दिया कि हेपजी 2 कोशिकाओं पर एल एडोड्स मायसेलिया का प्रत्यक्ष एपोप्टोटिक प्रभाव कस्पासे -3 और -8 डेथ रिसेप्टर पाथवे [79] के सक्रियण के माध्यम से है। वू एट अल। (2011) ने मानव कोलोरेक्टल एडेनोकार्सिनोमा (एसडब्ल्यू 480) कोशिकाओं और एक मानव मोनोसाइटिक ल्यूकेमिया, टीएचपी -1 (कोशिकाओं), और आरओएस, थकावट की रिपोर्ट की गई पीढ़ी पर पी। ओस्ट्रेटस के प्रोटीन अर्क के साइटोटोक्सिक प्रभाव का अध्ययन किया। ग्लूटाथियोन, माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली क्षमता में परिवर्तन और ऑलिगोन्यूक्लियोसोमल डीएनए का विघटन, जिसके परिणामस्वरूप SW480 कोशिकाओं का एपोप्टोसिस होता है [80]।

चूंकि एंटीऑक्सिडेंट एक तंत्र के माध्यम से कार्य नहीं करते हैं, एंटीऑक्सिडेंट क्षमता का मूल्यांकन आमतौर पर एक से अधिक तरीकों से किया जाता है [81]। इस अध्ययन में, तीन मूल्यांकन विधियों का उपयोग किया गया था, अर्थात् डीपीपीएच, एबीटीएस, और ओआरएसी परख। SET (एकल इलेक्ट्रॉन हस्तांतरण) एंटीऑक्सीडेंट तंत्र का मूल्यांकन DPPH परख के माध्यम से किया गया था, जबकि ABTS और ORAC assays का उपयोग HAT (हाइड्रोजन परमाणु हस्तांतरण) प्रतिक्रियाओं [81] के लिए किया गया था। ORAC परख अधिक सटीक सटीक अनुमान प्रदान करती है क्योंकि यह एक ही शब्द [82] में निषेध समय और निषेध की डिग्री को जोड़ती है। जबकि फॉस्फोमोलिब्डेट परख का उपयोग आमतौर पर कुल एंटीऑक्सीडेंट क्षमता (टीएसी) को व्यक्त करने के लिए किया जाता है, तीनों विधियों का उपयोग किया जाता है

इस पांडुलिपि में टीएसी का मूल्यांकन करने की सूचना मिली है। Munteanu और Apetrei (2021), ने एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि को निर्धारित करने में उपयोग की जाने वाली विधियों की अपनी समीक्षा में, ABTS रेडिकल स्कैवेंजिंग परख को "कुल एंटीऑक्सीडेंट क्षमता (TAC) को मापने के लिए उपयोग की जाने वाली सरल और सुविधाजनक विधि" के रूप में वर्णित किया है।[83]। उनके तुलनात्मक अध्ययन में, सेप्रेगी एट अल। (2016) ने टीएसी के मूल्यांकन के लिए उपयोग की जाने वाली चार विधियों की तुलना की, जो ट्रोलोक्स समकक्ष एंटीऑक्सीडेंट क्षमता (टीईएसी), फेरिक कम करने वाली एंटीऑक्सीडेंट क्षमता (एफआरएपी), 2, 2-डिपेनिल-1-पिक्रिलहाइड्राज़िल (डीपीपीएच) थी। कट्टरपंथी मैला ढोने की परख, और फोलिन-सियोकाल्टू अभिकर्मक प्रतिक्रियाशीलता (एफसीआर) [84]। 2013 में, ओयू एट अल ने टीएसी [85] के मूल्यांकन के लिए एक उपन्यास विधि के रूप में ओआरएसी की शुरुआत की। उसी नस में, रुबियो एट अल। (2016) ) ने ओआरएसी परख को टीईएसी [86] के साथ मिलकर टीएसी के निर्धारण के लिए प्रत्यक्ष तरीकों में से एक के रूप में वर्गीकृत किया। ABTSand ORAC assays के परिणाम बताते हैं कि P. ostreatus और L.edode के अर्क में एंटीऑक्सीडेंट क्षमता होती है जो मानक एंटीऑक्सिडेंट, Trolox की तुलना में अधिक होती है।

दो मशरूम के एंटीऑक्सीडेंट प्रभाव को कई बायोएक्टिव घटकों की उपस्थिति के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है जिनमें शामिल हैंflavonoids, फेनोलिक्स, बायोएक्टिव पेप्टाइड्स, और विटामिन सी [87]। गेबर एट अल। अमरूद के अर्क की एंटीऑक्सीडेंट क्षमता का आकलन करने के लिए एबीटीएस, डीपीपीएच, फेरिक रिड्यूसिंग एंटीऑक्सीडेंट पावर (एफआरएपी) और ओआरएसी एसेज़ की तुलना की और चार विधियों और विटामिन सी सामग्री और टीपीएन द्वारा निर्धारित एंटीऑक्सीडेंट शक्तियों के बीच एक सकारात्मक सहसंबंध की सूचना दी। दूसरी ओर, उन्होंने कैरोटीनॉयड सामग्री [88] के साथ एक नकारात्मक सहसंबंध दर्ज किया। DPPH(1,1-Diphenyl-2-picryl-hydrazyl) एक स्थिर मुक्त मूलक है जिसमें नाइट्रोजन ब्रिज के एक परमाणु पर एक अयुग्मित संयोजकता इलेक्ट्रॉन होता है; इस प्रकार, डीपीपीएच रेडिकल की सफाई लोकप्रिय डीपीपीएच एंटीऑक्सीडेंट परख का आधार है [89]। 2,2'-एज़िनो-बीआईएस (3-एथिलबेनज़ोथियाज़ोलिन-6-सल्फोनेट) रेडिकल कटियन (एबीटीएस) एक एंटीऑक्सिडेंट द्वारा कम किए जाने पर अपना नीला रंग खो देता है, और रंग परिवर्तन को स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक रूप से निर्धारित किया जा सकता है [90]। ओआरएसी परख मुक्त कणों द्वारा फ्लोरेसेंस जांच के ऑक्सीडेटिव गिरावट को मापता है जो एंटीऑक्सीडेंट पदार्थ द्वारा बाधित होते हैं। तदनुसार, एंटीऑक्सीडेंट क्षमता जितनी मजबूत होगी, प्रतिदीप्ति को बुझाने में उतना ही कम समय लगेगा [91]। इसके अतिरिक्त, चूंकि परीक्षण किए गए अर्क ने उपर्युक्त विधियों के माध्यम से परीक्षण किए जाने पर आशाजनक एंटीऑक्सीडेंट प्रभाव दिखाए, इसलिए यह निष्कर्ष निकाला जा सकता है कि वे इसके माध्यम से कार्य करते हैंमुक्त कट्टरपंथी सफाई. हालांकि, परीक्षण किए गए मशरूम में काफी कुल फ्लेवोनोइड सामग्री होती है, और फ्लेवोनोइड्स को ट्रांसक्रिप्शनल फैक्टर Nrf2 (2017) के सक्रियण से जोड़ा गया है, इसे एक पुटेटिव मैकेनिज्म [92] के रूप में जोड़ा जा सकता है।

4. सामग्री और तरीके

4.1.मशरूम प्रजाति और उप-संवर्धन की तैयारी

कृषि अनुसंधान केंद्र, काहिरा, मिस्र [93,94] के संस्कृति संग्रह से पहले पहचाने गए पी. ओस्ट्रेटस और एल.एडोड्स मशरूम, स्पॉन और/या फलने वाले निकायों के रूप में प्राप्त किए गए थे। मशरूम के फलने वाले शरीर से उप-संवर्धन के लिए फलों को असमान रूप से काटने के लिए सर्जिकल ब्लेड का उपयोग किया गया था। आंतरिक मायसेलिया को बाँझ सुइयों का उपयोग करके काटा गया और बाँझ आलू डेक्सट्रोज़ एगर (पीडीए) प्लेट्स (मर्क, डार्मस्टैड, जर्मनी) 95] में उप-सुसंस्कृत किया गया। फंगल स्पॉन को उप-खेती करने के लिए, बीज को लेने के लिए बाँझ संदंश का उपयोग किया गया था और उन्हें बाँझ पीडीए प्लेटों में स्थानांतरित कर दिया गया था, जिसे तब 7 दिनों के लिए 28 डिग्री पर ऊष्मायन किया गया था, और प्रत्येक तनाव के फलने वाले निकायों को अलग से धोया गया था। प्रत्येक आइसोलेट (500 ग्राम) को कमरे के तापमान पर 48 घंटे के लिए हवा में सूखने के लिए छोड़ दिया गया था, एक रसोई की चक्की में मैन्युअल रूप से जमीन, और भविष्य के उपयोग के लिए एक अच्छी तरह से वातित क्षेत्र में कमरे के तापमान पर संग्रहीत किया गया था।

4.2. Pleurotus Ostreatus और Lentinus edodes का जलीय निष्कर्षण

प्रत्येक आइसोलेट के सूखे मेवे को घरेलू ब्लेंडर का उपयोग करके 500 ग्राम पाउडर में पीस दिया गया था, फिर तीन दिनों के लिए कमरे के तापमान पर 7Lof आसुत जल में तीन बार मैकरेट किया गया, अल्ट्रा-सोनिकेटेड (अल्ट्रासोनिक क्लीनर, इंग्लैंड, यूके), और फिर फ़िल्टर किया गया। तरल समाप्त होने तक मैक्रेशन और निस्पंदन की प्रक्रिया दोहराई गई थी। उपज को स्टोर करने के लिए इथेनॉल का इस्तेमाल किया गया था। 45 डिग्री पर इथेनॉल के वाष्पीकरण के बाद, प्रत्येक आइसोलेट के कुल 500 एमएल को प्रत्येक अर्क [96] के लगभग 20 ग्राम सूखे अवशेषों को प्राप्त करने के लिए फ्रीज-ड्राय किया गया था।

4.3. प्रोटीन विश्लेषण

बच्चों के कैंसर अस्पताल मिस्र 57,357 (CCHE), काहिरा, मिस्र में प्रोटिओमिक्स और चयापचय इकाई में प्रोटीन विश्लेषण किया गया था। लगभग 600 5 में 8 एम यूरिया का यूएल00 एमएम ट्रिस (पीएच8.5) और 60 यूएल पूर्ण अल्ट्रा-प्रोटीज (रोश) , मैनहेम, जर्मनी) को प्रत्येक नमूने में जोड़ा गया, और फिर नमूनों को जोर से हिलाया गया और 1 0, 000 आरपीएम पर 30 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज किया गया। सतह पर तैरनेवाला एकत्र किया गया था, और अंश -1 कुरूप / 10 μL- को नैनोएलसी प्रणाली का उपयोग करके इंजेक्ट किया गया था। मास स्पेक्ट्रोमेट्री ट्रिपल टीओएफ सिस्टम (साइक्स ट्रिपलटीओएफ 5600 प्लस, एबी एससीआईईएक्स, कॉनकॉर्ड) को तरल क्रोमैटोग्राफी (एलसी) (3 उम, क्रोमएक्सपी सी18 सीएल, 120 ए, 150 × 0.3 मिमी) के साथ जोड़ा गया था, जिसमें एक एक्सिजेंट नैनोएलसी400 ऑटोसैंपलर जुड़ा हुआ था। एक एक्स्पर्ट नैनोएलसी425 पंप, 55 मिनट के लिए 10 μL/मिनट की प्रवाह दर के साथ, प्रत्येक नमूने के लिए [97]। डेटा विश्लेषण प्रोटीनपायलट (संस्करण 5.0.1.0,4895) और पैरागॉन एल्गोरिथम (संस्करण 5.0.1.0,4874) द्वारा किया गया था। प्रोटीन अनुक्रम स्विस-प्रोट और टीआरईएमबीएल डेटाबेस में अनुक्रमों के विरुद्ध संरेखित किए गए थे (प्लुरोटस एसपी। पी। ओस्ट्रेटस के लिए 14,792 प्रविष्टियां, और लेंटिनुला एसपी। एल.एडोड्स के लिए 12603 प्रविष्टियां युक्त) [98]। मशरूम प्रजातियों के बीच आम तौर पर पहचाने जाने वाले प्रोटीन को वेनी 2.1.0. बायोइन्फोजीपी सॉफ्टवेयर [99] (किंग्स्टन ऑन हल, इंग्लैंड, यूके) का उपयोग करके चित्रित किया गया था।

4.4. बायोएक्टिव यौगिकों की विशेषता

जैसा कि पहले बताया गया था, कुल घुलनशील कार्बोहाइड्रेट सामग्री को फिनोल सल्फ्यूरिक एसिड तकनीक [100] का उपयोग करके निर्धारित किया गया था। डेटा को ± मानक विचलन (एसडी) के रूप में प्रस्तुत किया जाता है, और प्रयोग तीन प्रतियों में किए गए थे।

रयान एट अल द्वारा रिपोर्ट के अनुसार कुल फेनोलिक सामग्री (टीपीसी) और कुल फ्लेवोनोइड सामग्री (टीएफसी) निर्धारित की गई थी। [101]. नमूने पानी में 20 मिलीग्राम / एमएल की एकाग्रता में तैयार किए गए थे। मेथनॉल में गैलिक एसिड (1 मिलीग्राम/एमएल स्टॉक समाधान) तैयार किया गया था। मेथनॉल में रुटिन (1 मिलीग्राम/एमएल स्टॉक समाधान) तैयार किया गया था। गैलिक एसिड मानकों और नमूनों को प्लेट के कुओं में छह प्रतिकृति में पिपेट किया गया और 630 एनएम पर मापा गया। छह प्रतिकृति में 10 रुटिन मानकों और नमूनों में से प्रत्येक को 420 एनएम पर मापा गया था।

सिंह एट अल की विधि के अनुसार कुल फेनोलिक्स और फ्लेवोनोइड्स का एचपीएलसी विश्लेषण किया गया था। [102]। प्रत्येक नमूने और 1 0 अलग-अलग मानक समाधान मेथनॉल में भंग कर दिए गए थे और 0.22 उम सिरिंज फिल्टर का उपयोग करके फ़िल्टर किया गया था, और फिर प्रत्येक नमूने के 100 μL और प्रत्येक मानक के 10 यूएल को एचपीएलसी कॉलम, वाटर्स 2690 एलायंस एचपीएलसी का उपयोग करके इंजेक्ट किया गया था। वाटर्स 996 फोटोडायोड एरे डिटेक्टर से लैस सिस्टम। कॉलम C18 Inertsil ODS3:4.6×250 mm,5 um; मोबाइल चरण: बफर (पानी में 0.1 प्रतिशत फॉस्फोरिक एसिड); रेफरेंस का मेथनॉल मोड 280 एनएम के तरंग दैर्ध्य पर 1 एमएल / मिनट की प्रवाह दर के साथ ढाल था।

पानी में घुलनशील विटामिन विश्लेषण के लिए, परीक्षण किए गए मशरूम के अर्क (50 मिलीग्राम/एमएल), संदर्भ मानकों(10 मिलीग्राम में 10 एमएल0.05 एम सोडियम हाइड्रोक्साइड) सात पानी में घुलनशील विटामिन (थियामिन एचसीएल, एस्कॉर्बिक एसिड, राइबोफ्लेविन, निकोटिनिक एसिड, निकोटिनमाइड, पाइरिडोक्सिन एचसीएल और फोलिक एसिड) [103] और वसा में घुलनशील विटामिन, तीन मशरूम के अर्क के समाधान (50 मिलीग्राम / एमएल) और तीन वसा विटामिनों के मेथनॉल में एक मानक घोल: ई, डी3 और ए, क्रमशः 806.2, 114 और 400 आईयू/एमएल पर तैयार किया गया। समाधान को तब 100 ug/mL तक पतला किया गया था, एक 0.22 um सिरिंज फिल्टर का उपयोग करके फ़िल्टर किया गया था, और 100 μL को एक HPLC कॉलम, वाटर्स 2690 एलायंस HPLC सिस्टम (Milford, CT, USA) में वाटर्स 996 फोटोडायोड एरे डिटेक्टर से लैस किया गया था। कॉलम इनर्टसिल ओडीएस 3∶4.6 × 250 मिमी, 5 माइक्रोन; मोबाइल चरण: बफर (1000 एमएल पानी में 0.85 ग्राम हेक्सेन सल्फोनिक एसिड सोडियम नमक और पीएच को ऑर्थोफोस्फोरिक एसिड के साथ 3 में समायोजित किया गया था); मेथनॉल रेफरेंस 210 एनएम [104] की तरंग दैर्ध्य पर 1 एमएल/मिनट की प्रवाह दर पर ढाल था।

4.5. प्रोटीन और अमीनो एसिड विश्लेषण

मशरूम के अर्क के अमीनो एसिड की संरचना का आकलन एक सॉल्वेंट डिलीवरी सिस्टम, S 21 0 0 (फ्लो रेंज के साथ क्वाटरनरी पंप {{ 24}}.01 से 10.00 एमएल/मिनट और अधिकतम दबाव 400 बार तक), एक ऑटोसैंपलर, S5200, एक एमिनो एसिड रिएक्शन मॉड्यूल, S4300 (बिल्ट-इन डुअल-फिल्टर के साथ) 570 एनएम पर फोटोमीटर), और एक प्रशीतित अभिकर्मक आयोजक, S4130। प्रत्येक मशरूम के अर्क का एक ग्राम 5 एमएल हेक्सेन के साथ मिलाया गया था और 24 घंटे के लिए मैकरेट करने की अनुमति दी गई थी, और फिर मिश्रण को व्हाटमैन नं का उपयोग करके फ़िल्टर किया गया था। 1 फिल्टर पेपर। अवशेषों को 10mL6N HCl युक्त एक परखनली में रखा गया था और 24 घंटे के लिए 110 डिग्री पर ओवन में इनक्यूबेट किया गया था। ऊष्मायन के बाद, व्हाटमैन नं का उपयोग करके निस्पंदन किया गया था। 1 फिल्टर पेपर, उसके बाद एक रोटरी बाष्पीकरण में वाष्पीकरण। अवशेष पूरी तरह से 2 एमएल कमजोर पड़ने वाले बफर (ट्राई-सोडियम साइट्रेट डिहाइड्रेट 0.06 एम, साइट्रिक एसिड 0.03 एम, फिनोल 0.02 एम, थियोडिग्लाइकॉल 1.4 प्रतिशत, एचसीएल 32 प्रतिशत) में पूरी तरह से भंग कर दिया गया था, उसी बफर में पतला 1000- और फिर एक अमोनिया फिल्टर कॉलम (LCA, K04/Na, 4.6×100 mm, Sykam GmbH, Erasing, Germany) पर लोड किया गया जो एक स्वचालित अमीनो एसिड विश्लेषक (Sykam) [105] से सुसज्जित है।

4.6. कोशिका संवर्धन

सर्वाइकल कैंसर (हेला), एक्यूट मोनोसाइटिक ल्यूकेमिया (Thpl), कोलोरेक्टल कार्सिनोमा (कोलो-205), और सीकुम कार्सिनोमा (LS-513) कोशिकाओं को रोसवेल पार्क मेमोरियल इंस्टीट्यूट (RPMI) माध्यम (लोन्ज़ा, कोलोन, जर्मनी) 100 मिलीग्राम/एमएल स्ट्रेप्टोमाइसिन, 100 यूनिट/एमएल पेनिसिलिन और 10 प्रतिशत गर्मी-निष्क्रिय भ्रूण गोजातीय सीरम के साथ पूरक। अन्य कोशिका रेखाएँ: मानव ल्यूकेमिया (CCRF-CEM); तीव्र प्रोमायलोसाइटिक ल्यूकेमिया (एनबी-4); मानव लिंफोमा (U937); प्रोस्टेट कैंसर (DU-145 और PC3); हेपैटोसेलुलर कार्सिनोमा (HepG2); स्तन ग्रंथिकर्कटता (एमसीएफ-7 और एमडीए-एमबी-231); वेरो; और हेप -2 कोशिकाएं, Dulbecco के संशोधित ईगल माध्यम (DMEM; Invitrogen, California, USA) पर उप-सुसंस्कृत थीं, और 5 प्रतिशत CO2 के साथ आर्द्र वातावरण में ऊष्मायन 37 डिग्री पर आयोजित किया गया था। सेल लाइनों को नवाह साइंटिफिक इंक (मोकाटम, काहिरा, मिस्र) से प्राप्त किया गया था, जबकि प्राथमिक परिधीय रक्त मोनोन्यूक्लियर सेल (PBMCs) और सामान्य मानव (ATCC PCS -800-011 TM) सेल विसेरा, काहिरा, मिस्र से खरीदे गए थे। इस कार्य को फार्मेसी संकाय, ऐन शम्स विश्वविद्यालय (अनुमोदन संख्या 294) की नैतिक अनुसंधान समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था।

4.7.एंटीरियोरल गतिविधि

एंटीवायरल गतिविधिएडेनोवायरस टाइप 7 (Ad7) और हर्पीज सिम्प्लेक्स वायरस टाइप- II (HSV -2) (नवा साइंटिफिक, मोकट्टम, मिस्र) के खिलाफ परीक्षण किया गया था। पहले वर्णित [106] के रूप में एंटीवायरल गतिविधि का मूल्यांकन किया गया था। वेरो और हेप -2 कोशिकाओं को संक्रमण से एक दिन पहले 2 × 10 * कोशिकाओं के घनत्व पर एक 96-वेल कल्चर प्लेट में डाला गया था। सेल कल्चर मीडियम (धारा 4.6) को अगले दिन हटा दिया गया, और कोशिकाओं को धोने के लिए फॉस्फेट-बफर सलाइन (पीबीएस) का इस्तेमाल किया गया। मानव एडेनोवायरस और हर्पीज सिम्प्लेक्स वायरस टाइप- II की संक्रामकता को सल्फोरहोडामाइन बी (एसआरबी) विधि का उपयोग करके निर्धारित किया गया था, जिसने साइटोपैथिक प्रभाव (सीपीई) की निगरानी की और सेल व्यवहार्यता के प्रतिशत की गणना की [107]। वायरल सीपीई को बाधित करने के लिए मशरूम के अर्क की क्षमता के आधार पर एंटीवायरल गतिविधि की गणना की गई थी, जहां 50 प्रतिशत साइटोटोक्सिक एकाग्रता (सीसी 5o) और 50 प्रतिशत निरोधात्मक एकाग्रता (आईसी 50) को ग्राफपैड पीआरआईएसएम सॉफ्टवेयर (ग्राफ-पैड सॉफ्टवेयर, सैन डिएगो) का उपयोग करके निर्धारित किया गया था। , सीए, यूएसए)। डोगन एट अल द्वारा बताए गए अनुसार चयनात्मकता सूचकांक (एसडी) की गणना की गई थी। [108] समीकरण के अनुसार (1) चयनात्मकता सूचकांक (एसआई)=CC50/IC50

4.8. एमटीटी परख का उपयोग कर पीबीएमसी के खिलाफ साइटोटोक्सिसिटी

एमटीटी परख-109】 का उपयोग करके साइटोटोक्सिसिटी का मूल्यांकन किया गया था। सेल सस्पेंशन के एलिकोट्स（100 μL） (सेल घनत्व 1. 2-1 .8 × 10 * सेल / वेल) को 96-वेल प्लेट्स में चढ़ाया गया, पूरा माध्यम जोड़ा गया और 24 घंटे के लिए कोशिकाओं को इनक्यूबेट किया गया। फिर, कोशिकाओं को 48 घंटे के लिए मशरूम के अर्क के सीरियल कमजोर पड़ने के साथ इलाज किया गया। पीबीएस में एमटीटी समाधान (5 मिलीग्राम / एमएल) कुओं में जोड़ा गया था और 4 घंटे के लिए ऊष्मायन किया गया था, और 570 एनएम पर अवशोषण को माइक्रोप्लेट रीडर का उपयोग करके पढ़ा गया था। अनुपचारित कोशिकाओं को नकारात्मक नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया गया था, और डॉक्सोरूबिसिन (सिग्मा-एल्ड्रिच, डार्मस्टैड, जर्मनी) के साथ इलाज किए गए कोशिकाओं को एक सकारात्मक नियंत्रण के रूप में कार्य किया गया था।

4.9. कैंसर सेल लाइनों के खिलाफ एसआरबी का उपयोग करते हुए साइटोटोक्सिक गतिविधि का मूल्यांकन

प्रोस्टेट कैंसर के खिलाफ साइटोटोक्सिसिटी (DU{0}} और PC3); हेपैटोसेलुलर कार्सिनोमा (HepG2); कोलोरेक्टल कार्सिनोमा (कोलो-205); सीकुम कार्सिनोमा (एलएस-513); सर्वाइकल कैंसर (हेला); और स्तन एडेनोकार्सिनोमा (एमडीए-एमबी -231 और एमसीएफ -7) सेल लाइनों का मूल्यांकन सल्फोरहोडामाइन बी (एसआरबी) वर्णमिति परख [110] का उपयोग करके किया गया था। पूरे मीडिया में सेल सस्पेंशन (4.6) को 24 घंटे के लिए 96-वेल प्लेट्स में इनक्यूबेट किया गया। फिर, विभिन्न सांद्रता (0 से 100 ug/mL पूर्ण मीडिया） मशरूम के अर्क में जोड़ा गया और 72 घंटे के लिए ऊष्मायन किया गया। अनुपचारित कोशिकाओं को नकारात्मक नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया गया था, और डॉक्सोरूबिसिन के साथ इलाज की गई कोशिकाओं को एक सकारात्मक नियंत्रण के रूप में कार्य किया गया था।

4.10. ल्यूकेमिया और लिम्फोमा सेल लाइन्स की व्यवहार्यता WST का UIsing-1 परख

मानव ल्यूकेमिया (CCRF-CEM), तीव्र प्रोमायलोसाइटिक ल्यूकेमिया (NB4), तीव्र मोनोसाइटिक ल्यूकेमिया (THP1), और मानव लिम्फोमा (U937) के खिलाफ साइटोटोक्सिसिटी को पानी में घुलनशील टेट्राजोलियम नमक (WST -1) परख द्वारा Abcamkit का उपयोग करके निर्धारित किया गया था। ab155902 WST-1 सेल प्रसार अभिकर्मक, यूनाइटेड किंगडम)। सेल निलंबन 24 घंटे के लिए ऊष्मायन किया गया था और फिर 48 घंटे के लिए मशरूम के अर्क के विभिन्न सांद्रता (पूर्ण मीडिया में 0 से 100 कुरूप / एमएल) के साथ इलाज किया गया था। कोशिकाओं को तब 1 घंटे के लिए 10 μL WST -1 अभिकर्मक के साथ इलाज किया गया था, और A450 को माइक्रोप्लेट रीडर [111] का उपयोग करके पढ़ा गया था। अनुपचारित कोशिकाओं का उपयोग नकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया गया था और डॉक्सोरूबिसिन (सिग्मा-एल्ड्रिच, जर्मनी) से उपचारित कोशिकाओं को सकारात्मक नियंत्रण के रूप में कार्य किया गया था।

4.11.एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि

4.11.1.डीपीपीएच रेडिकल स्कैवेंजिंग गतिविधि

डीपीपीएच कट्टरपंथी मैला ढोने की परख लू एट अल की विधि के अनुसार की गई थी। [112]। DPPH रंग में परिणामी कमी को 540 एनएम मापा गया।प्रतिउपचारक गतिविधिअंशांकन वक्र (R2=0.9903) के संदर्भ में निषेध प्रतिशत के रूप में व्यक्त किया गया था। डेटा को समीकरण (2) के अनुसार ± एसडी के रूप में दर्शाया जाता है: (एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि प्रतिशत=[(abs-blank-abs-sample)/abs-blank]×100)

(2) जहां एब्स-ब्लैंक और एब्स-सैंपल क्रमशः ब्लैंक और सैंपल के अवशोषण को संदर्भित करता है। आधे मुक्त कणों (IC50) को बाधित करने के लिए आवश्यक नमूना एकाग्रता का अनुमान लगाया गया था।

4.11.2.ABTS (2,2'-Azinobis-(3-एथिलबेन्ज़थियाज़ोलिन-6-सल्फ़ोनिक एसिड)) रेडिकल केशन स्कैवेंजिंग गतिविधि

परख को पहले वर्णित 113】 के रूप में किया गया था। मशरूम के अर्क（10 0 से 100 ug/mL घोल के μL को 190μL ताजा तैयार ABTS (सिग्मा-एल्ड्रिच जर्मनी) के साथ 96-अच्छी तरह से प्लेटों में मिलाया गया और कमरे के तापमान पर अंधेरे में इनक्यूबेट किया गया। 2 घंटे प्रत्येक नमूने का चार प्रतिकृति में परीक्षण किया गया था, और अवशोषण को 734 एनएम मापा गया था। अंशांकन वक्र (आर 2=0.9948) के संदर्भ में एंटीऑक्सिडेंट गतिविधि को निषेध (समीकरण (1)) के प्रतिशत के रूप में व्यक्त किया गया था।

4.11.3. ऑक्सीजन रेडिकल अवशोषण क्षमता (ओआरएसी) परख

विश्लेषण पहले से निर्धारित [62] के रूप में किया गया था, जिसमें मामूली संशोधन थे। संक्षेप में, मशरूम के अर्क के 12.5 μL, तीन प्रतियों में, 37 डिग्री पर 30 मिनट के लिए 75 μL फ्लोरेसिन (10 एनएम) के साथ ऊष्मायन किया गया था। प्रतिदीप्ति माप (485 ईएक्स, 520 ईएम, एनएम） तीन चक्रों चक्र समय=90 s） के लिए किया गया था। बाद में, 2,2'-अज़ोबिस 2- के ताज़ा तैयार 240 मिमी समाधान के 12.5 μL एमिडिनोप्रोपेन डाइहाइड्रोक्लोराइड (एएपीएच) (एबी-कैम, कैम्ब्रिज, यूके) को तुरंत प्रत्येक कुएं में जोड़ा गया था और 2.5 एच (85 चक्र, प्रत्येक 90 एस) के लिए प्रतिदीप्ति माप जारी रखा गया था। परख समय के साथ फ़्लोरेसिन प्रतिदीप्ति के नुकसान को मापता है। AAPH के टूटने से पेरोक्सिल-रेडिकल गठन का। ट्रोलॉक्स (6-हाइड्रॉक्सी-2,5,7,8-टेट्रामेथिलक्रोमैन-2-कार्बोक्जिलिक एसिड), एक पानी में घुलनशील विटामिन ई एनालॉग, खुराक पर निर्भर तरीके से फ़्लोरेसिन क्षय को रोकने वाले सकारात्मक नियंत्रण के रूप में कार्य करता है। एंटीऑक्सिडेंट गतिविधि को निषेध के प्रतिशत के रूप में व्यक्त किया गया था (समीकरण (1) अंशांकन वक्र (आर 2= 0.9957) के संदर्भ में।

4.12.सांख्यिकीय विश्लेषण

तीन प्रतियों की रासायनिक परख की गई, और परिणाम माध्य ± मानक विचलन के रूप में व्यक्त किए गए। सांख्यिकीय विश्लेषण वन-वे एनोवा द्वारा किए गए थे।

साधनों के बीच अंतर के महत्व का मूल्यांकन तुकी-क्रेमर बहु-तुलनात्मक परीक्षण द्वारा किया गया था। 0.05 से कम या उसके बराबर का पी-मान सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण माना जाता था। सांख्यिकीय मूल्यांकन ग्राफपैड प्रिज्म सॉफ्टवेयर (ग्राफ-पैड सॉफ्टवेयर, सैन डिएगो, सीए, यूएसए) का उपयोग करके निर्धारित किया गया था।

5। निष्कर्ष

मशरूम P. ostreatus और L.edodes में जैव सक्रिय यौगिकों की एक विस्तृत श्रृंखला होती है। प्रोटीन विश्लेषण ने कई जैविक गतिविधियों के साथ कई बायोएक्टिव अणुओं की अभिव्यक्ति को दिखाया। मशरूम के जलीय अर्क आशाजनक हैंएंटी वाइरलएडेनोवायरस टाइप 7 और हर्पीज सिम्प्लेक्स वायरस टाइप- II के खिलाफ गतिविधियां। सीपीई का पता कैंसर सेल लाइनों के खिलाफ लगाया गया था लेकिन सामान्य मानव पीबीएमसी के खिलाफ नहीं। वर्तमान अध्ययन इन मशरूमों को उनके एंटीवायरल, एंटीट्यूमर और एंटीऑक्सीडेंट क्षमताओं के अलावा, सामान्य PBMCs पर उनकी कम साइटोटोक्सिसिटी के आलोक में औषधीय उद्देश्यों के लिए उपयोग करने के लिए प्रोत्साहित करता है।

संदर्भ

1. बर्टेली, एमबीडी; ओलिवेरा फिल्हो, ओबीक्यू; फ्रीटास, जेडीएस; बर्टोलुची, डब्ल्यूसी; सिल्वा, जीआर; गाज़िम, जेडसी; लिवरो, एफएआर; लोवाटो, ईसीडब्ल्यू; वैले, जेएस; लिंडे, जीए; और अन्य। लेंटिनस क्रिनिटस बेसिडियोकार्प स्टाइप और पाइलस: रासायनिक संरचना, साइटोटोक्सिसिटी और एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि। ईयूआर। खाद्य रेस। तकनीक। 2021, 247, 1355-1366। [क्रॉसरेफ]

2. रघुपति, वी.; स्टीफन, ए.; अरिवोली, डी.; कुमारेसन, एस। जीवाणुरोधी गतिविधि, इन विट्रो एंटीऑक्सिडेंट क्षमता और जीसी-एमएस के मेथनॉलिक अर्क के जिमनोपिलस जूनियस, दक्षिणी पश्चिमी घाट, भारत से एक जंगली मशरूम। ईयूआर। जे बायोमेड। 2018, 5, 650-657।

3. अतिला, एफ।; ओवैद, एमएन; शरियाती, एमए अगरिकस बिस्पोरस के पोषण और चिकित्सा लाभ: एक समीक्षा। जे माइक्रोबायल। जैव प्रौद्योगिकी। खाद्य विज्ञान। 2017, 7, 281–286। [क्रॉसरेफ]

4. गैतान-हर्नांडेज़, आर।; कोर्टेस, जीएमएन पूरक स्पॉन के उपयोग से गेहूं के भूसे पर खाद्य और औषधीय मशरूम लेंटिनुला की उपज में सुधार। ब्राज़। जे माइक्रोबायल। 2014, 45, 467-474। [क्रॉसरेफ] [पबमेड]

5. स्मानिया, ए।; डेले मोनाचे, एफ.; स्मानिया, ई.; गिल, एम.; बेनचेट्रिट, एल.; क्रूज़, एफ। कवक Pycnoporus sanguineus (Fr.) Murr द्वारा उत्पादित पदार्थ की जीवाणुरोधी गतिविधि। जे एथनोफार्माकोल। 1995, 45, 177-181. [क्रॉसरेफ]

6. इशिकावा, एनके; कसुया, एमसीएम; वैनेटी, एमसीडी तरल माध्यम में उगाए गए लेंटिनुला एडोड्स की जीवाणुरोधी गतिविधि। ब्राज़। जे माइक्रोबायल। 2001, 32, 206-210। [क्रॉसरेफ]

7. ह्वांग, एच.-जे .; किम, दप; लिम, जे.-एम.; जू, जे.-एच.; किम, एच.-ओ.; किम, एच.-एम.; यूं, जे.-डब्ल्यू. स्ट्रेप्टोज़ोटोकिन-प्रेरित डायबिटिक चूहों में एक औषधीय मशरूम पेलिनस बॉमी द्वारा निर्मित क्रूड एक्सोपॉलीसेकेराइड का हाइपोग्लाइसेमिक प्रभाव। जीवन विज्ञान। 2005, 76, 3069-3080। [क्रॉसरेफ] [पबमेड]

8. हर्स्ट, आर।; नेल्सन, डी.; मैकुलम, जी.; मिलर, ई.पू.; माएदा, वाई.; सुनार, सीई; रूनी, पीजे; लॉफ्रे, ए.; राव, जे.; मूर, जेई शीटकेक (लेंटिनुला एडोड्स) और ऑयस्टर (प्लुरोटस ओस्ट्रेटस) मशरूम के घटकों के जीवाणुरोधी और एंटिफंगल गुणों की एक परीक्षा। पूरक। वहाँ। क्लीन. अभ्यास करें। 2009, 15, 5-7। [क्रॉसरेफ]

9. ज़रवाकिस, जी.; फिलिपोसिस, ए.; आयोनिडौ, एस.; Diamantopoulou, P. Mycelium ग्रोथ कैनेटीक्स और लिग्नोसेल्यूलोसिक सबस्ट्रेट्स पर खाद्य मशरूम प्रजातियों की खेती के लिए इष्टतम तापमान की स्थिति। फोलिया माइक्रोबायोल। 2001, 46, 231-234। [क्रॉसरेफ]

10. सांचेज़, सी. प्लुरोटस ओस्ट्रेटस और अन्य खाद्य मशरूम की खेती। आवेदन माइक्रोबायल। जैव प्रौद्योगिकी। 2009, 85, 1321-1337। [क्रॉसरेफ]